JP6058646B2 - 多置換インスリン - Google Patents

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Description

本発明は糖尿病及び関連する側面の処置に有用な新規インスリン誘導体に関する。
哺乳類では、インスリンは血中グルコースを低下させ、血中グルコースを健常濃度に向かって調節する目的で、１型及び２型糖尿病の処置に用いられる。健常者では、血中グルコース濃度は絶食状態で５ｍＭ付近に制御されているが、１０ｍＭまでの値は食事後数時間起こり得る。血中グルコース濃度は食事やインスリン投与、運動、感染症等のタイミングや性質等、多くの要因に影響される。血中グルコースは糖尿病患者において広く及び予測不能に変動することがあり、一人の患者において１〜３０ｍＭの範囲で変動することがある。
糖尿病患者は基礎インスリン薬の不断の供給から利益を得ている。なぜなら生来のインスリンは急速に体から取り除かれるからである。基礎インスリン濃度を維持するために必要な注射の回数を制限するため、インスリンは結晶化又は化学的誘導体化等の種々の引き伸ばし原理で設計されている。
血清アルブミン等の循環タンパク質の可逆的結合も薬物のインビボ活性を引き延ばす要因であり得る。場合により種々のリンカーによって組み込まれた、薬物と脂肪酸、脂肪二酸（fatty diacid）又は関連する化合物との結合による、インスリン及び他のペプチドの遅延原理としてのアルブミンの結合が開発されている。
低親和性インスリンアナログが、ブタにおける正常血糖グルコースクランプの研究で、グルコース利用について高親和性アナログと同等の全体的効果を生じさせることが示されていることは、インスリンの生物学的活性は低親和性及び高親和性アナログの両者で同様であり得ることを示唆している。しかしながら、低親和性アナログは高親和性アナログと比較すると、より長時間に渡ってそれらの効果を発揮する（例えばRibel, U.等 Equivalent in vivo biological activity of insulin analogues and human insulin despite different in vitro potencies. Diabetes 39, 1033-1039 (1990)を見よ。要約を添付。)
WO1999/032116及びWO1999/021578は脂肪酸アシル化されたインスリンに関し、WO1999/022754, WO1999/032116, WO1999/021578, JP1254699 は吸入により脂肪酸ジ‐及びトリアシル化されたインスリン又はインスリンアナログを投与しており、US3868356は例えば無水物等のジカルボキシル酸機能的誘導体とのインスリンのアシル化に関する。
国際公開第１９９９／０３２１１６号 国際公開第１９９９／０２１５７８号 国際公開第１９９９／０２２７５４号 特開平０１−２５４６９９号公報 米国特許第３８６８３５６号明細書
リベル・ユー（Ribel, U.）等 インビトロでの力価にかかわらない、インスリンアナログとヒトインスリンのインビボでの生物学的活性の等価性（Equivalent in vivo biological activity of insulin analogues and human insulin despite different in vitro potencies.）糖尿病（Diabetes）３９号, １９９０年、ｐ．１０３３−１０３９
インビボ活性が引き延ばされた基礎インスリン薬がやはり必要とされている。
本発明は、それぞれが脂肪二酸置換を有する２以上の置換を含むインスリン誘導体に関し、当該インスリン誘導体は場合によりインスリンと脂肪酸置換との間にリンカーを有する。
本発明は、インスリンのアシル化及び／又は還元的アルキル化による、そのようなインスリン誘導体又はその薬学的塩の調製方法にも関する。
本発明は、糖尿病又は関連する側面の処置のためのインスリン誘導体に関し、それ故そ医薬としても用いられてもよい。
本発明は、それぞれが遅延部分、さらに特定すると脂肪二酸置換、を有する少なくとも２つのアルブミン結合部分で置換されたインスリンに関する。場合により、アルブミン結合部分はさらに種々のリンカーを有している。本発明によるインスリンの誘導体化は、アシル化及び／又は還元的アルキル化によって達成され、結果物のインスリン誘導体について、生来のヒトインスリンに比べて増加されたアルブミン親和性及びインビボ循環回数が得られる。
本発明はＢ１残基（例えば、インスリンＢ鎖のＮ末端）の還元的アルキル化のための方法も提供する。
本発明はＡ１残基（例えば、インスリンＡ鎖のＮ末）の還元的アルキル化のための方法も提供する。
この発明の目的は、従来技術の不都合の少なくとも一つを克服するか若しくは改善することであるか、又は有用な代替案を提供することである。
この発明は、代表的な実施態様の開示から明らかに分かるであろう更なる問題をも解決してよい。
インスリン又はインスリンアナログの少なくとも２つの脂肪二酸での置換は、インスリンのヒト血清アルブミンへの結合を可能とし、インビボインスリン供給を引き延ばし、ＩＲ−結合特性を保持していることが発見されている。これは好ましいことである。なぜなら、本発明による置換も突然変異をほとんど有さない（例えば２〜６）インスリンアナログ上で可能であり、すなわちこの発明はインスリンのインビボ供給の引き延ばしの選択及び生来のヒトインスリンと非常に類似するインスリン骨格の維持の選択肢を提供する。
本発明の一つの態様では、少なくとも２つの脂肪二酸で置換されたインスリン誘導体のアルブミンに対する親和性は、単置換のインスリン誘導体に比較して増加されている。
本発明の一つの態様では、引き延ばし効果は、単置換のインスリン誘導体に比較して増加されている。
この発明のインスリン誘導体は長期活性であり、一つの態様においてそれらは皮下沈着物中でのオリゴマー化への増加された傾向を示し、循環に対する緩慢な拡散を可能とする。
一つの態様において、本発明によるインスリン誘導体のアルブミンに対する親和性は増加される脂肪二酸の鎖長で高められる。
一つの態様において、本発明によるインスリン誘導体のアルブミンに対する親和性は、２２の炭素原子まで増加される脂肪二酸鎖で高められる。
一つの態様において、インスリン誘導体は、２２の炭素原子まで増加される脂肪二酸鎖により、全体的な親水性が維持される。
一つの態様において、この発明による少なくとも２つのアルブミン結合部分の引き延ばし効果は増加される脂肪二酸鎖長で高められる。
一つの態様において、この発明による少なくとも２つのアルブミン結合部分の引き延ばし効果は、２２の炭素原子まで増加される脂肪二酸鎖で高められる。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体は、２２までの炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１０〜２２の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１０〜２０の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１０〜１８の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１０〜１６の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１０〜１４の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１２〜２０の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１２〜１８の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１２〜１６の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１２〜１４の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１４〜２０の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１４〜１８の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１４〜１６の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。一つの実施態様では、本発明によるインスリン誘導体は１６、１７、１８、１９又は２０の炭素原子からなる脂肪二酸置換を含む。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、少なくとも２つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、少なくとも３つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、２つ又は３つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、２つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、３つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、２つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンの以下のいかなる部位：インスリンのＡ２２、Ｂ２９若しくはＡ鎖のＮ末端アミノ酸残基及び／又はインスリンのＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基、に接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、３つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、３つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンのアミノ酸残基に接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は、３つのアルブミン結合部分を含み、ここで当該アルブミン結合部分は脂肪二酸置換を含み、それぞれの当該脂肪二酸置換から一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンの以下のいかなる部位：インスリンのＡ２２、Ｂ２９、Ａ鎖のＮ末端アミノ酸残基及び／又はインスリンのＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基、に接続されている。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は一般式Ｃｈｅｍ．１：
Figure 0006058646
〔ここで、ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘ２は場合によるものであり、Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、ｎ、ｍ及びｐは０又は１である。〕によって表される。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は一般式Ｃｈｅｍ．１〔ここで、ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、ｎ、ｍ及びｐは０又は１である。〕で表される。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は一般式Ｃｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、ｎ及びｍは０又は１である。〕によって表される。
本発明の一つの実施態様において、インスリン誘導体は一般式Ｃｈｅｍ．２〔ここで、ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、ｎ及びｍは０又は１である。〕によって表される。
ここで用いられている、「Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり」又は「Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり」は、Ｚ、Ｚ１又はＺ２がインスリン（Ｉｎｓ）におけるアミノ酸とそれぞれの遅延部分Ｘ、Ｘ１又はＸ２との間のリンカーであることを意味する。さらに特定すると、これは、Ｚがインスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分Ｘとの間のリンカーであり、Ｚ１がインスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分Ｘ１との間のリンカーであり、Ｚ２がインスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分Ｘ２との間のリンカーであることを意味する。
Ｃｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２の文字ｎ、ｍ及びｐは独立してインスリン誘導体中のリンカー（それぞれＺ、Ｚ１及びＺ２）の数を表し、ｎ、ｍ及びｐは０又は１である。さらに特定すると、これはｎが０の場合、Ｃｈｅｍ．１又はＣｈｅｍ．２において、インスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分（Ｘ）との間にリンカーが存在せず、ｍが０の場合、Ｃｈｅｍ．１又はＣｈｅｍ．２において、インスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分（Ｘ１）との間にリンカーが存在せず、ｐが０の場合、Ｃｈｅｍ．１において、インスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分（Ｘ２）との間にリンカーが存在せず、ｎが１の場合、Ｃｈｅｍ．１又はＣｈｅｍ．２において、インスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分（Ｘ）との間に一つのリンカーが存在し、ｍが１の場合、Ｃｈｅｍ．１又はＣｈｅｍ．２において、インスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分（Ｘ１）との間に一つのリンカーが存在し、ｐが１の場合、Ｃｈｅｍ．１において、インスリン（Ｉｎｓ）と遅延部分（Ｘ２）との間に一つのリンカーが存在することを意味する。
アルブミン結合部分（例えば式Ｃｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２のＺｎＸ）、遅延部分（例えば式Ｃｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２のＸ）又はリンカー（例えば式Ｃｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２のＺ）は、アシル化及び／又は還元的アルキル化によって、インスリンのＡ及び／又はＢ鎖のリシン残基又はＮ末端に共有結合的に接続されていてもよい。
一つの実施態様において、インスリンアナログはヒトインスリンに比較して１０未満のアミノ酸改変（置換、欠失、付加（挿入を含む）及びこれらの組み合わせ）を含み、あるいは、ヒトインスリンに比較して９、８、７、６、５、４、３、２、又は１未満の改変を含む。
インスリン分子中の改変は、鎖（Ａ又はＢ）、部位、及び生来のアミノ酸残基を置換するアミノ酸残基の１文字又は３文字コードを表明することで表される。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体は少なくとも２つのアルブミン結合部分を含む。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体のアルブミン結合部分（例えばＣｈｅｍ．１のＺｎＸ）は遅延部分を含み、それは脂肪二酸置換（例えばＣｈｅｍ．１のＸ）で示されてもよい。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体の各アルブミン結合部分は遅延部分及び場合によりリンカー（例えばＣｈｅｍ．１のＺｎ〔ここで、ｎは１である。〕）を含む。
一つの実施態様において、好ましくは遅延部分及びリンカーを含む、アルブミン結合部分の活性化されたエステルは、リシン残基のアミノ基、好ましくはそのイプシロンアミノ基に、アミド結合の形成の下に共有結合的に連結される（この過程はアシル化といわれている）。
一つの実施態様において、アルブミン結合部分（例えばＣｈｅｍ．１のＺｎＸ）の活性化されたエステルは、好ましくは遅延部分（例えばＣｈｅｍ．１のＸ）及びリンカー（例えばＣｈｅｍ．１のＺｎ〔ここでｎは１である〕）を含み、リシン残基のアミノ基及び／又はＡ‐鎖又はＢ‐鎖のＮ末端のアミノ酸残基、好ましくはそのイプシロンアミノ基に、アミド結合の形成の下に共有結合的に連結される（この過程はアシル化といわれている）。
一つの実施態様において、アルブミン結合部分のアルデヒド誘導体は、好ましくは遅延部分及びリンカーを含み、還元的アルキル化によってＡ鎖のＮ末端のアルファ−アミノ基又はＢ鎖のＮ末端のアルファ−アミノ基に共有結合的に連結され、或いは、アルデヒド誘導体はＡ‐鎖及び／又はＢ‐鎖のＮ末端で還元的にアルキル化される。
一つの実施態様において、アルブミン結合部分のアルデヒド誘導体は、好ましくは遅延部分及びリンカーを含み、還元的アルキル化によってリシン残基、好ましくはそのイプシロン−アミノ基に共有結合的に連結される。
一つの実施態様において、本発明によるインスリンはＢ２９部位にアルギニン残基を含み、Ｂ２９部位ではなく、Ａ２２リシンにおいてアルブミン結合部分で置換されている。
一つの実施態様において、この発明によるインスリン誘導体は、Ａ２２部位に一つのアルブミン結合部分を含み、インスリンの他のアミノ酸部位において一つのアルブミン結合部分を含み、Ｂ２９部位にはアルブミン結合部分を含まないことが望ましく、置換に供されるインスリンはＢ２９部位にアルギニン残基を含む。
一つの実施態様において、この発明によるインスリン誘導体は、Ａ２２部位に一つのアルブミン結合部分を含み、インスリンのＢ２９部位のような、インスリンの他のアミノ酸部位において一つのアルブミン結合部分を含み、置換に供されるインスリンはＢ２９部位にアルギニン残基を含んでいてもよい。
一つの実施態様において、本発明によるインスリンはＡ２２リシン及びＢ２９リシンにおいて、アルブミン結合部分で置換されている。
一つの実施態様において、各アルブミン結合部分（例えばＣｈｅｍ．１のＺｎＸ）は、独立してＣｈｅｍ．３及びＣｈｅｍ．４：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１０〜２０の範囲の整数であり、ｙは６〜１４の範囲の整数である。〕から選択される遅延部分（例えばＸ）を含む
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．１又はＣｈｅｍ．２のＸはＣｈｅｍ．３及びＣｈｅｍ．４：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１０〜２０の範囲の整数であり、ｙは６〜１４の範囲の整数である。〕から選択される。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．１又はＣｈｅｍ．２のＸ１はＣｈｅｍ．３及びＣｈｅｍ．４：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１０〜２０の範囲の整数であり、ｙは６〜１４の範囲の整数である。〕から選択される。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．２のＸ２はＣｈｅｍ．３及びＣｈｅｍ．４：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１０〜２０の範囲の整数であり、ｙは６〜１４の範囲の整数である。〕から選択される。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．１又はＣｈｅｍ．２のＸ、Ｘ１及びＸ２は独立してＣｈｅｍ．３及びＣｈｅｍ．４：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１０〜２０の範囲の整数であり、ｙは６〜１４の範囲の整数である。〕から選択される。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１０〜２０の範囲の整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは６〜１４の範囲の整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１２〜２０の範囲の整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは６〜１２の範囲の整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１４〜２０の範囲の整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは６〜１０の範囲の整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１４〜１６の範囲の整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは６〜８の範囲の整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１２〜１８の範囲の整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは６〜８の範囲の整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１４〜１８の範囲の整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは８〜１２の範囲の整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１０〜１６の範囲の整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは８〜１４の範囲の整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１２、１４、１６、１８及び２０からなる群より選択される整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは６、８、１０及び１２からなる群より選択される整数である。
