CN104322369A - 一种钻天柳茎段组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物组培领域，公开了一种钻天柳茎段组培快繁的方法，包括如下步骤：采集钻天柳当年生茎段，依次进行1)外植体消毒、2)丛生芽诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，得到钻天柳组培苗。本发明的方法突破了钻天柳只能靠种子繁殖且成活率低的瓶颈，有利于打破钻天柳濒危现状，形成钻天柳批量快速的繁殖局面。同时使用组培快繁技术，培养条件可控，可周年试验或生产，生长快，周期短，重复性强，在工厂化育苗条件下，一年内可使每株钻天柳繁育成上百万株成品和脱毒苗木，大大提高钻天柳的繁育苗木效率。
Description
技术领域
本发明属于植物组培领域，具体涉及一种钻天柳茎段组培快繁的方法。
背景技术
钻天柳(Chosenia arbutifolia)又名朝鲜柳、红梢柳，是杨柳科钻天柳属落叶大乔木，单属单种。该种现已濒临灭绝，属易危(V)级别的濒危树种，是国家Ⅱ级重点保护野生植物。钻天柳主要分布于亚洲东北部,北起自北极圈,向南经东西伯利亚,进人我国境内。东西分布于俄罗斯东部及其岛屿、中国东北部、日本北部至中部和朝鲜的北部。由于生态环境恶化，有的地区已经绝迹，有些地区仅有大树而无幼苗与幼树，其分布区正日益缩减。我国主要产自内蒙古(大兴安岭西坡)、东北三省，生于海拔300m～900m的林区河流两岸排水良好的碎石沙土上。
钻天柳高可达20～30m，胸径达0.5～1m，树冠圆柱形，树皮褐灰色，小枝无毛，黄色带红色或紫红色，有白粉，叶长圆状披针形至披针形，长5～8cm，宽1.5～2.3cm，先端渐尖，基部楔形，两面无毛，上面灰绿色，下面苍白色，常有白粉，边缘稍有锯齿或近全缘，花期5月，果期6月。钻天柳树干通直，树姿高大挺拔，枝条秋季落叶后色彩鲜红，是三北地区少有的冬季观枝大乔木，秋季树干高可达30m以上。木材纹理通直，颜色均一，可做建筑用材、家俱、造纸等用。钻天柳喜阳光，耐寒性强，极耐水淹。钻天柳根系发达，是地上部的3～5倍，是很好的防风固沙和防洪树种。由于生态环境恶化，有的地区已经绝迹，有些地区仅有大树而无幼苗与幼树，其分布区正日益缩减。
钻天柳人工繁殖十分困难，从60年代初开始，不断有人进行繁殖试验，比如扦插育苗、药物刺激生根处理、组培育苗等，但一直未能扩大繁育和推广，繁育难得问题一直未能得到彻底解决。目前采用种子繁殖，扦插枝条不易成活。
目前公开的钻天柳的组织培养中，主要采用了MS、WPM进行了研究，2006年和2010年采用了MS为基本培养基，进行了诱导的基本培养基、增殖和愈伤的培养基采用MS，生根及生根继代培养采用l/2MS，建立起钻天柳(Chosenia arbutifolia)离体繁殖技术。2013年发表的陶双勇和张小单的文章采用WPM作为基本培养基进行了研究，诱导生根率较低。以上几种配方的生长状况一般，可操作性和重复性不高。
发明内容
针对现有钻天柳组织培养方法中存在的生长状况一般、可操作性和重复性不高问题，本发明旨在提供一种钻天柳茎段组培快繁的方法。
本发明提供一种钻天柳茎段组培快繁的方法，包括如下步骤：
采集钻天柳当年生茎段，依次进行1)外植体消毒、2)丛生芽诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，得到钻天柳组培苗。
所述采集钻天柳当年生茎段，为在春天采集钻天柳当年生枝条，要求枝条直径3mm以上，将所采枝条截成3cm的茎段，要求每个茎段都长有一个腋芽。
所述1)外植体消毒，为将外植体以升汞溶液消毒，优选为以质量百分含量0.3％的升汞溶液消毒7min。
所述2)丛生芽诱导培养，为将消毒后的茎段接种到丛生芽诱导培养基上，使茎段先萌发新的丛生芽，后展开叶片。
所述丛生芽诱导培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有1.0mg/L(终浓度，下同)的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)的培养基，即DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基。
所述萌发新的丛生芽，时间为接种到丛生芽诱导培养基上20天后。
所述展开叶片，时间为接种到丛生芽诱导培养基上45天后。
所述3)丛生芽增殖培养，为将丛生芽诱导培养所得丛生芽接种到脱分化培养基上，培养至产生愈伤组织，将愈伤组织接种到分化培养基上，培养至产生不定芽。
所述脱分化培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即DKW+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培养基。
所述产生愈伤组织，时间为接种到脱分化培养基上40天后。
所述分化培养基是以1/2NRM培养基为基本培养基，含有0.75mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即1/2NRM+6-BA 0.75mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培养基。
所述产生不定芽，时间为接种到分化培养基上40天后。
所述4)丛生芽生根培养，为将丛生芽增殖培养所得不定芽接种到生根培养基上，培养至得到有根的完整植株。
所述生根培养基是以2/3DKW培养基为基本培养基，含有0.4mg/L的IBA(吲哚丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L琼脂、15g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA0.4mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖15g/L的培养基。
所述得到有根的完整植株，时间为接种到生根培养基上45天后。
所述5)炼苗移栽，为将得到有根的完整植株连瓶放入温室中炼苗2-4天，打开盖取出苗，洗净杀菌放入基质中栽培。
所述基质为草炭土：珍珠岩按体积比3:1混合所得的基质。
所述丛生芽诱导培养基、脱分化培养基、分化培养基、生根培养基的pH值优选为5.80。
所述的培养，培养条件为每天光照10h～12h，温度为25℃±2℃。
本发明还提供所述钻天柳茎段组培快繁的方法在钻天柳繁殖中的应用。
和现有的钻天柳的组织培养方法相比，本发明的方法具有如下优点：
