CN103503774B - 一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法 - Google Patents

一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，其方法是通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、壮苗及生根培养来实现再生植株幼苗。本发明取材方便，操作简单，生长繁殖速度快，可有效提高响叶杨组织培养获得再生植株的效率，能保持亲本的优良特性，种苗成品率高，对其以后遗产改良和遗传转化具有重要意义。

Description

一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法
技术领域
本发明属于林业无性繁殖技术领域，具体涉及一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法。
背景技术
林业是国民经济的基础产业，在维护生态平衡、改善生态环境、实现可持续发展中有着不可替代的作用。随着我国经济的不断发展，对生态环境的破坏不断加剧，水土流失和荒漠化加剧，同时，木材需求快速增长，国内产量已无法满足，林地用地紧张也日益凸显，培育速生丰产抗逆性强的品种是实现扩大种植面积，减少水土流失，缓解土地矛盾，提高木材产量的有效途径之一，同时也能有效的改善生态环境。近年来，国内相继推出了一批速生丰产、抗逆性强的杨树品种，推动了我国林业的发展。
响叶杨(Populus adenopoda)是我国特有的速生用材树种，为杨柳科(Salicaceae)、杨属(Populus)的一种喜光阳性树种，落叶乔木，高可达30m，其生长条件要求不严格，一般只要年均温10～20℃，年降水量1200mm，相对湿度20％，光照充足时就能正常生长。响叶杨在我国分布广，在我国南方10多个省，均有分布，具有主干通直、材质细密、不翘不裂，生长快、用途广等特点，是营造短周期工业用材原料林特别是纸浆材原料林的重要树种之一。适应性强，耐贫瘠，耐干旱。目前响叶杨造林大都使用的是实生苗，主要来自未经改良或测定的林分、行道树、孤立木等，遗传品质无保障，林分生产力不高，限制了响叶杨的发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法。
本发明直接用茎段作为外植体，取材方便。
本发明的响叶杨组培苗方法是通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、壮苗及生根培养来实现再生植株幼苗，其具体步骤如下：
(1)外植体消毒：选用半木质化的健康幼嫩茎段为外植体，用70％的CH3CH2OH消毒20-40s后，再用0.1％的HgCl2浸泡6-8min，然后在无菌条件下用无菌水清洗4-6次，用无菌纱布吸干；
(2)丛生芽诱导培养：将消毒后茎段切成1-2cm的小段，每段带芽1-2个，放入诱导培养基上，先置于暗培养箱中48-72h，然后放在光照培养箱上光照培养，7d后开始长出不定芽，培养30d，即可长出丛生芽；诱导培养基为MS+6-BA 0.5-0.7mg.L-1+NAA0.02-0.04mg.L-1；
(3)丛生芽增殖：切取诱导产生的丛生芽，接种到丛生芽增殖培养基上，直接置于光照培养箱进行光照培养，30d后，产生大量的丛生芽；增殖培养基为MS+6-BA 0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1；
(4)壮苗培养：在丛生芽中切取长度3～5cm长势良好的芽，接种到壮苗培养基上，使其生长成为茎干粗壮的无根苗；壮苗培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1；
(5)生根培养：壮苗培养30d后，接种到生根培养基上，三周后，可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗；生根培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1。
组织培养技术的成功不仅取决于植物本身的遗传特性，还需要合适的培养基、激素及恰当的培养温度、光照等条件。不同植物品种对组织培养条件的要求有所不同。本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖，7g琼脂，调pH5.8。本发明中的光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。
本发明的优点和有益效果如下：
响叶杨采用半木质化的幼嫩茎段诱导产生丛芽成苗，取材方便，操作简单，生长繁殖速度快，可有效提高响叶杨组织培养获得再生植株的效率，能保持亲本的优良特性，种苗成品率高，对其以后遗产改良和遗传转化具有重要意义。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步的详细描述，但并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所做的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
实施例1
本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖，7g琼脂，调pH5.8；光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。
响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，具体步骤如下：
(1)外植体消毒
采集响叶杨半木质化茎段，流水下冲洗2h后，移至超净工作台，用70％CH3CH2OH处理20s，再用0.1％HgCl2浸泡消毒8min，之后无菌水冲洗4次，用无菌纱布吸干；
(2)丛生芽诱导培养
培养基为MS+6-BA 0.5-0.7mg.L-1+NAA 0.02-0.04mg.L-1+KT0.1-0.3mg.L-1+蔗糖25-30g.L-1+琼脂6.5-70g.L-1，pH5.6-5.8；将茎段切成1-2cm的小段，每段带芽1-2个，放入诱导培养基上，先置于黑暗培养箱中48h，然后放在光照培养箱上光照培养，5d后，叶柄处出现淡绿色愈伤组织，不定芽也开始生长，待培养30d左右，即可长出丛生芽，诱导率为95％；
(3)丛生芽增殖
培养基为MS+6-BA 0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1；切取诱导产生的丛生芽，接种到丛生芽增殖培养基上，直接置于光照培养箱进行光照培养，10d后，丛生芽开始生长，约30d后，即可产生大量的丛生芽；
(4)壮苗培养
培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1；在丛生芽中切取3～5cm的嫩芽，接种到壮苗培养基上，使其生长成为茎干粗壮的无根苗；
(5)生根培养
培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1；
壮苗培养30d后，接种到生根培养基上，三周后，可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗，30d后统计结果，生根率达100％。
实施例2
本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖，7g琼脂，调pH5.8；光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。
响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，具体步骤如下：
(1)外植体消毒
采集响叶杨半木质化茎段，流水下冲洗3h后，移至超净工作台，用70％CH3CH2OH处理30s，再用0.1％HgCl2浸泡消毒7min，之后无菌水冲洗5次，用无菌纱布吸干；
(2)丛生芽诱导培养
培养基为MS+6-BA 0.5-0.7mg.L-1+NAA 0.02-0.04mg.L-1+KT 0.1-0.3mg.L-1+蔗糖25-30g.L-1+琼脂6.5-70g.L-1，pH5.6-5.8；将茎段切成1-2cm的小段，每段带芽1-2个，放入诱导培养基上，先置于黑暗培养箱中60h，然后放在光照培养箱上光照培养，5d后，叶柄处出现淡绿色愈伤组织，不定芽也开始生长，待培养30d左右，即可长出丛生芽，诱导率为96％；
(3)丛生芽增殖
培养基为MS+6-BA 0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1；切取诱导产生的丛生芽，接种到丛生芽增殖培养基上，直接置于光照培养箱进行光照培养，10d后，丛生芽开始生长，约30d后，即可产生大量的丛生芽；
(4)壮苗培养
培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1；在丛生芽中切取3～5cm的嫩芽，接种到壮苗培养基上，使其生长成为茎干粗壮的无根苗；
(5)生根培养
培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1；
壮苗培养30d后，接种到生根培养基上，三周后，可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗，30d后统计结果，生根率达100％。
实施例3
本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖，7g琼脂，调pH5.8；光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。
响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，具体步骤如下：
(1)外植体消毒
采集响叶杨半木质化茎段，流水下冲洗4h后，移至超净工作台，用70％CH3CH2OH处理40s，再用0.1％HgCl2浸泡消毒8min，之后无菌水冲洗6次，用无菌纱布吸干；
(2)丛生芽诱导培养
培养基为MS+6-BA 0.5-0.7mg.L-1+NAA 0.02-0.04mg.L-1+KT 0.1-0.3mg.L-1+蔗糖25-30g.L-1+琼脂6.5-70g.L-1，pH5.6-5.8；将茎段切成1-2cm的小段，每段带芽1-2个，放入诱导培养基上，先置于黑暗培养箱中60h，然后放在光照培养箱上光照培养，5d后，叶柄处出现淡绿色愈伤组织，不定芽也开始生长，待培养30d左右，即可长出丛生芽，诱导率为98％；
(3)丛生芽增殖
培养基为MS+6-BA 0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1；切取诱导产生的丛生芽，接种到丛生芽增殖培养基上，直接置于光照培养箱进行光照培养，10d后，丛生芽开始生长，约30d后，即可产生大量的丛生芽；
(4)壮苗培养
培养基为MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1；在丛生芽中切取3～5cm的嫩芽，接种到壮苗培养基上，使其生长成为茎干粗壮的无根苗；
(5)生根培养
培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L-1；
壮苗培养30d后，接种到生根培养基上，三周后，可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗，30d后统计结果，生根率达100％。