一つの実施態様において、Ｃｈｅｍ．３の＊−（ＣＨ２）ｘ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｘは１４、１６、１８及び２０からなる群より選択される整数である。
他の実施態様において、Ｃｈｅｍ．４の＊−（ＣＨ２）ｙ−＊は直鎖または分岐鎖、好ましくは直鎖のアルキレンであり、ここで、ｙは８、１０及び１２からなる群より選択される整数である。
一つの実施態様において、脂肪二酸の酸基の一つは前記インスリンにおけるリシン残基のイプシロンアミノ基と一緒に、好ましくはリンカーを介して、アミド結合を形成する。
用語「置換に供されるインスリン」がここで用いられる場合、ここに提供される方法によって処理されるインスリンを意味し、したがってアルブミン結合部分で置換され、この発明によるインスリン誘導体になるインスリンを意味する。
用語「脂肪二酸」とは、オメガ部位に付加的なカルボキシ基を有する脂肪酸をいう。したがって、脂肪二酸はジカルボン酸である。
学名はその技術における通常のものであり、例えば上記式における＊−ＣＯＯＨ並びにＨＯＯＣ−はカルボキシを表し、＊−Ｃ６Ｈ４−＊はフェニレン、＊−ＣＯ−＊並びに＊−ＯＣ−はカルボニル（Ｏ＝Ｃ＜＊ ＊）を表す。
特定の実施態様では、フェノキシのような芳香族化合物及びフェニレンラジカルは独立してオルソ、メタ又はパラであってもよい。
一つの実施態様において、この発明によるインスリン誘導体は少なくとも２つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分はＣｈｅｍ．３又は４から選択される遅延部分を含む。
一つの実施態様において、この発明によるインスリン誘導体は少なくとも２つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分はＣｈｅｍ．３又は４から選択される遅延部分を含み、アルブミン結合部分は場合によりさらにリンカーを含み、ここで、各リンカーは式Ｃｈｅｍ．５、Ｃｈｅｍ．６、Ｃｈｅｍ．７、Ｃｈｅｍ．８、Ｃｈｅｍ．９、Ｃｈｅｍ．１０及び／又はＣｈｅｍ．１１の１以上のリンカー要素を含む。
一つの実施態様において、この発明によるインスリン誘導体は少なくとも２つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分はＣｈｅｍ．３又は４から選択される遅延部分を含み、アルブミン結合部分は場合によりさらにリンカー（Ｚで示されてもよい）を含む。
一つの実施態様において、リンカーは式Ｃｈｅｍ．５、Ｃｈｅｍ．６、Ｃｈｅｍ．７、Ｃｈｅｍ．８、Ｃｈｅｍ．９、Ｃｈｅｍ．１０及び／又はＣｈｅｍ．１１の１以上のリンカー要素を含む。
一つの実施態様において、この発明によるリンカー要素はｅで示されてもよい。
一つの実施態様において、リンカー（Ｚ）は２つのリンカー要素を含み、それはｅ１‐ｅ２で示されてもよく、互いの相対的な配置、例えばリンカー要素ｅ１はリンカー要素ｅ２に接続されていることを示す。
一つの実施態様において、リンカー（Ｚ）は３つのリンカー要素を含み、それはｅ１‐ｅ２‐ｅ３で示されてもよく、互いの相対的な配置、例えばリンカー要素ｅ１はリンカー要素ｅ２に接続され、リンカー要素ｅ２はリンカー要素ｅ１及びリンカー要素ｅ３に接続されていることを示す。
一つの実施態様において、リンカー（Ｚ）は４つのリンカー要素を含み、それはｅ１‐ｅ２‐ｅ３‐ｅ４で示されてもよく、互いの相対的な配置、例えばリンカー要素ｅ１はリンカー要素ｅ２に接続され、リンカー要素ｅ２はリンカー要素ｅ１及びリンカー要素ｅ３に接続され、リンカー要素ｅ３はリンカー要素ｅ４に接続されていることを示す。
一つの実施態様において、リンカー（Ｚ）は５つのリンカー要素を含み、それはｅ１‐ｅ２‐ｅ３‐ｅ４‐ｅ５で示されてもよく、互いの相対的な配置、例えばリンカー要素ｅ１はリンカー要素ｅ２に接続され、リンカー要素ｅ２はリンカー要素ｅ１及びリンカー要素ｅ３に接続され、リンカー要素ｅ３はリンカー要素ｅ４に接続され、リンカー要素ｅ４はリンカー要素ｅ５に接続されていることを示す。
一つの実施態様において、リンカー（Ｚ）は６つのリンカー要素を含み、それはｅ１‐ｅ２‐ｅ３‐ｅ４‐ｅ５‐ｅ６で示されてもよく、互いの相対的な配置、例えばリンカー要素ｅ１はリンカー要素ｅ２に接続され、リンカー要素ｅ２はリンカー要素ｅ１及びリンカー要素ｅ３に接続され、リンカー要素ｅ３はリンカー要素ｅ４に接続され、リンカー要素ｅ４はリンカー要素ｅ５に接続され、リンカー要素ｅ５はリンカー要素ｅ６に接続されていることを示す。
一つの実施態様において、最も大きい数字で示される、本発明によるリンカー要素（例えば、リンカーｅ１‐ｅ２‐ｅ３‐ｅ４におけるｅ４又はリンカーｅ１‐ｅ２‐ｅ３におけるｅ３）は遅延部分（すなわち脂肪二酸）に接続されている。
本発明の誘導体のリンカーは下記第一リンカー要素：
Figure 0006058646
〔ここで、ｋは１〜５の範囲の整数であり、ｎは１〜５の範囲の整数である。〕を含んでいてもよい。
特定の実施態様では、ｋ＝１及びｎ＝１のとき、このリンカー要素はＯＥＧ、又は８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸のジ‐ラジカルで示されてもよく、及び／又はそれは下記式：
Figure 0006058646
で表されてもよい。
一つの実施態様において、本発明の誘導体の各リンカーは、独立して又は一つ以上の他のリンカー要素と組み合わせて、第二のリンカー要素、好ましくはＣｈｅｍ．６及び／又はＣｈｅｍ．７：
Figure 0006058646
Figure 0006058646
〔ここで、Ｇｌｕジ−ラジカルはｐ回含まれてもよく、ｐは１〜３の範囲の整数である〕のようなＧｌｕジ−ラジカルを更に含む。
Ｃｈｅｍ．６は、ここでは他のリンカー要素又はリシンのイプシロン−アミノ基への連結に用いられる、アミノ酸グルタミン酸のガンマカルボキシ基であるという事実により、ガンマ−Ｇｌｕ又は簡単にｇ−Ｇｌｕと表されてもよい。他のリンカー要素は、例えば、他のＧｌｕ残基、又はＯＥＧ分子であってもよい。Ｇｌｕのアミノ基は、遅延部分のカルボキシ基と一緒に、又は例えば、存在する場合には、ＯＥＧ分子のカルボキシ基と一緒に、若しくは、存在する場合には他のＧｌｕのガンマ−カルボキシ基と一緒に、順次アミド結合を形成する。
Ｃｈｅｍ．７は、ここでは他のリンカー要素或いはリシンのイプシロン−アミノ基又はＡ‐鎖若しくはＢ‐鎖のＮ末端への連結に用いられる、アミノ酸グルタミン酸のアルファカルボキシ基であるという事実により、アルファ−Ｇｌｕ又は簡単にａＧｌｕ又は単にＧｌｕと表されてもよい。
Ｃｈｅｍ．６及びＣｈｅｍ．７の上記構造はＧｌｕのＬ体並びにＤ体をカバーする。Ｌ体はガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ又はｇＬＧｌｕと表されてもよく、Ｄ体はガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ又はｇＤＧｌｕと表されてもよい。特定の実施態様では、Ｃｈｅｍ．６及び／又はＣｈｅｍ．７は、独立してａ）Ｌ体であるか、ｂ）Ｄ体である。
一つの実施態様において、本発明の誘導体の各リンカーは、独立して又は一つ以上の他のリンカー要素と組み合わせて、第二のリンカー要素、好ましくはＣｈｅｍ．８及び／又はＣｈｅｍ．９：
Figure 0006058646
Figure 0006058646
〔ここで、Ａｓｐジ−ラジカルはｐ回含まれてもよく、ｐは１〜３の範囲の整数である〕のようなＡｓｐジ−ラジカルを更に含む。
Ｃｈｅｍ．８は、ここでは他のリンカー要素或いはリシンのイプシロン−アミノ基又はＡ‐鎖若しくはＢ‐鎖のＮ末端への連結に用いられる、アミノ酸アスパラギン酸のアルファカルボキシ基であるという事実により、ベータ−Ａｓｐ又は簡単にｂＡｓｐと表されてもよい。他のリンカー要素は、例えば、他のＡｓｐ残基、又はＯＥＧ分子であってもよい。Ａｓｐのアミノ基は、遅延部分のカルボキシ基と一緒に、又は例えば、存在する場合には、ＯＥＧ分子のカルボキシ基と一緒に、若しくは、存在する場合には他のＡｓｐのベータ−カルボキシ基と一緒に、順次アミド結合を形成する。
Ｃｈｅｍ．９は、ここでは他のリンカー要素或いはリシンのイプシロン−アミノ基又はＡ‐鎖若しくはＢ‐鎖のＮ末端への連結に用いられる、アミノ酸グルタミン酸のアルファカルボキシ基であるという事実により、アルファ−Ａｓｐ又は簡単にａＡｓｐ又は単にＡｓｐと表されてもよい。
Ｃｈｅｍ．８及びＣｈｅｍ．９の上記構造はＡｓｐのＬ体並びにＤ体をカバーする。Ｌ体はベータ−Ｌ−Ａｓｐ又はｂＬＡｓｐと表されてもよく、Ｄ体はベータ−Ｄ−Ａｓｐ又はｂＤＡｓｐと表されてもよい。特定の実施態様では、Ｃｈｅｍ．８及び／又はＣｈｅｍ．９は、独立してａ）Ｌ体であるか、ｂ）Ｄ体である。
一つの実施態様において、本発明の誘導体の各リンカーは、独立して又は他のリンカー要素と組み合わせて、下記第三のリンカー要素：
Figure 0006058646
〔ここで、ｎ及びｍは１〜２の範囲の整数である。〕を更に含む。このリンカー要素はＩＤＡと表されてもよい。
一つの実施態様において、本発明の誘導体の各リンカーは、アルブミン結合部分が還元的アルキル化によって接続されている場合には、独立して又は他のリンカー要素と組み合わせて、下記リンカー要素：
Figure 0006058646
を更に含む。
このリンカー要素はＣＰＨと表されてもよい。
なおも更に特定の実施態様において、リンカーはａ）５〜４１のＣ原子、及び／又はｂ）４〜２８のヘテロ原子を有する。特定かつ非限定的なヘテロ原子の例は、Ｎ及びＯ原子である。Ｈ原子はヘテロ原子ではない。
あるいは、存在する場合、リンカー部分は５〜３０のＣ原子を有し、好ましくは５〜２５のＣ原子を有し、さらに好ましくは５〜２０のＣ原子を有し、又最も好ましくは５〜１７のＣ原子を有する。付加的な好ましい実施態様において、存在する場合、リンカー部分は４〜２０のヘテロ原子を有し、好ましくは４〜１８のヘテロ原子を有し、さらに好ましくは４〜１４のヘテロ原子を有し、最も好ましくは４〜１２のヘテロ原子を有する。
あるいは、リンカーは少なくとも一つのＯＥＧ分子及び／又は少なくとも一つのグルタミン酸残基、又は好適には対応するラジカルを含む。
一つの実施態様において、各リンカーは一つのＣｈｅｍ．６及び二つのＣｈｅｍ．５からなり、この順序で、アミド結合を介して相互接続され、リンカーはその遊離アミノ末端で遅延部分の遊離カルボニル基に連結されており、遊離カルボニル末端でＢ２９リシン残基、Ａ２２Ｋリシン残基又はインスリンのＡ及び／又はＢ鎖のＮ末端に連結されている。
一つの実施態様において、一つ以上のアルブミン結合部分はアシル化によってインスリンに接続されている。
一つの実施態様において、一つ以上のアルブミン結合部分は還元的アシル化によってインスリンに接続されている。
一つの実施態様は、インスリン又はこの発明によるインスリン誘導体を還元的アルキル化によってアルブミン結合部分で置換する方法である。
一つの実施態様において、インスリンはこの発明によって２工程で置換され、第一工程では一つ以上のアルブミン結合部分がアシル化によってインスリンに接続され、第二工程では、一つ以上のアルブミン結合部分が還元的アルキル化によって、第一工程で達成されたインスリン誘導体に接続される。
一つの実施態様において、インスリンはこの発明によって２工程で置換され、第一工程では一つ以上のアルブミン結合部分が還元的アルキル化によってインスリンに接続され、第二工程では、一つ以上のアルブミン結合部分がアシル化によって、第一工程で達成されたインスリン誘導体に接続される。
一つの実施態様において、インスリンのＡ及び／又はＢ鎖のＮ末端におけるアミンはアルブミン結合部分のアルデヒド官能基と反応する。
一つの実施態様において、インスリン又はこの発明によるインスリン誘導体は還元的アルキル化によってアルブミン結合部分で置換される。
一つの実施態様において、インスリン又はこの発明によるインスリン誘導体は還元剤を用いた還元的アルキル化によって一つ以上のアルブミン結合部分で置換される。
一つの実施態様において、インスリン又はこの発明によるインスリン誘導体は還元剤としてＮａＣＮＢＨ３を用いた還元的アルキル化によって一つ以上のアルブミン結合部分で置換される。
一つの実施態様は、インスリン又はこの発明によるインスリン誘導体を還元的アルキル化によってアルブミン結合部分で置換する方法であって、ここでＮａＣＮＢＨ３が還元剤として用いられる。
一つの実施態様は、インスリン又はこの発明によるインスリン誘導体を前記インスリンのＡ及び／又はＢ鎖中の前記インスリンのＮ末端アミノ酸残基において、アルブミン結合部分で置換する方法である。
一つの実施態様は、インスリン又はこの発明によるインスリン誘導体を前記インスリンのＡ及び／又はＢ鎖中の前記インスリンのＮ末端アミノ酸残基において、アルブミン結合部分で置換する方法であって、ここで、ＮａＣＮＢＨ３が還元剤として用いられる。
一つの実施態様において、本発明の少なくとも２つの側鎖は類似している。
一つの実施態様において、本発明の少なくとも２つのアルブミン結合部分（すなわち側鎖全体）は類似している。
一つの実施態様において、各アルブミン結合部分の遅延部分は類似している。
ここで用いられる用語「類似している」は、本発明の少なくとも２つの側鎖又はアルブミン結合部分に適用され、遅延部分及びリンカーの組み合わせが同じ（例えば、Ｃｈｅｍ．１でＺ＝Ｚ１，ｎ＝ｍかつＸ＝Ｘ１）であることを意味する。
ここで用いられる用語「類似している」は、本発明の少なくとも２つの側鎖の遅延部分に適用され、インスリン誘導体の側鎖において遅延部分の組み合わせが同じ（例えば、Ｘ＝Ｘ１）であることを意味する。
ここで用いられる用語「類似している」は、本発明の少なくとも２つのアルブミン結合部分の遅延部分に適用され、インスリン誘導体のアルブミン結合部分において遅延部分の組み合わせが同じ（例えば、Ｘ＝Ｘ１）であることを意味する。
一つの実施形態において、各側鎖又はアルブミン結合部分のリンカー要素の組み合わせは類似している（例えば、この発明による一つのインスリン誘導体について、Ｚに関してｅ１‐ｅ２＝ｇＤＧｌｕ−ａＬＡｓｐの組み合わせの場合に、Ｚ１に関するｅ１‐ｅ２＝もまたｇＤＧｌｕ−ａＬＡｓｐの組み合わせである）。
一つの実施形態において、各側鎖又はアルブミン結合部分のリンカー要素の組み合わせは類似していない（例えば、この発明による一つのインスリン誘導体について、Ｚに関してｅ１‐ｅ２＝ｇＤＧｌｕ−ａＬＡｓｐの組み合わせの場合に、Ｚ１に関するｅ１‐ｅ２はｇＤＧｌｕ−ａＬＡｓｐの組み合わせではない他の組み合わせ、例えばｇＤＧｌｕ−ＯＥＧである）。
一つの実施形態において、本発明の少なくとも２つの側鎖のリンカーにおけるリンカー要素の組み合わせ（存在する場合）は、類似しておらず（例えば、この発明による一つのインスリン誘導体について、Ｚに関してｅ１‐ｅ２＝ｇＤＧｌｕ−ａＬＡｓｐの組み合わせの場合に、Ｚ１に関するｅ１‐ｅ２はｇＤＧｌｕ−ａＬＡｓｐの組み合わせではない他の組み合わせ、例えばｇＤＧｌｕ−ＯＥＧである）、遅延部分は類似していない（例えば、ＸはＸ１と同じ脂肪二酸ではない。）。
一つの実施態様において、この発明によるインスリン誘導体は薬学的に許容されうる塩の形である。
一つの実施態様において、塩は塩基性塩でも酸性塩でもよく、又はいずれでもなくてもよい（例えば中性塩）。水中で、塩基性塩は水酸化物イオンを産生し、酸性塩はオキソニウムイオンを産生する。
本発明のインスリン誘導体はそれぞれアニオン性基又はカチオン性基と反応する添加カチオン又はアニオンと一緒に形成されてもよい。これらの基はペプチド部分、及び／又は本発明の誘導体の側鎖に位置していてもよい。
本発明の誘導体のアニオン性基の非限定的な例は、側鎖中の、もしあるならば、並びにペプチド部分中の、遊離カルボキシル基を含む。ペプチド部分はしばしばＣ末端に遊離カルボキシ基を含み、それはＡｓｐ及びＧｌｕのような内部酸アミノ酸残基において遊離カルボキシ基を含んでいてもよい。
ペプチド部分におけるカチオン性基の非限定的な例は、Ｎ末端、もし存在するなら並びにＨｉｓ、Ａｒｇ及びＬｙｓ等の内部塩基性アミノ酸の遊離アミノ基の遊離アミノ基を含む。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体は医薬品として用いられる。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体は薬物として用いられる。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体は２型糖尿病の疾病進行の遅延または阻害のための薬物として用いられる。
一つの実施態様において、インスリン誘導体は、ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、並びに、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病が与えられる、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、の処置又は予防のための薬物としての使用のためである。
一つの実施態様において、本発明は、ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、並びに、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病が与えられる、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、の処置又は予防のための方法に関し、前記方法は、そのような処置を必要とする患者にそのような処置のための有効量の本発明によるインスリン誘導体を投与することを含む。
用語「糖尿病」（diabetes）又は「糖尿病」（diabetes mellitus）は１型糖尿病、２型糖尿病、妊婦性糖尿病（妊娠中の）及び高血糖を引き起こす他の状態を含む。この用語は膵臓が産生するインスリンの量が不十分であるか、又は体の細胞がインスリンに適切に反応し損ねる、代謝障害に用いられる。その結果、血中にグルコースが蓄積する。
１型糖尿病は、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）及び若年発病性糖尿病とも呼ばれ、Ｂ細胞の破壊により引き起こされ、通常明白なインスリン欠乏を招く。
２型糖尿病は非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）及び成人発病性糖尿病としても知られており、支配的なインスリン抵抗性に関連し、したがって相対的なインスリン欠乏及び／又はインスリン抵抗性に伴う優勢的インスリン分泌障害に関連する。
一つの実施態様において、本発明によるインスリン誘導体は、ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病の処置又は予防のため、並びに糖尿病性及び非糖尿病性の重篤疾患患者及び多発性神経障害の処置のための薬物の調製に用いられる。
ここで用いる用語「ヒトインスリン」は、その構造及び性質がよく知られているヒトインスリンホルモンを意味する。ヒトインスリンはＡ鎖及びＢ鎖と名付けられた２本のポリペプチド鎖を有する。Ａ鎖は２１アミノ酸ペプチドであり、Ｂ鎖は３０アミノ酸ペプチドであり、その２つの鎖はジスルフィド架橋によって連結されている。第１の架橋はＡ鎖の７位のシステインとＢ鎖の７位のシステインの間であり、第２の架橋はＡ鎖の２０位のシステインとＢ鎖の１９位のシステインの間である。Ａ鎖の６位と１１位のシステイン間には第３の架橋が存在する。
人体において、前記ホルモンは、その配置：プリペプチド−Ｂ−ＡｒｇＡｒｇ−Ｃ−ＬｙｓＡｒｇ−Ａ〔ここで、Ｃは３１アミノ酸からなる連結ペプチドである〕において８６アミノ酸を含むプロインスリンに続く２４アミノ酸のプリペプチドからなる単鎖の前駆体プロインスリン（プレプロインスリン）として合成される。Ａｒｇ−Ａｒｇ及びＬｙｓ−ＡｒｇはＡ及びＢ鎖からの連結ペプチドの開裂のための開裂部位である。
本発明による「インスリン」は、ここではヒトインスリン又は他の種からのインスリン、例えばブタ又はウシインスリンと理解すべきである。