本发明的方法可以使每株钻天柳在工厂化育苗条件下，一年内繁育成上百万株成品和脱毒苗木，大大提高钻天柳的繁育苗木效率。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中所用化学药品、草炭土、珍珠岩均可市购。
实施例1筛选丛生芽诱导培养基
分别以WPM、DKW、2/3DKW以及1/2NRM四种培养基为基本培养基，筛选适合进行钻天柳茎段诱导培养的基础培养基。以上述4种基础培养基配制激素种类、浓度相同的培养基，所用激素为终浓度1.0mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)加上终浓度0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)，即配制如下培养基(pH值均为5.80)：
1、WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基
2、DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基
3、2/3DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基
4、1/2NRM+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基
对钻天柳当年生茎段(长3cm，长有一个腋芽)进行丛生芽诱导培养，培养条件为每天光照10h～12h，温度为25℃±2℃。
培养45天后统计诱导率，结果如表1所示，DKW为基础培养基的丛生芽诱导培养基诱导率为95％，2/3DKW为87％，1/2NRM为72％，WPM为50％，说明在钻天柳茎段组培中，以DKW为基础培养基配制的丛生芽诱导培养基的诱导效果最好。
表1不同基础培养基的钻天柳茎段诱导率
| 基础培养基 | 诱导率(％) |
| DKW | 95 |
| 2/3DKW | 87 |
| 1/2NRM | 72 |
| WPM | 50 |
实施例2筛选脱分化培养基
分别以WPM、DKW、2/3DKW以及1/2NRM四种培养基为基本培养基，筛选适合进行钻天柳茎段脱分化培养的基础培养基。以上述4种基础培养基配制添加物种类、浓度相同的培养基，所用添加物为终浓度2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂和20g/L葡萄糖，即配制如下培养基(pH值均为5.80)：
1、WPM+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L培养基
2、DKW+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L培养基
3、2/3DKW+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L培养基
4、1/2NRM+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L培养基
将实施例1所得丛生芽接种到上述4种培养基上进行脱分化培养，培养条件为每天光照10h～12h，温度为25℃±2℃。
培养40天后观察结果，如表2所示，DKW为基础培养基的脱分化培养基上产生的愈伤淡绿色质地疏松，诱导率最高，2/3DKW、1/2NRM和WPM为基础培养基的脱分化培养基上愈伤组织出现的情况均不如DKW为基础培养基的脱分化培养基，由此可见DKW为基础培养基的脱分化培养基表现优于其他三种。
表2不同基础培养基对钻天柳愈伤诱导率的影响
| 基础培养基 | 诱导率(％) | 愈伤情况 |
| DKW | 97 | 浅绿色、质地疏松 |
| 2/3DKW | 92 | 浅绿色、质地疏松 |
| 1/2NRM | 80 | 黄绿色、质地疏松 |
| WPM | 85 | 桃红色、质地紧密 |
实施例3以本发明的方法进行钻天柳茎段组培快繁
2014年4月20日，在本溪市桓仁县，采集钻天柳当年生枝条，要求枝条直径3mm以上，将所采枝条截成3cm无病虫害、无破损的茎段，要求每个茎段都长有一个腋芽，开始钻天柳茎段组培快繁：
(下面所用丛生芽诱导培养基、脱分化培养基、分化培养基、生根培养基的pH值均为5.80。)
1)外植体消毒：以质量百分含量0.3％的升汞溶液将所采茎段消毒7min。
2)丛生芽诱导培养：将消毒后的茎段100个接种到丛生芽诱导培养基上，所述丛生芽诱导培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有1.0mg/L(终浓度，下同)的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.1mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneaceticacid)的培养基，即DKW+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基。
培养条件为每天光照10h～12h，温度为25℃±2℃，以下各步骤的培养条件相同。
培养的结果为接种到丛生芽诱导培养基上20天后，茎段萌发了新的丛生芽，接种到丛生芽诱导培养基上45天后，丛生芽的叶片展开。诱导率为95％。
3)丛生芽增殖培养：将丛生芽诱导培养所得丛生芽接种到脱分化培养基上，培养至产生愈伤组织，将愈伤组织接种到分化培养基上，培养至产生不定芽。
所述脱分化培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即DKW+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培养基。
接种到脱分化培养基上40天后产生了淡绿色质地疏松的愈伤组织。
所述分化培养基是以1/2NRM培养基为基本培养基，含有0.75mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即1/2NRM+6-BA 0.75mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖20g/L的培养基。
接种到分化培养基上40天后产生不定芽，增殖系数为8.7。
4)丛生芽生根培养：将丛生芽增殖培养所得不定芽接种到生根培养基上，培养至得到有根的完整植株。
所述生根培养基是以2/3DKW培养基为基本培养基，含有0.4mg/L的IBA(吲哚丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L琼脂、15g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA0.4mg/L+琼脂4.5g/L+葡萄糖15g/L的培养基。
