CN103501636A - 从植物汁制备异麦芽酮糖的方法 - Google Patents

从植物汁制备异麦芽酮糖的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103501636A
CN103501636A CN201280021859.XA CN201280021859A CN103501636A CN 103501636 A CN103501636 A CN 103501636A CN 201280021859 A CN201280021859 A CN 201280021859A CN 103501636 A CN103501636 A CN 103501636A
Authority
CN
China
Prior art keywords
asp
leu
ala
asn
arg
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201280021859.XA
Other languages
English (en)
Inventor
J.哈伯兰
O.泽纳克
K.格拉曼
M.霍尔特坎普
J.沃尔特
T.希勒
A.莫尔
G.格林贝格
T.哈斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Evonik Operations GmbH
Original Assignee
Evonik Degussa GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Evonik Degussa GmbH filed Critical Evonik Degussa GmbH
Publication of CN103501636A publication Critical patent/CN103501636A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/30—Artificial sweetening agents
    • A23L27/33—Artificial sweetening agents containing sugars or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/12—Disaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Non-Alcoholic Beverages (AREA)

Abstract

本发明的主题是制备异麦芽酮糖的方法，所述方法包括下述方法步骤：A)使固定化的酶复合物与含有蔗糖的溶液接触，所述酶复合物能够催化蔗糖生成异麦芽酮糖的转化；B)将至少部分蔗糖异构化为异麦芽酮糖；C)分离出所述酶复合物，和任选地D)进一步纯化所述异麦芽酮糖，其特征在于，作为含有蔗糖的溶液使用选自浓汁或稀汁的至少一种，优选浓汁。

