ES2664509T3 - Derivados de pramlintida - Google Patents

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Thomas Kruse
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Abstract

Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 en donde dicho análogo se selecciona del grupo constituido por [Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [Glu14,His17,His35]-pramlintida, Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida y [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2 y en donde dicho polipéptido comprende un sustituyente N-alfa-[(S)-4-Carboxy-4-(19-carboxynonadecanoilamino)butirilo].

Description

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Derivados de pramlintida
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 (pramlintida), composiciones farmacéuticas que comprenden estos polipéptidos, y estos polipéptidos para uso como medicamentos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Un número grande y creciente de personas padecen diabetes mellitus y obesidad. La diabetes mellitus es un trastorno metabólico en el cual está parcial o totalmente perdida la capacidad de utilizar glucosa.
Cierto número de regímenes de tratamiento están orientados al exceso de glucosa en sangre, mientras que otros están enfocados fundamentalmente a la disminución de peso. El agente anti-diabético más eficiente utilizado para disminuir la glucosa en sangre es la insulina y sus análogos. Se sabe desde hace mucho tiempo que cuando se utiliza la insulina tradicional para tratar la diabetes, ello está asociado con un aumento en el peso corporal. La insulina tiene que inyectarse subcutáneamente hasta varias veces al día.
La diabetes tipo 2 se trata generalmente en las fases iniciales con dieta y ejercicio. A medida que progresa la afección, se añaden diversos agentes antidiabéticos orales. En esta etapa pueden utilizarse también agentes inyectables tales como análogos de GLP-1. En general, estos agentes son muy eficientes en pacientes con células β funcionales capaces de liberar insulina y amilina.
La amilina humana (SEQ ID No: 1) es un polipéptido de 37 aminoácidos de longitud que tiene propiedades fisicoquímicas que hacen engorroso su uso como fármaco. En particular, la misma presenta tendencia a fibrilogénesis, es decir a la formación de fibrillas, in vitro y/o ex vivo y llega a hacerse ineficaz debido a precipitación. Adicionalmente, la amilina es difícil de formular dado que es químicamente inestable y precipita al pH fisiológico. Por esta razón, la misma se formula en solución ácida.
La amilina humana se fija a dos complejos receptores distintos. Estos dos complejos contienen el receptor de calcitonina más una proteína modificadora de la actividad del receptor, RAMP1 o RAMP3. Debido a la estrecha relación entre el receptor de calcitonina y el receptor de amilina, puede esperarse cierta reactividad cruzada para el receptor de calcitonina del agonista receptor de amilina. Como ejemplo, la pramlintida tiene cierta afinidad para el receptor de calcitonina, pero es 14 veces más potente sobre el receptor de amilina.
El receptor de calcitonina se encuentra en muchos tejidos de todo el cuerpo y se cree que está implicado en la regulación del metabolismo óseo. La calcitonina de salmón se vende actualmente bajo el nombre comercial Miacalcic®. El producto se utiliza contra hipercalcemia, osteoporosis (con inclusión de la osteoporosis postmenopáusica y la osteoporosis relacionada con glucocorticoides), osteítis derformans (enfermedad de Paget) y se administra una vez al día por inyección o por vía nasal. La calcitonina se fija a receptores específicos en la membrana del esqueleto, los riñones y el sistema nervioso central (CNS). La semivida en plasma para la calcitonina de salmón es aproximadamente 45 minutos.
Los polipéptidos con actividad en el receptor de calcitonina podrían ser útiles en el tratamiento de hipercalcemia, osteoporosis, enfermedad de Paget, obesidad o enfermedades relacionadas con la obesidad, así como en la prevención de trastornos relacionados con la obesidad. Un inconveniente del tratamiento con las preparaciones de calcitonina utilizadas actualmente es que, debido a la corta semivida en plasma para la calcitonina de salmón, el fármaco tiene que administrarse varias veces al día y debe ser administrado inmediatamente antes de una comida.
Los polipéptidos con actividad dual tanto en el receptor de calcitonina como en el receptor de amilina pueden ser ventajosos.
La pramlintida (SEQ ID No: 2) es un fármaco comercializado por Amilin Pharmaceuticals como Symlin® para tratamiento de la diabetes como adición a la insulina. La pramlintida es un agonista del receptor de amilina. La misma es aproximadamente 14 veces menos activa sobre el receptor de calcitonina.
La estructura química de la pramlintida se presenta a continuación, y también en la Figura 1.
imagen2
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WO2010046357 y WO2009034119 describen polipéptidos que comprenden análogos de amilina que tienen un residuo fijador de albúmina (denominados derivados de amilina en dichos documentos). Aun cuando estos polipéptidos con restos fijadores de albúmina presentan propiedades farmacocinéticas (PK) o farmacodinámicas (PD) mejoradas comparados con la pramlintida, los mismos pueden presentar todavía estabilidad física deficiente en ciertas condiciones.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 y en el cual dicho análogo se selecciona del grupo constituido por [Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [Glu14,His17,His35]-pramlintida, Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida y [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida; en los cuales la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de aminoácidos de SEQ ID No: 2 y en los cuales dicho polipéptido comprende un sustituyente N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4(19-carboxinonadecanoilamino) butirilo].
Al menos en algunas realizaciones, los polipéptidos de la presente invención tienen solubilidad aumentada.
Al menos en algunas realizaciones, los polipéptidos de la presente invención tienen estabilidad física incrementada.
Al menos en algunas realizaciones, los polipéptidos de la presente invención tienen solubilidad y estabilidad física incrementadas.
Al menos algunas realizaciones, los polipéptidos de la presente invención exhiben un perfil farmacocinético ventajoso y/o perfil farmacológico ventajoso. Un ejemplo de un perfil farmacocinético ventajoso es un perfil de acción prolongada.
Opcionalmente, el polipéptido tiene un valor CE50 en un ensayo de potencia del receptor de calcitonina humana, tal como se describe en esta memoria, de aproximadamente 1800 pM o menor.
Opcionalmente, el polipéptido tiene una solubilidad a pH 4 de aproximadamente 100 µM o mayor en un ensayo de solubilidad, tal como el descrito en esta memoria.
Opcionalmente, el polipéptido tiene una solubilidad a pH 7 de aproximadamente 100 µM o mayor en un ensayo de solubilidad, tal como el descrito en esta memoria.
Opcionalmente, el polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis (denominado también ensayo de fibrilación), tal como el descrito en esta memoria.
Opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido al menos a uno de sus residuos de aminoácido. Dicho grupo sustituyente puede seleccionarse del grupo constituido por C20diácido, C20diácido-γGlu, C20diácidoγGlu-γGlu, C20diácido-γGlu-γGlu-γGlu, C20diácido-OEG, C20diácido-γGlu-OEG, C20diácido-γGlu-OEG-OEG, C18diácido-γGlu, C16diácido-γGlu y C14diácido-γGlu. Dicho grupo sustituyente opcional puede estar unido al grupo α-amino del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys.
La presente invención se refiere también a formulaciones farmacéuticas que comprenden el mismo. La presente invención se refiere también a usos farmacéuticos del mismo. La presente invención se refiere también al suministro (tal como administración) del mismo a pacientes que precisan tratamiento con el mismo.
En otro aspecto, la invención comprende adicionalmente una composición farmacéutica que comprende el polipéptido indicado anteriormente.
En otro aspecto, la invención comprende además un proceso para preparación de una composición farmacéutica que comprende el polipéptido indicado anteriormente.
En otro aspecto, la invención comprende además el polipéptido indicado anteriormente para uso como medicamento.
Los polipéptidos de la presente invención son ventajosos debido a que poseen solubilidad y/o estabilidad física mejoradas.
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Ensayos adecuados utilizados para determinar la potencia en los receptores de amilina y calcitonina, así como para determinar la solubilidad y estabilidad física de los polipéptidos, se describen en esta memoria. Por ejemplo, véanse los Ensayos (II), (IV) y (III) respectivamente.
La Figura 1 presenta una estructura. La Figura 2 presenta una estructura. La Figura 3 presenta una estructura. La Figura 4 presenta una estructura.
DEFINICIONES
El término “amilina humana” como se utiliza en esta memoria se refiere al polipéptido de amilina humana que tiene la secuencia representada en SEQ ID No: 1. El término incluye, pero sin carácter limitante, una hormona polipeptídica humana de 37 aminoácidos conocida como amilina, que en la naturaleza es secretada junto con la insulina por las células β del páncreas. La amilina humana tiene la secuencia primaria de aminoácidos siguiente:
imagen5
La amilina humana tiene un puente disulfuro entre los dos residuos Cys y un grupo amida C-terminal. Esta estructura se muestra a continuación, así como en la Figura 4.
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En esta memoria, SEQ ID No: 1 y amilina humana pueden utilizarse intercambiablemente.
El término “pramlintida”, como se utiliza en esta memoria, se refiere al polipéptido sintético que tiene la secuencia que se representa en SEQ ID No: 2. La pramlintida tiene la secuencia primaria de aminoácidos siguiente:
imagen7
La pramlintida tiene un puente disulfuro entre los dos residuos Cys y un grupo amida C-terminal. Esta estructura se muestra a continuación, así como en la Figura 1.
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En esta memoria, SEQ ID No: 2 y pramlintida pueden utilizarse intercambiablemente.
El término “calcitonina” significa calcitonina de salmón o calcitonina humana.
El término “calcitonina de salmón” o “sCT” significa la secuencia proteínica nativa de calcitonina de salmón como se describe en Niall et al (1969), Biochemistry vol. 64, Figura 2. La calcitonina de salmón es un polipéptido constituido por 32 aminoácidos. La misma tiene un puente disulfuro entre los aminoácidos primero y séptimo en el extremo amino-terminal de la cadena polipeptídica, siendo esencial el puente disulfuro para su actividad biológica, y un grupo prolinamida en el aminoácido del terminal carboxilo.
El término “calcitonina humana” significa la secuencia proteínica nativa de calcitonina humana como se describe en Niall et al (1969), Biochemistry vol. 64, Figura 2. La calcitonina humana es un polipéptido que está constituido por 32 aminoácidos. La misma tiene un puente disulfuro entre los aminoácidos primero y séptimo en el extremo aminoterminal de la cadena polipeptídica, siendo esencial el puente disulfuro para su actividad biológica, y un grupo prolinamida en el aminoácido del terminal carboxilo.
imagen9
El término “análogo de pramlintida” o “pramlintida-análogo” como se utiliza en esta memoria, se refiere a una variante de SEQ ID No: 2.
Por ejemplo, dichas variantes incluyen, pero sin carácter limitante, una o más sustituciones y/o una o más deleciones y/o una o más adiciones de uno cualquiera de los residuos de aminoácido para cualquier aminoácido natural o no natural, aminoácidos sintéticos o peptidomiméticos y/o la fijación de un sustituyente a uno cualquiera de los aminoácidos naturales o no naturales, aminoácidos sintéticos o peptidomiméticos en cualquier posición disponible.
La variante puede tener el mismo número de residuos de aminoácido que la pramlintida (es decir 37). Alternativamente, la variante puede comprender menos residuos de aminoácido que la pramlintida. Alternativamente, la variante puede comprender más residuos de aminoácido que la pramlintida. En algunas realizaciones, la variante tiene el mismo número de residuos de aminoácido que la pramlintida (es decir 37). En algunas realizaciones, la variante incluye sustituciones de uno cualquiera de los residuos de aminoácido para cualquier aminoácido natural o no natural, aminoácidos sintéticos o peptidomiméticos y/o la fijación de un sustituyente a uno cualquiera de los aminoácidos naturales o no naturales, aminoácidos sintéticos o peptidomiméticos posición disponible.
El polipéptido puede comprender una o más sustituciones aminoácido. En este caso, para algunas realizaciones, el número de sustituciones de aminoácidos en el análogo de amilina puede ser al menos uno. Preferiblemente, el número de sustituciones de aminoácidos está comprendido entre 1 y 15, más preferiblemente entre 1 y 12, más preferiblemente entre 1 y 10, más preferiblemente entre 1 y 5, más preferiblemente entre 1 y 3.
El número de inserciones, adiciones, deleciones, o sustituciones de aminoácidos puede ser al menos 1, pero pueden estar presentes hasta 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 inserciones, adiciones, deleciones, o sustituciones de aminoácidos. La sustitución o adición puede ser con cualquier aminoácido natural o no natural, aminoácidos sintéticos, peptidomiméticos, u otros compuestos químicos. La adición o deleción de residuos de aminoácido puede tener lugar en el terminal N del péptido y/o en el terminal C del péptido.
Cuando se utiliza en esta memoria el término “aminoácido natural” es un aminoácido (con los códigos usuales de 3 letras & códigos de una letra entre paréntesis) seleccionado del grupo constituido por: Glicina (Gly & G), prolina (Pro & P), alanina (Ala & A), valina (Val & V), leucina (Leu & L), isoleucina (Ile & I), metionina (Met & M), cisteína (Cys & C), fenilalanina (Phe & F), tirosina (Tyr & Y), triptófano (Trp & W), histidina (His & H), lisina (Lys & K), arginina (Arg & R), glutamina (Gln & Q), asparagina (Asn & N), ácido glutámico (Glu & E), ácido aspártico (Asp & D), serina (Ser & S) y treonina (Thr & T) . Si, debido a errores mecanográficos, existen desviaciones de los códigos utilizados comúnmente, se aplican los códigos utilizados comúnmente. Los aminoácidos presentes en los polipéptidos de esta invención son, preferiblemente, aminoácidos que pueden ser codificados por un ácido nucleico.
Si el análogo contiene más de 37 residuos de aminoácido o menos de 37 residuos de aminoácido, entonces la persona experta puede todavía alinear dicha secuencia con la secuencia de pramlintida (SEQ ID No: 2) para determinar el número de localización del residuo de aminoácido respectivo correspondiente. Un programa de alineación adecuado es “needle”, que es una alineación de Needleman-Wunsch. El algoritmo para este programa de alineación se describe en Needleman, S.B. y Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453.
En la secuencia de numeración de SEQ ID No: 2, y de acuerdo con la práctica establecida en la técnica, se asigna al residuo de aminoácido en el terminal N (Lys) el número 1 y los residuos de aminoácido subsiguientes se numeran consecutivamente, finalizando en el terminal C con la tirosina a la que se asigna el número 37. Por tanto, generalmente, cualquier referencia en esta memoria al número de posición de un residuo de aminoácido proporciona su localización en una secuencia de 37 aminoácidos; siendo dicha secuencia de 37 aminoácidos un análogo de pramlintida. Por ejemplo, una referencia a un análogo modificado en la posición 14 puede referirse a un análogo en el cual se ha modificado el residuo decimocuarto de los 37 aminoácidos en el análogo.
Dicho de otro modo, la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo proporciona la posición de cada análogo con respecto a una secuencia de 37 aminoácidos, en la cual la numeración es consecutiva y ascendente en la dirección que va desde el terminal N al terminal C.
Los análogos pueden describirse por referencia al número del residuo de aminoácido en la pramlintida o amilina humana que está modificado, es decir por su posición, y la naturaleza de la modificación. Los siguientes son Ejemplos no limitantes de nomenclatura de análogos apropiada.
Por ejemplo:
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[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida designa un análogo de SEQ ID No: 2 (pramlintida), en el cual la Asn en la posición 14 ha sido sustituida con Glu, la Val en la posición 17 ha sido sustituida con Arg, y la Tyr en la posición 37 ha sido sustituida con Pro.
Como otro ejemplo adicional, des1 (o Des1) en relación con un análogo de pramlintida se refiere a un análogo en el cual el aminoácido N-terminal, Lisina, se ha delecionado. Un análogo de pramlintida, en el cual el aminoácido Nterminal se ha delecionado puede designarse también des-1-pramlintida.
[Pro25, Pro28, Pro29]-amilina humana designa un análogo de SEQ ID No: 1 (amilina humana) en el cual las modificaciones respecto a la amilina humana son que la Ala en la posición 25 y la Cys en las posiciones 28 y 29 han sido todas ellas sustituidas con Pro. Este polipéptido es la pramlintida. De acuerdo con ello, se entenderá que la pramlintida es un análogo de la amilina humana. Así pues, ‘análogos de pramlintida’ y ‘análogos de amilina’ pueden utilizarse intercambiablemente.
Como es evidente por los Ejemplos anteriores, los residuos de aminoácido pueden identificarse por su nombre completo, su código de una sola letra, y/o su código de 3 letras. Estas 3 vías son totalmente equivalentes.
Las expresiones “está de acuerdo con”, “corresponde a”, “una posición equivalente a” o “posición correspondiente” como se utilizan en esta memoria, pueden utilizarse para caracterizar el sitio de modificación en un análogo de pramlintida por referencia a SEQ ID No: 2. Las posiciones equivalentes o correspondientes se deducen fácilmente, verbigracia por escritura manual y observación simples; y/o puede utilizarse un programa estándar de alineación de proteínas o polipéptidos, tal como “needle” que es una alineación Needleman-Wunsch. El algoritmo se describe en Needleman, S.B. y Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453, y el programa de alineación por Myers y W. Miller en “Optimal Alignments in Linear Space” CABIOS (aplicaciones de ordenador en las ciencias biológicas) (1988) 4:11-17. Para la alineación, pueden utilizarse la matriz de registro por defecto BLOSUM62 y la matriz de identidad por defecto, y la penalidad para el primer residuo en una laguna puede ajustarse a -10 y las penalidades para residuos adicionales en una laguna a -0,5.
El polipéptido puede comprender uno o más sustituyentes en uno o más de los residuos de aminoácido. Tales polipéptidos pueden denominarse también derivados de pramlintida o derivados de amilina.
El término “sustituyente”, como se utiliza en esta memoria significa cualquier resto adecuado unido, en particular unido covalentemente, a un residuo de aminoácido, en particular a cualquier posición disponible en un residuo de aminoácido. Típicamente, el resto adecuado es un resto químico.
Para algunas realizaciones, el sustituyente comprende un enlazador.
Para algunas realizaciones, el polipéptido tiene un sustituyente en un residuo de aminoácido, residuo de aminoácido que es el residuo de aminoácido situado en el terminal N, o el residuo de aminoácido es una Lisina.
Para algunas realizaciones, el polipéptido tiene un sustituyente en el residuo de aminoácido N-terminal unido por el grupo α (alfa)-amino del residuo de aminoácido N-terminal.
Para algunas realizaciones, el residuo de aminoácido N-terminal es Lisina y el polipéptido tiene un sustituyente en el residuo de aminoácido N-terminal unido por el grupo ε (épsilon)-amino del residuo aminolisina.
Para algunas realizaciones, el polipéptido se extiende por adición de un residuo lisina en el terminal N y el polipéptido tiene un sustituyente en el residuo de aminoácido N-terminal unido por el grupo ε-amino del residuo amino lisina.
Para algunas realizaciones, el polipéptido se extiende por adición de un residuo de aminoácido en el terminal N y el polipéptido tiene un sustituyente en el residuo de aminoácido N-terminal unido por un grupo alfa-amino del residuo de aminoácido N-terminal.
Como se utiliza en esta memoria, el término “hidrocarbilo” se refiere a un grupo que comprende al menos carbono e hidrógeno que puede comprender opcionalmente uno o más sustituyentes adecuados diferentes. Ejemplos de tales sustituyentes pueden incluir hidroxi, alquilo, halo, alcoxi, haloalquilo, haloalcoxi, amino, aminoalquilo o un grupo cíclico. Además de la posibilidad de que los sustituyentes sean un grupo cíclico, una combinación de sustituyentes puede formar un grupo cíclico. Si el grupo hidrocarbilo comprende más de un átomo de carbono, entonces tales átomos de carbono no precisan estar unidos necesariamente unos a otros. Por ejemplo, al menos dos de los átomos de carbono pueden estar unidos por un átomo o un grupo adecuado. Así, el grupo hidrocarbilo puede contener heteroátomos. Heteroátomos adecuados serán evidentes para los expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo, azufre, nitrógeno, oxígeno, fósforo y silicio. En una realización, el grupo hidrocarbilo se selecciona del grupo Como se utiliza en esta memoria, el término “alquilo” incluye tanto grupos alquilo saturados de cadena lineal como de cadena ramificada, que pueden estar (mono-o poli-) sustituidos. Preferiblemente, el grupo alquilo es un grupo alquilo C1-20, más preferiblemente un grupo alquilo C1-15, más preferiblemente un grupo alquilo C1-10, más preferiblemente un grupo alquilo C1-8, más preferiblemente un grupo alquilo C1-6. Grupos alquilo particularmente preferidos incluyen, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, iso-butilo, terc-butilo, npentilo, n-hexilo, n-heptilo y n-octilo. Sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxi, alquilo, halo, alcoxi, haloalquilo, haloalcoxi, amino, aminoalquilo, o un grupo cicloalquilo.