本発明による「可溶性インスリン」は、ここでは水を含むがそれには限定されない、水性溶液において可溶性のインスリンと理解すべきである。
一つの実施態様において、本発明によるインスリンは水に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンは水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンはｐＨ６から９の範囲のｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンはｐＨ７から８の範囲のｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンはｐＨ７．２から７．８の範囲のｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンはｐＨ７．２から７．６の範囲のｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンはｐＨ７．４から７．６の範囲のｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンはｐＨ７．４から７．８の範囲のｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンはアルカリ性ｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンは中性ｐＨの水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンは中性又は中性より１〜２ｐＨ単位低い水性溶液に可溶性である。一つの実施態様において、本発明によるインスリンは中性又は中性より１ｐＨ単位低い水性溶液に可溶性である。
一つの実施態様において、この発明によるインスリンは０．５ｍＭから８ｍＭの間の溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは０．６ｍＭから７．２ｍＭの間の溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも０．６ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも０．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも１．０ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも１．２ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも１．４ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも１．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも２．０ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも２．２ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも２．４ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも２．６ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも２．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも３．０ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも３．２ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも３．４ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも３．６ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも３．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも４．０ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも４．２ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも４．４ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも４．６ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも４．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも５．０ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも５．２ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも５．４ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも５．６ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも５．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも６．０ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも６．２ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも６．４ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも６．６ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも６．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも７．０ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも７．２ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも７．４ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも７．６ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも７．８ｍＭの溶解度を有する。一つの実施態様において、この発明によるインスリンは少なくとも８．０ｍＭの溶解度を有する。
ここで用いられる用語「インスリンペプチド」はヒトインスリン又はインスリン活性を有するそのアナログ若しくは誘導体を意味する。
ここで用いられる用語「インスリン誘導体」は化学的に改変されたインスリンを意味し、その改変は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステルの接続、ＰＥＧ化等の形式である。本発明によるヒトインスリンの誘導体の例は、Ａ２２Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ− グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｎε−Ｎ−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンである。
ここで用いられる用語「インスリンアナログ」は改変されたヒトインスリンを意味し、ここで前記インスリンの一つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基で置換されており、及び／又は一つ以上のアミノ酸残基が前記インスリンから欠失している及び／又は一つ以上のアミノ酸残基が前記インスリンに挿入されている。
一つの実施態様において、インスリンアナログはヒトインスリンに比べて１０未満のアミノ酸改変（置換、欠失、付加（挿入を含む）及びそれらのいかなる組み合わせ）、あるいはヒトインスリンに比べて９、８、７、６、５、４、３、２又は１未満の改変を含む。
前記インスリン分子における改変は鎖（Ａ又はＢ）、位置及び生来のアミノ酸残基を置換するアミノ酸残基の１文字又は３文字コードを表明することで表される。
「連結ペプチド」又は「Ｃ−ペプチド」によって、単鎖プロインスリン分子の前記Ｂ−Ｃ−Ａポリペプチド配列の連結部分「Ｃ」が意味される。前記ヒトインスリン鎖において前記Ｃ−ペプチドは前記Ｂ鎖の３０位と前記Ａ鎖の１位を連結し、３５アミノ酸長である。前記連結ペプチドは２つの末端二塩基性アミノ酸配列、例えばＡｒｇ−Ａｒｇ及びＬｙｓ−Ａｒｇを含み、これらは連結ペプチドを前記Ａ及びＢ鎖から切断して二鎖インスリン分子を形成するための開裂部位として供される。
「ｄｅｓＢ３０」又は「Ｂ（１〜２９）」によって、Ｂ３０アミノ酸を欠いた天然インスリンＢ鎖又はそのアナログが意味され、「Ａ（１〜２１）」は天然インスリンＡ鎖を意味する。したがって、例えばＡ１４Ｅ Ａ２２Ｋ ｄｅｓ３０ヒトインスリンはＡ鎖における１４位のアミノ酸がグルタミン酸で置換され、Ａ鎖における２２位のアミノ酸がリシンで置換され、そしてＢ鎖における３０位のアミノ酸が欠失しているヒトインスリンのアナログである。
ここで、「Ａ１」、「Ａ２」及び「Ａ３」等のような用語はそれぞれインスリンのＡ鎖における（Ｎ末端の終わりから数えて）１、２及び３位等におけるアミノ酸を示す。同様に、Ｂ１、Ｂ２及びＢ３等はそれぞれインスリンのＢ鎖における（Ｎ末端の終わりから数えて）１、２及び３位等におけるアミノ酸を示す。アミノ酸に一文字コードを用いた、Ａ２１Ａ、Ａ２１Ｇ、Ａ２１Ｑのような用語はＡ２１位のアミノ酸がそれぞれＡ、Ｇ及びＱであることを示す。アミノ酸に三文字コードを用いると、対応する表現はそれぞれＡ２１Ａｌａ、Ａ２１Ｇｌｙ及びＡ２１Ｇｌｎである。
ここで、用語「アミノ酸残基」は、形式上、カルボキシ基から一つの水酸基が除去されている、及び／又は、形式上、アミノ基から一つの水素原子が除去されているアミノ酸である。
アミノ酸はＤ体（右旋性）又はＬ体（左旋性）の立体異性体の形で存在する。前記Ｄ及びＬは光学活性分子の絶対立体配置を表す。グリシンの例外を除き、他のすべてのアミノ酸は重ねることができない鏡像である。自然界にみられる大部分のアミノ酸はＬ型である。ゆえに、真核性のタンパク質は常にＬアミノ酸で構成されるが、Ｄアミノ酸はバクテリア及びいくつかのペプチド抗体でみられる。自然界では少なくとも３００のアミノ酸が記述されているが、それらのうち２０だけが一般的にヒトのペプチドおよびタンパク質における構成成分として発見されている。２０の標準アミノ酸がペプチド生合成において細胞で使われており、それらは一般的な遺伝的コードで特定される。前記２０の標準アミノ酸はあ、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、プロリン（Ｐｒｏ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）システイン（Ｃｙｓ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、リシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）である。
インスリンアナログの例は、Ａ鎖の１４位のＴｙｒ（Ｙ）がＧｌｕ（Ｅ）で置換されているもの及び／又はＢ２９位のＬｙｓ（Ｋ）がＰｒｏ（Ｐ）、Ａｒｇ（Ｒ）で置換されているようなものである。さらにＢ３位のＡｓｎ（Ｎ）はＬｙｓ（Ｋ）で置換されていてもよい。Ａ鎖及び／又はＢ鎖のＣ末端、たとえばＬｙｓ（Ｋ）に一つ以上のアミノ酸が付加されていてもよい。Ｂ１位におけるアミノ酸はＧｌｕ（Ｅ）で置換されていてもよい。Ｂ１６位のアミノ酸はＨｉｓ（Ｈ）で置換されていてもよい。インスリンアナログの更なる例は、欠失アナログであり、例えば、ヒトインスリンのＢ３０アミノ酸が欠失した（ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）アナログ、ｄｅｓＢ２８−Ｂ３０ヒトインスリン、及びｄｅｓＢ２７ヒトインスリンである。Ａ鎖及び／又はＢ鎖にＮ末端伸長を有するインスリンアナログ及びＡ鎖及び／又はＢ鎖が、Ｂ鎖のＣ末端に２つのアルギニンが付加されている等の、Ｃ末端伸長を有するインスリンアナログもインスリンアナログの例である。更なる例は、前記言及された突然変異の組み合わせを含むインスリンアナログである。Ｂ２５位のアミノ酸がＨｉｓ（Ｈ）であり、場合によりさらに一つ以上の付加的な突然変異を含むインスリンアナログも、インスリンアナログの例である。Ａ２２位におけるアミノ酸残基がＬｙｓ（Ｋ）であるヒトインスリンのインスリンアナログであって、及び／又は前記インスリンアナログはさらにＣ末端において２つのＡｒｇ（Ｒ）残基で伸長されているものもまた、インスリンアナログの例である。
インスリンアナログの更なる例は以下：ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン Ｂ２８Ｄ ヒトインスリン, Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ｂ３Ｋ Ｂ２８Ｅ ヒトインスリン, Ｂ２８Ｄ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｐ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ｂ２８Ｋ Ｂ２９Ｐ ヒトインスリン, Ｂ２８Ｋ Ｂ２９ＰｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ｂ３Ｋ Ｂ２８Ｅ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン, Ａ１４ＥｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン 及び Ａ１４Ｅ Ｂ１６ＨｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン を含む。
インスリン受容体結合アッセイ（ＨＩＲｓｐａ）：
この発明のインスリン誘導体のヒトインスリン受容体への親和性はＳＰＡアッセイ（シンチレーション近接アッセイ）マイクロプレート抗体捕捉アッセイにより決定した。ＳＰＡ−ＰＶＴ抗体結合ビーズ及び抗マウス試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＰＲＮＱ００１７）を２５ｍｌの結合バッファ（ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．８ １００ｍＭ；塩化ナトリウム１００ｍＭ；ＭｇＳＯ４ １０ｍＭ；Ｔｗｅｅｎ−２０ ０．０２５％）と混合した。単一Ｐａｃｋｅｒｄ Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｎｏ．６００５１９０）のための混合試薬は、２．４μｌの１：５０００希釈純粋リコンビナントヒトインスリン受容体（エクソン１１を伴う又は伴わない）、混合試薬１００μｌ毎５０００ｃｐｍに相当する量のＡ１４Ｔｙｒ〔１２５Ｉ〕‐ヒトインスリンストック溶液、１２μｌの１：１０００希釈Ｆ１２抗体、３ｍｌのＳＰＡ−ビーズ、及び結合バッファを全量１２ｍｌまで、で構成される。次に、全量１００μｌの混合試薬をＰａｃｋａｒｄＯｐｔｉｐｌａｔｅの各ウェルに添加し、適切な試料からのインスリン誘導体の希釈系列を前記Ｏｐｔｉｐｌａｔｅにおいて作成する。次に、試料を穏やかに揺らしながら１６時間インキュベートする。次に、相を１分間の遠心分離で分離し、プレートをＴｏｐｃｏｕｎｔｅｒで計数する。結合データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ２．０１（GraphPad Software, San Diego, CA）の非線形回帰演算を用いて合わせると、親和性がヒトインスリンの親和性に対する相対値（百分率％で）が示される。
生理的条件を模倣するため、結合バッファが１．５％ＨＳＡをも含む関連のアッセイも用いられる。
薬物動態アッセイ、静脈でのラットＰＫ
麻酔したラットにインスリン誘導体を種々の用量で静脈投与（i.v.）し、用いられた化合物の血漿濃度をイムノアッセイ又は質量分析を用いて特定の間隔で投与後４時間以上、測定した。薬物動態パラメーターは続いてＷｉｎＮｏｎＬｉｎＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ(Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA)を用いて計算する。
計量された約２００ｇの非絶食のオスのウィスターラット（Ｔａｃｏｎｉｃ）を用いる。
体重を測定し、続いてラットをＨｙｐｎｏｒｍ／Ｄｏｒｍｉｃｕｍ（各化合物は別々に蒸留水中で１：１に希釈され混合する；実験当日に新たに準備する。）で麻酔する。麻酔は２ｍｌ／ｋｇのＨｙｐｎｏｒｍ／Ｄｏｒｍｉｃｕｍ混合物の皮下投与で開始し、続いて１ｍｌ／ｋｇの２維持用量の皮下投与を３０分間隔及び、１ｍｌ／ｋｇの２維持用量の皮下投与を４５分間隔で行う。必要に応じてラットをずっと軽度に麻酔し続けるために、１〜２ｍｌ／ｋｇの皮下投与の更なる用量を供給する。一つの部屋から他の部屋へ移動することにより動物がストレスを受けるのを避けるため、計量及び開始の麻酔はラット飼育室で行う。
アルブミン結合アッセイ、保持時間（ＲＴ）
薬物‐タンパク質結合の固定化ヒト血清アルブミンクロマトグラフィ−質量分光分析を用いた測定
固定化ＨＳＡ−カラム上の保持時間でのＬＣ−ＭＳを用いて測定されるアルブミン結合
溶媒は次の順で用いた。
Ａ：５０ｍＭ酢酸アンモニウム ｐＨ７．４（3,854ｇ／Ｌ）新たに調製されたもの
Ｂ：１００％２−プロパノール
Figure 0006058646
ＨＰＬＣ１１００システム（ＣＴＣ ＰＡＬ オートサンプラー）は以下のように調整した。
・ＨＰＬＣカラム：キラルＨＳＡ ５０×３．０ｍｍ ５μｍ（Chromtech カタログ番号: HSA 50.3 06-F）
・ＵＶ検出器：２８０nm
・カラム温度：４５℃
・化合物注入：１０μｌ、１０μＭ
・配分 １：４（ＭＳ：ＬＣ）
ＬＣ／ＭＳＤトラップＸＴＣは以下のように調整した。
・イオン源タイプ：ＥＳＩ
・極性：陽性
・ドライ温度：３２５℃
・噴霧器：４０．００ｐｓｉ
・ドライガス：８．００ ｌ／分
インスリンの調製
インスリン等のポリペプチドの調製は当分野でよく知られている。インスリン誘導体の一部として用いられるインスリン又はインスリンアナログは、古典的なペプチド合成、例えばｔ−ＢｏｃやＦｍｏｃ化学を用いた固相ペプチド合成法又は良好に確立されている技術で調製してもよい。例えば、Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999を参照されたい。インスリン又はインスリンアナログは、前記アナログをコードするＤＮＡ配列を含み、前記インスリン又はインスリンアナログの発現が許される条件下で、好適な栄養培地中で前記インスリン又はインスリンアナログを発現させることができるホスト細胞を培養することを含む方法で調製してもよい。ヒトインスリン及びヒトインスリンアナログの調製にはいくつかの組み換え方法を用いてもよい。エッシェリヒア・コリ及びサッカロマイセス・セレヴィシエ等のような微生物におけるインスリンの調製に用いてもよい方法の例は、例えばＷＯ２００８／０３４８８１に開示されている。
一般的に、インスリン又はインスリンアナログは、問題の前記インスリン又はインスリンアナログ又はその前駆体をコードするＤＮＡ配列を、例えばＥＰ１２４６８４５又はＷＯ２００８／０３４８８等に開示されているように、よく知られた技術好適なホスト細胞中で発現させることによって調製される。
インスリン又はインスリンアナログは、ＥＰ１２４６８４５に開示されているようにＮ末端伸長を伴って発現されてもよい。培地中に分泌され回収した後、インスリン前駆体は種々のインビトロ工程に供されて、あるであろうＮ末端伸長配列が除去され、ペプチドが連結されてインスリン又はインスリンアナログが与えられる。そのような方法は、Ｌ−トレオニンエステルの存在下でトリプシン又はアクロモバクター・ライチカスのプロテアーゼを用い、米国特許明細書第４３４３８９８号又は第４９１６２１２号に記載されているように、続いて前記インスリン又はインスリンアナログのトレオニンエステルを塩基性又は酸性加水分解でインスリン又はインスリンアナログに転換する、酵素転換を含む。
本発明において好適なタイプのＮ末端伸長の例は、ＵＳ５３９５９２２及びＥＰ０７６５３９５に開示されている。
非天然アミノ酸残基を含むインスリンアナログについては、例えばｔＲＮＡ突然変異体の使用により、非天然アミノ酸がアナログに組み込まれるように組み換え細胞が改変されているべきである。それ故、簡単には、本発明によるインスリン又はインスリンアナログは既知のインスリンアナログの調製と類似の方法で調製される。
タンパク質の精製
