BR112013031268B1 - Polipeptídeos - Google Patents

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Thomas Kruse
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Abstract

resumo patente de invenção: "polipeptídeos". a presente invenção refere-se a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de pramlintida, composições farmacêuticas compreendendo esses polipeptídeos e esses polipeptídeos para uso como medicamentos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para POLIPEPTÍDEOS ANÁLOGOS DE PRAMLINTIDA, USO DOS MESMOS, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO OS REFERIDOS POLIPEPTÍDEOS E MÉTODO DE PREPARAÇÃO DA REFERIDA COMPOSIÇÃO.
CAMPO DA INVENÇÃO [001] A invenção mL a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 (pramlintida) composições farmacêuticas contendo esses polipeptídeos e esses polipeptídeos para uso como medicamentos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [002] Um grande e crescente número de pessoas sofre de diabetes mellitus e obesidade. O diabetes mellitus é um distúrbio metabólico em que a habilidade em utilizar glicose é parcialmente ou completamente perdida.
[003] Vários regimes de tratamento se direcionam à glicose excessiva no sangue enquanto outros estão focados principalmente em redução de peso. O agente antidiabético mais eficiente para diminuir a glicose no sangue é a insulina e análogo(s) da mesma. Sabe-se há muito tempo que quando insulina tradicional é usada para tratar diabetes, ela está associada com um aumento em peso corporal. A insulina tem que ser injetada subcutaneamente até várias vezes por dia.
[004] O diabetes tipo 2 é geralmente tratado nas fases iniciais com dieta e exercício. Conforme a condição progride, vários agentes antidiabéticos orais são adicionados. Agentes injetados tais como análogos de GLP-1 podem ser também usados neste estágio. Em geral, esses agentes são mais eficientes em pacientes com células beta funcionais capazes de liberar insulina e amilina.
[005] A amilina humana (SEQ ID NO: 1) é um polipeptídeo longo de 37 aminoácidos que tem propriedades físico-químicas que tornam
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2/214 seu uso como um fármaco problemático. Em particular, ela tem uma tendência à fibrilogênese, isto é, a formação de fibrilas, in vitro e/ou ex vivo e se torna ineficaz devido à precipitação. Ainda, a amilina é difícil de formular uma vez que ela é quimicamente instável e é precipitada em pH fisiológico. Desta maneira, ela é formulada em solução ácida. [006] A amilina humana se liga a dois complexos de receptor distintos. Esses dois complexos contêm o receptor de calcitonina mais um receptor de proteínas de modificação de atividade, RAMP1 ou RAMP3. A partir da relação íntima entre o receptor de calcitonina e o receptor de amilina, um pouco de reatividade cruzada com o receptor de calcitonina pode ser esperada de agonista de receptor de amilina. Como um exemplo, pramlintida tem um pouco de atividade com o receptor de calcitonina, mas é 14 vezes mais potente sobre o receptor de amilina.
[007] O receptor de calcitonina é encontrado em muitos tecidos em todo o corpo e é acreditado estar envolvido em regulagem de metabolismo ósseo. A calcitonina do salmão é atualmente vendida sob a marca registrada Miacalcic®. O produto é usado contra hipercalcemia, osteoporose (incluindo osteoporose pós-menopausa e osteoporose relacionada a glucocorticoide), osteíte deformante (doença de Paget) e é administra uma vez por dia ou através de injeção ou nasalmente. A calcitonina é ligada a receptores específicos na membrana do esqueleto, aos rins e o sistema nervoso central (CNS) (Central Nervous System). A meia-vida no plasma da calcitonina de salmão é cerca de 45 minutos.
[008] Polipeptídeos com atividade no receptor de calcitonina poderiam ser úteis no tratamento de hipercalcemia, osteoporose, doença de Paget, obesidade e doenças relacionadas à obesidade, bem como na prevenção de doenças relacionadas à obesidade. Um inconveniente do tratamento com preparações de calcitonina atualmente usadas é
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3/214 que, devido à meia-vida no plasma curta para a calcitonina do salmão, o fármaco tem que ser administrado várias vezes por dia e tem que ser administrado imediatamente antes de uma reação.
[009] Polipeptídeos com atividade dupla em ambos o receptor de calcitonina e o receptor de amilina podem ser vantajosos.
[0010] Pramlintida (SEQ ID NO: 2) é um produto de fármaco comercializado pela Amylin Pharmaceuticals como Symlin® para o tratamento de diabetes como um aditivo à insulina. A pramlintida é um agonista de receptor de amilina. Ela é aproximadamente 14 vezes menos ativa sobre o receptor de calcitonina.
[0011] A estrutura química da pramlintida é apresentada abaixo e também na Figura 1.
SS.
N T A T-N'
H •ATQRLANFLVHSSNNFGP I LP P TN
OH [0012] A pramlintida é quimicamente instável em pH neutro e é então provida em uma solução ácida. Comparado com a amilina humana, os aminoácidos nas posições 25, 28 e 29 na pramlintida são substituídos com prolina. Esta modificação reduz a tendência da proteína quanto à fibrilogênese. A pramlintida tem uma meia-vida no plasma muito curta e então tem que ser injetada duas a três vezes por dia.
[0013] O WO2010046357 e o WO 2009034119 revelam polipeptídeos compreendendo análogos de amilina tendo um resíduo de ligação à albumina (neles chamados derivados de amilina). Embora esses polipeptídeos com porções de ligação à albumina mostrem propriedades farmacocinéticas (PK) (Pharmacokinetic) ou farmacodinâmicas (PD) (Pharmacodynamic) comparadas à pramlintida, eles podem ainda mostrar estabilidade física pobre sob certas condições.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0014] Foi surpreendentemente constatado que polipeptídeos compreendendo um aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2
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4/214 (pramlintida) compreendendo um resíduo de aminoácido na posição 37 que é prolina podem demonstrar solubilidade e/ou estabilidade física aumentada.
[0015] Pelo menos em algumas modalidades os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade aumentada.
[0016] Pelo menos em algumas modalidades os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma estabilidade física aumentada.
[0017] Pelo menos em algumas modalidades os polipeptídeos da presente invenção apresentam solubilidade e estabilidade física aumentadas.
[0018] Pelo menos em algumas modalidades os polipeptídeos da presente invenção exibem um perfil farmacocinético vantajoso e/ou perfil farmacológico vantajoso. Um exemplo de um perfil farmacocinético vantajoso é um perfil de ação longa.
[0019] Em um aspecto amplo, a presente invenção se refere a um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37, em que a numeração da sequência de aminoácido desse análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido SEQ ID NO: 2. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potência de receptor de amilina humana, tal como aquele revelado aqui, de cerca de 1800 pM ou menos. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potência de receptor de calcitonina humana, tais como aqueles revelados aqui, de cerca de 1800 pM ou menos. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 4 de cerca de 100 μΜ ou mais em um ensaio de solubilidade, tais como aqueles revelados aqui. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 7 de cerca de 100 μΜ ou mais em um ensaio de solubilidade, tais como aqueles revelados aqui. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25
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5/214 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese (também chamado um ensaio de fibrilação), tais como aqueles revelados aqui. Opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. A presente invenção se refere também a formulações farmacêuticas compreendendo os mesmos. A presente invenção se refere também a usos farmacêuticos do mesmo. A presente invenção se refere também à aplicação (tal como administração) do mesmo a pacientes com necessidade de tratamento do mesmo.
[0020] Em outro aspecto amplo, a presente invenção se refere a um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 em que o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37 e um resíduo de ácido glutárico na posição 14, em que a numeração de sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potência de receptor de amilina humana (tais como aqueles revelados aqui) de cerca de 1800 pM ou menos. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potência de receptor de calcitonina humana, tais como aqueles revelados aqui, de cerca de 1800 pM ou menos. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 14 de cerca de 100 μΜ ou mais em um ensaio de solubilidade, tais como aqueles revelados aqui. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 7 de cerca de 100 μΜ ou mais em um ensaio de solubilidade, tais como aqueles revelados aqui. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em ensaio de fibrilogênese (também chamado um ensaio de fibrilação), tais como aqueles revelados aqui. Opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. A presente invenção se refere também a formulações
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6/214 farmacêuticas compreendendo o mesmo. A presente invenção se refere também a usos farmacêuticos do mesmo. A presente invenção se refere também a usos farmacêuticos do mesmo. A presente invenção se refere também à aplicação (tal como administração) do mesmo a pacientes com necessidade do mesmo.
[0021] Em outro aspecto amplo, a presente invenção se refere a um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 em que o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37 e um resíduo histidina ou arginina na posição 17 e um resíduo de ácido glutâmico na posição 14, em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potência de receptor de amilina humana (tal como aquele revelado aqui) de cerca de 1800 pM ou menos. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potência de receptor de calcitonina humana, tal como aquele revelado aqui, de cerca de 1800 pM ou menos. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 4 de cerca de 100 μΜ ou mais em um ensaio de solubilidade, tal como aquele revelado aqui. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 7 de cerca de 100 μΜ ou mais em um ensaio de solubilidade, tal como aquele revelado aqui. Opcionalmente, o polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em ensaio de fibrilogênese (também chamado um ensaio de fibrilação), tal como aquele revelado aqui. Opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. A presente invenção se refere também a formulações farmacêuticas compreendendo o mesmo. A presente invenção se refere também a usos farmacêuticos do mesmo. A presente invenção se refere também à aplicação (tal como administração) do mesmo a pacientes com necessidade de tra
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7/214 tamento do mesmo.
[0022] Em outro aspecto amplo, a presente invenção se refere a um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 de Fórmula (I):
Xaa1-Cys- Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa14-PheLeu- Xaa17-Xaa18-Ser-Ser- Xaa21- Xaa22- Phe- Gly- Pro- Xaa26-LeuPro-Pro-Thr- Xaa31-Val-Gly-Ser- Xaa35-Thr-Pro;
Fórmula (I) (SEQ ID No:3) em que:
Xaa1 é depletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Asn; Xaa14 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln, Ser e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro, Arg e Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp, Gln e Glu;
e em que o terminal C pode ser opcionalmente derivatizado; opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potência de receptor de amilina humana, tal como aquele revelado aqui, de cerca de 1800 pM ou menos;
opcionalmente, o polipeptídeo tem uma EC50 em um ensaio de potencia de receptor de calcitonina humana, tal como aquele revelado aqui, de cerca de 1800 pM ou menos, opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 4 de cerca de 100 μΜ ou mais em um ensaio de solubilidade, tal como aquele re
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8/214 velado aqui;
opcionalmente, o polipeptídeo tem uma solubilidade em pH 7 de cerca de 100 μM ou mais em um ensaio de solubilidade, tal como aquele revelado aqui;
opcionalmente, o polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em ensaio de fibrilogênese (também chamado um ensaio de fibrilação), tal como aquele revelado aqui;
opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[0023] A presente invenção se refere também a formulações farmacêuticas compreendendo o mesmo. A presente invenção se refere também aos usos farmacêuticos do mesmo. A presente invenção se refere também à aplicação (tal como administração) do mesmo a pacientes com necessidade de tratamento do mesmo.
[0024] Em outro aspecto, a invenção compreende ainda uma composição farmacêutica compreendendo o polipeptídeo acima.
[0025] Em outro aspecto, a invenção compreende ainda um processo para preparação de uma composição farmacêutica compreendendo o polipeptídeo acima.
[0026] Em outro aspecto, a invenção compreende ainda o polipeptídeo acima para uso como um medicamento.
[0027] Os polipeptídeos da presente invenção são vantajosos uma vez que eles possuem solubilidade e/ou estabilidade física aperfeiçoada.
[0028] Ensaios adequados usados para determinar a potência em receptores de amilina e calcitonina, bem como determinar a solubilidade e a estabilidade física dos polipeptídeos, são descritos aqui. Por exemplo, vide Ensaios (II), (IV) e (III), respectivamente.
[0029] A Figura 1 apresenta uma estrutura.
[0030] A Figura 2 apresente uma estrutura.
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9/214 [0031] A Figura 3 apresenta uma estrutura.
[0032] A Figura 4 apresenta uma estrutura.
DEFINIÇÕES [0033] O termo amilina humana conforme aqui usado se refere ao polipeptídeo amilina humana tendo a sequência conforme mostrado na SEQ ID NO: 1. O termo inclui, mas não está limitado a, hormônio de polipeptídeo humano de 37 aminoácidos referido como amilina, que na natureza é cosecretado com insulina de células β do pâncreas. A amilina humana tem a sequência de aminoácido primária que segue: [0034] Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-AlaAsn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-SerThr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr (SEQ ID NO: 1) [0035] A amilina humana tem uma ponte dissulfeto entre os dois resíduos Cys e um grupo amida C-terminal. Esta estrutura é mostrada abaixo e também na Figura 4.
H HK N
Figure BR112013031268B1_D0001
ATQRLANF LVHSSNNFGA I
LSSTNVGSNT YNH2 [0036] Aqui, a SEQ ID NO: 1 e a amilina humana podem ser usadas intercomutavelmente.
[0037] O termo pramlintida conforme aqui usado se refere ao polipeptídeo sintético tendo a sequência conforme mostrado na SEQ ID NO: 2. A pramlintida tem a sequência de aminoácido primário que segue:
[0038] Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-AlaAsn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-ProThr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr (SEQ ID NO: 2) [0039] A pramlintida tem uma ponte dissulfeto entre os dois resíduos Cys e um grupo amida C-terminal. Esta estrutura é mostrada abaixo e também na Figura 1.
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10/214 nh9-K-N 2 H
Figure BR112013031268B1_D0002
N T A AN
O H
Figure BR112013031268B1_D0003
O
ATQRLANFLVHSSNNFGP
I LP P TN VGSN AN H O
Figure BR112013031268B1_D0004
OH [0040] Aqui, SEQ ID NO: 2 e pramlintida podem ser usadas inter comutavelmente.
[0041] O termo calcitonina significa calcitonina de salmão ou calcitonina humana.
[0042] O termo calcitonina de salmão ou sCT significa a sequência de proteína nativa de calcitonina de salmão conforme revelado em Niall e outros (1969), Biochemistry vol. 64, Figura 2. A calcitonina do salmão é um polipeptídeo que consiste em 32 aminoácidos. Ela tem uma ponte dissulfeto entre os primeiro e sétimo aminoácidos na extremidade amino-terminal da cadeia de polipeptídeo, a ponte dissulfeto sendo essencialmente para sua atividade biológica, e um grupo prolinamida no aminoácido carboxila terminal.
[0043] O termo calcitonina humana significa a sequência de proteína nativa de calcitonina humana conforme revelado em Niall e outros (1969), Biochemistry vol. 64, Figura 2. A calcitonina humana é um polipeptídeo que consiste em 32 aminoácidos. Ela tem uma ponte dissulfeto entre os primeiro e sétimo aminoácidos na extremidade amino-terminal da cadeia de polipeptídeo, a ponte dissulfeto sendo essencial para sua atividade biológica e um grupo prolinamida no aminoácido carboxila terminal.
[0044] O termo análogo de amilina conforme aqui usado se refere a uma variante da SEQ ID NO: 1.
[0045] O termo análogo de pramlintida conforme aqui usado se refere a uma variante da SEQ ID NO: 2.
[0046] Por exemplo, as ditas variantes incluem, mas não estão limitadas a, uma ou mais substituições e/ou uma ou mais deleções e/ou uma ou mais adições de qualquer um dos resíduos de aminoácido para qualquer aminoácido natural ou não natural, aminoácidos sintéticos
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11/214 ou peptidomiméticos e/ou a ligação de um substituinte a qualquer um dos aminoácidos naturais ou não naturais, aminoácidos sintéticos ou peptidomiméticos em qualquer posição variável.
[0047] A variante pode ter o mesmo número de resíduos de aminoácido que a pramlintida (isto é, 37). Alternativamente, a variante pode compreender menos resíduos de aminoácido do que a pramlintida. Alternativamente, a variante pode compreender mais resíduos de aminoácido que a pramlintida. Em algumas modalidades, a variante tem o mesmo número de resíduos de aminoácido que a pramlintida (isto é, 37). Em algumas modalidades, a variante inclui substituições de qualquer um dos resíduos de aminoácido para qualquer aminoácido natural ou não natural, aminoácidos sintéticos ou peptidomiméticos e/ou a ligação de um substituinte a qualquer um dos aminoácidos naturais ou não naturais, aminoácidos sintéticos ou peptidomiméticos em qualquer posição variável.
[0048] O polipeptídeo pode compreender uma ou mais substituições de aminoácido. Desta maneira, para algumas modalidades, o número de substituições de aminoácido no análogo de amilina pode ser pelo menos um. Preferivelmente, o número de substituições de aminoácido está entre um e quinze, mais preferivelmente entre um e doze, mais preferivelmente entre um e dez, mais preferivelmente entre um e cinco, mais preferivelmente entre um e três.
[0049] O número de inserções, adições, deleções ou substituições de aminoácido pode ser pelo menos 1, mas até 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 inserções, adições, deleções ou substituições de aminoácido podem estar presentes. A substituição ou adição pode ser com qualquer aminoácido natural ou não natural, aminoácidos sintéticos, peptidomiméticos ou outros compostos químicos. A adição ou a deleção de resíduos de aminoácido pode ocorrer no terminal N do peptídeo e/ou no terminal C do peptídeo.
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12/214 [0050] Quando usado aqui o termo amjnoácjdo natural é um aminoácido (com os códigos de três letras comum & códigos de uma letra em parênteses) selecionado do grupo consistindo em: Glicina (Gly & G), prolina (Pro & P), alanina (Ala & A), valina (Val & V), leucina (Leu & L), isoleucina (Ile & I), metionina (Met & M), cisteína (Cys & C), fenilalanina (Phe & F), tirosina (Tyr & Y), triptofano (Trp & W), histidina (His & H), lisina (Lys & K), arginina (Arg & R), glutamina (Gln & Q), asparagina (Asn & N), ácido glutâmico (Glu & E), ácido aspártico (Asp & D), serina (Ser & S) e treonina (Thr & T). Se, devido a erros de digitação, houver desvios dos códigos comumente usados, os códigos comumente usados se aplicam. Os aminoácidos presentes nos polipeptídeos da presente invenção são, preferivelmente, aminoácidos que podem ser codificados por um ácido nucleico.
[0051] Se o análogo contiver ou mais de 37 resíduos de aminoácido ou menos de 37 resíduos de aminoácido, então o versado pode ainda alinhar esta sequência com a sequência de pramlintida (SEQ ID NO: 2) para determinar o número de localização do respectivo resíduo de aminoácido correspondente. Um programa de alinhamento adequado é needle, que é um alinhamento Needleman-Wunsch. O algoritmo para este programa de alinhamento é descrito em Needleman, S. B. e Wunsch, C.D. (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453.
[0052] Na sequência de numeração de SEQ ID NO: 2, e de acordo com a prática estabelecida na técnica, o resíduo de aminoácido no terminal N (Lys) recebe no. 1 e resíduos de aminoácido subsequentes são numerados consecutivamente, terminando no terminal C com tirosina recebendo no. 37. Desta maneira, de um modo geral, qualquer referência aqui a número de posição de um resíduo de aminoácido provê sua localização na sequência de 37 aminoácidos; a dita sequência de 37 aminoácidos sendo um análogo de pramlintida. Por exemplo, uma referência a um análogo modificado na posição 14 pode se referir
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13/214 a um análogo em que o 14° resíduo de aminoácido dos 37 aminoácidos no análogo foi modificado.
[0053] Em outras palavras, a numeração de sequência de aminoácido do análogo provê a posição de cada análogo com relação a uma sequência de 37 aminoácidos, em que a numeração é consecutiva e ascendente na direção do terminal N para o terminal C.
[0054] Análogos podem ser descritos através de referência ao número do resíduo de aminoácido em pramlintida ou amilina humana que é modificada, isto é, por sua posição, e a natureza da modificação. O que segue são exemplos não limitantes de nomenclatura de análogo apropriada.
[0055] Por exemplo:
[0056] [Pro37]-pramlintida designa um análogo de SEQ ID NO: 2 (pramlintida) em que a mudança de pramlintida é a substituição de Tyr na posição 37 com Pro.
[0057] [Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida designa um análogo de
SEQ ID NO: 2 (pramlintida), em que o Asn na posição 14 foi substituído com Glu, o Val na posição 17 foi substituído com Arg e o Tyr na posição 37 foi substituído com Pro.
[0058] Como um exemplo adicional, des1 (ou Des1) em relação a um análogo de pramlintida se refere a um análogo em que o aminoácido N-terminal, Lisina, foi deletado. Um análogo de pramlintida, em que o aminoácido N-terminal foi deletado pode ser também denominado des 1 pramlintida.
[0059] Amilina humana [Pro25, Pro28, Pro29] designa um análogo de SEQ ID NO: 1 (amilina humana) em que as modificações de amilina humana são aquelas que o Ala na posição 25 e o Cys nas posições 28 e 29 foram todos substituídos com Pro. Este polipeptídeo é pramlintida. Desta maneira, será compreendido que a pramlintida é um análogo de amilina humana. Desta maneira, ‘análogos de pramlintida' e ‘análo
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14/214 gos de amilina' podem ser usados intercomutavelmente.
[0060] Como é aparente a partir dos exemplos acima, resíduos de aminoácido podem ser identificados por seu nome inteiro, seu código de uma letra e/ou seu código de três letras. Essas três maneiras são totalmente equivalentes.
[0061] As expressões está de acordo com, corresponde a, uma posição equivalente a ou posição correspondente conforme aqui usado podem ser usadas para caracterizar o sítio de modificação em um análogo de pramlintida através de referência à SEQ ID NO: 2. Posições equivalentes ou correspondentes são facilmente deduzidas, por exemplo, através de escrita simples ou checagem; e/ou um programa de alinhamento de proteína ou polipeptídeo padrão pode ser usado, tal como needle que é um alinhamento Needleman-Wunsch. O algoritmo é descrito em Needleman, S.B. e Wunsch, C.D. (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453 e o programa de alinhamento de Myers e W. Miller em Optimal Alignments in Linear Space CABIOS (computer applications in the biosciences) (1988) 4:11-17. Para o alinhamento, a matriz de pontuação default BLOSUM62 e a matriz de identidade default podem ser usadas, e a penalidade para o primeiro resíduo em uma lacuna pode ser ajustado em -10 e as penalidades para resíduos adicionais em uma lacuna em 0-5.
[0062] O polipeptídeo pode compreender um ou mais substituintes em um ou mais dos resíduos de aminoácidos. Tais polipeptídeos podem também ser chamados derivados de pramlintida ou derivados de amilina.
[0063] O termo substituinte conforme aqui usado significa qualquer porção adequada ligada, em particular covalentemente ligada, a um resíduo de aminoácido, em particular a qualquer posição disponível em um resíduo de aminoácido. Tipicamente, a porção adequada é uma porção química.
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15/214 [0064] Para algumas modalidades, o substituinte compreende um ligante.
[0065] Para algumas modalidades, o polipeptídeo tem um substituinte em um resíduo de aminoácido, resíduo de aminoácido que é ou o resíduo de aminoácido no resíduo N-terminal ou o resíduo é uma Lisina.
[0066] Para algumas modalidades, o polipeptídeo tem um substituinte no resíduo de aminoácido N-terminal ligado via o grupo a(alfa)amino do resíduo de aminoácido N-terminal.
[0067] Para algumas modalidades, o resíduo de aminoácido Nterminal é Lisina e o polipeptídeo tem um substituinte no resíduo de aminoácido N-terminal ligado via o grupo s(épsilon)-amino do resíduo de aminoácido lisina.
[0068] Para algumas modalidades, o polipeptídeo é aumentado através da adição de um resíduo de aminoácido no terminal N e o polipeptídeo tem um substituinte no resíduo de aminoácido N-terminal ligado via o grupo α-amino do resíduo de aminoácido N-terminal.