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Como se utiliza en esta memoria, el término “cicloalquilo” se refiere a un grupo alquilo cíclico que puede ser sustituido (mono-o poli-) sustituido o insustituido. Sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxi, alquilo, halo, alcoxi, haloalquilo, haloalcoxi, amino, aminoalquilo, o un grupo cicloalquilo.
Como se utiliza en esta memoria, el término “alquenilo” se refiere a una cadena de carbonos que contiene uno o más enlaces dobles carbono-carbono, que puede ser ramificada o no ramificada, y sustituida (mono-o poli-) o insustituida. Preferiblemente, el grupo alquenilo es un grupo alquenilo C2-20, más preferiblemente un grupo alquenilo C2-15, más preferiblemente un grupo alquenilo C2-10, más preferiblemente un grupo alquenilo C2-8, o más preferiblemente un grupo alquenilo C2-6. Sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxi, alquilo, halo, alcoxi, haloalquilo, haloalcoxi, amino, aminoalquilo, o un grupo cicloalquilo.
Como se utiliza en esta memoria, el término “alquinilo” se refiere a una cadena de carbonos que contiene uno o más enlaces triples carbono-carbono, que puede ser ramificada o no ramificada, y sustituida (mono-o poli-) o insustituida. Preferiblemente, el grupo alquinilo es un grupo alquinilo C2-20, más preferiblemente un grupo alquinilo C2-15, más preferiblemente un grupo alquinilo C2-10, más preferiblemente un grupo alquinilo C2-8, o más preferiblemente un grupo alquinilo C2-6. Sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxi, alquilo, halo, alcoxi, haloalquilo, haloalcoxi, amino, aminoalquilo, o un grupo cicloalquilo.
Como se utiliza en esta memoria, el término “arilo” se refiere a un grupo aromático C6-10 que puede ser sustituido (mono-o poli-) o insustituido. Ejemplos típicos incluyen fenilo y naftilo, etc. Sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxi, alquilo, halo, alcoxi, haloalquilo, haloalcoxi, amino, aminoalquilo, o un grupo cicloalquilo.
Como se utiliza en esta memoria, el término “heteroarilo”se refiere a un grupo arilo como se define anteriormente que contiene uno o más heteroátomos. Heteroátomos adecuados serán evidentes para los expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo, azufre, nitrógeno, oxígeno, fósforo y silicio. Sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxi, alquilo, halo, alcoxi, haloalquilo, haloalcoxi, amino, aminoalquilo, o un grupo cicloalquilo.
El término “enlazador” como se utiliza en esta memoria incluye sustituyentes adecuados que pueden unir un resto, tal como un resto químico, al polipéptido, tal como el polipéptido que constituye la cadena principal. Así, el enlazador y el resto químico se convierten juntos en un sustituyente. El resto unido al enlazador puede ser cualquier resto adecuado. Ejemplos incluyen un resto de fijación de albúmina.
En una realización, el resto de fijación de albúmina tiene de 6 a 40 átomos de carbono, de 8 a 26 átomos de carbono, o de 14 a 22 átomos de carbono, por ejemplo 16, 17,18, 19, o 20 átomos de carbono.
En otra realización, el resto de fijación de albúmina es un grupo acilo seleccionado del grupo que comprende CH3(CH2)rCO-, en donde r es un número entero de 4 a 38, preferiblemente un número entero de 4 a 24, más preferiblemente seleccionado del grupo que comprende CH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO-y CH3(CH2)22CO-.
En una realización, el resto de fijación de albúmina comprende un grupo que puede estar cargado negativamente a pH 7,4.
En una realización, el resto de fijación de albúmina comprende un grupo ácido carboxílico, tal como HOOC(CH2)sCO-, en donde s es un número entero de 12 a 22. Preferiblemente s es 16 ó 18.
En una realización, el resto unido al enlazador es un resto de fijación de albúmina.
Por ejemplo, el enlazador puede comprender uno o dos aminoácidos que por un extremo están unidos al resto -tal como un resto de fijación de albúmina -y por el otro extremo están unidos a cualquier posición disponible en la cadena principal del polipéptido.
En algunas realizaciones, el enlazador proporciona un puente o enlace entre un grupo amino en la cadena principal del polipéptido y un grupo acilo en el resto -tal como un resto de fijación de albúmina. El enlazador puede estar Otro ejemplo de un enlazador es una combinación de al menos un aminoácido y una amina.
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En una realización, la amina es preferiblemente el grupo OEG, en donde la fórmula de OEG se muestra a continuación:
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10 Para algunas realizaciones, el enlazador se selecciona preferiblemente del grupo constituido por of γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu-γGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-γGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-γGlu, His-HisγGlu, Gly, Gly-γGlu, Ser, Ser-γGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-γGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-γGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly y Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-γGlu, γGlu-OEG, γGlu-2xOEG y OEG,
15 seleccionándose preferiblemente el enlazador de γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-OEG, γGlu-2xOEG y OEG, y siendo el enlazador más preferiblemente γGlu-γGlu.
El enlazador puede contribuir a y/o mejorar el efecto de unión del resto (por ejemplo, el resto de fijación de albúmina), verbigracia un enlazador que comprende γGlu puede mejorar el efecto de fijación de albúmina del 20 polipéptido.
Por la utilización del término “γGlu” o “gGlu” o gammaGlu o gamma-L-Glu se entiende un aminoácido con la estructura siguiente (representada también en la Figura 2):
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Por la utilización del término “γGlu-γGlu” se entiende un resto con la estructura siguiente:
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Por la utilización del término “γGlu-OEG” se entiende un resto con la estructura siguiente:
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35 Por la utilización del término “γGlu-OEG-OEG” se entiende un resto con la estructura siguiente:
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El término “grupo amino épsilon” o “grupo amino ε”, utilizado en esta memoria en relación con la lisina, se refiere
40 al grupo amino en la posición 6, utilizando las convenciones de numeración estándar IUPAC. El término “grupoamino alfa” o “grupo amino α” se refiere al grupo amino en la posición 2, utilizando las convenciones de numeración estándar IUPAC. Se hace referencia a la estructura siguiente (representada también en la Figura 3).
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El término “resto de fijación de albúmina”, como se utiliza en esta memoria, se refiere a cualquier grupo químico susceptible de fijarse a albúmina, es decir que tiene afinidad de fijación de albúmina. En una realización, el resto de fijación de albúmina es un grupo acilo.
En algunas realizaciones, el resto de fijación de albúmina es preferiblemente un grupo acilo seleccionado de:
(a)
CH3(CH2)rCO-, en donde r es un número entero de 4 a 24;
(b)
HOOC(CH2)sCO-, en donde s es un número entero de 14 a 20, por ejemplo 16 ó 18.
La “afinidad de fijación de albúmina” puede determinarse por varios métodos conocidos en la técnica. En un método, el compuesto a medir se somete a radiomarcación con v.g. 125I o 3H y se incuba con albúmina inmovilizada (Kurtzhals et al., Biochem.J., 312, 725-731 (1995)). Se calcula la fijación del compuesto con relación a un estándar. En otro método, se somete a radiomarcación un compuesto afín, y su fijación a albúmina inmovilizada sobre v.g. cuentas de SPA se somete a competición por una serie de diluciones del compuesto a medir. El valor CE50 para la competición es una medida de la afinidad del compuesto. En un tercer método, la afinidad o potencia de receptor de un compuesto se mide a concentraciones de albúmina diferentes, y el cambio en afinidad o potencia relativa del compuesto en función de la concentración de albúmina refleja su afinidad para la albúmina.
Los polipéptidos de la presente invención exhiben potencia satisfactoria. El término “potencia” se utiliza para describir el efecto de un compuesto dado en ensayos en los que se ha establecido una relación sigmoidea entre el logaritmo de la concentración y el efecto de un compuesto. Adicionalmente, la respuesta debería ser variable desde 0 a 100%. El valor CE (concentración efectiva)50 puede utilizarse para describir la concentración de un compuesto dado que proporciona una respuesta de 50% en el ensayo, tal como en el ensayo funcional.
Los polipéptidos de la presente invención exhiben actividad satisfactoria. El término “actividad” se refiere a la aptitud para reducir el apetito y/o aumentar la saciedad. La actividad puede medirse por la aptitud para reducir el apetito como se describe v.g. en el Ensayo (I) en esta memoria.
Los polipéptidos de la presente invención exhiben estabilidad física satisfactoria. El término “estabilidad física” de un polipéptido conforme a la invención, o una formulación del mismo se refiere a la tendencia del polipéptido a no formar agregados biológicamente inactivos y/o insolubles como resultado de la exposición a esfuerzos termomecánicos y/o integración con interfaces y superficies que son desestabilizadoras, tales como superficies e interfaces hidrófobas. La estabilidad física de las formulaciones acuosas del polipéptido puede evaluarse por medio de inspección visual, ensayo de fibrilación de ThT (al que se hace referencia a veces como ensayo de fibrilogénesis de ThT) y/o medidas de turbidez como se describen en otro lugar de esta memoria. La inspección visual de las formulaciones se realiza en una luz aguda enfocada con un fondo oscuro. La turbidez de la formulación se caracteriza por un registro visual que clasifica el grado de turbidez por ejemplo en una escala de 0 a 3 (una formulación que no muestra turbidez alguna corresponde a un registro visual 0, y una formulación que muestra turbidez visual en luz diurna corresponde a un registro visual 3). Una formulación se clasifica como inestable físicamente con respecto a la agregación de proteínas, cuando la misma presenta turbidez visual en luz diurna. Alternativamente, la turbidez de la formulación puede evaluarse por medidas de turbidez simples bien conocidas por las personas expertas.
Los polipéptidos de la presente invención exhiben estabilidad química satisfactoria. El término “estabilidad química” de un polipéptido conforme a la invención o de una formulación del mismo se refiere a la ausencia de cambios de covalencia química en la estructura del polipéptido, evitándose con ello la formación de productos de degradación química con posiblemente menor potencia y/o propiedades inmunógenas posiblemente incrementadas comparado con la estructura del polipéptido original (nativo). Pueden formarse diversos productos de degradación química dependiendo del tipo y la naturaleza del polipéptido original y del ambiente al cual se expone el polipéptido. Muy probablemente, la eliminación de la degradación química no puede evitarse por completo, apreciándose a menudo cantidades crecientes de productos de degradación química durante el almacenamiento y uso de las formulaciones de polipéptidos, como es bien conocido por las personas expertas en la técnica. La mayoría de los polipéptidos son propensos a desamidación, proceso en el cual el grupo amida de la cadena lateral en los residuos glutaminilo o asparaginilo se hidroliza para formar un ácido carboxílico libre. Otros caminos de degradación implican la formación de productos de transformación de alto peso molecular en los cuales dos o más moléculas de polipéptido se unen covalentemente una a otra por transamidación y/o interacciones de disulfuros que conducen a la formación de productos de degradación dímeros, oligómeros y polímeros unidos covalentemente (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, Nueva York 1992). La oxidación (por ejemplo, de residuos metionina) puede mencionarse como otra variante de degradación química. La estabilidad química de la formulación polipeptídica puede evaluarse por medida de la cantidad de los productos de degradación química en diversos momentos después de exposición a diferentes condiciones ambientales (la formación de productos de degradación puede acelerarse a menudo, por ejemplo, por aumento de temperatura). La cantidad de cada producto de degradación individual se determina en muchos casos por separación de los productos de degradación que dependen del tamaño molecular y/o la carga de la molécula utilizando diversas técnicas de cromatografía (v.g. SCE-HPLC y/o RP-HPLC).
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El término “formulación estabilizada” se refiere a una formulación con estabilidad física incrementada, estabilidad química incrementada o estabilidad física y química incrementada comparada con una solución acuosa del polipéptido.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Aspectos Generales
En un aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 en donde:
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y opcionalmente un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y el polipéptido tiene opcionalmente al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y opcionalmente un residuo prolina n posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho análogo tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH 4 el polipéptido tiene opcionalmente al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y opcionalmente un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho análogo tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH 7
el polipéptido tiene opcionalmente al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y opcionalmente un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
imagen20
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y opcionalmente un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7; y
(d)
dicho polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis;
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho análogo tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14;
en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7
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opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7; y
(d)
dicho polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis;
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7; y
(d)
dicho polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis;
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7; y
(d)
dicho polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis;
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es Arg; y un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(b)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(c)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7; y
(d)
dicho polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis;
(a)
dicho análogo comprende un residuo ácido glutámico en posición 14;
(b)
dicho análogo comprende un residuo histidina o arginina en posición 17;
(c)
dicho análogo comprende un residuo histidina en posición 35; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(d)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
imagen22
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo ácido glutámico en posición 14;
(b)
dicho análogo comprende un residuo histidina o arginina en posición 17;
(c)
dicho análogo comprende un residuo histidina en posición 35; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(d)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7; y
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo ácido glutámico en posición 14;
(b)
dicho análogo comprende un residuo histidina o arginina en posición 17;
(c)
dicho análogo comprende un residuo histidina en posición 35; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(d)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH4; y
(e)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH7; y
opcionalmente, el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo ácido glutámico en posición 14;
(b)
dicho análogo comprende un residuo histidina o arginina en posición 17;
(c)
dicho análogo comprende un residuo histidina en posición 35; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(d)
dicho polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis;
opcionalmente el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
En otro aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2, en donde:
(a)
dicho análogo comprende un residuo ácido glutámico en posición 14;
(b)
dicho análogo comprende un residuo histidina o arginina en posición 1
(c)
dicho análogo comprende un residuo histidina en posición 35; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2; y
(d)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM o mayor a pH 4; y
(e)
dicho polipéptido tiene una solubilidad de aproximadamente 100 µM a pH7; y
(f)
dicho polipéptido tiene una estabilidad física de aproximadamente 25 horas o mayor en un ensayo de fibrilogénesis;
opcionalmente el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
Algunas Ventajas
imagen23
Los polipéptidos de la presente invención pueden exhibir estabilidad física mejorada. Los polipéptidos de la presente invención pueden exhibir solubilidad mejorada. Los polipéptidos de la presente invención pueden exhibir a la vez estabilidad física y solubilidad mejoradas.
imagen24
En esta memoria se presentan ensayos adecuados para medir la fijación y potencia, solubilidad y estabilidad física del receptor de amilina humana (por ejemplo, véanse los Ensayos (II), (IV) y (III) respectivamente). Preferiblemente, Xaa14 es Glu Preferiblemente Xaa17 es His o Arg; más preferiblemente Arg. Preferiblemente Xaa35 es His. Preferiblemente Xaa14 es Glu y Xaa17 es Arg. Preferiblemente Xaa14 es Glu y Xaa17 es His. En una realización preferida de la invención el polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 es de fórmula (I) en donde:
Xaa1 es Lys; Xaa14 es Glu Xaa17 es His o Arg; Xaa35 es His.
En una realización preferida de la invención, el polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 es de fórmula (I) en donde:
Xaa1 está delecionado o se selecciona independientemente de His, Arg y Lys; Xaa14 se selecciona independientemente de Glu y Asn, preferiblemente Glu; Xaa17 se selecciona independientemente de His y Arg, preferiblemente Arg; Xaa35 es His; Xaa37 es Pro.
En una realización, el terminal C puede estar derivatizado.
En una realización, el terminal C del polipéptido puede estar terminado como un ácido o amida. En un aspecto, el terminal C del polipéptido es una amida.
En una realización, el terminal C está derivatizado con una amida de fórmula (II):
(II) C(O)NR1R2
en donde R1 y R2 se seleccionan independientemente de H y alquilo. Preferiblemente R1 y R2 son ambos H.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención pueden tener un sustituyente unido a cualquier posición disponible en uno o más de los residuos de aminoácido. Ejemplos de sustituyentes incluyen restos químicos unidos directamente a uno o más de los residuos de aminoácido, o restos químicos unidos indirectamente a uno o más de los residuos de aminoácido por medio de un enlazador. Los puntos de unión disponibles serán conocidos por las personas expertas. Ejemplos de puntos de unión disponibles incluyen el terminal N del polipéptido, el terminal C del polipéptido, un grupo épsilon-amino de un residuo lisina, el grupo hidroxilo de un residuo serina, tirosina o treonina, el grupo amida de un residuo asparagina o glutamina, el grupo carboxilo de un residuo ácido aspártico o ácido glutámico, el grupo tiol de un residuo cisteína. Preferiblemente, el sustituyente está unido al terminal N del polipéptido, o al grupo épsilon-amino de un residuo lisina.
En otra realización, el sustituyente está unido al grupo amino N-terminal del polipéptido, en donde el residuo de aminoácido N-terminal corresponde a la posición 1 del análogo de SEQ ID No. 2.
En otra realización, el sustituyente está unido al grupo épsilon-amino de un residuo lisina en posición 1 del análogo de SEQ ID No:2.
En una realización, el sustituyente se selecciona de un grupo sustituyente hidrocarbilo, un grupo hidroxilo y un átomo de halógeno. Ejemplos de átomos de halógeno adecuados incluyen F, Cl, Br y I. Preferiblemente, el sustituyente es un grupo sustituyente hidrocarbilo.
En otra realización, el grupo sustituyente hidrocarbilo es un grupo alquilo, o un grupo de fórmula (III):
(III) Ln-Y
en donde
L es un enlazador;
n = 0 ó 1
Y es un resto químico -tal como un resto de fijación de albúmina.
imagen25
Ejemplos de aminas adecuadas incluyen:
-C(O)-(CH2)l-O-[CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O)-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH
en donde l, m, n, y p son independientemente 1-7, y q es 0-5.
Por ejemplo, el enlazador puede comprender una amina seleccionada de:
C(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-NH-; y C(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-[NHC(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-; y C(O)-(CH2)2-O-[CH2CH2-O]7-(CH2)2-NH-.
En otra realización, el enlazador es una combinación de residuos de aminoácido y las aminas arriba mencionadas, por ejemplo:
γGlu-C(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-[NHC(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-; o Arg-Arg-γGlu-C(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-[NHC(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-.
En algunas realizaciones, n = 1 y L se selecciona del grupo constituido por γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu, γGluγGlu-γGlu-γGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-γGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-γGlu, His-His-γGlu, Gly, Gly-γGlu, Ser, Ser-γGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-γGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-γGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly y Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-γGlu, γGlu-OEG, γGlu-OEG-OEG y OEG.
En algunas realizaciones, n = 1 y L se selecciona de γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-OEG, γGlu-OEG-OEG y OEG, y más preferiblemente el enlazador es γGlu-γGlu.
En otra realización, n = 0; conforme a ello, no hay enlazador alguno entre los residuos de aminoácido de la cadena principal del polipéptido y el resto químico Y, es decir Y está unido a una posición disponible en la cadena principal del polipéptido.
En una realización, Y es un resto de fijación de albúmina.
En una realización, el resto de fijación de albúmina es un grupo acilo.
Preferiblemente, el resto de fijación de albúmina es HOOC(CH2)sCO-, en donde s es un número entero de 12 a 22. Más preferiblemente s es un número entero de 14 a 20, por ejemplo 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20. Más preferiblemente s es 16 a 18. Más preferiblemente s es 18.
