CN103596584A - 多取代的胰岛素 - Google Patents

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Abstract

本发明关于一种包含至少两个白蛋白结合部分的胰岛素衍生物，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代；以及一种通过酰化和/或还原性烷基化用于制备所述胰岛素衍生物的方法。本发明还涉及一种包含所述胰岛素衍生物的药物。

Description

多取代的胰岛素
技术领域
本发明涉及可用于治疗糖尿病和相关方面的新的胰岛素衍生物。
背景
在哺乳动物中，胰岛素降低血糖，并且用于治疗1型和2型糖尿病，目的是调节血糖朝向健康水平。在健康的人体中，在禁食状态期间血糖水平被调节至接近5 mM，而在餐后几小时内，可出现升高到10 mM的值。血糖水平受到许多因素的影响，例如进餐时间和特征，以及胰岛素服用、锻炼、感染等。在糖尿病患者中，血糖可宽泛地波动并且不可预测，并且可在一名患者中在1-30 mM范围内波动。
糖尿病患者受益于基础胰岛素药物的恒定供应，因为天然胰岛素从身体快速清除。为了限制维持基础胰岛素水平所需的注射次数，使用各种延长原理来设计胰岛素，例如结晶或化学衍生。
与循环蛋白(例如血清白蛋白)的可逆结合也可为延长药物的体内活性的一个因素。对于胰岛素和其它肽，已经通过药物与脂肪酸、脂肪二酸或相关化合物的结合（任选经由各种连接基结合）来利用白蛋白结合作为延伸要素。
在猪的正葡萄糖钳夹（euglycemic glucose-clamp）研究中，已显示低亲和力胰岛素类似物对于葡萄糖利用率造成与高亲和力类似物一样的等价总体效果，表明对于低亲和力和高亲和力类似物两者，胰岛素生物活性可能类似。然而，当与高亲和力类似物相比时，低亲和力类似物在更长的时间段期间发挥它们的效果(参见例如Ribel，U.等人，Equivalent in vivo biological activity of insulin analogues and human insulin despite different in vitro potencies(胰岛素类似物和人胰岛素的等价体内生物活性，尽管体外潜能不同)。Diabetes 39，1033-1039 (1990)，附摘要)。
WO1999/032116和WO1999/021578关于脂肪酸-酰化的胰岛素，WO1999/022754、WO1999/032116、WO1999/021578、JP1254699通过吸入而服用脂肪酸二酰化和三酰化的胰岛素或胰岛素类似物，US3868356涉及胰岛素与二羧酸官能衍生物(例如，酸酐)的酰化。
仍需要具有延长的体内活性的基础胰岛素药物。
概述
本发明关于一种包含两个或更多个取代的胰岛素衍生物，每个所述取代包含脂肪二酸取代，所述胰岛素衍生物任选包含胰岛素与脂肪酸取代之间的连接基。
本发明还关于通过胰岛素的酰化和/或还原性烷基化来制备所述胰岛素衍生物或其药物盐的方法。
本发明涉及一种用于治疗糖尿病或相关方面的胰岛素衍生物并且可因此用作药物。
描述
本发明涉及一种胰岛素，其被至少两个白蛋白结合部分取代，每个所述白蛋白结合部分包含延伸部分，该延伸部分更具体地为脂肪二酸取代。任选地，白蛋白结合部分还包含各种连接基。通过酰化和/或还原性烷基化，实现根据本发明的胰岛素衍生，相对于天然的人胰岛素，所得到的胰岛素衍生物实现提高的白蛋白亲和力和体内循环次数。
本发明还提供了一种用于B1残基(例如，胰岛素的B链的N-末端)还原性烷基化的方法。
本发明还提供了一种用于A1残基(例如，胰岛素的A链的N-末端)还原性烷基化的方法。
本发明的目的是克服或改善现有技术的至少一个缺点，或者提供可用的备选。
本发明还可解决其它问题，由示例性实施方案的公开将显而易见。
发现用至少两个脂肪二酸取代胰岛素或胰岛素类似物能使胰岛素与人血清白蛋白结合并且延长体内胰岛素供应，保持IR-结合性质。这一点是有利的，因为根据本发明的取代对于仅具有非常少的(例如，2-6个)突变的胰岛素类似物也是可能的，从而本发明提供了以下选项：延长胰岛素的胰岛素体内供应并维持与天然的人胰岛素非常类似的胰岛素主链。
在本发明的一方面，当与单取代的胰岛素衍生物相比时，被至少两个脂肪二酸取代的胰岛素衍生物对白蛋白的亲和力提高。
在本发明的一方面，当与单取代的胰岛素衍生物相比时，延长效果提高。
本发明的胰岛素衍生物为长效的，并且在一方面，它们显示在皮下贮存中低聚合的提高的趋势，能够减慢向循环的扩散。
在一方面，根据本发明的胰岛素衍生物对白蛋白的亲和力随着提高的脂肪二酸链长度而升高。
在一方面，根据本发明的胰岛素衍生物与白蛋白的亲和力随着脂肪二酸链增加到22个碳原子而升高。
在一方面，随着脂肪二酸链增加到22个碳原子，胰岛素衍生物保持总体亲水。
在一方面，根据本发明的至少两个白蛋白结合部分的延长效果随着提高的脂肪二酸链长度而升高。
在一方面，根据本发明的至少两个白蛋白结合部分的延长效果随着脂肪二酸链增加到22个碳原子而升高。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由最多22个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由10-22个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由10-20个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由10-18个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由10-16个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由10-14个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由12-20个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由12-18个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由12-16个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由12-14个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由14-20个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由14-18个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由14-16个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由14、15、16、17、18、19或20个碳原子组成的脂肪二酸取代。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含由16、17、18、19或20个碳原子组成的脂肪二酸取代。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含至少2个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含至少3个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含2个或3个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含2个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含2个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素中的氨基酸残基连接。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含2个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素中位于以下任何位置的氨基酸残基连接：A22、B29或胰岛素的A链的N-末端氨基酸残基和/或胰岛素的B链的N-末端氨基酸残基。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含3个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含3个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素中的氨基酸残基连接。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物包含3个白蛋白结合部分，其中所述白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素中位于以下任何位置的氨基酸残基连接：A22、B29、胰岛素的A链的N-末端氨基酸残基和/或胰岛素的B链的N-末端氨基酸残基。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物由通式Chem 1表示：
Chem. 1：                                                
Figure 2012800290022100002DEST_PATH_IMAGE001
，
其中Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X2为任选的，Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，并且n、m和p为0或1。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物由通式Chem 1表示，其中Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，并且n、m和p为0或1。
在本发明的一个实施方案中胰岛素衍生物由通式Chem 2表示：
Chem 2：XZn-Ins-Z1 mX1，
其中Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，X和X1为脂肪二酸取代，Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，并且n和m为0或1。
在本发明的一个实施方案中，胰岛素衍生物由通式Chem. 2表示，其中Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，X和X1为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，并且n和m为0或1。
本文使用的“Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基”或“Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基”是指Z、Z1或Z2为胰岛素(Ins)中的氨基酸与相应的延伸部分X、X1或X2之间的连接基。更具体地，这意味着Z为胰岛素(Ins)与延伸部分X之间的连接基，Z1为胰岛素(Ins)与延伸部分X1之间的连接基，并且Z2为胰岛素(Ins)与延伸部分X2之间的连接基。
Chem. 1和Chem. 2的字母n、m和p独立地表示在胰岛素衍生物中表示的连接基(分别为Z、Z1和Z2)的数量，并且n、m和p为0或1。更具体地，这意味着当n为0时，在Chem.1或Chem. 2中在胰岛素(Ins)和延伸部分(X)之间不存在连接基，当m为0时，在Chem.1或Chem. 2中在胰岛素(Ins)和延伸部分(X1)之间不存在连接基，当p为0时，在Chem.1中在胰岛素(Ins)和延伸部分(X2)之间不存在连接基，当n为1时，在Chem.1或Chem. 2中在胰岛素(Ins)和延伸部分(X)之间存在一个连接基，当m为1时，在Chem.1或Chem. 2中在胰岛素(Ins)和延伸部分(X1)之间存在一个连接基，当p为1时，在Chem.1中在胰岛素(Ins)和延伸部分(X2)之间存在一个连接基。
白蛋白结合部分(例如，在式Chem.1和Chem. 2中的ZnX)、延伸部分(例如，在式Chem.1和Chem. 2中的X)或连接基(例如，在式Chem.1和Chem. 2中的Z)可通过酰化和/或还原性烷基化与胰岛素的A链和/或B链的赖氨酸残基或N-末端共价连接。
在一个实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含少于10个氨基酸修饰(取代、删除、添加(包括插入)和它们的任何组合)，或者相对于人胰岛素少于9、8、7、6、5、4、3、2或1个修饰。
指明链(A或B)、位置和取代天然氨基酸残基的氨基酸残基所用的一个或三个字母编码，以表示胰岛素分子中的修饰。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含至少2个白蛋白结合部分。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物的白蛋白结合部分(例如，Chem. 1的ZnX)包含延伸部分，所述延伸部分也可指示为脂肪二酸取代(例如，在Chem.1中的X)。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物的每一个白蛋白结合部分包含延伸部分和任选的连接基(例如，在Chem.1中的Zn，其中n为1)。
在一个实施方案中，优选包含延伸部分和连接基的白蛋白结合部分的活性酯与赖氨酸残基的氨基（优选其ε氨基）藉由形成酰胺键而共价连接(该过程称为酰化)。
在一个实施方案中，优选包含延伸部分(例如，X，Chem.1)和连接基(例如，Zn，其中n为1，Chem. 1)的白蛋白结合部分的活性酯(例如，ZnX，Chem.1)与赖氨酸残基的氨基（优选其ε氨基）和/或A链或B链N-末端中的氨基酸残基的氨基藉由形成酰胺键而共价连接(该过程称为酰化)。
在一个实施方案中，优选包含延伸部分和连接基的白蛋白结合部分的醛衍生物通过还原性烷基化与A链N-末端中的α-氨基或B链N-末端中的α-氨基共价连接，或者醛衍生物在A链和/或B链的N-末端氨基酸残基处还原性烷基化。
在一个实施方案中，优选包含延伸部分和连接基的白蛋白结合部分的醛衍生物通过还原性烷基化与赖氨酸残基(优选其ε-氨基)共价连接。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素在B29位包含精氨酸残基，并且在A22赖氨酸处而不是在B29位被白蛋白结合部分取代。
在一个实施方案中，期望根据本发明的胰岛素衍生物在A22位包含一个白蛋白结合部分，在胰岛素中的另一个氨基酸位置包含一个白蛋白结合部分，并且在B29位不含白蛋白结合部分，经受取代的胰岛素在B29位包含精氨酸残基。
在一个实施方案中，期望根据本发明的胰岛素衍生物在A22位包含一个白蛋白结合部分，在胰岛素的另一个氨基酸位置(例如胰岛素的B29位)包含一个白蛋白结合部分，经受取代的胰岛素可在B29位包含赖氨酸残基。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素在A22赖氨酸和B29赖氨酸处被白蛋白结合部分取代。
在一个实施方案中，每一个白蛋白结合部分(例如，ZnX，Chem.1)包含独立地选自Chem. 3和Chem. 4的延伸部分(例如，X)：
Chem. 3：HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 4：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为10-20的整数，y为6-14的整数。
在一个实施方案中，Chem. 1或Chem. 2的X选自Chem. 3和Chem. 4：
Chem. 3：HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 4：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为10-20的整数，y为6-14的整数。
在一个实施方案中，Chem. 1或Chem. 2的X1选自Chem. 3和Chem. 4：
Chem. 3：HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 4：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为10-20的整数，y为6-14的整数。
在一个实施方案中，Chem. 2的X2选自Chem. 3和Chem. 4：
Chem. 3：HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 4：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中s为10-20的整数，t为6-14的整数。
在一个实施方案中，Chem. 1或Chem. 2的X、X1和X2独立地选自Chem. 3和Chem. 4：