接种到生根培养基上培养10d后，基部产生白色根系，培养45天后毛根明显，根系发达，形成完整植株，生根率达84％。
5)炼苗移栽，为将得到有根的完整植株连瓶放入温室中炼苗2-4天，打开盖取出苗，洗净杀菌放入基质中栽培。所述基质为草炭土：珍珠岩按体积比3:1混合所得的基质。10天后统计，成活率达85％。
本发明的方法突破了钻天柳只能靠种子繁殖且成活率低的瓶颈，有利于打破钻天柳濒危现状，形成钻天柳批量快速的繁殖局面。同时使用组培快繁技术，培养条件可控，可周年试验或生产，生长快，周期短，重复性强，在工厂化育苗条件下，一年内可使每株钻天柳繁育成上百万株成品和脱毒苗木，大大提高钻天柳的繁育苗木效率。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种钻天柳茎段组培快繁的方法，包括如下步骤：
采集钻天柳当年生茎段，依次进行1)外植体消毒、2)丛生芽诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，得到钻天柳组培苗。
2.根据权利要求1所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述2)丛生芽诱导培养，为将消毒后的茎段接种到丛生芽诱导培养基上，使茎段先萌发新的丛生芽，后展开叶片。
3.根据权利要求2所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA的培养基。
4.根据权利要求1所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述3)丛生芽增殖培养，为将丛生芽诱导培养所得丛生芽接种到脱分化培养基上，培养至产生愈伤组织，将愈伤组织接种到分化培养基上，培养至产生不定芽。
5.根据权利要求4所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述脱分化培养基是以DKW培养基为基本培养基，含有2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。
6.根据权利要求4所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述分化培养基是以1/2NRM培养基为基本培养基，含有0.75mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。
7.根据权利要求1所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述4)丛生芽生根培养，为将丛生芽增殖培养所得丛生芽接种到生根培养基上，培养至得到有根的完整植株。
8.根据权利要求7所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述生根培养基是以2/3DKW培养基为基本培养基，含有0.4mg/L的IBA(吲哚丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L琼脂、15g/L葡萄糖的培养基。
9.根据权利要求1所述的钻天柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述5)炼苗移栽，为将得到有根的完整植株连瓶放入温室中炼苗2-4天，打开盖取出苗，洗净杀菌放入基质中栽培。
10.权利要求1-9任一项所述的钻天柳茎段组培快繁的方法在钻天柳繁殖中的应用。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112703952A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-04-27 | 黑龙江省林业科学院伊春分院 | 一种使用钻天柳营养钵苗的造林方法 |
| CN115589947A (zh) * | 2022-10-21 | 2023-01-13 | 曲阜师范大学（Cn） | 一种蒿柳组培快繁的方法及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1121387A (zh) * | 1994-09-08 | 1996-05-01 | 车春光 | 红毛柳人工无性育苗方法 |
| CN103538677A (zh) * | 2013-09-23 | 2014-01-29 | 沈阳工业大学 | 齐心协力亲子娱乐运动机 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1121387A (zh) * | 1994-09-08 | 1996-05-01 | 车春光 | 红毛柳人工无性育苗方法 |
| CN103538677A (zh) * | 2013-09-23 | 2014-01-29 | 沈阳工业大学 | 齐心协力亲子娱乐运动机 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 任真: "钻天柳组织培养技术研究", 《北方园艺》, no. 18, 31 December 2012 (2012-12-31), pages 144 - 146 * |
| 张小单等: "钻天柳茎段腋芽诱导消毒方法与培养基的筛选", 《安徽农业科学》, vol. 41, no. 33, 31 December 2013 (2013-12-31) * |
| 王向军等: "钻天柳腋芽组培快繁技术的研究", 《吉林林业科技》, vol. 35, no. 2, 31 March 2006 (2006-03-31), pages 8 - 11 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112703952A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-04-27 | 黑龙江省林业科学院伊春分院 | 一种使用钻天柳营养钵苗的造林方法 |
| CN112703952B (zh) * | 2020-12-24 | 2023-12-12 | 黑龙江省林业科学院伊春分院 | 一种使用钻天柳营养钵苗的造林方法 |
| CN115589947A (zh) * | 2022-10-21 | 2023-01-13 | 曲阜师范大学（Cn） | 一种蒿柳组培快繁的方法及其应用 |
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