[0069] Conforme aqui usado, o termo hidrocarbila se refere a um grupo compreendendo pelo menos carbono e hidrogênio que podem compreender opcionalmente um ou mais outros substituintes adequados. Exemplos de tais substituintes podem incluir hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou um grupo cíclico. Em adição à possibilidade dos substituintes serem um grupo cíclico, uma combinação de substituintes pode formar um grupo cíclico. Se o grupo hidrocarbila compreender mais de um átomo de carbono, então esses átomos de carbono não precisam necessariamente ser ligados uns aos outros. Por exemplo, pelo menos dois dos átomos de carbono podem ser ligados via um átomo ou grupo adequado. Desta maneira, o grupo hidrocarbila pode conter heteroátomos. Heteroátomos adequados serão aparentes àqueles versados na técniPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 22/230
16/214 ca e incluem, por exemplo, enxofre, nitrogênio, oxigênio, fósforo e silício. Em uma modalidade o grupo hidrocarbila é selecionado do grupo consistindo em um grupo alquila, um grupo alquenila, um grupo alquinila, um grupo arila, um grupo heteroarila ou um grupo cicloalquila, cada um deles pode ser opcionalmente substituído. Exemplos de tais substituintes podem incluir um grupo hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou um cicloalquila.
[0070] Conforme aqui usado, o termo alquila inclui ambos os grupos alquila de cadeia reta e ramificada que podem ser substituídos (mono- ou poli-) ou não substituídos. Preferivelmente, o grupo alquila é um grupo C1-20 alquila, mais preferivelmente um C1-15, mais preferivelmente um grupo C1-10 alquila, mais preferivelmente um grupo C1-8 alquila, mais preferivelmente um grupo C1-C6 alquila. Grupos alquila particularmente preferidos incluem, por exemplo, metila, etila, n-propila, /so-propila, n-butila, sec-butila, /so-butila, ferc-butila, n-pentila, n-hexila, n-heptila e n-octila. Substituintes adequados incluem, por exemplo, um grupo hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou um cicloalquila.
[0071] Conforme aqui usado, o termo cicloalquila se refere a um grupo alquila cíclico que pode ser substituído (mono- ou poli-) ou não substituído. Substituintes adequados incluem, por exemplo, um grupo hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou um cicloalquila.
[0072] Conforme aqui usado, o termo alquenila se refere a uma cadeia de carbono contendo uma ou mais ligações duplas carbonocarbono, que podem ser ramificadas ou não ramificadas, e substituídas (mono- ou poli-) ou não substituídas. Preferivelmente o grupo alquenila é um grupo C2-20 alquenila, mais preferivelmente um grupo C215 alquenila, mais preferivelmente um grupo C2-10 alquenila, mais preferivelmente um grupo C2-8 alquenila ou mais preferivelmente um grupo
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C2-6 alquenila. Substituintes adequados incluem, por exemplo, um grupo hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou um cicloalquila.
[0073] Conforme aqui usado, o termo alquinila se refere a uma cadeia de carbono contendo uma ou mais ligações triplas carbonocarbono, que podem ser ramificadas ou não ramificadas, e substituídas (mono- ou poli-) ou não substituídas. Preferivelmente o grupo alquinila é um grupo C2-20 alquinila, mais preferivelmente um grupo C2-15 alquinila, mais preferivelmente um grupo C2-10 alquinila, mais preferivelmente um grupo C2-8 alquinila ou mais preferivelmente um grupo C26 alquinila. Substituintes adequados incluem, por exemplo, um grupo hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou um cicloalquila.
[0074] Conforme aqui usado, o termo arila se refere a um grupo
C6-10 aromático que pode ser substituído (mono- ou poli-) ou não substituído. Exemplos típicos incluem fenila e naftila, etc. Substituintes adequados incluem, por exemplo, um grupo hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou cicloalquila.
[0075] Conforme aqui usado, o termo heteroarila se refere a um grupo arila conforme acima definido que contém um ou mais heteroátomos. Heteroátomos adequados serão aparentes àqueles versados na técnica e incluem, por exemplo, enxofre, nitrogênio, oxigênio, fósforo e silício. Substituintes adequados incluem, por exemplo, um grupo hidróxi, alquila, halo, alcóxi, haloalquila, haloalcóxi, amino, aminoalquila ou um cicloalquila.
[0076] O termo ligante conforme aqui usado inclui substituintes adequados que podem unir uma porção, tal como uma porção química, ao polipeptídeo, tal como a estrutura principal do polipeptídeo. Desta maneira, o ligante e a porção química podem se tornar um substituinte juntos. A porção unida ao ligante pode ser qualquer porção
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18/214 adequada. Exemplos incluem uma porção de ligação à albumina.
[0077] Em uma modalidade, a porção de ligação à albumina tem de a partir de 6 a 40 átomos de carbono, de a partir de 8 a 26 átomos de carbono ou de a partir de 14 a 22 átomos de carbono, por exemplo, 16,17, 18, 19, 20 átomos de carbono.
[0078] Em outra modalidade, a porção de ligação à albumina é um grupo acila selecionado do grupo compreendendo CH3(CH2)rCO-, em que r é um inteiro de a partir de 4 a 38, preferivelmente um inteiro de a partir de 4 a 24, mais preferivelmente selecionado do grupo compreendendo CH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-,
CH3(CH2)12CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO- e CH3(CH2)22CO-.
[0079] Em uma modalidade, a porção de ligação à albumina compreende um grupo que pode ser negativamente carregado em pH 7,4.
[0080] Em uma modalidade, a porção de ligação à albumina compreende um grupo de ácido carboxílico, tal como HOOC(CH2)sCO-, em que s é um inteiro de a partir de 12 a 22. Preferivelmente s é 16 ou 18.
[0081] Em uma modalidade, a porção unida ao ligante é uma porção de ligação à albumina.
[0082] Por exemplo, o ligante pode compreender um ou dois aminoácidos que em uma extremidade se ligam à porção - tal como uma porção de ligação à albumina - e na outra extremidade se ligam a qualquer posição disponível na estrutura principal do polipeptídeo.
[0083] Em algumas modalidades, o ligante provê uma ponte ou ligação entre um grupo amino na estrutura principal do polipeptídeo e um grupo acila na porção - tal como uma porção de ligação à albumina. O ligante pode ser ligado ao, ou próximo do, resíduo de aminoácido N-terminal. Preferivelmente o ligante é ligado ao aminoácido na posição 1 do análogo de pramlintida.
[0084] Outro exemplo de um ligante é uma combinação de pelo
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19/214 menos um aminoácido e uma amina.
[0085] Em uma modalidade, preferivelmente a amina é o grupo
OEG, em que a formula de OEG é mostrada abaixo:
N H ο η|· o [0086] Para algumas modalidades, preferivelmente o ligante é selecionado do grupo consistindo em yGlu, yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu-yGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-yGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-yGlu, His-His-yGlu, Gly, Gly-yGlu, Ser, Ser-yGlu, D-Arg-DArg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-yGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-GlySer-Ser-yGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly e Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-GlyyGlu, yGlu-OEG, yGlu-2xOEG e OEG, preferivelmente o ligante é selecionado de yGlu, yGlu-yGlu, yGlu-OEG, yGlu-2xOEG e OEG, mais preferivelmente o ligante é yGlu-yGlu.
[0087] O ligante pode contribuir para e/ou aumentar o efeito de ligação da porção (por exemplo, a porção de ligação à albumina), por exemplo, um ligante compreendendo yGlu pode aumentar o efeito de ligação à albumina do polipeptídeo.
[0088] Ao usar o termo yGlu ou gGlu ou gamaGlu ou gama-LGlu quer dizer um aminoácido com a estrutura que segue (também mostrada na Figura 2):
Figure BR112013031268B1_D0005
grupo α-nitrogênio e γ-carbóxi formam as ligações amida para os dois resíduos vizinhos [0089] Ao usar o termo yGlu-yGlu quer dizer porção com a estrutura que segue:
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20/214
Figure BR112013031268B1_D0006
[0090] Ao usar o termo yGlu-OEG quer dizer uma porção com a estrutura que segue:
Figure BR112013031268B1_D0007
[0091] Ao usar o termo yGlu-OEG-OEG quer dizer uma porção com a estrutura que segue:
Figure BR112013031268B1_D0008
[0092] O termo grupo épsilon amino ou grupo ε-amino, usado aqui em relação á lisina, se refere ao grupo amino na posição 6, usando as convenções de numeração padrão IUPAC. O termo grupo alfa amino ou grupo α-amino se refere ao grupo amino na posição 2, usando as convenções de numeração padrão IUPAC. A requerente faz referência à estrutura que segue (também mostrada na Figura 3).
grupo épsilon amino grupo· alfa amino
Figure BR112013031268B1_D0009
[0093] O termo porção de ligação à albumina conforme aqui usado se refere a qualquer grupo químico capaz de se ligar à albumina, isto é, tem afinidade de ligação à albumina. Em uma modalidade, a porção de ligação à albumina é um grupo acila.
[0094] Em algumas modalidades, preferivelmente a porção de ligação à albumina é um grupo acila selecionado de:
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21/214 (a) CH3(CH2)rCO-, em que r é um inteiro de a partir de 4 a 24;
(b) HOOC(CH2)sCO-, em que s é um inteiro de a partir de 14 a 20, por exemplo, 16 ou 18.
[0095] Afinidade de ligação à albumina pode ser determinada através de vários métodos conhecidos na técnica. Em um método o composto a ser medido é radiomarcado com, por exemplo, 125I ou 3H e incubado com albumina imobilizada (Kurtzhals e outros, Biochem. J., 312, 725-731 (1995)). A ligação do composto com relação a um padrão é calculada. Em outro método, um composto relacionado é radiomarcado e sua ligação à albumina imobilizada sobre, por exemplo, contas de SPA é completada através de uma série de diluições do composto a ser medido. O valor EC50 para a competição é uma medida da afinidade do composto. Em um terceiro método, a afinidade com receptor ou potência de um composto é medida em concentrações diferentes de albumina, e a mudança em afinidade ou potência relativa do composto como uma função de concentração de albumina reflete sua afinidade com albumina.
[0096] Os polipeptídeos da presente invenção exibem boa potência. O termo potência é usado para descrever o efeito de um dado composto em ensaios em que uma relação sigmoidal entre concentração log e o efeito de um composto foi estabelecida. Ainda, a resposta deve ser variável de 0 a 100%. A EC(concentração efetiva)50 pode ser usada para descrever a concentração de um dado composto proporcionando uma resposta de 50% no ensaio, tal como no ensaio funcional. [0097] Os polipeptídeos da presente invenção exibem boa atividade. O termo atividade se refere à habilidade em reduzir o apetite e/ou aumentar a saciedade. A atividade pode ser medida através da habilidade em reduzir o apetite como, por exemplo, descrito no Ensaio (I) aqui.
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22/214 [0098] Os polipeptídeos da presente invenção exibem boa estabilidade física. O termo estabilidade física de um polipeptídeo de acordo com a invenção, ou uma formulação do mesmo, se refere à tendência do polipeptídeo em não formar agregados biologicamente inativos e/ou insolúveis como um resultado de exposição a estresses termomecânicos e/ou interação com interfaces e superfícies que são desestabilizantes, tais como superfícies e interfaces hidrofóbicas. A estabilidade física das formulações de polipeptídeo aquosas pode ser avaliada por meio de inspeção visual, o ensaio de fibrilação Th T (algumas vezes referido como um ensaio de fibrilogênese Th T) e/ou medições de turbidez conforme descrito em outro ponto aqui. Inspeção visual das formulações é realizada em uma luz de foco forte com um fundo escuro. A turbidez da formulação é caracterizada por um score visual classificando o grau de turbidez, por exemplo, em uma escala de 0 a 3 (uma formulação não mostrando turbidez corresponde a um score visual de 0 e uma formulação mostrando turbidez visual na luz do dia corresponde a score visual 3). Uma formulação é classificada fisicamente instável com relação à agregação de proteína quando ela mostra turbidez visual à luz do dia. Alternativamente, a turbidez da formulação pode ser avaliada através de medições de turbidez simples bem conhecidas do versado.
[0099] Os polipeptídeos da presente invenção exibem boa estabilidade química. O termo estabilidade química de um polipeptídeo de acordo com a invenção ou de uma formulação do mesmo se refere a quaisquer mudanças químicas covalentes na estrutura do polipeptídeo desta maneira evitando a formação de produtos de degradação química com potencialmente menos potência e/ou propriedades imunogênicas potencialmente aumentadas comparado com a estrutura de polipeptídeo parental (nativa). Vários produtos de degradação química podem ser formados dependendo do tipo e da natureza do polipeptí
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23/214 deo parental e do ambiente ao qual o polipeptídeo é exposto. Eliminação de degradação química pode com grande probabilidade não ser completamente evitada e quantidades grandes de produtos de degradação química são frequentemente vistas durante armazenamento e uso das formulações de polipeptídeo como bem conhecido dos versados na técnica. A maioria dos polipeptídeos tende à desaminação, um processo em que o grupo amida da cadeia lateral em resíduos glutaminila ou asparaginila é hidrolisado para formar um ácido carboxílico livre. Outros cursos de degradação envolvem a formação de produtos de transformação de peso molecular alto em que duas ou mais moléculas de polipeptídeo estão covalentemente ligadas umas às outras através de transaminação e/ou interações dissulfeto levando à formação de dímero, oligômero e produtos de degradação de polímero covalentemente ligados (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern, T.J. & Manning M.C., Plenum Press, Nova York, 1992). Oxidação (de, por exemplo, resíduos de metionina) pode ser mencionada com outra variante de degradação química. A estabilidade química da formulação de polipeptídeo pode ser avaliada medindo a quantidade dos produtos de degradação química em vários pontos de tempo após exposição a condições ambientais diferentes (a formação de produtos de degradação pode frequentemente ser acelerada através de, por exemplo, aumento da temperatura). A quantidade de cada produto de degradação individual é frequentemente determinada através de separação dos produtos de degradação dependendo do tamanho da molécula e/ou da carga usando várias técnicas cromatográficas (por exemplo, SECHPLC e/ou RP-HPLC).
[00100] O termo formulação estabilizada se refere a uma formulação com estabilidade física aumentada, estabilidade química aumentada ou estabilidades física e química aumentadas comparado com uma solução aquosa do polipeptídeo.
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24/214
DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
Aspectos Gerais [00101] Em um aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
[00102] o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
[00103] em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e [00104] opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00105] Em outro aspecto, a presente invenção se refere à polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo da SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (b) o dito análogo tem uma solubilidade de cerca de 100 pg ou mais em pH 4 opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00106] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração da sequência de aminoácido do aná
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25/214 logo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (b) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou mais em pH7 opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00107] Em outro aspecto, a presente invenção se refere à polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo da SEQ ID NO: 2 em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração de sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (b) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou maior em pH 4; e (c) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou maior em pH 7 opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00108] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (b) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou maior em pH 4; e
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26/214 (c) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μM ou maior em pH 7; e (d) o dito polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese;
opcionalmente, o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00109] Em outro aspecto, a presente invenção se refere à polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
(b) em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00110] Em outro aspecto, a presente invenção se refere à polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
(b) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (c) o dito análogo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 4
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27/214 opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00111] Em outro aspecto, a presente invenção se refere à polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
(b) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (c) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou mais em pH 7 opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00112] Em outro aspecto, a presente invenção se refere à polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
(b) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (c) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou mais em pH 4; e (d) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou mais em pH 7
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28/214 opcionalmente, o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00113] Em outro aspecto, a presente invenção se refere à polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37:
(b) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (c) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 4; e (d) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 7; e (e) o dito polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese;
opcionalmente, o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00114] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
(b) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
(c) o dito análogo compreende um resíduo histidina ou arginina na posição 17;
em que a numeração da sequência de aminoácido do aná
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29/214 logo correspondente à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00115] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 de Fórmula (I): Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa14-PheLeu- Xaa17-Xaa18-Ser-Ser- Xaa21- Xaa22- Phe- Gly- Pro- Xaa26-LeuPro-Pro-Thr- Xaa31-Val-Gly-Ser- Xaa35-Thr-Pro;
Fórmula (I) (SEQ ID No:3) em que
Xaa1 é deletado ou é independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Asn;
Xaa14 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln, Ser e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro, Arg e Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp, Gln e Glu;
e em que o terminal C pode ser opcionalmente derivatiza
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30/214 do;
opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00116] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
(b) o dito análogo compreende um resíduo histidina ou arginina na posição 17;
(c) o dito análogo compreende um resíduo histidina na posição 35;
(d) em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 4; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00117] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
(b) o dito análogo compreende um resíduo histidina ou arginina na posição 17;
(c) o dito análogo compreende um resíduo histidina na posição 35;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ
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ID NO: 2; e (d) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μM ou mais em pH 7; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00118] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
(b) o dito análogo compreende um resíduo histidina ou arginina na posição 17;
(c) o dito análogo compreende um resíduo histidina na posição 35;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (d) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 4; e (e) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 7; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00119] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
(b) o dito análogo compreende um resíduo histidina ou arginina na posição 17;
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32/214 (c) o dito análogo compreende um resíduo histidina na posição 35;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2;
(d) o dito polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese;
opcionalmente, o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte preso a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00120] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo de ácido glutâmico na posição 14;
(b) o dito análogo compreende um resíduo histidina ou arginina na posição 17;
(c) o dito análogo compreende um resíduo histidina na posição 35;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (d) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou mais em pH 4; e (e) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou mais em pH 7; e (f) o dito polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese;
opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. Algumas Vantagens
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33/214 [00121] Os polipeptídeos da presente invenção podem exibir estabilidade física aperfeiçoada.
[00122] Os polipeptídeos da presente invenção podem exibir solubilidade aperfeiçoada.
[00123] Os polipeptídeos da presente invenção podem exibir ambas estabilidade física e solubilidade aperfeiçoadas.
Alguns Aspectos Preferidos [00124] Ensaios adequados para medição de ligação ao receptor de amilina e potência, solubilidade e estabilidade física são apresentados aqui (por exemplo, vide Ensaios (II), (IV) e (III), respectivamente.
[00125] Preferivelmente, Xaa14 é Glu.
[00126] Preferivelmente, Xaa17 é His ou Arg; mais preferivelmente Arg.
[00127] Preferivelmente, Xaa35 é Asn ou Gln; mais preferivelmente Asn.
[00128] Preferivelmente Xaa14 é Glu e Xaa17 é Arg.
[00129] Preferivelmente Xaa14 é Glu e Xaa17 é His.
[00130] Em uma modalidade preferida da invenção, o polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 é de Fórmula (I), em que:
Xaa1 é Lys;
Xaa3 é Asn;
Xaa14 é Glu
Xaa17 é His ou Arg;
Xaa18 é His;
Xaa21 é Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é Asn;
Xaa35 é Asn.
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34/214 [00131] Em uma modalidade preferida da invenção, o polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 é de Fórmula (I), em que:
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de His, Arg e Lys; Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His e Asn;
Xaa14 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ser e Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp, Gln e Glu.
[00132] Em uma modalidade preferida da invenção, o polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 é de Fórmula (I), em que:
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de His e Asn;
Xaa14 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln, Ser e Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro e Ile;
Xaa31 é Asn;
Xaa35 é Asn.
[00133] Em uma modalidade preferida da invenção, o polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de
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SEQ ID NO: 2 é de Fórmula (I) em que:
Xaai é deletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é Asn;
Xaa14 é Glu;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Thr e Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de Gln, Gly e Asn.
[00134] Em uma modalidade preferida da invenção, o polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 é de Fórmula (I) em que:
Xaa1 é deletado;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly e Asn;
Xaa14 é Glu;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de Asn, Gln e Glu.
[00135] Em uma modalidade preferida da invenção o polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 é de Fórmula (I) em que:
Xaa1 é Lys;
Xaa3 é Asn;
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Xaai4 é Glu;
Xaai7 é independentemente selecionado de His, Lys, Arg e Val;
Xaai8 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln e Ser; Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn; Xaa26 é independentemente selecionado de Pro e Ile;
Xaa3i é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn; Xaa35 é independentemente selecionado de Gln, Glu e Asn.
[00136] Em uma modalidade, o terminal C pode ser derivatizado. [00i37] Em uma modalidade, o terminal C do polipeptídeo pode ser terminado ou como um ácido ou amida. Em um aspecto, o terminal C do polipeptídeo é uma amida.
[00i38] Em uma modalidade, o terminal C é derivatizado com uma amida de Fórmula (II):
(II) C(O)NR1R2 em que Ri e R2 são independentemente selecionados de H e alquila. Preferivelmente R1 e R2 são ambos H.
[00139] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção podem ter um substituinte ligado a qualquer posição disponível em um ou mais dos resíduos de aminoácido. Exemplos de substituintes incluem porções químicas diretamente ligadas a um ou mais dos resíduos de aminoácido ou porções químicas indiretamente ligadas a um ou mais dos resíduos de aminoácido por meio de um ligante. Pontos de ligação disponíveis serão conhecidos do versado na técnica. Exemplos de pontos de ligação disponíveis incluem o terminal N do polipeptídeo, o terminal C do polipeptídeo, um grupo épsilon-amino de um resíduo lisina, o grupo hidroxila de um resíduo serina, tirosina ou treonina, o grupo amida de um resíduo asparagina ou glutamina, o grupo carboxila de um resíduo de ácido aspártico ou ácido glutâmico, o grupo tiol de um resíduo cisteína. Preferivelmente, o substituinte é
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37/214 ligado ao terminal N do polipeptídeo ou ao grupo épsilon amino de um resíduo lisina.
[00140] Em outra modalidade, o substituinte é ligado ao grupo amino N-terminal do polipeptídeo em que o resíduo de aminoácido Nterminal corresponde à posição 1 do análogo de SEQ ID NO: 2.
[00141] Em outra modalidade, o substituinte é ligado ao grupo épsilon amino de um resíduo lisina na posição 1 de análogo de SEQ ID NO: 2.
[00142] Em uma modalidade, o substituinte é selecionado de um grupo substituinte hidrocarbila, um grupo hidroxila e um átomo de halogênio. Exemplos de átomos de halogênio adequados incluem F, Cl, Br e I. Preferivelmente, o substituinte é um grupo substituinte hidrocarbila.
[00143] Em outra modalidade, o grupo substituinte hidrocarbila é um grupo alquila ou um grupo de Fórmula (III):
(III) Ln-Y em que
L é um ligante;
N = 0 ou 1
Y é uma porção química - tal como uma porção de ligação à albumina.
[00144] Em uma modalidade, o ligante compreende 1 a 10 aminoácidos. O ligante pode compreender ainda aminas.
[00145] Exemplos de aminas adequadas incluem: -C(O)-(CH2)l-O-[CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O)-(CH2)l-O-[(CH2)nO]m-(CH2)p]q-NHem que l, m, n e p são independentemente 1-7 e q é 0-5.
[00146] Por exemplo, o ligante pode compreender uma amina selecionada de:
-C(O)-CH2-O- CH2- CH2-O-CH2-CH2-NH- ; e
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-C(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2- CH2-[NHC(O)-CH2-O-CH2-CH2O-CH2-CH2-]i-NH-; e -C(O)-(CH2)2-O-[CH2CH2-O]7-(CH2)2-NH-.
[00147] Em outra modalidade, o ligante é uma combinação de resíduos de aminoácido e das aminas mencionadas acima, por exemplo: YGlu-C(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-[NHC(O)-CH2-O-CH2CH2-O- CH2- CH2-]i-NH-; ou Arg-Arg-YGlu-C(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2- CH2-[NHC(O)-CH2O-CH2-CH2-O- CH2- CH2-]i-NH-.
[00148] Em algumas modalidades, n = 1 e L é selecionado do grupo consistindo em yGlu, yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu-yGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-yGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-yGlu, His-His-yGlu, Gly, Gly-yGlu, Ser, Ser-yGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-yGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-yGlu, SerSer-Gly-Ser-Ser-Gly e Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-yGlu, yGlu-OEG, yGluOEG-OEG e OEG.