Chem. 3：HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 4：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为10-20的整数，y为6-14的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为10-20的整数。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为6-14的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为12-20的整数。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为6-12的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为14-20的整数。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为6-10的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为14-16的整数。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为6-8的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为12-18的整数。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为8-10的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为14-18的整数。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为8-12的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为10-16的整数。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为8-14的整数。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为整数并且选自12、14、16、18和20。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为整数并且选自6、8、10、12和14。
在一个实施方案中，Chem. 3的*-(CH2)x-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中x为整数并且选自14、16、18和20。
在另一实施方案中，Chem. 4的*-(CH2)y-*是指直链或支化（优选直链）亚烷基，其中y为整数并且选自8、10和12。
在一个实施方案中，脂肪二酸的一个酸基与所述胰岛素中的赖氨酸残基的ε氨基形成酰胺键，优选经由连接基。
本文使用的术语“经受取代的胰岛素”是指通过本文提供的方法处理的胰岛素，像被白蛋白结合部分取代的胰岛素，得到根据本发明的胰岛素衍生物。
术语"脂肪二酸"是指在ω位具有另外的羧酸基的脂肪酸。因此，脂肪二酸为二羧酸。
命名法按本领域惯常的，例如在上式中，*-COOH以及HOOC-*是指羧基；*-C6H4-*是指亚苯基；*-CO-*以及*-OC-*是指羰基(O=C<**)。
在特定的实施方案中，芳族(例如苯氧基和亚苯基)可独立地为邻、间或对位。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含至少2个白蛋白结合部分，每一个白蛋白结合部分包含选自Chem. 3或Chem. 4的延伸部分。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含至少2个白蛋白结合部分，每一个白蛋白结合部分包含选自Chem. 3或Chem. 4的延伸部分，并且白蛋白结合部分任选还包含连接基，其中每一个连接基包含式Chem. 5、Chem. 6、Chem. 7、Chem. 8、Chem. 9、Chem. 10和/或Chem. 11的一个或多个连接基组分。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物包含至少2个白蛋白结合部分，每一个白蛋白结合部分包含选自Chem. 3或Chem. 4的延伸部分，并且白蛋白结合部分还包含连接基(其可指示为Z)。
在一个实施方案中，连接基包含式Chem. 5、Chem. 6、Chem. 7、Chem. 8、Chem. 9、Chem. 10和/或Chem. 11的一个或多个连接基组分。
在一个实施方案中，根据本发明的连接基组分可指示为e。
在一个实施方案中，连接基(Z)包含两个连接基组分，其可指示为e1-e2，说明相对于彼此的排列，例如，连接基组分e1与连接基组分e2连接。
在一个实施方案中，连接基(Z)包含三个连接基组分，其可指示为e1-e2-e3，说明相对于彼此的排列，例如，连接基组分e1与连接基组分e2连接，并且连接基组分e2与连接基组分e1和连接基组分e3连接。
在一个实施方案中，连接基(Z)包含四个连接基组分，其可指示为e1-e2-e3-e4，说明相对于彼此的排列，例如，连接基组分e1与连接基组分e2连接，并且连接基组分e2与连接基组分e1和连接基组分e3连接，并且连接基组分e3与连接基组分e4连接。
在一个实施方案中，连接基(Z)包含四个连接基组分，其可指示为e1-e2-e3-e4-e5，说明相对于彼此的排列，例如，连接基组分e1与连接基组分e2连接，并且连接基组分e2与连接基组分e1和连接基组分e3连接，连接基组分e3与连接基组分e4连接，并且e4与连接基组分e5连接。
在一个实施方案中，连接基(Z)包含四个连接基组分，其可指示为e1-e2-e3-e4-e5-e6，说明相对于彼此的排列，例如，连接基组分e1与连接基组分e2连接，并且连接基组分e2与连接基组分e1和连接基组分e3连接，连接基组分e3与连接基组分e4连接，e4与连接基组分e5连接，并且e5与连接基组分e6连接。
在一个实施方案中，本发明的连接基中，用最高的数字(例如，连接基e1-e2-e3-e4中的e4或连接基e1-e2-e3中的e3)指示的连接基组分与延伸部分(即，脂肪二酸)连接。
本发明的衍生物的连接基可包含以下第一连接基组分：
Chem 5：
Figure 502087DEST_PATH_IMAGE002
，
其中k为1-5的整数，并且n为1-5的整数。
在一个特定的实施方案中，当k=1并且n=1时，该连接基组分可指示为OEG，或8-氨基-3,6-二氧杂辛酸的双基，和/或其可用下式表示：
Chem. 5a：
*-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-CO-*。
在一个实施方案中，独立地或与一个或多个其它连接基组分组合，本发明的衍生物的每一个连接基还包含第二连接基组分，优选Glu双基，例如Chem. 6和/或Chem. 7：
Chem. 6：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
Chem. 7：
Figure 543861DEST_PATH_IMAGE004
，
其中可包括p倍Glu双基，其中p为1-3的整数。
Chem. 6也可称为γ-Glu，或简称为g-Glu，因为事实上，在这里用于与另一个连接基组分或与赖氨酸的ε-氨基连接的是氨基酸谷氨酸的γ羧基。其它连接基组分可例如为另一个Glu残基或OEG分子。Glu的氨基进而与延伸部分的羧基或与例如OEG分子(如果存在)的羧基或与例如另一个Glu(如果存在)的γ-羧基形成酰胺键。
Chem. 7也可称为α-Glu，或简称为aGlu，或简单地Glu，因为事实上，在这里用于与另一个连接基组分或与赖氨酸的ε-氨基或与A链或B链的N-末端连接的是氨基酸谷氨酸的α羧基。
Chem. 6和Chem. 7的以上结构涵盖Glu的L-形式以及D-形式。L-形式可指示为γ-L-Glu或gLGlu，而D-形式可指示为γ-D-Glu或gDGlu。在特定的实施方案中，Chem. 6和/或Chem. 7独立地为a) L-形式或b) D-形式。
在一个实施方案中，独立地或与一个或多个其它连接基组分组合，本发明的衍生物的每一个连接基还包含第二连接基组分，优选Asp双基，例如Chem. 8和/或Chem. 9：
Chem. 8：
Figure DEST_PATH_IMAGE005
Chem. 9：
Figure 12014DEST_PATH_IMAGE006
，
其中可包括p倍Asp双基，其中p为1-3的整数。
Chem. 8也可称为β-Asp，或简称为bAsp，因为事实上，在这里用于与另一个连接基组分或与赖氨酸的ε-氨基或与A链或B链的N-末端连接的是氨基酸天冬氨酸的γ羧基。其它连接基组分可例如为另一个Asp残基或OEG分子。Asp的氨基进而与延伸部分的羧基或与例如OEG分子(如果存在)的羧基或与例如另一个Asp(如果存在)的β-羧基形成酰胺键。
Chem. 9也可称为α-Asp，或简称为aAsp，或简单地Asp，因为事实上，在这里用于与另一个连接基组分或与赖氨酸的ε-氨基连接的是氨基酸天冬氨酸的α羧基。
Chem. 8和Chem. 9的以上结构涵盖Asp的L-形式以及D-形式。L-形式可指示为β-L-Asp或bLAsp，而D-形式可指示为β-D-Asp或bDAsp。在特定的实施方案中，Chem. 8和/或Chem. 9独立地为a) L-形式或b) D-形式。
在一个实施方案中，独立地或与其它连接基组分组合，本发明的衍生物的每一个连接基还包含以下第三连接基组分：
Chem. 10：
*-N((CH2)nCOOH)(CH2)mCO-*，n=1-2
其中n和m为1-2的整数。该连接基组分可指示为IDA。
在一个实施方案中，当白蛋白结合部分通过还原性烷基化连接时，独立地或与其它连接基组分组合，本发明的衍生物的每一个连接基还包含以下连接基组分：
Chem. 11：
*-CH2PhCH2NH-*
该连接基组分可指示为CPH。
在其它特定的实施方案中，连接基具有a) 5-41个C原子；和/或b) 4-28个杂原子。杂原子的具体和非限制性实例为N原子和O原子。H原子不是杂原子。
或者，连接基部分(如果存在)具有5-30个C原子，优选5-25个C原子，更优选5-20个C原子，或最优选5-17个C原子。在另外的优选实施方案中，连接基部分(如果存在)具有4-20个杂原子，优选4-18个杂原子，更优选4-14个杂原子，或最优选4-12个杂原子。
或者，连接基包含至少一个OEG分子和/或至少一个谷氨酸残基，或者更确切地说相应的自由基。
在一个实施方案中，每一个连接基由一倍Chem. 6和两倍Chem. 5组成，经由酰胺键并且按照说明的顺序互连，连接基在其游离的氨基端与延伸部分的游离的羰基连接，并且在其游离的羰基端与胰岛素的B29赖氨酸残基、A22K赖氨酸残基或A链和/或B链的N-末端连接。
在一个实施方案中，一个或多个白蛋白结合部分通过酰化与胰岛素连接。
在一个实施方案中，一个或多个白蛋白结合部分通过还原性烷基化与胰岛素连接。
一个实施方案为通过还原性烷基化，用白蛋白结合部分取代根据本发明的胰岛素或胰岛素衍生物的方法。
在一个实施方案中，根据本发明分两步取代胰岛素，在第一步中，一个或多个白蛋白结合部分通过酰化与胰岛素连接，而在第二步中，一个或多个白蛋白结合部分通过还原性烷基化与在第一步中获得的胰岛素衍生物连接。
在一个实施方案中，根据本发明分两步取代胰岛素，在第一步中，一个或多个白蛋白结合部分通过还原性烷基化与胰岛素连接，而在第二步中，一个或多个白蛋白结合部分通过酰化与在第一步中获得的胰岛素衍生物连接。
在一个实施方案中，胰岛素的A链和/或B链的N-末端中的胺与白蛋白结合部分中的醛官能反应。
在一个实施方案中，通过还原性烷基化，根据本发明的胰岛素或胰岛素衍生物被白蛋白结合部分取代。
在一个实施方案中，通过使用还原剂还原性烷基化，根据本发明的胰岛素或胰岛素衍生物被一个或多个白蛋白结合部分取代。
在一个实施方案中，通过使用NaCNBH3作为还原剂还原性烷基化，根据本发明的胰岛素或胰岛素衍生物被一个或多个白蛋白结合部分取代。
一个实施方案为通过还原性烷基化，用白蛋白结合部分取代根据本发明的胰岛素或胰岛素衍生物的方法，其中NaCNBH3用作还原剂。
一个实施方案为在所述胰岛素的A链和/或B链中，在所述胰岛素的N-末端氨基酸残基处，用白蛋白结合部分取代根据本发明的胰岛素或胰岛素衍生物的方法。
本发明的一个实施方案为在所述胰岛素的A链和/或B链中，在所述胰岛素的N-末端氨基酸残基处，用白蛋白结合部分取代根据本发明的胰岛素或胰岛素衍生物的方法，其中NaCNBH3用作还原剂。
在一个实施方案中，本发明的至少两个侧链类似。
在一个实施方案中，本发明的至少两个白蛋白结合部分(即，整个侧链)类似。
在一个实施方案中，每一个白蛋白结合部分的延伸部分类似。
本文使用的术语“类似”，其涉及本发明的至少两个侧链或白蛋白结合部分，是指延伸部分和连接基的组合相同(例如，Z=Z1，n=m和X=X1，Chem. 1)。
本文使用的术语“类似”，其涉及本发明的至少两个侧链的延伸部分，是指在胰岛素衍生物的侧链中延伸部分的组合相同(例如，X=X1)。
本文使用的术语“类似”，其涉及本发明的至少两个白蛋白结合部分的延伸部分，是指在胰岛素衍生物的白蛋白结合部分中延伸部分的组合相同(例如，X=X1)。
在一个实施方案中，每一个侧链或白蛋白结合部分的连接基组分的组合类似(例如，对于根据本发明的一种胰岛素衍生物，如果对于Z，e1-e2=gDGlu-aLAsp组合，则对于Z1，e1-e2也是gDGlu-aLAsp组合)。
在一个实施方案中，在每一个侧链或白蛋白结合部分中连接基组分的组合不类似(例如，对于根据本发明的一种胰岛素衍生物，如果对于Z，e1-e2为gDGlu-aLAsp组合，则对于Z1，e1-e2为不同于gDGlu-aLAsp组合的另一种连接基组分组合，例如，gDGlu-OEG)。
在一个实施方案中，在本发明的至少两个侧链的连接基(如果存在)中的连接基组分组合不类似(例如，对于根据本发明的一种胰岛素衍生物，如果对于Z，e1-e2为gDGlu-aLAsp组合，则对于Z1，e1-e2为不同于gDGlu-aLAsp组合的另一种连接基组分组合，例如，gDGlu-OEG)并且延伸部分不类似(例如，X不是与X1相同的脂肪二酸)。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物形式为在药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，盐可为碱式盐、酸式盐或者二者均不是(即，中性盐)。在水中，碱式盐产生氢氧根离子，而酸式盐产生水合氢离子。
本发明的胰岛素衍生物的盐可与加入的阳离子或阴离子形成，所述加入的阳离子或阴离子分别与阴离子或阳离子基团反应。这些基团可位于肽部分中，和/或在本发明的衍生物的侧链中。
本发明的衍生物的阴离子基团的非限制性实例包括在侧链(如果有的话)以及在肽部分中的游离羧基。肽部分通常在C-末端包括游离的羧酸基团，并且其还可在内部酸氨基酸残基(例如Asp和Glu)处包括游离的羧基。
在肽部分中的阳离子基团的非限制性实例包括在N-末端(如果存在)的游离氨基以及内部碱性氨基酸残基(例如His、Arg和Lys)的任何游离氨基。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物用作药物。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物用作药剂。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物用作用于延缓或防止2型糖尿病的疾病进展的药剂。
在本发明的一个实施方案中，提供了胰岛素衍生物用作药物，其用于治疗或预防包括应激性高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、以及烧伤、手术创伤和在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损害、心肌梗塞、中风、冠心病和其它心血管病症。
在一个实施方案中，本发明涉及一种方法，其用于治疗或预防包括应激性高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、以及烧伤、手术创伤和在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损害、心肌梗塞、冠心病和其它心血管病症、中风，所述方法包括对需要这种治疗的患者给予对于这种治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物。
术语“糖尿病(diabetes)”或“糖尿病(diabetes mellitus)”包括1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠期糖尿病(在怀孕期间)和造成高血糖症的其它状况。该术语用于代谢病症，其中胰腺产生不足够量的胰岛素，或者其中身体的细胞不能适当与胰岛素响应，因此妨碍细胞吸收葡萄糖。结果是，葡萄糖在血液中累积。
1型糖尿病，也称为胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)和幼年发病型糖尿病，由B-细胞破坏造成，通常导致绝对的胰岛素缺乏。
2型糖尿病，也称为非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)和成年发病型糖尿病，与以下有关：占主导的胰岛素抵抗，由此造成相对的胰岛素缺乏；和/或占主导的胰岛素分泌缺陷，伴随着胰岛素抵抗。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素衍生物用于制备药物，所述药物其用于治疗或预防包括压力诱导高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、烧伤、手术创伤、在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损害、心肌梗塞、中风、冠心病、其它心血管病症，治疗重症糖尿病患者和非糖尿病患者和多发性神经病。
本文使用的术语“人胰岛素”是指其结构和性质为众所周知的人胰岛素激素。人胰岛素具有两个多肽链，称为A链和B链。A链为21个氨基酸的肽，而B链为30个氨基酸肽，两个链通过二硫桥连接：第一桥在A链7位的半胱氨酸与B链7位的半胱氨酸之间，而第二桥在A链20位的半胱氨酸与B链19位的半胱氨酸之间。第三桥存在于A链的6位与10位的半胱氨酸之间。
在人体中，合成激素作为单链前体胰岛素原(前胰岛素原)，其由24个氨基酸的前肽后接含有86个氨基酸的胰岛素原组成，结构为：前肽-B-Arg Arg-C-Lys Arg-A，其中C为31个氨基酸的连接肽。Arg-Arg和Lys-Arg为用于连接肽从A链和B链裂解的裂解位点。