Claims (1)

1.一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，具体步骤如下：
(1)外植体消毒：选用半木质化的健康幼嫩茎段为外植体，用70％的CH3CH2OH消毒20-40s后，再用0.1％的HgCl2浸泡6-8min，无菌水清洗4-6次，最后用无菌纱布吸干外植体表面的水；
(2)丛生芽诱导培养：将消毒后的茎段切成1-2cm小段，每段带芽1-2个，放入诱导培养基上，先置于暗培养箱中48-72h，然后放在光照培养箱上光照培养，7d后开始长出不定芽，培养30d，即长出丛生芽；所述诱导培养基为MS+6-BA 0.5-0.7mg/L+NAA0.02-0.04mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,调pH为5.8；
(3)丛生芽增殖：切取诱导产生的丛生芽，接种到丛生芽增殖培养基上，直接置于光照培养箱进行光照培养，30d后，产生大量的丛生芽；所述丛生芽增殖培养基为MS+6-BA 0.2-0.5mg/L+NAA0.01-0.03mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,调pH为5.8；
(4)壮苗培养：在丛生芽中切取长度3～5cm长势良好的芽，接种到壮苗培养基上，使其生长成为茎干粗壮的无根苗；所述壮苗培养基为MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,调pH为5.8；
(5)生根培养：壮苗培养30d后，接种到生根培养基上，三周后，获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗；所述生根培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,调pH为5.8；
所述的光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。
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