Description

从植物汁制备异麦芽酮糖的方法
技术领域
本发明涉及使含有蔗糖的植物汁异构化生成异麦芽酮糖的方法。
背景技术
借助于异麦芽酮糖合酶（蔗糖葡萄糖基变位酶（Succharose Glucosylmutasen），EC 5.4.99.11）将水溶液中的蔗糖酶促异构化生成异麦芽酮糖是一种已知的方法。
例如，DE1049800描述了一种借助于细菌菌株红色精蛋白杆菌（Protaminobacter rubrum）由含有蔗糖的植物汁发酵制备异麦芽酮糖的方法。可替换地，酶促转化也可以用死生物体进行。在反应结束时，通过离心逐批分离出细胞群，并进一步后处理产物。该方法参见文献H. Schiweck, alimenta 19, 5-16, 1980。
EP0001099描述了一种用尤其是浓汁或稀汁作为底物连续发酵细菌菌株红色精蛋白杆菌（CBS574.77）和普城沙雷菌（Serratia plymuthica）（ATCC 15928）同时将蔗糖异构化为异麦芽酮糖的方法，其中所述底物溶液本身是细胞生长的营养培养基。在反应以后，借助于离心从产物溶液分离出细胞。在与底物培养基不同的培养基中与实际异构化分离培养生物催化上有效的生物体已经被明确证实是不利的。
DE3241788描述了一种用细菌菌株的游离细胞由蔗糖水溶液制备1-O-α-D-吡喃型葡萄糖苷-D-果糖（1-O-α-D-Glucopyranosido-D-Fructose）的方法，所述细菌菌株选自红色精蛋白杆菌（CBD574.77）、普城沙雷菌（ATCC 15928）、粘质沙雷氏菌（Serratia marescens）（NCIB 8285）、肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）（NRRL-B-512 F）和大黄欧文氏菌（Erwinia rhapontici）（NCPPB 1578）。在所述的方法中，可以使用浓汁，并且所述浓汁同样充当细胞的生长过程的碳源。在固定化的细胞的情况中，则使用纯的蔗糖溶液。
在前述2篇说明书中公开的发酵制备异麦芽酮糖的情况中，存在在无菌条件下使用经济上和能源上有利的浓汁的可能性。但是，这里必须指出的缺点是，部分蔗糖被用于形成细胞群，并且需要昂贵的无菌硬件以及复杂的细胞混悬液与产物流的分离。
EP0983374描述了一种用固定化的细菌菌株同时制备异麦芽酮糖和甜菜碱的方法，所述细菌菌株选自红色精蛋白杆菌（CBD574.77）、普城沙雷菌（ATCC 15928）和大黄欧文氏菌（NCPPB 1578）。该制备方法始于糖蜜，即在制糖制工艺结束时生成的组合物。在该方法中，不能使用浓汁作为底物，并且需要通过例如结晶明确地贫化蔗糖。
WO97/44478描述了一种用活的、固定化的细菌菌株制备异麦芽酮糖的方法，所述细菌菌株选自红色精蛋白杆菌（CBD574.77）、普城沙雷菌（ATCC 15928）和大黄欧文氏菌（ATCC 29284）。该制备方法始于糖蜜或纯蔗糖溶液。
EP0028900描述了一种用细菌菌株大黄欧文氏菌（NCPPB 1578）的固定化细胞制备异麦芽酮糖的方法。该生产方法始于纯的蔗糖溶液与最多15% v/v糖蜜的掺混物。
DE2217628、EP49472、EP3038219和EP91063描述了用固定化的细菌细胞将纯蔗糖酶促转化为异麦芽酮糖的方法。为此，EP0625578使用选自红色精蛋白杆菌（CBS 574.77）、普城沙雷菌（ATCC 15928）、粘质沙雷菌（Serratia marcescens）（NCIB 8285）、肠膜明串珠菌（NRRL-B 512 F（ATCC 1083 a））和大黄欧文氏菌（NCPPB 1578）的细菌菌株。EP0392556和EP1257638描述了选自土生结克雷伯菌（Klebsiella terrigena）JCM 1687、克雷伯菌属（Klebsiella sp. ）No. 88（FERM BP-2838）和新加坡克雷伯菌（Klebsiella singaporensis）LX3和LX21的细菌菌株的用途。
使用固定化的细胞的异构化方法描述于DE3133123和EP0915986中，并在固定化方法的范围中用作藻酸钙酶催化剂或离子交换剂。
所有已知的用固定化的细胞将蔗糖异构化为异麦芽酮糖的方法的一个共同点是，仅使用制糖工艺的最终产物，即纯的蔗糖或糖蜜。
因此，本发明的目的是，提供能够由容易获得的蔗糖来源制备异麦芽酮糖的方法。
发明内容
令人惊奇地，现在已经发现，在使用固定化的酶复合物的条件下使用含有蔗糖的植物汁来制备异麦芽酮糖，能够实现该目的。
因此，本发明提供了制备异麦芽酮糖的方法，所述方法包括下述方法步骤：
A) 使固定化的酶复合物与含有蔗糖的溶液接触，所述酶复合物能够催化蔗糖生成异麦芽酮糖的转化；
B) 将至少部分蔗糖异构化为异麦芽酮糖；
C) 分离出所述酶复合物，和任选地
D) 进一步纯化所述异麦芽酮糖，
其特征在于，作为含有蔗糖的溶液使用选自浓汁或稀汁的至少一种，优选浓汁。
在这方面，本发明有利地提供了含有蔗糖的植物汁作为异构化的底物的用途。
令人惊讶地，尽管事实上所使用的含有蔗糖的溶液是未纯化的并因而是非常复杂的底物混合物，但是通过本发明却实现了与用高纯度蔗糖相同的异构化中的收率和甚至更高的选择性。
本发明的一个优点是，通过增加固定化的细胞的停留时间以及使用粗制的植物汁作为底物，实现了显著更高的资源效率，因为节省了得到高纯度蔗糖的纯化步骤。
本发明的另一个优点是，通过直接使用浓汁，能够节省能量和生产装置（Betriebsmittel）。
本发明的另一个优点是，通过使用浓汁，不需要用于稳定酶活性的任何种类的缓冲溶液或另外的添加剂，而是进行所使用的酶的天然稳定化。
本发明的另一个优点是，与使用纯的蔗糖水溶液相反，使用含有蔗糖的植物汁会防止床的渗漏。
本发明的另一个优点是，通过在异构化过程中使用浓汁，与使用经纯化的蔗糖溶液相比，可以降低生龋的单糖类果糖和葡萄糖的含量。
术语“异麦芽酮糖”应当理解为是指6-O-α-D-吡喃型葡萄糖苷-D-果糖。
术语“酶复合物”应当理解为是指，具有至少一种活性酶的组合物或混合物组合物，其也可以是复合物性质的，例如，活细胞。酶复合物的另外的例子是融合蛋白，其中至少一种活性酶与至少一种另外的多肽连接，但是纯化的酶本身也可以是本发明意义上的酶复合物。
在本发明的上下文中，术语“固定化的酶复合物”应当理解为是指这样的酶复合物：其结合在基质上，或者被基质包封，使得所述酶复合物在水溶液中其自由扩散或其自由运动受到限制，例如减慢。
在本发明的上下文中，术语“稀汁”应当理解为是指，在由糖用甜菜或甘蔗制糖的过程中，在汁纯化以后存在的产物。基于整个汁计，稀汁通常包含10-20重量%的蔗糖。
在本发明的上下文中，术语“浓汁”应当理解为是指经浓缩的“稀汁”，基于整个汁计，其包含超过20重量%的蔗糖。
除非另外说明，所有给出的百分比(%) 是质量百分比。
在根据本发明的方法中，作为含有蔗糖的溶液有利地使用浓汁；如果需要的话，可以用水将其稀释至最多1:5的体积比，基于浓汁:水，从而得到更好的可控的异构化。
具体地，用水稀释浓汁如此来选择，使得在方法步骤A)开始时，基于整个汁计，在浓汁中存在20-80重量%、尤其是30-50重量%的蔗糖浓度。
具体地，可有利地使用糖用甜菜的稀汁或浓汁，其中糖用甜菜的浓汁是特别优选的。
含于固定化的酶复合物中的酶优选地是酶类别EC 5.4.99.11中的至少一种蔗糖葡萄糖基变位酶。在根据本发明的方法中，特别优选使用这样的蔗糖葡萄糖基变位酶，其得自：红色精蛋白杆菌、尤其是菌株红色精蛋白杆菌CBS 574.77和具有Seq ID Nr. 5和6的那些；红色精朊杆菌（Protaminobacter ruber）Z12；普城沙雷菌、尤其是菌株普城沙雷菌ATCC 15928；气味沙雷氏菌（Serratia odorifera）、尤其是菌株气味沙雷氏菌4Rx13（Seq ID Nr. 7）；粘质沙雷菌、尤其是菌株粘质沙雷菌NCIB 8285；肠膜明串珠菌、尤其是菌株肠膜明串珠菌ATCC 1083 a；大黄欧文氏菌、尤其是菌株大黄欧文氏菌ATCC29283（Seq ID Nr. 1）、NCPPB 1578、DSM 4484（Seq ID Nr. 8）、NX-5（Seq ID Nr. 9）和WAC2928（Seq ID Nr. 10）；欧文氏菌属（Erwinia sp.）、尤其是菌株欧文氏菌属D12；放射形土壤杆菌（Agrobacterium radiobacter）、尤其是菌株放射形土壤杆菌MX-232；土生结克雷伯菌、尤其是菌株土生结克雷伯菌JCM 1687；克雷伯菌属、尤其是菌株克雷伯菌属FERM BP-2838、LX3（Seq ID Nr. 11）和NK33-98-8（Seq ID Nr. 12）；肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）、尤其是菌株肺炎克雷伯菌342（Seq ID Nr. 4）；新加坡克雷伯菌、尤其是菌株新加坡克雷伯菌LX21；嗜中酸假单胞菌（Pseudomonas mesoacidophila）、尤其是菌株嗜中酸假单胞菌MX-45（Seq ID Nr. 2）；分散泛菌（Pantoea dispersa）、尤其是菌株分散泛菌UQ68J（Seq ID Nr. 3）；植物生克雷伯菌（Klebsiella planticola）、尤其是菌株植物生克雷伯菌CCRC 19112、MX10和UQ14S（Seq ID Nr. 13）；肠杆菌属（Enterobactersp.）、尤其是菌株肠杆菌属FMB-1（Seq ID Nr. 16）、SZ62和Ejp617（Seq ID Nr. 14）；维涅兰德固氮菌（Azotobacter vinelandii）DJ（Seq ID Nr. 15），其中红色精蛋白杆菌CBS 574.77和红色精朊杆菌Z12是特别优选的。
所述酶可以以经纯化形式作为多肽来使用。为了易于纯化，这些可以作为融合蛋白存在，其中，例如，使能够易于纯化的标签与所述酶融合，所述标签例如His-标签、Strep-标签、GST-标签或MBP-标签。
在根据本发明的方法中，优选的是，所述酶复合物是整个细胞，所述细胞优选地选自：红色精蛋白杆菌、尤其是菌株红色精蛋白杆菌CBS 574.77；红色精朊杆菌Z12；普城沙雷菌、尤其是菌株普城沙雷菌ATCC 15928；气味沙雷氏菌、尤其是菌株气味沙雷氏菌4Rx13；粘质沙雷菌、尤其是菌株粘质沙雷菌NCIB 8285；肠膜明串珠菌、尤其是菌株肠膜明串珠菌ATCC 1083 a；大黄欧文氏菌、尤其是菌株大黄欧文氏菌ATCC29283、NCPPB 1578、DSM 4484、NX-5和WAC2928；欧文氏菌属、尤其是菌株欧文氏菌属D12；放射形土壤杆菌、尤其是菌株放射形土壤杆菌MX-232；土生结克雷伯菌、尤其是菌株土生结克雷伯菌JCM 1687；克雷伯菌属、尤其是菌株克雷伯菌属FERM BP-2838、LX3和NK33-98-8；肺炎克雷伯菌、尤其是菌株肺炎克雷伯菌342；新加坡克雷伯菌、尤其是菌株新加坡克雷伯菌LX21；嗜中酸假单胞菌、尤其是菌株嗜中酸假单胞菌MX-45；分散泛菌、尤其是菌株分散泛菌UQ68J；植物生克雷伯菌、尤其是菌株植物生克雷伯菌CCRC 19112、MX10和UQ14S；肠杆菌属、尤其是菌株肠杆菌属FMB-1、SZ62和Ejp617；维涅兰德固氮菌DJ，其中红色精蛋白杆菌CBS 574.77和红色精朊杆菌Z12是特别优选的。
酶复合物的固定化例如可以以CLEAs (insoluble crosslinked enzyme aggregates (不可溶交联酶聚集体))的形式进行(Cao, L. 等人, 2000, Cross-linked enzyme aggregates: a simple and effective method for the immobilization of penicillin acylase, Org. Lett., 2: 1361-1264)，或者在天然或合成起源的固体载体材料上进行。天然材料例如是多糖诸如藻酸盐、琼脂糖（Agarose）、琼脂糖凝胶（Sepharose）、纤维素及其衍生物(例如DEAE-或CM-纤维素)。也可以使用改性的琼脂糖凝胶，例如被环氧基-活化的、溴氰根-活化的、NHS-活化的、硫醇-活化的琼脂糖凝胶。这些琼脂糖例如是在公司GE Healthcare、BioRad、Sigma和Pierce商购可得的。
作为合成有机聚合物可以使用聚苯乙烯-衍生物、聚丙烯酸酯、尤其是环氧化物活化的丙烯酸树脂珠(Eupergit)、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、乙烯基-和烯丙基聚合物、聚酯或聚酰胺。
作为无机载体可以是基于硅氧化物或铝氧化物或其混合物的材料。
酶复合物的固定化还可以通过包封在聚合的多孔凝胶中进行，例如RSi(OCH3)3或者RSi(OCH3)3与Si(OCH3)4 的混合物的疏水性溶胶-凝胶材料(Reetz, M.T.; Zonta, A.; Simpelkamp, J.; Rufinska, A.; Tesche, B. J. Sol-Gel Sci. Technol. 1996, 7, 第35-43页)或多孔的聚合硅胶-凝胶(Elgren, T.M.; Zadvorny, O.A.; Brecht, E.; Douglas, T.; Zorin, N.A.; Maroney, M. J. & Peters, J. W.)。
此外，除了固定化以外，在酶膜反应器中的酶的多次使用是可能的。
在根据本发明的方法中使用的酶复合物，尤其是细胞，优选地被固定在多糖诸如藻酸盐、果胶、角叉菜胶、壳聚糖或聚乙烯醇例如Lentikats或其混合物中，尤其是藻酸盐中；在这点上，参见例如Shimizu, H., 等人(1997) Screening of novel microbial enzymes for the production of biologically and chemically useful compounds，见：Advances in biochemical engineering biotechnology, 第58卷: New Enzymes for Organic Synthesis (Scheper, T., 编) 第45-88页, Springer, New York。
一种对于在根据本发明的方法中使用的酶复合物的任意形式而言特别优选的固定化是，在EP2011865中描述的方法，其中给固定在惰性载体上的酶复合物提供通过氢化硅烷化得到的有机硅涂层。
根据本发明优选的是，在方法步骤B)中，具有4-9.5的pH-值。该pH-值有利地借助于酸、尤其是无机酸来调节，所述酸优选选自硫酸、盐酸或乙酸。
此外，根据本发明优选的是，在方法步骤B)中，具有20-40℃、优选25-35℃的温度，该温度在含有蔗糖的溶液中测得。
在方法步骤C)中，将酶复合物与异麦芽酮糖分离；这例如通过过滤、沉降或离心来进行。因为酶复合物的被固定物特性，该分离相对于未固定的酶变得容易。
由于工艺经济的原因，根据本发明，如果以固体床的形式使用经固定化的酶复合物，是优选的，含有蔗糖的溶液从所述固体床中流过(H. Schiweck, Zuckerind. (1990), 115 (7), 555-565)。相应的以固体床的方法描述于A. Liese, 等人. Processes 在A. Liese, K. Seelbach, C. Wandrey (编), Industrial Biotransformations第2版(2006), Wiley-VCH, Weinheim中。在这样的方法中，方法步骤A)至C) 连续进行，并且从而彼此逐渐变成直至同时进行。
可以在任选的方法步骤D)中进一步纯化异麦芽酮糖。这尤其可通过结晶或色谱法进行。相应的方法描述于DE3241788和EP0983374中。
下面列出的实施例示例性描述了本发明，而非意在将其范围由整个说明书和权利要求书给出的本发明限制在实施例中所提及的实施方案中。
实施例：
实施例1：生物催化剂的制备
用1-5 ml无菌营养培养基将细胞从菌株红色精蛋白杆菌(CBS574.77)的传代培养物上洗下，所述营养培养基由50 g/kg的蔗糖、15 g/kg的玉米泡胀水、7 g/kg的硫酸铵、0.5 g/kg的酵母浸出物、1 g/kg的硫酸二氢钾、0.41 g/kg的氯化镁七水合物、0.004 g/kg的氯化锰四水合物、0.047 g/kg的柠檬酸铁一水合物和926 g/kg的水组成，需要时将其调节至pH 7.2。该混悬液充当预培养物的接种物，在1 l摇瓶中所述预培养物包含200 ml上述营养物溶液。
在30℃培养20小时以后，以使初始光密度(OD600)为1的方式，用所述预培养物给2- L发酵罐接种，所述发酵罐装有1升无菌生产培养基，所述生产培养基由50 g/kg的蔗糖、15 g/kg的玉米泡胀水、3 g/kg的硫酸铵、4 g/kg的磷酸氢铵、0.5 g/kg的酵母浸出物、1 g/kg的硫酸二氢钾、0.41 g/kg的氯化镁七水合物、0.004 g/kg的氯化锰四水合物、0.047 g/kg的柠檬酸铁一水合物和926 g/kg的水组成，其被调节至pH 7.2。
在30℃、pH 7 (经调节)和30%的pO2 (级联搅拌器，Airflow)下进行发酵。在发酵过程中，补料蔗糖。15-20 h以后，发酵过程结束，可以收获生物质用于固定化。
为此，将得到的混悬液与水和4%浓度的藻酸盐溶液以体积比1:1进行混合。然后将该混悬液通过滴入到2%浓度的CaCl2-溶液中来固定化。用聚乙烯亚胺和戊二醛后固化所得到的珠子。得到的生物催化剂可以在4-10℃保存数周。
实施例2：通过使纯蔗糖溶液异构化来制备异麦芽酮糖(非根据本发明的)
如在Sugar in Ullman’s Encyclopedia of Industrial Chemisty (2007)中所述，从得自糖用甜菜的浓汁制备纯蔗糖；蔗糖收率为88.3%。
将在实施例1中得到的经固定化的细胞填充到可加热的柱反应器中，并将温度调节至20-35℃。由所述纯蔗糖和自来水制备具有35-45%的干物质(TS)-含量的蔗糖溶液。使该溶液连续通流穿过所述柱反应器。
流出柱反应器的异麦芽酮糖溶液的HPLC-分析表明了在该方法步骤中的收率、选择性和转化率的平均值：
收率：85%
选择性：91%
转化率：94%
基于使用的蔗糖计，该方法的收率为75%。
实施例3：通过使浓汁异构化来制备异麦芽酮糖(根据本发明的)
将在实施例1中得到的经固定化的细胞填充到可加热的柱反应器中，并将温度调节至20-35℃，并使上述经稀释的得自糖用甜菜的具有35-45%的干物质(TS)-含量的浓汁连续通流穿过。
流出柱反应器的异麦芽酮糖溶液的HPLC-分析表明了收率、选择性和转化率的平均值：
收率 ：82%
选择性：91%
转化率：90%
基于使用的蔗糖计，该方法的收率为82%，因而比根据现有技术的方法的收率高了7%。
实施例4：浓汁的异构化与经纯化的蔗糖溶液的异构化的选择性对比
在调温至30℃的柱反应器中装入根据实施例1得到的固定化的细胞。
使经纯化的蔗糖溶液连续通流穿过柱反应器1，所述经纯化的蔗糖溶液的浓度用自来水调节至40% 干物质-含量，并用浓硫酸调节至pH-值为6。
使得自糖用甜菜的浓汁连续通流穿过柱反应器2，所述浓汁被稀释至40% 的蔗糖干物质-含量，并用浓硫酸调节至pH-值为6。
为了能够更好地测定选择性，通过调节体积流，将2个柱反应器中的异麦芽酮糖收率调节为79%的相同值，基于各自的蔗糖干物质-含量计。通过得到的异麦芽酮糖溶液的HPLC-分析，进行分析确定。
实现的选择性如下：
选择性(浓汁)：85%
选择性(蔗糖溶液)：83%
另外，与使用经纯化的蔗糖溶液相比，通过使用浓汁使终产物中不希望的，致龋的单糖类果糖和葡萄糖的形成减少了大约10% (基于干物质计)。
序列表
 