根据本发明的“胰岛素”在本文中应理解为人胰岛素或来自另一个物种的胰岛素(例如猪或牛胰岛素)。
根据本发明的“可溶性胰岛素”在本文中应理解为可溶于水溶液(包括但不局限于水)的胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于水。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素为可溶性水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于pH为pH 6-9的水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于pH为pH 7-8的水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于pH为pH 7.2-7.8的水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素为可溶于pH为pH 7.2-7.6的水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于pH为pH 7.4-7.6的水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于pH为pH 7.4-7.8的水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于pH碱性水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于pH中性水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于中性或低于中性1-2个pH单位的水溶液。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素可溶于中性或低于中性1个pH单位的水溶液。
在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为0.5 mM-8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为0.6 mM-7.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少0.6 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少0.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少1.0 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少1.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少1.4 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少1.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少2.0 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少2.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少2.4 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少2.6 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少2.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少3.0 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少3.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少3.4 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少3.6 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少3.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少4.0 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少4.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少4.4 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少4.6 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少4.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少5.0 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少5.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少5.4 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少5.6 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少5.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少6.0 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少6.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少6.4 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少6.6 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少6.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少7.0 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少7.2 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少7.4 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少7.6 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少7.8 mM。在一个实施方案中，根据本发明的胰岛素的溶解度为至少8.0 mM。
本文使用的术语“胰岛素肽”是指一种肽，其具有胰岛素活性的人胰岛素或其类似物或衍生物。
本文使用的术语“胰岛素衍生物”是指化学修饰的胰岛素，其中修饰的形式为酰胺、碳水化合物、烷基、酰基、酯、聚乙二醇化等的连接。根据本发明的人胰岛素的衍生物的实例为A22Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22Nε-N-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22K B29R desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H B29R desB30人、A22Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、B1Nα-(十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A22Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H desB27 desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E desB27 desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG A14E desB27 desB30人胰岛素。
本文使用的术语“胰岛素类似物”是指修饰的人胰岛素，其中胰岛素的一个或多个氨基酸残基被其它氨基酸残基取代和/或其中一个或多个氨基酸残基已从胰岛素删除和/或其中一个或多个氨基酸残基已加入和/或插入胰岛素。
在一个实施方案中，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含少于10个氨基酸修饰(取代、删除、添加(包括插入)和它们的任何组合)，或者相对于人胰岛素少于9、8、7、6、5、4、3、2或1个修饰。
指明链(A或B)、位置和取代天然氨基酸残基的氨基酸残基所用的一个或三个字母编码，以表示胰岛素分子中的修饰。
“连接肽”或“C-肽”是指单链胰岛素原-分子的B-C-A多肽序列的连接部分“C”。在人胰岛素链中，C-肽连接B链的30位和A链的1位，并且为35氨基酸残基长。连接肽包括两个末端二价氨基酸序列，例如，用作连接肽从A链和B链裂解以形成双链胰岛素分子的裂解位点的Arg-Arg和Lys-Arg。
“desB30”或“B(1-29)”是指缺乏B30氨基酸的天然胰岛素B链或其类似物，而“A(1-21)”是指天然胰岛素A链。因此，例如，A14E A22K desB30人胰岛素为人胰岛素的类似物，其中在A链中14位的氨基酸被谷氨酸取代，在A链中22位的氨基酸被赖氨酸取代，并且在B链中30位的氨基酸被删除。
本文中术语像“A1”、“A2”和“A3”等分别说明在胰岛素的A链的1位、2位和3位等的氨基酸(从N-末端计数)。类似地，术语像“B1”、“B2”和“B3”等分别说明在胰岛素的B链的1位、2位和3位等的氨基酸(从N-末端计数)。对氨基酸使用一个字母编码，术语像A21A、A21G和A21Q分别指示在A21位的氨基酸为A、G和Q。对氨基酸使用三个字母编码，相应的表述分别为A21Ala、A21Gly和A21Gln。
本文术语“氨基酸残基”为在形式上羟基已从羧基除去和/或在形式上氢原子已从氨基除去的氨基酸。
氨基酸以D(右)或L(左)的立体异构形式存在。D和L是指光学活性化合物的绝对构型（absolute confirmation）。除甘氨酸外，所有的其它氨基酸为不能叠合的镜像。自然界中发现的大多数氨基酸为L-类型。因此，真核蛋白质总是由L-氨基酸组成，但是在细菌细胞壁中和在一些肽抗生素中发现D-氨基酸。在自然界中已描述至少300种氨基酸，但是这些中仅二十种通常作为人肽和蛋白质中的组分而存在。在肽生物合成中，二十种标准氨基酸被细胞利用，并且这些由通用的遗传编码指定。二十种标准氨基酸为丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、蛋氨酸(Met)、脯氨酸(Pro)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)和组氨酸(His)。
胰岛素类似物的实例为其中A链14位的Tyr(Y)被Glu(E)取代和/或B29位的Lys(K)被Pro(P)、Arg(R)取代的那些。此外，在B3位的Asn(N)可被Lys(K)取代。另外，可将一个或多个氨基酸加入到A链和/或B链的C-末端，例如像Lys(K)。在B1位的氨基酸可被Glu(E)取代。在B16位的氨基酸可被His(H)取代。胰岛素类似物的其它实例为删除类似物，例如，其中人胰岛素中的B30氨基酸已删除的类似物(desB30人胰岛素)、desB28-B30人胰岛素和desB27人胰岛素。其中A链和/或B链具有N-末端延伸的胰岛素类似物和其中A链和/或B链具有C-末端延伸的胰岛素类似物(例如具有加入到B链的C-末端的两个精氨酸残基)也是胰岛素类似物的实例。其它实例为包含所提及的突变的组合的胰岛素类似物。其中在B25位的氨基酸为His(H)并且其任选还包含一个或多个另外的突变的胰岛素类似物是胰岛素类似物的其它实例。其中在A22位的氨基酸残基为Lys( K)和/或其中胰岛素类似物在C-末端被两个Arg(R)残基进一步延伸的人胰岛素的胰岛素类似物也是胰岛素类似物的实例。
胰岛素类似物的其它实例包括：desB30人胰岛素、A22K desB30人胰岛素、A14E A22K desB30人胰岛素、A14E A22K B25H B29R desB30人胰岛素、A14E A22K B25H desB30人胰岛素A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A14E B25H desB30人胰岛素、A14E B16H desB30人胰岛素、A14E B16H B25H desB30人胰岛素B28D人胰岛素、A22K B29R desB30人胰岛素、B3K B28E人胰岛素、B28D desB30人胰岛素、A22K B29P desB30人胰岛素、B28K B29P人胰岛素、B28K B29P desB30人胰岛素、B3K B28E desB30人胰岛素、A14E desB27 desB30人胰岛素和A14E B16H desB27 desB30人胰岛素。
胰岛素受体结合试验(HIRspa)：
本发明的胰岛素衍生物对人胰岛素受体的亲和力通过SPA试验(邻近闪烁试验)微量滴定板抗体捕获试验来测定。将SPA-PVT抗体结合珠、抗鼠试剂(Amersham Biosciences，分类号PRNQ0017)与25 mL结合缓冲剂(100 mM HEPES pH 7.8；100 mM氯化钠，10 mM MgSO4，0.025%吐温-20)混合。用于单一Packard Optiplate(Packard No. 6005190)的试剂混合物包含：2.4 μl的1:5000稀释的纯化的重组人胰岛素受体(含有或不含外显子11)、相应于每100 μl试剂混合物5000 cpm的量的A14Tyr[125I]-人胰岛素的储液、12 μl的F12抗体的1:1000稀释液、3 mL的SPA珠和结合缓冲剂，总计12 mL。随后将共100 μl试剂混合物加入到Packard Optiplate中的每一个孔中，并且在Optiplate中由适当的样品制备胰岛素衍生物的稀释系列。随后将样品温育16小时，同时轻微振动。随后通过离心1分钟，将各相分离，并且在Topcounter中对板计数。使用非线性回归算法在GraphPad Prism 2.01(GraphPad Software，San Diego，CA)中拟合结合数据，亲和力用相对于(按百分比(%))人胰岛素的亲和力表示。
还使用其中结合缓冲剂还含有1.5%HSA的相关测定，以模仿生理条件。
药代动力学试验，静脉大鼠PK：
麻醉的大鼠通过静脉给药(i.v.)各种剂量的胰岛素衍生物，并且以给药后4小时或更长的指定间隔，使用免疫测定或质谱法测量所采用的化合物的血浆浓度。随后使用WinNonLin Professional(Pharsight Inc.，Mountain View，CA，USA)计算药代动力学参数。
使用重约200 g的非禁食的雄性Wistar大鼠(Taconic)。
测量体重，随后用Hypnorm/多美康(每一种化合物单独在无菌水中1:1稀释，随后混合；在实验当天新制备)麻醉大鼠。通过2 mL/kg Hypnorm/多美康混合物皮下注射引发麻醉，接着是1 mL/kg sc的两个维持剂量，间隔为30分钟，以及1 mL/kg皮下注射的两个维持剂量，间隔为45分钟。如果需要，为了从始至终保持大鼠轻度麻醉，供应1-2 mL/kg sc的另外的剂量。在大鼠容纳室中进行称重和初始麻醉，以避免由于将它们从一个房间移到另一个房间而使动物紧张。
白蛋白结合试验，保留时间(RT)
通过使用固定人血清白蛋白色谱-质谱法测量药物-蛋白质结合。
白蛋白结合，按照固定的HSA-柱上的保留时间(Rt)来测量。
按以下顺序使用溶剂：
A：新制备的50mM乙酸铵pH 7.4(3,854 g/ 1L)
B：100% 2-丙醇
时间(分钟) A溶剂(%) B溶剂(%) 流速(mL/分钟)
0 100 0 0.7
5 65 35 0.7
15 60 40 0.7
16 100 0 0.7
20 100 0 0.7
HPLC 1100系统(CTC PAL自动取样器)如下排列：
·HPLC-柱：手性HSA 50×3.0mm 5μm(Chromtech分类号：HSA 50.3 06-F)
·UV检测器：280 nm
·柱温度：45℃
·化合物注射：10 μL，10μM
·分流1:4(MS;LC)
LC/MSD Trap XCT如下排列：
·离子源类型：ESI
·极性：正
·干温度：325℃
·喷雾器：40.00 psi
·干气体：8.00 L/分钟
生产胰岛素
多肽(例如，胰岛素)的生产为本领域众所周知的。用作胰岛素衍生物的一部分的胰岛素或胰岛素类似物可例如通过经典的肽合成来生产，例如，使用t-Boc或Fmoc化学或其它充分建立的技术的固相肽合成，参见，例如，Greene和Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基团)”，John Wiley & Sons，1999。胰岛素或胰岛素类似物还可通过以下方法生产：所述方法包括培养含有DNA序列的宿主细胞，该序列对类似物编码，并且能在合适的营养培养基中在允许表达胰岛素或胰岛素类似物的条件下表达胰岛素或胰岛素类似物。若干重组体方法可用于生产人胰岛素和人胰岛素类似物。可用于在微生物(例如像大肠杆菌(Escherichia coli)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))中生产胰岛素的方法的实例例如公开于WO2008/034881。
通常通过在合适的宿主细胞中以众所周知的技术对编码所讨论的胰岛素或胰岛素类似物或其前体的DNA序列作表达，来生产胰岛素或胰岛素类似物，例如，在EP1246845或WO2008/034881中描述的。
