CN103571829A - 用于检测食物腐败微生物的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于灵敏且特异性地检测食物中的微生物的核酸、核酸集合、试验试剂盒和方法。所述核酸由选自SEQ ID NOs:1-45的核苷酸序列组成。

Description

用于检测食物腐败微生物的组合物
电子提交材料的引入参考
在此将全部引入作为参考的是与此同时提交的并如下标识的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表：日期为2012年7月20日的文件名为“710675序列表”的One8,781Byte ASCII（文本）。
发明背景
微生物（例如，细菌）可以在制造过程中或制造后引起食物（例如，啤酒）的腐败。一些微生物可能引起食物腐败以及几种不合需要作用中的任何一种或多种，如，例如，令人不愉快的气味、令人不愉快的味道以及使得食物食用不安全。不能准确且快速地检测食物腐败微生物的存在可能增加食物腐败的风险。引起食物腐败的微生物的快速且准确检测的障碍包括，例如，用于检测微生物的传统微生物学方法的冗长持续时间。这些传统方法可能要花7-14天来完成。准确检测的另一个障碍包括，例如，一些食物腐败微生物的基因组序列与非食物腐败微生物的基因组序列相比的相似性。
因此，对用于检测引起食物腐败的微生物的改进组合物和方法存在需求。
发明简述
本发明的一个实施方案提供了由选自SEQ ID NOs:1-45的核苷酸序列组成的核酸。
本发明的另一个实施方案提供了包含两个或更多个核酸的一组核酸，其中两个或更多个核酸各自由选自SEQ ID NOs:1-45的核苷酸序列组成。
本发明的另一个实施方案提供了包含一组核酸的试验试剂盒，其中那组核酸选自（a）SEQ ID NOs:1-3；（b）SEQ ID NOs:4-6；（c）SEQ ID NOs:7-9；（d）SEQ ID NOs:10-12；（e）SEQ ID NOs:13-15；（f）SEQ ID NOs:16-18；（g）SEQ ID NOs:19-21；（h）SEQ ID NOs:22、24和27；（i）SEQ ID NOs:22、25和27；（j）SEQ ID NOs:23、26和27；（k）SEQ ID NOs:28-30；（l）SEQ ID NOs:31-33；（m）SEQ ID NOs:34-36；（n）SEQ ID NOs:37-39；（o）SEQ ID NOs:40-42；和（p）SEQ ID NOs:43-45。
本发明的再另一个实施方案提供了一种检测食物中一种或多种微生物的存在的方法，该方法包括：（a）获得至少一种包含从食物分离的微生物核酸的测试样品；（b）在允许本发明的核酸和微生物核酸之间形成复合物的条件下，使本发明的核酸、一组核酸或包括至少一种本发明的核酸的支持物与至少一种测试样品接触；（c）检测复合物；和，任选地，（d）将至少一种测试样品中的复合物的量与来自缺乏微生物核酸的阴性样品中的复合物的量相比较，其中增加量的来自所述至少一种测试样品的复合物表示一种或多种微生物的存在。
发明详述
本发明的一个实施方案提供了由选自SEQ ID NOs:1-45的核苷酸序列组成的核酸。在一个实施方案中，核酸是分离的或纯化的。本发明的核酸提供了正向引物、反向引物和探针，有利地，其可以与微生物核酸特异性地杂交，用于检测食物中一种或多种微生物的存在。在一些实施方案中，引物和探针与特定属的微生物的核酸特异性地杂交。在一个特别优选的实施方案中，引物和探针与特定种的微生物的核酸特异性地杂交。
本发明的核酸可以用于检测食物样品中一种或多种引起食物腐败的微生物的存在。在本发明的一个实施方案中，本发明的核酸可以特异性地检测选自片球菌属（Pediococcus）、乳杆菌属（Lactobacillus）、梳状菌属（Pectinatus）和巨球形菌属（Megasphaera）的一个或多个属的一种或更多种微生物。通过本发明的核酸可以特异性地检测的微生物的示例性种列于表1中。
Figure BDA00003543219600041
Figure BDA00003543219600051