<110>  Evonik Degussa GmbH
 
<120>  从植物汁制备异麦芽酮糖的方法
 
<130>  201100086
 
<160>  16   
 
<170>  PatentIn 3.4版
 
<210>  1
<211>  600
<212>  PRT
<213>  大黄欧文氏菌
 
<400>  1
 
Met Ser Ser Gln Gly Leu Lys Thr Ala Val Ala Ile Phe Leu Ala Thr
1               5                   10                  15     
 
 
Thr Phe Ser Ala Thr Ser Tyr Gln Ala Cys Ser Ala Gly Pro Asp Thr
            20                  25                  30         
 
 
Ala Pro Ser Leu Thr Val Gln Gln Ser Asn Ala Leu Pro Thr Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Gln Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Leu Asn Gly Ile Ile Glu Asn Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Lys Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg Asp Tyr Arg Lys
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Arg Leu Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Ile Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Ala Trp Phe Val Gln Ser Lys Ser Gly Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Gly
                165                 170                 175    
 
 
His Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Glu
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Asp Lys Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Lys Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Gln Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Asp Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Leu Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Asn Phe Pro Asp Leu Ser
                245                 250                 255    
 
 
Gln Gln Gln Leu Lys Asn Phe Ala Glu Glu Tyr Thr Lys Gly Pro Lys
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Asp Tyr Val Asn Glu Met Asn Arg Glu Val Leu Ser His Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Ile Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Lys Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ile Lys Phe Phe Asp Arg Arg Arg Asn Glu Leu Asn Ile Ala Phe Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ala Asp Glu Arg Trp Arg Arg
                325                 330                 335    
 
 
Lys Asp Trp Thr Leu Ser Gln Phe Arg Lys Ile Val Asp Lys Val Asp
            340                 345                 350        
 
 
Gln Thr Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Ala Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                 
 
 
Arg Glu His Ala Ala Lys Ala Leu Ala Thr Leu Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Lys Lys Ile Asp Asp Phe Asp Asp Val Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Glu Thr Gly Lys Val Lys Ala Glu Glu Phe Leu
        435                 440                 445            
 
 
Gln Asn Val Arg Gln Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asp Ala Ser Lys Asn Ala Gly Phe Thr Ser Gly Thr Pro Trp Leu
465                 470                 475                 480
 
 
Lys Ile Asn Pro Asn Tyr Lys Glu Ile Asn Ser Ala Asp Gln Ile Asn
                485                 490                 495    
 
 
Asn Pro Asn Ser Val Phe Asn Tyr Tyr Arg Lys Leu Ile Asn Ile Arg
            500                 505                 510        
 
 
His Asp Ile Pro Ala Leu Thr Tyr Gly Ser Tyr Ile Asp Leu Asp Pro
        515                 520                 525            
 
 
Asp Asn Asn Ser Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Gly Ala Glu Lys
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Ile Asn Phe Lys Glu Glu Val Met His Tyr Thr Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Gly Asp Leu Ser Ile Asn Lys Val Ile Thr Glu Asn Asn Ser His
                565                 570                 575    
 
 
Thr Ile Val Asn Lys Asn Asp Arg Gln Leu Arg Leu Glu Pro Trp Gln
            580                 585                 590        
 
 
Ser Gly Ile Tyr Lys Leu Asn Pro
        595                 600
 
 
<210>  2
<211>  584
<212>  PRT
<213>  嗜中酸假单胞菌
 
<400>  2
 
Met Leu Met Lys Arg Leu Phe Ala Ala Ser Leu Met Leu Ala Phe Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Val Ser Ser Val Arg Ala Glu Glu Ala Val Lys Pro Gly Ala Pro
            20                  25                  30         
 
 
Trp Trp Lys Ser Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser Phe Lys
        35                  40                  45             
 
 
Asp Thr Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Phe Lys Gly Leu Thr Glu Lys
    50                  55                  60                 
 
 
Leu Asp Tyr Leu Lys Gly Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro
65                  70                  75                  80 
 
 
His Tyr Ala Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Ser Asp Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Arg Glu Val Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Arg Leu
            100                 105                 110        
 
 
Met Ala Glu Leu Lys Lys Arg Gly Met Arg Leu Met Val Asp Val Val
        115                 120                 125            
 
 
Ile Asn His Ser Ser Asp Gln His Glu Trp Phe Lys Ser Ser Arg Ala
    130                 135                 140                
 
 
Ser Lys Asp Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asp Gly His Glu Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala
                165                 170                 175    
 
 
Trp Glu Lys Asp Pro Val Thr Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Gly
            180                 185                 190        
 
 
Arg Gln Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Thr Pro Lys Leu Arg Glu Glu
        195                 200                 205            
 
 
Leu Tyr Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Met
    210                 215                 220                
 
 
Arg Phe Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Thr Pro Gly Phe Pro Asp
225                 230                 235                 240
 
 
Leu Thr Pro Glu Gln Met Lys Asn Phe Ala Glu Ala Tyr Thr Gln Gly
                245                 250                 255    
 
 
Pro Asn Leu His Arg Tyr Leu Gln Glu Met His Glu Lys Val Phe Asp
            260                 265                 270        
 
 
His Tyr Asp Ala Val Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Ala Pro Leu Asn
        275                 280                 285            
 
 
Gln Val Pro Leu Phe Ile Asp Ser Arg Arg Lys Glu Leu Asp Met Ala
    290                 295                 300                
 
 
Phe Thr Phe Asp Leu Ile Arg Tyr Asp Arg Ala Leu Asp Arg Trp His
305                 310                 315                 320
 
 
Thr Ile Pro Arg Thr Leu Ala Asp Phe Arg Gln Thr Ile Asp Lys Val
                325                 330                 335    
 
 
Asp Ala Ile Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Thr Phe Phe Leu Gly Asn
            340                 345                 350        
 
 
His Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln
        355                 360                 365            
 
 
Trp Arg Glu Ala Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Val Thr Leu Thr Gln
    370                 375                 380                
 
 
Arg Gly Thr Pro Phe Ile Phe Gln Gly Asp Glu Leu Gly Met Thr Asn
385                 390                 395                 400
 
 
Tyr Pro Phe Lys Thr Leu Gln Asp Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly
                405                 410                 415    
 
 
Phe Phe Gln Asp Tyr Val Glu Thr Gly Lys Ala Thr Ala Glu Glu Leu
            420                 425                 430        
 
 
Leu Thr Asn Val Ala Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ala Arg Thr Pro Phe
        435                 440                 445            
 
 
Gln Trp Asp Asp Ser Ala Asn Ala Gly Phe Thr Thr Gly Lys Pro Trp
    450                 455                 460                 
 
 
Leu Lys Val Asn Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Asn Ala Ala Arg Glu Ile
465                 470                 475                 480
 
 
Gly Asp Pro Lys Ser Val Tyr Ser Phe Tyr Arg Asn Leu Ile Ser Ile
                485                 490                 495    
 
 
Arg His Glu Thr Pro Ala Leu Ser Thr Gly Ser Tyr Arg Asp Ile Asp
            500                 505                 510        
 
 
Pro Ser Asn Ala Asp Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Ser Gln Asp Gly Glu
        515                 520                 525            
 
 
Thr Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Lys Ala Glu Pro Arg Ser Phe Thr
    530                 535                 540                
 
 
Leu Pro Asp Gly Met His Ile Ala Glu Thr Leu Ile Glu Ser Ser Ser
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Ala Ala Pro Ala Ala Gly Ala Ala Ser Leu Glu Leu Gln Pro Trp
                565                 570                 575    
 
 
Gln Ser Gly Ile Tyr Lys Val Lys
            580                
 
 
<210>  3
<211>  598
<212>  PRT
<213>  分散泛菌
 
<400>  3
 
Met Phe Leu Asn Gly Phe Lys Thr Val Ile Ala Leu Thr Met Ala Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Phe Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Leu Thr Lys Pro Ser Thr Pro Ile
            20                  25                  30         
 
 
Ala Ala Thr Asn Ile Gln Lys Ser Ala Asp Phe Pro Ile Trp Trp Lys
        35                  40                  45             
 
 
Gln Ala Val Phe Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Ser Asn
    50                  55                  60                 
 
 
Gly Asp Gly Ile Gly Asp Ile Pro Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp Tyr
65                  70                  75                  80 
 
 
Leu Lys Met Leu Gly Val Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr Glu
                85                  90                  95     
 
 
Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Ser Asp Tyr Arg Lys Ile
            100                 105                 110        
 
 
Met Lys Glu Tyr Gly Ser Met Ala Asp Phe Asp Arg Leu Val Ala Glu
        115                 120                 125            
 
 
Met Asn Lys Arg Gly Met Arg Leu Met Ile Asp Ile Val Ile Asn His
    130                 135                 140                
 
 
Thr Ser Asp Arg His Arg Trp Phe Val Gln Ser Arg Ser Gly Lys Asp
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Gln Gly Gln
                165                 170                 175    
 
 
Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln Leu
            180                 185                 190        
 
 
Asp Lys Gln Thr Asp Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Pro Gln Gln
        195                 200                 205            
 