胰岛素或胰岛素类似物可连带N-末端延伸来表达，如在EP 1,246,845中公开的。在分泌至培养基和恢复后，胰岛素前体将经受各种体外程序来除去可能的N-末端延伸序列和连接肽，以得到胰岛素或胰岛素类似物。这样的方法包括：在L-苏氨酸酯存在下，借助胰蛋白酶或水解无色杆菌(Achromobacer lyticus)蛋白酶的酶转化，接着通过碱性或酸性水解将胰岛素或胰岛素类似物的苏氨酸酯转化为胰岛素或胰岛素类似物，如在美国专利说明书4,343,898或4,916,212号中描述的。
适用于本发明的N-末端延伸类型的实例公开于US5395922和EP0765395。
对于包含非天然氨基酸残基的胰岛素类似物，应修饰重组体细胞，使得非天然氨基酸结合到类似物中，例如通过使用tRNA突变体。因此，简要地，与已知的胰岛素类似物的制备类似地制备根据本发明的胰岛素或胰岛素类似物。
蛋白质纯化
从细胞培养基回收用作本发明的胰岛素衍生物的一部分的胰岛素或胰岛素类似物。本发明的胰岛素或胰岛素类似物可通过本领域已知的多种程序纯化，包括但不限于层析法(例如，离子交换、亲和力、疏水、聚焦层析和尺寸排阻)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦(IEF)、差别溶解(例如，硫酸铵沉淀)或萃取(参加，例如，Protein Purification(蛋白质纯化)，J.-C. Janson和Lars Ryden编辑，VCH Publishers，New York，1989)。优选，它们可通过亲和力层析法在抗胰岛素或抗胰岛素类似物抗体柱上纯化。通过常规的化学纯化手段可实现额外的纯化，例如高效液相层析法。其它纯化方法(包括柠檬酸钡沉淀)为本领域已知的，并且可应用于本文描述的新的胰岛素或胰岛素类似物的纯化(参加，例如，Scopes，R.，Protein Purification(蛋白质纯化)，Springer-Verlag，N.Y.，1982)。
药物制剂
含有根据本发明的胰岛素衍生物的药物组合物可在数个部位给予需要这种治疗的患者，例如，在局部部位，例如，皮肤和粘膜部位，在旁路吸收的部位，例如，在动脉、静脉、心脏中给予，以及在涉及吸收的部位，例如，在皮肤中、在皮肤下、在肌肉中或在腹中给予。
根据本发明的药物组合物可通过数个给予路线给予需要这种治疗的患者，例如，舌、舌下、颊、口中、口腔、胃和肠中、鼻、肺(例如，通过细支气管和肺泡或它们的组合)、表皮、皮肤、透皮、阴道、直肠、眼(例如通过结膜)、输尿管和肠胃外。
本发明的组合物可采用数种剂型给予，例如，溶液剂、混悬剂、乳液剂、微乳液剂、多重乳液、泡沫、膏、糊、硬膏、软膏、片剂、包衣片剂、冲洗剂、胶囊剂(例如，硬明胶胶囊和软明胶胶囊)、栓剂、直肠胶囊、滴剂、凝胶剂、喷雾剂、散剂、气溶胶、吸入剂、滴眼剂、眼用软膏、眼用冲洗剂、阴道栓剂、阴道环、阴道软膏、注射溶液、原位转变溶液剂(例如原位凝胶化、原位固化、原位沉淀、原位结晶)、灌注溶液和植入物。
对于肠胃外给予，与已知胰岛素的配制类似地配制本发明的胰岛素衍生物。此外，对于肠胃外给予，与已知胰岛素的给予类似地给予本发明的胰岛素衍生物，并且医生熟悉该程序。
肠胃外给予可借助注射器进行，任选笔状注射器。或者，肠胃外给予可借助灌注泵进行。
含有本发明的胰岛素衍生物的可注射组合物可使用药物行业常规的技术制备，其包括适当地溶解和混合成分，以得到期望的终产物。因此，根据一种程序，将本发明的胰岛素衍生物溶解于一定量的水中，水的量稍微低于待制备的组合物的最终体积。按需加入等渗剂、防腐剂和缓冲剂，并且如果需要，则按需使用酸(例如，盐酸)或碱(例如，氢氧化钠水溶液)调节溶液的pH值。最后，用水调节溶液的体积，以得到期望的成分浓度。
旨在用于口腔使用的制剂可根据任何已知的方法制备，并且所述制剂可含有一种或多种选自增甜剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以提供在药学上精致和可口的制备物。片剂可含有活性成分混合，带有适用于制备片剂的非毒性、药学上可接受的赋形剂。片剂可未包衣或者可通过已知的技术对它们包衣，以延迟分解或释放治疗活性多肽。
本发明的可口腔给予的制剂可根据药物化学中熟知的方法制备和给予，参见Remington的Pharmaceutical Sciences(药物科学)，第17版(A. Osol编辑，1985)。
本发明的胰岛素衍生物制备物与已知的胰岛素制备物的使用类似地使用。
以下为进一步包含在本发明范围内的方面的非限制性列举：
1) 胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含至少2个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
2) 胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含至少3个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
3) 胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含2个或3个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
4) 胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含2个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
5) 胰岛素衍生物或在药学上可接受的盐，其包含3个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
6) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含至少3个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
7) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含2个或3个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
8) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含2个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
9) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其包含3个白蛋白结合部分，其中每一个白蛋白结合部分包含脂肪二酸取代，并且其中来自每个所述脂肪二酸取代的一个羧基任选经由连接基与胰岛素连接。
10) 以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X2为任选的，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
11) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X2为任选的，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
12) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
13) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 168692DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29精氨酸残基和A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述A22赖氨酸残基，并且X1位于A链的N-末端，并且X2不存在，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n和m为1或0，并且p为0。
14) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 373408DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29精氨酸残基和A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述A22赖氨酸残基，并且X1位于B链的N-末端，并且X2不存在，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n和m为1或0，并且p为0。
15) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 572308DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1位于所述A链的N-末端，并且X2不存在，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n和m为1或0，并且p为0。
16) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 926673DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1位于B链的N-末端，并且X2不存在，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n和m为1或0，并且p为0。
17) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸残基和A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1位于所述A22赖氨酸残基，并且X2不存在，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n和m为1或0，并且p为0。
18) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
，其中
a. Ins代表包含B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述A链的N-末端，并且X1位于所述B链的N-末端，并且X2不存在，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n和m为1或0，并且p为0。
19) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 349061DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1在所述A链的N-末端，并且X2位于所述B链的N-末端，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
20) 根据任何前述方面的以下通式的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 872446DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29精氨酸残基和A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X位于所述A22赖氨酸残基，并且X1在所述A链的N-末端，并且X2位于所述B链的N-末端，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
21) 通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
22) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
23) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
24) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29精氨酸残基和A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代脂肪二酸取代，并且X位于所述A22赖氨酸残基，并且X1位于A链的N-末端，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
25) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29精氨酸残基和A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，并且X位于所述A22赖氨酸残基，并且X1位于B链的N-末端，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
26) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1位于所述A链的N-末端，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
27) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1位于B链的N-末端，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
28) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸和A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1位于所述A22赖氨酸残基，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
29) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29精氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，并且X位于所述A链的N-末端，并且X1位于所述B链的N-末端，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
30) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代包含10-20个碳原子。
31) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为10-20的整数，并且y为6-14的整数。
32) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14-20的整数，并且y为6-10的整数。
33) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14-18的整数，并且y为8-10的整数。
34) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14-16的整数，并且y为10-12的整数。
35) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14-20的整数，并且y为6-12的整数。
36) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为12、14、16、18或20，并且y为6、8、10、12或14。
37) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14、16、18或20，并且y为8、10或12。
38) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14、16、18或20，并且y为6、8或10。
39) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14、16或18，并且y为8、10或12。
40) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代在所述胰岛素中的氨基酸残基处连接，所在位置选自A1、A22、B1和B29。
41) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物，其中所述脂肪二酸取代分别与赖氨酸侧链ε-氨基或胰岛素的A链和/或B链的N-末端连接。
42) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代经由连接基与胰岛素的氨基酸残基连接。
43) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述连接基(Z)包含一个或多个连接基组分(e)。
44) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述连接基包含一个或多个选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG。
45) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述连接基包含下式表示的两个连接基组分：e1-e2，其中
a. e1为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG，
b. e2为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG。
46) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述连接基包含下式表示的三个连接基组分：e1-e2-e3，其中