本発明のインスリン誘導体の一部として用いられるインスリン又はインスリンアナログは細胞培養培地から回収される。本発明のインスリン又はインスリンアナログは、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、アフィニティ、疎水性、クロマトフォーカシング及びサイズ排除）、電気泳動手法（例えば等電点電気泳動（ＩＥＦ））、示差溶解度（例えば、硫酸アンモニウム沈降法）又は抽出（例えばProtein Purification, J.-C. Janson and Lars Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989を参照されたい。）を含むが、これらに限定されない、当分野で知られている様々な手法で精製されてもよい。好ましくは、それらは抗インスリン又は抗インスリンアナログ抗体カラム上のアフィニティクロマトグラフィで精製されてもよい。更なる精製法は、例えば高速液体クマトグラフィのような従来の化学的精製法によって達成される。クエン酸バリウム沈降法を含む、他の精製法が本分野で知られており、ここに記載されている新規のインスリン又はインスリンアナログの精製に適用することができる（例えば、Scopes, R., Protein Purification, Springer-Verlag, N.Y., 1982 を参照されたい）。
薬学製剤
本発明によるインスリン誘導体を含む医薬組成物は、例えば皮膚及び粘膜部位の例えば局所部位等の数か所で、吸収をバイパスした部位に、例えば動脈内、静脈内、心臓内投与で、及び吸収を伴う部位に、例えば皮膚内、皮下、筋肉内又は下腹部内投与で、そのような処置を必要とする患者に投与してもよい。
本発明によるインスリン誘導体を含む医薬組成物の投与は、いくつかの投与経路、例えば舌、舌下、頬、口内、経口、胃及び腸内、鼻、肺（例えば細気管支及び肺胞を通じて又はそれらの組み合わせで）、表皮、真皮、経皮的に、膣、直腸、眼球（例えば結膜を通じて）、尿管を通じて及び非経口で、そのような処置が必要な患者に投与されてもよい。
現発明の組成物は種々の投薬形態で投与することができる。例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、マイクロエマルション、多重エマルション、発泡剤、軟膏、貼付剤、膏薬、付け薬、錠剤、コーティング錠、リンス剤、ハードゼラチンカプセル及びソフトゼラチンカプセルのようなカプセル、座薬、直腸カプセル、ドロップ、ゲル剤、噴霧剤、粉末剤、エアロゾル、吸入剤、目薬、眼軟膏、眼科リンス剤、膣ペッサリー、膣リング、膣軟膏、注射液、インサイチュゲル化、インサイチュ設置、インサイチュ沈殿、インサイチュ結晶化等のインサイチュ形質転換溶液、輸液剤及びインプラントである。
非経口投与のために、この発明によるインスリン誘導体は既知のインスリンと類似の方法で形成される。さらに、非経口投与のために、本発明のインスリン誘導体は既知のインスリンの投与と類似する方法で投与され、医師はこの手法に慣れている。
非経口投与は注射器、場合によりペン型注射器によって施すことができる。あるいは、非経口投与は輸液ポンプによって施すことができる。
本発明のインスリン誘導体を含む注射可能な組成物は、適切な成分を溶解および混合して所望の最終産物を得ることを含む医薬産業の従来技術を用いて調製することができる。したがって、一つの手法によれば、この発明のインスリン誘導体は、調製される組成物の最終量よりもいくらか少ない、ある量の水に溶解される。等張剤、防腐剤及び緩衝剤を必要に応じて添加し、溶液のｐＨ値を調整し、必要であれば、必要な塩酸等の酸又は水性水酸化ナトリウム等のアルカリを用いる。最後に、成分が望ましい濃度になるように、水で溶液の量を調整する。
経口用途のための製剤は既知のいかなる方法によって調製してもよく、薬学的に上品であり味の良い処方を提供するため、そのような製剤は甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤からなる群より選択される一つ以上の剤を含んでいてもよい。錠剤は有効成分を、錠剤の製造にふさわしい、非毒性の、薬学的に許容されうる賦形剤との混合物の中に含んでいてもよい。錠剤はコーティングされていないか、治療上の活性ポリペプチドの崩壊又は解放を遅延させる既知の技術でコーティングされていてもよい。
本発明の経口投与可能な製剤は医薬化学においてよく知られている方法によって調製し、投与することができる。レミントンの薬学科学 第１７版（Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed.）(A. Osol ed., 1985)を参照されたい。
本発明のインスリン誘導体の調製は、既知のインスリンの調製の使用に同様に用いられる。
以下は更に本発明の範囲に含まれる側面の非限定的なリストである。
１）少なくとも２つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸での置換（fatty acid substitution）を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２）少なくとも２つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３）２つ又は３つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４）２つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
５）３つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６）少なくとも３つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７）２つ又は３つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
８）２つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
９）３つのアルブミン結合部分を含み、各アルブミン結合部分が脂肪二酸置換を含み、各当該脂肪二酸置換からの一つのカルボキシ基が、場合によりリンカーを介して、インスリンに接続されている、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１０）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘ２は場合によるものであり、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１１）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘ２は場合によるものであり、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１２）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１３）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９アルギニン残基及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ａ２２リシン残基に位置し、Ｘ１はＡ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ２は存在せず、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは１又は０であり、ｐは０である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１４）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９アルギニン残基及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ａ２２リシン残基に位置し、Ｘ１はＢ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ２は存在せず、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは１又は０であり、ｐは０である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１５）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシンを含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１はＡ鎖の当該Ｎ末端に位置し、Ｘ２は存在せず、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは１又は０であり、ｐは０である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１６）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１はＢ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ２は存在せず、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは１又は０であり、ｐは０である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１７）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン残基及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１は当該Ａ２２リシン残基に位置し、Ｘ２は存在せず、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは１又は０であり、ｐは０である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１８）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、ＸはＡ鎖の当該Ｎ末端に位置し、Ｘ１はＢ鎖の当該Ｎ末端に位置し、Ｘ２は存在せず、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは１又は０であり、ｐは０である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
１９）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシンを含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１はＡ鎖の当該Ｎ末端に位置し、Ｘ２はＢ鎖の当該Ｎ末端に位置し、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２０）一般式
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９アルギニン残基及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ａ２２リシン残基に位置し、Ｘ１はＡ鎖の当該Ｎ末端に位置し、Ｘ２はＢ鎖の当該Ｎ末端に位置し、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２１）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２２）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２３）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、それぞれＢ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される位置に位置し、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２４）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９アルギニン残基及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ａ２２リシン残基に位置し、Ｘ１はＡ鎖のＮ末端に位置し、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２５）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９アルギニン残基及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ａ２２リシン残基に位置し、Ｘ１はＢ鎖のＮ末端に位置し、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２６）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１はＡ鎖のＮ末端に位置し、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２７）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１はＢ鎖のＮ末端に位置し、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２８）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン残基及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１は当該Ａ２２リシン残基に位置し、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
２９）一般式 ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９アルギニン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、ＸはＡ鎖の当該Ｎ末端に位置し、Ｘ１はＢ鎖の当該Ｎ末端に位置し、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３０）前記脂肪二酸置換が１０〜２０の炭素原子を含む、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３１）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１０〜２０の整数であり、ｙは６〜１４の整数である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３２）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１４〜２０の整数であり、ｙは６〜１０の整数である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３３）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１４〜１８の整数であり、ｙは８〜１０の整数である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３４）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１４〜１６の整数であり、ｙは１０〜１２の整数である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３５）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１４〜２０の整数であり、ｙは６〜１２の整数である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３６）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１２、１４、１６、１８又は２０であり、ｙは６、８、１０、１２又は１４である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３７）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１２、１４、１６、１８又は２０であり、ｙは６、８又は１０である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３８）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１４、１６、１８又は２０であり、ｙは６、８又は１０である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
３９）前記脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１４、１６又は１８であり、ｙは８、１０又は１２である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４０）前記脂肪二酸置換が前記インスリンのアミノ酸残基に、Ａ１、Ａ２２、Ｂ１及びＢ２９からなる群より選択される部位で接続されている、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４１）前記脂肪二酸置換が、リシン側鎖のイプシロンアミノ基、又はインスリンのＡ及び／又はＢ鎖のＮ末端にそれぞれ接続されている、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４２）前記脂肪二酸置換が、インスリンのアミノ酸残基にリンカーを介して接続されている、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４３）前記リンカー（Ｚ）が一つ以上のリンカー要素（ｅ）を含む、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４４）前記リンカーがアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択される一つ以上のリンカー要素を含む、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４５）前記リンカーが式：ｅ１−ｅ２で表される２つのリンカー要素を含み、ここで
ａ．ｅ１はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素であり、
ｂ．ｅ２はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素である、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４６）前記リンカーが式：ｅ１−ｅ２−ｅ３で表される３つのリンカー要素を含み、ここで
ａ．ｅ１はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素であり、
ｂ．ｅ２はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素であり
ｃ．ｅ３はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素である、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４７）前記リンカーが式：ｅ１−ｅ２−ｅ３−ｅ４で表される３つのリンカー要素を含み、ここで
ａ．ｅ１はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素であり、
ｂ．ｅ２はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素であり、
ｃ．ｅ３はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素であり、
ｄ．ｅ４はアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択されるリンカー要素である、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４８）前記アルブミン結合部分が前記インスリンＡ及び／又はＢ鎖のＮ末端に位置し、リンカーが１つ以上のＣＰＨリンカー要素を含む、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
４９）当該インスリン誘導体の前記アルブミン結合部分が類似している、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体。
５０）前記インスリン誘導体がヒトインスリン、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの誘導体及びインスリンアナログの誘導体からなる群より選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