 
Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Ala Glu Leu Tyr Asp
    210                 215                 220                
 
 
Ile Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Leu Arg Phe Asp
225                 230                 235                 240
 
 
Thr Val Ala Thr Phe Ser Lys Ile Pro Gly Phe Pro Asp Leu Ser Lys
                245                 250                 255    
 
 
Ala Gln Leu Lys Asn Phe Ala Glu Ala Tyr Thr Glu Gly Pro Asn Ile
            260                 265                 270        
 
 
His Lys Tyr Ile His Glu Met Asn Arg Gln Val Leu Ser Lys Tyr Asn
        275                 280                 285            
 
 
Val Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Val Ser Ala Met Pro
    290                 295                 300                
 
 
Asp Tyr Phe Asp Arg Arg Arg Glu Glu Leu Asn Ile Ala Phe Thr Phe
305                 310                 315                 320
 
 
Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Tyr Pro Asp Gln Arg Trp Arg Arg Lys
                325                 330                 335    
 
 
Pro Trp Thr Leu Ser Gln Phe Arg Gln Val Ile Ser Gln Thr Asp Arg
            340                 345                 350        
 
 
Ala Ala Gly Glu Phe Gly Trp Asn Ala Phe Phe Leu Asp Asn His Asp
        355                 360                 365            
 
 
Asn Pro Arg Gln Val Ser His Phe Gly Asp Asp Ser Pro Gln Trp Arg
    370                 375                 380                
 
 
Glu Arg Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Leu Leu Leu Thr Gln Arg Ala
385                 390                 395                 400
 
 
Thr Pro Phe Ile Phe Gln Gly Ala Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr Pro
                405                 410                 415    
 
 
Phe Lys Asn Ile Glu Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe Trp
            420                 425                 430         
 
 
Asn Asp Tyr Val Ala Ser Gly Lys Val Asn Ala Ala Glu Phe Leu Gln
        435                 440                 445            
 
 
Glu Val Arg Met Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Met Gln Trp
    450                 455                 460                 
 
 
Asn Asp Ser Val Asn Ala Gly Phe Thr Gln Gly Lys Pro Trp Phe His
465                 470                 475                 480
 
 
Leu Asn Pro Asn Tyr Lys Gln Ile Asn Ala Ala Arg Glu Val Asn Lys
                485                 490                 495    
 
 
Pro Asp Ser Val Phe Ser Tyr Tyr Arg Gln Leu Ile Asn Leu Arg His
            500                 505                 510        
 
 
Gln Ile Pro Ala Leu Thr Ser Gly Glu Tyr Arg Asp Leu Asp Pro Gln
        515                 520                 525            
 
 
Asn Asn Gln Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Ile Leu Asp Asn Glu Lys Tyr
    530                 535                 540                
 
 
Leu Val Val Val Asn Phe Lys Pro Glu Gln Leu His Tyr Ala Leu Pro
545                 550                 555                 560
 
 
Asp Asn Leu Thr Ile Ala Ser Ser Leu Leu Glu Asn Val His Gln Pro
                565                 570                 575    
 
 
Ser Leu Gln Glu Asn Ala Ser Thr Leu Thr Leu Ala Pro Trp Gln Ala
            580                 585                 590        
 
 
Gly Ile Tyr Lys Leu Asn
        595            
 
 
<210>  4
<211>  598
<212>  PRT
<213>  肺炎克雷伯菌
 
<400>  4
 
Met Ser Phe Ile Thr Leu Arg Thr Gly Val Ala Val Ala Leu Ser Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Leu Met Ile Ser Leu Ala Ser Pro Ala Val Ser Ala Ala Pro Ser Val
            20                  25                  30         
 
 
Asn Gln Asp Ile Leu Val Gln Lys Glu Ser Glu Tyr Pro Ala Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Asp Asp Gly Ile Gly Asp Ile Arg Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Ser Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Ser Asn Tyr Arg Gln
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Asn Leu Val Ala
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Val Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Pro Trp Phe Ile Gln Ser Lys Ser Asp Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Asn
                165                 170                 175    
 
 
Gln Pro Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Ala Lys Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Arg Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Glu Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Met Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Gly Phe Pro Asn Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Glu Gln Gln Lys Asn Phe Ala Glu Gln Tyr Thr Met Gly Pro Asn
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Ile Gln Glu Met Asn Arg Glu Val Leu Ser Arg Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Val Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Arg Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ser Gln Phe Phe Asp Arg Arg Arg His Glu Leu Asn Met Ala Phe Met
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser Asn Glu Arg Trp Arg His
                325                 330                 335    
 
 
Lys Ser Trp Ser Leu Ser Gln Phe Arg Gln Ile Ile Ser Lys Met Asp
            340                 345                 350        
 
 
Val Thr Val Gly Lys Tyr Gly Trp Asn Thr Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu Ala Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Ile Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Ile Asn Tyr
                405                 410                 415     
 
 
Pro Phe Arg Gln Leu Asn Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Gln Ser Gly Lys Val Thr Ala Thr Glu Phe Leu
        435                 440                 445             
 
 
Asp Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asn Asp Thr Leu Asn Ala Gly Phe Thr Arg Gly Lys Pro Trp Phe
465                 470                 475                 480
 
 
His Ile Asn Pro Asn Tyr Val Glu Ile Asn Ala Glu Arg Glu Glu Thr
                485                 490                 495    
 
 
Arg Glu Asp Ser Val Leu Asn Tyr Tyr Lys Lys Met Ile Gln Leu Arg
            500                 505                 510        
 
 
His His Ile Pro Ala Leu Val Tyr Gly Ala Tyr Gln Asp Leu Asn Pro
        515                 520                 525            
 
 
Gln Asp Asn Thr Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Gly Asn Glu Arg
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Lys Glu Tyr Pro Val Arg Tyr Thr Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Ala Asn Asp Ala Ile Glu Glu Val Val Ile Asp Thr Gln Gln Gln
                565                 570                 575    
 
 
Ala Thr Ala Pro His Ser Thr Ser Leu Ser Leu Ser Pro Trp Gln Ala
            580                 585                 590        
 
 
Gly Val Tyr Lys Leu Arg
        595            
 
 
<210>  5
<211>  558
<212>  PRT
<213>  红色精蛋白杆菌
 
<400>  5
 
Thr Ile Pro Lys Trp Trp Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro
1               5                   10                  15     
 
 
Arg Ser Phe Lys Asp Thr Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Ile Asn Gly
            20                  25                  30         
 
 
Ile Ile Glu Lys Leu Asp Tyr Leu Lys Ala Leu Gly Ile Asp Ala Ile
        35                  40                  45             
 
 
Trp Ile Asn Pro His Tyr Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp
    50                  55                  60                 
 
 
Ile Arg Asp Tyr Arg Lys Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Phe Asp Arg Leu Ile Ser Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met
                85                  90                  95     
 
 
Ile Asp Val Val Ile Asn His Thr Ser Asp Gln Asn Glu Trp Phe Val
            100                 105                 110        
 
 
Lys Ser Lys Ser Ser Lys Asp Asn Pro Tyr Arg Gly Tyr Tyr Phe Trp
        115                 120                 125            
 
 
Lys Asp Ala Lys Glu Gly Gln Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe
    130                 135                 140                
 
 
Gly Gly Ser Ala Trp Gln Lys Asp Glu Lys Thr Asn Gln Tyr Tyr Leu
145                 150                 155                 160
 
 
His Tyr Phe Ala Lys Gln Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys
                165                 170                 175    
 
 
Val Arg Gln Asp Leu Tyr Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly
            180                 185                 190        
 
 
Val Ser Gly Leu Arg Phe Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro
        195                 200                 205            
 
 
Asp Phe Pro Asn Leu Thr Gln Gln Gln Leu Lys Asn Phe Ala Ala Glu
    210                 215                 220                
 
 
Tyr Thr Lys Gly Pro Asn Ile His Arg Tyr Val Asn Glu Met Asn Lys
225                 230                 235                 240
 
 
Glu Val Leu Ser His Tyr Asp Ile Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly
                245                 250                 255    
 
 
Val Pro Leu Asp Gln Ser Ile Lys Phe Phe Asp Arg Arg Arg Asp Glu
            260                 265                 270        
 
 
Leu Asn Ile Ala Phe Thr Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser
        275                 280                 285            
 
 
Asp Gln Arg Trp Arg Arg Lys Asp Trp Lys Leu Ser Gln Phe Arg Gln
    290                 295                 300                
 
 
Ile Ile Asp Asn Val Asp Arg Thr Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Ala
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Phe Leu Asp Asn His Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly
                325                 330                 335    
 
 
Asp Asp Arg Pro Gln Trp Arg Glu Pro Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr
            340                 345                 350        
 
 
Leu Thr Leu Thr Gln Arg Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu
        355                 360                 365            
 
 
Leu Gly Met Thr Asn Tyr Pro Phe Lys Ala Ile Asp Glu Phe Asp Asp
    370                 375                 380                
 
 
Ile Glu Val Lys Gly Phe Trp His Asp Tyr Val Glu Thr Gly Lys Val
385                 390                 395                 400
 
 
Lys Ala Asp Glu Phe Leu Gln Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn
                405                 410                 415    
 
 
Ser Arg Thr Pro Phe Gln Trp Asp Gly Ser Lys Asn Ala Gly Phe Thr
            420                 425                 430        
 
 
Ser Gly Lys Pro Trp Phe Lys Val Asn Pro Asn Tyr Gln Glu Ile Asn
        435                 440                 445            
 
 
Ala Val Ser Gln Val Thr Gln Pro Asp Ser Val Phe Asn Tyr Tyr Arg
    450                 455                 460                 
 
 
Gln Leu Ile Lys Ile Arg His Asp Ile Pro Ala Leu Thr Tyr Gly Thr
465                 470                 475                 480
 
 
Tyr Thr Asp Leu Asp Pro Ala Asn Asp Ser Val Tyr Ala Tyr Thr Arg
                485                 490                 495    
 
 
Ser Leu Gly Ala Glu Lys Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Lys Glu Gln
            500                 505                 510        
 
 
Met Met Arg Tyr Lys Leu Pro Asp Asn Leu Ser Ile Glu Lys Val Ile
        515                 520                 525            
 
 
Ile Asp Ser Asn Ser Lys Asn Val Val Lys Lys Asn Asp Ser Leu Leu
    530                 535                 540                
 
 
Glu Leu Lys Pro Trp Gln Ser Gly Val Tyr Lys Leu Asn Gln
545                 550                 555             
 