a. e1为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG，
b. e2为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG，
c. e3为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG。
47) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述连接基包含下式表示的四个连接基组分：e1-e2-e3-e4，其中
a. e1为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG，
b. e2为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG，
c. e3为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG，
d. e4为选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG。
48) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述白蛋白结合部分位于所述胰岛素A链和/或B链的N-末端，并且其中所述连接基包含一个或多个CPH连接基组分。
49) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物的白蛋白结合部分类似。
50) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述胰岛素衍生物选自人胰岛素的衍生物、desB30人胰岛素的衍生物和胰岛素类似物的衍生物。
51) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述胰岛素选自desB30人胰岛素、A22K desB30人胰岛素、A14E A22K desB30人胰岛素、A14E A22K B25H B29R desB30人胰岛素、A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A14E B25H desB30人胰岛素、A14E B16H desB30人胰岛素、A14E B16H B25H desB30人胰岛素、B28D人胰岛素、A22K B29R desB30人胰岛素、B3K B28E人胰岛素、B28D desB30人胰岛素、A22K B29P desB30人胰岛素、B28K B29P人胰岛素、B28K B29P desB30人胰岛素和B3K B28E desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H desB27 desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E desB27 desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG A14E desB27 desB30人胰岛素。
52) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐用作药物的用途，所述药物用于治疗或预防包括应激性高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、烧伤、手术创伤、在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损伤、心肌梗塞、中风、冠心病、其它心血管病症，治疗重症糖尿病患者和非糖尿病患者和多发性神经病。
53) 根据任何前述方面的通式XZn-Ins-Z1 mX1的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，并且X位于所述B29赖氨酸残基，并且X1位于所述A链的N-末端，并且其中X和X1由20个碳原子组成，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，并且其中Z和Z1为gGlu-OEG-OEG，
d. n和m为1。
54) 根据前述权利要求中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其尽可能选自A22Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG4-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22Nε-N-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22K B29R desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H B29R desB30人、A22Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、B1Nα-(十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A22Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素。
55) 根据任何前述方面的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其用作药物的用途。
56) 根据前述权利要求中任一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物可溶于水溶液。
57) 以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 302290DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X2为任选的，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
58) 以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X2为任选的，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
59) 以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 5990DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X2为任选的，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
60) 根据权利要求1的可溶性胰岛素衍生物或在药学上可接受的盐，其用作药物的用途。
61) 根据前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
62) 以下通式的根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 922310DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
63) 根据前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 339648DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
64) 根据前述权利要求中任一项的通式XZn-Ins-Z1 mX1的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
65) 根据前述权利要求中任一项的通式XZn-Ins-Z1 mX1的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子。
66) 根据前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 418462DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14、16、18或20个碳原子。
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
67) 根据前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 854123DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14、16、18或20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
68) 根据前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 625769DEST_PATH_IMAGE007
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14、16、18或20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
69) 根据前述权利要求中任一项的通式XZn-Ins-Z1 mX1的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，其中所述脂肪二酸取代包含14、16、18或20个碳原子，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
70) 根据前述权利要求中任一项的通式XZn-Ins-Z1 mX1的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14、16、18或20个碳原子，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
71) 根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为10-20的整数，并且y为6-14的整数。
72) 根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代从选自Chem. 1和Chem. 2的延伸部分选取：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14、16或18，并且y为8、10或12。
73) 根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代在所述胰岛素中的氨基酸残基处连接，所在位置选自A1、A22、B1和B29。
74) 根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代经由连接基与胰岛素的氨基酸残基连接。
75) 根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述连接基包含一个或多个选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG。
76) 根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其用作药物的用途，所述药物用于治疗或预防包括应激性高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、烧伤、手术创伤、在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损伤、心肌梗塞、中风、冠心病、其它心血管病症，治疗重症糖尿病患者和非糖尿病患者和多发性神经病。
77) 根据前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其选自A22Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG4-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22Nε-N-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22K B29R desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H B29R desB30人、A22Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、B1Nα-(十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A22Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素。
78) 用于制备根据上述权利要求中任一项的胰岛素衍生物的方法，所述方法包括酰化或烷基化的步骤。
79) 用于制备根据任何上述方面的胰岛素衍生物的方法。
80) 通过使胰岛素还原性烷基化和/或酰化，制备根据任何上述方面的胰岛素衍生物的方法。
81) 通过使胰岛素还原性烷基化，制备根据任何上述方面的胰岛素衍生物的方法。
82) 通过使胰岛素酰化，制备根据任何上述方面的胰岛素衍生物的方法。
83) 根据方面1-77的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐作为药物的用途。
84) 根据方面1-77的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐的用途，用于治疗或预防包括应激性高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、烧伤、手术创伤、在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损伤、心肌梗塞、中风、冠心病、其它心血管病症，治疗重症糖尿病患者和非糖尿病患者和多发性神经病。
85) 根据方面1-77中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代X位于B29位赖氨酸，并且脂肪二酸取代X1位于所述胰岛素的A链的N-末端，其中X和X1由20个碳原子组成，并且所述连接基Z和Z1为gGlu-OEG-OEG。
86) 根据方面1-77中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐作为药物的用途，其中所述脂肪二酸取代X位于B29位赖氨酸，并且脂肪二酸取代X1位于所述胰岛素的A链的N-末端，其中X和X1由20个碳原子组成，并且所述连接基Z和Z1为gGlu-OEG-OEG。
87) 根据方面1-77中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐的用途，其中所述脂肪二酸取代X位于B29位赖氨酸，并且脂肪二酸取代X1位于所述胰岛素的A链的N-末端，其中X和X1由20个碳原子组成，并且所述连接基Z和Z1为gGlu-OEG-OEG，所述用途为用于治疗或预防包括压力诱导高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、烧伤、手术创伤、在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损伤、心肌梗塞、中风、冠心病、其它心血管病症，治疗重症糖尿病患者和非糖尿病患者和多发性神经病。
88) 根据方面1-77中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代X位于B29位赖氨酸，并且脂肪二酸取代X1位于所述胰岛素的A链的N-末端，其中其中X和X1由20个碳原子组成，并且所述连接基Z和Z1不是gGlu-OEG-OEG。
89) 根据方面1-77中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代X位于B29位赖氨酸，并且脂肪二酸取代X1位于所述胰岛素的A链的N-末端，并且其中所述连接基Z和Z1为gGlu-OEG-OEG，并且其中所述X和X1不是由20个碳原子组成。
90) 根据方面1-77中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中如果所述脂肪二酸取代X位于B29位赖氨酸，并且脂肪二酸取代X1位于所述胰岛素的A链的N-末端，并且其中所述连接基Z和Z1为gGlu-OEG-OEG，则其中所述X和X1不是由20个碳原子组成。
91) 根据方面1-72中任一项的胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中如果所述脂肪二酸取代X位于B29位赖氨酸，并且脂肪二酸取代X1位于所述胰岛素的A链的N-末端，其中其中X和X1由20个碳原子组成，则所述连接基Z和Z1不是gGlu-OEG-OEG。
缩写列表
AcOH，乙酸
Cpm，计数/分钟
Da，道尔顿
DCM，二氯甲烷
DIPEA，N,N-二异丙基乙基胺
DMSO，二甲基亚砜
EDTA，乙二胺四乙酸
ESI，电喷雾电离
Fmoc，芴基甲氧基羰基
HCCA，4-羟基-α-氰基-肉桂酸
HEPES，4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸
HPCD，2-羟基丙基-β-环糊精
HPLC，高效液相层析法，有时称为高压液相层析法
HSA，人血清白蛋白
LC-MS/LCMS，液相色谱法-质谱法
IDDM，胰岛素依赖性糖尿病
IEF，等电聚焦
NaAc，乙酸钠
NIDDM，非胰岛素依赖性糖尿病
NMP，N-甲基吡咯烷酮
MALDI，基质辅助激光解吸电离
MRT，平均停留时间
OEG，8-氨基-3,6-二氧杂辛酸，8-氨基-3,6-二氧杂辛酰基