本发明的核酸可以特异性地检测任何类型的微生物核酸。在本发明的一个实施方案中，微生物核酸是DNA。在再另一个实施方案中，本发明的核酸是由与SEQ ID NO:1-45中任一个互补的核苷酸序列组成的核酸。与SEQ ID NO:1-45任一个互补的核酸可以检测微生物RNA。
在一个实施方案中，本发明的核酸进一步包含可检测标记。标记可以是任何适用于检测本发明的核酸与微生物核酸杂交（例如，复合物）的标记。示例性可检测标记包括放射性标记、非放射性标记、荧光标记和化学发光标记中的任何一种或多种。
本发明的另一个实施方案提供了包含两个或更多个核酸的一组核酸，其中两个或更多个核酸各自由SEQ ID NO:1-45的核苷酸序列组成。在本发明的一个实施方案中，该组可以进一步包含与选自SEQ IDNO:1-45的核苷酸序列互补的核苷酸序列。该组可以包含任何合适数量的本发明的核酸。例如，该组可以包含约2至约45个或更多核酸，约10个或更少至约40个或更多核酸，或约20个或更少至约30个或更多核酸。在这点上，该组可以包含2个或更多，3个或更多，4个或更多，5个或更多，6个或更多，7个或更多，8个或更多，9个或更多，10个或更多，11个或更多，12个或更多，13个或更多，14个或更多，15个或更多，16个或更多，17个或更多，18个或更多，19个或更多，20个或更多，21个或更多，22个或更多，23个或更多，24个或更多，25个或更多，26个或更多，27个或更多，28个或更多，29个或更多，30个或更多，31个或更多，32个或更多，33个或更多，34个或更多，35个或更多，36个或更多，37个或更多，38个或更多，39个或更多，40个或更多，41个或更多，42个或更多，43个或更多，44个或更多，或45个或更多核酸。尽管一组的两个或更多个核酸可以彼此相同，但在优选的实施方案中，两个或更多个核酸彼此不同。因此，两个或更多个不同的核酸可以有利地与两个或更多个不同的微生物核酸杂交，并且因此，检测出食物中存在两种或多种不同的微生物。
本发明的一个实施方案提供了一种试验试剂盒，其包含用于特异性检测一个或多个物种的一种或多种微生物的一组核酸，该试验试剂盒的那组核酸包括至少一个引物和探针，优选至少一个正向引物，至少一个反向引物和至少一个探针。在一个实施方案中，该试验试剂盒选自表1中1-14号的试验试剂盒。优选地，该试验试剂盒的那组核酸选自（a）SEQ ID NOs:1-3；（b）SEQ ID NOs:4-6；（c）SEQ IDNOs:7-9；（d）SEQ ID NOs:10-12；（e）SEQ ID NOs:13-15；（f）SEQ ID NOs:16-18；（g）SEQ ID NOs:19-21；（h）SEQ ID NOs:22、24和27；（i）SEQ ID NOs:22、25和27；（j）SEQ ID NOs:23、26和27；（k）SEQ ID NOs:28-30；（l）SEQ ID NOs:31-33；（m）SEQ ID NOs:34-36；（n）SEQ ID NOs:37-39；（o）SEQ ID NOs:40-42；和（p）SEQ ID NOs:43-45。在一个实施方案中，该试验试剂盒包括与SEQ ID NO:1-45的任一个或多个互补的序列。
如本文中所用的“核苷酸序列”或“核酸”包括“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸分子”，并且通常意思是DNA或RNA的聚合物，其可以是单链或双链、合成的或从天然来源获得（例如，分离和/或纯化的），其可以含有天然、非天然或改变的核苷酸，并且其可以含有天然、非天然或改变的核苷酸间键合，如氨基磷酸酯键合和硫代磷酸酯键合，替代未修饰寡核苷酸的核苷酸之间发现的磷酸二酯。通常优选本发明的核酸不包含任何插入、缺失、翻转和/或置换。然而，如本文中所讨论的，对于核酸包含一个或多个插入、缺失、翻转和/或置换，在一些情况下，是合适的。