En una realización, el polipéptido de la invención comprende un enlazador γGlu unido al terminal N del análogo de amilina y HOOC(CH2)18CO o HOOC(CH2)16CO-como el residuo de fijación de albúmina y donde la secuencia del análogo de amilina comprende Glu en posición 14, His o Arg en posición 17, His en posición 35 o Pro en posición 37 en comparación con SEQ ID No: 2.
En otra realización, el grupo sustituyente y/o grupo de fórmula (III) se selecciona de los grupos siguientes presentados en la Tabla 1.
imagen26
Tabla 1
Abreviatura
Sustituyente
C20diácido
imagen27
C20diácido-γGlu
imagen28
C20diácido-γGlu-γGlu
imagen29
C20diácido-γGlu-γGlu-γGlu
imagen30
C20diácido-OEG
imagen31
C20diácido-γGlu-OEG
imagen32
C20diácido-γGlu-OEG-OEG
imagen33
C18diácido-γGlu
imagen34
C16diácido-γGlu
imagen35
C14diácido-γGlu
imagen36
Preferiblemente, los polipéptidos de la presente invención comprenden un solo sustituyente.
5 Preferiblemente, los polipéptidos de la presente invención tienen un solo sustituyente unido al grupo amino Nterminal del polipéptido, en donde el residuo de aminoácido N-terminal corresponde a la posición 1 del análogo de SEQ ID No: 2.
10 Preferiblemente el sustituyente es: Preferiblemente, el sustituyente
imagen37
imagen37
está unido al grupo amino N-terminal del polipéptido.
Para las realizaciones que comprenden un resto de fijación de albúmina, los polipéptidos de la presente invención pueden exhibir un perfil farmacocinético prolongado y propiedades farmacodinámicas satisfactorias. Por esta razón, los polipéptidos conforme la presente invención no tienen que inyectarse con tanta frecuencia como los productos de amilina conocidos.
Adicionalmente, los polipéptidos de la invención proporcionan una reducción en la ingesta de alimento. La reducción en la ingesta de alimento es superior a la de los productos de amilina conocidos.
En una realización, el resto de fijación de albúmina se fija a albúmina de modo no covalente. Preferiblemente, el resto de fijación de albúmina tiene una afinidad de fijación de albúmina para la albúmina del suero humano que es menor que aproximadamente 10 µM o menor que aproximadamente 1 µM.
En una realización, el polipéptido de la presente invención se selecciona de los compuestos siguientes presentados en la Tabla 2 (a continuación). La Tabla 2 presenta una lista de compuestos que tienen una solubilidad mayor que 100 µM a pH 4.
imagen38
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >200
120
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)ac etil]-D-Arg-D-Arg-[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 29,5 >200
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >200
97
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]pramlintida 34 >200
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >200
73
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)ac etil]-[Glu14,His17,Lys25]-pramlintida 38,5 >200
48
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17]-pramlintida 42,5 >200
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >200
99
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,His35]-pramlintida 45 >200
46
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]pramlintida 46,9 >200
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >200
92
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52 >200
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 >200
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >200
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 56 >200
79
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 56,5 >200
70
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,His17,His35]-pramlintida 58,5 >200
47
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 59 >200
51
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]pramlintida 61 >200
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200
imagen39
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilid ad a pH 4,0 (µM)
45
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 62,4 >200
106
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62,5 >200
77
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 66 >200
61
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 67,5 >200
100
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arq1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 67,5 >200
78
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 68,5 >200
168
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)aceti l]-[Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida 71 >200
42
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu 14,His17]-pramlintida 73,9 >200
98
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]pramlintida 74,5 >200
12
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,Arg17]-pramlintida 77,5 >200
7
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida 77,9 >200
104
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79,5 >200
71
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 79,5 >200
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >200
95
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 82 >200
10
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82,3 >200
37
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 83,2 >200
11
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 85,3 >200
124
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 >200
170
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro3 7]-pramlintida 90 >200
136
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 >200
imagen40
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM)
146
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >200
84
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 >200
1
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 93,4 >200
68
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 93,5 >200
81
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Glu14,His17,His35]-pramlintida 95,5 >200
67
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[Glu14,His17,His35]-pramlintida 96,5 >200
112
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg35]-pramlintida 98 >200
22
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Arg3,Glu14,His17]-pramlintida 98,5 >200
14
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)a cetil]-[Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida 99,4 >200
50
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17]-pramlintida 100,9 >200
69
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 101 >200
60
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17,His35]-pramlintida 101,5 >200
135
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >200
19
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida 105,1 >200
139
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107,5 >200
82
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)a cetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 108,5 >200
57
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 111 >200
17
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 111,3 >200
58
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 116,5 >200
25
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida 118,8 >200
94
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 119,5 >200
imagen41
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM)
137
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120,5 >200
27
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17]-pramlintida 121,4 >200
76
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 121,5 >200
115
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His34]-pramlintida 129 >200
54
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu10,Glu14,His17]-pramlintida 129,5 >200
26
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17]-pramlintida 130 >200
18
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17]-pramlintida 130,7 >200
85
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser[Glu14,His17,His35]-pramlintida 132,5 >200
113
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Lys35]-pramlintida 134 >200
93
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His35]-pramlintida 135,5 >200
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida 211,6 116
123
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136 >200
87
N-épsilon 1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 142 >200
38
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida 148,8 >200
49
N-alfa-{(S)-4-Carboxi-4-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}-[des1,Glu14,His17]pramlintida 151 >200
55
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 151,6 >200
64
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 153 >200
117
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida 156 >200
31
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 163,5 >200
3
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida 164 >200
36
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29]-pramlintida 167 >200
62
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 172 >200
imagen42
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM)
30
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 174,2 >200
28
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17]-pramlintida 179,1 >200
66
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,His17,His35]-pramlintida 182,5 >200
74
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida 184 >200
21
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Arg35]-pramlintida 192 >200
140
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 198,5 >200
167
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida 203 >200
105
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 207,5 >200
151
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida 209 >200
65
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 217 >200
107
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 225 >200
161
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >200
40
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[His1,Glu14,His17]-pramlintida 248 >200
34
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida 271,5 >200
35
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17]-pramlintida 286 >200
125
N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 288,5 >200
128
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Asp21,His35]-pramlintida 291 >200
56
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17,His35]-pramlintida 299 >200
142
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 301 >200
44
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-SerGly-Ser-Ser-Gly-[His1,Glu14,His17]-pramlintida 305,5 >200
imagen43
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad pH 4,0 (µM)
155
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313 >200
43
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida 333,5 >200
150
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida 344 >200
5
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 353,5 >200
75
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 365,5 >200
29
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17]-pramlintida 377,4 >200
114
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His36]-pramlintida 381,5 >200
134
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 390 >200
129
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17,Gln21,His35]-pramlintida 391 >200
111
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 393,5 >200
162
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411 >200
133
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 416 >200
118
N-alfa-[2-(2-(2-[2-(2-(2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida 434,5 >200
157
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 465 >200
141
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida 482,5 >200
116
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His32]-pramlintida 487 >200
147
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida 540,5 >200
63
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]-pramlintida 558,5 >200
imagen44
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM)
32
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida 603 >200
144
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)-acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida 625 >200
110
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 921 >200
119
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida 938 >200
132
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,His35]-pramlintida 998,5 >200
148
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 1031 >200
33
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida 1032,5 >200
163
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida 1059 >200
127
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida 1093,5 >200
158
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1129 >200
138
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1512 >200
164
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida 1713 >200
83
N-épsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida 1748,5 >200
159
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida imagen45 >200
160
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida imagen46 >200
169
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida imagen47 >200
171
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp3 1,Asp35,Pro37]-pramlintida imagen48 >200
imagen49
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM)
177
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida imagen50 >200
178
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida imagen51 >200
131
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 858 172
6
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida 114,7 163
4
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida 253,3 120
41
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Glu14,His17]-pramlintida 402 118
Como se demuestra en la sección de Ejemplos de esta memoria, los polipéptidos presentados anteriormente tienen 5 una solubilidad mayor que o igual a 100 µM (µM) a pH 4.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 125 µM (µM) a pH 4.
10 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 150 µM (µM) a pH 4.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 175 µM (µM) a pH 4.
15 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 200 µM (µM) a pH 4.
En una realización, la solubilidad se mide en un ensayo de solubilidad como se presenta en esta memoria.
20 En una realización adicional, el polipéptido de la presente invención se selecciona de los compuestos siguientes presentados en la Tabla 3 (a continuación).
La Tabla 3 presenta una lista de compuestos que tienen una solubilidad mayor que 100 µM a pH 7. 25
imagen52
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >200
120
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 29,5 >200
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >200
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >200
73
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25]-pramlintida 38,5 155
48
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17]-pramlintida 42,5 >200
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >200
46
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]pramlintida 46,9 169
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >200
92
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52 >200
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 >200
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >200
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 56 >200
79
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 56,5 >200
47
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 59 118
51
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]pramlintida 61 >200
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200
106
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62,5 >200
78
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 68,5 122
168
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)a cetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida 71 >200
imagen53
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
42
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17]-pramlintida 73,9 >200
104
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79,5 >200
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >200
10
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82,3 >200
37
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)a cetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 83,2 198
124
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 >200
170
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro3 7]-pramlintida 90 >200
136
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 >200
146
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >200
84
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 >200
81
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Glu14,His17,His35]-pramlintida 95,5 >200
60
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17,His35]-pramlintida 101,5 >200
135
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >200
139
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107,5 >200
82
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)a cetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 108,5 >200
57
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 111 >200
58
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 116,5 >200
25
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida 118,8 >200
94
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 119,5 138
137
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120,5 >200
27
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17]-pramlintida 121,4 160
imagen54
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
54
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu10,Glu14,His17]-pramlintida 129,5 >200
26
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17]-pramlintida 130 >200
18
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17]-pramlintida 130,7 191
113
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Lys35]-pramlintida 134 >200
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida 211,6 >200
123
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136 >200
87
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 142 >200
38
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)a cetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]pramlintida 148,8 >200
49
N-alfa-{(S)-4-Carboxi-4-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}-[des1,Glu14,His17]pramlintida 151 >200
55
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 151,6 102,5
117
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida 156 >200
3
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida 164 >200
62
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 172 >200
30
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 174,2 >200
28
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17]-pramlintida 179,1 >200
74
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida 184 >200
167
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)a cetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida 203 >200
105
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 207,5 >200
151
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida 209 >200
65
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 217 176
imagen55
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
161
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >200
40
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[His1,Glu14,His17]-pramlintida 248 >200
125
N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 288,5 >200
128
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Asp21,His35]-pramlintida 291 140
56
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17,His35]-pramlintida 299 >200
155
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313 >200
43
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida 333,5 >200
150
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)a cetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]pramlintida 344 >200
5
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 353,5 >200
75
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 365,5 >200
29
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17]-pramlintida 377,4 >200
129
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17,Gln21,His35]-pramlintida 391 >200
162
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411 >200
157
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 465 >200
132
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,His35]-pramlintida 998,5 142
163
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida 1059 >200
127
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida 1093,5 >200
158
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1129 >200
138
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1512 >200
imagen56
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
164
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida 1713 >200
83
N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida 1748,5 >200
159
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida imagen57 >200
160
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida imagen58 >200
169
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida imagen59 >200
171
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp3 1,Asp35,Pro37]pramlintida imagen60 >200
177
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida imagen61 >200
178
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida imagen62 >200
4
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida 253,3 146
16
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida 313 104
Como se demuestra en la sección de Ejemplos de esta memoria, los polipéptidos presentados anteriormente tienen una solubilidad mayor que o igual a 100 µM (µM) a pH 7.
5 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 125µM (µM) a pH7.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 150µM (µM) 10 a pH7.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 175µM (µM) a pH7.
15 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 200µM (µM) a pH7.
En una realización, la solubilidad se mide en un ensayo de solubilidad como se presenta en esta memoria.
20 La Tabla 4 presenta una lista de compuestos que tienen una solubilidad mayor que 100 µM tanto a pH 4 como a pH7.
imagen63
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >200 >200
120
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil-amino]etoxil-etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 29,5 >200 >200
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >200 >200
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >200 >200
73
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25]-pramlintida 38,5 >200 155
48
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17]-pramlintida 42,5 >200 >200
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >200 >200
46
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17]-pramlintida 46,9 >200 169
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >200 >200
92
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52 >200 >200
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200 >200
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 >200 >200
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >200 >200
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 56 >200 >200
79
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 56,5 >200 >200
47
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida 59 >200 118
51
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17]-pramlintida 61 >200 >200
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200 >200
106
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62,5 >200 >200
78
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 68,5 >200 122
imagen64
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
168
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Pro37]pramlintida 71 >200 >200
42
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,His17]-pramlintida 73,9 >200 >200
104
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79,5 >200 >200
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >200 >200
10
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82,3 >200 >200
37
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]pramlintida 83,2 >200 198
124
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 >200 >200
170
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp 35,Pro37]pramlintida 90 >200 >200
136
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 >200 >200
146
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >200 >200
84
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 >200 >200
81
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Gly-[Glu14,His17,His35]-pramlintida 95,5 >200 >200
60
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida 101,5 >200 >200
135
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >200 >200
139
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107,5 >200 >200
82
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 108,5 >200 >200
57
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 111 >200 >200
58
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 116,5 >200 >200
imagen65
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
25
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida 118,8 >200 >200
94
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 119,5 >200 138
137
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120,5 >200 >200
27
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17]-pramlintida 121,4 >200 160
54
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu10,Glu14,His17]-pramlintida 129,5 >200 >200
26
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,His17]-pramlintida 130 >200 >200
18
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17]-pramlintida 130,7 >200 191
113
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Lys35]-pramlintida 134 >200 >200
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35 ]pramlintida 211,6 116 >200
123
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136 >200 >200
87
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 142 >200 >200
38
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida 148,8 >200 >200
49
N-alfa-{(S)-4-Carboxi-4-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}[des1,Glu14,His17]-pramlintida 151 >200 >200
55
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 151,6 >200 102,5
117
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida 156 >200 >200
3
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida 164 >200 >200
62
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 172 >200 >200
30
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 174,2 >200 >200
28
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17]-pramlintida 179,1 >200 >200
imagen66
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
74
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys21,Glu35]pramlintida 184 >200 >200
167
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Glu21,Pro37]pramlintida 203 >200 >200
105
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 207,5 >200 >200
151
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]pramlintida 209 >200 >200
65
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 217 >200 176
161
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >200 >200
40
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida 248 >200 >200
125
N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 288,5 >200 >200
128
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Asp21,His35]-pramlintida 291 >200 140
56
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida 299 >200 >200
155
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313 >200 >200
43
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida 333,5 >200 >200
150
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida 344 >200 >200
5
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arq18]-pramlintida 353,5 >200 >200
75
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 365,5 >200 >200
29
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17]-pramlintida 377,4 >200 >200
129
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]-pramlintida 391 >200 >200
162
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411 >200 >200
imagen67
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH 4,0 (µM) Solubilidad a pH 7,0 (µM)
80
N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,Lys17]-pramlintida 455,5 >200 >200
157
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 465 >200 >200
132
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,His35]-pramlintida 998,5 >200 142
163
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]pramlintida 1059 >200 >200
127
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,Ser29,His35]pramlintida 1093,5 >200 >200
158
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1129 >200 >200
138
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1512 >200 >200
164
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37 ]pramlintida 1713 >200 >200
83
N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]pramlintida 1748,5 >200 >200
159
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]pramlintida imagen68 >200 >200
160
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37 ]pramlintida imagen69 >200 >200
169
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Ala21,Pro37]pramlintida imagen70 >200 >200
171
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser2 9,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida imagen71 >200 >200
177
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida imagen72 >200 >200
178
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,Ala21,His35,Pro37]pramlintida imagen73 >200 >200
4
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]pramlintida 253,3 120 146
imagen74
5 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a125µM (µM) tanto a pH 4 como a pH 7.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 150µM (µM) tanto a pH 4 como a pH 7.
10 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 175µM (µM) tanto a pH 4 como a pH 7.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una solubilidad mayor que o igual a 200µM (µM) 15 tanto a pH 4 como a pH 7.
En una realización, la solución se mide en un ensayo de solubilidad como se presenta en esta memoria.
La Tabla 5 presenta una lista de compuestos que tienen estabilidad física mayor que o igual a 25 horas en un 20 ensayo de fibrilogénesis.
TABLA 5
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Tiempo de retardo de ThT a pH 4,0 (h) Recuperaciónde ThT a pH 4,0 (%)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >45 91
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >45 93
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >45 87
73
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25]-pramlintida 38,5 >45 100
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >45 92
46
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17]-pramlintida 46,9 27,9 48,2
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >45 98
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >45 96,2
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 29 0
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >45 93
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 56 >45 97
70
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,His17,His35]-pramlintida 58,5 >45 85
51
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17]-pramlintida 61 28,7 73
imagen75
EjemploNº
Nombre Receptorde amilina humana CE50 (pM) Tiempo de retardo de ThT a pH 4,0 (h) Recuperaciónde ThT a pH 4,0 (%)
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >45 92,3
45
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]His-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida 62,4 36,7 37
77
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 66 >45 93
61
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 67,5 >45 100
100
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 67,5 26 92
78
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 68,5 >45 100
12
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-HisHis-[His1,Glu14,Arg17]-pramlintida 77,5 >45 50
71
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 79,5 >45 97
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >45 91
95
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 82 >45 89
37
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetilamino]etoxi}-etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 83,2 >45 87
124
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-GluArg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 >45 9,3
170
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]pramlintida 90 >45 94
136
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 >45 100
146
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >45 87
84
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 25,6 100
68
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 93,5 >45 93
67
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-HisHis-[Glu14,His17,His35]-pramlintida 96,5 >45 88
112
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg35]-pramlintida 98 >45 100
50
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17]-pramlintida 100,9 >45 85
imagen76
EjemploNº
Nombre Receptorde amilina humana CE50 (pM) Tiempo de retardo de ThT a pH 4,0 (h) Recuperaciónde ThT a pH 4,0 (%)
69
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]His-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 101 >45 94
135
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >45 100
57
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 111 >45 100
17
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida 111,3 30,3 9
58
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 116,5 >45 97
137
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120,5 29 23
76
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 121,5 >45 100
115
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His34]-pramlintida 129 >45 88
85
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]Ser-[Glu14,His17,His35]-pramlintida 132,5 >45 100
113
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Lys35]-pramlintida 134 >45 88
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp3 5]pramlintida 211,6 >45 57
87
N-épsilon-1-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 142 25 85
38
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida 148,8 >45 94
55
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 151,6 37 90,6
117
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida 156 >45 92
imagen77
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Tiempo retardo ThT a 4,0 (h) de de pH Recuperaciónde ThT a pH 4,0 (%)
31
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 163,5 >45 imagen78 94
62
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 172 30 imagen79 53
66
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida 182,5 >45 imagen80 92
74
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida 184 >45 imagen81 96
105
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]pramlintida 207,5 26 imagen82 48
65
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 217 >45 imagen83 100
161
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >45 imagen84 96
128
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Asp21,His35]-pramlintida 291 >45 imagen85 96
150
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida 344 >45 imagen86 83
75
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida imagen87 imagen88 0
114
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]pramlintida 381,5 >45 imagen89 89
134
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 365,5 28 imagen90 23
111
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 393,5 >45 imagen91 4
162
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411 >45 imagen92 98
imagen93
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Tiempo retardo ThT a 4,0 (h) de de pH Recuperación de ThT a pH 4,0 (%)
133
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 416 >45 imagen94 37
118
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida 434,5 >45 imagen95 81
116
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]pramlintida 487 >45 imagen96 92
32
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida 603 >45 imagen97 94
119
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida 938 >45 imagen98 86
132
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}-etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,His35]pramlintida 998,5 >45 imagen99 100
163
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida 1059 >45 imagen100 95
164
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]pramlintida 1713 >45 imagen101 95
83
N-épsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]-etoxi}etoxi)acetilamino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida 1748,5 >45 imagen102 97
156
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 66 >45 imagen103 99
Como se demuestra en la sección de Ejemplos de esta memoria, los polipéptidos presentados anteriormente tienen 5 una estabilidad física mayor que o igual a 25 horas en un ensayo de fibrilogénesis.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una estabilidad física mayor que o igual a 30 horas.