[00149] Em algumas modalidades, n = 1 e L é selecionado de yGlu, yGlu-yGlu, yGlu-OEG, yGlu-OEG-OEG e OEG, mais preferivelmente o ligante é yGlu-yGlu.
[00150] Em outra modalidade, n = 0; desta maneira, não há nenhum ligante entre os resíduos de aminoácido da estrutura principal de polipeptídeo e a porção química, Y, isto é, Y é ligado a uma posição disponível na estrutura principal do polipeptídeo.
[00151] Em uma modalidade, Y é uma porção de ligação à albumina.
[00152] Em uma modalidade, a porção de ligação à albumina é um grupo acila.
[00153] Preferivelmente, a porção de ligação à albumina é HOOC(CH2)sCO-, em que s é um inteiro de a partir de 12 a 22. Mais preferivelmente, s é um inteiro de a partir de 14 a 20, por exemplo, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20. Mais preferivelmente, s é 16 a 18. Mais preferi
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39/214 velmente, s é 18.
[00154] Em uma modalidade, o polipeptídeo da invenção compreende um ligante yGlu ligado ao terminal N do análogo de amilina e HOOC(CH2)i8CO ou HOOC(CH2)i6CO- como o resíduo de ligação à albumina e em que a sequência do análogo de amilina compreende Glu na posição 14, His ou Arg na posição 17, His na posição 35 ou Pro na posição 37 comparado com SEQ ID NO: 2.
[00155] Em outra modalidade, o grupo substituinte e/ou grupo de fórmula (III) é selecionado dos grupos que seguem apresentados na Tabela 1.
TABELA 1
Abreviação Substituinte
C20diácido O O
C20diácido -yGlu Ox/OH O 0' O
C20diácido - yGlu-yGlu O^/OH O^^OH O ? O
C20diácido - yGlu-yGlu-yGlu p. (—)|_| O^-— /OH (X^OH Ox^OH XX O ? Jx .. - HO H H Xh 1 O
C20diácido -OEG O ZO. h^^'H O η 0 O
C20diácido - yGlu-OEG O 0^-::· II A — ^/0./^, 0 τι 0 H 0 0
C20diácido - yGlu-OEG-OEG Λ Ox /OH 0 o zxA/- ^X -- »JI............... -...........-......-...... -.....' 0.....0«........ 0.....0
C18diácido -yGlu O/ /OH 0 h^^— S H O
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Abreviação Substituinte
C16diácido -yGlu O^z-OH o □πΑΑ'/χχχχχχ—n-'--—Άι HO O H °
C14diácido -yGlu Ox .OH O X^ H^^— o H O
[00156] Preferivelmente, os polipeptídeos da presente invenção compreende um substituinte.
[00157] Preferivelmente, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um substituinte ligado ao grupo amino N-terminal do polipeptídeo em que o resíduo de aminoácido N-terminal corresponde à posição 1 do análogo de SEQ ID NO: 2.
[00158]
HO' [00159]
HO'
Preferivelmente o substituinte é:
Ox .OH
-^N·
II H
O
Preferivelmente o substituinte é:
Ox .OH v H
O
É ligado ao grupo amino N-terminal do polipeptídeo.
Para modalidades que compreendem uma porção de liga[00160] [00161] ção à albumina, os polipeptídeos da presente invenção podem exibir um perfil farmacocinético prolongado e boas propriedades farmacodinâmicas. Desta maneira, os polipeptídeos de acordo com a presente invenção não apresentam que ser injetados com tanta frequência quanto os produtos de amilina.
[00162] Ainda, os polipeptídeos da invenção causam uma redução em ingestão de alimento. A redução em ingestão de alimento é superior com relação aos produtos de amilina conhecidos.
[00163] Em uma modalidade, a porção de ligação à albumina se
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41/214 liga não covalentemente à albumina. Preferivelmente, a porção de ligação à albumina tem uma afinidade de ligação à albumina com relação à albumina de soro humano que está abaixo de cerca de 10 μΜ ou abaixo de cerca de 1 μΜ.
TABELA 2
Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 4,0 (μΜ)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >200
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >200
97 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Pro37]-pramlintida 34 >200
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >200
166 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser2 9,Pro37]-pramlintida 39 >200
143 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg18,Pro37]-pramlintida 41,5 >200
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >200
121 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg- [Glu1,Pro37]-pramlintida 45 >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 4,0 (μΜ)
102 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida 49,5 >200
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >200
92 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52 >200
103 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Pro37]-pramlintida 52,5 >200
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 >200
86 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Pro37]-pramlintida 55 >200
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >200
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200
106 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62,5 >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 4,0 (μΜ)
122 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Pro37]-pramlintida 63 >200
168 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}et óxi)acetil]-[Glu14,His17, Lys21, Pro37]pramlintida 71 >200
104 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79,5 >200
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11 ,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >200
10 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82,3 >200
109 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 84,5 >200
108 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 88 >200
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 >200
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp3 1 ,Asp35,Pro37]-pramlintida 90 >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 4,0 (μΜ)
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 >200
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >200
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 >200
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >200
19 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]pramlintida 105,1 >200
139 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107,5 >200
82 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}et óxi)acetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 108,5 >200
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1 ,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 120,5 >200
123 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136 >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 4,0 (μΜ)
167 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}et óxi)acetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]pramlintida 203 >200
151 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29 ,Pro37]-pramlintida 209 >200
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >200
125 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 288,5 >200
155 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313 >200
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]- pramlintida 411 >200
157 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 465 >200
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37] -pramlintida 1059 >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 4,0 (μΜ)
158 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 1129 >200
138 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1512 >200
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35, Pro37]-pramlintida 1713 >200
159 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31 ,Gln35,Pro37] -pramlintida >200
160 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31 ,Gln35, Pro37]-pramlintida >200
169 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}et óxi)acetil]-[Glu14,His17,Ala21, Pro37]pramlintida >200
171 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser2 8,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida >200
177 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 4,0 (μΜ)
178 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}et óxi)acetil]-[Glu14,Ala21 ,His35, Pro37]pramlintida >200
[00164] Conforme demonstrado na seção Exemplos aqui, os polipeptídeos apresentados acima apresentam uma solubilidade superior ou igual a 100 μΜ (micromolar) em pH 4.
[00165] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 125 μΜ (micromolar) em pH 4.
[00166] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 150 μΜ (micromolar) em pH 4.
[00167] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 175 μΜ (micromolar) em pH 4.
[00168] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 200 μΜ (micromolar) em pH 4.
[00169] Em uma modalidade, a solubilidade é medida em um ensaio de solubilidade conforme apresentado aqui.
[00170] Em uma modalidade adicional, o polipeptídeo da presente invenção é selecionado do compostos que seguem apresentados na Tabela 3 (abaixo).
[00171] A Tabela 3 apresenta uma lista de compostos que apresentam uma solubilidade superior a 100 μΜ em pH 7.
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TABELA 3
Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 7,0 (μΜ)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >200
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >200
97 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]pramlintida 34 >200
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >200
166 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro3 7]-pramlintida 39 >200
143 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg18,Pro37]-pramlintida 41,5 165
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >200
102 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida 49,5 >200
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 7,0 (μΜ)
92 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52 >200
103 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Pro37]-pramlintida 52,5 199
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 >200
86 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Pro37]pramlintida 55 >200
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >200
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200
106 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62,5 >200
122 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Pro37]-pramlintida 63 >200
168 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)a cetil]-[Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida 71 >200
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Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 7,0 (μΜ)
104 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79,5 >200
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11 ,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >200
10 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82,3 >200
109 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 84,5 >200
108 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 88 >200
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 >200
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp 35,Pro37]-pramlintida 90 >200
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 >200
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >200
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 57/230
51/214
Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 7,0 (μΜ)
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >200
139 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107,5 >200
82 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)a cetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 108,5 >200
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120,5 >200
123 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136 >200
167 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)a cetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida 203 >200
151 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro3 7]-pramlintida 209 >200
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >200
125 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 288,5 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 58/230
52/214
Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 7,0 (μΜ)
155 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313 >200
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411 >200
157 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 465 >200
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]pramlintida 1059 >200
158 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1129 >200
138 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1512 >200
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro3 7]-pramlintida 1713 >200
159 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31 ,Gln35,Pro37]pramlintida >200
160 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31 ,Gln35,Pro3 7]-pramlintida >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 59/230
53/214
Exe mplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubilidade pH 7,0 (μΜ)
169 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)a cetil]-[Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida >200
171 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser2 9,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida >200
177 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida >200
178 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)a cetil]-[Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida >200
[00172] Conforme demonstrado na seção Exemplos aqui, os polipeptídeos apresentados acima apresentam uma solubilidade superior ou igual a 100 μΜ (micromolar) em pH 7.
[00173] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 125 μΜ (micromolar) em pH 7.
[00174] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 150 μΜ (micromolar) em pH 7.
[00175] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 175 μΜ (micromolar) em pH 7.
[00176] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 200 μΜ (micro
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54/214 molar) em pH 7.
[00177] Em uma modalidade, a solubilidade é medida em um ensaio de solubilidade conforme apresentado aqui.
[00178] A Tabela 4 apresenta uma lista de compostos que apresentam uma solubilidade superior a 100 μΜ em ambos os pHs 4 e 7.
TABELA 4
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]- Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 25,5 >200 >200
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 32,5 >200 >200
97 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Pro37]-pramlintida 34 >200 >200
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 36 >200 >200
166 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Se r28,Ser29,Pro37]-pramlintida 39 >200 >200
143 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg18,Pro37]pramlintida 41,5 >200 165
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55/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 43 >200 >200
102 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida 49,5 >200 >200
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 51,5 >200 >200
92 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 52 >200 >200
103 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[Arg1,Pro37]-pramlintida 52,5 >200 199
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200 >200
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 54 >200 >200
86 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Pro37]-pramlintida 55 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 62/230
56/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida 55,5 >200 >200
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200 >200
106 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 62,5 >200 >200
122 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida 63 >200 >200
168 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamin o] etóxi}etóxi)acetil]- [Glu14,His17,Lys21,Pro37]pramlintida 71 >200 >200
42 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17]-pramlintida 73,9 >200 >200
104 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 79,5 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 63/230
57/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 80,5 >200 >200
10 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]pramlintida 82,3 >200 >200
109 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 84,5 >200 >200
108 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 88 >200 >200
72 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamin o] etóxi}etóxi)acetil]- [Glu14,Ser21,Lys25]-pramlintida 89 >200 126
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 89,5 >200 >200
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Se r29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida 90 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 64/230
58/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 91 >200 >200
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida 91 >200 >200
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 92,5 >200 >200
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida 103 >200 >200
139 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 107,5 >200 >200
82 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- Carbóxi-4-(17carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamin o]etóxi}etóxi)acetil][Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 108,5 >200 >200
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1 ,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro3 7]-pramlintida 120,5 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 65/230
59/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
123 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 136 >200 >200
167 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- Carbóxi-4-(19carboxieptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamin o]etóxi}etóxi)acetil]- [Glu14,His17,Glu21,Pro37]pramlintida 203 >200 >200
151 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser 28,Ser29,Pro37]-pramlintida 209 >200 >200
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]pramlintida 232 >200 >200
40 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida 248 >200 >200
125 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)- Glu-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 288,5 >200 >200
155 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 313 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 66/230
60/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro 37]-pramlintida 411 >200 >200
157 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]pramlintida 465 >200 >200
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln 35,Pro37]-pramlintida 1059 >200 >200
158 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro 37]-pramlintida 1129 >200 >200
138 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 1512 >200 >200
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln 31 ,Gln35,Pro37]-pramlintida 1713 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 67/230
61/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,0 (μΜ)
159 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln 35,Pro37]-pramlintida >200 >200
160 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln 31 ,Gln35,Pro37]-pramlintida >200 >200
169 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamin o]etóxi}etóxi)acetil]- [Glu14,His17,Ala21,Pro37]pramlintida >200 >200
171 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pr o26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro3 7]-pramlintida >200 >200
177 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 68/230
62/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 4,0 (μΜ) Solubili dade PH 7,0 (μΜ)
178 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4- Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamin o]etóxi}etóxi)acetil]- [Glu14,Ala21,His35,Pro37]pramlintida >200 >200
[00179] Conforme demonstrado na seção Exemplos aqui, os polipeptídeos apresentados acima apresentam uma solubilidade superior ou igual a 100 μΜ (micromolar) em ambos o pH 4 e o pH 7.
[00180] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 125 μΜ (micromolar) em ambos o pH 4 e o pH 7.
[00181] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 150 μΜ (micromolar) em ambos o pH 4 e o pH 7.
[00182] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 175 μΜ (micromolar) em ambos o pH 4 e o pH 7.
[00183] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma solubilidade superior ou igual a 200 μΜ (micromolar) em ambos o pH 4 e o pH 7.
[00184] Em uma modalidade, a solubilidade é medida em um ensaio de solubilidade conforme apresentado aqui.
[00185] A Tabela 5 apresenta uma lista de compostos que apresentam estabilidade física superior ou igual a 25 horas em um ensaio de fibrilogênese.
TABELA 5
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 69/230
63/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humano EC50 (pM) ThT pH 4,0 tempo de latência (h) ThT pH 4,0 recuperação (%)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >45 91
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >45 93
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >45 87
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >45 92
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >45 98
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >45 96,2
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 29 0
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >45 93
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >45 92,3
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 70/230
64/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humano EC50 (pM) ThT pH 4,0 tempo de latência (h) ThT pH 4,0 recuperação (%)
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11 ,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >45 91
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluArg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 89,5 >45 9,3
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29, Asp31 ,Asp35,Pro37]-pramlintida 90 >45 94
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 91 >45 100
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >45 87
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 25,6 100
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >45 100
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1 ,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 120,5 29 23
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 71/230
65/214
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humano EC50 (pM) ThT pH 4,0 tempo de latência (h) ThT pH 4,0 recuperação (%)
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg-[Glu1 ,Glu14,Arg17,Gln21 ,Pro37]pramlintida 232 >45 96
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]- pramlintida 411 >45 98
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35, Pro37]-pramlintida 1059 >45 95
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31, Gln35,Pro37]-pramlintida 1713 >45 95
156 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 66 >45 99
[00186] Conforme demonstrado na seção Exemp os aqui, os poli-
peptídeos apresentados acima apresentam uma estabilidade física superior ou igual a 25 horas em um ensaio de fibrilogênese.
[00187] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma estabilidade física superior ou igual a 30 horas.
[00188] Em uma modalidade, os polipeptídeo da presente invenção apresentam uma estabilidade física superior ou igual a 35 horas.
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 72/230
66/214 [00189] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma estabilidade física superior ou igual a 40 horas.
[00190] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam uma estabilidade física superior ou igual a 45 horas.
[00191] Em uma modalidade, a estabilidade física é medida em um ensaio de fibrilogênese conforme apresentado aqui.
[00192] A Tabela 6 apresenta uma lista de compostos que apresentam um valor EC50 de receptor de amilina humana de 1800 pM (pico molar) ou menos.
TABELA 6
Exemplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25.5
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32.5
97 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]pramlintida 34
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36
166 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro 37]-pramlintida 39
143 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,Arg18,Pro37]-pramlintida 41.5
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43
121 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg- [Glu1,Pro37]-pramlintida 45
102 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida 49.5
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 73/230
67/214
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51.5
92 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52
103 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Pro37]-pramlintida 52.5
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54
86 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Pro37]pramlintida 55
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55.5
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62
45 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His[His1 ,Glu14,His17]-pramlintida 62.4
106 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62.5
122 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Pro37]-pramlintida 63
168 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu 14,His17,Lys21, Pro37]pramlintida 71
104 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79.5
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11 ,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80.5
10 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82.3
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 74/230
68/214
109 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 84.5
108 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 88
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89.5
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,As p35,Pro37]-pramlintida 90
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92.5
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103
19 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]pramlintida 105.1
139 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107.5
82 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 108.5
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120.5
123 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 75/230
69/214
167 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]pramlintida 203
151 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro 37]-pramlintida 209
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232
125 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 288.5
155 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411
157 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 465
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]pramlintida 1059
158 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1129
138 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1512
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro3 7]-pramlintida 1713
153 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 43
154 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]pramlintida 53
156 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 66
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 76/230
70/214
152 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida 129
[00193] Conforme demonstrado na seção Exemp os aqui, os poli-
peptídeos apresentados acima apresentam um valor EC50 de amilina humana de 1800 pM (picomolar) ou menos.
[00194] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 1500 pM (picomolar) ou menos.
[00195] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 1200 pM (picomolar) ou menos.
[00196] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 1000 pM (picomolar) ou menos.
[00197] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 800 pM (picomolar) ou menos.
[00198] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 600 pM (picomolar) ou menos.
[00199] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 400 pM (picomolar) ou menos.
[00200] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 200 pM (picomolar) ou menos.
[00201] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 100 pM (picomolar) ou menos.
[00202] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 75 pM (picomo
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 77/230
71/214 lar) ou menos.
[00203] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 60 pM (picomolar) ou menos.
[00204] Em uma modalidade, a EC50 da amilina humana é medida em um ensaio conforme aqui apresentado.
[00205] A Tabela 7 apresenta uma lista de compostos que apresentam um valor EC50 de receptor de amilina humana de 1800 pM (picomolar) ou menos.
TABELA 7
Exemplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) EC50recept or humana CTa (pM)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 39,5
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 47,5
97 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Pro37]-pramlintida 34 38,5
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 55
166 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,S er29, Pro37]-pramlintida 39 34
143 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg18,Pro37]-pramlintida 41,5 22
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- 43 55
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Exemplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) EC50recept or humana CTa (pM)
carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
121 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu- Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida 45 61,5
102 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida 49,5 50,5
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 45,5
92 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52 49
103 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Pro37]-pramlintida 52,5 75
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 79,7
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 52
86 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Pro37]-pramlintida 55 52,5
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 31,5
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 53,7
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 79/230
73/214
Exemplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) EC50recept or humana CTa (pM)
106 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62,5 70,5
122 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida 63 61
168 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]- [Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida 71 85
104 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79,5 106,5
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11 ,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 83
10 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]pramlintida 82,3 86,4
109 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 84,5 72,5
108 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida 88 73,5
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 367
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 80/230
74/214
Exemplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) EC50recept or humana CTa (pM)
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,A sp31 ,Asp35,Pro37]-pramlintida 90 76
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 91 45
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 59,5
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 67
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 97
139 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107,5 58,5
82 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]- [Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 108,5 288,5
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1 ,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 120,5 72
123 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- 136 377,5
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Exemplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) EC50recept or humana CTa (pM)
carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
167 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4- (19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]- [Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida 203 113
151 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Se r29,Pro37]-pramlintida 209 67,5
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Arg-[Glu1 ,Glu14,Arg17,Gln21 ,Pro37]pramlintida 232 1133
125 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu- Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 288,5 443
155 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313 526
157 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluGlu-[Arg1 ,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]pramlintida 465 547
158 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluGlu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 1129 1188
138 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- 1512 496,5
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Exemplo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) EC50recept or humana CTa (pM)
carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]- pramlintida
153 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 43 41
154 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg17,Pro37]-pramlintida 53 57
156 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 66 168
152 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida 129 453
[00206] Conforme demonstrado na seção Exemplos aqui, os poli-
peptídeos apresentados acima apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 1800 pM (picomolar) ou menos.
[00207] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 1500 pM (picomolar) ou menos.
[00208] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 1200 pM (picomolar) ou menos.
[00209] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 1000 pM (picomolar) ou menos.
[00210] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 800 pM (pi
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77/214 comolar) ou menos.
[00211] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 600 pM (picomolar) ou menos.
[00212] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 400 pM (picomolar) ou menos.
[00213] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 200 pM (picomolar) ou menos.
[00214] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 100 pM (picomolar) ou menos.
[00215] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente invenção apresentam um valor EC50 de calcitonina humana de 80 pM (picomolar) ou menos.
[00216] Em uma modalidade, a EC50 da calcitonina humana é medida em um ensaio conforme aqui apresentado.
[00217] A Tabela 8 apresenta uma lista de compostos que apresentam um valor EC50 de receptor de amilina humana de 1800 pM (picomolar) ou menos, uma solubilidade de 150 pM ou mais em pH 7 e uma estabilidade física de 25 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese.
TABELA 8
Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 7,0 (μΜ) Tempo de Latência Th T pH 4,0 (h)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25.5 >200 >45
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32.5 >200 >45
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Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 7,0 (μΜ) Tempo de Latência Th T pH 4,0 (h)
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >200 >45
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >200 >45
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51.5 >200 >45
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200 >45
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 >200 29
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55.5 >200 >45
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200 >45
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11 ,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80.5 >200 >45
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluArg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 89.5 >200 >45
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29, Asp31 ,Asp35,Pro37]-pramlintida 90 >200 >45
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 91 >200 >45
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >200 >45
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92.5 >200 25.6
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Exem plo No. Nome Receptor de Amilina humana EC50 (pM) Solubili dade pH 7,0 (μΜ) Tempo de Latência Th T pH 4,0 (h)
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >200 >45
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1 ,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 120.5 >200 29
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluArg-[Glu1 ,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]pramlintida 232 >200 >45
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluArg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 411 >200 >45
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluArg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pr o37]-pramlintida 1059 >200 >45
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluArg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gl n35,Pro37]-pramlintida 1713 >200 >45
[00218 Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente inven-
ção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 1800 pM (pico molar) ou menos e uma solubilidade superior a 150 μM em pH 7 e uma estabilidade física superior ou igual a 25 horas em um ensaio de fibrilogênese.
[00219] Em uma modalidade, a EC50 de amilina humana, solubilidade em pH 7 e estabilidade física são medidas em ensaios conforme aqui apresentado.
[00220] A Tabela 9 apresenta uma lista de compostos que apresentam um valor EC50 de receptor de amilina humana de 1800 pM (picomolar) ou menos, uma solubilidade de 200 μΜ ou mais em pH 7 e uma
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80/214 estabilidade física de 45 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese.
TABELA 9
Exem plo No. Nome EC50Re ceptor de Amilina humana (pM) Solubili dade pH 7,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,5 (μΜ) Tempo de latência ThT pH 4,0 (h)
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 25,5 >200 >200 >45
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 32,5 >200 >200 >45
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 36 >200 >200 >45
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 43 >200 >200 >45
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 51,5 >200 >200 >45
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200 >200 >45
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida 55,5 >200 >200 >45
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200 >200 >45
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 80,5 >200 >200 >45
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 89,5 >200 >200 >45
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Exem plo No. Nome EC50Re ceptor de Amilina humana (pM) Solubili dade pH 7,0 (μΜ) Solubili dade pH 7,5 (μΜ) Tempo de latência ThT pH 4,0 (h)
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19- carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,S er29,Asp31 ,Asp35,Pro37]pramlintida 90 >200 >200 >45
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 91 >200 >200 >45
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida 91 >200 >200 >45
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida 103 >200 >200 >45
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]pramlintida 232 >200 >200 >45
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pr o37]-pramlintida 411 >200 >200 >45
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gl n35,Pro37]-pramlintida 1059 >200 >200 >45
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gl n31 ,Gln35,Pro37]-pramlintida 1713 >200 >200 >45
[00221] Em uma modalidade, os polipeptídeos da presente inven ção apresentam um valor EC50 de amilina humana de 1800 pM (picomolar) ou menos e uma solubilidade superior a 200 μΜ em pH 7 e uma estabilidade física superior ou igual a 45 horas em um ensaio de fibri
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82/214 logênese.
[00222] Em uma modalidade, a EC50 da amilina humana, solubilidade em pH 7 e estabilidade física são medidas em ensaios conforme aqui apresentado.