可以基于化学合成和/或酶连接反应，使用本领域已知的程序，来构建本发明的核酸。参见，例如，Sambrook等，Molecular Cloning:ALaboratory Manual（分子克隆：实验室手册），第3版，Cold SpringHarbor Press，Cold Spring Harbor，NY2001；和Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology（分子生物学通用实验方案），GreenePublishing Associates and John Wiley&Sons，NY，1994。例如，可以使用天然产生的核苷酸或不同修饰的核苷酸来化学合成核酸，设计所述修饰的核苷酸来提高分子的生物稳定性或提高杂交时形成的双链体（例如，硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸）的物理稳定性。可以用于产生核酸的修饰核苷酸的实例包括，但不限于，5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰胞核嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基-2-硫尿苷、5-羧甲基氨甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基Q苷（queosine）、次黄嘌呤核苷、N6-异戊烯腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基次黄嘌呤核苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-取代的腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q苷、5’-甲氧基羧基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫-N6-异戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧醋酸（v）、wybutoxosine、假尿嘧啶、Q苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧醋酸甲酯、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶和2,6-二氨基嘌呤。或者，本发明的一个或多个核酸可以购自公司，如MacromolecularResources（Fort Collins，CO）和Synthegen（Houston，TX）。
本发明的一个实施方案提供了包含固定于支持物上的本发明的核酸、一组核酸或试验试剂盒的一组核酸的支持物。本发明的另一个实施方案提供了包含固定于支持物上的待测试样品的支持物，并将本发明的核酸施加于支持物上。支持物可以是适用于固定本发明核酸的任何支持物。美国专利申请No.6,821,771中描述了示例性支持物，通过引用将其全部并入本文中。其他示例性支持物包括可从PallCorporation，Port Washington，NY，USA获得的GENEDISC平板。
支持物可以进一步包含可检测标记。标记可以是适用于检测本发明的核酸与微生物核酸的复合物的任何标记。示例性可检测标记可以包括放射性标记、非放射性标记、荧光标记和化学发光标记中的任何一种或多种。
本发明的再另一个实施方案提供了一种检测食物中一种或多种微生物的存在的方法，该方法包括：（a）获得至少一种包含从食物分离的微生物核酸的测试样品；（b）在允许本发明的核酸和微生物核酸之间形成复合物的条件下，使本发明的核酸、一组核酸、试验试剂盒的一组核酸或包括至少一种核酸的支持物与至少一种测试样品接触；（c）检测复合物；和，任选地，（d）将至少一种测试样品中的复合物的量与来自缺乏微生物核酸的阴性样品中的复合物的量相比较，其中增加量的来自至少一种测试样品的复合物表示一种或多种微生物的存在。
该方法可以包括获得待测试食物的样品并且以任何合适的方式培养微生物。例如，当食物是啤酒时，样品可以是任何一种或多种清澈的啤酒、非过滤啤酒、处理过的啤酒、发酵过的啤酒或其他混浊的啤酒。