10 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una estabilidad física mayor que o igual a 35 horas.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una estabilidad física mayor que o igual a 40 horas.
15 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen una estabilidad física mayor que o igual a 45 horas.
imagen104
La Tabla 6 presenta una lista de compuestos que tienen un valor CE50 del receptor de amilina humana de 1800 pM (picomolar) o menor.
TABLA 6
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5
120
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-DArg-[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 29,5
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 32,5
97
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]-pramlintida 34
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 36
73
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25]-pramlintida 38,5
166
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida 39
143
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18,Pro37]pramlintida 41,5
48
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]pramlintida 42,5
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 43
121
N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida 45
99
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]-pramlintida 45
46
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida 46,9
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5
92
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida
53
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 54
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida 55,5
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 56
79
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18]pramlintida 56,5
70
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida 58,5
47
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida 59
51
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida 61
imagen105
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]pramlintida 62
imagen106
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
45
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida 62,4
106
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 62,5
77
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 66
61
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 67,5
100
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 67,5
78
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida 68,5
168
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida 71
42
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]pramlintida 73,9
98
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]-pramlintida 74,5
12
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]pramlintida 77,5
7
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida 77,9
104
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 79,5
71
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 79,5
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 80,5
95
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida 82
10
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82,3
15
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18]pramlintida 83
37
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-DArg]-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 83,2
11
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida 85,3
108
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]pramlintida 88
124
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5
imagen107
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
170
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida 90
136
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91
146
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida 91
84
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 92,5
1
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida 93,4
68
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 93,5
81
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Glu14,His17,His35]pramlintida 95,5
67
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida 96,5
112
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg35]pramlintida 98
22
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Arg3,Glu14,His17]-pramlintida 98,5
14
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi)etoxi)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida 99,4
50
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida 100,9
69
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 101
60
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]pramlintida 101,5
135
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida 103
19
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida 105,1
139
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida 107,5
82
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 108,5
57
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 111
17
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida 111,3
58
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 116,5
imagen108
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
25
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,His17]pramlintida 118,8
94
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 119,5
137
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120,5
27
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida 121,4
76
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida 121,5
115
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]-pramlintida 129
54
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu10,Glu14,His17]-pramlintida 129,5
26
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida 130
18
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida 130,7
85
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-[Glu14,His17,His35]pramlintida 132,5
113
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]-pramlintida 134
93
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida 135,5
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida 211,6
123
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136
87
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 142
38
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida 148,8
20
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida 150,6
49
N-alfa-{(S)-4-Carboxi-4-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}[des1,Glu14,His17]-pramlintida 151
55
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida 151,6
64
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 153
117
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)pramlintida 156
31
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 163,5
3
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida 164
imagen109
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
36
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29]-pramlintida 167
62
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 172
30
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida 174,2
28
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida 179,1
66
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida 182,5
74
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida 184
21
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Arg35]-pramlintida 192
140
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 198,5
167
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida 203
105
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]pramlintida 207,5
151
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida 209
65
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 217
107
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]pramlintida 225
161
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232
40
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[His1,Glu14,His17]pramlintida 248
34
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida 271,5
35
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17]pramlintida 286
125
N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 288,5
128
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Asp21,His35]pramlintida 291
56
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]pramlintida 299
imagen110
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
142
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 301
44
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly[His1,Glu14,His17]-pramlintida 305,5
155
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 313
43
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi)etoxi)acetil][des1,Glu14,His17]-pramlintida 333,5
150
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida 344
5
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida 353,5
75
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida 365,5
29
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17]-pramlintida 377,4
114
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]-pramlintida 381,5
134
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 390
129
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]pramlintida 391
111
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 393,5
162
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411
133
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 416
118
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida 434,5
80
N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys17]-pramlintida 455,5
157
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 465
141
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida 482,5
116
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]-pramlintida 487
imagen111
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
147
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14, Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida 540,5
63
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]-pramlintida 558,5
32
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida 603
144
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida 625
110
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 921
119
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida 938
132
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi)etoxi)acetil][Glu14,Lys21,His35]-pramlintida 998,5
148
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 1031
33
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida 1032,5
163
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida 1059
127
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida 1093,5
158
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1129
138
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 1512
164
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida 1713
83
N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida 1748,5
131
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 858
6
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida 114,7
4
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida 253,3
imagen112
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM)
41
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu14,His17]pramlintida 402
8
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida 126,5
39
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser[Gly1,Glu14,His17]-pramlintida 253
16
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida 313
153
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 43
154
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]-pramlintida 53
156
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 66
152
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg14,Arg17,Pro37]pramlintida 129
23
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida 385
2
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 602
24
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,Arg35]-pramlintida 1441,5
Como se demuestra en la sección de Ejemplos de esta memoria, los polipéptidos presentados anteriormente tienen 5 un valor CE50 de amilina humana de 1800 pM (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de amilina humana de 1500pM (picomolar) o menor.
10 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 1200pM (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 1000pM (picomolar) o menor.
15 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 800pM (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 600pM 20 (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 400pM (picomolar) o menor.
25 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 200pM (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 100pM (picomolar) o menor. 30
imagen113
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor de amilina humana CE50 de 60pM 5 (picomolar) o menor.
En una realización, el valor CE50 de amilina humana se mide en un ensayo presentado en esta memoria.
La Tabla 7 presenta una lista de compuestos que tienen un valor CE50 del receptor de amilina humana de 1800pM 10 (picomolar) o menor.
TABLA 7
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Receptorde CTa humana CE50 (pM)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 39,5
120
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]D-Arg-D-Arg-[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 29,5 690,5
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 47,5
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 55
73
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25]-pramlintida 38,5 45
48
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]pramlintida 42,5 112
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 55
99
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]pramlintida 45 87,5
46
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]pramlintida 46,9 79,2
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 45,5
92
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 52 49
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 79,7
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 54 52
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 31,5
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 56 60,5
79
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 56,5 77
70
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,His17,His35]-pramlintida 58,5 99
imagen114
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Receptorde CTa humana CE50 (pM)
47
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 59 258
51
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]pramlintida 61 600
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 53,7
45
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 62,4 264,5
106
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62,5 70,5
77
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 66 110
61
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 67,5 334,5
100
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 67,5 89,5
78
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida 68,5 96,5
168
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida 71 85
42
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]pramlintida 73,9 273,5
98
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]pramlintida 74,5 193
12
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,Arg17]-pramlintida 77,5 408,5
7
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida 77,9 131
104
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 79,5 106,5
71
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 79,5 946,5
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 83
95
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 82 174,5
10
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida 82,3 86,4
37
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 83,2 641,9
11
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17]-pramlintida 85,3 208,3
imagen115
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Receptorde CTa humana CE50 (pM)
124
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 367
170
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida 90 76
136
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 45
146
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 59,5
84
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 92,5 67
1
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida 93,4 149,7
68
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 93,5 430
81
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Glu14,His17,His35]-pramlintida 95,5 70,5
67
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[Glu14,His17,His35]-pramlintida 96,5 114,5
112
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Arg35]-pramlintida 98 104
22
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Arg3,Glu14,His17]-pramlintida 98,5 157,2
14
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida 99,4 469
50
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]pramlintida 100,9 458,5
69
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 101 614,5
60
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,His17,His35]-pramlintida 101,5 168,5
135
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro371-pramlintida 103 97
19
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida 105,1 309,7
139
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 107,5 58,5
82
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 108,5 288,5
57
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 111 387
17
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu 14,His17]-pramlintida 111,3 166,4
imagen116
Ejemplo Nº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Receptorde CTa humana CE50 (pM)
58
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 116,5 605,5
25
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida 118,8 184
94
N-épsilon-1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 119,5 285,5
137
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 120,5 72
27
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]pramlintida 121,4 106,8
76
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida 121,5 85,5
115
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]pramlintida 129 114,5
54
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu10,Glu14,His17]pramlintida 129,5 199,5
26
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]pramlintida 130 214,1
18
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]pramlintida 130,7 125,5
85
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser[Glu14,His17,His35]-pramlintida 132,5 153
113
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]pramlintida 134 130
93
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]pramlintida 135,5 180
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida 211,6 207,6
123
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 136 377,5
87
N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 142 228
38
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida 148,8 1109,7
49
N-alfa-{(S)-4-Carboxi-4-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}-[des1,Glu14,His17]-pramlintida 151 527
55
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 151,6 163,2
64
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida 153 94,5
117
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida 156 169
imagen117
imagen118
imagen119
imagen120
Como se demuestra en la sección de Ejemplos de esta memoria, los polipéptidos presentados anteriormente tienen un valor CE50 1800pM (picomolar) o menor.
5 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 1500pM (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 1200pM 10 (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 1000pM (picomolar) o menor.
15 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 800pM (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 600pM (picomolar) o menor.
20 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 400pM (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 200pM 25 (picomolar) o menor.
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 100pM (picomolar) o menor.
30 En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de calcitonina humana de 80pM (picomolar) o menor.
En una realización, el CE50 de calcitonina humana se mide en un ensayo que se presenta en esta memoria.
35 La Tabla 8 presenta una lista de compuestos que tienen un valor CE50 del receptor de amilina humana de 1800pM (picomolar) o menor, una solubilidad de 150µM o mayor a pH7 y una estabilidad física de 25 horas o más en un ensayo de fibrilogénesis.
imagen121
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad pH7,0 (µm) a Tiempo de retardo ThT a pH 4.0 (h)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >200 imagen122 >45
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 32,5 >200 imagen123 >45
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 36 >200 imagen124 >45
73
N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxiletoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys,25]-pramlintida 38,5 155 imagen125 >45
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 43 >200 imagen126 >45
46
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida 46,9 169 imagen127 27,9
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >200 imagen128 >45
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida 53 >200 imagen129 >45
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida 54 >200 imagen130 29
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >200 imagen131 >45
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida 56 >200 imagen132 >45
51
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida 61 >200 imagen133 28,7
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]pramlintida 62 >200 imagen134 >45
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >200 imagen135 >45
37
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil-amino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg-[Glu14,His17,Arg18]pramlintida 83,2 198 imagen136 >45
imagen137
imagen138
EjemploNº
Nombre Receptor de amilina humana CE50 (pM) Solubilidad pH7,0 (µm) a Tiempode retardo ThT a pH 4.0 (h)
105
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]pramlintida 207,5 >200 imagen139 26
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]pramlintida 211,6 >200 imagen140 >45
65
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His 35]-pramlintida 217 176 imagen141 >45
161
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >200 imagen142 >45
150
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida 344 >200 imagen143 >45
75
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida 365,5 >200 imagen144 28
162
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411 >200 imagen145 >45
163
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro 37]-pramlintida 1059 >200 imagen146 >45
164
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]pramlintida 1713 >200 imagen147 >45
83
N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil-amino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]pramlintida 1748,5 >200 imagen148 >45
En una realización, los polipéptidos de la presente invención tienen un valor CE50 de amilina humana de 1800pM 5 (picomolar) o menor, y una solubilidad mayor que 150µM a pH7, y una estabilidad física mayor que o igual a 25 horas en un ensayo de fibrilogénesis.
En una realización, el valor CE50 de amilina humana, la solubilidad a pH7 y la estabilidad física se miden en ensayos que se presentan en esta memoria.
10 La Tabla 9 presenta una lista de compuestos que tienen un valor CE50 del receptor de amilina humana de 1800pM (picomolar) o menor, una solubilidad de 200µM o mayor a pH7 y una estabilidad física de 45 horas o más en un ensayo de fibrilogénesis.
15
imagen149
EjemploNº
Nombre Receptorde amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH7,0 (µm) Solubilidad a pH7,5 (µm) Tiempo de retardo a pH 4,0 (h)
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 25,5 >200 >200 >45
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 32,5 >200 >200 >45
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 36 >200 >200 >45
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 43 >200 >200 >45
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 51,5 >200 >200 >45
53
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 53 >200 >200 >45
130
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida 55,5 >200 >200 >45
59
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,His35]-pramlintida 56 >200 >200 >45
52
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 62 >200 >200 >45
145
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida 80,5 >200 >200 >45
124
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida 89,5 >200 >200 >45
170
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,As p31,Asp35,Pro37]-pramlintida 90 >200 >200 >45
136
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 91 >200 >200 >45
146
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida 91 >200 >200 >45
imagen150
EjemploNº
Nombre Receptorde amilina humana CE50 (pM) Solubilidad a pH7,0 (µm) Solubilidad a pH7,5 (µm) imagen151 Tiempo de retardo a pH 4,0 (h)
135
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida 103 >200 >200 imagen152 >45
57
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida 111 >200 121 imagen153 >45
58
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida 116,5 >200 >200 imagen154 >45
113
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]pramlintida 134 >200 188 imagen155 >45
38
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)-acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida 148,8 >200 >200 imagen156 >45
117
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida 156 >200 >200 imagen157 >45
74
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoil-amino)butiril-amino]-etoxi}etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida 184 >200 >200 >45
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp3 1,Asp35]pramlintida 211,6 >200 >200 >45
161
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida 232 >200 >200 >45
150
N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoil-amino)butiril-amino]-etoxi}etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida 344 >200 >200 >45
162
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida 411 >200 >200 >45
163
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]pramlintida 1059 >200 >200 >45
164
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln3 5,Pro37]pramlintida 1713 >200 >200 >45
83
N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoil-amino)butiril-amino]-etoxi}etoxi)acetil-amino]-etoxi}-etoxi)acetil][Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida 1748,5 >200 >200 >45
imagen158
En una realización, el CE50 de amilina humana, la solubilidad a pH7 y la estabilidad física se miden en ensayos que se presentan en esta memoria.
en un aspecto de la invención, los derivados de amilina se seleccionan del grupo constituido por:
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Arg35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Arg3,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,Arg35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His29,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His29]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-[Gly1,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[des1,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-[His1,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-{(S)-4-Carboxi-4-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}[des1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu 14,Arg17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu10,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Ser21,Lys25]pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,His17,Lys25]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-épsilon-17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu 14, Pro37]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu 1, Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys25]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Asp21,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys21,His35]pramlintida,
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N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18,Pro37]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Arg-[Glu14,Arg17,His35,Pro37]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida,
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N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp31,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp22,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Asp3,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida.
Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un perfil farmacocinético prolongado comparado con la pramlintida como se mide por el Ensayo (IX) que se describe en la sección Ensayos Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 30 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 40 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 50 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 60 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 70 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 75 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 80 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 85 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 90 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 95 horas. Para algunas realizaciones, el polipéptido de la presente invención tiene un valor T½ en plasma de al menos 100 horas.
PROCESO
La producción de polipéptidos tales como amilina o sus análogos es bien conocida en la técnica. Así, los polipéptidos de la invención pueden producirse por síntesis de polipéptidos clásica, v.g., síntesis de polipéptidos en fase sólida utilizando química de t-Boc o Fmoc u otras técnicas bien establecidas, véase por ejemplo Greene y Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, 1999. Los polipéptidos pueden producirse también por un método que comprende cultivar una célula hospedadora que contiene una secuencia de DNA que codifica el polipéptido y es capaz de expresar el polipéptido en un medio nutriente adecuado en condiciones que permiten la expresión del polipéptido. Para polipéptidos que comprenden residuos de aminoácido no naturales, la célula recombinante debería modificarse de tal manera que los aminoácidos no naturales se incorporen en el polipéptido, por ejemplo, mediante el uso de mutantes de t RNA.
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS
En un aspecto, la invención concierne a una composición farmacéutica que comprende un polipéptido conforme a la invención, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Las composiciones son adecuadas para administración parenteral.
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En otra realización, la formulación tiene un pH que va desde 2,0 a 10,0. En otra realización, la formulación tiene un pH que va desde 2,0 a 7,0. En otra realización, la formulación tiene un pH que va desde 2,5 a 4,5. En otra realización, la formulación tiene un pH que va desde 3,5 a 4,5.
Las composiciones farmacéuticas que contienen un polipéptido conforme a la presente invención se pueden preparar por técnicas convencionales, por ejemplo, como se describe en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 1985 o en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, edición 19ª, 1995.
La formulación puede comprender además un sistema tampón, conservante(s), agente(s) de isotonicidad, agente(s) quelantes, estabilizadores y/o surfactantes. El uso de tales excipientes en composiciones farmacéuticas es bien conocido por las personas expertas. Por comodidad se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, edición 19ª, 1995.
En una realización, la formulación farmacéutica es una formulación acuosa, es decir que la formulación comprende agua. Una formulación de este tipo es típicamente una solución o una suspensión. En una realización adicional de la invención, la formulación farmacéutica es una solución acuosa.
El término “formulación acuosa” se define como una formulación que comprende al menos 50% peso/peso de agua.
Análogamente, el término “solución acuosa” se define como una solución que comprende al menos 50% peso/peso de agua, y el término “suspensión acuosa” se define como una suspensión que comprende al menos 50% peso/peso de agua.
En otra realización, la formulación farmacéutica es una formulación liofilizada, a la cual el médico o el paciente añade disolventes y/o diluyentes antes de su utilización. En otra realización, la formulación farmacéutica es una formulación secada (por ejemplo, liofilizada o secada por pulverización) lista para utilización sin disolución previa alguna.
Por “forma secada” se entiende que la composición o formulación farmacéutica líquida se seca, sea mediante deshidratación por congelación (es decir, liofilización; véase, por ejemplo, Williams y Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59), secado por pulverización (véase Masters (1991) en Spray-Drying Handbook (edición 5ª; Longman Scientific y Technical, Essez, U.K.), pp. 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; y Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11:12-20), o secado con aire (Carpenter y Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; y Roser (1991) Biopharm. 4:47-53).
En una realización adicional de la invención, el tampón se selecciona del grupo constituido por acetato, carbonato, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, dihidrogenofosfato, hidrogenofosfato, fosfato, y tris(hidroximetil)aminometano, bicina, tricina, ácido málico, ácido láctico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico, o mezclas de los mismos. Cada uno de estos tampones específicos constituye una realización alternativa de la invención.
En otra realización de la invención, la formulación comprende además un conservante farmacéuticamente aceptable. En una realización adicional de la invención, la formulación comprende además un agente isotónico, por ejemplo, propilenglicol, manitol o glicerol. En una realización adicional de la invención, la formulación comprende además un agente quelante.
En otra realización de la invención, la formulación comprende adicionalmente un estabilizador. El uso de un estabilizador en composiciones farmacéuticas es bien conocido por las personas expertas. Por comodidad, se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, edición 19ª, 1995.
La formación de agregados por un polipéptido durante el almacenamiento de una composición farmacéutica líquida puede afectar desfavorablemente a la actividad biológica de dicho polipéptido, dando como resultado pérdida de la eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Adicionalmente, la formación de agregados puede causar otros problemas tales como obstrucción de tuberías, membranas, o bombas cuando la composición farmacéutica que contiene el polipéptido se administra utilizando un sistema de infusión.
Las composiciones de la invención son composiciones farmacéuticas líquidas estabilizadas cuyos componentes terapéuticamente activos incluyen un polipéptido que exhibe posiblemente formación de agregados durante el almacenamiento en formulaciones farmacéuticas líquidas.
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Por “durante el almacenamiento” se entiende una composición o formulación farmacéutica líquida que una vez preparada, no se administra inmediatamente a un individuo. En lugar de ello, después de la preparación, se envasa para almacenamiento, sea en forma líquida, en estado congelado, o en una forma secada para reconstitución más tarde en una forma líquida u otra forma adecuada para administración a un individuo.
Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender además una cantidad de una base de aminoácido suficiente para reducir la formación de agregados por el polipéptido durante el almacenamiento de la composición.
Por “base de aminoácido” se entiende un aminoácido o una combinación de aminoácidos, donde cualquier aminoácido dado está presente en su forma de base libre o en su forma de sal. En el caso de utilizarse una combinación de aminoácidos, todos los aminoácidos pueden estar presentes en sus formas de base libre, pueden estar presentes todos en sus formas de sal, o algunos pueden estar presentes en sus formas de base libre en tanto que otros están presentes en sus formas de sal. En una realización, los aminoácidos utilizados en la preparación de las composiciones de la invención son aquéllos que llevan una cadena lateral cargada, tales como arginina, lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico. En las composiciones farmacológicas de la invención puede estar presente cualquier estereoisómero (es decir, L, D, o una mezcla de los mismos) de un aminoácido particular (por ejemplo, metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina y mezclas de los mismos) o combinaciones de estos estereoisómeros, con tal que el aminoácido particular esté presente en su forma de base libre o su forma de sal. En una realización, se utiliza el estereoisómero L. Las composiciones de la invención pueden formularse también con derivados de estos aminoácidos. Derivados de arginina adecuados incluyen, por ejemplo, aminoguanidina, ornitina y N-monoetil-L-arginina, derivados de metionina adecuados incluyen etionina y butionina, y derivados de cisteína adecuados incluyen S-metil-L-cisteína. Como en el caso de los otros aminoácidos, los derivados de aminoácidos se incorporan en las composiciones en su forma de base libre o su forma de sal. En otra realización de la invención, los aminoácidos o derivados de aminoácidos se utilizan en una concentración que es suficiente para prevenir o retardar la agregación de la proteína.
En otra realización de la invención, la formulación comprende además un surfactante. En otra realización de la invención, la formulación comprende además inhibidores de proteasas. El uso de un inhibidor de proteasas es particularmente útil en composiciones farmacéuticas que comprenden zimógenos de proteasas a fin de inhibir la autocatálisis.
Es posible que puedan estar presentes otros ingredientes en la formulación farmacéutica de polipéptidos de la presente invención. Tales ingredientes adicionales pueden incluir agentes humectantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de aumento de volumen, modificadores de la tonicidad, agentes quelantes, iones metálicos, vehículos oleaginosos, proteínas (por ejemplo, seroalbúmina humana, gelatina o proteínas) y un ion dipolar (por ejemplo, un aminoácido tal como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina). Por supuesto, tales ingredientes adicionales no deberían afectar desfavorablemente a la estabilidad global de la formulación farmacéutica de la presente invención.
Las composiciones farmacéuticas que contienen un polipéptido conforme a la presente invención pueden administrarse a un paciente que precisa dicho tratamiento en varios sitios, por ejemplo, en sitios locales, por ejemplo, la piel y sitios mucosales, en sitios que salvan en derivación la absorción, por ejemplo, la administración en una arteria, en una vena, en el corazón, y en sitios que implican absorción, por ejemplo, administración en la piel, bajo la piel, en un músculo o en el abdomen.
La administración de las composiciones farmacéuticas conforme a la invención puede realizarse por varias rutas de administración, por ejemplo, lingual, sublingual, bucal, en la boca, oral, en el estómago e intestino, nasal, pulmonar, por ejemplo, a través de los bronquiolos y alvéolos o una combinación de las mismas, epidérmica, dérmica, transdérmica, vaginal, rectal, ocular, por ejemplo a través de la conjuntiva, ureteral, y parenteral a los pacientes que necesiten un tratamiento de este tipo.
Las composiciones de la presente invención se pueden administrar en varias formas de dosificación, por ejemplo, como soluciones, suspensiones, emulsiones, microemulsiones, emulsión múltiple, espumas, pomadas, pastas, emplastos, ungüentos, tabletas, tabletas recubiertas, lavados, cápsulas, por ejemplo, cápsulas de gelatina dura y cápsulas de gelatina blanda, supositorios, cápsulas rectales, gotas, geles, sprays, polvo, aerosoles, inhalantes, gotas oftálmicas, ungüentos oftálmicos, lavados oftálmicos, pesarios vaginales, anillos vaginales, ungüentos vaginales, solución inyectable, soluciones de transformación in situ, por ejemplo gelificación in situ, deposición in situ, precipitación in situ, cristalización in situ, solución de infusión, e implantes.
Las composiciones de la invención pueden incorporarse adicionalmente, o unirse a, por ejemplo por interacciones covalentes, hidrófobas y electrostáticas, un vehículo de fármaco, sistema de suministro de fármacos y sistema Las composiciones de la presente invención son útiles en la formulación de sólidos, semisólidos, polvo y soluciones para administración pulmonar del derivado de un análogo de amilina, utilizando, por ejemplo, un inhalador de dosis medidas, inhalador de polvo seco y un nebulizador, siendo todos ellos dispositivos bien conocidos por los expertos en la técnica.
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Las composiciones de la presente invención son útiles en la formulación de sistemas de suministro de fármacos controlado, sostenido, prolongado, retardado, y de liberación lenta.
La administración parenteral puede realizarse por inyección subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringuilla, opcionalmente una jeringuilla tipo pluma. Alternativamente, la administración parenteral puede realizarse por medio de una bomba de infusión. Una opción adicional es una composición que puede ser una solución o suspensión para la administración del derivado de un análogo de amilina en la forma de un spray nasal o pulmonar. Como otra opción adicional, las composiciones farmacéuticas que contienen el polipéptido de la invención pueden adaptarse también para administración transdérmica, por ejemplo, por inyección sin aguja, o a partir de un parche, opcionalmente un parche iontoforético, o administración transmucosal, por ejemplo, bucal.
El polipéptido de la invención puede administrarse por la ruta pulmonar en un vehículo, como una solución, suspensión o polvo seco utilizando cualquiera de los tipos conocidos de dispositivos adecuados para suministro pulmonar de fármacos. Ejemplos de éstos comprenden, pero sin carácter limitante, los tres tipos generales de generación de aerosoles para suministro pulmonar de fármacos, y pueden incluir nebulizadores de chorro o ultrasónicos, inhaladores de dosis medidas, o inhaladores de polvo seco (cf. Yu J, Chien YW. Pulmonary drug delivery: Physiologic and mechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14(4) (1997) 395-453).
En una realización de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el polipéptido de la invención es estable durante más de 6 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento.
En otra realización de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el polipéptido de la invención es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento.
En otra realización de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el derivado de un análogo de amilina es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento.
En otra realización de la invención, la formulación farmacéutica que comprende el derivado de un análogo de amilina es estable durante más de dos semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento.
En un aspecto, un proceso para preparación de una composición farmacéutica que comprende el derivado conforme a la invención comprende mezclar un derivado conforme a la invención con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
INDICACIONES TERAPÉUTICAS
En un aspecto, el polipéptido conforme a la invención puede utilizarse como medicamento.
En un aspecto, el polipéptido conforme a la invención puede utilizarse como un medicamento para el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, tolerancia deteriorada a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, ateroesclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria y otros trastornos cardiovasculares, ictus, síndrome inflamatorio intestinal, dispepsia y úlceras gástricas.
En un aspecto, el polipéptido es para uso en el retardo o la prevención de la progresión de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
En un aspecto, el polipéptido conforme a la invención puede utilizarse como medicamento para el tratamiento o la prevención de la obesidad.
En un aspecto, el péptido conforme a la invención puede utilizarse como medicamento para el tratamiento o la prevención de hipercalcemia, osteoporosis u ostitis derformans. En un aspecto, el polipéptido puede utilizarse como medicamento para reducción del peso corporal. En un aspecto, el polipéptido puede utilizarse como medicamento para el tratamiento o la prevención de la obesidad, o como como medicamento para prevención del aumento de peso corporal. En un aspecto, el polipéptido puede utilizarse como medicamento para la modificación de la ingesta de alimento, tal como reducción de la ingesta de alimento.
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En un aspecto, el polipéptido conforme a la invención puede utilizarse para la preparación de un medicamento.
En un aspecto, el polipéptido puede utilizarse para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, tolerancia deteriorada a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, ateroesclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria y otros trastornos cardiovasculares, ictus, síndrome inflamatorio intestinal, dispepsia y úlceras gástricas.
En un aspecto, el polipéptido puede utilizarse para la preparación de un medicamento para el retardo o la prevención de la progresión de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
En un aspecto, el polipéptido puede utilizarse para la preparación de un medicamento para disminución de la ingesta de alimento, disminución de la apoptosis de las células β, aumento de la función de las células β y de la masa de células β, y/o para el restablecimiento de la sensibilidad de la glucosa a las células β.
El tratamiento con un polipéptido conforme a la presente invención puede combinarse también con una segunda o más sustancias farmacológicamente activas, por ejemplo, seleccionadas de agentes antidiabéticos, agentes antiobesidad, agentes reguladores del apetito, agentes antihipertensivos, agentes para tratamiento y/o la prevención de complicaciones resultantes de o asociadas con la diabetes y agentes para el tratamiento y/o la prevención de complicaciones y trastornos resultantes de o asociadas con la obesidad. Ejemplos de estas sustancias farmacológicamente activas son: insulina, derivados de insulina, análogos de insulina, GLP-1, derivados de GLP-1, análogos de GLP-1, derivados de oxintomodulina, sulfonilureas, biguanidas, meglitinidas, inhibidores de glucosidasa, antagonistas de glucagón, inhibidores de DPP-IV (dipeptidilpeptidasa), inhibidores de enzimas hepáticas implicadas en la estimulación de gluconeogénesis y/o glucogenólisis, moduladores de la absorción de glucosa, compuestos modificadores del metabolismo de los lípidos tales como agentes antihiperlipidémicos como inhibidores de la HMG CoA (estatinas), compuestos reductores de la ingesta de alimento, agonistas de RXR y agentes que actúan sobre el canal de potasio dependiente de ATP de las células β; colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida; β-bloqueantes tales como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol y metoprolol, inhibidores de ACE (enzima convertidora de las angiotensinas) tales como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueantes de los canales de calcio tales como nifedipino, felodipino, nicardipino, isradipino, nimodipino, diltiazem y verapamil, y αbloqueantes tales como doxazosin, urapidil, prazosin y terazosin; agonistas de CART (transcriptor regulado por cocaína-anfetamina), antagonistas de NPY (neuropéptido Y), agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina, agonistas de TNF (factor de necrosis de tumores), agonistas de CRF (factor liberador de corticotropina), antagonistas de CRF BP (proteína de fijación del factor liberador de corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas β3, agonistas de MSH (hormona estimulante de los melanocitos), antagonistas de MCH (hormona de concentración de los melanocitos), agonistas de CCK (colecistoquinina), inhibidores de la reabsorción de serotonina, inhibidores de la reabsorción de serotonina y noradrenalina, compuestos mixtos de serotonina y noradrenérgicos, agonistas de 5HT (serotonina), agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormona del crecimiento, compuestos liberadores de hormona del crecimiento, agonistas de TRH (hormona liberadora de tirotropina), moduladores de UCP 2 ó 3 (proteína de desacoplamiento 2 ó 3), agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inhibidores de lipasa/amilasa, moduladores de RXR (receptor X de retinoides), βagonistas de TR; antagonistas H3 de histamina, gastrina y análogos de gastrina.
Debe entenderse que se considera que cualquier combinación adecuada de los polipéptidos conforme a la invención con uno o más de los compuestos arriba mencionados y opcionalmente una o más sustancias farmacológicamente activas adicionales están dentro del alcance de la presente invención.
Los párrafos numerados siguientes definen aspectos preferidos de la presente invención.
1.
Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 en
donde: dicho análogo comprende un residuo de aminoácido en posición 17 que es His o Arg y/o un residuo de aminoácido en posición 35 que es His o Arg o Lys o Asp o Glu; y opcionalmente un residuo prolina en posición 37 y/o un residuo ácido glutámico en posición 14; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de aminoácidos de SEQ id No: 2; y opcionalmente el polipéptido tiene al menos un sustituyente unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
2.
El polipéptido conforme al párrafo anterior que comprende una amida C-terminal.
3.
El polipéptido conforme al párrafo 2, en donde la amida C-terminal es de fórmula (II):
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(II) C(O)NR1R2
en donde R1 y R2 se seleccionan independientemente de H y alquilo. Preferiblemente R1 y R2 son ambos H.
4.
El polipéptido conforme al párrafo 3 en donde R1 y R2 son ambos H.
5.
El polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores en donde al menos un sustituyente está unido a uno de los residuos de aminoácido.
6.
El polipéptido conforme al párrafo 5 en donde el sustituyente se selecciona de un grupo hidrocarbilo, un grupo hidroxilo y un átomo de halógeno.
7.
El polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos 5 y 6, en donde el grupo sustituyente es de fórmula (II):
(II) Ln-Y
en donde
L es un enlazador; n = 0 ó 1 Y es un resto de fijación de albúmina.
8. El polipéptido conforme al párrafo 7, en donde el resto de fijación de albúmina es un grupo acilo seleccionado de:
(a)
CH3(CH)rCO-, en donde r es un número entero de 12 a 20;
(b)
HOOC(CH2)sCO-, en donde s es un número entero de 12 a 22 o s es un número entero de 12 a 18, o s es 16 a 18 o preferiblemente s es 18.
9. El polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores en donde el enlazador se
selecciona del grupo constituido por γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu-γGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-γGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-γGlu, His-His-γGlu, Gly, Gly-γGlu, Ser, Ser-γGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-γGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-γGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly y Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-γGlu, γGlu-OEG, γGlu-OEG-OEG y OEG, seleccionándose preferiblemente el enlazador de γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-OEG, γGlu-OEG-OEG y OEG, y siendo más preferiblemente el enlazador γGlu.
10.
El polipéptido conforme a cualquier párrafo anterior, en donde el grupo sustituyente se selecciona de
los grupos presentados en la Tabla 1 (presentada anteriormente).
11.
El polipéptido conforme a cualquier párrafo anterior, en donde un sustituyente está unido al grupo alfaamino del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys.
12.
El polipéptido conforme a cualquier párrafo anterior, en donde un sustituyente está unido al residuo de aminoácido en la posición 1 solamente.
13.
El polipéptido conforme a cualesquiera párrafos anteriores seleccionado del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 2 (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 3 (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 4 (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 5 de (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 6 (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 7 (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 8 (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 9 (presentada anteriormente); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 10 (presentada más adelante); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 11 (presentada más adelante); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 12 (presentada más adelante); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 13 (presentada más adelante); o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 14 (presentada más adelante);
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o del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 15 (presentada más adelante).
14.
El polipéptido conforme a cualesquiera párrafos anteriores seleccionado del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 8 (presentada anteriormente).
15.
El polipéptido conforme a cualesquiera párrafos anteriores seleccionado del grupo constituido por cualquiera de los polipéptidos presentados en la Tabla 9 (presentada anteriormente).
16.
El polipéptido conforme a cualquier párrafo anterior, en donde el polipéptido es:
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida [ejemplo 53]
17.
Una composición farmacéutica que comprende un polipéptido conforme a cualquiera de los párrafos anteriores y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
18.
La composición farmacéutica conforme al párrafo 17, que es adecuada para administración parenteral.
19.
20.
Un proceso para preparación de una composición farmacéutica conforme al párrafo 17 o el párrafo 18, que comprende mezclar un polipéptido conforme a cualquier párrafo anterior con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
20.
Un polipéptido conforme a cualquiera de los párrafos anteriores para uso como medicamento.
21.
Un polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores para uso el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, tolerancia deteriorada a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, ateroesclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria y otros trastornos cardiovasculares, ictus, síndrome inflamatorio intestinal, dispepsia y úlceras gástricas.
22.
Un polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores para uso en el retardo o la prevención de la progresión de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
23.
Un polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores para uso en la prevención o el tratamiento de la obesidad.
24.
Un polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores para uso en la disminución de la ingesta de alimento, disminución de la apoptosis de las células β, aumento de la función de las células β y de la masa de células β, y/o para el restablecimiento de la sensibilidad de la glucosa a las células β.
25.
Un polipéptido conforme uno cualquiera de los párrafos anteriores, para uso en el tratamiento o la prevención de hipercalcemia, osteoporosis u ostitis derformans.
26.
Un método de tratamiento o prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, tolerancia deteriorada a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, ateroesclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria y otros trastornos cardiovasculares, ictus, síndrome inflamatorio intestinal, dispepsia y úlceras gástricas, por administración de un polipéptido conforme a cualquiera de los párrafos anteriores a un animal.
27.
Un método de retardo o prevención de la progresión de la enfermedad en la diabetes tipo 2 por administración de un polipéptido conforme a cualquiera de los párrafos anteriores a un animal.
28.
Un método de disminución de la ingesta de alimento, disminución de la apoptosis de las células β, aumento de la función de las células β y de la masa de células β, y/o para el restablecimiento de la sensibilidad de la glucosa a las células β por administración de un polipéptido conforme a cualquiera de los párrafos anteriores a un animal.
29.
Un método de tratamiento o prevención de hipercalcemia, osteoporosis u ostitis derformans por administración de un polipéptido conforme a cualquiera de los párrafos anteriores a un animal.
30.
El polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores en donde dicho polipéptido tiene un valor CE50 en el receptor de amilina humana de aproximadamente 1800 pM o menor.
31.
El polipéptido conforme a uno cualquiera de los párrafos anteriores en donde dicho polipéptido tiene un
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valor CE50 en el receptor de calcitonina humana de aproximadamente 1800 pM o menor.
La invención se resumirá ulteriormente en los párrafos adicionales siguientes:
1. Un derivado de amilina, que es un análogo de amilina que tiene hasta 10 modificaciones de residuos
de aminoácido comparado con SEQ ID No: 2 y que tiene un sustituyente unido al grupo alfa-amino del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys en el análogo de amilina, en donde dicho sustituyente comprende un resto de fijación de albúmina y en donde
a.
el residuo de aminoácido en posición 14 del análogo de amilina es Glu o
b.
el residuo de aminoácido en posición 35 del análogo de amilina es His, Arg, Lys, Asp o Glu o
c.
el residuo de aminoácido en posición 37 del análogo de amilina es Pro.
2.
Un derivado conforme al párrafo 1, en donde el residuo de aminoácido en posición 14 es Glu.
3.
Un derivado conforme a los párrafos o 1-2, en donde
a. el residuo de aminoácido en posición 14 es Glu y el aminoácido en posición 35 es His, Arg,
Lys, Asp o Glu o
b. el residuo de aminoácido en posición 14 es Glu y el aminoácido en posición 37 es Pro
4. Un derivado conforme a los párrafos 1-3, en donde
a. el residuo de aminoácido en posición 14 es Glu y el aminoácido en posición 35 es His.
5.
Un derivado conforme a los párrafos 1-4, en donde el residuo de aminoácido en posición 17 es His.
6.
Un derivado conforme a los párrafos 1-5, en donde el análogo de amilina comprende 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 sustituciones.
7.
Un derivado conforme a los párrafos 1-6 en donde el aminoácido en posición 1 del análogo de amilina
está sustituido o está delecionado.
8.
Un derivado conforme a los párrafos 1-7 en donde el aminoácido en posición 1 se selecciona del grupo constituido por Lys, Glu, Arg, Ala, Ser, Cys, Gly y His.
9.
Un derivado conforme a los párrafos 1-8, en donde el sustituyente comprende un enlazador.
10.
Un derivado conforme a los párrafos 1-9, en donde el enlazador comprende 1-10 aminoácidos que están
unidos al grupo alfa-amino del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys en el análogo de amilina.
11.
Un derivado conforme al párrafo 10, en donde los aminoácidos se seleccionan del grupo constituido por γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu-γGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-γGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-γGlu, His-His-γGlu, Gly, Gly-γGlu, Ser, Ser-γGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-γGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-γGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly y Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-γGlu.
12.