 
<210>  6
<211>  629
<212>  PRT
<213>  红色精蛋白杆菌
 
<400>  6
 
Met Pro Arg Gln Gly Leu Lys Thr Ala Leu Ala Ile Phe Leu Thr Thr
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Leu Cys Ile Ser Cys Gln Gln Ala Phe Gly Thr Gln Gln Pro Leu
            20                  25                  30         
 
 
Leu Asn Glu Lys Ser Ile Glu Gln Ser Lys Thr Ile Pro Lys Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Ile Asn Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Ala Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg Asp Tyr Arg Lys
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Arg Leu Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Val Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln Asn Glu Trp Phe Val Lys Ser Lys Ser Ser Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asp Asn Pro Tyr Arg Gly Tyr Tyr Phe Trp Lys Asp Ala Lys Glu Gly
                165                 170                 175    
 
 
Gln Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Glu Lys Thr Asn Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Lys Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Gln Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Leu Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Asp Phe Pro Asn Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Gln Gln Gln Leu Lys Asn Phe Ala Ala Glu Tyr Thr Lys Gly Pro Asn
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Val Asn Glu Met Asn Lys Glu Val Leu Ser His Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Ile Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Gln Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ile Lys Phe Phe Asp Arg Arg Arg Asp Glu Leu Asn Ile Ala Phe Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser Asp Gln Arg Trp Arg Arg
                325                 330                 335    
 
 
Lys Asp Trp Lys Leu Ser Gln Phe Arg Gln Ile Ile Asp Asn Val Asp
            340                 345                 350        
 
 
Arg Thr Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Ala Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Asp Arg Pro Gln
    370                 375                 380                
 
 
Trp Arg Glu Pro Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Leu Thr Leu Thr Gln
385                 390                 395                 400
 
 
Arg Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn
                405                 410                 415    
 
 
Tyr Pro Phe Lys Ala Ile Asp Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly
            420                 425                 430        
 
 
Phe Trp His Asp Tyr Val Glu Thr Gly Lys Val Lys Ala Asp Glu Phe
        435                 440                 445            
 
 
Leu Gln Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe
    450                 455                 460                 
 
 
Gln Trp Asp Gly Ser Lys Asn Ala Gly Phe Thr Ser Gly Lys Pro Trp
465                 470                 475                 480
 
 
Phe Lys Val Asn Pro Asn Tyr Gln Glu Ile Asn Ala Val Ser Gln Val
                485                 490                 495    
 
 
Thr Gln Pro Asp Ser Val Phe Asn Tyr Tyr Arg Gln Leu Ile Lys Ile
            500                 505                 510        
 
 
Arg His Asp Ile Pro Ala Leu Thr Tyr Gly Thr Tyr Thr Asp Leu Asp
        515                 520                 525            
 
 
Pro Ala Asn Asp Ser Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Ser Leu Gly Ala Glu
    530                 535                 540                
 
 
Lys Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Lys Glu Gln Met Met Arg Tyr Lys
545                 550                 555                 560
 
 
Leu Pro Asp Asn Leu Ser Ile Glu Lys Val Ile Ile Asp Ser Asn Ser
                565                 570                 575    
 
 
Lys Asn Val Val Lys Lys Asn Asp Ser Leu Leu Glu Leu Lys Pro Trp
            580                 585                 590        
 
 
Gln Ser Gly Val Tyr Lys Thr Lys Ser Ile Asn Leu Ile Val Thr Pro
        595                 600                 605            
 
 
Asn Asn Val Asn Ile Leu Lys Leu Leu Lys Pro Ala Phe Tyr Ala Gly
    610                 615                 620                
 
 
Phe Phe Ser Ala Lys
625                
 
 
<210>  7
<211>  600
<212>  PRT
<213>  气味沙雷氏菌
 
<400>  7
 
Met Pro Arg Gln Gly Leu Lys Thr Ala Leu Ala Ile Phe Leu Thr Thr
1               5                   10                  15     
 
 
Ser Leu Ser Val Ser Cys Gln Gln Ala Leu Gly Thr Gln Gln Pro Leu
            20                  25                  30         
 
 
Leu Asn Glu Lys Ser Ile Glu Gln Ser Lys Thr Ile Pro Lys Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Ile Lys Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Ala Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg Asp Tyr Arg Lys
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Arg Leu Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Val Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln Asn Glu Trp Phe Val Lys Ser Lys Ser Ser Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asp Asn Pro Tyr Arg Gly Tyr Tyr Phe Trp Lys Asp Ala Lys Glu Gly
                165                 170                 175    
 
 
Gln Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Glu Lys Thr Asn Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Lys Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Gln Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Leu Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Asp Phe Pro Asn Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Gln Gln Gln Leu Lys Asn Phe Ala Ala Glu Tyr Thr Lys Gly Pro Asn
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Val Asn Glu Met Asn Arg Glu Val Leu Ser His Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Ile Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Gln Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ile Lys Phe Phe Asp Arg Arg Arg Asp Glu Leu Asn Ile Ala Phe Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser Asp Gln Arg Trp Arg Arg
                325                 330                 335    
 
 
Lys Glu Trp Lys Leu Ser Gln Phe Arg Gln Val Ile Asp Asn Val Asp
            340                 345                 350        
 
 
Arg Thr Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Ala Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu Pro Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Leu Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Lys Ala Ile Asp Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp His Asp Tyr Val Glu Thr Gly Lys Val Lys Ala Asp Glu Phe Leu
        435                 440                 445            
 
 
Gln Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                 
 
 
Trp Asp Thr Ser Lys Asn Ala Gly Phe Thr Ser Gly Lys Pro Trp Phe
465                 470                 475                 480
 
 
Lys Val Asn Pro Asn Tyr Gln Glu Ile Asn Ala Val Ser Gln Val Ala
                485                 490                 495    
 
 
Gln Pro Asp Ser Val Phe Asn Tyr Tyr Arg Gln Leu Ile Lys Ile Arg
            500                 505                 510        
 
 
His Asn Ile Pro Ala Leu Thr Tyr Gly Thr Tyr Thr Asp Leu Asp Pro
        515                 520                 525            
 
 
Ala Asn Asp Ser Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Ser Leu Gly Ala Glu Lys
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Gln Glu Gln Val Met Arg Tyr Lys Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Asp Asn Leu Ser Ile Glu Lys Val Ile Ile Glu Ser Asn Ser Lys
                565                 570                 575    
 
 
Asn Val Val Lys Lys Asn Asp Ala Leu Leu Glu Leu Lys Pro Trp Gln
            580                 585                 590        
 
 
Ser Gly Val Tyr Lys Leu Asn Gln
        595                 600
 
 
<210>  8
<211>  600
<212>  PRT
<213>  大黄欧文氏菌
 
<400>  8
 
Met Ser Ser Gln Gly Leu Lys Thr Ala Val Ala Ile Phe Leu Ala Thr
1               5                   10                  15     
 
 
Thr Phe Ser Ala Thr Ser Tyr Gln Ala Cys Ser Ala Gly Pro Asp Thr
            20                  25                  30         
 
 
Ala Pro Ser Leu Thr Val Gln Gln Ser Asn Ala Leu Pro Thr Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Gln Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Leu Asn Gly Ile Ile Glu Asn Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Lys Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg Asp Tyr Arg Lys
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Arg Leu Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Ile Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Ala Trp Phe Val Gln Ser Lys Ser Gly Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Gly
                165                 170                 175    
 
 
His Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Glu
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Asp Lys Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Lys Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Gln Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Asp Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Leu Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Asn Phe Pro Asp Leu Ser
                245                 250                 255    
 
 
Gln Gln Gln Leu Lys Asn Phe Ala Glu Glu Tyr Thr Lys Gly Pro Lys
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Asp Tyr Val Asn Glu Met Asn Arg Glu Val Leu Ser His Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Ile Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Lys Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ile Lys Phe Phe Asp Arg Arg Arg Asn Glu Leu Asn Ile Ala Phe Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ala Asp Glu Arg Trp Arg Arg
                325                 330                 335    
 
 
Lys Asp Trp Thr Leu Ser Gln Phe Arg Lys Ile Val Asp Lys Val Asp
            340                 345                 350        
 
 
Gln Thr Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Ala Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu His Ala Ala Lys Ala Leu Ala Thr Leu Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Lys Lys Ile Asp Asp Phe Asp Asp Val Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Glu Thr Gly Lys Val Lys Ala Glu Glu Phe Leu
        435                 440                 445            
 
 
Gln Asn Val Arg Gln Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asp Ala Ser Lys Asn Ala Gly Phe Thr Ser Gly Thr Pro Trp Leu
465                 470                 475                 480
 
 
Lys Ile Asn Pro Asn Tyr Lys Glu Ile Asn Ser Ala Asp Gln Ile Asn
                485                 490                 495    
 
 
Asn Pro Asn Ser Val Phe Asn Tyr Tyr Arg Lys Leu Ile Asn Ile Arg
            500                 505                 510        
 
 
His Asp Ile Pro Ala Leu Thr Tyr Gly Ser Tyr Ile Asp Leu Asp Pro
        515                 520                 525            
 
 
Asp Asn Asn Ser Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Gly Ala Glu Lys
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Ile Asn Phe Lys Glu Glu Val Met His Tyr Thr Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Gly Asp Leu Ser Ile Asn Lys Val Ile Thr Glu Asn Asn Ser His
                565                 570                 575    
 
 
Thr Ile Val Asn Lys Asn Asp Arg Gln Leu Arg Leu Glu Pro Trp Gln
            580                 585                 590        
 
 
Ser Gly Ile Tyr Lys Leu Asn Pro
        595                 600
 
 
<210>  9
<211>  550
<212>  PRT
<213>  大黄欧文氏菌
 
<400>  9
 
Met Arg Ser Thr Pro His Trp Lys Glu Ala Val Val Tyr Gln Val Tyr
1               5                   10                  15     
 
 
Pro Arg Ser Phe Met Asp Ser Asn Gly Asp Gly Thr Gly Asp Leu Asn
            20                  25                  30         
 
 
Gly Ile Ile Ser Lys Leu Asp Tyr Leu Gln Gln Leu Gly Ile Thr Leu
        35                  40                  45             
 
 
Leu Trp Leu Ser Pro Val Tyr Arg Ser Pro Met Asp Asp Asn Gly Tyr
    50                  55                  60                 
 
 
Asp Ile Ser Asp Tyr Glu Glu Ile Ala Asp Ile Phe Gly Ser Met Ser
65                  70                  75                  80 
 
 
Asp Met Glu Arg Leu Ile Ala Glu Ala Lys Ala Arg Asp Ile Gly Ile
                85                  90                  95     
 
 
Leu Met Asp Leu Val Val Asn His Thr Ser Asp Glu His Pro Trp Phe
            100                 105                 110        
 
 
Ile Asp Ala Leu Ser Ser Lys Asn Ser Ala Tyr Arg Asp Phe Tyr Ile
        115                 120                 125            
 