如本领域已知的，该方法可以包括在任何合适的培养基中培养微生物。可以根据待测试食物和微生物的性质来选择培养基。示例性培养基可以包括富集肉汤，如，例如，可从AES CHEMUNEX，Inc.，Cranbury，NJ，USA获得的MRS富集肉汤；和可从VWRInternational，West Chester，PA，USA获得的NBB-C富集肉汤。
如本领域已知的，可以在任何合适的温度下培养微生物，并且持续任何合适的持续时间。可以根据待测试食物和微生物的性质来选择培养温度和持续时间。例如，可以在约20℃至约40℃，优选地约22℃至约28℃的温度下培养微生物。可以将微生物培养约1天至约14天，优选地约2天至约7天。
如本领域已知的，该方法可以包括以任何合适的方式从微生物提取核酸。核酸可以是RNA和/或DNA。如本领域已知的，可以根据待测试的食物、微生物和核酸的性质来选择用于提取核酸的实验方案。优选地，以任何裂解革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌并且没有使用聚合酶链反应（PCR）抑制剂收集可测试量的DNA的方式来提取核酸。可以使用多种可购得的核酸提取试剂盒中的任何一种，根据制造商的说明，来进行核酸提取。示例性DNA提取试剂盒可以包括，例如，PEFOOD试剂盒（可从Pall Corporation，Port Washington，NY，USA获得）。
该方法包括在允许本发明的核酸和微生物核酸之间形成复合物的条件下，使本发明的核酸、一组核酸集合、试验试剂盒的一组核酸或支持物与至少一种测试样品接触。在这点上，如本领域已知的，该方法包括在允许本发明的核酸与微生物核酸特异性杂交的条件下，使提取的核酸的样品与本发明的核酸接触。如本领域已知的，该方法可以包括使用任何合适类型的PCR来扩增本发明的核酸和微生物核酸。
该方法包括检测复合物。如本领域已知的，可以使用，例如，放射性标记或染料，来检测复合物。在优选的实施方案中，该方法包括使用例如激光器测量从荧光染料发射出来的光。检测复合物可以进一步包含测量所形成的复合物的量。
在一个实施方案中，该方法任选地包括将至少一种测试样品中的复合物的量与来自缺乏微生物核酸的阴性样品中的复合物的量相比较，其中增加量的来自至少一种测试样品的复合物表示一种或多种微生物的存在。在这点上，如果样品中检测到的复合物的量不高于已知缺乏微生物核酸的阴性样品中检测到的复合物的量，那么样品对于食物腐败微生物是阴性的。如果样品中检测到的复合物的量高于已知缺乏微生物核酸的阴性样品中检测到的复合物的量，那么样品对于食物腐败微生物是阳性的。
该方法可以有利地包括同时测试超过一种的不同食物样品中的微生物的存在。在这点上，至少一种测试样品可以是按序或同时测试的两种或多种不同样品，即，按序或同时测试的3种或更多，4种或更多，5种或更多，6种或更多，7种或更多，8种或更多，9种或更多，10种或更多，11种或更多，12种或更多，13种或更多，14种或更多，15种或更多，16种或更多，17种或更多，18种或更多，19种或更多，20种或更多样品。
该方法可以包括检测一种或多种引起食物腐败的微生物的存在。在本发明的一个实施方案中，该方法包括检测选自片球菌属、乳杆菌属、梳状菌属和巨球形菌属的一个或多个属的一种或多种微生物的存在。在优选的实施方案中，该方法包括检测选自有害片球菌、意外片球菌、克氏片球菌、Lactobacillus backii、短乳杆菌、干酪乳杆菌、棒状乳杆菌、丘状菌落乳杆菌、林氏乳杆菌、Lactobacillus rossiae、类布氏乳杆菌、类丘状菌落乳杆菌、Lactobacillus perolens、植物乳杆菌、嗜啤酒梳状菌、福瑞森加梳状菌、Pectinatus haikarae、Pectinatusportalensis、啤酒巨球形菌和埃氏巨球形菌的一个或多个微生物种的存在。