RP-HPLC，反相HPLC
Rt，保留时间
RT，室温
SPA，邻近闪烁试验
SPA-PVT，邻近闪烁试验聚乙烯基甲苯珠粒
T-boc，二碳酸二叔丁酯
THF，四氢呋喃
TFA，三氟乙酸
Tris，三(羟甲基)氨基甲烷
tRNA，转移RNA
UV，紫外。
实施例
实施例1 A22N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素
Figure 763359DEST_PATH_IMAGE008
将A22K desB30胰岛素(200 mg，34 μM)溶解于pH 10.5的0.2 M碳酸钠(2.4 mL)中，并用乙腈(2.4 mL)中的十六烷二酰基-γ-琥珀酰亚胺基-L-谷氨酸盐(44 mg，86 uM，如WO05012347所述制备)处理。测量pH，如果需要，调节至10.5。30分钟后，通过加入pH 8的0.2 M甲基胺(0.24 mL)淬灭反应。用1 M HCl将pH调节至5.5，通过离心收集沉淀物。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用缓冲剂A：10 mM Tris、15 mM硫酸铵，pH 7.3，在水/乙腈80/20中，缓冲剂B：水/乙腈20/80，梯度11 % B-50 % B，经60分钟。通过调节pH至5.5，接着离心，使产物沉淀。或者，通过RP-HPLC在C18柱上进一步纯化产物，使用缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素。
产物LCMS：1658.4 Da [M + 4H]4+。
C301H458N68O88S6 [M + 4H]4+计算值：1658.5 Da。
LCMS 缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度10-90 % B，经10分钟。
实施例2 A22N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A22K desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE009
该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基作为试剂，如WO2010/029159所述制备。
产物LCMS：1817.5 Da [M + 4H]4+。
C329H510N72O100S6 [M + 4H]4+计算值：1817.6 Da。
实施例3 A22N ε -十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29N ε -十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素
Figure 583547DEST_PATH_IMAGE010
该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用十四烷二酰基-γ-琥珀酰亚胺基-L-谷氨酸盐作为试剂。
产物LCMS：1643.9 Da [M + 4H]4+。
C297H450N68O88S6 [M + 4H]4+计算值：1644.4 Da。
实施例4 A22N ε -十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基B29N ε -十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE011
该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用叔丁基-十八烷二酰基-γ-琥珀酰亚胺基-D-谷氨酸盐-叔丁基作为试剂，如WO05012347所述制备。通过用冰冷却的95 %三氟乙酸/水处理粗产物45分钟，除去叔丁基保护基团。
产物LCMS：1672.2 Da [M + 4H]4+。
C305H466N68O88S6 [M + 4H]4+计算值：1672.5 Da。
实施例5 A22N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E A22K B25H desB30人胰岛素
Figure 936031DEST_PATH_IMAGE012
该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用十六烷二酰基-γ-琥珀酰亚胺基-L-谷氨酸盐和A14E A22K B25H desB30人胰岛素。
产物LCMS：1647.3 Da [M + 4H]4+。
C294H454N70O89S6 [M + 4H]4+计算值：1647.4 Da。
实施例6 A22N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE013
该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基和A14E A22K B25H desB30人胰岛素。
产物LCMS：1806.6 Da [M + 4H]4+。
C322H506N74O101S6 [M + 4H]4+计算值：1806.6 Da。
实施例7 A1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素
Figure 564065DEST_PATH_IMAGE014
在pH 9.0的1:1乙腈/0.2 M碳酸钠中，该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用十六烷二酰基-γ-琥珀酰亚胺基-L-谷氨酸盐和A14E B25H desB30人胰岛素。
产物LCMS：1615.3 Da [M + 4H]4+。
C288H442N68O88S6 [M + 4H]4+计算值：1615.4 Da。
HSA柱的亲和力，Rt(分钟)：8.0分钟，单取代的胰岛素C的值(参见实施例29和表1) 6.4分钟。
实施例8 A1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基desB30人胰岛素
在pH 9.0的1:1乙腈/0.2 M碳酸钠中，该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用十六烷二酰基-γ-琥珀酰亚胺基-L-谷氨酸盐和desB30人胰岛素。
产物LCMS：1626.4 Da [M + 4H]4+。
C295H446N68O87S6 [M + 4H]4+计算值：1626.4 Da。
实施例9 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素
Figure 939683DEST_PATH_IMAGE016
在pH 9.0的1:1乙腈/0.2 M碳酸钠中，该化合物与实施例1的化合物类似地制备，通过使用十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基和A14E B25H desB30人胰岛素。
产物LCMS：1774.7 Da [M + 4H]4+。
C316H494N72O100S6 [M + 4H]4+计算值：1774.6 Da。
实施例10 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE017
十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛叔丁基-N-(4-甲酰基苄基)氨基甲酸酯制备物(100 mg)用TFA/DCM(1:1)处理1小时。将混合物真空浓缩，并且与甲苯共同浓缩两次。将残余物溶解于THF(2.5 mL)中，加入十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基酯(320 mg，如先前在WO2009/083549中所述制备)的THF(5 mL)溶液。缓慢加入DIPEA(0.5 mL)。130分钟后，将混合物真空浓缩。将残余物溶解于EtOAc和1N HCl中。有机层用1N HCl和盐水萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，真空浓缩，以得到标题化合物，为白色固体，其不经进一步纯化而使用。收率234 mg(72%)。
LCMS：理论质量：851.0 实测值：851.5(M+1)。
将相应于约400 mg胰岛素的A14E B25H desB27 desB30人胰岛素的锌沉淀物溶解于水(32 mL)中，并加入EDTA(40 mg)。让混合物在室温下留置1小时。用10% AcOH将pH降低至4.8。加入溶解于1M NaAc的十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(92 mg)(3.0 mL，在自来水下加热)。搅拌10分钟后，加入1M NaCNBH3/水(0.715 mL)，以得到20 mM 溶液。1分钟内，混合物变得不透明，并且出现粘性沉淀物。1小时后，加入更多的醛(36 mg)和THF(3 mL)。40分钟后，用AcOH将pH降低至3.1，并且加入一些乙腈。将混合物冻干。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经45分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7233.5 Da，C328H505N73O98S6计算值：7231.5 Da
实施例11 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素
Figure 547251DEST_PATH_IMAGE018
将A14E B25H desB30人胰岛素(300 mg)溶解于pH 5.0的1.0 M NaAc(3.2 mL)中。将醛十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(79 mg)在1.0 M NaAc中的pH 5.0的溶液(3.0 mL，在自来水下加热)加入。混合物变得不透明。搅拌5分钟后，加入1M NaCNBH3(135 μL)，以得到20 mM 溶液。pH为4.9，反应混合物显得不透明。40分钟后，用AcOH将pH降低至3.1，并且加入一些乙腈。将混合物冻干。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经45分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7334.5 Da，C332H512N74O100S6计算值：7332.6 Da
实施例12 A1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE019
将相应于约400 mg胰岛素的A14E B25H desB27 desB30人胰岛素的锌沉淀物溶解于水(48 mL)中，并且加入EDTA(40 mg)。让混合物在室温下留置45分钟。用10% AcOH将pH降低至5.0。加入溶解于1M NaAc的十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(90 mg，与十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛类似地制备)(3.0 mL，在自来水下加热)。搅拌7分钟后，加入1M NaCNBH3/水(1.08 mL)，以得到20 mM 溶液。1分钟内，混合物变得不透明，片刻以后出现粘性沉淀物。45分钟后，用AcOH将pH降低至3.1，并且加入一些乙腈。将混合物冻干。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经45分钟pH。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7178.9 Da，C324H497N73O98S6计算值：7175.4 Da
实施例13 A1N α -十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1N α -十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素
Figure 19820DEST_PATH_IMAGE020
将相应于约100 mg胰岛素的A14E B25H desB27 desB30人胰岛素的锌沉淀物溶解于水中(16 mL)，并加入EDTA(10 mg)。让混合物在室温下留置1小时。用10% AcOH将pH降低至4.8。加入溶解于1M NaAc的十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(36 mg，与十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛类似地制备)(0.75 mL，在自来水下加热)。搅拌10分钟后，加入1M NaCNBH3/水(0.35 mL)，以得到20 mM 溶液。1分钟内，混合物变得不透明，片刻以后出现粘性沉淀物。1小时后，加入更多的醛(36 mg)和THF(3 mL)。4小时后，将混合物在5℃下储存过夜。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经45分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素。
LCMS：1780.6 Da [M + 4H]4+。C320H489N73O98S6 [M + 4H]4+计算值：1780.8 Da。
LCMS 缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度10-90 % B，经10分钟。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7118.7 Da，计算值：7119.3 Da
实施例14 A1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG4-氨基甲基-苄基B1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE021
将A14E B25H desB30人胰岛素(300 mg)溶解于pH 5.0的1.0 M NaAc(3.2 mL)中。将十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苯甲醛(79 mg)在1.0 M NaAc中的pH 5.0的溶液(3.0 mL，在自来水下加热)加入。混合物变得不透明。搅拌5分钟后，加入1M NaCNBH3(135 μL)，以得到20 mM 溶液。pH为4.9，反应混合物不透明，但在变化。40分钟后，用AcOH将pH降低至3.1，并且加入一些乙腈。将混合物冻干。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经45分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7279.4 Da，C328H504N74O100S6计算值：7276.5 Da
实施例15 B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素
将300 mg如WO 2010/029159所述制备的B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素溶解于2M AcOH/NMP 9:1(9 mL)中。用1N NaOH将pH从2.9调节至3.5。加入十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(44 mg)/NMP(0.5 mL)。混合物变为不透明，pH 3.77。搅拌15分钟后，在NMP/1M NaAc(0.45 mL)中加入1M 2-甲基吡啶硼烷复合物。pH为3.77。将混合物在室温下搅拌。粘性材料聚集在混合物的顶部。7分钟后，混合物用1M AcOH(4.7 mL，以稀释硼化物)稀释。1小时后，用AcOH将pH降低至3.0，以得到溶液，其通过RP-HPLC在C18柱上纯化，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经45分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素。
LCMS：1804.8 Da [M + 4H]4+。C324H503N73O100S6 [M + 4H]4+计算值：1804.4Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度10-90 % B，经10分钟。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7215.9 Da，C324H503N73O100S6计算值：7213.4 Da
实施例16 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε 十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE023
将B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素(300 mg)溶解于2 M AcOH/NMP 9:1(9 mL)中。用1N NaOH将pH从2.9调节至3.5，得到粘性悬浮液。加入十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(44 mg)/NMP(0.5 mL)。混合物变为不透明，pH为3.77。搅拌15分钟后，在NMP/1M NaAc(0.45 mL)中加入1M 2-甲基吡啶硼烷复合物。pH为3.77。将混合物在室温下搅拌。粘性材料聚集在混合物的顶部。7分钟后，用1M AcOH(4.7 mL，以稀释硼化物)稀释混合物。1小时后，用AcOH将pH降低至3.0，以得到溶液，其通过RP-HPLC在C18柱上纯化，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经45分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素。