 
Trp Arg Ala Pro Ala Ala Asp Gly Gly Pro Pro Asp Asp Ser Arg Ser
    130                 135                 140                
 
 
Asn Phe Gly Gly Ser Ala Trp Thr Leu Asp Glu Ala Ser Gly Glu Tyr
145                 150                 155                 160
 
 
Tyr Leu His Gln Phe Ser Thr Arg Gln Pro Asp Leu Asn Trp Glu Asn
                165                 170                 175    
 
 
Pro Arg Val Arg Glu Ala Ile His Ala Met Met Asn Arg Trp Leu Asp
            180                 185                 190        
 
 
Lys Gly Ile Gly Gly Phe Arg Met Asp Val Ile Asp Leu Ile Gly Lys
        195                 200                 205            
 
 
Glu Val Asp Pro Gln Ile Met Ala Asn Gly Arg His Pro His Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Leu Gln Gln Met Asn Arg Ala Thr Phe Gly Pro Arg Gly Ser Val Thr
225                 230                 235                 240
 
 
Val Gly Glu Thr Trp Ser Ala Thr Pro Glu Asp Ala Leu Leu Tyr Ser
                245                 250                 255    
 
 
Ala Glu Glu Arg Gln Glu Arg Gln Glu Leu Thr Met Val Phe Gln Phe
            260                 265                 270        
 
 
Glu His Ile Lys Leu Phe Trp Asp Glu Gln Tyr Gly Lys Trp Cys Asn
        275                 280                 285            
 
 
Gln Pro Phe Asp Leu Leu Arg Phe Lys Ala Val Ile Asp Lys Trp Gln
    290                 295                 300                
 
 
Thr Ala Leu Ala Asp His Gly Trp Asn Ser Leu Phe Trp Ser Asn His
305                 310                 315                 320
 
 
Asp Leu Pro Arg Ala Val Ser Lys Phe Gly Asp Asp Gly Glu Tyr Arg
                325                 330                 335    
 
 
Val Val Ser Ala Lys Met Leu Ala Thr Ala Leu His Cys Leu Lys Gly
            340                 345                 350        
 
 
Thr Pro Tyr Ile Tyr Gln Gly Glu Glu Ile Gly Met Thr Asn Val Asn
        355                 360                 365            
 
 
Phe Ala Asp Ile Asp Asp Tyr Arg Asp Ile Glu Ser Leu Asn Leu Tyr
    370                 375                 380                
 
 
Gln Glu Arg Ile Ala Glu Gly Met Ser His Glu Ala Met Met Arg Gly
385                 390                 395                 400
 
 
Ile His Ala Asn Gly Pro Asp Asn Ala Arg Thr Pro Met Gln Trp Thr
                405                 410                 415    
 
 
Ala Val His Met Pro Gly Leu Pro Pro Val Ser Pro Gly Leu Arg Leu
            420                 425                 430        
 
 
Ile Leu Thr Ser Gly Gln Trp Asn Val Ala Ala Ala Leu Asp Asp Pro
        435                 440                 445            
 
 
Asp Ser Val Phe Tyr His Tyr Gln Lys Leu Val Ala Leu Arg Lys Gln
    450                 455                 460                 
 
 
Leu Pro Leu Leu Val His Gly Asp Phe Arg Gln Ile Val Val Glu His
465                 470                 475                 480
 
 
Pro Gln Val Phe Ala Trp Leu Arg Thr Leu Gly Glu Gln Thr Leu Val
                485                 490                 495    
 
 
Val Ile Asn Asn Phe Thr Arg Asp Ala Val Met Leu Ala Ile Pro Asp
            500                 505                 510        
 
 
Asn Leu Gln Ser Gln Gln Gly Arg Cys Leu Ile Asn Asn Tyr Ala Pro
        515                 520                 525            
 
 
Arg Glu Gln Leu Glu Pro Ile Met Glu Leu Gln Pro Tyr Glu Ser Phe
    530                 535                 540                
 
 
Ala Leu Leu Ile Glu Arg
545                 550
 
 
<210>  10
<211>  632
<212>  PRT
<213>  大黄欧文氏菌
 
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (236)..(236)
<223>  Xaa可以是任意天然存在的氨基酸
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (449)..(449)
<223>  Xaa可以是任意天然存在的氨基酸
 
<400>  10
 
Met Ser Ser Gln Glu Leu Lys Ala Ala Val Ala Ile Phe Leu Ala Thr
1               5                   10                  15     
 
 
Thr Phe Ser Ala Thr Ser Tyr Gln Ala Cys Ser Ala Gly Pro Asp Thr
            20                  25                  30         
 
 
Ala Pro Ser Leu Thr Val Gln Gln Ser Asn Ala Leu Pro Thr Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Gln Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Leu Asn Gly Ile Ile Glu Asn Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Lys Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg Asp Tyr Arg Lys
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Arg Leu Ile Ser
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Ile Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Ala Trp Phe Val Gln Ser Lys Ser Gly Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Gly
                165                 170                 175    
 
 
His Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Glu
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Asp Lys Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Lys Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Gln Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Asp Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Xaa Gly Leu Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Asn Phe Pro Asp Leu Ser
                245                 250                 255    
 
 
Gln Gln Gln Leu Lys Asn Phe Ala Glu Glu Tyr Thr Lys Gly Pro Lys
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Asp Tyr Val Asn Glu Met Asn Arg Glu Val Leu Ser His Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Ile Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Lys Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ile Lys Phe Phe Asp Arg Arg Arg Asn Glu Leu Asn Ile Ala Phe Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ala Asp Glu Arg Trp Arg Arg
                325                 330                 335    
 
 
Lys Asp Trp Thr Leu Ser Gln Phe Arg Lys Ile Val Asp Lys Val Asp
            340                 345                 350        
 
 
Gln Thr Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Ala Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu His Ala Ala Lys Ala Leu Ala Thr Leu Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Lys Lys Ile Asp Asp Phe Asp Asp Val Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Glu Thr Gly Lys Val Lys Ala Glu Glu Phe Leu
        435                 440                 445             
 
 
Xaa Asn Val Arg Gln Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asp Ala Ser Lys Asn Ala Gly Phe Thr Ser Gly Thr Pro Trp Leu
465                 470                 475                 480
 
 
Lys Ile Asn Pro Asn Tyr Lys Glu Ile Asn Ser Ala Asp Gln Ile Asn
                485                 490                 495    
 
 
Asn Pro Asn Ser Val Phe Asn Tyr Tyr Arg Lys Leu Ile Asn Ile Arg
            500                 505                 510        
 
 
His Asp Ile Pro Ala Leu Thr Tyr Gly Ser Tyr Ile Asp Leu Ala Pro
        515                 520                 525            
 
 
Asp Asn Asn Ser Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Phe Gly Ala Glu Lys
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Ile Asn Phe Lys Glu Glu Val Met His Tyr Thr Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Gly Asp Leu Ser Ile Asn Lys Val Ile Thr Glu Asn Asn Ser His
                565                 570                 575    
 
 
Thr Ile Val Asn Lys Asn Asp Val Glu Asp Pro Arg Gly Ala Thr Ser
            580                 585                 590        
 
 
Val Cys Ser Pro Phe Gln Ala Gln Lys Arg Pro Gly Asp Pro Gly Tyr
        595                 600                 605            
 
 
Ser Ala Ala His Ser Ile Arg Phe Leu Pro Arg Phe Phe Ala Ser Tyr
    610                 615                 620                
 
 
Arg Gly Asp Ile His Ala Phe Lys
625                 630        
 
 
<210>  11
<211>  598
<212>  PRT
<213>  克雷伯菌属
 
<400>  11
 
Met Ser Phe Val Thr Leu Arg Thr Gly Val Ala Val Ala Leu Ser Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Leu Ile Ile Ser Leu Ala Cys Pro Ala Val Ser Ala Ala Pro Ser Leu
            20                  25                  30         
 
 
Asn Gln Asp Ile His Val Gln Lys Glu Ser Glu Tyr Pro Ala Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Asp Asp Gly Ile Gly Asp Ile Arg Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Ser Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Ser Asn Tyr Arg Gln
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Ser Leu Val Ala
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Val Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Pro Trp Phe Ile Gln Ser Lys Ser Asp Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Asn
                165                 170                 175    
 
 
Gln Pro Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Ala Lys Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Arg Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Glu Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Met Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Gly Phe Pro Asn Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Glu Gln Gln Lys Asn Phe Ala Glu Gln Tyr Thr Met Gly Pro Asn
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Ile Gln Glu Met Asn Arg Lys Val Leu Ser Arg Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Val Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Arg Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ser Gln Phe Phe Asp Arg Arg Arg His Glu Leu Asn Met Ala Phe Met
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser Asn Glu Arg Trp Arg His
                325                 330                 335     
 
 
Lys Ser Trp Ser Leu Ser Gln Phe Arg Gln Ile Ile Ser Lys Met Asp
            340                 345                 350        
 
 
Val Thr Val Gly Lys Tyr Gly Trp Asn Thr Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365             
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu Ala Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Ile Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Arg Gln Leu Asn Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Gln Ser Gly Lys Val Thr Ala Thr Glu Phe Leu
        435                 440                 445            
 
 
Asp Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asn Asp Thr Leu Asn Ala Gly Phe Thr Arg Gly Lys Pro Trp Phe
465                 470                 475                 480
 
 
His Ile Asn Pro Asn Tyr Val Glu Ile Asn Ala Glu Arg Glu Glu Thr
                485                 490                 495    
 
 
Arg Glu Asp Ser Val Leu Asn Tyr Tyr Lys Lys Met Ile Gln Leu Arg
            500                 505                 510        
 
 
His His Ile Pro Ala Leu Val Tyr Gly Ala Tyr Gln Asp Leu Asn Pro
        515                 520                 525            
 
 
Gln Asp Asn Thr Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Gly Asn Glu Arg
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Lys Glu Tyr Pro Val Arg Tyr Thr Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Ala Asn Asp Ala Ile Glu Glu Val Val Ile Asp Thr Gln Gln Gln
                565                 570                 575    
 
 
Ala Ala Ala Pro His Ser Thr Ser Leu Ser Leu Ser Pro Trp Gln Ala
            580                 585                 590        
 
 
Gly Val Tyr Lys Leu Arg
        595            
 
 
<210>  12
<211>  598
<212>  PRT
<213>  克雷伯菌属 NK33-98-8
 
<400>  12
 
Met Ser Phe Val Thr Leu Arg Thr Gly Val Ala Val Ala Leu Ser Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Leu Ile Ile Ser Leu Ala Cys Pro Ala Val Ser Ala Ala Pro Ser Leu
            20                  25                  30         
 