Un derivado conforme a los párrafos 1-11, en donde el enlazador comprende -C(O)-(CH2)l-O-[CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O) -(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH-en donde I, m, n, y p son independientemente
17, y qes 0-5.
13.Un derivado conforme a los párrafos 1-12, en donde el enlazador se selecciona del grupo constituido por -C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-NH-o -C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O) -CH2O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-y -C(O) -(CH2)2-O-[CH2CH2-O]7-(CH2)2-NH-.
14.
Un derivado conforme a los párrafos 1-13, en donde el enlazador se selecciona del grupo constituido
por γGlu-C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O) -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-y Arg-ArgγGlu-C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O) -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-.
15.
Un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1-14, en donde el residuo de fijación de albúmina es
16.
Un derivado conforme a los párrafos 1-15, en donde el derivado comprende un enlazador γGlu unido al terminal-N del análogo de amilina y HOOC(CH2)18CO o HOOC(CH2)16CO-como el residuo de fijación de albúmina y donde la secuencia del análogo de amilina comprende:
a.
Glu en posición 14
b.
His o Arg en posición 17
c.
His en posición 35 o Pro en posición 37,
17.
Un derivado conforme al párrafo 1, donde el análogo de amilina comprende una secuencia de aminoácidos de fórmula 1:
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Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Xaa17-Xaa18-Ser-Ser-Xaa21-Xaa22-Phe-Gly-Pro-Xaa26-Leu-Pro-Pro-Thr-Xaa31-Val-Gly-Ser-Xaa35-Thr-Xaa37 Fórmula (1) (SEQ ID No:3)
en donde
Xaa1 está delecionado o se selecciona independientemente de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser y Lys; Xaa3 se selecciona independientemente de Gly, His, Arg, Ser y Asn; Xaa17 se selecciona independientemente de His, Arg, Lys y Val; Xaa18 se selecciona independientemente de Arg, Lys y His; Xaa21 se selecciona independientemente de Ala, Lys, Gln, Ser y Asn; Xaa22 se selecciona independientemente de Glu, Gln, Ser, Thr y Asn; Xaa26 se selecciona independientemente de Pro, Arg y Ile; Xaa31 se selecciona independientemente de Ser, Glu, Asp y Asn; Xaa35 se selecciona independientemente de His, Arg, Lys, Asp y Glu; Xaa37 se selecciona independientemente de Pro y Tyr; y donde el terminal C puede estar derivatizado opcionalmente como una amida.
18.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17, en donde Xaa1 está delecionado o se selecciona independientemente de His, Arg y Lys; Xaa3 se selecciona independientemente de Gly, His y Asn; Xaa17 se selecciona independientemente de His, Arg y Val; Xaa18 se selecciona independientemente de Arg y His; Xaa21 se selecciona independientemente de Ser y Asn; Xaa22 es Asn; Xaa26 es Ile; Xaa31 se selecciona independientemente de Glu y Asn; Xaa35 se selecciona independientemente de His, Arg, Lys, Asp y Glu; Xaa37 se selecciona independientemente de Pro y Tyr.
19.
Un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1 y 17 en donde Xaa1 está delecionado o se selecciona independientemente de Gly, His, Arg, Ser y Lys; Xaa3 se selecciona independientemente de His y Asn; Xaa17 se selecciona independientemente de His, Arg y Val; Xaa18 se selecciona independientemente de Arg y His; Xaa21 se selecciona independientemente de Gln, Ser y Asn; Xaa22 es Asn; Xaa26 se selecciona independientemente de Pro y Ile; Xaa31 es Asn; Xaa35 es His; Xaa37 es Tyr.
20.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17, en donde Xaa1 está delecionado o se selecciona independientemente de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser y Lys; Xaa3 es Asn; Xaa17 se selecciona independientemente de His, Arg y Val; Xaa18 se selecciona independientemente de Arg, Lys y His; Xaa21 se selecciona independientemente de Gln y Asn; Xaa22 se selecciona independientemente de Thr y Asn; Xaa26 es Ile; Xaa31 es Asn;
Xaa35 se selecciona independientemente de Gly y Asn; Xaa37 es Pro.
21.
Un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1 y 17, en donde Xaa1 está delecionado; Xaa3 se selecciona independientemente de Gly y Asn; Xaa17 se selecciona independientemente de His, Arg y Val; Xaa18 se selecciona independientemente de Arg y His; Xaa21 se selecciona independientemente de Gln y Asn; Xaa22 se selecciona independientemente de Gln y Asn; Xaa26 es Ile; Xaa31 se selecciona independientemente de Glu y Asn; Xaa35 se selecciona independientemente de His y Ser; Xaa37 se selecciona independientemente de Pro y Tyr.
22.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17, en donde Xaa1 es Lys; Xaa3 es Asn; Xaa17 se selecciona independientemente de His, Lys, Arg y Val; Xaa18 se selecciona independientemente de Arg y His; Xaa21 se selecciona independientemente de Ala, Lys, Gln y Ser; Xaa22 se selecciona independientemente de Glu, Gln, Ser, Thr y Asn; Xaa26 se selecciona independientemente de Pro y Ile; Xaa31 se selecciona independientemente de Ser, Glu, Asp y Asn; Xaa35 se selecciona independientemente de His, Glu y Asn; Xaa37 se selecciona independientemente de Pro y Tyr.
23.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-22, en donde el residuo de fijación de albúmina se fija no covalentemente a albúmina.
24.
Un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1 y 17-23, en donde el residuo de fijación de
albúmina tiene una capacidad de fijación de albúmina para la seroalbúmina humana que es menor que aproximadamente 10 µM o menor que aproximadamente 1 µM.
25.
Un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1 y 17-24, en donde el residuo de fijación de
albúmina comprende un grupo que puede estar cargado negativamente a pH 7,4.
26.
Un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1 y 17-25, en donde el residuo de fijación de albúmina comprende un grupo ácido carboxílico.
27.
Un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1 y 17-26, en donde el residuo de fijación de albúmina es un grupo acilo seleccionado del grupo que comprende HOOC(CH2)sCO-, en donde s es un número entero de 12 a 22, por ejemplo 17, 18, 19, 20, 21 ó 22.
28.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 27, en donde s es 16 ó 18.
29.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-28, en donde el sustituyente comprende un enlazador.
30.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-29, en donde el enlazador comprende 1-10 aminoácidos
que están unidos al grupo alfa-amino del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys en el análogo de amilina.
31.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-30, en donde los aminoácidos se seleccionan del grupo constituido por un derivado conforme al párrafo 10, en donde los aminoácidos se seleccionan del grupo constituido por γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu-γGlu, Glu, Glu-Glu, Glu-γGlu, Glu-Arg, Glu-Glu-Arg, His, His-His, His-γGlu, His-His-γGlu, Gly, Gly-γGlu, Ser, Ser-γGlu, D-Arg-D-Arg, Arg, Arg-Arg, Arg-Arg-γGlu, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser, Ser-Ser,-Gly-Ser-Ser-γGlu, Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly y Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-γGlu.
32.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-31, en donde el enlazador comprende γGlu.
33.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-32, en donde el enlazador comprende -C(O) -(CH2)l-O[CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O) -(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH-en donde l, m, n, y p son independientemente 1-7, y q es 0-5.
34.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-33, en donde el enlazador se selecciona del grupo constituido por -C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-NH-o -C(O)-CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 [NHC(O) -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-y -C(O) -(CH2)2-O-[CH2CH2-O]7-(CH2)2-NH-.
35.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-34, en donde el enlazador se selecciona del grupo constituido por γGlu-C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O)-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1NH-y Arg-Arg-γGlu-C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O) -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-.
36.
Un derivado conforme a los párrafos 1 y 17-28, en donde el enlazador es γGlu-γGlu-γGlu-γGlu-C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O) -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-.
37.
Un derivado conforme al párrafo 1, en donde el derivado se selecciona del grupo constituido por:
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N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Arg35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Arg3,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,Arg35]-pramlintida N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His29]pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser[Gly1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, 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N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Ser21,Lys25]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, 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N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu 14, Pro37]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, 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N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu 1, Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys25]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Asp21,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,His35]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, N-épsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18,Pro37]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Arg-[Glu14,Arg17,His35,Pro37]pramlintida, N-épsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp21,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp31,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp22,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Asp3,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-épsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida.
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imagen176
imagen177
38. Una composición farmacéutica que comprende un derivado conforme a cualquiera a de los de los
párrafos 1-37, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
39.
La composición farmacéutica conforme al párrafo 38, que es adecuada para administración parenteral.
40.
Un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para uso como medicamento.
41.
Un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para uso como medicamento para el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, tolerancia deteriorada a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, ateroesclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria y otros trastornos cardiovasculares, ictus, síndrome inflamatorio intestinal, dispepsia y úlceras gástricas.
42.
Un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para uso como medicamento para el retardo o la prevención de la progresión de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
43.
Un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para uso como medicamento para la disminución de la ingesta de alimento, disminución de la apoptosis de las células β, aumento de la función de las células β y de la masa de células β, y/o para el restablecimiento de la sensibilidad de la glucosa a las células β.
44.
Uso de un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para la preparación de un medicamento.
45.
Uso de un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, tolerancia deteriorada a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, ateroesclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria y otros trastornos cardiovasculares, ictus, síndrome inflamatorio intestinal, dispepsia y úlceras gástricas.
46.
Uso de un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para la preparación de un medicamento para el retardo o la prevención de la progresión de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
47.
Uso de un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 para la preparación de un medicamento para tratamiento de la obesidad, disminución de la ingesta de alimento, disminución de la apoptosis de las células β, aumento de la función de las células β y la masa de células β, y/o para restablecimiento de la sensibilidad de la glucosa a las células β.
48.
Un proceso para preparación de una composición farmacéutica conforme a los párrafos 38-39, que comprende mezclar un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-37 con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
49.
Un derivado de amilina conforme a los ejemplos
imagen178
La invención se resumirá ulteriormente en los párrafos adicionales que siguen:
1. Un derivado de amilina, que es un análogo de amilina que tiene hasta 10 modificaciones de residuos de aminoácido comparado con SEQ ID No: 2 y que tiene un sustituyente unido al grupo alfa-amino del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys en el análogo de amilina, en donde dicho sustituyente comprende un resto de fijación de albúmina y en donde
a.
el residuo de aminoácido en posición 14 del análogo de amilina es Glu o
b.
el residuo de aminoácido en posición 35 del análogo de amilina es His, Arg, Lys, Asp o Glu o
c.
el residuo de aminoácido en posición 37 del análogo de amilina es Pro.
2.
Un derivado conforme al párrafo 1, en donde el residuo de aminoácido en posición 14 es Glu.
3.
Un derivado conforme a los párrafos 1-2, en donde
c.
el residuo de aminoácido en posición 14 es Glu y el aminoácido en posición 35 es His, Arg, Lys, Asp o Glu o
d.
el residuo de aminoácido en posición 14 es Glu y el aminoácido en posición 37 es Pro
4.
Un derivado conforme a los párrafos 1-4, en donde el residuo de aminoácido en posición 17 es His.
5.
Un derivado conforme al párrafo 1, donde el análogo de amilina comprende una secuencia de aminoácidos de fórmula 1:
Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Xaa17-Xaa18-Ser-Ser-Xaa21-Xaa22-Phe-Gly-Pro-Xaa26-Leu-Pro-Pro-Thr-Xaa31-Val-Gly-Ser-Xaa35-Thr-Xaa37 Fórmula (1) (SEQ ID No:3)
en donde
Xaa1 está delecionado o se selecciona independientemente de Ala, Cys, Glu, Gly, His, Arg, Ser y Lys; Xaa3 se selecciona independientemente de Gly, His, Arg, Ser y Asn; Xaa17 se selecciona independientemente de His, Arg, Lys y Val; Xaa18 se selecciona independientemente de Arg, Lys y His; Xaa21 se selecciona independientemente de Ala, Lys, Gln, Ser y Asn; Xaa22 se selecciona independientemente de Glu, Gln, Ser, Thr y Asn; Xaa26 se selecciona independientemente de Pro, Arg y Ile; Xaa31 se selecciona independientemente de Ser, Glu, Asp y Asn; Xaa35 se selecciona independientemente de His, Arg, Lys, Asp y Glu; Xaa37 se selecciona independientemente de Pro y Tyr; y donde el terminal C puede estar derivatizado opcionalmente como una amida.
6.
Un derivado conforme a los párrafos 1-5, en donde el sustituyente comprende un enlazador que tiene 110 aminoácidos que están unidos al grupo amino alfa del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys en el análogo de amilina.
7.
Un derivado conforme a los párrafos 1-6, en donde el enlazador comprende γGlu.
8.
Un derivado conforme a los párrafos 1-7, en donde el enlazador se selecciona del grupo constituido por γGlu-C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O) -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-y Arg-ArgγGlu-C(O) -CH2 -O-CH2-CH2-O-CH2-CH2 -[NHC(O) -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-]1-NH-.
9.
Un derivado conforme a los párrafos 1-8, en donde el derivado comprende un enlazador γGlu unido al terminal N del análogo de amilina y HOOC(CH2)18CO o HOOC(CH2)16CO-como el residuo de fijación de albúmina y donde la secuencia del análogo de amilina comprende:
a.
Glu en posición 14
b.
His o Arg en posición 17
c.
His en posición 35 o Pro en posición 37,
1.
10.
Un derivado conforme al párrafo 1, en donde el derivado se selecciona del grupo constituido por:
imagen179
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1 ,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Arg35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Arg3,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,Arg35]-pramlintida N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,His3,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,His29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,His3,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,His29]pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Glu14,His17,Arg18,Ala21,Ser35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser[Gly1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][des1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-{(S)-4-Carboxi-4-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]butiril}[des1,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu 14,Arg17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu10,Glu14,His17]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ser21,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[Glu14,Arg17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-His-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida, N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Ser21,Lys25]-pramlintida, N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25]-pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys17]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-epsilon17-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu 14, Pro37]-pramlintida, N-epsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida, N-epsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,Arg17,Ser21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Arg35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Lys35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His36]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His34]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His32]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,His35)pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Ser21,His35]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-D-Arg-D-Arg[Orn1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida, N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Pro37]-pramlintida N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu 1, Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-(19-carboxinonadecanoil)-Glu-Glu-Arg-[Glu1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Glu14,Lys25]pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Asp21,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,Gln21,His35]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Pro37]pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,His35]-pramlintida, N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ser21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,His21,Lys25,Ser28,Ser29.His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Gly1,Glu14,His17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Gln21,Gln35,Pro37]pramlintida, N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, N-epsilon25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys25,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg18,Pro37]pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Lys11,Glu14,His17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Thr21,Pro37]pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Lys21,Ser28,Arg29,His35]-pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Ser28,Ser29,His35]-pramlintida, N-epsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Arg-[Glu14,Arg17,His35,Pro37]pramlintida, N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Arg18,Lys21,Ser28,Arg29,Arg35]-pramlintida, N-epsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,His17,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg14,Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu[Arg1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Arg[Glu1,Glu14,Arg17,Gln21,Gln22,Gln31,Gln35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-Glu-[Glu1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Gln21,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Glu21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Lys21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,His17,Ala21,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu14,Ser21,Ser22,Pro23,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Asp31,Asp35,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp21,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp35,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp31,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Asp22,Pro37]pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Asp3,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-epsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida, N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida.
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imagen184
5 11. Una composición farmacéutica que comprende un derivado conforme a cualquiera de los párrafos 1-10, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
12. Un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-10 para uso como medicamento.
10 13. Un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-10 para uso como medicamento para tratamiento de la obesidad, para disminución de la ingesta de alimento, disminución de la apoptosis de las células β, aumento de la función de las células β y la masa de células β, y/o para restablecimiento de la sensibilidad de la glucosa a las células β.
15 14. Uso de un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-10 para la preparación de un medicamento.
15. Un proceso para preparación de una composición farmacéutica que comprende mezclar un derivado conforme a uno cualquiera de los párrafos 1-10 con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
20 La presente invención se describirá a continuación únicamente por vía de ejemplos.
EJEMPLOS
25 Los polipéptidos preparados se muestran en la Tabla 10.
Tabla 10
Ejemplo Nº
Nombre
1
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
2
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu8,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
3
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Glu31,Gly35]-pramlintida
4
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][des1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Gln21,Gln22,Glu31,Gly35]-pramlintida
5
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18]-pramlintida
6
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida
7
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu25,Ser28,Arg29]-pramlintida
8
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Glu22,Ala25,Arg26,Ser28,Ser29]-pramlintida
9
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Asp31,Asp35]-pramlintida
10
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu1,Glu14,His17,Arg18,Pro37]-pramlintida
11
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida
12
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,Arg17]-pramlintida
14
N-epsilon21-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]ethoxy}ethoxy)acetilamino]ethoxy}ethoxy)acetil][Arg1,Glu14,His17,Arg18,Lys21]-pramlintida
15
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Hisl,Glu14,Arg18]-pramlintida
16
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][His1,Gly3,Glu14,His17,Arg18,Ser21,Ser22,Glu31,Glu35]-pramlintida
17
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-[His1,Glu14,His17]-pramlintida
18
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17]-pramlintida
imagen185
Ejemplo Nº
Nombre
19
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His[His1,Glu14,His17,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29]-pramlintida
20
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14]-pramlintida
21
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Glu14,His17,Arg35]pramlintida
22
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-His-His-[His1,Arg3,Glu14,His17]-pramlintida
23
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][His1,Glu14,His17,Arg18,Ala19,Thr20,Gln21,Glu22,Leu23]-pramlintida
24
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril][Glu1,Gly3,Glu14,Arg18,Ser21,Ser22,Ala25,Pro26,Ser28,Ser29,Glu31,Arg35]-pramlintida
25
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Arg1,Glu14,His17]-pramlintida
26
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17]-pramlintida
27
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17]-pramlintida
28
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17]-pramlintida
imagen186
imagen187
imagen188
imagen189
[Glu14,Lys17,Ser21,Glu35]-pramlintida
84
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
85
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Ser-[Glu14,His17,His35]-pramlintida
86
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Pro37]-pramlintida
87
N-epsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida
88
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida
89
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]pramlintida
90
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Arg17,Pro37]-pramlintida
91
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
92
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[His1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida
93
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His35]-pramlintida
94
N-epsilon1-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxiheptadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida
95
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
96
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
97
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,Pro37]-pramlintida
98
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Arg1,His35]-pramlintida
99
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,His35]-pramlintida
100
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,His35]pramlintida
101
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida
102
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Glu14,Pro37]-pramlintida
103
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Gly-[Arg1,Pro37]-pramlintida
104
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,His17,Pro37]pramlintida
105
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Gly1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
106
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,Pro37]-pramlintida
107
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Ser1,Glu14,His17,His35]-pramlintida
108
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[des1,Glu14,Pro37]-pramlintida
109
N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[His1,Glu14,Pro37]-pramlintida
imagen190
imagen191
imagen192
imagen193
Ejemplo Nº
Nombre
N-alfa-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(19carboxiheptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]178
[Glu14,Ala21,His35,Pro37]-pramlintida
La potencia in vitro de los polipéptidos frente a los receptores de amilina y los receptores de calcitonina de ratas y humanas (como se describe en el Ensayo (II)) se muestra en la Tabla 11.
Tabla 11
Ejemplo Nº
Receptor de amilina de rata CE50 (pM) Receptor de CTa de rata CE50 (pM) Receptor de amilina humana CE50 (pM) Receptor de CTa humana CE50 (pM)
1
64,5 379 93,4 149,7
2
imagen194 imagen195 602 4300,5
3
imagen196 imagen197 164 222
4
imagen198 imagen199 253,3 284,3
5
imagen200 imagen201 353,5 1650
6
imagen202 imagen203 114,7 239,8
7
imagen204 imagen205 77,9 131
8
imagen206 imagen207 126,5 278,5
9
330,5 1734 211,6 207,6
10
374,5 806,5 82,3 86,4
11
88,5 962 85,3 208,3
12
82 6764 77,5 408,5
14
imagen208 imagen209 99,4 469
15
imagen210 imagen211 83 125
16
imagen212 imagen213 313 197,5
17
147 221 111,3 166,4
18
187 1165 130,7 125,5
19
132 824 105,1 309,7
20
imagen214 imagen215 150,6 740,2
21
133 1342 192 429,2
22
261 1288 98,5 157,2
23
imagen216 imagen217 385 492
24
4512 1753 1441,5 672
25
imagen218 imagen219 118,8 184
26
475,5 1393 130 214,1
27
188 539 121,4 106,8
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imagen221
imagen222
imagen223
La solubilidad de los polipéptidos se testó como se describe en el Ensayo (IV) y los resultados se muestran en la Tabla 12.