该实施例说明这种类型的反应得到B1N-烷基化作为主要产物。
LCMS：1610.9 Da [M + 5H]5+。C367H573N77O112S6 [M + 5H]5+计算值：1610.7 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度10-90 % B，经10分钟。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：8050.7 Da，C367H573N77O112S6计算值：8048.5 Da
实施例17 A1N α -十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基B29N ε -十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素
Figure 684599DEST_PATH_IMAGE024
将A14E B25H desB30人胰岛素(200 mg)溶解于100 mM水性Na2CO3(4.5 mL)中，并用1 N NaOH将pH 调节至10.1。将叔丁基十八烷二酰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)-β-丙氨酰基-OSu(28 mg)(如WO 2005/012347所述制备)溶解于THF(2.25 mL)，并且加入到胰岛素溶液中。观察到一些沉淀，加入更多的THF(0.75 mL)。Ph为10.7。34分钟后，加入更多的叔丁基十八烷二酰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)-β-丙氨酰基-OSu(14 mg)。57分钟后，加入水，用1N HCl将pH调节至5.1。使沉淀物旋转下沉并冻干。将固体溶解于冰冷却的95%三氟乙酸(含有5%水)中，并在冰上保持40分钟。将混合物真空浓缩，由二氯甲烷再蒸发。通过RP-HPLC在C18柱上将残余物纯化，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 %1B-55 % B，经75分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素。
LCMS：1629.0 Da [M + 4H]4+。C292H450N68O88S6 [M + 4H]4+计算值：1629.4 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度10-90 % B，经10分钟。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：6511.0 Da，C292H450N68O88S6计算值：6513.6 Da
实施例18 A1N α 十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基B29N ε -十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE025
将A14E B25H desB30人胰岛素(100 mg)溶解于DMSO(1.0 mL)中，并加入三乙胺(0.05 mL)。加入溶解于乙腈/THF 1:1(2.25 mL)中的叔丁基十八烷二酰基-N-(2-(叔丁氧基羰基)乙基)-Gly-OSu(46 mg)(如WO 2005/012347所述制备)。在室温下搅拌30分钟后，加入溶解于乙腈/THF 1:1(2.25 mL)中的更多的叔丁基十八烷二酰基-N-(2-(叔丁氧基羰基)乙基)-Gly-OSu(46 mg)。75分钟后，加入水(5 mL)，用1N HCl将pH调节至5.3。使沉淀物旋转下沉并冻干。在pH 12下，干混合物用0.1N NaOH在冰浴上处理45分钟。将pH再次调节至5.3，将沉淀物旋转下沉并冻干。将固体溶解于冰冷却的95%三氟乙酸(含有5%水)中，并在冰上保持45分钟。将混合物真空浓缩，由二氯甲烷再次蒸发。通过RP-HPLC在C18柱上将残余物纯化，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度25 %1B-70 % B，经60分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素。
LCMS：1628.7 Da [M + 4H]4+。C292H450N68O88S6 [M + 4H]4+计算值：1629.4 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度10-90 % B，经10分钟。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：6511.1 Da，C292H450N68O88S6计算值：6513.6 Da
实施例19 A1N α -十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22N ε -N-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22K B29R desB30人胰岛素
Figure 908907DEST_PATH_IMAGE026
将A22K B29R desB30人胰岛素(200 mg)溶解于100 mM水性Na2CO3(4.5 mL)中，并用1 N NaOH将pH调节至10.1。将叔丁基十八烷二酰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)-βAla-OSu(27 mg)(如WO 2005/012347所述制备)溶解于乙腈/THF 1.2(2.25 mL)中，并且加入到胰岛素溶液中。观察到一些沉淀，加入更多的THF(1.0 mL)，以得到透明的溶液。Ph为10.7。57分钟后，加入溶解于THF(1.1 mL)中的更多的叔丁基十八烷二酰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)- βAla-OSu(14 mg)。90分钟后，加入水(4.5 mL)，用1N HCl将pH调节至5.5。使沉淀物旋转下沉并冻干。将固体溶解于冰冷却的95%三氟乙酸(含有5%水)中，并在冰上保持25分钟。将混合物真空浓缩。通过RP-HPLC在C18柱上将残余物纯化，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度10 % B-55 % B，经75分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基)-β-丙氨酰基)A22Nε-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22K B29R desB30人胰岛素。
LCMS：1679.0 Da [M + 4H]4+。C305H466N70O88S6 [M + 4H]4+计算值：1679.5 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度10-90 % B，经10分钟。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：6709.4 Da，C305H466N70O88S6计算值：6713.9 Da
实施例20 A22N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE027
将A14E A22K B25H desB30人胰岛素(0.5 g，86 μmol)溶解于200 mM Na2CO3(5 mL)中，用1N NaOH将pH调节至11。随后，将十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(150 mg，186 μmol) 溶解于NMP(0.5mL)中，将乙腈(0.1 mL)加入到胰岛素溶液中，并加入1N NaOH，以保持pH在11。将反应搅拌5分钟，通过LCMS监测反应进程。将溶解于NMP(0.5 mL)和乙腈(0.1 mL)中的十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(150 mg，186 μmol)再加入2次(使用以上方案)，随后通过LCMS监测形成的目标产物。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度25-50%乙腈，经60分钟，流速为25 mL/分钟。将产物纯化2次。柱：Phenomenex，Gemini，5 μ，C18，110 ?，250×30 cm。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1791.7 Da [M + 4H]4+。C318H498N74O101S6 [M + 4H]4+计算值：1790.5 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。
实施例21 A1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素
Figure 908087DEST_PATH_IMAGE028
将A14E B25H desB30人胰岛素(500 mg，88 μmol)溶解于200mM  Na2CO3(5mL)中，并用1N NaOH将pH调节至11。随后，将溶解于NMP(0.5mL)和乙腈(0.1mL)中的十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(150 mg，186 μmol)加入到胰岛素溶液中，并加入1N NaOH，以保持pH在11。将反应搅拌5分钟，通过LCMS监测反应进程。将溶解于NMP(0.5 mL)和乙腈(0.1 mL)中的连接基十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(150 mg，186 μmol)再加入3次(使用以上方案)，随后通过LCMS监测，目标产物为主要产物。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度30-45%乙腈，经60分钟，流速为25 mL/分钟。柱：Phenomenex，Gemini，5μ，C18，110 ?，250×30 cm。将产物纯化2次。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1760.3 Da [M + 4H]4+。C312H486N72O100S6 [M + 4H]4+计算值：1758.5 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。
实施例22 A1N α -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素
将A14E B16H B25H，desB30人胰岛素(1 g，177 μmol)溶解于200 mM Na2CO3(12.5mL)中，通过加入1N NaOH将pH调节至11。随后，经10分钟，将溶解于NMP(1.0 mL)和乙腈(0.2 mL)中的十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(400 mg，499 μmol)加入到胰岛素溶液中。另外加入1N NaOH，以保持在反应期间pH在11.0。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，通过LCMS监测反应进程，通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度25-40%乙腈，经60分钟，流速为25 mL/分钟。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1402.9 Da [M + 5H]5+。C309H484N74O99S6 [M + 5H]5+计算值：1403.0 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。
实施例23 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H B29R desB30人胰岛素
Figure 379388DEST_PATH_IMAGE030
将A14E B25H B29R desB30人胰岛素(0.35g，61 μmol)溶解于H2O(3mL)中，将pH调节至11。随后，将溶解于NMP(0.4 mL)和乙腈(0.1 mL)中的十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(100 mg，120 μmol)加入到胰岛素溶液中，并加入1N NaOH，以保持pH在11。将反应搅拌5分钟，通过LCMS监测反应进程。再加入溶解于NMP(0.4 mL)和乙腈(0.1 mL)中的十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(150 mg，120 μmol)，通过LCMS监测形成的主要产物的进展。通过RP-HPLC在C18柱上将产物纯化2次，使用缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度；30-45%乙腈，经60分钟，和10-40%乙腈，经60分钟，流速为25 mL/分钟。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1189.9.88 Da [M + 6H]6+。C316H494N74O100S6 [M + 6H]6+计算值：1188 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。
实施例24 A22N ε -二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素
将A14E A22K B25H desB30人胰岛素(450 mg，77 μmol)溶解于200mM Na2CO3(5mL)中，并用1N NaOH将pH调节至11。随后，将溶解于NMP(0.5 mL)和乙腈(0.1mL)中的二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(150 mg，174 μmol)加入到胰岛素溶液中，并加入1N NaOH，以保持pH在11。将反应搅拌5分钟。随后，通过LCMS监测反应进程，将溶解于NMP(0.5 mL)和乙腈(0.1 mL)中的二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(150 mg，174 μmol)再加入2次(使用以上方案)，随后通过LCMS监测到，形成标靶产物。通过RP-HPLC在C18柱上将产物纯化2次，使用1) 缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度：25-50%乙腈，经40分钟，流速为25 mL/分钟；2) 缓冲剂A：10 mM Tris，15 mM硫酸铵，pH 7.3，在水/乙腈80/20中，缓冲剂B：水/乙腈20/80，梯度：10-60% 缓冲剂B，经60分钟，流速为25 mL/分钟。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1820.1 Da [M + 4H]4+。C326H514N74O101S6 [M + 4H]4+计算值：1820.5 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。
实施例25 B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素
Figure 729598DEST_PATH_IMAGE032
通过加热(自来水)，将十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(100 mg，117 μmol)溶解于2mL 25mM HEPES(2mL)中，随后加入20% HPCD(500 μL)，以得到不透明但是均质的溶液。向B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素(250 mg，39.8 μmol)中加入25 mM HEPES(5 mL，pH 5.6)，用1N HCl将pH调节至5.0。将以上醛溶液(2.5 mL)加入到胰岛素中，溶液变得不透明。5分钟后，加入1M NaCNBH3/MeOH(165 μL)，通过LCMS和UPLC监测反应进程。
通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度：30-55%乙腈，经40分钟，流速为25 mL/分钟。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1438.3 Da [M + 5H]5+。C321H501N75O99S6 [M + 5H]5+计算值：1438.4 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。肽的氨基酸排序证实C18二酸-γ-LGlu-OEG-OEG-氨基甲基-苄基与B1连接(烷基化)。
实施例26 B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE033