 
Asn Gln Asp Ile His Val Gln Lys Glu Ser Glu Tyr Pro Ala Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Asp Asp Gly Ile Gly Asp Ile Arg Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Ser Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Ser Asn Tyr Arg Gln
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Asn Leu Val Ala
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Val Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Pro Trp Phe Ile Gln Ser Lys Ser Asp Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Ser Pro Tyr Arg Asn Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Asn
                165                 170                 175    
 
 
Gln Pro Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Val Lys Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Arg Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Glu Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Met Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Gly Phe Pro Asn Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Glu Gln Gln Lys Asn Phe Ala Glu Gln Tyr Thr Met Gly Pro Asn
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Ile Gln Glu Met Asn Arg Glu Val Leu Ser Arg Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Val Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Arg Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ser Gln Phe Phe Asp Arg Arg Arg His Glu Leu Asn Met Ala Phe Met
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser Asn Glu Arg Trp Arg His
                325                 330                 335    
 
 
Lys Ser Trp Ser Leu Ser Gln Phe Arg Gln Ile Ile Ser Lys Met Asp
            340                 345                 350        
 
 
Val Thr Val Gly Lys Tyr Gly Trp Asn Thr Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu Ala Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Ile Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Arg Gln Leu Asn Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Gln Ser Gly Lys Val Thr Ala Thr Glu Phe Leu
        435                 440                 445            
 
 
Asp Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asn Asp Thr Leu Asn Ala Gly Phe Thr Arg Gly Lys Pro Trp Phe
465                 470                 475                 480
 
 
His Ile Asn Pro Asn Tyr Val Glu Ile Asn Ala Glu Arg Glu Glu Thr
                485                 490                 495    
 
 
Arg Glu Asp Ser Val Leu Asn Tyr Tyr Lys Lys Met Ile Gln Leu Arg
            500                 505                 510        
 
 
His His Ile Pro Ala Leu Val Tyr Gly Ala Tyr Gln Asp Leu Asn Pro
        515                 520                 525            
 
 
Gln Asp Asn Thr Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Gly Asn Glu Arg
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Glu Glu Tyr Pro Val Arg Tyr Thr Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Ala Asn Asp Ala Ile Glu Glu Val Val Ile Asp Thr Gln Gln Gln
                565                 570                 575    
 
 
Ala Thr Ala Pro His Ser Thr Ser Leu Ser Leu Ser Pro Trp Gln Ala
            580                 585                 590        
 
 
Gly Val Tyr Lys Leu Arg
        595            
 
 
<210>  13
<211>  598
<212>  PRT
<213>  植物生克雷伯菌
 
<400>  13
 
Met Ser Phe Ile Thr Leu Arg Thr Gly Val Ala Val Ala Leu Ser Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Leu Met Ile Ser Gln Ala Cys Pro Ala Val Ser Ala Ala Pro Ser Val
            20                  25                  30         
 
 
Asn Gln Asn Ile His Val His Lys Glu Ser Glu Tyr Pro Ala Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Asp Asp Gly Ile Gly Asp Ile Arg Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Ser Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Ser Asn Tyr Arg Gln
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Asn Leu Val Ala
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Val Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Pro Trp Phe Ile Gln Ser Lys Ser Asp Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asn Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Asn
                165                 170                 175    
 
 
Gln Pro Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Ala Lys Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Arg Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Glu Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Ser Met Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Gly Phe Pro Asn Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Glu Gln Gln Lys Asn Phe Ala Glu Gln Tyr Thr Met Gly Pro Asn
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Ile Gln Glu Met Asn Arg Lys Val Leu Ser Arg Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Val Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Asp Arg Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ser Gln Phe Phe Asp Pro Arg Arg His Glu Leu Asn Met Ala Phe Met
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser Asn Glu Arg Trp Arg His
                325                 330                 335    
 
 
Lys Ser Trp Ser Leu Ser Gln Phe Arg Gln Ile Ile Ser Lys Met Asp
            340                 345                 350        
 
 
Val Thr Val Gly Lys Tyr Gly Trp Asn Thr Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Glu Ala Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Ile Thr Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Arg Gln Leu Asn Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Gln Ser Gly Lys Val Thr Ala Thr Glu Phe Leu
        435                 440                 445            
 
 
Asp Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                 
 
 
Trp Asn Asp Thr Leu Asn Ala Gly Phe Thr Arg Gly Lys Pro Trp Phe
465                 470                 475                 480
 
 
His Ile Asn Pro Asn Tyr Val Glu Ile Asn Ala Glu Arg Glu Glu Thr
                485                 490                 495    
 
 
Arg Glu Asp Ser Val Leu Asn Tyr Tyr Lys Lys Met Ile Gln Leu Arg
            500                 505                 510        
 
 
His His Ile Pro Ala Leu Val Tyr Gly Ala Tyr Gln Asp Leu Asn Pro
        515                 520                 525            
 
 
Gln Asp Asn Thr Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Gly Asn Glu Arg
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Val Asn Phe Lys Glu Tyr Pro Val Arg Tyr Thr Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Ala Asn Asp Ala Ile Glu Glu Val Val Ile Asp Thr Gln Gln Gln
                565                 570                 575    
 
 
Ala Thr Ala Pro His Ser Thr Ser Leu Ser Leu Ser Pro Trp Gln Ala
            580                 585                 590        
 
 
Gly Val Tyr Lys Leu Arg
        595            
 
 
<210>  14
<211>  599
<212>  PRT
<213>  欧文氏菌属 Ejp617
 
<400>  14
 
Met Ser Arg Phe Thr Leu Ser Thr Val Met Ala Leu Leu Val Ala Pro
1               5                   10                  15     
 
 
Val Leu Ser Val Leu Pro Gly Gln Val Met Ala Gly Lys Met Asp Met
            20                  25                  30         
 
 
Ala Thr Thr Gln Leu Ala Gln Lys Ser Asp Asp Phe Pro Ala Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Gln Ala Val Phe Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Leu Lys Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Arg Leu Gly Val Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg Asp Tyr Arg Lys
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Lys Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Arg Leu Ile Ala
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Asn Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Ile Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Ser Trp Phe Val Gln Ser Lys Gly Ser Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Asp Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asn Gly
                165                 170                 175    
 
 
Gln Pro Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Lys
            180                 185                 190        
 
 
Lys Glu Asp Asn Ser Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Thr Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Glu Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ala Gly Leu Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ala Lys Ile Pro Gly Phe Pro Asp Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Gln Gln Arg Lys Asn Phe Ala Arg Thr Tyr Thr Glu Gly Pro Ser
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Ile Lys Glu Met His Gln Gln Val Phe Ser His Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asn Ile Ala Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Glu Lys Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ile Asp Tyr Phe Asp Arg Arg Arg Gly Glu Leu Asn Ile Ala Phe Thr
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Gly Val Glu Glu Arg Trp Arg Gln
                325                 330                 335    
 
 
Lys Ala Trp Ser Leu Thr Asp Phe Arg Gln Thr Ile Asp Lys Val Asp
            340                 345                 350        
 
 
Arg Val Ala Gly Lys Tyr Gly Trp Asn Ala Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Arg Pro Gln Trp
    370                 375                 380                
 
 
Arg Gln Ala Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Leu Met Ile Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415     
 
 
Pro Phe Lys Ser Ile Ala Asp Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Ser Ser Gly Lys Val Asp Pro Glu Glu Phe Met
        435                 440                 445             
 
 
Arg Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asp Glu Ser Ala Asn Ala Gly Phe Thr Ser Gly Thr Pro Trp Phe
465                 470                 475                 480
 
 
Asn Val Asn Pro Asn Tyr Lys Leu Ile Asn Ala Ala Asp Gln Thr Arg
                485                 490                 495    
 
 
Asp Pro Asp Ser Val Phe Asn Tyr Tyr Arg Lys Leu Ile Gly Leu Arg
            500                 505                 510        
 
 
His Ala Ile Pro Ala Leu Thr Tyr Gly Glu Tyr Lys Asp Leu Asp Pro
        515                 520                 525            
 
 
Asn Asn Asp Thr Val Tyr Ala Phe Thr Arg Thr His Gly Asp Lys Arg
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Ile Asn Phe Lys Glu Asn Val Val Asn Tyr Arg Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Asp Gln Leu Thr Ile Arg Gln Thr Leu Ser Glu Ser Ser Ala Ile
                565                 570                 575    
 
 
Gln Pro Val Ala Glu Asn Ala Arg Glu Leu Leu Leu Gln Pro Trp Gln
            580                 585                 590        
 
 
Ser Gly Ile Tyr Gln Leu Asn
        595                
 
 
<210>  15
<211>  600
<212>  PRT
<213>  维涅兰德固氮菌
 
<400>  15
 
Met Gln Thr Ala Ser Phe Arg Arg Thr Leu Ser Ser Val Met Leu Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Ala Leu Ala Ile Cys Gln Thr Ala Met Gly Thr Pro Asn Thr Gly Ser
            20                  25                  30         
 
 
Asp Thr Ala Arg Glu Asp Val Ala Lys Thr Pro Ala Ala Arg Pro Asp
        35                  40                  45             
 
 
Ala Pro Trp Trp Lys Glu Ala Val Val Tyr Gln Val Tyr Pro Arg Ser
    50                  55                  60                 
 
 
Phe Asn Asp Thr Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Leu Asn Gly Ile Thr
65                  70                  75                  80 
 
 
Ala Lys Leu Asp Tyr Leu Lys Ala Leu Gly Val Asp Thr Ile Trp Leu
                85                  90                  95     
 
 
Ser Pro His Phe Asp Ser Pro Asn Ala Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg
            100                 105                 110        
 
 
Asp Tyr Arg Lys Val Met Ser Glu Phe Gly Asp Met Asp Asp Phe Glu
        115                 120                 125            
 
 
Arg Leu Leu Ala Gly Met Asn Lys Arg Gly Met Arg Leu Ile Ile Asp
    130                 135                 140                
 
 
Leu Val Val Asn His Ser Ser Asp Glu His Arg Trp Phe Val Glu Ser
145                 150                 155                 160
 
 
Arg Arg Ser Lys Asp Asn Pro Tyr Arg Asp Tyr Tyr Thr Trp Arg Asp
                165                 170                 175    
 
 
Gly Lys Asp Gly Ala Ala Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly
            180                 185                 190        
 
 
Ser Ala Trp Lys Lys Asp Glu Ala Thr Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr
        195                 200                 205            
 
 
Phe Ala Gly Lys Gln Pro Asp Leu Asn Trp Glu Asn Pro Glu Val Arg
    210                 215                 220                
 
 
Ala Glu Val His Asp Ile Met Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser
225                 230                 235                 240
 