Tabla 12
imagen224
Solubilidad (µM)
Ejemplo Nº
pH 3,0 pH 4,0 pH 5,0 pH 6,0 pH 6,5 pH 7,0 pH 7,5 pH 8,0
1
>200 >200 >200 52 16 15 58 138
3
>200 >200 68 >200 >200 >200 >200 >200
4
>200 120 0 42 82 146 183 190
5
>200 >200 62 164 181 >200 >200 >200
6
>200 163 168 12 4 7 18 48
7
>200 >200 13 69 32 42 89 155
8
178 93 2 1 1 1 1 3
9
>200 116 5 >200 >200 >200 >200 >200
10
>200 >200 >200 >200 >200 >200 >200 >200
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imagen229
Los derivados de amilina se testaron en cuanto a estabilidad física en el ensayo de ThT (Ensayo (III)) y los datos se muestran en la Tabla 13.
Tabla 13
Ejemplo Nº
Tiempo de retardo de ThT a pH 4,0 (h) Recuperación de ThT a pH 4,0 (%)
1
11 0
5
4,4 0
6
14 0
7
0 0
9
>45 57
11
7,4 3
12
>45 50
15
4,7 2
17
30,3 9
20
1,7 0
21
1 89
22
2,7 14
25
2,7 0
26
2 0
27
12,3 26
28
9,3 0
29
3 0
30
4,7 0
31
>45 94
32
>45 94
33
10 86
34
13 94
35
1,3 50
36
1,3 18
37
>45 87
38
>45 94
39
0 0
40
7 2
41
0 0
42
7,3 2
43
0 4
44
10,6 3
imagen230
imagen231
imagen232
Los derivados de amilina se testaron con respecto a su efecto en el Ensayo de Ingesta de alimento (Ensayo (I)) y los resultados se muestran en la Tabla 14.
imagen233
Ejemplo Nº
Reducción de la ingesta de alimento, 0-24h, 30 nmol/kg (%) Reducción de la ingesta de alimento, 24-48h, 30 nmol/kg (%) Reducción de la ingesta de alimento, 0-24h, 3 nmol/kg (%) Reducción de la ingesta de alimento, 24-48h, 3 nmol/kg (%)
1
93 92 50 45
3
imagen234 imagen235 37 32
7
imagen236 imagen237 53 46
9
imagen238 imagen239 39 32
10
imagen240 imagen241 50 40
11
87 92 imagen242 imagen243
12
70 45 imagen244 imagen245
14
imagen246 imagen247 27 8
15
imagen248 imagen249 56 59
17
imagen250 imagen251 40 22
18
imagen252 imagen253 40 32
22
imagen254 imagen255 26 5
26
imagen256 imagen257 46 39
27
imagen258 imagen259 56 53
28
imagen260 imagen261 39 36
29
imagen262 imagen263 15 5
37
imagen264 imagen265 24 0
38
imagen266 imagen267 16 0
42
imagen268 imagen269 45 5
46
imagen270 imagen271 54 27
50
imagen272 imagen273 30 8
52
imagen274 imagen275 62 74
53
imagen276 imagen277 40 28
55
88 90 58 40
56
imagen278 imagen279 46 21
57
imagen280 imagen281 17 0
59
imagen282 imagen283 59 27
71
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73
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84
imagen288 imagen289 68 67
87
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89
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96
imagen294 imagen295 69 89
101
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117
imagen298 imagen299 50 35
120
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5
10
15
20
25
30
35
40
45
La semivida de los derivados de amilina de la invención se testó en lechones como se describe en el Ensayo (IX) y los datos se muestran en la Tabla 15.
Tabla 15
Ejemplo Nº
Lechón PK i.v. T½ (horas)
11
106
27
90
52
105
53
98
55
73
57
68
59
59
96
107
ABREVIATURAS
Algunas de las abreviaturas utilizadas en los Ejemplos son como sigue:
Acm: acetamidometilo HATU: (O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio hexafluorofosfato) HBTU: 2-(1H-Benzotriazol-1-il-)-1,1,3,3 tetrametiluronio hexafluorofosfato Fmoc: 9 H-fluoren-9-ililmetoxicarbonilo Boc: terc.butiloxicarbonilo Mtt: 4-metiltritilo DCM: diclorometano TIPS: triisopropilsilano TFA: ácido trifluoroacético NMP: 1-Metil-pirrolidin-2-ona HOAt: 1-Hidroxi-7-azabenzotriazol DIC: Diisopropilcarbodiimida Trt: trifenilmetilo
ENSAYOS
En los ejemplos que siguen se hace referencia a los Ensayos siguientes:
Ensayo (I) -ad libitum ENSAYO (II)a -Ensayo Funcional -Ensayo de los receptores de calcitonina y amilina humanos ENSAYO (II)b -Ensayo Funcional -Ensayos de los receptores de calcitonina de rata y amilina de rata ENSAYO (III) -Ensayos de fibrilación de ThT para la evaluación de la estabilidad física de formulaciones de
proteínas ENSAYO (IV) -Determinación de solubilidad ENSAYO (V) -Determinación de fijación al receptor de amilina humana ENSAYO (VI) -Determinación de la fijación al receptor de amilina de rata ENSAYO (VII) -Determinación de fijación al receptor de calcitonina humana ENSAYO (VIII) -Determinación de fijación al receptor de calcitonina de rata ENSAYO (IX) -PK -Determinación de T½ en lechón ENSAYO (X) -PK -Determinación de T½ en rata
ENSAYO (I) -Protocolo experimental para ensayo de la eficacia sobre el apetito utilizando un modelo de rata alimentada ad libitum
Se utilizan para los experimentos ratas Sprague Dawley (SD) de Taconic Europe, Dinamarca. Las ratas tienen un peso corporal de 200-250 g al comienzo del experimento. Las ratas llegan al menos 10-14 días antes del comienzo del experimento. Para permitir la aclimatación a los ajustes experimentales. Durante este periodo, los animales se tratan al menos dos veces. Después de su llegada, las ratas se alojan individualmente durante una semana en una fase luz/oscuridad invertida (lo que significa que las luces están apagadas durante el día y encendidas durante la noche) durante dos semanas. Dado que las ratas son normalmente activas y toman la mayor parte de su ingesta de alimento diaria durante el periodo de oscuridad, se dosifican las ratas por la mañana inmediatamente antes de apagar las luces. Este ajuste da como resultado la variación mínima de los datos y la sensibilidad máxima del test. El experimento se conduce en las jaulas de alojamiento de las ratas y las ratas tienen acceso libre a alimento y agua durante todo el periodo de aclimatación y el periodo del experimento. Cada dosis de derivado se ensaya en un grupo de 5-8 ratas. En cada serie de ensayos se incluye un grupo de vehículo de 6-8 ratas. Las ratas se dosifican una vez según su peso corporal con una solución de 0,01-3 mg/kg administrada por vía intraperitoneal (ip), oral (po) o subcutánea (sc). Se registra el tiempo de dosificación para cada grupo. Después de la dosificación, las ratas se devuelven a sus jaulas de alojamiento, donde las mismas tienen acceso a alimento y agua. El consumo de alimento se registra individualmente de manera continua por registro en línea o manualmente cada hora durante 7 horas, y luego después de 24 horas y algunas veces 48 horas. Al final de la sesión experimental, los animales se sacrifican por eutanasia.
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Los datos individuales se registran en hojas de Microsoft Excel. Los resultados atípicos se excluyen después de aplicar el test de evaluación estadística de Grubbs para valores atípicos, y el resultado se presenta gráficamente utilizando el programa GraphPad Prism.
ENSAYO (II) -Ensayos Funcionales
Ensayo (II) a -Ensayo de los receptores humanos de calcitonina y amilina
1. Resumen del ensayo de luciferasa
La activación de los receptores de calcitonina y amilina (coexpresión del receptor de calcitonina y las proteínas modificadoras de la actividad del receptor (RAMP)) conduce a concentraciones intracelulares incrementadas de cAMP. Como consecuencia, la transcripción es activada por promotores que contienen copias múltiples del elemento de respuesta a cAMP (CRE). Así, es posible medir la actividad de amilina por el uso de un gen informador de CREluciferasa introducido en células BHK que expresan también los receptores de calcitonina o amilina.
2. Construcción de una línea de células receptor de calcitonina (a) -y amilina 3(a)/CRE-luc.
Una línea de células BHK570 se transfectó establemente con el receptor de calcitonina humana y un gen informador de luciferasa sensible a CRE. La línea de células se transfectó adicionalmente con RAMP-3, utilizando métodos estándar. Esto convierte el receptor de calcitonina en un receptor de amilina 3(a). Metotrexato, neomicina, e higromicina son marcadores de selección para luciferasa, el receptor de calcitonina, y RAMP-3, respectivamente.
3. Ensayos de luciferasa
Para realizar los ensayos de actividad, se sembraron células BHK receptor de calcitonina (a)-o receptor de amilina 3(a)/CRE-luc en placas de cultivo blancas de 96 pocillos a una densidad de aproximadamente 20.000 células/pocillo. Las células se encontraban en 100 µl de medio de crecimiento (DMEM con 10% de FBS 1% Pen/Strep, piruvato Na 1 mM, metotrexato 250 mM, 500 µg/ml de neomicina, y 400 µg/ml de higromicina). Después de incubación durante una noche a 37ºC y 5% CO2, el medio de crecimiento se reemplazó por 50 µl/pocillo de medio de Ensayo (DMEM (sin rojo de fenol), Glutamax™, 10% FBS, y Hepes 10 mM, pH 7,4). Se añadieron ulteriormente 50 µl/pocillo de estándar o muestra en tampón de ensayo. Después de 3 horas de incubación a 37°C y 5% CO2, el medio de ensayo con estándar o muestra se retiró y se reemplazó por 100 µl/ pocillo de PBS. Se añadieron luego 100 µl/ pocillo de LucLite™. Se sellaron las placas y se incubaron a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Finalmente, se midió la luminiscencia en un TopCounter (Packard) en modo SPC (recuento de fotones simples).
Ensayo (II)b -Ensayos de receptores de calcitonina de rata y amilina de rata
Resumen del ensayo cAMP
La activación de los receptores de calcitonina y amilina (coexpresión del receptor de calcitonina y las proteínas modificadoras de la actividad del receptor (RAMP)) conduce a concentraciones intracelulares incrementadas de cAMP. A fin de cuantificar los niveles de cAMP en células transfectadas transitoriamente, se utilizó el Adenylyl Cyclase Activation FlashPlate® Assay de Perkin Elmer. El principio básico del FlashPlate® Assay es una competición entre cAMP radiactivo y no radiactivo generado por las células para un número fijo de sitios de fijación.
Construcción de células receptor calcitonina(a) de rata -y amilina3(a) de rata.
Se transfectaron transitoriamente células BHK tk'ts 13 con receptor de calcitonina (a) o receptor de amilina 3(a) de rata (receptor de calcitonina(a) de rata+ RAMP3 de rata) utilizando FuGENE® 6 (Roche) de acuerdo con las recomendaciones de los fabricantes.
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24 horas después de la transfección transitoria, las células (células receptor calcitonina (a) de rata -o amilina 3 a) de rata) se añadieron (100.000 células/pocillo) a las FlashPlates de 96 pocillos con muestras o estándar en tampón de estimulación FlashPlate con IBMX y se incubaron durante 30 minutos. Se creó una mezcla de detección conforme al protocolo de los fabricantes y se midió el centelleo después de 3 horas de incubación en TopCounter™ (Packard).
ENSAYO (III) -Ensayos de fibrilación de ThT para la evaluación de la estabilidad física de formulaciones de proteínas
La estabilidad física baja de un polipéptido puede conducir a formación de fibrillas amiloides, lo que se observa como estructuras macromoleculares tipo filamento bien ordenadas en la muestra que dan finalmente como resultado la formación de gel. Esto se ha medido tradicionalmente por inspección visual de la muestra. Sin embargo, esta clase de medida es muy subjetiva y dependiente del observador. Por tanto, la aplicación de una sonda indicadora de moléculas pequeñas es mucho más ventajosa. La tioflavina T (ThT) es una sonda de este tipo y tiene una huella de fluorescencia distintiva cuando se fija a las fibrillas [Naiki et al. (1989) Anal. Biochem. 177, 244-249; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 09, 274-284].
La evolución temporal para la formación de fibrillas puede describirse por una curva sigmoidea con la expresión siguiente [Nielsen et al. (2001) Biochemistry 40, 6036-6046]:
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Aquí, F es la fluorescencia de ThT en el tiempo t. La constante t0 es el tiempo necesario para alcanzar el 50% de la fluorescencia máxima. Los dos parámetros importantes que describen la formación de fibrillas son el tiempo de retardo calculado por t0 -2τ y la constante de velocidad aparente kapp = 1/τ.
La formación de un compuesto intermedio parcialmente plegado del polipéptido se sugiere como un mecanismo general de iniciación para la fibrilación. Un pequeño número de dichos compuestos intermedios forman núcleos para formar una plantilla sobre la cual pueden ensamblarse compuestos intermedios ulteriores y puede proceder la fibrilación. El tiempo de retardo corresponde al intervalo en el cual se acumula la masa crítica de núcleo y la constante de velocidad aparente es la velocidad con la cual se forma la fibrilla propiamente dicha.
Preparación de la muestra
Las muestras se prepararon recientemente antes de cada ensayo. Cada composición de muestra se describe en cada ejemplo. El pH de la muestra se ajustó al valor deseado utilizando cantidades apropiadas de NaOH y HClO4 o HCl concentrados. Se añadió tioflavina T a las muestras a partir de una solución stock en agua a una concentración final de 1 µM.
Se pusieron partes alícuotas de muestra de 200 µl en una placa de microtitulación de 96 pocillos (Packard OptiPlate™-96, poliestireno blanco). Usualmente, se pusieron 4 u 8 réplicas de cada muestra (correspondientes a una sola condición de test) en una columna de pocillos. La placa se selló con Scotch Pad (Qiagen).
Incubación y medida de la fluorescencia
La incubación a temperatura dada, agitación mediante sacudidas y medida de la emisión de fluorescencia de ThT se realizaron en un lector de placas de fluorescencia Fluoroskan Ascent FL o lector de placas Varioskan (Thermo Labsystems). La temperatura se ajustó a 37ºC. La agitación mediante sacudidas orbitales se ajustó a 960 rpm con una amplitud de 1 mm en todos los datos presentados. La medida de la fluorescencia se realizó utilizando excitación a través de un filtro de 444 nm y la medida de la emisión a través de un filtro e 485 nm.
Cada operación se inició por incubación de la placa a la temperatura de ensayo durante 10 minutos. La placa se midió cada 20 minutos durante un periodo de tiempo deseado. Entre cada medida, la placa se sacudió y se calentó como se describe.
Tratamiento de los datos
Los puntos de medida se salvaron en formato Microsoft Excel para procesamiento ulterior y el trazado y ajuste de curvas se realizó utilizando GraphPad Prism. La emisión de fondo de ThT en ausencia de fibrillas era despreciable. Los puntos de datos son típicamente una media de 4 u 8 muestras y se representan con las barras de error de la desviación estándar. Únicamente los datos obtenidos en el mismo experimento (es decir muestras en la misma placa) se presentan en la misma gráfica asegurando una medida relativa de la fibrilación entre los experimentos.
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Medida de las concentraciones inicial y final
La concentración de polipéptido en cada una de las formulaciones ensayadas se midió tanto antes de la aplicación en el ensayo de fibrilación de ThT ("inicial") como después de la culminación de la fibrilación de ThT ("después del ensayo ThT"). Las concentraciones se determinaron por métodos de HPLC inversa utilizando un estándar de pramlintida como referencia. Antes de la medida después de la culminación se recogieron 150 µl de cada una de las réplicas y se transfirieron a un tubo Eppendorf. Éstos se centrifugaron a 30.000 G durante 40 minutos. Los sobrenadantes se filtraron a través de un filtro de 0,22 micrómetros antes de la aplicación en el sistema HPLC.
ENSAYO (IV) -Determinación de la solubilidad
El polipéptido se disolvió en agua a -500 nM/ml y se mezcló en proporción 1/1 con una serie de tampones (glicilglicina 100 mM de pH 3,0, glicilglicina 10mM de pH 4,0, glicilglicina 100 mM de pH 5,0, bistrispropano 100 mM de pH 6,0, bistrispropano 100 mM de pH 6,5, bistrispropano 100 mM de pH 7,0, bistrispropano 100 mM de pH 7,5, bistrispropano 100 mM de pH 8,0). Después de 18 horas a la temperatura ambiente, se centrifugaron las muestras y se determinó la concentración de polipéptido por UPLC.
ENSAYO (V) -Determinación de la fijación al receptor de amilina humana
El ensayo de fijación se realizó utilizando cuentas (RPNQ0001) del ensayo de proximidad de centelleo (SPA) de Perkin-Elmer y se utilizaron membranas celulares de las células Amylin 3(a)/CRE-luc (como se describe en el Ensayo (II)). Las membranas se prepararon de la manera siguiente: se lavaron las células con PBS y se incubaron con Versene durante aproximadamente 5 minutos antes de la recolección. Las células se lavaron abundantemente con PBS y la suspensión de células se centrifugó durante 5 minutos a 1000 rpm. Las células se homogeneizaron (Ultra-Turrax) en un tampón que contenía Na-HEPES 20 mM y EDTA 10 mM (pH 7,4) y se centrifugaron 20.000 rpm durante 15min. El pélet resultante se resuspendió, se homogeneizó y se centrifugó (20.000 rpm, 15min) en un tampón que contenía Na-HEPES 20 mM y EDTA 0,1 mM). El pélet resultante se resuspendió en tampón 2 y se midió la concentración de proteínas (Ensayo de proteínas BCA, Pierce). El homogeneizado se mantuvo frío durante todo el procedimiento. Las membranas se mantuvieron a -80ºC hasta su utilización. El ensayo se realizó en una Optiplate de 384 pocillos (Perkin Elmer) en un volumen total de 40 µl. Las membranas se mezclaron con cuentas SPA. La concentración final de membranas era 35 ng/µL, y la de cuentas SPA era 0,05 mg/pocillo. Los compuestos de test se disolvieron en DMSO y se diluyeron ulteriormente en tampón de Ensayo (Hepes 50 mM, pH 7,4, CaCl2 1 mM MgCl2 5 mM, 0,1% OA y 0,02% Tween 20. Se disolvió Radioligando 5I-amilina de rata (NEX448 de Perkin-Elmer) en tampón de ensayo y se añadió a la Optiplate a una concentración final de 50pM/ pocillo (aproximadamente 20.000cpm/10 µl). La mezcla final se incubó con sacudidas a 400 rpm durante 120 minutos a 25°C antes de la centrifugación (1500 rpm, 10min). Las muestras se analizaron en TopCounterTM (Packard). El valor CI50 se calculó utilizando (análisis de competición por fijación a un sólo sitio) GraphPad Prism5 como medida de la afinidad del receptor.