通过加热(自来水)，将十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(100 mg，117 mmol)溶解于25mM HEPES(2mL)中。随后加入20% HPCD(500 μL)，以得到不透明但是均质的溶液。
向B29Ne-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素(250 mg，39 μmol)中加入25 mM HEPES(5 mL，pH 5.6)，用1N HCl将pH调节至5.0。将醛溶液(2.5 mL)加入到胰岛素中，溶液变得不透明。5分钟后，加入1M NaCNBH3/MeOH(165μL)。通过LCMS和uplc两者监测反应进程。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度：30-55%乙腈，经40分钟，流速为25 mL/分钟。柱(Kolonne)：Phenomenex，Gemini，5μ，C18，110 ?，250×30 cm。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1802.4 Da [M + 4H]4+。C324H503N73O100S6 [M + 4H]4+计算值：1804 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。肽的氨基酸排序证实C18二酸-γ-LGlu-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基与B1连接(烷基化)。
实施例27 B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB27 desB30人胰岛素
Figure 757597DEST_PATH_IMAGE034
通过加热(自来水)，将十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(140 mg，163 μmol)溶解于25mM HEPES(2.8 mL)中。加入20% HPCD(700 μL)，以得到不透明但是均质的溶液。
向B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB27 desB30人胰岛素(350 mg，55 μmol)中加入25 mM HEPES(7 mL，pH 5.6)，用1N HCl将pH调节至5.5。加入醛溶液(3.5 mL)，溶液不透明。几分钟后，加入1M NaCNBH3/MeOH(230 μL)。30分钟后，通过LCMS监测反应进程，随后形成期望的产物。加入1N HCl，以酸化反应混合物，随后进行制备型HPLC纯化。通过RP-HPLC在C18柱上纯化产物，使用缓冲剂A：0.1% TFA/水，缓冲剂B：0.1% TFA/乙腈，梯度：25-65%乙腈，经40分钟，流速为25 mL/分钟。随后将纯馏分汇合并冷冻干燥。
LCMS：1423.4 Da [M + 5H]5+。C320H496N72O98S6 [M + 5H]5+计算值：1423.5 Da。
LCMS缓冲剂A：0.1 %三氟乙酸/水；缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈，梯度5-90 % B，经4分钟。肽的氨基酸排序证实C18二酸-γ-LGlu-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基与B1连接(烷基化)。
实施例28 A22N ε -4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE035
该化合物与实施例4的化合物类似地制备，通过使用4-叔丁基-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-α-叔丁基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基(与在WO06082204中描述的类似地制备)和A14E B25H A22K desB30人胰岛素。
产物LCMS：1806.5 Da [M + 4H]4+。
C320H486N74O103S6 [M + 4H]4+计算值：1803.6 Da。
实施例29 根据本发明的胰岛素衍生物的人胰岛素受体亲和力、白蛋白亲和力、平均停留时间
对根据本发明的胰岛素衍生物(二取代和三取代的胰岛素)和一种单取代的胰岛素呈现表1中的数据。通过SPA试验(邻近闪烁试验)微量滴定板抗体捕获试验来测定本发明的酰化的胰岛素类似物对人胰岛素受体的亲和力。对麻醉的大鼠静脉给药(i.v.)各种剂量的胰岛素类似物，使用免疫测定或质谱，以给药后4小时或更长的指定间隔测量采用的化合物的血浆浓度。随后使用WinNonLin Professional (Pharsight Inc.，Mountain View，CA，USA)计算药代动力学参数。
A. 与人胰岛素受体同种型A(hIRA)结合的胰岛素衍生物实施例的人胰岛素受体亲和力，解离常数(Kd)，相对于人胰岛素的值。
B. 当向大鼠静脉给予胰岛素衍生物实施例时，按平均停留时间(MRT)测量的体内延长。
C. 在该列表中，B29Nε十六烷二酰基γ-L-谷氨酰基desB30人胰岛素指示为“C”，并且表示单取代的参比，仅用于值的比较。
表1：
Figure 648103DEST_PATH_IMAGE036
虽然本文已说明和描述了本发明的某些特征，但是本领域普通技术人员可以想到许多修改、取代、变化和等价物。因此，应理解的是，所附方面旨在涵盖落入本发明的真实精神内的所有这些修改和变化。
实施例30 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE037
该化合物与实施例7的化合物类似地制备，通过使用十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基和A14E B16H B25H desB30人胰岛素。
产物LCMS：1767.9 Da [M + 4H]4+。
C313H492N74O99S6 [M + 4H]4+计算值：1768.1 Da。
实施例31 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H desB27 desB30人胰岛素
Figure 775459DEST_PATH_IMAGE038
该化合物与实施例7的化合物类似地制备，通过使用十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基和A14E B16H desB27 desB30人胰岛素。
产物LCMS：1744.8 Da [M + 4H]4+。
C312H487N71O97S6 [M + 4H]4+计算值：1745.3 Da。
实施例32 B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE039
向A14E B25H desB30人胰岛素(50 mg)在DMSO(1.5 ml)中的悬浮液中加入十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛(11.3 mg)的DMSO(0.5 mL)溶液。20分钟后，混合物透明，加入1 M 2-甲基吡啶硼烷复合物/DMSO(0.041 ml)。2.5小时后和21小时后，加入另外1M 2-甲基吡啶硼烷复合物/DMSO(0.041 ml)。24.5小时后，通过RP-HPLC在C18柱上纯化混合物，使用A：0.1 %三氟乙酸/水，缓冲剂B：0.1 %三氟乙酸/乙腈。梯度20 % B-60 % B，经60分钟。将产物池部分真空蒸发，冷冻干燥，得到B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素。
LCMS：1833.81 Da [M + 4H]4+。C332H512N74O100S6 [M + 4H]4+计算值：1834.15 Da。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7332.76 Da，计算值：7332.60 Da
实施例33 A1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素
Figure 862233DEST_PATH_IMAGE040
将A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素从实施例32中描述的反应混合物中分离。
LCMS：1834.14 Da [M + 4H]4+。C332H512N74O100S6 [M + 4H]4+计算值：1834.15 Da。
MALDI：(基质，HCCA)；m/z：7332.94 Da，计算值：7332.60 Da
实施例34 B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E desB27 desB30人胰岛素
Figure DEST_PATH_IMAGE041
该化合物与实施例27的化合物类似地制备，通过使用十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛和十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基和A14E desB27 desB30人胰岛素。
产物LCMS：1781.8 Da [M + 4H]4+。
C323H498N70O98S6 [M + 4H]4+计算值：1781.6 Da。
实施例35 B1N α -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29N ε -十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG A14E desB27 desB30人胰岛素
Figure 428343DEST_PATH_IMAGE042
该化合物与实施例27的化合物类似地制备，通过使用十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG-4-氨基甲基-苯甲醛和十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-OEG-OEG-琥珀酰亚胺基和A14E desB27 desB30人胰岛素。
产物LCMS：1926.8 Da [M + 4H]4+。
C347H542N74O110S6 [M + 4H]4+计算值：1926.8 Da。

Claims (15)

1. 一种以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代，并且X2为任选，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
2. 权利要求1的可溶性胰岛素衍生物或在药学上可接受的盐，其用作药物的用途。
3. 前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐：
Figure 192013DEST_PATH_IMAGE002
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
4. 前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐：
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
5. 前述权利要求中任一项的以下通式的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐
Figure 764257DEST_PATH_IMAGE002
，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X、X1和X2为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z、Z1和Z2分别为Ins与X、X1和X2之间的连接基，和
d. n、m和p为0或1。
6. 前述权利要求中任一项的通式XZn-Ins-Z1 mX1的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
7. 前述权利要求中任一项的通式XZn-Ins-Z1 mX1的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中
a. Ins代表包含B29赖氨酸或B29精氨酸残基和/或A22赖氨酸残基的胰岛素，
b. X和X1为脂肪二酸取代并且分别位于选自以下的位置：B29赖氨酸、A22赖氨酸、A链的N-末端、B链的N-末端，其中所述脂肪二酸取代包含14-20个碳原子，
c. Z和Z1分别为Ins与X和X1之间的连接基，和
d. n和m为0或1。
8. 前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代选自从Chem. 1和Chem. 2选取的延伸部分：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为10-20的整数，并且y为6-14的整数。
9. 前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪酸取代选自从Chem. 1和Chem. 2选取的延伸部分：
Chem 1：HOOC-(CH2)X-CO-*
Chem 2：HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*
其中x为14、16或18，并且y为8、10或12。
10. 前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代在选自A1、A22、B1和B29的位置，连接于所述胰岛素中的氨基酸残基。
11. 前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述脂肪二酸取代经由连接基与所述胰岛素的氨基酸残基连接。
12. 前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其中所述连接基包含一个或多个选自以下的连接基组分：α-L-Glu、α-D-Glu、γ-L-Glu、γ-D-Glu、α-L-Asp、α-D-Asp、β-L-Asp、β-D-Asp、CPH、IDA和OEG。
13. 前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐用作药物的用途，所述药物用于治疗或预防包括应激性高血糖症的高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、烧伤、手术创伤、在治疗中需要合成代谢作用的其它疾病或损伤、心肌梗塞、中风、冠心病、其它心血管病症，治疗重症糖尿病患者和非糖尿病患者和多发性神经病。
14. 前述权利要求中任一项的可溶性胰岛素衍生物或其在药学上可接受的盐，其选自A22Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-γ-D-谷氨酰基A22K desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A22Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B1Nα-十四烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG4-氨基甲基-苄基B1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基B29Nε-十八烷二酰基-N-2-羧乙基-甘氨酰基A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22Nε-N-十八烷二酰基-N-羧甲基-β-丙氨酰基A22K B29R desB30人胰岛素、A22Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-十六烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、A1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H B29R desB30人、A22Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-二十烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B16H B25H desB30人胰岛素、B1Nα-(十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-4-氨基甲基-苄基A14E B25H B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG desB30人胰岛素、B1Nα-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG-氨基甲基-苄基B29Nε-十八烷二酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E B25H desB27 desB30人胰岛素、A22Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG B29Nε-4-羧基苯氧基-癸酰基-γ-L-谷氨酰基-OEG-OEG A14E A22K B25H desB30人胰岛素。
15. 一种用于制备上述权利要求中任一项的胰岛素衍生物的方法，所述方法包括酰化或烷基化的步骤。
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