[00223] Em um aspecto da invenção os derivados de amilina são selecionados do grupo consistindo em:
[00224] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00225] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00226] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida, [00227] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida, [00228] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00229] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00230] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida, [00231] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida,
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83/214 [00232] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida, [00233] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]pramlintida, [00234] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida, [00235] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]pramlintida, [00236] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida, [00237] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18]-pramlintida, [00238] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida, [00239] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00240] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00241] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00242] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida,
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84/214 [00243] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Arg35]pramlintida, [00244] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Arg3,Glu14,His17]pramlintida, [00245] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida [00246] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31, Arg35]-pramlintida [00247] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1 ,Glu14,His17]-pramlintida, [00248] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00249] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, [00250] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida, [00251] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17]-pramlintida, [00252] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00253] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 91/230
85/214 [00254] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00255] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, [00256] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, [00257] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17]pramlintida, [00258] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His29]pramlintida, [00259] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-DArg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00260] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida, [00261] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser[Gly1,Glu14,His17]-pramlintida, [00262] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00263] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 92/230
86/214 [00264] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00265] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][des1,Glu14,His17]-pramlintida, [00266] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00267] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00268] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, [00269] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00270] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00271] N-alfa-{(S)-4-Carbóxi-4-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}-[des1,Glu14,His17]pramlintida, [00272] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida, [00273] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida, [00274] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00275] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, [00276] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu10,Glu14,His17]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 93/230
87/214 [00277] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00278] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00279] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00280] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, [00281] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00282] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00283] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00284] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00285] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]-pramlintida, [00286] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00287] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00288] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00289] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,His17,His35]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 94/230
88/214 pramlintida, [00290] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00291] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, [00292] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00293] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00294] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Ser21,Lys25]-pramlintida, [00295] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys25]-pramlintida, [00296] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida, [00297] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00298] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00299] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18,His35]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 95/230
89/214 pramlintida, [00300] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, [00301] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00302] N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys17]pramlintida, [00303] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00304] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00305] N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida, [00306] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00307] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00308] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Pro37]-pramlintida, [00309] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00310] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 96/230
90/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00311] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00312] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00313] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00314] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00315] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida, [00316] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00317] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00318] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00319] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]-pramlintida, [00320] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]-pramlintida, [00321] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 97/230
91/214 [00322] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00323] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00324] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00325] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Pro37]-pramlintida, [00326] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00327] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00328] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00329] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00330] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00331] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00332] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00333] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 98/230
92/214 carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00334] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg35]-pramlintida, [00335] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]-pramlintida, [00336] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]-pramlintida, [00337] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]-pramlintida, [00338] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]-pramlintida, [00339] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)pramlintida, [00340] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, [00341] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, [00342] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00343] N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]pramlintida [00344] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 99/230
93/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida, [00345] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00346] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00347] N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00348] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys25]pramlintida, [00349] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida, [00350] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Asp21,His35]pramlintida, [00351] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]pramlintida, [00352] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida, [00353] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida,
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94/214 [00354] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,His35]-pramlintida, [00355] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, [00356] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, [00357] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida, [00358] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00359] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00360] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00361] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00362] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 101/230
95/214 [His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00363] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, [00364] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00365] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18,Pro37]pramlintida, [00366] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, [00367] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00368] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida, [00369] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida, [00370] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida,
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96/214 [00371] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Arg-[Glu14,Arg17,His35,Pro37]pramlintida, [00372] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida, [00373] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, [00374] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida, [00375] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00376] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]-pramlintida, [00377] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00378] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00379] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, [00380] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00381] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 103/230
97/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00382] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00383] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, [00384] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00385] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00386] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00387] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00388] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, [00389] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida, [00390] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 104/230
98/214 [Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida, [00391] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida, [00392] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]pramlintida, [00393] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro
37]-pramlintida, [00394] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp21,Pro37]pramlintida, [00395] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp35,Pro37]pramlintida, [00396] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp31,Pro37]pramlintida, [00397] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp22,Pro37]pramlintida, [00398] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Asp3,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00399] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida,
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99/214 [00400] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida.
[00401] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem um perfil farmacocinético prolongado comparado com pramlintida conforme medido através do Ensaio (IX) conforme descrito na seção Ensaios.
[00402] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 30 horas.
[00403] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 40 horas.
[00404] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 50 horas.
[00405] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 60 horas.
[00406] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 70 horas.
[00407] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 75 horas.
[00408] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 80 horas.
[00409] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 85 horas.
[00410] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 90 horas.
[00411] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 95 horas.
[00412] Para algumas modalidades, o polipeptídeo da presente invenção tem uma T1/2 no plasma de pelo menos 100 horas.
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PROCESSO [00413] A produção de polipeptídeos tais como amilina ou análogos da mesma é bem conhecida na técnica. Os polipeptídeos da presente invenção podem então ser produzidas através de síntese de polipeptídeo clássica, por exemplo, síntese de polipeptídeo de fase sólida usando química t-Boc ou Fmoc ou outras técnicas bem estabelecidas, vide, por exemplo, Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1999. Os polipeptídeos podem também ser produzidos através de um método que compreende cultura de uma célula hospedeiro contendo uma sequência de DNA codificando o polipeptídeo e capaz de expressar o polipeptídeo em um meio nutriente adequado sob condições que permitem a expressão do polipeptídeo. Para polipeptídeos compreendendo resíduos de aminoácido não naturais, a célula recombinante deve ser modificada de maneira que os aminoácidos não naturais sejam incorporados ao polipeptídeo, por exemplo, através do uso de mutantes de tRNA.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS [00414] Em um aspecto a invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo de acordo com a invenção e um excipiente farmaceuticamente aceitável. As composições são adequadas para administração parenteral.
[00415] Em uma modalidade, o polipeptídeo está presente na formulação em uma concentração de a partir de cerca de 0,1 mg/mL a cerca de 25 mg/mL. Em outro aspecto, o polipeptídeo está presente na formulação em uma concentração de a partir de cerca de 1 mg/mL a cerca de 10 mg/mL.
[00416] Em outra modalidade, a formulação tem um pH de a partir de 2,0 a 10,0. Em outra modalidade, a formulação tem um pH de 2,0 a 7,0. Em outra modalidade, a formulação tem um pH de a partir de 2,5 a 4,5. Em outra modalidade, a formulação tem um pH de a partir de
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3,5 a 4,5.
[00417] As composições farmacêuticas contendo um polipeptídeo de acordo com a presente invenção podem ser preparadas através de técnicas convencionais, por exemplo, conforme descrito em Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985 ou em Remington: The Science e Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995.
[00418] A formulação pode compreender ainda um sistema de tampão, preservativo(s), agente(s) de isotonicidade, agente(s) de quelação, estabilizadores e/ou tensoativos. O uso de tais excipientes em composições farmacêuticas é bem conhecido do versado. Para conveniência referência é feita a Remington: The Science e Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995.
[00419] Em uma modalidade, a formulação farmacêutica é uma formulação aquosa, isto é, formulação compreendendo água. Tal formulação é tipicamente uma solução ou uma suspensão. Em uma modalidade adicional da invenção a formulação farmacêutica é uma solução aquosa.
[00420] O termo formulação aquosa é definido como uma formulação compreendendo pelo menos 50% p/p de água.
[00421] Da mesma maneira, o termo solução aquosa é definido como uma solução compreendendo pelo menos 50% p/p de água e o termo suspensão aquosa é definido como uma suspensão compreendendo pelo menos 50% p/p de água.
[00422] Em outra modalidade a formulação farmacêutica é uma formulação seca por congelamento, à qual o médico ou o paciente adiciona solventes e/ou diluentes antes do uso. Em outra modalidade, a formulação farmacêutica é uma formulação seca (por exemplo, seca por congelamento ou seca por pulverização) para uso sem qualquer discussão anterior.
[00423] Por forma seca quer dizer que a composição ou formula
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102/214 ção farmacêutica líquida é seca ou através de secagem por congelamento (isto é, liofilização; vide, por exemplo, Williams e Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59), secagem por pulverização (vide Masters (1991) em Spray-Drying Handbook (5a ed; Longman Scientific e Technical, Essez, U.K.), pp. 491-676; Broadhead e outros (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; e Mumenthaler e outros (1994) Pharm. Res. 11:12-20) ou secagem ao ar (Carpenter e Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; e Roser (1991) Biopharm. 4:47-53).
[00424] Em uma modalidade adicional da invenção o tampão é selecionado do grupo consistindo em acetato, carbonato, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, diidrogeno fosfato, hidrogeno fosfato, fosfato e tris(hidroximetil)-aminometano, bicina, tricina, ácido málico, ácido láctico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico ou misturas dos mesmos. Cada um desses tampões específicos constitui uma modalidade alternativa da invenção. [00425] Em outra modalidade da invenção a formulação compreende ainda um preservativo farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade adicional da invenção a formulação compreende ainda um agente isotônico, por exemplo, propileno glicol, manitol ou glicerol. Em uma modalidade adicional da invenção a formulação compreende ainda um agente de quelação.
[00426] Em outra modalidade da invenção a formulação compreende ainda um estabilizador. O uso de um estabilizador em composições farmacêuticas é bem conhecido do versado. Por questão de conveniência referência é feita a Remington: The Science e Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995.
[00427] Formação de agregado por um polipeptídeo durante armazenamento de uma composição farmacêutica líquida pode afetar de modo adverso a atividade biológica deste polipeptídeo, resultando em perda de eficácia terapêutica da composição farmacêutica. Ainda, for
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103/214 mação de agregado pode causar outros problemas tais como bloqueio de tubulação, membranas ou bombas quando a composição farmacêutica contendo polipeptídeo é administrada usando um sistema de infusão.
[00428] As composições da invenção são composições farmacêuticas líquidas estabilizadas cujos componentes terapeuticamente ativos incluem um polipeptídeo que possivelmente exibe formação de agregado durante armazenamento em formulações farmacêuticas líquidas.
[00429] Por formação de agregado quer dizer uma interação física entre as moléculas de polipeptídeo que resulta na formação de oligômeros, que podem permanecer solúveis, ou agregados grandes visíveis que participam da solução.
[00430] Por durante armazenamento quer dizer uma composição ou formulação farmacêutica líquida que, uma vez preparada, não é imediatamente administrada a um indivíduo. Ao invés disso, seguindo a preparação, ela é embalada para armazenamento, ou em uma forma líquida, em um estado congelado ou em uma forma seca para reconstituição posterior em uma forma líquida ou outra forma adequada para administração a um indivíduo.
[00431] As composições farmacêuticas da invenção podem compreender ainda uma quantidade de uma base de aminoácido suficiente para diminuir formação de agregado pelo polipeptídeo durante armazenamento da composição.
[00432] Por base de aminoácjdo quer dizer um aminoácido ou uma combinação de aminoácidos, em que qualquer dado aminoácido está presente ou em sua forma de base livre ou em sua forma de sal. Em que uma combinação de aminoácidos for usada, todos os aminoácidos podem estar presentes em suas formas de base livre, todos podem estar presentes em suas formas de sal ou alguns podem estar presentes em suas formas de base livre enquanto outros estão pre
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104/214 sentes em suas formas de sal. Em uma modalidade, os aminoácidos usados na preparação das composições da invenção são aqueles carregando uma cadeia lateral carregada, tal como arginina, lisina, ácido aspártico e ácido glutâmico. Qualquer estereoisômero (isto é, L, D ou uma mistura dos mesmos) de um aminoácido particular (por exemplo, metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina e misturas dos mesmos) ou combinações desses estereoisômeros, pode estar presente nas composições farmacêuticas da invenção contanto que o aminoácido particular esteja presente em sua forma de base livre ou sua forma de sal. Em uma modalidade, o estereoisômero L é usado. As composições da invenção podem também ser formuladas com derivados desses aminoácidos. Derivados de arginina adequados incluem, por exemplo, aminoguanidina, ornitina e N-monoetil L-arginina, derivados de metionina adequados incluem etionina e butionina e derivados de cisteína adequados incluem S-metil-L cisteína. Como com os outros aminoácidos, os derivados de aminoácido são incorporados às composições ou em sua forma de base livre ou sua forma de sal. Em outra modalidade da invenção, os aminoácidos ou derivados de aminoácido dos mesmos são usados em uma concentração que é suficiente para prevenir ou retardar agregação da proteína.
[00433] Em outra modalidade da invenção, a formulação compreende ainda um tensoativo. Em outra modalidade da invenção, a formulação compreende ainda inibidores de protease. O uso de um inibidor de protease é particularmente útil em composições farmacêuticas compreendendo zimógenos de proteases a fim de inibir autocatálise.
[00434] É possível que outros ingredientes possam estar presentes na formulação farmacêutica de polipeptídeo da presente invenção. Tais ingredientes adicionais podem incluir agentes umectantes, emulsificantes, antioxidantes, agentes de volume, modificadores de tonici
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105/214 dade, agentes de quelação, íons de metal, veículos oleaginosos, proteínas (por exemplo, albumina de soro humano, gelatina ou proteínas) e um zwitteríon (por exemplo, um aminoácido tal como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina). Tais ingredientes adicionais, com certeza, não devem afetar de modo adverso à estabilidade geral da formulação farmacêutica da presente invenção.
[00435] As composições farmacêuticas contendo um polipeptídeo de acordo com a presente invenção podem ser administradas a um paciente com necessidade de tal tratamento em vários sítios, por exemplo, em sítios tópicos, por exemplo, sítios da pele e mucosa, em sítios que by-pass absorção, por exemplo, administração em uma artéria, em uma veia, no coração e em sítios que envolvem absorção, por exemplo, administração à pele, sob a pele, em um músculo ou no abdômen.
[00436] Administração de composições farmacêuticas de acordo com a invenção pode ser através de várias vias de administração, por exemplo, lingual, sublingual, bucal, na boca, oral, no estômago e intestino, nasal, pulmonar, por exemplo, através dos bronquíolos e alvéolos ou uma combinação dos mesmos, epidermal, dermal, transdermal, vaginal, retal, ocular, por exemplo, através da conjuntiva, uretal e parenteral a pacientes com necessidade de tal tratamento.
[00437] As composições da presente invenção podem ser administradas em várias formas de dosagem, por exemplo, como soluções, suspensões, emulsões, microemulsões, emulsões múltiplas, espumas, bálsamos, pastas, emplastros, unguentos, comprimidos, comprimidos revestidos, enxaguatórios, cápsulas, por exemplo, cápsulas de gelatina dura e cápsulas de gelatina macia, supositórios, cápsulas retais, gotas, géis, sprays, pós, aerossóis, inalantes, colírios, unguentos oftálmicos, enxaguatórios oftálmicos, pessários vaginais, anéis vaginais, unguentos vaginais, solução para injeção, soluções de transformação
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106/214 in situ, por exemplo, geleificação in situ, precipitação in situ, cristalização in situ, solução de infusão e implantes.
[00438] As composições da invenção podem ainda ser compostas em, ou ligadas a, por exemplo, através de interações covalentes, hidrofóbicas e eletrostáticas, um carreador de fármaco, sistema de aplicação de fármaco e sistema de aplicação de fármaco avançado a fim de aumentar mais a estabilidade do derivado de um análogo de amilina do mesmo aumenta a biodisponibilidade, aumenta a solubilidade, diminui os efeitos adversos, obtém a cronoterapia bem conhecida daqueles versados na técnica e aumenta a obediência do paciente ou qualquer combinação dos mesmos.
[00439] As composições da presente invenção são úteis na formulação de sólidos, semissólidos, pós e soluções para administração pulmonar do derivado de um análogo de amilina, usando, por exemplo, um inalador de dose medida, inalador de pó seco e um nebulizador, todos sendo dispositivos bem conhecidos daqueles versados na técnica.
[00440] As composições da presente invenção são úteis na formulação de sistemas de aplicação de fármaco controlada, sustentada, prolongada, retardada ou lenta.
[00441] Administração parenteral pode ser realizada através de injeção subcutânea, intramuscular, intraperitoneal ou intravenosa por meio de uma seringa, opcionalmente uma seringa tipo caneta. Alternativamente, administração parenteral pode ser realizada por meio de uma bomba de infusão. Uma opção adicional é uma composição que pode ser uma solução ou suspensão para a administração do derivado de um análogo de amilina na forma de um spray nasal ou pulmonar. Como uma opção adicional, as composições farmacêuticas contendo o polipeptídeo da invenção podem também ser adaptadas para administração transdermal, por exemplo, através de injeção livre de agulha ou
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107/214 a partir de um emplastro, opcionalmente um emplastro iontoforético, ou através de administração transmucosal, por exemplo, bucal.
[00442] O polipeptídeo da presente invenção pode ser administrado através da via pulmonar em um veículo, como uma solução, suspensão ou pó seco usando qualquer um dos tipos conhecidos de dispositivos adequados para aplicação de fármaco pulmonar. Exemplos desses compreendem, mas não estão limitados a, três tipos gerais de geração de aerossol para aplicação de fármaco pulmonar, e podem incluir nebulizadores a jato ou ultrassônicos, inaladores de dose medida ou inalador de pó seco (cf. Yu J, Chien YW. Pulmonary drug delivery: Physiologic e mechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14(4) (1997) 395-453).
[00443] Em uma modalidade da invenção a formulação farmacêutica compreendendo o polipeptídeo da invenção é estável por mais de 6 semanas de uso e por mais de 3 anos de armazenamento.
[00444] Em outra modalidade da invenção, a formulação farmacêutica compreendendo o polipeptídeo da invenção é estável por mais de 4 semanas de uso e por mais de 3 anos de armazenamento.
[00445] Em outra modalidade da invenção, a formulação farmacêutica compreendendo o derivado de um análogo de amilina é estável por mais de 4 semanas de uso e por mais de dois anos de armazenamento.
[00446] Em outra modalidade da invenção a formulação farmacêutica compreendendo o derivado de um análogo de amilina é estável por mais de 2 semanas de uso e por mais de dois anos de armazenamento.
[00447] Em um aspecto, um processo para preparação de uma composição farmacêutica compreendendo o derivado de acordo com a invenção compreende mistura de um derivado de acordo com a invenção com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
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INDICAÇÕES TERAPÊUTICAS [00448] Em um aspecto o polipeptídeo de acordo com a invenção pode ser usado como um medicamento.
[00449] Em um aspecto o polipeptídeo de acordo com a invenção pode ser usado como um medicamento para o tratamento ou prevenção de hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose prejudicada, diabetes tipo 1, obesidade, hipertensão, síndrome X, dislipidemia, distúrbios cognitivos, aterosclerose, infarto do miocárdio, doença coronária cardíaca e outros distúrbios cardiovasculares, acidente vascular cerebral, síndrome do intestino inflamatório, dispepsia e úlceras gástricas.
[00450] Em um aspecto o polipeptídeo é para uso no retardo ou prevenção de progressão de doença em diabetes tipo 2.
[00451] Em um aspecto o polipeptídeo de acordo com a invenção pode ser usado como um medicamento para o tratamento de ou prevenção de obesidade.
[00452] Em um aspecto o polipeptídeo de acordo com a invenção pode ser usado como um medicamento para o tratamento ou prevenção de hipercalcemia, osteoporose ou osteíte deformante. Em um aspecto, o polipeptídeo pode ser usado como um medicamento para redução do peso corporal. Em um aspecto, o polipeptídeo pode ser usado como um medicamento para o tratamento ou prevenção de obesidade ou como um medicamento para prevenção de aumento do corpo corporal. Em um aspecto, o polipeptídeo pode ser usado como um medicamento para modificação da ingestão de alimento, tal como redução da ingestão de alimento.
[00453] Em um aspecto, o medicamento pode ser usado para diminuição da ingestão de alimento, diminuição da apoptose de célula β, aumento da função de célula β e massa de célula β e/ou para restauração da sensibilidade à glicose para células β.
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109/214 [00454] Em um aspecto, o polipeptídeo de acordo com a invenção pode ser usado para a preparação de um medicamento.
[00455] Em um aspecto, o polipeptídeo pode ser usado para a preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose prejudicada, diabetes tipo 1, obesidade, hipertensão, síndrome X, dislipidemia, distúrbios cognitivos, aterosclerose, infarto do miocárdio, doença coronária cardíaca e outros distúrbios cardiovasculares, acidente vascular cerebral, síndrome do intestino inflamatório, dispepsia e úlceras gástricas.
[00456] Em um aspecto, o polipeptídeo pode ser usado para a preparação de um medicamento para retardo ou prevenção de progressão de doença em diabetes tipo 2.
[00457] Em um aspecto, o polipeptídeo pode ser usado para a preparação de um medicamento para diminuição de ingestão de alimento, diminuição de apoptose de célula β, aumento da função de célula β e massa de célula β e/ou para restauração da sensibilidade à glicose para células β.
[00458] O tratamento com um polipeptídeo de acordo com a presente invenção pode ser também combinado com uma segunda ou mais substâncias farmacologicamente ativas, por exemplo, selecionadas de agentes antidiabéticos, agentes antiobesidade, agentes reguladores de apetite, agentes anti-hipertensivos, agentes para o tratamento e/ou prevenção de complicações resultantes de ou associadas com diabetes e agentes para o tratamento e/ou prevenção de complicações e distúrbios resultantes de ou associados com obesidade. Exemplos dessas substâncias farmacologicamente ativas são: insulina, derivado de insulina, análogos de insulina, GLP-1, derivados de GLP-1, análogos de GLP-1, derivados de oxintomodulina, sulfonilureias, biguanidas, meglitinidas, inibidores de glicosidase, antagonistas de glucagon, inividores de DPP-IV (dipeptidil peptidase-IV), inibidores de enzimas hepá
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110/214 ticas envolvidas em estimulação de gluconeogênese e/ou glicogenólise, moduladores de absorção de glicose, compostos modificando o metabolismo de lipídeo tais como agentes anti-hiperlipidêmicos como inibidores de CoA HMG (estatinas), compostos de diminuição da ingestão de alimento, agonistas de RXT e agentes agindo sobre o canal de potássio dependente de ATP das células β; Colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, sinvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida; β-bloqueadores tais como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol e metoprolol, inibidores de ACE (enzima de conversão de angiotensina) tais como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril e ramipril, bloqueadores de canal de cálcio tais como nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem e verapamil, e αbloqueadores tais como doxazosin, urapidil, prazosin e terazosin; agonistas de CART (transcrito regulado por cocaína anfetamina), antagonistas de NPY (neuropeptídeo Y), agonistas de MC4 (melanocortina), antagonistas de orexina, agonistas de TNF (fator de necrose de tumor), agonistas de CRF (fator de liberação de corticotropina), antagonistas de CRF BP (proteína de ligação a fator de liberação de corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas de β3, agonistas de MSH (hormônio de estimulação de melanócito), antagonistas de MCH (hormônio de concentração de melanócito), agonistas de CCK (colecistoquinina), inibidores de reabsorção de serotonina, inibidores de reabsorção de serotonina e noradrenalina serotonina e compostos noradrenérgicos misturados, agonistas de 5HT (serotonina), agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormônio do crescimento, compostos de liberação de hormônio do crescimento, agonistas de TRH (hormônio de liberação de tirotropina), moduladores de UCP 2 ou 3 (proteínas 2 ou 3 de não acoplamento), agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inibidores de lipase/amilase, modu
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111/214 ladores de RXR (receptor de retinoide X), agonistas de TR β; antagonistas de histamina H3, gastrina e análogos de gastrina.
[00459] Deve ser compreendido que qualquer combinação adequada dos polipeptídeos de acordo com a invenção com um ou mais dos compostos mencionados acima e opcionalmente uma ou mais substâncias farmacologicamente ativas adicionais é considerada estar dentro do escopo da presente invenção.
[00460] A invenção será agora sumarizada nos parágrafos abaixo: [00461] 1. Um polipeptídeo selecionado de:
[00462] (i) um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00463] (ii) Um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que (a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (b) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 4 opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00464] (iii) Um polipeptídeo compreendendo uma sequência de
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112/214 aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (b) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 7; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte preso a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00465] (iv) Um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e (b) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 4; e (c) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μΜ ou mais em pH 7; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte preso a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido. [00466] (v) Um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2, em que:
(a) o dito análogo compreende um resíduo prolina na posição 37;
(b) em que a numeração da sequência de aminoácido do análogo corresponde à sequência de numeração de aminoácido de SEQ ID NO: 2; e
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113/214 (c) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de 100 μM ou mais em pH 4; e (d) o dito polipeptídeo tem uma solubilidade de cerca de
100 μΜ ou mais em pH 7; e o dito polipeptídeo tem uma estabilidade física de cerca de 25 horas ou mais em um ensaio de fibrilogênese; e opcionalmente o polipeptídeo tem pelo menos um substituinte ligado a pelo menos um de seus resíduos de aminoácido.