该方法可以包括检测任何食物中的微生物。该食物可以是，例如，任何一种或多种乳制品；脂肪、油脂和脂肪乳浊液；可食冰（包括，例如，冰冻果子露（sherbet）和果汁冰糕（sorbet）；水果和蔬菜（包括，例如，蘑菇和真菌、根和块茎、豆和豆荚，以及芦荟）；海藻；坚果和种子；糖食；谷物和谷物制品；烘焙产品（例如，面包）；肉和肉制品（包括，例如，家禽和野味）；鱼和鱼制品（包括软体动物、甲壳动物和棘皮动物）；蛋和蛋制品；甜味剂，包括，例如，蜂蜜；盐、汤、酱汁、沙拉、蛋白制品；打算用于特定营养用途的食物；和饮料（例如，啤酒和葡萄酒）。在优选的实施方案中，该食物是啤酒。
如本文中所用的术语“分离的”意思是已经从其天然环境中取出。如本文中所用的术语“纯化的”意思是具有已经提高的纯度，其中“纯度”是相对术语，并且未必被理解为绝对纯度。例如，该纯度可以至少约50%，可以高于60%、70%或80%、90%或可以是100%。
以下实施例进一步说明了本发明，但当然不应当被理解为以任何方式限制其范围。
实施例1
该实施例证明了使用本发明的核酸对干酪乳杆菌的定量检测。
使用DNA提取试剂盒（获自Pall Corporation，Port Washington，NY，USA），从干酪乳杆菌（美国典型培养物保藏中心（ATCC）菌株参考号E-011808）分离了基因组DNA。用10mM Tris-pH8.3将细菌DNA稀释至83pg/μL的浓度。将Tris-pH8.3缓冲液（10mM）用作无靶对照（NTC）。
将干酪乳杆菌试验试剂盒（包括正向引物（SEQ ID NO:28）、反向引物（SEQ ID NO:29）和探针（SEQ ID NO:30））用于测试以0（NTC）、10、1,000或100,000拷贝/PCR孔的来自干酪乳杆菌的DNA。在5’端用6-FAM荧光染料，在3’端用BHQ1淬灭剂来标记探针，或在5’端用ROX荧光染料，在3’端用BHQ2淬灭剂。
根据制造商的说明制备了GENEDISC平板（获自PallCorporation，Port Washington，NY，USA）。
制备包括SEQ IN NO:28-30的定量（q）PCR混合试剂盒（“Master Mix”）（包括在GENEDISC检测试剂盒中，获自PallCorporation，Port Washington，NY，USA）。使用适配GENEDISC循环仪（获自Pall Corporation，Port Washington，NY，USA）的条形码读出器扫描位于GENEDISC平板上的条形码和Master Mix袋中所含的识别卡上的条形码。根据制造商对于GENEDISC循环仪的说明输入样本名称。将对应于每个GENEDISC平板扇区的六个1.5mL微管做上标记。将Master Mix涡旋2秒钟，然后简短离心2秒钟。将Master Mix（37μL）加入每个微管中。将微管闭合。将DNA样品在台式离心机中离心15秒钟。
使用移液器将DNA样品（37μL）转移至含有Master Mix的相应微管中。将管闭合，以防止交叉污染。将管轻柔混合2秒钟，然后使用迷你离心机离心2秒钟。对其他5种样品的每一种重复这些步骤。将来自每个微管的72μL加入合适的GENEDISC平板扇区中。
装载GENEDISC平板。将填料帽置于GENEDISC平板顶部，将帽子轻柔按压，以确保没有泄漏，并且开始真空。当GENEDISC循环仪表明真空完成90%时，轻叩GENEDISC平板以除去任何残余的气泡。在释放真空后，除去帽子。将矿物油（4滴）加入每个GENEDISC平板扇区中。将填料帽置于GENEDISC平板上，并开始真空。在真空循环结束时，除去帽子，并通过用70%乙醇擦拭来清洁。检查孔，以确保没有可能引起试验试剂盒异常中断的部分或不均匀填充的孔存在。
将填料帽放在指定位置。将GENEDISC平板小心地插入GENEDISC循环仪中，并关闭GENEDISC循环仪的盖子。使用热循环条件运行PCR。热循环条件包括四个温度113℃、107℃、57℃和63℃。循环时间是每个循环70秒，持续45个循环。在PCR结束时，取出GENEDISC平板，并丢弃。
分析了数据。干酪乳杆菌试验（SEQ ID NO:28-30）定量检测了10、1,000和100,000拷贝/PCR孔的干酪乳杆菌靶DNA。在靶不存在或使用“无模板”对照（NTC）的情况下，不存在信号。NTC测量了靶分子不存在情况下的非特异性信号。抑制对照提供了阳性PCR信号，并测量了样品或样品中污染物存在情况下的PCR抑制程度。