５１）前記インスリンがｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ２８Ｄヒトインスリン、Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ３Ｋ Ｂ２８Ｅ ヒトインスリン、Ｂ２８Ｄ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｐ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ２８Ｋ Ｂ２９Ｐ ヒトインスリン、Ｂ２８Ｋ Ｂ２９Ｐ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、及びＢ３Ｋ Ｂ２８Ｅ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ２７ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンからなる群より選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
５２）ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病の処置又は予防のため、並びに糖尿病性及び非糖尿病性の重篤疾患患者及び多発性神経障害の処置のための、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
一般式 ＸＺｎ‐Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ１はＡ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなり、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、Ｚ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧであり、
ｄ．ｎ及びｍは１である〕の、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
可能な範囲内で、Ａ２２Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｎε−Ｎ−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、からなる群より選択される、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
５５）医薬品としての使用のための、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
５６）当該インスリン誘導体が水性溶液に可溶性である、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体。
５７）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘ２は場合によるものであり、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
５８）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘ２は場合によるものであり、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
５９）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｘ２は場合によるものであり、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６０）医薬品としての使用のための、請求項１に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６１）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６２）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６３）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６４）一般式ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６５）一般式ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４〜２０の炭素原子を含む〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６６）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４、１６、１８又は２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６７）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４、１６、１８又は２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容れうる塩。
６８）一般式：
Figure 0006058646
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ、Ｘ１及びＸ２は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４、１６、１８又は２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ、Ｚ１及びＺ２はそれぞれＩｎｓと、Ｘ、Ｘ１及びＸ２との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ、ｍ及びｐは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
６９）一般式ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、当該脂肪二酸置換は１４、１６、１８又は２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７０）一般式ＸＺｎ−Ｉｎｓ−Ｚ１ ｍＸ１
〔ここで、
ａ．ＩｎｓはＢ２９リシン若しくはＢ２９アルギニン残基及び／又はＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
ｂ．Ｘ及びＸ１は脂肪二酸置換であり、Ｂ２９リシン、Ａ２２リシン、Ａ鎖のＮ末端、Ｂ鎖のＮ末端からなる群より選択される部位にそれぞれ位置し、当該脂肪二酸置換は１４、１６、１８又は２０の炭素原子を含み、
ｃ．Ｚ及びＺ１はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ１との間のリンカーであり、及び
ｄ．ｎ及びｍは０又は１である〕の、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７１）当該脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１０〜２０の整数であり、ｙは６〜１４の整数である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７２）当該脂肪二酸置換がＣｈｅｍ．１及びＣｈｅｍ．２：
Figure 0006058646
〔ここで、ｘは１４、１６又は１８であり、ｙは８、１０、又は１２である。〕から選択される遅延部分の群から選択される、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７３）当該脂肪二酸置換が当該インスリンのアミノ酸残基に、Ａ１、Ａ２２、Ｂ１及びＢ２９からなる群より選択される部位で接続されている、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７４）当該脂肪二酸置換が、インスリンのアミノ酸残基にリンカーを介して接続されている、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７５）当該リンカーがアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、 ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択される一つ以上のリンカー要素を含む、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７６）ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病の処置又は予防、並びに糖尿病性及び非糖尿病性の重篤疾患患者及び多発性神経障害の処置、において薬物として用いるための、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７７）Ａ２２Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα− ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ− グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｎε−Ｎ−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、からなる群より選択される、先の請求項のいずれか１項に記載の可溶性インスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
７８）アシル化またはアルキル化の工程を含む、上記請求項のいずれか１項に記載されたインスリン誘導体を調製する方法。
７９）上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体を調製する方法。
８０）インスリンの還元的アルキル化及び／又はアシル化による、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体を調製する方法。
８１）インスリンの還元的アルキル化による、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体を調製する方法。
８２）インスリンのアシル化による、上記側面のいずれか１つに記載のインスリン誘導体を調製する方法。
８３）前記側面１〜７７のいずれか１つに記載のインスリン誘導体の、薬物としての使用。
８４）ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病の処置又は予防、並びに糖尿病性及び非糖尿病性の重篤疾患患者及び多発性神経障害の処置、のための、前記側面１〜７７のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩の使用。
８５）当該脂肪二酸置換ＸはＢ２９リシン位に位置し、当該脂肪二酸置換Ｘ１は当該インスリンのＡ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなり、当該リンカーＺ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧである、上記側面１〜７７のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
８６）当該脂肪二酸置換ＸはＢ２９リシン位に位置し、当該脂肪二酸置換Ｘ１は当該インスリンのＡ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなり、当該リンカーＺ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧである、上記側面１〜７７のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩の薬物としての使用。
８７）当該脂肪二酸置換ＸはＢ２９リシン位に位置し、当該脂肪二酸置換Ｘ１は当該インスリンのＡ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなり、当該リンカーＺ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧである、上記側面１〜７７のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩の、ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病の処置又は予防、並びに糖尿病性及び非糖尿病性の重篤疾患患者及び多発性神経障害の処置、のための使用。
８８）当該脂肪二酸置換ＸはＢ２９リシン位に位置し、当該脂肪二酸置換Ｘ１は当該インスリンのＡ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなり、当該リンカーＺ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧではない、上記側面１〜７７のいずれか１つに記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
８９）当該脂肪二酸置換ＸはＢ２９リシン位に位置し、当該脂肪二酸置換Ｘ１は当該インスリンのＡ鎖のＮ末端に位置し、Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなり、当該リンカーＺ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧであり、当該Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなっていない、上記側面１〜７７のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
９０）当該脂肪二酸置換ＸはＢ２９リシン位に位置し、当該脂肪二酸置換Ｘ１は当該インスリンのＡ鎖のＮ末端に位置し、当該リンカーＺ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧである場合には、当該Ｘ及びＸ１は２０炭素原子からなっていない、上記側面１〜７７のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
９１）当該脂肪二酸置換ＸはＢ２９リシン位に位置し、当該脂肪二酸置換Ｘ１は当該インスリンのＡ鎖のＮ末端に位置し、ここで、当該Ｘ及びＸ１が２０炭素原子からなる場合には、当該リンカーＺ及びＺ１はｇＧｌｕ−ＯＥＧ−ＯＥＧではない、上記側面１〜７２のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
略号リスト
AcOH, 酢酸
Cpm, カウント／分
Da, ダルトン
DCM, ジクロロメタン
DIPEA, Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
DMSO, ジメチルスルホキシド
EDTA, エチレンジアミン四酢酸
ESI, エレクトロスプレーイオン化
Fmoc, フルオレニルメチルオキシカルボニル
HCCA, ４−ヒドロキシ−α−シアノ−桂皮酸
HEPES, ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
HPCD, ２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン
HPLC, 高速液体クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィーという場合もある
HSA, ヒト血清アルブミン
LC-MS/LCMS, 液体クロマトグラフィー質量解析
IDDM, インスリン依存性糖尿病
IEF, 等電点電気泳動法
NaAc, 酢酸ナトリウム
NIDDM，インスリン非依存性糖尿病
NMP, Ｎ−メチルピロリドン
MALDI, マトリックス支援レーザー脱離イオン化
MRT, 平均滞留時間
OEG, ８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイル
RP-HPLC, 逆相HPLC
Rt, 保持時間
RT 室温
SPA, シンチレーション近接アッセイ
SPA-PVT, シンチレーション近接アッセイ−ポリビニルトルエンビーズ
T-boc, ジ−tert−ブチルジカーボネート
THF, テトラヒドロフラン
TFA, トリフルオロ酢酸
Tris, トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
tRNA, 転移ＲＮＡ
UV, 紫外線
〔実施例１〕 Ａ２２Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０インスリン（２００ｍｇ、３４μＭ）を０．２Ｍの炭酸ナトリウム、ｐＨ１０．５（２．４ｍｌ）中に溶解し、アセトニトリル（２．４ｍｌ）中のヘキサデカンジオイル−γ−スクシンイミジル−Ｌ−グルタメート（４４ｍｇ、８６μＭ、ＷＯ０５０１２３４７に記載されているように調製した）で処理した。ｐＨを測定し、必要に応じて１０．５に調節した。３０分後、０．２Ｍメチルアミン、ｐＨ８（０．２４ｍｌ）を添加して反応を停止した。１Ｍの塩酸を用いてｐＨを５．５に調節し、沈殿を遠心分離で集めた。産物を、バッファＡ：１０ｍＭトリス、１５ｍＭ硫酸アンモニウム、水／アセトニトリル＝８０／２０中でｐＨ７．３、及びバッファＢ：水／アセトニトリル＝８０／２０、勾配は６０分でＢ１１％からＢ５０％、を用いてＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。前記産物をｐＨ５．５に調節した後の遠心分離によって沈殿させた。あるいは、前記産物をさらにバッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いたＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで更に精製し、産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ２２Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
Product LCMS:1658.4 Da [M + 4H]4+
Calculated for Ｃ301Ｈ458Ｎ68Ｏ88Ｓ6[M + 4H]4+：1658.5 Da
ＬＣＭＳバッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸、勾配：１０分で１０％から９０％Ｂ
〔実施例２〕 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は試薬としてＷＯ２０１０／０２９１５９に記載されているように調製したオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジルを用いて実施例１の化合物と類似して調製した。
Product LCMS:1817.5 Da [M + 4H]4+
Calculated for Ｃ329Ｈ510Ｎ72Ｏ100Ｓ6[M + 4H]4+：1817.6 Da
〔実施例３〕 Ａ２２Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は試薬としてテトラデカンジオイル−γ−スクシンイミジル−Ｌ−グルタメートを用いて実施例１の化合物と類似して調製した。
Product LCMS:1643.9 Da [M + 4H]4+
Calculated for Ｃ297Ｈ450Ｎ68Ｏ88Ｓ6[M + 4H]4+：1644.4 Da
〔実施例４〕 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は試薬として、ＷＯ０５０１２３４７に記載されたように調製されたtert−ブチル−オクタデカンジオイル−γ−スクシンイミジル−Ｄ−グルタメート−tert−ブチルを用いて実施例１の化合物と類似して調製した。tert−ブチル保護基は粗生成物を、氷冷した９５％トリフルオロ酢酸／水で４５分間処理することにより除去した。
Product LCMS:1672.2 Da [M + 4H]4+
Calculated for Ｃ305Ｈ466Ｎ68Ｏ88Ｓ6[M + 4H]4+：1672.5 Da
〔実施例５〕 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物はヘキサデカンジオイル−γ−スクシンイミジル−Ｌ−グルタメート及びＡ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例１の化合物と類似して調製した。
Product LCMS:1647.3 Da [M + 4H]4+
Calculated for Ｃ294Ｈ454Ｎ70Ｏ89Ｓ6[M + 4H]4+：1647.4 Da
〔実施例６〕 Ａ２２Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物はオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル及びＡ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例１の化合物と類似して調製した。
Product LCMS: 1806.6 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C322H506N74O101S6 [M + 4H]4+: 1806.6 Da.