[00467] 2. O polipeptídeo de acordo com o parágrafo 1, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 14 que é independentemente selecionado de qualquer um de asparagina e ácido glutâmico; preferivelmente ácido glutâmico.
[00468] 3. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 e 2, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 17 que é independentemente selecionado de qualquer um de histidina, arginina, lisina e valina; preferivelmente histidina e arginina; mais preferivelmente arginina.
[00469] 4. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 35 que é independentemente selecionado de qualquer um de histidina, arginina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, asparagina e glutamina; preferivelmente histidina, asparagina, glutamina e ácido glutâmico; mais preferivelmente histidina, glutamina e asparagina; mais preferivelmente asparagina.
[00470] 5. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 1, o qual é deletado ou independentemente selecionado de qualquer um de alanina, cisteína, ácido glutâmico, glicina, histidina, arginina, serina e lisina; preferivelmente glicina, histidina, arginina e lisina; mais preferivelmente lisina.
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114/214 [00471] 6. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 3 que é independentemente selecionado de qualquer um de glicina, histidina, arginina, serina e asparagina; preferivelmente asparagina.
[00472] 7. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 18 que é independentemente selecionado de qualquer um de arginina, lisina e histidina; preferivelmente histidina.
[00473] 8. Polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 21 que é independentemente selecionado de qualquer um de alanina, lisina, glutamina, serina, treonina e asparagina; preferivelmente glutamina e asparagina; mais preferivelmente asparagina.
[00474] 9. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 22 que é independentemente selecionado de qualquer um de ácido glutâmico, glutamina, serina, treonina e asparagina; preferivelmente serina e asparagina; mais preferivelmente asparagina.
[00475] 10. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 26 que é independentemente selecionado de qualquer um de prolina, arginina e isoleucina, preferivelmente asparagina.
[00476] 11. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o dito análogo compreende um resíduo na posição 31, o qual é independentemente selecionado de qualquer um de serina, ácido glutâmico, ácido aspártico e asparagina; preferivelmente ácido aspártico e asparagina; mais preferivelmente asparagina.
[00477] 12. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o análogo compreende um resíduo de aminoácido na posição 14, o qual é ácido glutâmico, um resíduo na posição 17 que é
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115/214 arginina e um resíduo na posição 37 que é prolina.
[00478] 13. O polipeptídeo de acordo com os parágrafos 1 a 11, em que o análogo compreende um resíduo de aminoácido na posição 14 que é ácido glutâmico, um resíduo na posição 17 que é histidina e um resíduo na posição 37 que é prolina.
[00479] 14. O polipeptídeo de acordo com os parágrafos 1 a 11, em que o análogo compreende um resíduo de aminoácido na posição 14, o qual é ácido glutâmico, um resíduo na posição 17 que é histidina e um resíduo na posição 35 que é glutamina e um resíduo na posição 37 que é prolina.
[00480] 15. Os polipeptídeos de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que os resíduos restantes são os mesmos que na SEQ ID NO: 2.
[00481] 16. Os polipeptídeos de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o análogo compreende os mesmos resíduos de aminoácido nas posições 2, 4 a 16, 19, 20, 23 a 25, 27 a 30, 32 a 34 e 36 que os resíduos nas posições 2, 4 a 16, 19, 20, 23 a 25, 27 a 30, 32 a 34 e 36 de SEQ ID NO: 2.
[00482] 17. Um polipeptídeo de acordo com o parágrafo 1 compreendendo uma sequência de aminoácido que é um análogo de SEQ ID NO: 2 de fórmula (I): Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa14-PheLeu- Xaa17-Xaa18-Ser-Ser- Xaa21- Xaa22- Phe- Gly- Pro- Xaa26Leu-Pro-Pro-Thr- Xaa31-Val-Gly-Ser- Xaa35-Thr-Pro;
Fórmula (I) (SEQ ID No:3) em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Asn; Xaa14 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
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Xaai7 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys e Val;
Xaai8 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln, Ser e Asn; Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn; Xaa26 é independentemente selecionado de Pro, Arg e Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp, Gln e Glu;
e em que o terminal C pode ser opcionalmente derivatizado.
[00483] 18. Um polipeptídeo de acordo com o parágrafo 17, em que
Xaa14 é Glu.
[00484] 19. Um polipeptídeo de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 e 18, em que Xaa17 é Arg ou His.
[00485] 20. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos 17 a 19, em que Xaa35 é Asn ou Gln.
[00486] 21. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos 17 a 19, em que:
Xaa1 é Lys;
Xaa3 é Asn;
Xaa14 é Glu
Xaa17 é His ou Arg;
Xaa18 His;
Xaa21 Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é Asn;
Xaa35 é Asn.
[00487] 22. Um polipeptídeo de acordo com o parágrafo 17, em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de His, Arg e Lys; Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His e Asn;
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Xaai4 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaai7 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ser e Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp, Gln e Glu.
[00488] 23. Um polipeptídeo de acordo com o parágrafo 17, em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de His e Asn;
Xaa14 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln, Ser e Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro e Ile;
Xaa31 é Asn;
Xaa35 é Asn;
[00489] 24. Um polipeptídeo de acordo com o parágrafo 17, em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é Asn;
Xaa14 é Glu;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Thr e Asn;
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118/214
Xaa26 é Ile;
Xaa3i é Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de Gln, Gly e Asn;
[00490] 25. Um polipeptídeo de acordo com o parágrafo 17, em que
Xaa1 é deletado;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly e Asn;
Xaa14 é Glu;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de Asn, Gln e Glu.
[00491] 26. Um polipeptídeo de acordo com o parágrafo 17, em que
Xaa1 é Lys;
Xaa3 é Asn;
Xaa14 é Glu;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Lys, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln e Ser;
Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro e Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de Gln, Glu e Asn.
[00492] 27. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores compreendendo uma amida C-terminal.
[00493] 28. O polipeptídeo de acordo com o parágrafo 27, em que a amida C-terminal é de Fórmula (II):
(II) C(O)NR1R2
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119/214 em que R1 e R2 são independentemente selecionados de H e alquila. Preferivelmente, R1 e R2 são ambos H.
[00494] 29. O polipeptídeo de acordo com o parágrafo 28, em que
R1 e R2 são ambos H.
[00495] 30. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que pelo menos um substituinte é ligado a um dos resíduos amina.
[00496] 31. O polipeptídeo de acordo com o parágrafo 30, em que o substituinte é selecionado de um grupo hidrocarbila, um grupo hidroxila e um átomo de halogênio.
[00497] 32. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos 30 e 31, em que o grupo substituinte é de fórmula (II):
(II) Ln-Y em que
L é um ligante;
N = 0 ou 1
Y é uma porção de ligação à albumina.
[00498] 33. O polipeptídeo de acordo com o parágrafo 32, em que a porção de ligação à albumina é um grupo acila selecionado de:
(a) CH3(CH2)rCO-, em que r é um inteiro de 12 a 20;
(b) HOOC(CH2)sCO-, em que s é um inteiro de a partir de 12 a 22 ou s é um inteiro de a partir de 12 a 18 ou s é 16 a 18 ou preferivelmente s é 18.
[00499] 34. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos 32 e 33, em que o ligante é selecionado do grupo consistindo em yGlu, yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu-yGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-yGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-yGlu, His-His-yGlu, Gly, Gly-yGlu, Ser, Ser-yGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-yGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-yGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-SerGly e Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-yGlu, yGlu-OEG, yGlu-OEG-OEG e
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OEG, preferivelmente o ligante é selecionado de yGlu, yGlu-yGlu, yGluOEG, yGlu-OEG-OEG e OEG, mais preferivelmente o ligante é yGlu. [00500] 35. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que o grupo substituinte é selecionado do grupo apresentando na Tabela 1 (apresentada anterior).
[00501] 36. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que um substituinte é ligado ao grupo α-amino do resíduo de aminoácido N-terminal ou a um resíduo Lys.
[00502] 37. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior, em que um substituinte é ligado ao resíduo de aminoácido na posição 1 apenas.
[00503] 38. O polipeptídeo de acordo com quaisquer parágrafos anteriores selecionados do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 2 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 3 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 4 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 5 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 6 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 7 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 8 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 9 (apresentada antes); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 10 (apresentada depois); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 11 (apresentada depois); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 12 (apresentada depois); ou do grupo consistindo em qualquer
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121/214 um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 13 (apresentados depois); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 14 (apresentada depois); ou do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 15 (apresentada depois).
[00504] 39. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores selecionado do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 8 (apresentada antes). [00505] 40. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos selecionados do grupo consistindo em qualquer um dos polipeptídeos apresentados na Tabela 9 (apresentada antes).
[00506] 41. O polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anteriores, em que o polipeptídeo é:
N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida [Exemplo 53].
[00507] 42. Uma composição farmacêutica compreendendo um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00508] 43. A composição farmacêutica de acordo com o parágrafo
42, a qual é adequada para administração parenteral.
[00509] 44. Um processo para a preparação de uma composição farmacêutica de acordo com o parágrafo 42 ou parágrafo 43 compreendendo mistura de um polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00510] 45. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores para uso como um medicamento.
[00511] 46. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores para uso no tratamento ou prevenção de hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose prejudicada, diabetes tipo 1,
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122/214 obesidade, hipertensão, síndrome X, dislipidemia, distúrbios cognitivos, aterosclerose, infarto do miocárdio, doença coronária cardíaca e outros distúrbios cardiovasculares, síndrome do intestino inflamatório, dispepsia e úlceras gástricas.
[00512] 47. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores para uso no retardo ou prevenção de progressão de doença em diabetes tipo 2.
[00513] 48. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores para uso na prevenção ou tratamento de obesidade.
[00514] 49. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores para uso na diminuição de ingestão de alimento, diminuição de apoptose de célula β, aumento da função de célula β e massa de célula β e/ou para restauração de sensibilidade à glicose para células β.
[00515] 50. Um polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores para uso no tratamento ou prevenção de hipercalcemia, osteoporose ou osteíte deformante.
[00516] 51. Um método de tratamento ou prevenção de hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose prejudicada, diabetes tipo 1, obesidade, hipertensão, síndrome X, dislipidemia, distúrbios cognitivos, aterosclerose, infarto do miocárdio, doença coronária cardíaca e outros distúrbios cardiovasculares, síndrome do intestino inflamatório, dispepsia e úlceras gástricas através da administração de um polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior a um animal.
[00517] 52. Método de retardo ou prevenção de progressão de doença em diabetes tipo 2 através da administração a um polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior a um animal.
[00518] 53. Método de diminuição de ingestão de alimento, diminuição de apoptose de célula β, aumento da função de célula β e massa de célula β e/ou para restauração da sensibilidade à glicose para célu
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123/214 las β através da administração de um polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior a um animal.
[00519] 54. Um método de tratamento ou prevenção de hipercalcemia, osteoporose ou osteíte deformante através da administração de um polipeptídeo de acordo com qualquer parágrafo anterior a um animal.
[00520] 55. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o dito polipeptídeo tem uma EC50 no receptor de amilina humana de cerca de 1800 pM ou menos.
[00521] 56. O polipeptídeo de acordo com qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o dito polipeptídeo tem uma EC50 no receptor de calcitonina humana de cerca de 1800 pM ou menos.
[00522] A invenção será sumarizada adicionalmente nos parágrafos adicionais abaixo:
[00523] 1. Um derivado de amilina, o qual é um análogo de amilina tendo até dez modificações de resíduos de aminoácido comparado com a SEQ ID NO: 2 e tendo um substituinte ligado ao grupo α-amino do resíduo de aminoácido N-terminal ou a um resíduo Lys no análogo de amilina, em que o dito substituinte compreende uma porção de ligação à albumina e em que [00524] a. o resíduo de aminoácido na posição 14 do análogo de amilina é Glu ou [00525] b. o resíduo de aminoácido na posição 35 do análogo de amilina é His, Arg, Lys, Asp ou Glu ou [00526] c. o resíduo de aminoácido na posição 37 do análogo de amilina é Pro.
[00527] 2. Um derivado de acordo com o parágrafo 1, em que o resíduo de aminoácido na posição 14 é Glu.
[00528] 3. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-2, em que:
[00529] a. o resíduo de aminoácido na posição 14 é Glu e o amino
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124/214 ácido na posição 35 é His, Arg, Lys, Asp ou Glu ou [00530] b. o resíduo de aminoácido na posição 14 é Glu e o aminoácido na posição 37 é Pro.
[00531] 4. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-3, em que:
[00532] a. o resíduo de aminoácido na posição 14 é Glu e o resíduo de aminoácido na posição 35 é His.
[00533] 5. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-4, em que o resíduo de aminoácido na posição 17 é His.
[00534] 6. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-5, em que o análogo de amilina compreende 1,2, 3, 4, 5 ou 6 substituições.
[00535] 7. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-6, em que o aminoácido na posição 1 do análogo de amilina é substituído ou é deletado.
[00536] 8. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-7, em que o aminoácido na posição 1 é selecionado do grupo consistindo em Lys, Glu, Arg, Ala, Ser, Cys, Gly e His.
[00537] 9. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-8, em que o substituinte compreende um ligante.
[00538] 10. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-9, em que o ligante compreende 1-10 aminoácidos que são ligados ao grupo αamino do resíduo de aminoácido N-terminal ou a um resíduo Lys no análogo de amilina.
[00539] 11. Um derivado de acordo com o parágrafo 10, em que os aminoácidos são selecionados do grupo consistindo em yGlu, yGluyGlu, yGlu-yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu-yGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-yGlu, GluArg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-yGlu, His-His-yGlu, Gly, Gly-yGlu, Ser, Ser-yGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-yGlu, Ser-Ser,-GlySer-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-yGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly e SerSer-Gly-Ser-Ser-Gly-yGlu.
[00540] 12. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-11, em
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125/214 que o ligante compreende -C(O) - (CH2)i-O- [CH2CH2-O]m- (CH2)p[NHC(O) - (CH2)i-O- [(CH2)n-O]m- (CH2)p]q-NH-em que l, m, n, e p são independentemente 1-7, e q é 0-5.
[00541] 13. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-12, em que o ligante é selecionado do grupo consistindo em - C(O) - CH2 O- CH2- CH2- O- CH2- CH2- NH- ou -C(O) - CH2 - O- CH2- CH2O- CH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-O- CH2- CH2-]i-NHe -C(O) - (CH2)2-O- [CH2CH2-O]7- (CH2)2-NH-.
[00542] 14. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-13, em que o ligante é selecionado do grupo consistindo em yGlu-C(O) - CH2 - O- CH2- CH2- O- CH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-OCH2- CH2-]i-NH- e Arg-Arg-yGlu-C(O) - CH2 - O- CH2- CH2- OCH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-O- CH2- CH2-]i-NH-.
[00543] 15. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-14, em que o resíduo de ligação á albumina é um grupo acila selecionado do grupo compreendendo HOOC(CH2)sCO-, em que s é um inteiro de 14 a 20, por exemplo, 16 ou 18.
[00544] 16. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-15, em que o derivado compreende um ligante yGlu ligado ao terminal N do análogo de amilina e HOOC(CH2)isCO ou HOOC(CH2)igCO- como o resíduo de ligação à albumina e em que a sequência do análogo de amilina compreende:
a. Glu na posição 14
b. His ou Arg na posição 17
c. His na posição 35 ou Pro na posição 37.
[00545] 17. Um derivado de acordo com o parágrafo 1, em que o análogo de amilina compreende uma sequência de aminoácido de fórmula 1:
Xaa1-Cys- Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala- Glu-PheLeu- Xaa17-Xaa18-Ser-Ser- Xaa21- Xaa22- Phe- Gly- Pro- Xaa26-LeuPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 132/230
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Pro-Pro-Thr- Xaa3i-Val-Gly-Ser- Xaa35-Thr- Xaa3? Formula (1) (SEQ ID No:3) em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln, Ser e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro, Arg e Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp e Glu;
Xaa37 é independentemente selecionado de Pro e Tyr;
e em que o termina C pode ser opcionalmente derivatizado como uma amida.
[00546] 18. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17, em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de His, Arg e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ser e Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp e Glu;
Xaa37 é independentemente selecionado de Pro e Tyr.
[00547] 19. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 e 17, em que
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127/214
Xaai é deletado ou independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de His e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln, Ser e Asn;
Xaa22 é Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro e Ile;
Xaa31 é Asn;
Xaa35 é His;
Xaa37 é Tyr.
[00548] 20. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17, em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Thr e Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de Gly e Asn;
Xaa37 é Pro.
[00549] 21. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 e 17, em que
Xaa1 é deletado;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly e Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
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128/214
Xaa2i é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Gln e Asn;
Xaa26 é Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Glu e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His e Ser;
Xaa37 é independentemente selecionado de Pro e Tyr.
[00550] 22. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17, em que
Xaa1 é Lys;
Xaa3 é Asn;
Xaa17 é independentemente selecionado de His, Lys, Arg e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln e Ser;
Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro e Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Glu e Asn;
Xaa37 é independentemente selecionado de Pro e Tyr.
[00551] 23. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 7-22, em que o resíduo de ligação à albumina se liga não covalentemente à albumina.
[00552] 24. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 e 7-23, em que o resíduo de ligação à albumina tem uma afinidade de ligação com relação à albumina de soro humano que está abaixo de cerca de 10 μΜ ou abaixo de cerca de 1 μΜ.
[00553] 25. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 e 17-24, em que o resíduo de ligação à albumina compreende um grupo que pode ser negativamente carregado em pH 7,4.
[00554] 26. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 e 17-25, em que o resíduo de ligação á albumina compreende
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129/214 um grupo de ácido carboxílico.
[00555] 27. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1 e 17-26, em que o resíduo de ligação à albumina é um grupo acila selecionado do grupo compreendendo HOOC(CH2)sCO-, em que s é um inteiro de a partir de 12 a 22, por exemplo, 17, 18, 19, 20, 21 ou
22.
[00556] 28. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 27, em que s é 16 ou 18.
[00557] 29. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-28, em que o substituinte compreende um ligante.
[00558] 30. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-29, em que o ligante compreende 1-10 aminoácidos que são ligados ao grupo α-amino do resíduo de aminoácido N-terminal ou a um resíduo Lys no análogo de amilina.
[00559] 31. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-30, em que os aminoácidos são selecionados do grupo consistindo em um derivado de acordo com o parágrafo 10, em que os aminoácidos são selecionados do grupo consistindo em yGlu, yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu, yGlu-yGlu-yGlu-yGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-yGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-yGlu, His-His-yGlu, Gly, Gly-yGlu, Ser, Ser-yGlu, D-Arg-DArg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-yGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-GlySer-Ser-yGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly e Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-GlyyGlu.
[00560] 32. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-31, em que o ligante compreende yGlu.
[00561] 33. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-32, em que o ligante compreende -C(O) - (CH2)i-O- [CH2CH2-O]m(CH2)p- [NHC(O) - (CH2)i-O- [(CH2)n-O]m- (CH2)p]q-NH-em que l, m, n, e p são independentemente 1-7, e q é 0-5.
[00562] 34. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-33,
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130/214 em que o ligante é selecionado do grupo consistindo em - C(O) - CH2 - O- CH2- CH2- O- CH2- CH2- NH- ou -C(O) - CH2 - O- CH2- CH2O- CH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-O- CH2- CH2-]i-NHe -C(O) - (CH2)2-O- [CH2CH2-O]7- (CH2)2-NH-.
[00563] 35. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-34, em que o ligante é selecionado do grupo consistindo em yGlu-C(O) CH2 - O- CH2- CH2- O- CH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2O- CH2- CH2-]i-NH- e Arg-Arg-yGlu-C(O) - CH2 - O- CH2- CH2- OCH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-O- CH2- CH2-]i-NH-.
[00564] 36. Um derivado de acordo com os parágrafos 1 e 17-28, em que o ligante é yGlu-yGlu-yGlu-yGlu- C(O) - CH2 - O- CH2- CH2O- CH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-O- CH2- CH2-]i-NH-.
[00565] 37. Um derivado de acordo com o parágrafo 1, em que o derivado é selecionado do grupo consistindo em:
[00566] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00567] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00568] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida, [00569] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida, [00570] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00571] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 137/230
131/214 carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00572] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida, [00573] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00574] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida, [00575] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]pramlintida, [00576] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida, [00577] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]pramlintida, [00578] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida, [00579] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18]-pramlintida, [00580] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida, [00581] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 138/230
132/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00582] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00583] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00584] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida, [00585] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Arg35]pramlintida, [00586] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Arg3,Glu14,His17]pramlintida, [00587] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida [00588] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,
Arg35]-pramlintida [00589] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida, [00590] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00591] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, [00592] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 139/230
133/214 [00593] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17]-pramlintida, [00594] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00595] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00596] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00597] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, [00598] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, [00599] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17]pramlintida, [00600] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His29]pramlintida, [00601] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-DArg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00602] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-ArgPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 140/230
134/214 [Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida, [00603] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser[Gly1,Glu14,His17]-pramlintida, [00604] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00605] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00606] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00607] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][des1,Glu14,His17]-pramlintida, [00608] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00609] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00610] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, [00611] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00612] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00613] N-alfa-{(S)-4-Carbóxi-4-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}-[des1,Glu14,His17]pramlintida, [00614] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 141/230
135/214 [00615] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida, [00616] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00617] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, [00618] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu10,Glu14,His17]-pramlintida, [00619] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00620] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00621] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00622] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, [00623] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00624] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00625] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00626] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00627] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]-pramlintida, [00628] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 142/230
136/214 [Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00629] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00630] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00631] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida, [00632] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00633] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, [00634] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00635] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00636] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Ser21,Lys25]-pramlintida, [00637] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys25]-pramlintida, [00638] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 143/230
137/214 [00639] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00640] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00641] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, [00642] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, [00643] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00644] N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys17]pramlintida, [00645] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00646] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00647] N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida, [00648] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Pro37]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 144/230
138/214 pramlintida, [00649] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00650] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Pro37]-pramlintida, [00651] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00652] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00653] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00654] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00655] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00656] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00657] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida, [00658] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00659] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00660] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 145/230
139/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00661] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]-pramlintida, [00662] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]-pramlintida, [00663] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]-pramlintida, [00664] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00665] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00666] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00667] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Pro37]-pramlintida, [00668] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00669] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00670] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00671] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 146/230
140/214 [00672] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00673] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00674] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00675] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00676] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg35]-pramlintida, [00677] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]-pramlintida, [00678] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]-pramlintida, [00679] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]-pramlintida, [00680] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]-pramlintida, [00681] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)pramlintida, [00682] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, [00683] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 147/230
141/214 [His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, [00684] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00685] N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]pramlintida [00686] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida, [00687] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00688] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00689] N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00690] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys25]pramlintida, [00691] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida, [00692] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Asp21,His35]pramlintida, [00693] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 148/230
142/214 pramlintida, [00694] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida, [00695] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00696] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,His35]-pramlintida, [00697] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, [00698] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, [00699] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida, [00700] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00701] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00702] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 149/230
143/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00703] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00704] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00705] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, [00706] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00707] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18,Pro37]pramlintida, [00708] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, [00709] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00710] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 150/230
144/214 [00711] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida, [00712] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00713] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Arg-[Glu14,Arg17,His35,Pro37]pramlintida, [00714] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida, [00715] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, [00716] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida, [00717] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00718] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]-pramlintida, [00719] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00720] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 151/230
145/214 pramlintida, [00721] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, [00722] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00723] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00724] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00725] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, [00726] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00727] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00728] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00729] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00730] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 152/230
146/214 [Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, [00731] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida, [00732] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida, [00733] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida, [00734] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]pramlintida, [00735] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro 37]-pramlintida, [00736] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp21,Pro37]pramlintida, [00737] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp35,Pro37]pramlintida, [00738] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp31,Pro37]pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 153/230
147/214 [00739] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp22,Pro37]pramlintida, [00740] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Asp3,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00741] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, [00742] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino]etóxi}etóxi)acetil][Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida.