ENSAYO (VI) -Determinación de la fijación al receptor de amilina de rata
El ensayo se realizó como se ha descrito arriba (Ensayo (V) -Determinación de la fijación al receptor de amilina humana) con la excepción de que se utilizaron membranas preparadas a partir de células BHK tk'ts 13 que se transfectaron transitoriamente con el receptor de calcitonina de rata RAMP 3 a una ratio equimolar (1:2). Las células BHK tk'ts 13 se transfectaron transitoriamente con receptor de calcitonina de rata utilizando FuGENE® 6 (Roche), conforme a las recomendaciones del fabricante. Las células se cultivaron en DMEM con 10% FBS y 1% Pen/Strep. Aproximadamente 48 horas después de la transfección, se cosecharon las células y se prepararon las membranas.
ENSAYO (VII) -Determinación de la fijación al receptor de calcitonina humana
El ensayo de fijación se realizó utilizando cuentas (RPNQ0001) del ensayo de proximidad de centelleo (SPA) de Perkin-Elmer y membranas celulares preparadas a partir de una línea de células BHK tk'ts 13 que se transfectó establemente con el receptor de calcitonina humana y un gen informador de luciferasa sensible a CRE. Las membranas se prepararon de la manera siguiente: las células se lavaron con PBS y se incubaron con Versene durante aproximadamente 5 minutos antes de la recolección. Las células se lavaron abundantemente con PBS y la suspensión de células se centrifugó durante 5 minutos a 1000 rpm. Las células se homogeneizaron (Ultra-Turrax) en un tampón que contenía Na-HEPES 20 mM y EDTA 10 mM (pH 7, 4) y se centrifugaron a 20.000 rpm durante 15 minutos. El pélet resultante se resuspendió, se homogeneizó y se centrifugó (20.000 rpm, 15 minutos) en un tampón que contenía Na-Hepes 20 mM y EDTA 0,1 mM (pH 7, 4, tampón 2). El pélet resultante se resuspendió en tampón 2 y se midió la concentración de proteínas (Ensayo de proteínas BCA, Pierce). El homogeneizado se mantuvo frío durante todo el procedimiento. Las membranas se mantuvieron a -80ºC hasta su utilización. El ensayo se realizó en una Optiplate de 384 pocillos (Perkin Elmer) en un volumen total de 40 µl. Las membranas se mezclaron con cuentas SPA. La concentración final de membranas era 35 nanogramos/µl y la concentración final de cuentas SPA era 0,05 mg/pocillo. Los compuestos de test se disolvieron en DMSO y se diluyeron ulteriormente en tampón de Ensayo (HEPES 50 mM, pH 7,4, CaCl2 1 mM, MgCl2 5 mM, 0,1% OA y 0,02% Tween20) Se disolvió Radioligando 125I-Calcitonina (NEX422 de Perkin-Elmer) en tampón de ensayo y se añadió a la Optiplate a una concentración final de 75 pM/pocillo (aprox. 30.000 cpm/10 µl). La mezcla final se incubó durante 120 minutos con sacudidas a 400 rpm a 25°C antes de la centrifugación (1500 rpm, 10 min). Las muestras se analizaron en TopCounter™ (Packard). El valor CI50 se calculó utilizando (análisis de competición de fijación de un solo sitio) GraphPad Prism5 como medida de la afinidad del receptor.
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ENSAYO (VIII) -Determinación de la fijación al receptor de calcitonina de rata
El ensayo se realizó como se ha descrito arriba (Ensayo (VII) -Determinación de la fijación al receptor de calcitonina humana) con la excepción de que se utilizaron membranas preparadas a partir de células BHK tk'ts 13 que se habían transfectado transitoriamente con el receptor de calcitonina de rata. Las células BHK tk'ts 13 se transfectaron transitoriamente con receptor de calcitonina de rata utilizando FuGENE® 6 (Roche), conforme a las recomendaciones del fabricante. Las células se cultivaron en DMEM con 10% FBS y 1% Pen/Strep. Aproximadamente 48 horas después de la transfección, las células se cosecharon y se prepararon las membranas.
ENSAYO (IX) -PK -Determinación de T½ en el lechón
T½ es la semivida terminal = ln2/λz de un compuesto en plasma. λz es la constante de velocidad de primer orden asociada con la porción terminal (logarítmica-lineal) de la curva concentración en plasma-tiempo y se estima por regresión lineal del tiempo frente al logaritmo de la concentración.
Los valores T½ de los análogos de amilina de la invención se determinan por estudios farmacocinéticos en lechones macho Göttingen de Ellegaard Göttingen Minipigs ApS y se siguen los principios de cuidado de animales de laboratorio
Se dejó un periodo de aclimatación de aproximadamente 6-10 días antes de la entrada de los animales en el estudio. Al comienzo del periodo de aclimatación, los lechones tenían una edad de aproximadamente 5 a 12 meses y un peso comprendido en el intervalo de 7-35 kg. Se insertaron en los lechones dos catéteres venosos centrales, que se utilizaron para la toma de muestras de sangre.
Los estudios se realizaron en una sala de animales que estaba iluminada para dar un ciclo de aproximadamente 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Los animales se alojaron individualmente.
Los animales tenían acceso libre a agua de bebida de calidad doméstica durante el estudio, pero se mantuvieron típicamente en ayunas durante toda la noche antes de la dosificación hasta aproximadamente 6-12 horas después de la dosificación. Los animales se pesaron a su llegada y a lo largo de los días de dosificación.
En los presentes estudios, las sustancias de test se administraron subcutáneamente a una dosis aproximado de 2 nM/kg. Los animales recibieron una sola inyección subcutánea. La inyección subcutánea se aplicó en el lado derecho del cuello, a aproximadamente 5-7 centímetros de la oreja y 7-9 centímetros de la parte media del cuello. Las inyecciones se administraron con un retén en la aguja, dejando que se introdujeran aproximadamente 0,5 centímetros de la aguja. Cada sustancia de test se administró típicamente a 3, pero en algunos casos a 2 ó 4 animales.
Se obtuvo un perfil completo de concentración en plasma-tiempo de cada animal, empleando 12-16 puntos de muestreo. En un ejemplo, se recogieron muestras de sangre conforme al protocolo siguiente: después de administración subcutánea:
Predosificación (0), 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168 y 240 horas después de la inyección.
En algunos casos, se tomaron también muestras adicionales de sangre hasta 288 horas después de la inyección.
En cada tiempo de muestreo, se extrajeron de cada animal 0, 5 a 2 ml de sangre. Las muestras de sangre se tomaron por la vía del catéter venoso central.
Las muestras de sangre se recogieron en tubos de ensayo de EDTA (a saber, microtubos Sarstedt de 1,3 ml K3E). Las muestras de sangre se mantuvieron en hielo durante un máximo de 20 minutos antes de la centrifugación. Se separó el plasma utilizando centrifugación (a saber, a 4°C, 10 min., 1500G) y se transfirió inmediatamente a tubos Micronic. Se transfirieron aproximadamente 200 µl de plasma a cada tubo Micronic. El plasma se guardó a -20°C hasta su ensayo. Las muestras de plasma se ensayaron respecto al contenido de amilina utilizando un ensayo ELISA.
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Los perfiles concentración en plasma-tiempo se analizaron por un análisis farmacocinético no compartimental (NCA) utilizando WinNonlin Professional 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA). El NCA se realizó utilizando los perfiles individuales concentración en plasma-tiempo de cada animal. T½ es la semivida terminal = ln2/ y se determinó a partir de λz, la constante de velocidad de primer orden asociada con la porción terminal (logarítmicalineal) de la curva, estimada por regresión lineal del tiempo frente a logaritmo de la concentración.
Ensayo ELISA del plasma para la cuantificación de amilina
El ELISA de amilina humana es un inmunoensayo sándwich basado en anticuerpos monoclonales para determinación de los niveles de amilina en plasma humana. El anticuerpo de captura reconoce amilina humana, ácido amilínico (amilina desamidada), un fragmento 1-20 de amilina, pero no la amilina reducida. El anticuerpo de detección se fija a la amilina humana reducida o no reducida, pero no al ácido amilínico, y se compleja con estreptavidina-fosfatasa alcalina. El sustrato, 4-metilumbeliferil-fosfato, se aplica al sándwich completo y la señal fluorescente, monitorizada a 355 nm /460 nm, es proporcional a la cantidad de amilina presente en la muestra.
Método MS para la cuantificación de amilina
Se diluyen 40 µl de plasma con 120 µl de EOH al 66, 67% + 1% HCOOH.se centrifuga durante 20 minutos 13.000 rpm, 4ºC. El sobrenadante se analiza por un método LC-MS en un Sciex API 3000 y se cuantifica con un estándar preparado en plasma.
ENSAYO (X) -PK -Determinación de T½ en la rata
T½ es la semivida terminal = ln2/λz de un compuesto en plasma. λz es la constante de velocidad de primer orden asociada con la porción terminal (logarítmica-lineal) de la curva concentración en plasma-tiempo y se estima por regresión lineal del tiempo frente al logaritmo de la concentración.
Los valores T½ de los análogos de amilina de la invención se determinan por estudios farmacocinéticos en ratas macho Sprague-Dawley, de Taconic Europe y se siguen los principios de cuidado de animales de laboratorio.
Se dejó un periodo de aclimatación de aproximadamente 7 días antes de la entrada de los animales en el estudio. Al comienzo del periodo de aclimatación, las ratas tenían un peso comprendido en el intervalo de 300-400 g. Se insertaron en las ratas catéteres permanentes en la arteria carótida, que se utilizaron para la toma de muestras de sangre.
Los estudios se realizaron en una sala de animales que estaba iluminada para dar un ciclo de aproximadamente 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Los animales se alojaron individualmente debido a los catéteres y tenían acceso libre a comida y agua a discreción. Los animales se pesaron a lo largo de los días de dosificación.
En los presentes estudios, las sustancias de test se administraron subcutáneamente a una dosis aproximada de 20 nM/kg. Los animales recibieron una sola inyección subcutánea en el cuello utilizando una aguja 25G con jeringuilla. Cada sustancia de test se administró típicamente a 3, pero en algunos casos a 2 ó 4 animales.
Se obtuvo un perfil completo de concentración en plasma-tiempo de cada animal, empleando 8-10 puntos de muestreo. En el ejemplo, se recogieron muestras de sangre conforme al protocolo siguiente: Después de administración subcutánea:
Predosificación (0), 0,5, 1, 1,5, 2, 4, 6, 12, 24, 48 y 72 horas después de la inyección.
En cada tiempo de muestreo, se extrajeron 0,08 a 0,1 ml de sangre de cada animal. Las muestras de sangre se tomaron por la vía del catéter.
Las muestras de sangre se recogieron en tubos de ensayo de EDTA. Las muestras de sangre se mantuvieron en hielo durante un máximo de 20 minutos antes de la centrifugación. Se separó el plasma utilizando centrifugación (a saber, a 4°C, 10 min., 1500G) y se transfirió inmediatamente a tubos Micronic o placas PCR. Se transfirieron aproximadamente 40 µl de plasma y se guardaron a -20°C hasta su ensayo. Las muestras de plasma se ensayaron respecto al contenido de amilina utilizando un ensayo ELISA.
Los perfiles concentración en plasma-tiempo se analizaron por un análisis farmacocinético no compartimental (NCA) utilizando WinNonlin Professional 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA). El NCA se realizó utilizando los perfiles individuales concentración en plasma-tiempo de cada animal. T½ es la semivida terminal = ln2/λz y se determinó a partir de λz, la constante de velocidad de primer orden asociada con la porción terminal (logarítmicalineal) de la curva, estimada por regresión lineal del tiempo frente al logaritmo de la concentración.
PREPARACIONES
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Un método de síntesis de polipéptidos fue por química de Fmoc en un sintetizador de polipéptidos Liberty basado en microondas (CEM Corp., North Carolina). La resina era Tentagel S RAM con una carga de aproximadamente 0,25 mmol/g o PAL-ChemMatrix con una carga de aproximadamente 0,43 mmol/g. La química de acoplamiento era DIC/HOAt en NMP utilizando soluciones de aminoácidos de 0,3 M en NMP y un exceso molar de 6-8 veces. Las condiciones de acoplamiento eran 5 minutos a hasta 70°C. La desprotección se realizó con 5% de piperidina en NMP a hasta 70°C. Los aminoácidos protegidos utilizados eran aminoácidos Fmoc estándar suministrados por v.g. Anaspec o Novabiochem disueltos a 0,3 M en NMP que contenía HOAt 0,3 M.
Otro método de síntesis de polipéptidos fue por química de Fmoc en un sintetizador de polipéptidos Prelude (Protein Technologies, Arizona). La resina era Tentagel S RAM con una carga de aproximadamente 0,25 mmol/g o PAL-ChemMatrix con una carga de aproximadamente 0,43 mmol/g. La química de acoplamiento era DIC/HOAt en NMP utilizando soluciones de aminoácidos de 0,3 M en NMP y un exceso molar de 6-8 veces. Las condiciones de acoplamiento eran acoplamientos simples o dobles durante 1 ó 2 horas a la temperatura ambiente. La desprotección se realizó con piperidina al 20% en NMP. Los aminoácidos protegidos utilizados fueron aminoácidos Fmoc estándar (suministrados por ejemplo por Anaspec o Novabiochem) disueltos a 0,3 M en NMP que contenía HOAt 0,3 M.
Otro método de síntesis de polipéptidos fue en un sintetizador de polipéptidos Applied Biosystems 433 en escala de 0,25 mmol o 1,0 mmol utilizando los protocolos FastMoc UV suministrados por el fabricante, que emplean acoplamientos mediados por HBTU o HATU en NMP y monitorización UV de la desprotección del grupo protector Fmoc. La resina de partida utilizada para la síntesis de las amidas de polipéptido era resina de amida de Rink. Los derivados de aminoácido protegidos utilizados eran aminoácidos Fmoc estándar (suministrados v.g. por Anaspec, o Novabiochem) suministrados en cartuchos previamente pesados adecuados para el sintetizador ABI433A.
Cuando se deseaba una modificación química de una cadena lateral lisina, la lisina se incorporó como Lys(Mtt) y el aminoácido N-terminal se incorporó en la secuencia como un Boc-aminoácido o, si el aminoácido N-terminal se incorporó como un Fmoc-aminoácido, el grupo Fmoc se eliminó y el terminal N se protegió por tratamiento con 6 equivalentes de Boc-carbonato y 6 equivalentes de DIPEA en NMP durante 30 minutos. La resina se lavó con NMP y DCM y el grupo Mtt se eliminó por suspensión de la resina en hexafluoroisopropanol puro durante 20 minutos, seguido por lavado con DCM y NMP. La modificación química de la lisina se realizó por adición de uno o más de los bloques de construcción listados a continuación por los mismos métodos empleados para la síntesis de polipéptidos, es decir por uno o más pasos automáticos en el Liberty o el ABI 433 o por uno o más pasos de acoplamiento manual a la temperatura ambiente. Después de la síntesis, la resina se lavó con DCM y se secó, y el polipéptido se escindió de la resina por tratamiento durante 2 horas con TFA/TIPS/ agua (92,5/5/2,5 ó 95/2,5/2,5) seguido por precipitación con 4 volúmenes de dietil-éter, lavado ulterior con dietil-éter y secado. Si el polipéptido contenía cisteínas protegidas con grupos Acm, el polipéptido se redisolvió en agua 2-5 mg/ml, se ajustó el pH a un valor menor a 4, y se formó el puente disulfuro por tratamiento con 4 equivalentes de yodo (2% peso/volumen en metanol) durante 15 minutos. Alternativamente, el puente disulfuro se formó en la resina utilizando Trt como el grupo protector para la cisteína y tratamiento con 10 equivalentes de yodo en NMP durante 1 hora. En este caso, el polipéptido bruto se purificó inmediatamente después de escisión y precipitación con dietil-éter.
Purificación: El polipéptido bruto se purificó por HPLC semipreparativa en una columna de 20 milímetros por 250 milímetros rellena con sílice C-18 de 5µ o 7µ. Se bombearon soluciones del polipéptido en la columna HPLC y los polipéptidos precipitados se disolvieron en 5 ml de ácido acético al 50% en agua y se diluyeron hasta 20 ml con agua después de lo cual se inyectaron en la columna que se eluyó luego con un gradiente de 40-60 % CH3CN en TFA al 0,1% a razón de 10 ml/min durante 50 min a 40°C. Se recogieron las fracciones que contenían el polipéptido. El polipéptido purificado se liofilizó después de dilución del eluato con agua.
Para el análisis de las fracciones de HPLC y el producto final, el análisis RP-HPLC se realizó utilizando detección UV a 214 nm y, por ejemplo, una columna de sílice C-18 de 5µ Vidac 218TP54 de 4,6 mm x 250mm (The Separations Group, Hesperia, USA) que se eluyó a v.g. 1 ml/min a 42ºC. En la mayoría de los casos se utilizó una de cuatro condiciones de elución diferentes:
A1: Equilibración de la columna con un tampón constituido por (NH4)2SO4 0,1M, que se ajustó a pH 2,5 con H2SO4 concentrado y elución por un gradiente de CH3CN 0% a 60% en el mismo tampón durante 50 minutos.
B1: Equilibración de la columna con TFA al 0,1% / H2O y elución por un gradiente de 0% CH3CN / 0,1% TFA/H2O hasta 60% CH3CN /0,1% TFA / H2O durante 50 min.
B6: Equilibración de la columna con 0,1% TFA / H2O y elución por un gradiente de 0% CH3CN / 0,1% TFA /

Claims (12)

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    REIVINDICACIONES
    1.
    Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es un análogo de SEQ ID No: 2 en donde dicho análogo se selecciona del grupo constituido por [Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, [Glu14,His17,His35]-pramlintida, Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida y [Glu14,Arg17,His35]-pramlintida; en donde la numeración de la secuencia de aminoácidos del análogo corresponde a la secuencia de numeración de los aminoácidos de SEQ ID No: 2 y en donde dicho polipéptido comprende un sustituyente N-alfa-[(S)-4-Carboxy-4-(19-carboxynonadecanoilamino)butirilo].
  2. 2.
    El polipéptido de la reivindicación 1 que comprende adicionalmente un grupo sustituyente seleccionado del grupo constituido por C20diácido, C20diácido-γGlu, C20diácido-γGlu-γGlu, C20diácido-γGlu-γGlu-γGlu, C20diácido-OEG, C20diácido-γGlu-OEG, C20diácido-γGlu-OEG-OEG, C18diácido-γGlu, C16diácido-γGlu, y C14diácido-γGlu unido a al menos uno de sus residuos de aminoácido.
  3. 3.
    El polipéptido conforme a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde el sustituyente está unido al grupo alfa-amino del residuo de aminoácido N-terminal o a un residuo Lys.
  4. 4.
    El polipéptido conforme a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde el polipéptido se selecciona del grupo constituido por
    N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida, y N-alfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida.
  5. 5.
    El polipéptido conforme a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polipéptido es Nalfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,Pro37]-pramlintida.
  6. 6.
    El polipéptido conforme a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polipéptido es Nalfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,His17,His35]-pramlintida.
  7. 7.
    El polipéptido conforme a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polipéptido es Nalfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-Glu-[Glu14,His17,His35]-pramlintida.
  8. 8.
    El polipéptido conforme a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polipéptido es Nalfa-[(S)-4-Carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)butiril]-[Glu14,Arg17,His35]-pramlintida.
  9. 9.
    Un polipéptido conforme a una cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso como medicamento.
  10. 10.
    Un polipéptido conforme a las reivindicaciones 1-8 para uso en el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, tolerancia deteriorada a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, ateroesclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria y otros trastornos cardiovasculares, ictus, síndrome inflamatorio intestinal, dispepsia y úlceras gástricas y/o para uso en la disminución de la ingesta de alimento, disminución de la apoptosis de las células β, aumento de la función de las células β y la masa de células β, y/o para restablecimiento de la sensibilidad de la glucosa a las células β, hipercalcemia, osteoporosis y ostitis derformans.
  11. 11.
    Una composición farmacéutica que comprende un polipéptido conforme a las reivindicaciones 1-8 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  12. 12.
    Un proceso para preparación de una composición farmacéutica conforme a la reivindicación 11, que comprende mezclar un polipéptido conforme a cualquiera de las reivindicaciones anteriores con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
    122
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