〔実施例７〕 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物はヘキサデカンジオイル−γ−スクシンイミジル−Ｌ−グルタメート及びＡ１４ＥＢ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例１の化合物と類似して１：１アセトニトリル／０．２Ｍ炭酸ナトリウム、ｐＨ９．０中で調製した。
Product LCMS: 1615.3 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C288H442N68O88S6 [M + 4H]4+: 1615.4 Da.
HASカラムに対する親和性, Rt (分): 8.0 分, 単置換インスリンC（実施例２９及び表１参照）に対する値6.4 mins
〔実施例８〕 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物はヘキサデカンジオイル−γ−スクシンイミジル−Ｌ−グルタメート及びｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例１の化合物と類似して１：１アセトニトリル／０．２Ｍ炭酸ナトリウム、ｐＨ９．０中で調製した。
Product LCMS: 1626.4 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C295H446N68O87S6 [M + 4H]4+: 1626.4 Da.
〔実施例９〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物はオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル及びＡ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例１の化合物と類似して１：１アセトニトリル／０．２Ｍ炭酸ナトリウム、ｐＨ９．０中で調製した。
Product LCMS: 1774.7 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C316H494N72O100S6 [M + 4H]4+: 1774.6 Da.
〔実施例１０〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンズアルデヒドの調製 t-ブチル−Ｎ−（４−ホルミルベンジル）カルバメート（１００ｍｇ）をＴＦＡ／ＤＣＭ（１：１）で１時間処理した。その混合物を真空中で濃縮し、トルエンで２回共濃縮した。残渣をＴＨＦ（２．５ｍｌ）中に溶解し、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル−エステル（３２０ｍｇ、以前にＷＯ２００９／０８３５４９に記載されているように調製した）のＴＨＦ（５ｍｌ）中の溶液を添加した。ＤＩＰＥＡ（０．５ｍｌ）をゆっくりと添加した。１３０分後、その混合物を真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチル及び１ＮのＨＣｌ中に溶解した。有機層を１ＮのＨＣｌ及び食塩水で抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮して、標記化合物を白色個体として得、さらなる精製なしに用いた。収量２３４ｍｇ（７２％）。
LCMS: Theoretical mass: 851.0 Found: 851.5 (M+1)
インスリン約４００ｍｇに対応するＡ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンの亜鉛沈殿を水（３２ｍｌ）に溶解し、ＥＤＴＡ（４０ｍｇ）を添加した。その混合物をＲＴで１時間放置した。ｐＨを１０％酢酸で４．８に下げた。１Ｍ酢酸ナトリウム（３．０ｍｌ、水道水中で加熱）に溶解されたオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒド（９２ｍｇ）を添加した。１０分間の攪拌後、水（０．７１５ｍｌ）中の１ＭのＮａＣＮＢＨ３を添加して２０ｍＭ溶液とした。1分以内に、その混合物は不透明になり、粘り気のある沈殿物が現れた。１時間以上の後、アルデヒド（３６ｍｇ）及びＴＨＦ（３ｍｌ）を添加した。４０分後、酢酸でｐＨを３．１まで下げ、いくらかのアセトニトリルを添加した。その混合物を凍結乾燥した。産物はＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２０％Ｂから６０％Ｂまで４５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7233.5 Da, calculated for C328H505N73O98S6: 7231.5 Da
〔実施例１１〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（３００ｍｇ）を１．０Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０（３．２ｍｌ）に溶解した。アルデヒドの溶液、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒド（７９ｍｇ）の１．０Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０（３．０ｍｌ、水道水中で加熱）中の溶液を添加した。その混合物は不透明になった。５分間の攪拌の後、１ＭのＮａＣＮＢＨ３（１３５μｌ）を添加して２０ｍＭの溶液とした。ｐＨは４．９であり、反応混合物は不透明を呈した。４０分後、酢酸でｐＨを３．１に下げ、少量のアセトニトリルを添加した。混合物を凍結乾燥した。産物をＣ１８カラム上の、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いたＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。勾配は２０％Ｂから６０％Ｂまで４５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7334.5 Da, calculated for C332H512N74O100S6: 7332.6 Da
〔実施例１２〕 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
約４００ｍｇのインスリンに対応するＡ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンの亜鉛沈殿を水（４８ｍｌ）に溶解し、ＥＤＴＡ（４０ｍｇ）を添加した。その混合物をＲＴで４５分放置した。ｐＨを１０％酢酸で５．０に下げた。１Ｍ酢酸ナトリウム（３．０ｍｌ、水道水中で加熱）に溶解されたヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒド（９０ｍｇ、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒドと同様に調製した。）を添加した。７分間の攪拌後、水（１．０８ｍｌ）中の１ＭのＮａＣＮＢＨ３を添加して２０ｍＭ溶液とした。1分以内に、その混合物は不透明になり、しばらくして粘り気のある沈殿物が現れた。４５分後、酢酸でｐＨを３．１まで下げ、いくらかのアセトニトリルを添加した。その混合物を凍結乾燥した。産物はＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２０％Ｂから６０％Ｂまで４５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7178.9 Da, Calculated for C324H497N73O98S6: 7175.4 Da
〔実施例１３〕 Ａ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
約１００ｍｇのインスリンに対応するＡ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンの亜鉛沈殿を水（１６ｍｌ）に溶解し、ＥＤＴＡ（１０ｍｇ）を添加した。その混合物をＲＴで１時間放置した。ｐＨを１０％酢酸で４．８に下げた。１Ｍ酢酸ナトリウム（０．７５ｍｌ、水道水中で加熱）に溶解されたテトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒド（３６ｍｇ、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒドと同様に調製した。）を添加した。１０分間の攪拌後、水（０．３５ｍｌ）中の１ＭのＮａＣＮＢＨ３を添加して２０ｍＭ溶液とした。1分以内に、その混合物は不透明になり、しばらくして粘り気のある沈殿物が現れた。１時間以上後、アルデヒド（３６ｍｇ）及びＴＨＦ（３ｍｌ）を添加した。４時間後、混合物を５℃で一晩保管した。産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２０％Ｂから６０％Ｂまで４５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
LCMS: 1780.6 Da [M + 4H]4+. Calculated for C320H489N73O98S6 [M + 4H]4+: 1780.8 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配： １０分で10〜90 % B
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7118.7 Da, calculated: 7119.3 Da
〔実施例１４〕 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（３００ｍｇ）を１．０Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０（３．２ｍｌ）に溶解した。ｐＨ５．０の１．０Ｍ酢酸ナトリウム（３．０ｍｌ、水道水中で加熱）に溶解されたヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンズアルデヒド（７９ｍｇ）を添加した。混合物は不透明になった。５分間の攪拌後、１ＭのＮａＣＮＢＨ３（１３５μｌ）を添加して２０ｍＭ溶液とした。ｐＨは４．９であり、反応混合物は不透明であるが、chaningであった。４０分後、酢酸でｐＨを３．１まで下げ、いくらかのアセトニトリルを添加した。その混合物を凍結乾燥した。産物はＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２０％Ｂから６０％Ｂまで４５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7279.4 Da, calculated for C328H504N74O100S6: 7276.5 Da
〔実施例１５〕 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
ＷＯ２０１０／０２９１５９に記載されているように調製したＢ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを２Ｍの酢酸／ＮＭＰ９：１（９ｍｌ）に溶解した。１ＮのＮａＯＨでｐＨを２．９から３．５に調節した。ＮＭＰ（０．５ｍｌ）中のオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒド（４４ｍｇ）を添加した。混合物は不透明になり、ｐＨは３．７７であった。１５分間攪拌した後、ＮＭＰ／１ＭＮａＡｃ（０．４５ｍｌ）中の１Ｍの２−ピコリンボラン錯体を添加した。ｐＨは３．７７であった。混合物をＲＴで攪拌した。粘着性の物質が混合物の上部に集まった。７分後、混合物を１Ｍの酢酸（４．７ｍｌ、ホウ化物を希釈するため）で希釈した。１時間後、ｐＨを酢酸で３．０に下げ、溶液を得、Ｃ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２０％Ｂから６０％Ｂまで４５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＢ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
LCMS: 1804.8 Da [M + 4H]4+. Calculated for C324H503N73O100S6 [M + 4H]4+: 1804.4Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：１０分で10〜90 % B
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7215.9 Da, calculated for C324H503N73O100S6: 7213.4
〔実施例１６〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（３００ｍｇ）を２ＭのＡｃＯＨ／ＮＭＰ９：１（９ｍｌ）に溶解した。１ＮのＮａＯＨでｐＨを２．９から３．５に調節して、粘性の懸濁液を得た。ＮＭＰ（０．５ｍｌ）中のオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−４−アミノメチル−ベンズアルデヒド（４４ｍｇ）を添加した。混合物は不透明になり、ｐＨは３．７７であった。１５分間攪拌した後、ＮＭＰ／１ＭＮａＡｃ（０．４５ｍｌ）中の１Ｍの２−ピコリンボラン錯体を添加した。ｐＨは３．７７であった。混合物をＲＴで攪拌した。粘着性の物質が混合物の上部に集まった。７分後、混合物を１ＭのＡｃＯＨ（４．７ｍｌ、ホウ化物を希釈するため）で希釈した。１時間後、ｐＨをＡｃＯＨで３．０に下げ、溶液を得、Ｃ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２０％Ｂから６０％Ｂまで４５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
この実施例は、この種類の反応が主産物としてＢ１Ｎ−アルキル化を引き起こすことを説明している。
LCMS: 1610.9 Da [M + 5H]5+. Calculated for C367H573N77O112S6 [M + 5H]5+: 1610.7 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：１０分で10〜90 % B
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 8050.7 Da, calculated for C367H573N77O112S6: 8048.5 Da
〔実施例１７〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（２００ｍｇ）を１００ｍＭの水性Ｎａ２ＣＯ３（４．５ｍｌ）中に溶解し、１ＮのＮａＯＨでｐＨを１０．１に調節した。tert−ブチルオクタデカンジオイル−Ｎ−（tert−ブトキシカルボニルメチル）−ベータ−アラニル−Ｏｓｕ（２８ｍｇ）（ＷＯ２００５／０１２３４７に記載されているように調製した）をＴＨＦ（２．２５ｍｌ）に溶解し、前記インスリン溶液に添加した。いくらかの沈澱が観察され、ＴＨＦ（０．７５ｍｌ）をさらに添加した。ｐＨは１０．７であった。３４分後、さらにtert−ブチルオクタデカンジオイル−Ｎ−（tert−ブトキシカルボニルメチル）−ベータ−アラニル−Ｏｓｕ（１４ｍｇ）を添加した。５７分後、水を添加し、１ＮのＨＣｌでｐＨを５．１に調節した。沈殿を遠心沈降して凍結乾燥した。固形物を氷冷した９５％トリフルオロ酢酸（５％の水を含む）に溶解し、氷上で４０分間維持した。混合物を真空中で濃縮し、ジクロロメタンから再度蒸発させた。残渣をカラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２０％Ｂから５５％Ｂまで７５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
LCMS: 1629.0 Da [M + 4H]4+. Calculated for C292H450N68O88S6 [M + 4H]4+: 1629.4 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：１０分で10〜90 % B
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 6511.0 Da, calculated for C292H450N68O88S6: 6513.6 Da
〔実施例１８〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（１００ｍｇ）をＤＭＳＯ（１．０ｍｌ）中に溶解しトリエチルアミン（０．０５ｍｌ）を添加した。アセトニトリル／ＴＨＦ１：１（２．２５ｍｌ）中に溶解したtert−ブチルオクタデカンジオイル−Ｎ−（２−（tert−ブトキシカルボニル）エチル）−Ｇｌｙ−Ｏｓｕ（４６ｍｇ）（ＷＯ２００５／０１２３４７に記載されているように調製した。）を添加した。室温で３０分間攪拌した後、アセトニトリル／ＴＨＦ１：１（２．２５ｍｌ）中に溶解したtert−ブチルオクタデカンジオイル−Ｎ−（２−（tert−ブトキシカルボニル）エチル）−Ｇｌｙ−Ｏｓｕ（４６ｍｇ）をさらに添加した。７５分後に水（５ｍｌ）を添加し、１ＮのＨＣｌでｐＨを５．３に調節した。沈殿を遠心沈降して凍結乾燥した。乾燥混合物を氷上で０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ１２で４５分間処理した。ｐＨを５．３に再調節して沈殿を遠心沈降し凍結乾燥した。固形物を氷冷した９５％トリフルオロ酢酸（５％の水を含む）に溶解し、氷上で４５分間維持した。混合物を真空中で濃縮し、ジクロロメタンから再度蒸発させた。残渣をカラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は２５％Ｂから７０％Ｂまで６０分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−Ｎ−2−カルボキシエチル−グリシル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