[00743] 38. Uma composição farmacêutica compreendendo um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00744] 39. A composição farmacêutica de acordo com o parágrafo
38, a qual é adequada para administração parenteral.
[00745] 40. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para uso como um medicamento.
[00746] 41. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para uso como um medicamento para o tratamento ou prevenção de hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose prejudicada, diabetes tipo 1, obesidade, hipertensão, síndrome X, dislipidemia, distúrbios cognitivos, aterosclerose, infarto do miocárdio, doença coronária cardíaca e outros distúrbios cardiovasculares, acidente vascular cerebral, síndrome do intestino inflamatório, dispepsia e úlceras gástricas.
[00747] 42. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para uso como um medicamento para retardo ou prevenção de progressão de doença em diabetes tipo 2.
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148/214 [00748] 43. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para uso como um medicamento para diminuição da ingestão de alimento, diminuição da apoptose de célula β, aumento da função de célula β e massa de célula β e/ou para restauração da sensibilidade à glicose para células β.
[00749] 44. Uso de um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para a preparação de um medicamento.
[00750] 45. Uso de um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para a preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerância à glicose prejudicada, diabetes tipo 1, obesidade, hipertensão, síndrome X, dislipidemia, distúrbios cognitivos, aterosclerose, infarto do miocárdio, doença coronária cardíaca e outros distúrbios cardiovasculares, acidente vascular cerebral, síndrome do intestino inflamatório, dispepsia e úlceras gástricas.
[00751] 46. Uso de um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para a preparação de um medicamento para retardo ou prevenção de progressão de doença em diabetes tipo 2.
[00752] 47. Uso de um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 para a preparação de um medicamento para tratamento de obesidade, diminuição da ingestão de alimento, diminuição de apoptose de célula β, aumento de função da célula β e massa de célula β e/ou para restauração de sensibilidade à glicose para células β.
[00753] 48. Um processo para preparação de uma composição farmacêutica de acordo com os parágrafos 38-39 compreendendo mistura de um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-37 com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00754] 49. Derivado de amilina de acordo com os exemplos.
[00755] A invenção será melhor sumarizada nos parágrafos adicioPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 155/230
149/214 nais abaixo:
[00756] 1. Um derivado de amilina, o qual é um análogo de amilina tendo até dez modificações de resíduos de aminoácido comparado com SEQ ID NO: 2 e tendo um substituinte ligado ao grupo α-amino do resíduo de aminoácido N-terminal ou a um resíduo Lys no análogo de amilina, em que o dito substituinte compreende uma porção de ligação à albumina, em que
a. o resíduo de aminoácido na posição 14 do análogo de amilina é Glu ou
b. o resíduo de aminoácido na posição 35 do análogo de amilina é His, Arg, Lys, Asp ou Glu ou
c. o resíduo de aminoácido na posição 37 do análogo de amilina é Pro.
[00757] 2. Um derivado de acordo com o parágrafo 1, em que o resíduo de aminoácido na posição 14 é Glu.
[00758] 3. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-2, em que
c. o resíduo de aminoácido na posição 14 é Glu e o aminoácido na posição 35 é His, Arg, Lys, Asp ou Glu ou
d. o resíduo de aminoácido na posição 14 é Glu e o aminoácido na posição 37 é Pro.
[00759] 4. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-4, em que o resíduo de aminoácido na posição 17 é His.
[00760] 5. Um derivado de acordo com o parágrafo 1, em que o análogo de amilina compreende uma sequência de aminoácido de fórmula 1:
Xaa1-Cys- Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-PheLeu- Xaa17-Xaa18-Ser-Ser- Xaa21- Xaa22- Phe- Gly- Pro- Xaa26-LeuPro-Pro-Thr- Xaa31-Val-Gly-Ser- Xaa35-Thr- Xaa37
Fórmula (1) (SEQ ID No:3) em que
Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu,
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150/214
Gly, His, Arg, Ser e Lys;
Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Asn; Xaai7 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys e Val;
Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln, Ser e Asn;
Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn;
Xaa26 é independentemente selecionado de Pro, Arg e Ile;
Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn;
Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp e Glu;
Xaa37 é independentemente selecionado de Pro e Tyr;
e em que o terminal C pode ser opcionalmente derivatizado como uma amida.
[00761] 6. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-5, em que o substituinte compreende um ligante tendo 1-10 aminoácidos que são ligados ao grupo α-amino do resíduo de aminoácido N-terminal ou a um resíduo Lys no análogo de amilina.
[00762] 7. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-6, em que o ligante compreende yGlu.
[00763] 8. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-7, em que o ligante é selecionado do grupo consistindo em yGlu-C(O) - CH2 - OCH2- CH2- O- CH2- CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-O- CH2CH2-]i-NH- e Arg-Arg-yGlu-C(O) - CH2 - O- CH2- CH2- O- CH2CH2 - [NHC(O) - CH2- O- CH2- CH2-O- CH2- CH2-]i-NH-.
[00764] 9. Um derivado de acordo com os parágrafos 1-8, em que o derivado compreende um ligante yGlu ligado ao terminal N de um análogo de amilina e HOOC(CH2)i8CO ou HOOC(CH2)i6CO como o resíduo de ligação à albumina e em que a sequência do análogo de amilina compreende:
a. Glu na posição 14
b. His ou Arg na posição 17
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c. His na posição 35 ou Pro na posição 37.
[00765] 10. Um derivado de acordo com o parágrafo 1, em que o derivado é selecionado do grupo consistindo em:
[00766] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00767] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00768] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida, [00769] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida, [00770] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00771] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00772] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida, [00773] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00774] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 158/230
152/214 [00775] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]pramlintida, [00776] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida, [00777] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]pramlintida, [00778] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida, [00779] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18]-pramlintida, [00780] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida, [00781] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00782] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00783] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, [00784] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida, [00785] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Arg35]pramlintida, [00786] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 159/230
153/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Arg3,Glu14,His17]pramlintida, [00787] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida [00788] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,
Arg35]-pramlintida [00789] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida, [00790] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00791] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, [00792] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida, [00793] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17]-pramlintida, [00794] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, [00795] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00796] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00797] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 160/230
154/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, [00798] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, [00799] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17]pramlintida, [00800] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His29]pramlintida, [00801] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00802] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]pramlintida, [00803] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser[Gly1,Glu14,His17]-pramlintida, [00804] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00805] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00806] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, [00807] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 161/230
155/214 [00808] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00809] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00810] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, [00811] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00812] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, [00813] N-alfa-{(S)-4-Carbóxi-4-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}-[des1,Glu14,His17]pramlintida, [00814] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida, [00815] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida, [00816] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00817] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, [00818] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu10,Glu14,His17]-pramlintida, [00819] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00820] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00821] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 162/230
156/214 [00822] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, [00823] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00824] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00825] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00826] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00827] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]-pramlintida, [00828] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00829] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00830] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00831] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida, [00832] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00833] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 163/230
157/214 [00834] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00835] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, [00836] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Ser21,Lys25]-pramlintida, [00837] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25]-pramlintida, [00838] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida, [00839] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00840] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00841] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, [00842] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, [00843] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00844] N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys17]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 164/230
158/214 [00845] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00846] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00847] N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida, [00848] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00849] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00850] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Pro37]-pramlintida, [00851] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00852] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00853] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00854] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00855] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00856] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 165/230
159/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00857] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida, [00858] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, [00859] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00860] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00861] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]-pramlintida, [00862] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]-pramlintida, [00863] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]-pramlintida, [00864] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00865] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00866] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00867] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Pro37]-pramlintida, [00868] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,Pro37]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 166/230
160/214 pramlintida, [00869] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00870] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00871] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]pramlintida, [00872] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00873] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Pro37]-pramlintida, [00874] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00875] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00876] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg35]-pramlintida, [00877] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]-pramlintida, [00878] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]-pramlintida, [00879] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]-pramlintida, [00880] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 167/230
161/214 [00881] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)pramlintida, [00882] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, [00883] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, [00884] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, [00885] N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]pramlintida [00886] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida, [00887] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00888] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00889] N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [00890] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys25]-pramlintida, [00891] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida,
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 168/230
162/214 [00892] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Asp21,His35]pramlintida, [00893] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]pramlintida, [00894] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida, [00895] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00896] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,His35]-pramlintida, [00897] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]pramlintida, [00898] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, [00899] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida, [00900] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00901] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 169/230
163/214 [Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00902] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00903] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, [00904] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00905] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, [00906] N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00907] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18,Pro37]pramlintida, [00908] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, [00909] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, [00910] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida, [00911] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó
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164/214 xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida, [00912] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, [00913] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Arg-[Glu14,Arg17,His35,Pro37]pramlintida, [00914] N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida, [00915] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, [00916] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida, [00917] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00918] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]-pramlintida, [00919] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00920] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00921] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, [00922] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 171/230
165/214 carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00923] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00924] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00925] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, [00926] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00927] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00928] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, [00929] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00930] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, [00931] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida, [00932] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 172/230
166/214 heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida, [00933] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida, [00934] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]pramlintida, [00935] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro 37]-pramlintida, [00936] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp21,Pro37]pramlintida, [00937] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp35,Pro37]pramlintida, [00938] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp31,Pro37]pramlintida, [00939] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp22,Pro37]pramlintida, [00940] N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Asp3,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, [00941] N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida,
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167/214 [00942] N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etóxi}etóxi)acetil]-[Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida.
[00943] 11. Uma composição farmacêutica compreendendo um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-10 e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00944] 12. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-10 para uso como um medicamento.
[00945] 13. Um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-10 para uso como um medicamento para tratamento de obesidade, para diminuição da ingestão de alimento, diminuição de apoptose de célula β, aumento da função de célula β e massa de célula β e/ou para restauração de sensibilidade à glicose para células β.
[00946] 14. Uso de um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-10 para a preparação de um medicamento.
[00947] 15. Processo para preparação de uma composição farmacêutica compreendendo mistura de um derivado de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-10 com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00948] A presente invenção será agora descrita apenas a título de exemplos.
EXEMPLOS [00949] Os polipeptídeos preparados são mostrados na Tabela 10.
Tabela 10
Exemplo No. Nome
1 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
2 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
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Exemplo No. Nome
3 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida
4 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [des1 ,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21 ,Gln22,Glu31 ,Gly35]-pramlintida
5 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
6 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida
7 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida
8 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida
9 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida
10 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida
11 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1 ,Glu14,His17]-pramlintida
12 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1 ,Glu14,Arg17]-pramlintida
14 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida
15 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1 ,Glu14,Arg18]-pramlintida
16 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida
17 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His- [His1 ,Glu14,His17]-pramlintida
18 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1 ,Glu14,His17]-pramlintida
19 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida
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169/214
Exemplo No. Nome
20 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,Glu14]-pramlintida
21 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,Glu14,His17,Arg35]-pramlintida
22 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,Arg3,Glu14,His17]-pramlintida
23 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]- [His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida
24 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,Ar g35]-pramlintida
25 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Arg1,Glu14,His17]-pramlintida
26 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Glu14,His17]-pramlintida
27 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17]-pramlintida
28 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [des1 ,Glu14,His17]-pramlintida
29 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu1,Glu14,His17]-pramlintida
30 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
31 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
32 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida
33 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida
34 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida
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170/214
Exemplo No. Nome
35 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,His3,Glu14,His17]-pramlintida
36 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1,Glu14,His17,His29]-pramlintida
37 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
38 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida
39 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser- Gly-Ser-Ser-[Gly1,Glu14,His17]-pramlintida
40 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [His1 ,Glu14,His17]-pramlintida
41 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Glu14,His17]-pramlintida
42 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]-Glu- [Glu14,His17]-pramlintida
43 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida
44 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser- Gly-Ser-Ser-Gly-[His1,Glu14,His17]-pramlintida
45 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1 ,Glu14,His17]-pramlintida
46 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17]-pramlintida
47 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]-His- [His1 ,Glu14,His17]-pramlintida
48 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]- [His1 ,Glu14,His17]-pramlintida
49 N-alfa-{(S)-4-Carbóxi-4-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]butiril}-[des1,Glu14,His17]-pramlintida
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Exemplo No. Nome
50 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17]-pramlintida
51 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17]-pramlintida
52 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
53 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
54 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu10,Glu14,His17]-pramlintida
55 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
56 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
57 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida
58 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida
59 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
60 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]-Glu- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
61 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida
62 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]-Glu- [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida
63 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [His1 ,Glu14,His17,Ser21 ,Glu35]-pramlintida
64 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
65 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 178/230
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Exemplo No. Nome
66 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
67 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
68 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His- [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida
69 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His- [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida
70 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]-His- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
71 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]-His- [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida
72 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Ser21,Lys25]-pramlintida
73 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu 14,His17,Lys25]-pramlintida
74 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida
75 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [des1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
76 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
77 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida
78 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida
79 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
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173/214
Exemplo No. Nome
80 N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys17]-pramlintida etó-
81 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
82 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] xi}etóxi)acetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida etó-
83 N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxiheptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida etó-
84 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
85 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
86 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Pro37]-pramlintida
87 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
88 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
89 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
90 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
91 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
92 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
93 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His35]-pramlintida
94 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi-heptadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,His35]-pramlintida
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 180/230
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Exemplo No. Nome
95 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
96 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
97 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Arg1,Pro37]-pramlintida
98 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Arg1,His35]-pramlintida
99 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,His35]-pramlintida
100 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
101 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
102 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida
103 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Pro37]-pramlintida
104 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
105 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Gly1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
106 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
107 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Ser1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
108 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [des1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida
109 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1 ,Glu14,Pro37]-pramlintida
110 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 181/230
175/214
Exemplo No. Nome
111 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
112 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Arg35]-pramlintida
113 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Lys35]-pramlintida
114 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,His36]-pramlintida
115 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,His34]-pramlintida
116 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,His32]-pramlintida
117 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida
118 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida
119 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida
120 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
121 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1, Pro37]-pramlintida
122 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Pro37]-pramlintida
123 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
124 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
125 N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]- pramlintida
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 182/230
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Exemplo No. Nome
126 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(17-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys25]-pramlintida
127 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida
128 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Asp21,His35]-pramlintida
129 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Glu14,His17,Gln21,His35]-pramlintida
130 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida
131 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
132 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,His35]-pramlintida
133 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida
134 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida
135 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida
136 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida
137 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida
138 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 183/230
177/214
Exemplo No. Nome
139 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida
140 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
141 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida
142 N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
143 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [His1,Glu14,Arg18,Pro37]-pramlintida
144 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida
145 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Lys11 ,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
146 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida
147 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida
148 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida
149 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Arg- [Glu14,Arg17,His35,Pro37]-pramlintida
150 N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida
151 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 184/230
178/214
Exemplo No. Nome
152 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida
153 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
154 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Arg17,Pro37]-pramlintida
155 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
156 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
157 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida
158 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida
159 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida
160 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida
161 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida
162 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida
163 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida
164 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg- [Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida
165 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu- [Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
166 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida
167 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 185/230
179/214
Exemplo No. Nome
168 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu 14,His17,Lys21, Pro37]-pramlintida
169 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida
170 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida
171 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37 ]-pramlintida
172 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,Asp21,Pro37]-pramlintida
173 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,Asp35,Pro37]-pramlintida
174 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,Asp31,Pro37]-pramlintida
175 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,Asp22,Pro37]-pramlintida
176 N-alfa-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Asp3,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
177 N-epsilon1-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]- [Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
178 N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carbóxi-4-(19-carbóxi- heptadecanoilamino)butirilamino]etóxi}etóxi)acetilamino] etó- xi}etóxi)acetil]-[Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida
[00950] A potência in vitro dos polipeptídeos vs. receptores de amilina e receptores de calcitonina de ratos e humanos (conforme descrito no Ensaio (II)) é mostrada na Tabela 11.
Tabela 11
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 186/230
180/214
Exemplo No. EC50 do receptor de amilina de rato (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM) EC50 de receptor de amilina humano (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM)
1 64,5 379 93,4 149,7
2 602 4300,5
3 164 222
4 253,3 284,3
5 353,5 1650
6 114,7 239,8
7 77,9 131
8 126,5 278,5
9 330,5 1734 211,6 207,6
10 374,5 806,5 82,3 86,4
11 88,5 962 85,3 208,3
12 82 6764 77,5 408,5
14 99,4 469
15 83 125
16 313 197,5
17 147 221 111,3 166,4
18 187 1165 130,7 125,5
19 132 824 105,1 309,7
20 150,6 740,2
21 133 1342 192 429,2
22 261 1288 98,5 157,2
23 385 492
24 4512 1753 1441,5 672
25 118,8 184
26 475,5 1393 130 214,1
27 188 539 121,4 106,8
28 179,1 259
29 377,4 656,6
30 174,2 753,4
31 200 1309 163,5 155,5
32 401 4873 603 543
33 1032,5 484
34 271,5 198
35 286 801,5
36 167 190,5
37 132 1890 83,2 641,9
38 233 4479 148,8 1109,7
39 253 432,5
40 248 439
41 402 798,5
42 134,5 2432,5 73,9 273,5
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 187/230
181/214
Exemplo No. EC50 do receptor de amilina de rato (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM) EC50 de receptor de amilina humano (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM)
43 333,5 672
44 305,5 669
45 62,4 264,5
46 122 433 46,9 79,2
47 59 258
48 15 375 42,5 112
49 151 527
50 100,9 458,5
51 61 600
52 159,5 76 62 53,7
53 348 287 53 79,7
54 129,5 199,5
55 262 673 151,6 163,2
56 643 4974 299 352
57 510,5 2842,5 111 387
58 63 2233 116,5 605,5
59 23 148 56 60,5
60 101,5 168,5
61 38 2360 67,5 334,5
62 281 17580 172 1073
63 558,5 631,5
64 153 94,5
65 1334 5353 217 341,5
66 305 656 182,5 210
67 96,5 114,5
68 93,5 430
69 101 614,5
70 58,5 99
71 79,5 946,5
72 89 100,5
73 52 167 38,5 45
74 504 2062 184 216
75 365,5 286
76 224 1043 121,5 85,5
77 66 110
78 68,5 96,5
79 56,5 77
80 455,5 4302,5
81 95,5 70,5
82 108,5 288,5
83 1748,5 8430
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 188/230
182/214
Exemplo No. EC50 do receptor de amilina de rato (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM) EC50 de receptor de amilina humano (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM)
84 121 109 92,5 67
85 132,5 153
86 55 52,5
87 106 437 142 228
88 300 370 36 55
89 151 114 25,5 39,5
90 217 128 32,5 47,5
91 54 52
92 52 49
93 138 215 135,5 180
94 119,5 285,5
95 82 174,5
96 88 58 43 55
97 34 38,5
98 74,5 193
99 45 87,5
100 67,5 89,5
101 75 44 51,5 45,5
102 49,5 50,5
103 52,5 75
104 79,5 106,5
105 207,5 160,5
106 62,5 70,5
107 225 171
108 88 73,5
109 84,5 72,5
110 921 349
111 393,5 569,5
112 98 104
113 134 130
114 381,5 112,5
115 129 114,5
116 487 124
117 156 169
118 434,5 277
119 938 1076
120 33 2569 29,5 690,5
121 45 61,5
122 63 61
123 136 377,5
124 89,5 367
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 189/230
183/214
Exemplo No. EC50 do receptor de amilina de rato (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM) EC50 de receptor de amilina humano (pM) EC50 de receptor de CTa de rato (pM)
125 288,5 443
126 76 101
127 1093,5 480,5
128 291 265,5
129 391 247,5
130 55,5 31,5
131 858 336
132 998,5 601
133 416 142
134 390 193,5
135 103 97
136 91 45
137 120,5 72
138 1512 496,5
139 107,5 58,5
140 198,5 114
141 482,5 889
142 301 110,5
143 41,5 22
144 625 347
145 80,5 83
146 91 59,5
147 540,5 229
148 1031 319
150 344 731,5
151 209 67,5
152 129 453
153 43 41
154 53 57
155 313 526
156 66 168
157 465 547
158 1129 1188
161 232 1133
162 411 2195
163 1059 3707
164 1713 3568
166 39 34
167 203 113
168 71 85
170 90 76
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 190/230
184/214 [00951] A solubilidade dos polipeptídeos foi testada conforme descrito no Ensaio (IV) e os resultados mostrados na Tabela 12.