实施例2
该实施例证明了本发明核酸的特异性。
从13种啤酒腐败细菌（表2）中分离出基因组DNA，并按照实施例1中所述的稀释。将Tris-pH8.3缓冲液（10mM）用作无靶对照（NTC）。所有细菌菌株获自美国典型培养物保藏中心（ATCC）。
表2
菌株参考号 细菌 DNA批次
E-64028 短乳杆菌 0011111LBRE-DH
E-79105 嗜啤酒梳状菌 0010212LPEC-DH
E-052900 L.backii 0011111LBAC-DH
E-991161 林氏乳杆菌 0011111LLIN-DH
E-91459T 有害片球菌 0011111PEDD-DH
E-79111T 啤酒巨球形菌 0011011MEGC-DH
E-95503T 坚硬乳杆菌 0011111LFRI-DH
DSM15814 L.rossiae 0011111LRO-DH
E-011808 干酪乳杆菌 0011111LCAS-DH
E-991162 丘状菌落乳杆菌 0011111LCOL-DH
E-991163 棒状乳杆菌 0011111LCOR-DH
E-89345 L.perolens 0011111LPER-DH
E-71034 植物乳杆菌 0011111LPLA-DH
根据实施例1的程序，将干酪乳杆菌试验试剂盒（包括正向引物（SEQ ID NO:28）、反向引物（SEQ ID NO:29）和探针（SEQ IDNO:30）用于测试来自表2的13种不同细菌的DNA样品。在5’端用6-FAM荧光染料，在3’端用BHQ1淬灭剂来标记所有探针，或在5’端用ROX荧光染料，在3’端用BHQ2淬灭剂。
干酪乳杆菌试验（SEQ ID NO:28-30）定量检测了以10、1,000和100,000个拷贝/PCR孔的干酪乳杆菌靶DNA。然而，在表2的其他12种细菌的100,000个拷贝的存在下，不存在阳性信号。因此，干酪试验（SEQ ID NO:28-30）对于干酪乳杆菌是高度特异性的。
本文中引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，据此通过引用并入，如同每篇参考文献单独和具体地表示通过引用并入一样，并且在本文中全面阐明。
在描述本发明的内容中（尤其是在以下权利要求的内容中）的术语“一个（a）”和“一个（an）”和“该（the）”和“至少一个”和相似提及，应被理解为涵盖单数和复数，除非文中另外指出或内容明显矛盾。后面跟着一个或多个项目列表的术语“至少一个”的使用（例如，“A和B中的至少一个）应被理解为表示选自所列项目中的一个项目（A或B）或两个或更多个所列项目的任意组合（A和B），除非文中另外指出或内容明显矛盾。术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应被理解为开放式术语（即，意思是“包括，但不限于”），除非另外指出。本文中数值范围的引用仅仅打算作为表示落入该范围内的每个分开值的速记方法，除非文中另外指出，并且将每个分开值并入说明书中，如同文中单独记述一样。可以以任何合适的顺序进行本文中所述的所有方法，除非文中另外指出或者与内容明显矛盾。本文中提供的任何实施例或示例性表述（例如，“如”）只是打算用来更好地说明本发明，而不是对本发明的范围具有限制，除非另外声明。说明书中没有任何语言应当被理解为表示任何未要求的要素为实施本发明必需的。
本文中描述了本发明的优选实施方案，包括发明人已知的用于实施本发明的最佳方式。那些优选实施方案的变化对于本领域普通技术人员来说在阅读之前的描述时可变得清楚。本发明人预期本领域技术人员能够按照需要使用这样的变化，并且本发明人打算用本文中具体描述以外的其他方法来实施本发明。因此，本发明包括在适用法律允许的所附权利要求中所记载主题的所有改变和等同物。此外，本发明包括上述要素所有可能变化的任意组合，除非文中另外指出或者与内容明显矛盾。
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Claims (12)

1.由选自SEQ ID NOs:1-45的核苷酸序列组成的核酸。