LCMS: 1628.7 Da [M + 4H]4+. Calculated for C292H450N68O88S6 [M + 4H]4+: 1629.4 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：１０分で10〜90 % B
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 6511.1 Da, calculated for C292H450N68O88S6: 6513.6 Da
〔実施例１９〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｎε−Ｎ−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（２００ｍｇ）を１００ｍＭの水性Ｎａ２ＣＯ３（４．５ｍｌ）中に溶解し１ＮのＮａＯＨでｐＨを１０．１に調節した。アセトニトリル／ＴＨＦ１：２（２．２５ｍｌ）中にtert−ブチルオクタデカンジオイル−Ｎ−（２−（tert−ブトキシカルボニルメチル）−βＡｌａ−Ｏｓｕ（２７ｍｇ）（ＷＯ２００５／０１２３４７に記載されているように調製した。）を溶解し、そのインスリン溶液に添加した。いくらかの沈澱が観察され、ＴＨＦ（１．０ｍｌ）をさらに添加して透明の溶液を得た。ｐＨは１０．７であった。５７分後、ＴＨＦ（１．１ｍｌ）中に溶解したtert−ブチルオクタデカンジオイル−Ｎ−（tert−ブトキシカルボニルメチル）−βＡｌａ−Ｏｓｕ（１４ｍｇ）を添加した。９０分後に水（４．５ｍｌ）を添加し、１ＮのＨＣｌでｐＨを５．５に調節した。沈殿を遠心沈降して凍結乾燥した。固形物を氷冷した９５％トリフルオロ酢酸（５％の水を含む）に溶解し、氷上で２５分間維持した。混合物を真空中で濃縮した。残渣をカラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は１０％Ｂから５５％Ｂまで７５分であった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＡ１Ｎα−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｎε−Ｎ−オクタデカンジオイル−Ｎ−カルボキシメチル−ベータ−アラニル Ａ２２Ｋ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
LCMS: 1679.0 Da [M + 4H]4+. Calculated for C305H466N70O88S6 [M + 4H]4+: 1679.5 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：１０分で10〜90 % B
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 6709.4 Da, calculated for C305H466N70O88S6: 6713.9 Da
〔実施例２０〕 Ａ２２Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（０．５ｇ、８６μmol）を２００ｍＭのＮａ２ＣＯ３（５ｍｌ）中に溶解し１ＮのＮａＯＨでｐＨを１１に調節した。次に、ＮＭＰ（０．５ｍｌ）に溶解したヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１５０ｍｇ、１８６μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をそのインスリン溶液に添加し、１ＮのＮａＯＨを添加してｐＨを１１に維持した。反応混合物を５分間攪拌し、反応の進行をＬＣＭＳでモニターした。目標産物の形成がＬＣＭＳでモニターされる前に、ＮＭＰ（０．５ｍｌ）に溶解したオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１５０ｍｇ、１８６μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をさらに２回添加した（上記プロトコルを用いて）。産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて精製した。勾配は２５ｍｌ／分の流速で、６０分で２５〜５０％アセトニトリルであった。産物を２回精製した。カラム：Phenomenex, Gemini, 5μ, C18, 110Å, 250×30cm。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1791.7 Da [M + 4H]4+. Calculated for C318H498N74O101S6 [M + 4H]4+: 1790.5 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B
〔実施例２１〕 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（５００ｍｇ、８８μmol）を２００ｍＭのＮａ２ＣＯ３（５ｍｌ）中に溶解し１ＮのＮａＯＨでｐＨを１１に調節した。次に、ＮＭＰ（０．５ｍｌ）に溶解したヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１５０ｍｇ、１８６μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をそのインスリン溶液に添加し、１ＮのＮａＯＨを添加してｐＨを１１に維持した。反応混合物を５分間攪拌し、反応の進行をＬＣＭＳでモニターした。目標産物が主要産物であることがＬＣＭＳでモニターされる前に、ＮＭＰ（０．５ｍｌ）に溶解したヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１５０ｍｇ、１８６μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をさらに３回添加した（上記プロトコルを用いて）。産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて精製した。勾配は２５ｍｌ／分の流速で、６０分で３０〜４５％アセトニトリルであった。カラム：Phenomenex, Gemini, 5μ, C18, 110Å, 250×30cm。産物を２回精製した。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1760.3 Da [M + 4H]4+. Calculated for C312H486N72O100S6 [M + 4H]4+: 1758.5 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B
〔実施例２２〕 Ａ１Ｎα−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（１ｇ、１７７μmol）を２００ｍＭのＮａ２ＣＯ３（１２．５ｍｌ）中に溶解し１ＮのＮａＯＨでｐＨを１１に調節した。次に、ＮＭＰ（１．０ｍｌ）に溶解したヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（４００ｍｇ、４９９μmol）及びアセトニトリル（０．２ｍｌ）をそのインスリン溶液に１０分かけて添加し、１ＮのＮａＯＨを添加してｐＨを反応の間１１．０に維持した。反応混合物を３０分間室温で攪拌し、反応の進行をＬＣＭＳでモニターし、産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて精製した。勾配は２５ｍｌ／分の流速で、６０分で２５〜４０％アセトニトリルであった。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1402.9 Da [M + 5H]5+. Calculated for C309H484N74O99S6 [M + 5H]5+: 1403.0 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B
〔実施例２３〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ Ｂ２９Ｒ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（０．３５ｇ、６１μmol）をＨ２Ｏ（３ｍｌ）中に溶解しｐＨを１１に調節した。次に、ＮＭＰ（０．４ｍｌ）に溶解したオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１００ｍｇ、１２０μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をそのインスリン溶液に添加し、１ＮのＮａＯＨを添加してｐＨを１１．０に維持した。反応混合物を５分間攪拌し、反応の進行をＬＣＭＳでモニターした。ＮＭＰ（０．４ｍｌ）に溶解したオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１５０ｍｇ、１２０μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をさらに添加し、形成された主要産物の進行を産物をＬＣＭＳでモニターした。産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて２回精製した。勾配は２５ｍｌ／分の流速で、６０分で３０〜４５％アセトニトリル及び６０分で１０〜４０％アセトニトリルであった。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1189.9.88 Da [M + 6H]6+. Calculated for C316H494N74O100S6 [M + 6H]6+: 1188 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B
〔実施例２４〕 Ａ２２Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（４５０ｍｇ、７７μmol）を２００ｍＭのＮａ２ＣＯ３（５ｍｌ）中に溶解し１ＮのＮａＯＨでｐＨを１１に調節した。次に、ＮＭＰ（０．５ｍｌ）に溶解したヘエイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１５０ｍｇ、１７４μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をそのインスリン溶液に添加し、１ＮのＮａＯＨを添加してｐＨを１１に維持した。反応混合物を５分間攪拌した。次に、反応の進行をＬＣＭＳでモニターした。目標産物が形成されたことがＬＣＭＳでモニターされる前に、ＮＭＰ（０．５ｍｌ）に溶解したエイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（１５０ｍｇ、１７４μmol）及びアセトニトリル（０．１ｍｌ）をさらに２回添加した（上記プロトコルを用いて）。産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、１）バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて、勾配は２５ｍｌ／分の流速で、４０分で２５〜５０％アセトニトリルで、２）バッファＡ：１０ｍＭトリス、１５ｍＭ硫酸アンモニウム、水／アセトニトリル＝８０／２０中でｐＨ７．３、バッファＢ：水／アセトニトリル＝８０／２０を用いて、勾配は２５ｍｌ／分の流速で６０分で１０〜６０％バッファＢで、２回精製した。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1820.1 Da [M + 4H]4+. Calculated for C326H514N74O101S6 [M + 4H]4+: 1820.5 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B
〔実施例２５〕 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジルアルデヒド（１００ｍｇ、１１７μmol）を２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（２ｍｌ）中に加熱（水道水）して溶解した後、２０％ＨＰＣＤ（５００μｌ）を添加して、不透明であるが均質な溶液を得た。Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（２５０ｍｇ、３９．８μmol）に２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（５ｍｌ、ｐＨ５．６）を添加し、１ＮのＨＣｌでｐＨを５．０に調節した。上記アルデヒド溶液（２．５ｍｌ）をインスリンに添加すると、その溶液は不透明になった。５分後、ＭｅＯＨ（１６５μｌ）中の１ＭのＮａＣＮＢＨ３を添加し、反応の進行をＬＣＭＳ及びＵＰＬＣの両方でモニターした。
産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて精製した。勾配は２５ｍｌ／分の流速で、４０分で３０〜５５％アセトニトリルであった。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1438.3 Da [M + 5H]5+. Calculated for C321H501N75O99S6 [M + 5H]5+: 1438.4 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B。ペプチドのアミノ酸配列は、B1にC18二酸-γ-LGlu-OEG-OEG-アミノメチル-ベンジルが接続（アルキル化）されていることが確認された。
〔実施例２６〕 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンズアルデヒド（１００ｍｇ、１１７mmol）を２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（２ｍｌ）中に加熱（水道水）して溶解した。その後、２０％ＨＰＣＤ（５００μｌ）を添加して、不透明であるが均質な溶液を得た。
Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（２５０ｍｇ、３９μmol）に２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（５ｍｌ、ｐＨ５．６）を添加し、１ＮのＨＣｌでｐＨを５．０に調節した。上記アルデヒド溶液（２．５ｍｌ）をインスリンに添加すると、その溶液は不透明になった。５分後、ＭｅＯＨ（１６５μｌ）中の１ＭのＮａＣＮＢＨ３を添加し、反応の進行をＬＣＭＳ及びＵＰＬＣの両方でモニターした。産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて精製した。勾配は２５ｍｌ／分の流速で、４０分で３０〜５５％アセトニトリルであった。カラム：Phenomenex, Gemini, 5μ, C18, 110Å, 250×30cm。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1802.4 Da [M + 4H]4+. Calculated for C324H503N73O100S6 [M + 4H]4+: 1804 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B。 ペプチドのアミノ酸配列は、B1に C18二酸-γ-LGlu-OEG-OEG-4-アミノメチル-ベンジルが接続 (アルキル化)されていることが確認された。
〔実施例２７〕 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンズアルデヒド（１４０ｍｇ、１６３mmol）を２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（２．８ｍｌ）中に加熱（水道水）して溶解した。２０％ＨＰＣＤ（７００μｌ）を添加して、不透明であるが均質な溶液を得た。
Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（３５０ｍｇ、５５μmol）に２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（７ｍｌ、ｐＨ５．６）を添加し、１ＮのＨＣｌでｐＨを５．５に調節した。アルデヒド溶液（３．５ｍｌ）をインスリンに添加すると、その溶液は不透明になった。数分後、ＭｅＯＨ（２３０μｌ）中の１ＭのＮａＣＮＢＨ３を添加した。３０分後、反応の進行をＬＣＭＳでモニターし、その後所望の産物が形成された。分取ＨＰＬＣ精製の前に、１ＮのＨＣｌを添加して反応混合物を酸性化した。産物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％ＴＦＡ、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを用いて精製した。勾配は２５ｍｌ／分の流速で、４０分で２５〜６５％アセトニトリルであった。カラム：Phenomenex, Gemini, 5μ, C18, 110Å, 250×30cm。そして、純粋な画分をプールして凍結乾燥した。
LCMS: 1423.4 Da [M + 5H]5+. Calculated for C320H496N72O98S6 [M + 5H]5+: 1423.5 Da.
LCMS バッファ A: 水中の0.1 % トリフルオロ酢酸; バッファ B: アセトニトリル中の0.1 % トリフルオロ酢酸, 勾配：４分で5〜90 % B。 ペプチドのアミノ酸配列は、B1にC18二酸-γ-LGlu-OEG-OEG-4-アミノメチル-ベンジルが接続（アルキル化）されていることが確認された。
〔実施例２８〕 Ａ２２Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は、４−tert−ブチル−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−α−tert−ブチル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル（ＷＯ０６０８２２０４の記載に類似して調製した）を用いて、実施例４の化合物に類似して調製した。
Product LCMS: 1806.5 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C320H486N74O103S6 [M + 4H]4+: 1803.6 Da.