Tabela 12
Solubilidade (μΜ)
Exemplo No. pH 3,0 pH 4,0 pH 5,0 pH 6,0 pH 6,5 pH 7,0 pH 7,5 pH 8,0
1 >200 >200 >200 52 16 15 58 138
3 >200 >200 68 >200 >200 >200 >200 >200
4 >200 120 0 42 82 146 183 190
5 >200 >200 62 164 181 >200 >200 >200
6 >200 163 168 12 4 7 18 48
7 >200 >200 13 69 32 42 89 155
8 178 93 2 1 1 1 1 3
9 >200 116 5 >200 >200 >200 >200 >200
10 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
11 >200 >200 >200 >200 44 29 157 >200
12 >200 >200 >200 >200 45 9 26 69
14 >200 >200 >200 192 102 13 7 47
15 >200 >200 10 1 1 10 56 134
16 179 80 1 34 12 104 122 129
17 >200 >200 >200 160 66 88 >200 >200
18 >200 >200 >200 >200 153 191 >200 >200
19 >200 >200 155 175 35 6 61 158
20 >200 >200 >200 6 0 1 13 73
21 >200 >200 >200 >200 87 0 0 1
22 >200 >200 >200 >200 57 2 1 3
25 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
26 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
27 >200 >200 >200 >200 174 160 >200 >200
28 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
29 >200 >200 107 >200 >200 >200 >200 >200
30 >200 >200 69 >200 >200 >200 >200 >200
31 >200 >200 >200 >200 8 0 10 65
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 191/230
185/214
Solubilidade (μΜ)
Exemplo No. pH 3,0 pH 4,0 pH 5,0 pH 6,0 pH 6,5 pH 7,0 pH 7,5 pH 8,0
32 >200 >200 >200 >200 6 0 6 55
33 >200 >200 >200 >200 17 0 0 16
34 >200 >200 >200 >200 4 0 0 13
35 >200 >200 194 17 0 0 9 66
36 >200 >200 >200 >200 14 0 2 60
37 >200 >200 >200 >200 124 198 >200 >200
38 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
39 >200 84 52 6 4 1 25 26
40 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
41 >200 118 1 1 1 1 1 4
42 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
43 >200 >200 194 176 195 >200 >200 >200
44 >200 >200 >200 21 20 52 >200 >200
45 >200 >200 >200 188 48 42 134 >200
46 >200 >200 >200 >200 >200 169 197 >200
47 >200 >200 >200 168 87 118 >200 >200
48 >200 >200 >200 >200 177 >200 >200 >200
49 >200 >200 27 >200 >200 >200 >200 >200
50 >200 >200 183 161 132 73 62 21
51 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
52 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
53 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
54 >200 >200 >200 100 150 >200 >200 >200
55 >200 >200 >200 >200 146 102,5 108,5 146
56 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
57 >200 >200 >200 >200 >200 >200 121 80
58 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
59 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
60 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
61 >200 >200 >200 >200 >200 81 50 48
62 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 192/230
186/214
Solubilidade (μΜ)
Exemplo No. pH 3,0 pH 4,0 pH 5,0 pH 6,0 pH 6,5 pH 7,0 pH 7,5 pH 8,0
63 >200 >200 >200 1 2 75 >200 >200
64 >200 >200 >200 >200 189 91 136 >200
65 >200 >200 >200 >200 >200 176 96 89
66 >200 >200 >200 >200 155 46 77 144
67 >200 >200 >200 >200 166 15 24 60
68 >200 >200 >200 >200 170 17 6 7
69 >200 >200 >200 >200 158 6 2 24
70 >200 >200 >200 >200 69 32 52 89
71 >200 >200 >200 >200 156 37 27 26
72 >200 >200 >200 168 130 126 165 >200
73 >200 >200 >200 >200 >200 155 169 >200
74 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
75 >200 >200 >200 >200 193 >200 >200 >200
76 >200 >200 >200 45 1 4 104 >200
77 >200 >200 >200 185 23 5 33 94
78 >200 >200 >200 >200 >200 122 92 79
79 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
80 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
81 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
82 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
83 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
84 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
85 >200 >200 >200 185 64 22 47 109
86 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
87 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
88 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
89 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
90 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
91 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
92 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
93 >200 >200 >200 >200 84 74 163 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 193/230
187/214
Solubilidade (μΜ)
Exemplo No. pH 3,0 pH 4,0 pH 5,0 pH 6,0 pH 6,5 pH 7,0 pH 7,5 pH 8,0
94 >200 >200 >200 >200 >200 138 >200 >200
95 >200 >200 >200 >200 16 2 11 51
96 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
97 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
98 >200 >200 >200 85 1 1 1 1
99 >200 >200 >200 2 1 1 1 1
100 >200 >200 >200 >200 28 9 30 95
101 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
102 >200 >200 >200 >200 198 >200 >200 >200
103 >200 >200 >200 >200 >200 199 >200 >200
104 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
105 >200 >200 >200 >200 152 >200 >200 >200
106 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
107 >200 >200 >200 49 4 27 174 >200
108 >200 >200 >200 193 >200 >200 >200 >200
109 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
110 >200 >200 >200 1 1 1 1 1
111 >200 >200 >200 2 1 1 1 3
112 >200 >200 >200 >200 161 23 4 2
113 >200 >200 >200 >200 >200 >200 188 124
114 >200 >200 >200 >200 73 14 31 79
115 >200 >200 >200 >200 73 22 46 115
116 >200 >200 >200 >200 120 44 79 173
117 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
118 >200 >200 >200 >200 105 37 57 117
119 >200 >200 >200 32 3 13 114 >200
120 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 197
121 >200 >200 >200 155 127 54 157 117
122 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
123 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
124 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 194/230
188/214
Solubilidade (μΜ)
Exemplo No. pH 3,0 pH 4,0 pH 5,0 pH 6,0 pH 6,5 pH 7,0 pH 7,5 pH 8,0
125 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
127 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
128 >200 >200 >200 >200 114 140 >200 >200
129 >200 >200 >200 >200 194 >200 >200 >200
130 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
131 >200 172 150 25 27 6 4 3
132 >200 >200 >200 >200 198 142 169 >200
133 >200 >200 107 1 1 1 1 1
134 >200 >200 >200 3 1 2 3 2
135 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
136 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
137 >200 >200 >200 192 >200 >200 >200 >200
138 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
139 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
140 >200 >200 104 2 1 1 1 1
141 >200 >200 >200 84 3 2 1 1
142 >200 >200 185 118 1 1 1 1
143 >200 >200 >200 75 122 165 >200 >200
144 >200 >200 >200 47 2 1 1 1
145 >200 >200 >200 178 >200 >200 >200 >200
146 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
147 >200 >200 >200 1 1 1 1 1
148 >200 >200 >200 51 19 1 1 1
150 >200 >200 >200 >200 163 >200 >200 >200
151 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
155 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
157 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
158 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
159 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
160 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
161 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
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189/214
Solubilidade (μΜ)
Exemplo No. pH 3,0 pH 4,0 pH 5,0 pH 6,0 pH 6,5 pH 7,0 pH 7,5 pH 8,0
162 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
163 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
164 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
166 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
167 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
168 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
169 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
170 >200 >200 186 >200 >200 >200 >200 188
171 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
177 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
178 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
[00952] Os derivados de amilina foram testados quanto à estabilidade física no ensaio de Th T (Ensaio (III)) e os dados fornecidos na Tabela 13.
Tabela 13
Exemplo No. Tempo de latência ThT pH 4,0 (h) Recuperação ThT pH 4,0 (%)
1 11 0
5 4,4 0
6 14 0
7 0 0
9 >45 57
11 7,4 3
12 >45 50
15 4,7 2
17 30,3 9
20 1,7 0
21 1 89
22 2,7 14
25 2,7 0
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 196/230
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Exemplo No. Tempo de latência ThT pH 4,0 (h) Recuperação ThT pH 4,0 (%)
26 2 0
27 12,3 26
28 9,3 0
29 3 0
30 4,7 0
31 >45 94
32 >45 94
33 10 86
34 13 94
35 1,3 50
36 1,3 18
37 >45 87
38 >45 94
39 0 0
40 7 2
41 0 0
42 7,3 2
43 0 4
44 10,6 3
45 36,7 37
46 27,9 48,2
47 6 8
48 9 8
49 0 7
50 >45 85
51 28,7 73
52 >45 92,3
53 >45 96,2
54 23 42
55 37 90,6
56 16 35
57 >45 100
58 >45 97
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 197/230
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Exemplo No. Tempo de latência ThT pH 4,0 (h) Recuperação ThT pH 4,0 (%)
59 >45 97
60 10 13
61 >45 100
62 30 53
63 2 100
64 6 8
65 >45 100
66 >45 92
67 >45 88
68 >45 93
69 >45 94
70 >45 85
71 >45 97
72 10,3 57
73 >45 100
74 >45 96
75 28 0
76 >45 100
77 >45 93
78 >45 100
79 16 35
80 3 7
81 24 50
82 14 27
83 >45 97
84 25,6 100
85 >45 100
86 5 3,4
87 25 85
88 >45 87
89 >45 91
90 >45 93
91 29 0
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 198/230
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Exemplo No. Tempo de latência ThT pH 4,0 (h) Recuperação ThT pH 4,0 (%)
92 15,3 1,6
93 19 0
94 11,3 97
95 >45 89
96 >45 92
97 1,7 0
98 2,6 30
99 1,7 0
100 26 92
101 >45 98
102 3,1 2
103 1,3 2
104 23 3
105 26 48
106 9,7 2
107 19 24
108 2,7 0
109 6,3 2,4
110 1,7 0
111 >45 4
112 >45 100
113 >45 88
114 >45 89
115 >45 88
116 >45 92
117 >45 92
118 >45 81
119 >45 86
120 22 86
121 0,3 2,2
122 0,7 2,6
123 8,7 2,3
124 >45 9,3
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 199/230
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Exemplo No. Tempo de latência ThT pH 4,0 (h) Recuperação ThT pH 4,0 (%)
125 19 2,3
126 10 0
127 6 15
128 >45 96
129 24 0
130 >45 93
131 0,3 18
132 >45 100
133 >45 37
134 >45 23
135 >45 100
136 >45 100
137 29 23
138 1,3 5
139 23,6 31
140 0 6
141 0 10
142 0 25
143 6 0
144 1,3 25
145 >45 91
146 >45 87
147 1 11
148 18 5
150 >45 83
151 9 68
156 >45 99
161 >45 96
162 >45 98
163 >45 95
164 >45 95
166 1,3 2
170 >45 94
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 200/230
194/214 [00953] Os derivados de amilina foram testados com relação ao seu efeito em ensaio de Ingestão de Alimento (Ensaio (I)) e os resultados mostrados na Tabela 14.
Tabela 14
Exemplo No. Redução de ingestão de alimento 0-24h 30 nmol/kg (%) Redução de ingestão de alimento 24- 48h 30 nmol/kg (%) Redução de ingestão de alimento 0-24h 3 nmol/kg (%) Redução de ingestão de alimento 24- 48h 3 nmol/kg (%)
1 93 92 50 45
3 37 32
7 53 46
9 39 32
10 50 40
11 87 92
12 70 45
14 27 8
15 56 59
17 40 22
18 40 32
22 26 5
26 46 39
27 56 53
28 39 36
29 15 5
37 24 0
38 16 0
42 45 5
46 54 27
50 30 8
52 62 74
53 40 28
55 88 90 58 40
56 46 21
57 17 0
59 59 27
71 10 0
73 29 2
84 68 67
Petição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 201/230
195/214
87 66 47
89 42 23
96 69 89
101 70 90
117 50 35
120 53 2
[00954] A meia-vida dos derivados de amilina da invenção foi testada em miniporcos conforme descrito no Ensaio (IX) e os dados são fornecidos na Tabela 15.
Tabela 15
Exemplo No. PK miniporco i.v. T1/2 (horas)
11 106
27 90
52 105
53 98
55 73
57 68
59 59
96 107
ABREVIAÇÕES [00955] Algumas das abreviações usadas nos Exemplos são como segue:
Acm: acetamidometila
HATU: (hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3tetrametilurônio)
HBTU: hexafluorfosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il-)-1,1,3,3- tetrametilurônio
Fmoc: 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonila
Boc: terc-butiloxicarbonila
Mtt: 4-metiltritila
DCM: diclorometano
TIPS: triisopropilsilano
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TFA: ácido trifluoracético
NMP: 1-Metil-pirrolidin-2-ona
HOAt: 1 -Hidróxi-7-azabenzotriazol
DIC: Diisopropilcarbodiimida
Trt: trifenilmetila
ENSAIOS [00956] Nos exemplos que seguem referência é feita aos Ensaios que seguem:
ENSAIO (I) - Protocolo experimental para teste de eficácia sobre apetite usando um modelo de rato alimentado ad libitum
ENSAIO (II)a - Ensaio funcional - Ensaio de receptor de calcitonina e amilina humanas
ENSAIO (II)b - Ensaio funcional - Ensaios de receptor de calcitonina de rato e amilina de rato
ENSAIO (III) - Os ensaios de fibrilação de Th T para a avaliação de estabilidade física de formulações de proteína
ENSAIO (IV) - Determinação de solubilidade
ENSAIO (V) - Determinação de ligação ao receptor de amilina humana
ENSAIO (VI) - Determinação de ligação ao receptor de amilina de reato
ENSAIO (VII) - Determinação de ligação ao receptor de calcitonina humana
ENSAIO (VIII) - Determinação de ligação ao receptor de calcitonina de rato
ENSAIO (IX) - pK - Determinação da 7½ em miniporco
ENSAIO (X) - pK - Determinação da 7½ em rato
ENSAIO (I) - Protocolo experimental para teste da eficácia sobre apetite usando um modelo de rato alimentado ad libitum [00957] Ratos Sprague Dawley (SD) da Taconic Europe, Dinamarca, foram usados para os experimentos. Os ratos apresentam um pe
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197/214 so corporal de 200-250 g no início do experimento. Os ratos chegam pelo menos 10-14 dias antes do início do experimento para permitir aclimatação aos ambientes experimentais. Durante este período, os animais são manuseados pelo menos 2 vezes. Depois da chegada os ratos são alojados individualmente por uma semana em uma fase de luz/escuro revertida (significando que as luzes são desligadas durante o dia e ligadas durante a noite) por duas semanas. Uma vez que os ratos são normalmente ativos e comem a maior parte de sua ingestão de alimento diária durante o período de escuro, os ratos são dosados de manhã um pouco antes das luzes serem desligadas. Este ajuste resulta na variação de dados mais baixa e na sensibilidade de teste mais alta. O experimento é conduzido nas gaiolas de residência dos ratos e os ratos apresentam acesso livre a alimento e água durante o período de aclimatação e o período de experimento. Cada dose de derivado é testada em um grupo de 5-8 ratos. Um grupo veículo de 6-8 ratos está incluído em cada conjunto de teste. Os ratos são dosados uma vez de acordo com o peso do corpo com uma solução de 0,01-3 mg/kg administrada intraperitonealmente (i.p.), oralmente (p.o.) ou subcutaneamente (s.c.). O momento de dosagem é registrado para cada grupo. Depois da dosagem, os ratos são retornados para suas gaiolas de residência, em que eles então apresentam acesso a alimento e água. O consumo de alimento é registrado individualmente continuamente através de registro on line ou manualmente a cada hora por 7 horas e então após 24 horas e algumas vezes 48 horas. No final da sessão experimental, os animais sofrem eutanásia.
[00958] Os dados individuais são registrados em folhas de Microsoft excel. Discrepantes são excluídos após aplicação do teste de avaliação estatística Grubbs para discrepantes e o resultado é apresentado graficamente usando o programa GraphPad Prism.
ENSAIO (II) - Ensaios funcionais
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198/214
Ensaio (II)a - Ensaio de receptor de calcitonina e amilina humanas
1. Esboço do ensaio de luciferase [00959] Ativação de receptores de calcitonina e amilina (coexpressão de receptor de calcitonina e proteínas de modificação de atividade de receptor (RAMP)) levou a concentrações intracelulares aumentadas de cAMP. Consequentemente, transcrição é ativada por promotores contendo cópias múltiplas do elemento de resposta de cAMP (CRE). É então possível medir a atividade de amilina através do uso de um gene repórter da luciferase introduzido em células BHK também expressando receptores de calcitonina ou amilina.
2. Construção de receptor de calcitonina (a) - e amilina
3(a)/linhagem de célula CRE-luc.
[00960] Uma linhagem de célula BHK570 foi estavelmente transfectada com receptor de calcitonina humana e um gene repórter da luciferase responsivo a CRE. A linhagem celular foi transfectada adicionalmente com RAMP-3, usando métodos padrão. Isso transformou a calcitonina em um receptor de amilina 3(a). Metotrexato, Neomicina e Higromicina são marcadores de seleção para luciferase, o receptor de calcitonina e RAMP-3, respectivamente.
3. Ensaios de luciferase [00961] Para realizar ensaios de atividade, receptor de calcitonina BHK (a) - ou receptor de amilina 3(a)/células CRE-luc foram semeados em placas de cultura de 96 cavidades em uma densidade de cerca de 20.000 células/cavidade. As células estavam em 100 pl de meio de crescimento (DMEM com FBS 10%, Pen/Estrep 1%, Na-piruvato 1 mM, Metotrexato 250 nM, 500 pg/mL de Neomicina e 400 pg/mL de Higromicina). Após incubação de um dia para o outro a 37° C e CO2 5%, o meio de crescimento foi substituído por 50 pl/cavidade de meio de ensaio (DMEM (sem vermelho fenol), Glutamax®, FBS 10% e
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Hepes 10 mM, pH 7,4). Ainda, 50 μΙ/cavidade de padrão ou amostra em tampão de ensaio foram adicionados. Depois de 3 horas de incubação a 37° C e CO2 5%, o meio de ensaio com padrão ou amostra foi removido e substituído por 100 μΙ/cavidade de PBS. Ainda, 100 μΙ/cavidade de LucLite® foram adicionados. As placas foram vedadas e incubadas em temperatura ambiente por 30 minutos. Finalmente, luminescência foi medida em um TopCounter (Packard) em modo SPC (contagem de fóton única).
Ensaio (II)b - Ensaios de receptor de amilina de rato e calcitonina de rato
Esboço de ensaio de cAMP [00962] Ativação de receptores de calcitonina e amilina (coexpressão de receptor de calcitonina e proteínas de modificação de atividade de receptor (RAMP)) levou a concentrações intracelulares aumentadas de cAMP.
[00963] A fim de quantificar os níveis de cAMP em células transientemente transfectadas o Adenylyl Cyclase Activation FlashPlate® Assay da Perkin Elmer foi usado. O princípio básico do FlashPlate® Assay é uma competição entre cAMP radioativo e não radioativo gerado pelas células por um número fixado de sítios de ligação.
Construção de calcitonina (a) de rato - e amilina de rato 3(a) - células receptoras [00964] Células BHK tk'ts 13 foram transientemente transfectadas ou com receptor de calcitonina de rato (a) ou receptor de amilina 3 (a) (receptor de calcitonina de rato (a) + RAMP3 de rato) usando FUGENE® 6 (Roche), de acordo com as recomendações do fabricante.
Ensaio de cAMP [00965] 24 horas após transfecção transiente as células (calcitonina de rato (a) - ou amilina de rato 3(a) - células receptoras) foram adicionadas (100.000 células/cavidade) a FlashPlates® de 96 cavidades com
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200/214 amostras ou padrão em tampão de estimulação FlashPlate com IBMX e incubadas por 30 minutos. Mistura de detecção foi criada de acordo com o protocolo dos fabricantes e cintilação medida após 3 horas de incubação em TopCounter® (Packard).
ENSAIO (III) - Ensaios de fibrilação de Th T para a avaliação de estabilidade física de formulações de proteína [00966] A estabilidade física baixa de um polipeptídeo pode levar à formação de fibrila amiloide, que é observada como estruturas macromoleculares tipo filamento, bem ordenadas, na amostra eventualmente resultando em formação de gel. Isso tem sido tradicionalmente medido através de inspeção visual da amostra. No entanto, este tipo de medição é muito subjetivo e dependente do observador. Desta maneira, a aplicação de uma sonda indicadora de molécula pequena é muito mais vantajosa. Tioflavina T (Th T) é tal sonda e tem uma assinatura de fluorescência distinta quando se ligando a fibrilas [Naiki e outros (1989) Anal. Biochem. 177, 244-249; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 09, 274-284].
[00967] O curso de tempo para formação de fibrila pode ser descrito por uma curva sigmoidal com a expressão que segue: [Nielsen e outros, (2001) Biochemistry 40, 6036-6046]:
Figure BR112013031268B1_D0010
[00968] Aqui, F é a fluorescência Th T no momento t. A constante t0 é o tempo necessário para atingir 50% de fluorescência máxima. Os dois parâmetros importantes descrevendo formação de fibrila são o tempo de latência calculado por t0 - 2τ e a constante de taxa aparente kapp = 1/τ.
[00969] Formação de um intermediário parcialmente dobrado do polipeptídeo é sugerida como um mecanismo de iniciação geral para fibrilação. Alguns desses intermediários nucleiam para formar um mol
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201/214 de sobre o qual intermediários adicionais podem se reunir e a fibrilação prossegue. O tempo de latência corresponde ao intervalo em que a massa crítica do núcleo é formada e a constante de taxa aparente é a taxa com a qual a fibrila em si é formada.
Preparação da amostra [00970] Cada amostra foi preparada um pouco antes de cada ensaio. Cada composição de amostra é descrita em cada exemplo. O pH da amostra foi ajustado para o valor desejado usando quantidades apropriadas de NaOH e HClO4 ou HCl concentrado. Tioflavina T foi adicionada às amostras a partir de uma solução de estoque em H2O para uma concentração final de 1 μΜ.
[00971] Alíquotas de amostra de 200 μl foram postas em uma placa de microticulação de 96 cavidades (Packard OptiPlate®-96, poliestireno branco). Geralmente, quatro ou oito réplicas de cada amostra (correspondendo a uma condição de teste) foram postas em uma coluna de cavidades. A placa foi vedada com Scotch Pad (Qiagen).
Medição de incubação de fluorescência [00972] Incubação em uma dada temperatura, agitação e medição da emissão de fluorescência de Th T foram feitas em uma leitora de placa de fluorescência Fluoroskan Ascent FL ou leitora de placa Varioskan (Thermo Labsystems). A temperatura foi ajustada para 37° C. A agitação orbital foi ajustada para 960 rpm com uma amplitude de 1 mm em todos os dados apresentados. Medição de fluorescência foi feita usando excitação através de um filtro de 444 nm e medição de emissão através de um filtro de 485 nm.
[00973] Cada rodada foi iniciada através da incubação da placa na temperatura de ensaio por 10 minutos. A placa foi medida a cada 20 minutos por um período de tempo desejado. Entre cada medição, a placa foi agitada e aquecida conforme descrito.
Manuseamento de dados
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202/214 [00974] Os pontos de medição foram salvos em formato Microsoft Excel para processamento adicional e desenho da curva e ajuste foram realizados usando GraphPad Prism. A emissão de base de Th T na ausência de fibrilas foi desprezível. Os pontos de dados são tipicamente uma média de quatro ou oito amostras e mostrados com barras de erro de desvio padrão. Apenas dados obtidos no mesmo experimento (isto é, amostras na mesma placa) são apresentados no mesmo gráfico assegurando uma medição relativa de fibrilação entre os experimentos.
[00975] O ajuste de dados pode ser ajustado à Equação (1). No entanto, uma vez que curvas sigmoidais integrais neste caso não são sempre obtidas durante o tempo de medição, o grau de fibrilação é expresso como fluorescência Th T tabulada com a média das amostras e mostrado com o desvio padrão em vários pontos de tempo.
Medição de concentrações inicial e final [00976] A concentração de polipeptídeo em cada uma das formulações testadas foi medida ambos antes a aplicação no ensaio de fibrilação de Th T (Inicial) e após o término da fibrilação de Th T (Após o ensaio Th T). As concentrações foram determinadas através de métodos de HPLC reversa usando um padrão pramlintida como uma referência. Antes da medição após o término, 150 pl foram coletados de cada uma das réplicas e transferidos para um tubo Eppendorf. Esses foram centrifugados a 30000 G por 40 minutos. Os sobrenadantes foram filtrados em um filtro de 0,22 pm antes da aplicação no sistema de HPLC.
ENSAIO (IV) - Determinação de solubilidade [00977] O polipeptídeo foi dissolvido em água a ~500 nmol/mL e misturado 1:1 com uma série de tampões (glicilglicina 100 mM pH 3,0, glicilglicina 100 mM pH 4,0, glicilglicina 100 mM pH 5,0, bistrispropano 100 mM pH 6,0, bistrispropano 100 mM pH 6,5, bistrispropano 100 mM
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203/214 pH 7,0, bistrispropano 100 mM pH 7,5, bistrispropano 100 mM pH 8,0).
Depois de 18 horas em temperatura ambiente, as amostras foram centrifugadas e a concentração de polipeptídeo determinada através de
UPLC.
ENSAIO (V) - Determinação de ligação ao receptor de amilina humana [00978] O ensaio de ligação foi realizado usando contas de ensaio de proximidade de cintilação (SPA) (Scintillation Proximity Assay) (RPNQ0001) da PerkinElmer e as membranas celulares de Amilina 3(a)/células CRE-luc (conforme descrito no Ensaio (II)) foram usadas. As membranas foram preparadas da maneira que segue: as células foram enxaguadas com PBS e incubadas com Versene por aproximadamente 5 minutos antes da coleta. As células receberam fluxo de PBS e a suspensão celular foi centrifugada por 5 minutos a 1000 rpm. As células foram homogeneizadas (ultrathurrax) em um tampão contendo Na-HEPES 20 mM e EDTA 10 mM (pH 7,4) e centrifugadas a 20.000 rpm por 15 minutos. O pelete resultante foi ressuspenso, homogeneizado e centrifugado (20.000 rpm, 15 min) em um tampão contendo Na-HEPES 20 mM e EDTA 0,1 mM (pH 7,4, tampão 2). O pelete resultante foi ressuspenso em tampão 2 e a concentração de proteína foi medida (BCA protein Assay, Pierce). O homogenato foi mantido frio durante todo o procedimento. As membranas foram mantidas a -80° C até o uso. O ensaio foi realizado em uma Optiplate de 384 cavidades (PerkinElmer) em um volume total de 40 ul. As membranas foram misturadas com contas SPA. A concentração final de membranas 35 ng/pL final e contas SPA foi 0,05 mg/cavidade. Os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO e diluídos adicionalmente em tampão de ensaio (Hepes 50 mM, pH 7,4, CaCl2 1 mM, MgCh 5 mM, OA 0,1% e Tween 20 0,02%). Radioligante 125I-amilina de rato (NEX448 PekinElmer) foi dissolvido em tampão de ensaio e adicionado à Optiplate em
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204/214 uma concentração final de 50 pM/cavidade (aproximadamente 20.000 cpm/10 ul). A mistura final foi incubada com agitação a 400 rpm por 120 minutos a 25° C antes da centrifugação (1500 rpm, 10 minutos). As amostras foram analisadas em TopCounter® (Packard). A IC50 foi calculada usando GraphPad Prism5 (uma análise de competição de ligação de sítio) como uma medida de afinidade de receptor.
