CN103503774A - 一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,其方法是通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、壮苗及生根培养来实现再生植株幼苗。本发明取材方便,操作简单,生长繁殖速度快,可有效提高响叶杨组织培养获得再生植株的效率,能保持亲本的优良特性,种苗成品率高,对其以后遗产改良和遗传转化具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于林业无性繁殖技术领域,具体涉及一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法。
背景技术
林业是国民经济的基础产业,在维护生态平衡、改善生态环境、实现可持续发展中有着不可替代的作用。随着我国经济的不断发展,对生态环境的破坏不断加剧,水土流失和荒漠化加剧,同时,木材需求快速增长,国内产量已无法满足,林地用地紧张也日益凸显,培育速生丰产抗逆性强的品种是实现扩大种植面积,减少水土流失,缓解土地矛盾,提高木材产量的有效途径之一,同时也能有效的改善生态环境。近年来,国内相继推出了一批速生丰产、抗逆性强的杨树品种,推动了我国林业的发展。
响叶杨(Populus adenopoda)是我国特有的速生用材树种,为杨柳科(Salicaceae)、杨属(Populus)的一种喜光阳性树种,落叶乔木,高可达30m,其生长条件要求不严格,一般只要年均温10~20℃,年降水量1200mm,相对湿度20%,光照充足时就能正常生长。响叶杨在我国分布广,在我国南方10多个省,均有分布,具有主干通直、材质细密、不翘不裂,生长快、用途广等特点,是营造短周期工业用材原料林特别是纸浆材原料林的重要树种之一。适应性强,耐贫瘠,耐干旱。目前响叶杨造林大都使用的是实生苗,主要来自未经改良或测定的林分、行道树、孤立木等,遗传品质无保障,林分生产力不高,限制了响叶杨的发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法。
本发明直接用茎段作为外植体,取材方便。
本发明的响叶杨组培苗方法是通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、壮苗及生根培养来实现再生植株幼苗,其具体步骤如下:
(1)外植体消毒:选用半木质化的健康幼嫩茎段为外植体,用70%的CH3CH2OH消毒20-40s后,再用0.1%的HgCl2浸泡6-8min,然后在无菌条件下用无菌水清洗4-6次,用无菌纱布吸干;
(2)丛生芽诱导培养:将消毒后茎段切成1-2cm的小段,每段带芽1-2个,放入诱导培养基上,先置于暗培养箱中48-72h,然后放在光照培养箱上光照培养,7d后开始长出不定芽,培养30d,即可长出丛生芽;诱导培养基为MS+6-BA0.5-0.7mg.L-1+NAA0.02-0.04mg.L-1;
(3)丛生芽增殖:切取诱导产生的丛生芽,接种到丛生芽增殖培养基上,直接置于光照培养箱进行光照培养,30d后,产生大量的丛生芽;增殖培养基为MS+6-BA0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1;
(4)壮苗培养:在丛生芽中切取长度3~5cm长势良好的芽,接种到壮苗培养基上,使其生长成为茎干粗壮的无根苗;壮苗培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1;
(5)生根培养:壮苗培养30d后,接种到生根培养基上,三周后,可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗;生根培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1。
组织培养技术的成功不仅取决于植物本身的遗传特性,还需要合适的 培养基、激素及恰当的培养温度、光照等条件。不同植物品种对组织培养条件的要求有所不同。本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖,7g琼脂,调pH5.8。本发明中的光照培养箱温度为20-25℃,光照强度为1500-2000Lx,光照时间为12-15h/d。
本发明的优点和有益效果如下:
响叶杨采用半木质化的幼嫩茎段诱导产生丛芽成苗,取材方便,操作简单,生长繁殖速度快,可有效提高响叶杨组织培养获得再生植株的效率,能保持亲本的优良特性,种苗成品率高,对其以后遗产改良和遗传转化具有重要意义。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步的详细描述,但并非对本发明的限制,凡依照本发明公开内容所做的任何本领域的等同替换,均属于本发明的保护范围。
实施例1
本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖,7g琼脂,调pH5.8;光照培养箱温度为20-25℃,光照强度为1500-2000Lx,光照时间为12-15h/d。
响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,具体步骤如下:
(1)外植体消毒
采集响叶杨半木质化茎段,流水下冲洗2h后,移至超净工作台,用70%CH3CH2OH处理20s,再用0.1%HgCl2浸泡消毒8min,之后无菌水冲洗4次,用无菌纱布吸干;
(2)丛生芽诱导培养
培养基为MS+6-BA0.5-0.7mg.L-1+NAA0.02-0.04mg.L-1+KT0.1-0.3mg.L-1+蔗糖25-30g.L-1+琼脂6.5-70g.L-1,pH5.6-5.8;将茎段切成 1-2cm的小段,每段带芽1-2个,放入诱导培养基上,先置于黑暗培养箱中48h,然后放在光照培养箱上光照培养,5d后,叶柄处出现淡绿色愈伤组织,不定芽也开始生长,待培养30d左右,即可长出丛生芽,诱导率为95%;
(3)丛生芽增殖
培养基为MS+6-BA0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1;切取诱导产生的丛生芽,接种到丛生芽增殖培养基上,直接置于光照培养箱进行光照培养,10d后,丛生芽开始生长,约30d后,即可产生大量的丛生芽;
(4)壮苗培养
培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1;在丛生芽中切取3~5cm的嫩芽,接种到壮苗培养基上,使其生长成为茎干粗壮的无根苗;
(5)生根培养
培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1;
壮苗培养30d后,接种到生根培养基上,三周后,可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗,30d后统计结果,生根率达100%。