〔実施例２９〕 本発明によるインスリン誘導体についてのヒトインスリン受容体親和性、アルブミン親和性、平均滞留時間
表１のデータは本発明によるインスリン誘導体（二及び三置換されたインスリン）及び一つの単置換されたインスリンのものである。ヒトインスリン受容体に対する、本発明のアシル化されたインスリンアナログの親和性は、ＳＰＡアッセイ（シンチレーション近接アッセイ）マイクロタイタープレート抗体捕捉アッセイにより測定した。麻酔したラットにインスリンアナログを種々の用量で静脈投与（i.v.）し、用いられた化合物の血漿濃度をイムノアッセイ又は質量分析を用いて特定の間隔で投与後４時間以上測定した。薬物動態パラメーターは続いてＷｉｎＮｏｎＬｉｎＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ(Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA)を用いて計算した。
Ａ．ヒトインスリン受容体親和性、インスリン誘導体例のヒトインスリン受容体アイソフォーム（hIRA）に対する、ヒトインスリンに対する値と比較した解離定数（Ｋｄ）
Ｂ．平均滞留時間（ＭＲＴ）として測定された、ラットに静脈投与されたインスリン誘導体例のインビボ遅延
Ｃ．この表ではＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンは「Ｃ」で表され、値の比較のための単置換された参照のみを表す。
Figure 0006058646
本発明のいくらかの特徴はここに説明し記載したが、多くの改変、置換、変更及び均等物は、通常の技術者がするであろう。したがって、付加的な側面は、それらの改変および変更を、本発明の真の精神に該当するものとして含むことが意図されていると理解すべきである。
〔実施例３０〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル及びＡ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例７の化合物と類似して調製した。
Product LCMS: 1767.9 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C313H492N74O99S6 [M + 4H]4+: 1768.1 Da.
〔実施例３１〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−ガンマ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル及びＡ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例７の化合物と類似して調製した。
Product LCMS: 1744.8 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C312H487N71O97S6 [M + 4H]4+: 1745.3 Da.
〔実施例３２〕 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン（５０ｍｇ）のＤＭＳＯ（１．５ｍｌ）中の懸濁液にＤＭＳＯ（０．５ｍｌ）中のオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンズアルデヒド（１１．３ｍｇ）を添加した。２０分後、その混合物は透明であり、ＤＭＳＯ（０．０４１ｍｌ）中の１Ｍの２−ピコリンボラン錯体を添加した。２．５時間後及び２１時間後に追加のＤＭＳＯ（０．０４１ｍｌ）中の１Ｍの２−ピコリンボラン錯体を添加した。２４．５時間後に、混合物をＣ１８カラム上のＲＰ−ＨＰＬＣで、バッファＡ：水中の０．１％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸を用いて精製した。勾配は６０分で２０％Ｂから６０％Ｂであった。産物群を真空中で部分的に蒸発させ、凍結乾燥してＢ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを得た。
LCMS: 1833.81 Da [M + 4H]4+. Calculated for C332H512N74O100S6 [M + 4H]4+: 1834.15 Da.
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7332.76 Da, calculated: 7332.60 Da
〔実施例３３〕 Ａ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
実施例３２に記載された反応混合物からＡ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを単離した。
LCMS: 1834.14 Da [M + 4H]4+. Calculated for C332H512N74O100S6 [M + 4H]4+: 1834.15 Da.
MALDI: (matrix, HCCA); m/z: 7332.94 Da, calculated: 7332.60 Da
〔実施例３４〕 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンズアルデヒド及びオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル及びＡ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例２７の化合物と類似して調製した。
Product LCMS: 1781.8 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C323H498N70O98S6 [M + 4H]4+: 1781.6 Da.
〔実施例３５〕 Ｂ１Ｎα−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンジル Ｂ２９Ｎε−オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン
Figure 0006058646
この化合物は、オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−4−アミノメチル−ベンズアルデヒド及びオクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−ＯＥＧ−スクシンイミジル及びＡ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリンを用いて実施例２７の化合物と類似して調製した。
Product LCMS: 1926.8 Da [M + 4H]4+.
Calculated for C347H542N74O110S6 [M + 4H]4+: 1926.8 Da.

Claims (9)

  1. 一般式：ＸＺ ｎ −Ｉｎｓ−Ｚ １ ｍ Ｘ １
    〔式中、
    ＩｎｓはＢ２９リシン及びＡ２２リシン残基を含むインスリンを表し、
    Ｘ及びＸ １ は脂肪二酸置換基であり、Ｘは当該Ｂ２９リシン残基に位置し、Ｘ １ は当該Ａ２２リシン残基に位置し、
    Ｚ及びＺ １ はそれぞれＩｎｓと、Ｘ及びＸ １ との間のリンカーであり、及び
    ｎ及びｍは０又は１である〕
    のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  2. 医薬品としての使用のための、請求項１に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  3. 前記脂肪二酸置換基は１４〜２０の炭素原子からなる、請求項１又は２に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  4. 前記脂肪二酸置換基が、インスリンのアミノ酸残基にリンカーを介して接続されている、請求項１から３のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  5. 前記リンカーがアルファ−Ｌ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｄ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｌ−Ｇｌｕ、ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ、アルファ−Ｌ−Ａｓｐ、アルファ−Ｄ−Ａｓｐ、ベータ−Ｌ−Ａｓｐ、ベータ−Ｄ−Ａｓｐ、ＣＰＨ、ＩＤＡ及びＯＥＧからなる群より選択される一つ以上のリンカー要素を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  6. ストレス誘導性高血糖を含む高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、火傷、操作傷、処置において同化作用が必要とされる他の疾病又は創傷、心筋梗塞、脳卒中、冠状動脈性心臓病及び他の心血管疾病の処置又は予防、並びに糖尿病性及び非糖尿病性の重篤疾患患者及び多発性神経障害の処置、における薬物としての使用のための、請求項１から５のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  7. ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ２８Ｄ ヒトインスリン、Ｂ３Ｋ Ｂ２８Ｅ ヒトインスリン、Ｂ２８Ｄ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ｂ３Ｋ Ｂ２８Ｅ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ１４Ｅ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、及び、Ａ１４Ｅ Ｂ１６Ｈ ｄｅｓＢ２７ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、からなる群より選択される、請求項１から６のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  8. Ａ２２Ｎ α −ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎ ε −ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎ ε −オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎ ε −オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎ ε −テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎ ε −テトラデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎ ε −オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ｂ２９Ｎ ε −オクタデカンジオイル−γ−Ｄ−グルタミル Ａ２２Ｋ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、 Ａ２２Ｎ ε −ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ｂ２９Ｎ ε −ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎ ε −オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎ ε −オクタデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎ ε −ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎ ε −ヘキサデカンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎ ε −エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎ ε −エイコサンジオイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、Ａ２２Ｎ ε −4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ｂ２９Ｎ ε −4−カルボキシフェノキシ−デカノイル−γ−Ｌ−グルタミル−ＯＥＧ−ＯＥＧ Ａ１４Ｅ Ａ２２Ｋ Ｂ２５Ｈ ｄｅｓＢ３０ ヒトインスリン、からなる群より選択される、請求項１から７のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
  9. 当該インスリン誘導体が水性溶液に可溶性である、請求項１から８のいずれか１項に記載のインスリン誘導体又はその薬学的に許容されうる塩。
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5749155B2 (ja) 2008-03-18 2015-07-15 ノボ・ノルデイスク・エー／エス プロテアーゼ安定化アシル化インスリンアナログ
AR099569A1 (es) * 2014-02-28 2016-08-03 Novo Nordisk As Derivados de insulina y los usos médicos de estos
AR100639A1 (es) * 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
JOP20200119A1 (ar) 2015-01-09 2017-06-16 Lilly Co Eli مركبات مساعد مشترك من gip وglp-1
CN105001140B (zh) * 2015-06-29 2018-01-05 珠海联邦制药股份有限公司 一种制备脂肪二酸衍生物的方法及其应用
EP3341403B1 (en) 2015-08-25 2022-01-05 Novo Nordisk A/S Novel insulin derivatives and the medical uses hereof
BR112019005637A2 (pt) 2016-09-23 2019-07-30 Hanmi Pharm Ind Co Ltd análogos da insulina com afinidade reduzida para o receptor de insulina e seu uso
ES2886837T3 (es) 2016-12-16 2021-12-21 Novo Nordisk As Composiciones farmacéuticas que contienen insulina
CA3054899A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
KR102646845B1 (ko) * 2018-08-08 2024-03-14 주식회사 대웅제약 클로스트리파인을 이용한 지속형 인슐린 아날로그 복합체의 활성형 제조방법
KR102666154B1 (ko) * 2018-08-08 2024-05-20 주식회사 대웅제약 지속형 인슐린 아날로그 및 그 복합체
SG11202106168VA (en) 2018-12-11 2021-07-29 Sanofi Sa Insulin analogs having reduced insulin receptor binding affinity
RS65822B1 (sr) 2019-12-11 2024-09-30 Novo Nordisk As Novi insulinski analozi i njihova upotreba
MX2022008174A (es) * 2019-12-30 2022-08-02 Gan & Lee Pharmaceuticals Co Ltd Derivado de insulina.
WO2022090448A1 (en) 2020-10-30 2022-05-05 Novo Nordisk A/S Novel acylating reagents
MX2023008330A (es) 2021-01-20 2024-01-18 Viking Therapeutics Inc Agonistas del receptor dual gip/glp-1 de molécula pequeña, composiciones farmacéuticas y preparación de las mismas para usarse en el tratamiento de trastornos metabólicos y hepáticos.
WO2023144277A1 (en) * 2022-01-26 2023-08-03 Sanofi Insulin conjugates
CN118574842A (zh) * 2022-01-28 2024-08-30 甘李药业股份有限公司 酰化胰岛素

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3528960A (en) 1968-10-07 1970-09-15 Lilly Co Eli N-carboxyaroyl insulins
US3869437A (en) 1970-05-08 1975-03-04 Nat Res Dev Mono-, di, and N{HD A1{B , N{HU B1{B , N{HU B29{B -tri-acylated insulin
GB1381274A (en) * 1971-01-28 1975-01-22 Nat Res Dev Insulin derivatives
US3864325A (en) 1971-11-18 1975-02-04 Nat Res Dev (N{HU Al{b , N{HU Bl{b , N{HU B29{B , carbamoyl)-(O{HU A14{B , O{HU B16{B , O{HU B26{B aryl) insulin derivatives
IE50892B1 (en) 1980-02-11 1986-08-06 Novo Industri As Process for preparing insulin esters
DK58285D0 (da) 1984-05-30 1985-02-08 Novo Industri As Peptider samt fremstilling og anvendelse deraf
JPH01254699A (ja) 1988-04-05 1989-10-11 Kodama Kk インスリン誘導体及びその用途
DK105489D0 (da) 1989-03-03 1989-03-03 Novo Nordisk As Polypeptid
ZA954983B (en) 1994-06-17 1996-02-14 Novo Nordisk As N-terminally extended proteins expressed in yeast
US5905140A (en) 1996-07-11 1999-05-18 Novo Nordisk A/S, Novo Alle Selective acylation method
HUP0004169A3 (en) 1997-10-24 2001-06-28 Lilly Co Eli Insoluble insulin compositions and process for production thereof
ZA989744B (en) 1997-10-31 2000-04-26 Lilly Co Eli Method for administering acylated insulin.
CO4970787A1 (es) * 1997-12-23 2000-11-07 Lilly Co Eli Composiciones insolubles de insulina y derivados de insulina que controlan la glucosa sanguinea
AU5454200A (en) 1999-06-29 2001-01-31 Eli Lilly And Company Protamine-free insoluble acylated insulin compositions
DE60039074D1 (de) 1999-12-29 2008-07-10 Novo Nordisk As Verfahren zur herstellung von insulinvorläufern und von analogen von insulinvorläufern
WO2001093837A2 (en) 2000-06-08 2001-12-13 Eli Lilly And Company Protein powder for pulmonary delivery
EP2264065B1 (en) 2003-08-05 2017-03-08 Novo Nordisk A/S Novel insulin derivatives
WO2005016312A1 (en) 2003-08-13 2005-02-24 Nobex Corporation Micro-particle fatty acid salt solid dosage formulations for therapeutic agents
CN105801686B (zh) 2004-07-19 2020-04-07 比奥孔有限公司 胰岛素-低聚物共轭物、制剂及其用途
US8067362B2 (en) 2005-02-02 2011-11-29 Novo Nordisk As Insulin derivatives
DE602007009496D1 (de) 2006-02-27 2010-11-11 Novo Nordisk As Insulinderivate
JP2009544716A (ja) 2006-07-27 2009-12-17 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 肺送達のためのインスリン含有エアロゾル化可能製剤
ES2542146T3 (es) 2006-07-31 2015-07-31 Novo Nordisk A/S Insulinas extendidas PEGiladas.
WO2008034881A1 (en) 2006-09-22 2008-03-27 Novo Nordisk A/S Protease resistant insulin analogues
WO2008145721A2 (en) 2007-06-01 2008-12-04 Novo Nordisk A/S N-terminal modification of polypeptides for protection against degradation by aminopeptidases
WO2009015456A1 (en) 2007-07-30 2009-02-05 Generex Pharmaceuticals Inc. Pharmaceutical formulation in mixed micellar form and dispenser for oral delivery of agents as a spray
EP2178912B1 (en) 2007-08-15 2015-07-08 Novo Nordisk A/S Insulin analogues with an acyl and aklylene glycol moiety
JP5547083B2 (ja) 2007-11-20 2014-07-09 アンブルックス，インコーポレイテッド 修飾されたインスリンポリペプチドおよびそれらの使用
US20100317057A1 (en) 2007-12-28 2010-12-16 Novo Nordisk A/S Semi-recombinant preparation of glp-1 analogues
JP5749155B2 (ja) * 2008-03-18 2015-07-15 ノボ・ノルデイスク・エー／エス プロテアーゼ安定化アシル化インスリンアナログ
JP5591243B2 (ja) * 2008-09-12 2014-09-17 ノボ・ノルデイスク・エー／エス ペプチド又はタンパク質のアシル化の方法
US8697632B2 (en) * 2008-12-19 2014-04-15 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based insulin prodrugs
US9655974B2 (en) * 2010-07-20 2017-05-23 Novo Nordisk A/S N-terminal modified FGF21 compounds

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