ENSAIO (VI) - Determinação da ligação ao receptor de amilina de rato [00979] O ensaio foi realizado conforme descrito acima (Ensaio (V) - Determinação de ligação ao receptor de amilina humana) com a exceção que a requerente usou membranas preparadas a partir de células BHK tk'ts 13 que foram transientemente transfectadas com um receptor de calcitonina de rato RAMP 3 de rato em uma razão equimolar (1:2). As células BHK tk'ts 13 foram transientemente transfectadas com receptor de calcitonina de rato usando FUGENE® (Roche), de acordo com as recomendações do fabricante. As células foram cultivadas em DMEM com FBS 10% e Pen/Strep 1%. Aproximadamente 48 horas após a transfecção, as células foram coletadas e as membranas foram preparadas.
ENSAIO (VII) - Determinação de ligação ao receptor de calcitonina humana [00980] O ensaio de ligação foi realizado usando contas de ensaio de proximidade de cintilação (SPA) (RPNQ0001) da PerkinElmer e membranas celulares preparadas a partir da linhagem de célula BHK tk'ts 13 foram estavelmente transfectadas com o receptor de calcitonina humana e um gene repórter da luciferase responsivo a CRE. As membranas foram preparadas da maneira que segue; as células foram enxaguadas com PBS e incubadas com Versene por aproximadamente 5 minutos antes da coleta. As células foram fluxadas com PBS e a suspensão celular foi centrifugada por 5 minutos a 1000 rpm. As céluPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 211/230
205/214 las foram homogeneizadas (Ultrathurrax) em um tampão contendo NaHEPES 20 mM e EDTA 10 mM (pH 7,4) e centrifugadas a 20.000 rpm por 15 minutos. O pelete resultante foi ressuspenso, homogeneizado e centrifugado (20.000 rpm, 15 minutos) em um tampão contendo NaHEPES 20 mM e EDTA 0,1 mM (pH 7,4, tampão 2). O pelete resultante foi ressuspenso em tampão 2 e a concentração de proteína foi medida (BCA protein Assay, Pierce). O homogenato foi mantido frio durante todo o procedimento. As membranas foram mantidas a -80° C até o uso. O ensaio foi realizado em Optiplate de 384 cavidades (PerkinElmer) em um volume total de 40 ul. As membranas foram misturadas com contas SPA. A concentração final de membranas 35 ng/mL final e a concentração final de contas SPA foi 0,05 mg/mL. Os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO e diluídos adicionalmente em tampão de ensaio (Hepes 50 mM, pH 7,4, CaCl2 1 mM, MgCl2 5 mM, OA 0,1% e Tween 20 0,02%). Radioligante 125I-Calcitonina (NEX422 PerkinElmer) foi dissolvido em tampão de ensaio e adicionado ao Optiplate em uma concentração final de 75 pM/cavidade (aproximadamente 30.000 cpm/10 ul). A mistura final foi incubada por 120 minutos com agitação a 400 rpm a 25° C antes da centrifugação (1500 rpm, 10 min). As amostras foram analisadas em TopCounter® (Packard). A IC50 foi calculada usando (uma análise de competição de ligação a sítio) GraphPad Prism5 como uma medida de afinidade de receptor.
ENSAIO (VIII) - Determinação de ligação ao receptor da calcitonina de rato [00981] O ensaio foi realizado conforme acima descrito (Ensaio (VII) - Determinação de ligação ao receptor da calcitonina humana) com a exceção que a requerente usou membranas preparadas a partir de células BHK tk'ts 13 que foram transientemente transfectadas com o receptor de calcitonina de rato. As células BHK tk'ts 13 foram transienPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 212/230
206/214 temente transfectadas com receptor de calcitonina de rato usando
FUGENE® 6 (Roche), de acordo com as recomendações do fabricante.
As células foram cultivadas em DMEM com FBS 10% e Pen/Estrep
1%. Aproximadamente 48 horas após a transfecção, as células foram coletadas e as membranas foram preparadas.
ENSAIO (IX) - pK - Determinação de T1/2 em miniporcos [00982] A T1/2 é a meia-vida terminal = ln2/Àz de um composto em plasma. Àz é a constante de taxa de primeira ordem associada com a porção terminal (log-linear) da curva de concentração no plasma tempo e é estimada por regressão linear de tempo vs. concentração log.
[00983] Os valores de T1/2 dos análogos de amilina da invenção são determinados através de estudos farmacocinéticos em miniporcos Gottingen machos da Ellegaard Gottingen Minipigs ApS e os princípios de cuidado de animal de laboratório são seguidos.
[00984] Um período de aclimatação de aproximadamente 6-10 dias foi permitido após os animais terem entrado no estudo. No início do período de aclimatação os miniporcos tinham cerca de 5 a 12 meses de vida e na faixa de peso de 7-35 kg. Os miniporcos tinham dois cateteres venosos centrais inseridos, os quais foram usados para amostragem de sangue.
[00985] Os estudos foram conduzidos em uma sala para animal que foi iluminada para fornecer um ciclo de aproximadamente 12 horas de luz e 12 horas de escuro. Os animais foram alojados individualmente.
[00986] Os animais tinham acesso livre à água potável de qualidade doméstica durante o estudo, mas foram tipicamente deixados em jejum de um dia para o outro antes da dosagem até aproximadamente 612 horas após a dosagem. Os animais foram pesados na chegada e nos dias de dosagem.
[00987] Nos presentes estudos as substâncias de teste foram adPetição 870190085553, de 30/08/2019, pág. 213/230
207/214 ministradas subcutaneamente em uma dose de aproximadamente 2 nmol/kg. Os animais receberam uma injeção subcutânea única. A injeção subcutânea foi dada no lado direito do pescoço, aproximadamente 5-7 cm a partir da orelha e 7-9 cm a partir do meio do pescoço. As injeções foram dadas com uma rolha na agulha, permitindo que aproximadamente 0,5 cm da agulha fosse introduzido. Cada substância de teste foi dada a tipicamente três, mas em alguns casos dois ou quatro animais.
[00988] Um perfil de concentração no plasma-tempo, utilizando 1216 pontos de amostragem, foi obtido de cada animal. No exemplo amostras de sangue foram coletadas de acordo com o programa que segue: Após administração subcutânea.
Pré-dose (0), 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168 e 240 horas após injeção.
[00989] Em alguns casos também amostras de sangue adicionais até 288 horas pós-injeção foram obtidas.
[00990] Em cada momento de amostragem, 0,5 a 2 mL de sangue foram retirados de cada animal. As amostras de sangue foram obtidas via o cateter venoso central.
[00991] As amostras de sangue foram coletadas em tubos de teste EDTA (isto é, Sarstedt Micro tube 1,3 mL K3E). Amostras de sangue foram mantidas em gelo por no máximo 20 minutos antes da centrifugação. Plasma foi separado usando centrifugação (isto é, a 4° C, 10 min, 1500 G) e foi imediatamente transferido para tubos Micronic. Aproximadamente 200 pl de plasma foram transferidos para cada tubo Micronic. O plasma foi armazenado a -20° C até ser ensaiado. As amostras de plasma foram ensaiadas quanto ao teor de amilina usando um ensaio ELISA.
[00992] Os perfis de concentração no plasma-tempo foram analisados através de uma análise farmacocinética não compartimental
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208/214 (NCA) (Non-compartmental Pharmacokinetic Analysis) usando WinNonlin Professional 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA). NCA foi realizada usando os perfis de concentração no plasma-tempo individuais de cada animal. T1/2 é a meia-vida terminal = ln2/Az e foi determinado a partir de Àz a constante de taxa de primeira ordem associada com a porção terminal (log-linear) da curva, estimada por regressão linear de tempo vs. concentração log.
Ensaio no plasma ELISA para quantificação de amilina [00993] O ELISA de amilina humana é um imunoensaio sanduíche à base de anticorpo monoclonal para determinação dos níveis de amilina em plasma humano. O anticorpo de captura reconhece amilina humana, ácido de amilina (amilina desaminada), um fragmento 1-20 de amilina, mas não amilina reduzida. O anticorpo de detecção se liga à amilina humana reduzida ou não reduzida, mas não ácido de amilina e é complexado com estreptavidina-fosfatase alcalina. O substrato, fosfato de 4-metilumbeliferila, é aplicado ao sanduíche terminado e o sinal fluorescente, monitorado a 355 nm/460 nm, é proporcional à quantidade de amilina presente na amostra.
Método MS para quantificação de amilina [00994] 40 pl de plasma são diluídos com 120 pl de EtOH 66,67% +
HCOOH 1% e misturados. Centrifugados por 20 minutos a 13000 rpm, 4°C. O sobrenadante é analisado através de um método LC-MS em um Sciex API 3000 e quantificado com um padrão criado em plasma. ENSAIO (X) - pK - Determinação de T1/2 em rato [00995] T1/2 é a meia-vida terminal = ln2/Az de um composto no plasma. Az é a constante de taxa de primeira ordem associada com a porção terminal (log-linear) da curva de concentração no plasma tempo e é estimada por regressão linear de tempo vs. concentração log.
[00996] Os valores de T1/2 dos análogos de amilina da invenção são
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209/214 determinados através de estudos farmacocinéticos em ratos machos Sprague Dawley, da Taconic Europe e os princípios de cuidado de animal de laboratório são seguidos.
[00997] Um período de aclimatação de aproximadamente 7 dias foi permitido antes dos animais entrarem no estudo. No início do período de aclimatação os ratos estavam em uma faixa de peso de 300-400 g. Os ratos tinham cateteres permanentes inseridos em a. carótidas que foram usados para amostragem de sangue.
[00998] Os estudos foram conduzidos em uma sala para animal que foi iluminada para fornecer um ciclo de aproximadamente 12 horas e luz e 12 horas de escuro. Os animais foram alojados individualmente devido aos cateteres e tinham alimento e água ad lib. Os animais foram pesados nos dias de dosagem.
[00999] Nos presentes estudos as substâncias de teste foram administradas subcutaneamente em dose de aproximadamente 20 nmol/kg. Os animais receberam uma injeção subcutânea única no pescoço usando uma agulha 25G com seringa. Cada substância de teste foi dada a tipicamente três, mas em alguns casos dois ou quatro animais.
[001000] Um perfil de concentração no plasma-tempo integral, utilizando 8-10 pontos de amostragem, foi obtido a partir de cada animal. No exemplo amostras de sangue foram coletadas de acordo com o programa que segue: Após administração subcutânea:
Pré-dose (0), 0,5, 1, 1,5, 2, 4, 6, 12, 24, 48 e 72 horas após injeção. [001001] Em cada momento de amostragem, 0,08 a 0,10 mL de sangue foi retirado de cada animal. As amostras de sangue foram obtidas através do cateter.
[001002] As amostras de sangue foram coletadas em tubos de teste EDTA. Amostras de sangue foram mantidas em gelo por no máximo 20 minutos antes da centrifugação. O plasma foi separado usando
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210/214 centrifugação (isto é, a 4°C, 10 minutos, 1500G) e foi imediatamente transferido para tubos Micronic ou placas de PCR.
[001003] Aproximadamente 40 μΐ de plasma foram transferidos e armazenados a -20°C até ser ensaiado. As amostras de plasma foram ensaiadas quanto ao teor de amilina usando um ensaio ELISA.
[001004] Os perfis de concentração no plasma-tempo foram analisados através de uma análise farmacocinética não compartimental (NCA) usando WinNonlin Professional 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA). NCA foi realizado usando os perfis de concentração no plasma-tempo individuais de cada animal. T1/2 é a meia-vida terminal = Ιη2/λζ e foi determinada a partir de λζ, a constante da taxa de primeira ordem associada com a porção terminal (log-linear) da curva, estimada através de regressão linear de tempo vs. concentração log.
PREPARAÇÕES [001005] As sequências de polipeptídeo foram preparadas de acordo com a síntese de polipeptídeo mencionada abaixo e os compostos apresentados nas Tabelas (por exemplo, Tabela 10) foram preparados de acordo com a síntese mencionada abaixo.
[001006] Um método de síntese de polipeptídeo foi de química Fmoc em um sintetizador de polipeptídeo Liberty à base de micro-ondas (CEM Corp., North Carolina). A resina era Tentagel S RAM com uma carga de cerca de 0,25 mmol/g ou PAL-ChemMatrix com uma carga de cerca de 0,43 mmol/g. A química de acoplamento era DIC/HOAt em NMP usando soluções de aminoácido de 0,3 M em NMP e um excesso molar de 6-8 vezes. As condições de acoplamento eram 5 minutos até 70° C. Desproteção foi com piperidina 5% em NMP até 70° C. Os aminoácidos protegidos usados foram aminoácidos Fmoc padrão (fornecidos da, por exemplo, Anaspec ou Novabiochem) dissolvidos em 0,3 M em NMP contendo HOAt 0,3 M.
[001007] Outro método de síntese de polipeptídeo foi a química
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Fmoc em um sintetizador de polipeptídeo Prelude (Protein Technologies, Arizona). A resina era Tentagel S RAM com uma carga de cerca de 0,25 mmol/g ou PAL-ChemMatrix com uma carga de cerca de 0,43 mmol/g. A química de acoplamento era DIC/HOAt em NMP usando soluções de aminoácido de 0,3 M em NMP e um excesso molar de 6-8 vezes. As condições de acoplamento eram acoplamento simples ou duplo por 1 ou 2 horas em temperatura ambiente. Desproteção era com piperidina 20% em NMP. Os aminoácidos protegidos usados eram aminoácidos Fmoc padrão (fornecidos, por exemplo, da Anaspec ou Novabiochem) dissolvidos em 0,3 M em NMP contendo HOAt 0,3 M.
[001008] Outro método de síntese de polipeptídeo era um sintetizador de polipeptídeo Applied Biosystems 433 em escala de 0,25 mmol ou 1,0 mmol usando os protocolos FastMoc UV que utilizam acoplamentos mediados por HBTU ou HATU em NMP e monitoramento UV da desproteção do grupo de proteção Fmoc. A resina de partida usada para a síntese das polipeptídeo amidas foi a resina Rink-Amide. Os derivados de aminoácido protegido usados eram aminoácidos Fmoc padrão (fornecidos da, por exemplo, Anaspec ou Novabiochem) fornecidos em cartuchos pré-pesados adequados para o sintetizador ABI433A.
[001009] Quando uma modificação química de uma cadeia lateralde lisina foi desejada, a lisina foi incorporada como Lys(Mtt) e o aminoácido N-terminal ou foi incorporado à sequência como um aminoácido Boc ou, se o aminoácido N-terminal foi incorporado como um aminoácido Fmoc, o grupo Fmoc foi removido e o terminal N foi protegido através de tratamento com 6 equivalentes de carbonato Boc e 6 equivalentes de DIPEA em NMP por 30 minutos. A resina foi lavada com NMP e DCM e o grupo Mtt foi removido através de suspensão da resina em hexafluorisopropanol puro por 20 minutos seguido por lavagem
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212/214 com DCM e NMP. A modificação química da lisina foi realizada através da adição de um ou mais dos blocos de construção que seguem listados abaixo através dos mesmos métodos que aqueles usados para a síntese de polipeptídeo, isto é, por uma ou mais etapas automáticas no Liberty ou no ABI 433 ou através de uma ou mais etapas de acoplamento em temperatura ambiente. Após a síntese a resina foi lavada com DCM e seca e o polipeptídeo foi clivado a partir da resina por um tratamento de 2 horas com TFA/TIPS/água (92,5/5/2,5 ou 95/2,5/2,5) seguido por precipitação com 4 volumes de éter de dietila, lavagem adicional com dietiléter e secagem. Se o polipeptídeo contivesse cisteínas protegidas com grupos Acm, o polipeptídeo seria redissolvido em água em 2-5 mg/ml, o pH ajustado para abaixo de 4 e a ponte dissulfeto formada através de tratamento com 4 equivalentes de iodo (2% p/v em metanol) por 15 minutos. Alternativamente, a ponte dissulfeto foi formada na resina usando Trt como o grupo de proteção para cisteína e tratamento com 10 equivalentes de iodo em NMP por 1 hora. Neste caso o polipeptídeo bruto foi purificado diretamente após clivagem e precipitação com dietiléter.
[001010] Purificação: O polipeptídeo bruto foi purificado através de HPLC semipreparativa em uma coluna de 20 mm x 250 mm empacotada ou com 5 μ ou 7 μ de sílica C-18. Soluções de polipeptídeo foram bombeadas na coluna de HPLC e polipeptídeos precipitados foram dissolvidos em 5 mL de ácido acético 50% H2O e diluídos para 20 mL com H2O e injetados na coluna que foi então eluída com um gradiente de CH3CN 40-60% em TFA 0,% 10 ml/min durante 50 minutos a 40° C. As frações contendo polipeptídeo foram coletadas. O polipeptídeo purificado foi liofilizado após diluição do eluato com água.
[001011] Para análise de frações de HPLC e produto final RP-HPLC foi realizada análise usando detecção de UV a 214 nm e, por exemplo, uma coluna de sílica Vydac 218TP54 4,6 mm x 250 mm 5 μ C-18 (The
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213/214
Separations Group, Hesperia, USA) e eluída em, por exemplo, 1 ml/min a 42° C. Com mais frequência uma de quatro condições de eluição diferentes foi usada.
[001012] A1: Equilíbrio da coluna com um tampão consistindo em 0,1
M (NH4)2SO4, que foi ajustado para pH 2,5 com H2SO4 concentrado e eluição por um gradiente de 0% a 60% de CH3CN no mesmo tampão durante 50 minutos.
[001013] B1: Equilíbrio da coluna com TFA 0,1% / H2O e eluição por um gradiente de 0% de CH3CN / TFA 0,1% / H2O para CH3CN 60% / TFA 0,1% / H2O durante 50 minutos.
[001014] B6: Equilíbrio da coluna com TFA 0,1% / H2O e eluição por um gradiente de CHCN 0% / TFA 0,1% / H2O para CH3CN 90% / TFA 0,1% / H2O durante 50 minutos.
[001015] Alternativamente, a análise de RP-HPLC foi realizada usando detecção por UV em 214 nm e uma coluna de sílica Symmetry 300, 3,6 mm x 150 mm, 3,5 μ C-18 (Waters) que foi eluída a 1 ml/min a 42° C.
[001016] B4: Equilíbrio da coluna com TFA 0,05% / H2O e eluição por um gradiente de CH3CN 5% / TFA 0,05% / H2O para CH3CN 95% / TFA 0,05% / H2O durante 15 minutos.
[001017] A identidade do polipeptídeo foi confirmada através de MALDI-MS em um Bruker Microflex.
[001018] Os polipeptídeos preparados são mostrados na Tabela 10 (apresentada antes):
Observações:
[001019] Todas as referências, incluindo publicações, pedidos de patente e patentes, mencionadas aqui são pela presente incorporadas a título de referência em sua totalidade e até o mesmo ponto como que se cada referência fosse individualmente e especificamente indicada ser incorporada a título de referência e fosse mostrada em sua
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214/214 totalidade aqui (até o ponto máximo permitido por lei).
[001020] Todos os títulos e subtítulos são usados aqui por questão de conveniência apenas e não devem ser considerados limitantes da invenção de maneira alguma.
[001021] O uso de qualquer um e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, tal como) provida aqui, pretende apenas iluminar melhor a invenção e não impõe uma limitação ao escopo da invenção a menos que de outro modo reivindicado. Nenhuma linguagem no relatório deve ser considerada como indicando qualquer elemento não reivindicado como essencial para a prática da invenção.
[001022] A citação e a incorporação de documentos de patente aqui são feitas por conveniência apenas e não refletem nenhuma visão da validade, patenteabilidade e/ou exequibilidade de tais documentos de patente.
[001023] A presente invenção inclui todas as modificações e equivalentes da matéria objeto mencionada nas reivindicações apenas à mesma conforme permitido pela lei aplicável.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIA
SEQ ID NO: 1
Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-LeuVal-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-ValGly-Ser-Asn-Thr-Tyr
SEQ ID NO: 2
Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-LeuVal-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-ValGly-Ser-Asn-Thr-Tyr
SEQ ID NO: 3
Xaa1-Cys- Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa14-PheLeu- Xaa17-Xaa18-Ser-Ser- Xaa21- Xaa22- Phe- Gly- Pro- Xaa26-LeuPro-Pro-Thr- Xaa31-Val-Gly-Ser- Xaa35-Thr-Pro

Claims (14)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Agonista receptor de amilina, caracterizado pelo fato de que compreende o polipeptídeo, que apresenta a Fórmula (I) (SEQ ID No: 3):
    Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-AlaXaa14-Phe-Leu-Xaa17-Xaa18-Ser-Ser-Xaa21-Xaa22-Phe-Gly-ProXaa26-Leu-Pro-Pro-Thr-Xaa31-Val-Gly-Ser-Xaa35-Thr-Pro;
    na qual
    Xaa1 é deletado ou independentemente selecionado de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser e Lys;
    Xaa3 é independentemente selecionado de Gly, His, Arg, Ser e Asn;
    Xaa14 é Glu;
    Xaa17 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys e Val;
    Xaa18 é independentemente selecionado de Arg, Lys e His;
    Xaa21 é independentemente selecionado de Ala, Lys, Gln, Ser e Asn;
    Xaa22 é independentemente selecionado de Glu, Gln, Ser, Thr e Asn;
    Xaa26 é independentemente selecionado de Pro, Arg e Ile;
    Xaa31 é independentemente selecionado de Ser, Glu, Asp e Asn; e
    Xaa35 é independentemente selecionado de His, Arg, Lys, Asp, Gln e Glu.
  2. 2. Agonista receptor de amilina, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 2, que compreende um resíduo prolina na posição 37; um de ácido glutâmico na posição 14; uma arginina na po
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    2/4 sição 17; em que a numeração de aminoácidos da sequência do análogo corresponde à numeração de aminoácidos da sequência de SEQ ID NO: 2.
  3. 3. Agonista receptor de amilina, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que Xaa17 é arginina.
  4. 4. Agonista receptor de amilina, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que Xaan é ácido glutâmico, e Xaan é arginina.
  5. 5. Agonista receptor de amilina, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que pelo menos um substituinte está ligado a pelo menos um resíduo de aminoácido do referido polipeptídeo.
  6. 6. Agonista receptor de amilina, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o grupo substituinte é selecionado do grupo que consiste em C20diacid, C20diacid-YGlu, C20diacid-YGluYGlu, C20diacid-YGlu-YGlu- YGlu, C20diacid-OEG, C20diacid-YGluOEG, C20diacid-YGlu-OEG- OEG, C18diacid-YGlu, C16diacid-YGlu, e C14diacid-YGlu.
  7. 7. Agonista receptor de amilina, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que um substituinte está ligado ao grupo α-amino do resíduo de aminoácido N-terminal ou a um resíduo de Lys.
  8. 8. Agonista receptor de amilina, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo em:
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida,
    Petição 870200014981, de 31/01/2020, pág. 5/13
    3/4
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida,
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida,
    Petição 870200014981, de 31/01/2020, pág. 6/13
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    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, e
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31 ,Gln35,Pro37]pramlintida.
  9. 9. Agonista receptor da amilina, caracterizado pelo fato de que é: N-alfa-[(S)-4-carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida.
  10. 10. Agonista receptor da amilina, caracterizado pelo fato de que é: N-alfa-[(S)-4-carbóxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida.
  11. 11. Agonista do receptor de amilina, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que é para tratar diabetes tipo 2 ou obesidade.
  12. 12. Uso de um agonista do receptor de amilina, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição farmacêutica para tratar diabetes tipo 2 ou obesidade.
  13. 13. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um agonista do receptor de amilina, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
  14. 14. Processo para preparação de uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que compreende misturar um agonista do receptor de amilina, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
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