实施例2
本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖,7g琼脂,调pH5.8;光照培养箱温度为20-25℃,光照强度为1500-2000Lx,光照时间为12-15h/d。
响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,具体步骤如下:
(1)外植体消毒
采集响叶杨半木质化茎段,流水下冲洗3h后,移至超净工作台,用70%CH3CH2OH处理30s,再用0.1%HgCl2浸泡消毒7min,之后无菌水冲洗5次,用无菌纱布吸干;
(2)丛生芽诱导培养
培养基为MS+6-BA0.5-0.7mg.L-1+NAA0.02-0.04mg.L-1+KT0.1-0.3mg.L-1+蔗糖25-30g.L-1+琼脂6.5-70g.L-1,pH5.6-5.8;将茎段切成1-2cm的小段,每段带芽1-2个,放入诱导培养基上,先置于黑暗培养箱中60h,然后放在光照培养箱上光照培养,5d后,叶柄处出现淡绿色愈伤组织,不定芽也开始生长,待培养30d左右,即可长出丛生芽,诱导率为96%;
(3)丛生芽增殖
培养基为MS+6-BA0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1;切取诱导产生的丛生芽,接种到丛生芽增殖培养基上,直接置于光照培养箱进行光照培养,10d后,丛生芽开始生长,约30d后,即可产生大量的丛生芽;
(4)壮苗培养
培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1;在丛生芽中切取3~5cm的嫩芽,接种到壮苗培养基上,使其生长成为茎干粗壮的无根苗;
(5)生根培养
培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1;
壮苗培养30d后,接种到生根培养基上,三周后,可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗,30d后统计结果,生根率达100%。
实施例3
本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖,7g琼脂,调pH5.8;光照培养箱温度为20-25℃,光照强度为1500-2000Lx,光照时间为12-15h/d。
响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,具体步骤如下:
(1)外植体消毒
采集响叶杨半木质化茎段,流水下冲洗4h后,移至超净工作台,用 70%CH3CH2OH处理40s,再用0.1%HgCl2浸泡消毒8min,之后无菌水冲洗6次,用无菌纱布吸干;
(2)丛生芽诱导培养
培养基为MS+6-BA0.5-0.7mg.L-1+NAA0.02-0.04mg.L-1+KT0.1-0.3mg.L-1+蔗糖25-30g.L-1+琼脂6.5-70g.L-1,pH5.6-5.8;将茎段切成1-2cm的小段,每段带芽1-2个,放入诱导培养基上,先置于黑暗培养箱中60h,然后放在光照培养箱上光照培养,5d后,叶柄处出现淡绿色愈伤组织,不定芽也开始生长,待培养30d左右,即可长出丛生芽,诱导率为98%;
(3)丛生芽增殖
培养基为MS+6-BA0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1;切取诱导产生的丛生芽,接种到丛生芽增殖培养基上,直接置于光照培养箱进行光照培养,10d后,丛生芽开始生长,约30d后,即可产生大量的丛生芽;
(4)壮苗培养
培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1;在丛生芽中切取3~5cm的嫩芽,接种到壮苗培养基上,使其生长成为茎干粗壮的无根苗;
(5)生根培养
培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1;
壮苗培养30d后,接种到生根培养基上,三周后,可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗,30d后统计结果,生根率达100%。
Claims (4)
1.一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,包括如下步骤:
(1)外植体消毒:选用半木质化的健康幼嫩茎段为外植体,用70%的CH3CH2OH消毒20-40s后,再用0.1%的HgCl2浸泡6-8min,无菌水清洗4-6次,最后用无菌纱布吸干外植体表面的水;
(2)丛生芽诱导培养:将消毒后的茎段切成1-2cm小段,每段带芽1-2个,放入诱导培养基上,先置于暗培养箱中48-72h,然后放在光照培养箱上光照培养,7d后开始长出不定芽,培养30d,即可长出丛生芽;
(3)丛生芽增殖:切取诱导产生的丛生芽,接种到丛生芽增殖培养基上,直接置于光照培养箱进行光照培养,30d后,产生大量的丛生芽;
(4)壮苗培养:在丛生芽中切取长度3~5cm长势良好的芽,接种到壮苗培养基上,使其生长成为茎干粗壮的无根苗;
(5)生根培养:壮苗培养30d后,接种到生根培养基上,三周后,可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗。
2.根据权利要求1所述的一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,其特征在于:所述诱导培养基为MS+6-BA0.5-0.7mg.L-1+NAA0.02-0.04mg.L-1;所述增殖培养基为MS+6-BA0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1;所述壮苗培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1;所述生根培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1。
3.根据权利要求1或2所述的一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,其特征在于:所述的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖,7g琼脂,调pH5.8。
4.根据权利要求1或2所述的一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法,其特征在于:所述的光照培养箱温度为20-25℃,光照强度为1500-2000Lx,光照时间为12-15h/d。
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