2.包含两个或更多个核酸的一组核酸，其中所述两个或更多个核酸各自由选自SEQ ID NOs:1-45的核苷酸序列组成。
3.根据权利要求2的那组核酸，其中所述两个或更多个核酸包括两个或更多个不同的核酸。
4.包含一组核酸的试验试剂盒，其中那组核酸选自：
（a）SEQ ID NOs:1-3；
（b）SEQ ID NOs:4-6；
（c）SEQ ID NOs:7-9；
（d）SEQ ID NOs:10-12；
（e）SEQ ID NOs:13-15；
（f）SEQ ID NOs:16-18；
（g）SEQ ID NOs:19-21；
（h）SEQ ID NOs:22、24和27；
（i）SEQ ID NOs:22、25和27；
（j）SEQ ID NOs:23、26和27；
（k）SEQ ID NOs:28-30；
（l）SEQ ID NOs:31-33；
（m）SEQ ID NOs:34-36；
（n）SEQ ID NOs:37-39；
（o）SEQ ID NOs:40-42；和
（p）SEQ ID NOs:43-45。
5.支持物，包含固定于该支持物上的根据权利要求1的核酸、根据权利要求2-3任一项的那组核酸或权利要求4的试验试剂盒的那组核酸。
6.根据权利要求5的支持物，进一步包含可检测标记。
7.检测食物中一种或多种微生物的存在的方法，该方法包括：
（a）获得至少一种包含从食物分离的微生物核酸的测试样品；
（b）在允许核酸与微生物核酸之间形成复合物的条件下，使根据权利要求1的核酸、根据权利要求2-3任一项的那组核酸、根据权利要求4的试验试剂盒的那组核酸或根据权利要求5或6的包括该核酸的支持物与至少一种测试样品接触；
（c）检测该复合物；和，任选地，
（d）将所述至少一种测试样品中的复合物的量与来自缺乏微生物核酸的阴性样品的复合物的量相比较，其中增加量的来自所述至少一种测试样品的复合物表示一种或多种微生物的存在。
8.根据权利要求7的方法，包括检测一种或多种引起食物腐败的微生物的存在。
9.根据权利要求7或8的方法，包括检测选自片球菌属（Pediococcus）、乳杆菌属（Lactobacillus）、梳状菌属（Pectinatus）和巨球形菌属（Megasphaera）的一个或多个属的一种或多种微生物的存在。
10.根据权利要求7-9任一项的方法，包括检测选自有害片球菌（Pediococcus damnosus）、意外片球菌（Pediococcus inopinatus）、克氏片球菌（Pediococcus claussenii）、Lactobacillus backii、短乳杆菌（Lactobacillus brevis）、干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）、棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）、丘状菌落乳杆菌（Lactobacilluscollinoides）、林氏乳杆菌（Lactobacillus lindneri）、Lactobacillusrossiae、类布氏乳杆菌（Lactobacillus parabuchneri）、类丘状菌落乳杆菌（Lactobacillus paracollinoides）、Lactobacillus perolens、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜啤酒梳状菌（Pectinatuscerevisiiphillus）、福瑞森加梳状菌（Pectinatus frisingensis）、Pectinatushaikarae、Pectinatus portalensis、啤酒巨球形菌（Megasphaeracerevisiae）和埃氏巨球形菌（Megasphaera elsdenii）的一种或多种微生物的存在。
11.根据权利要求7-10任一项的方法，其中所述食物是饮料。
12.根据权利要求7-11任一项的方法，其中所述食物是啤酒。
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