 
Gly Phe Arg Met Asp Val Ile Pro Phe Ile Ser Lys Gln Asp Gly Leu
                245                 250                 255    
 
 
Pro Asp Leu Pro Ala Gln Ala Leu Ala His Pro Glu Phe Val Tyr Ala
            260                 265                 270        
 
 
Asn Gly Pro Arg Ile His Glu Tyr Leu Gln Glu Met Asn Arg Glu Val
        275                 280                 285            
 
 
Leu Ser Arg Tyr Asp Thr Met Thr Val Gly Glu Ala Phe Gly Ile Thr
    290                 295                 300                
 
 
Phe Glu Gln Ala Pro Leu Phe Thr Asp Ala Arg Arg His Glu Leu Asn
305                 310                 315                 320
 
 
Met Ile Phe His Phe Asp Leu Val Arg Leu Asp Arg Asp Gly Trp Arg
                325                 330                 335    
 
 
Lys Lys Asp Trp Thr Leu Pro Glu Leu Lys Ala Thr Tyr Ala Arg Ile
            340                 345                 350        
 
 
Asp Arg Thr Gly Gly Asp His Gly Trp Asn Thr Ser Phe Leu Gly Asn
        355                 360                 365            
 
 
His Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Ser Pro Glu
    370                 375                 380                
 
 
Trp Arg Ala Ala Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Met Met Leu Thr Gln
385                 390                 395                 400
 
 
Arg Ala Thr Pro Phe Leu Tyr Gln Gly Asp Glu Leu Gly Met Thr Asn
                405                 410                 415    
 
 
Tyr Pro Phe Arg Gly Leu Glu Asp Tyr Asp Asp Val Glu Val Lys Gly
            420                 425                 430        
 
 
Gln Trp Arg Asp Phe Val Glu Ser Gly Lys Val Ser Ala Asp Glu Tyr
        435                 440                 445            
 
 
Leu Ala His Leu Arg Gln Thr Ser Arg Asp Asn Ala Arg Thr Pro Met
    450                 455                 460                 
 
 
Gln Trp Ser Asp Ala Pro Asn Gly Gly Phe Thr Thr Gly Lys Pro Trp
465                 470                 475                 480
 
 
Leu Ala Val Asn Pro Asn Tyr Pro Gln Val Asn Ala Ala Ser Gln Val
                485                 490                 495    
 
 
Asp Asp Pro Gly Ser Ile Tyr His His Tyr Arg Arg Leu Leu Glu Val
            500                 505                 510        
 
 
Arg Arg Gln Thr Pro Ala Leu Ile His Gly Gln Phe Arg Asp Leu Asp
        515                 520                 525            
 
 
Pro Ala Asn Pro Lys Val Phe Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Asp Asp Lys
    530                 535                 540                
 
 
Arg Tyr Leu Val Leu Ile Asn Phe Thr Arg Glu Thr Val Ala Tyr Asp
545                 550                 555                 560
 
 
Leu Pro Glu Gly Leu Lys Ile Ala Ala Thr Leu Leu Asp Asn Gly Ala
                565                 570                 575    
 
 
Ala Gln Glu Ser Met Gln Pro Gly Ala Ala Ser Val Thr Leu Gln Pro
            580                 585                 590        
 
 
Trp Gln Ala Thr Ile Tyr Arg Leu
        595                 600
 
 
<210>  16
<211>  599
<212>  PRT
<213>  肠杆菌属
 
<400>  16
 
Met Ser Phe Phe Lys Lys Leu Thr Gly Val Ala Val Thr Phe Ser Ser
1               5                   10                  15     
 
 
Leu Phe Met Thr Leu Ala Pro Ala Ala Tyr Ser Ala Glu Thr Ser Val
            20                  25                  30         
 
 
Thr Gln Ser Ile Gln Thr Gln Lys Glu Ser Thr Leu Pro Ala Trp Trp
        35                  40                  45             
 
 
Lys Glu Ala Val Phe Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp Thr
    50                  55                  60                 
 
 
Asn Gly Asp Gly Ile Gly Asp Ile Arg Gly Ile Ile Glu Lys Leu Asp
65                  70                  75                  80 
 
 
Tyr Leu Lys Ser Leu Gly Ile Asp Ala Ile Trp Ile Asn Pro His Tyr
                85                  90                  95     
 
 
Asp Ser Pro Asn Thr Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Arg Asp Tyr Glu Lys
            100                 105                 110        
 
 
Ile Met Gln Glu Tyr Gly Thr Met Glu Asp Phe Asp Thr Leu Val Ser
        115                 120                 125            
 
 
Glu Met Lys Lys Arg Asn Met Arg Leu Met Ile Asp Val Val Ile Asn
    130                 135                 140                
 
 
His Thr Ser Asp Gln His Pro Trp Phe Ile Gln Ser Lys Ser Ser Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Glu Asn Pro Tyr Arg Glu Tyr Tyr Phe Trp Arg Asp Gly Lys Asp Asn
                165                 170                 175    
 
 
Gln Pro Pro Asn Asn Tyr Pro Ser Phe Phe Gly Gly Ser Ala Trp Gln
            180                 185                 190        
 
 
Lys Asp Asp Lys Thr Gly Gln Tyr Tyr Leu His Tyr Phe Ala Arg Gln
        195                 200                 205            
 
 
Gln Pro Asp Leu Asn Trp Asp Asn Pro Lys Val Arg Gly Asp Leu Tyr
    210                 215                 220                
 
 
Ala Met Leu Arg Phe Trp Leu Asp Lys Gly Val Ser Gly Met Arg Phe
225                 230                 235                 240
 
 
Asp Thr Val Ala Thr Tyr Ser Lys Ile Pro Gly Phe Pro Asp Leu Thr
                245                 250                 255    
 
 
Pro Glu Gln Gln Lys Asn Phe Ala Glu Gln Tyr Thr Thr Gly Pro Asn
            260                 265                 270        
 
 
Ile His Arg Tyr Leu Gln Glu Met Lys Gln Glu Val Leu Ser Arg Tyr
        275                 280                 285            
 
 
Asp Val Val Thr Ala Gly Glu Ile Phe Gly Val Pro Leu Glu Arg Ser
    290                 295                 300                
 
 
Ser Asp Phe Phe Asp Arg Arg Arg Asn Glu Leu Asp Met Ser Phe Met
305                 310                 315                 320
 
 
Phe Asp Leu Ile Arg Leu Asp Arg Asp Ser Asn Glu Arg Trp Arg His
                325                 330                 335    
 
 
Lys Lys Trp Thr Leu Ser Gln Phe Arg Gln Ile Ile Asn Lys Met Asp
            340                 345                 350        
 
 
Ser Asn Ala Gly Glu Tyr Gly Trp Asn Thr Phe Phe Leu Asp Asn His
        355                 360                 365            
 
 
Asp Asn Pro Arg Ala Val Ser His Phe Gly Asp Asp Ser Pro Gln Trp
    370                 375                 380                 
 
 
Ile Glu Pro Ser Ala Lys Ala Leu Ala Thr Ile Ile Leu Thr Gln Arg
385                 390                 395                 400
 
 
Ala Thr Pro Phe Ile Phe Gln Gly Ser Glu Leu Gly Met Thr Asn Tyr
                405                 410                 415    
 
 
Pro Phe Lys Lys Leu Asn Glu Phe Asp Asp Ile Glu Val Lys Gly Phe
            420                 425                 430        
 
 
Trp Gln Asp Tyr Val Gln Thr Gly Lys Val Ser Ala Glu Glu Phe Ile
        435                 440                 445            
 
 
Asp Asn Val Arg Leu Thr Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Pro Phe Gln
    450                 455                 460                
 
 
Trp Asn Asp Arg Lys Asn Ala Gly Phe Thr Ser Gly Lys Pro Trp Phe
465                 470                 475                 480
 
 
Arg Ile Asn Pro Asn Tyr Val Glu Ile Asn Ala Asp Lys Glu Leu Ile
                485                 490                 495    
 
 
Arg Asn Asp Ser Val Leu Asn Tyr Tyr Lys Glu Met Ile Lys Leu Arg
            500                 505                 510        
 
 
His Lys Thr Pro Ala Leu Ile Tyr Gly Thr Tyr Lys Asp Ile Ser Pro
        515                 520                 525            
 
 
Glu Asp Asp Ser Val Tyr Ala Tyr Thr Arg Thr Leu Gly Lys Glu Arg
    530                 535                 540                
 
 
Tyr Leu Val Val Ile Asn Phe Thr Glu Lys Thr Val Arg Tyr Pro Leu
545                 550                 555                 560
 
 
Pro Glu Asn Asn Val Ile Lys Ser Ile Leu Ile Glu Ala Asn Gln Asn
                565                 570                 575    
 
 
Lys Thr Ala Glu Lys Gln Ser Thr Val Leu Thr Leu Ser Pro Trp Gln
            580                 585                 590        
 
 
Ala Gly Val Tyr Glu Leu Gln
        595                

Claims (8)

1.制备异麦芽酮糖的方法，所述方法包括下述方法步骤：
A) 使固定化的酶复合物与含有蔗糖的溶液接触，所述酶复合物能够催化蔗糖转化成异麦芽酮糖；
B) 将至少部分蔗糖异构化为异麦芽酮糖；
C) 分离出所述酶复合物，和任选地
D) 进一步纯化所述异麦芽酮糖，
其特征在于，
作为含有蔗糖的溶液使用选自浓汁或稀汁的至少一种，优选浓汁。
2.根据权利要求1所述的方法，
其特征在于，
作为含有蔗糖的溶液使用用水稀释过的浓汁，基于整个汁计，其具有20-80重量%、尤其是30-50重量%的蔗糖浓度。
3.根据权利要求1或2所述的方法，
其特征在于，
含于固定化的酶复合物中的酶是酶类别EC 5.4.99.11中的至少一种蔗糖葡萄糖基变位酶，特别得自下述菌的一种：红色精蛋白杆菌、尤其是菌株红色精蛋白杆菌CBS 574.77和具有Seq ID Nr. 5和6的那些；红色精朊杆菌Z12；普城沙雷菌、尤其是菌株普城沙雷菌ATCC 15928；气味沙雷氏菌、尤其是菌株气味沙雷氏菌4Rx13（Seq ID Nr. 7）；粘质沙雷菌、尤其是菌株粘质沙雷菌NCIB 8285；肠膜明串珠菌、尤其是菌株肠膜明串珠菌ATCC 1083 a；大黄欧文氏菌、尤其是菌株大黄欧文氏菌ATCC29283（Seq ID Nr. 1）、NCPPB 1578、DSM 4484（Seq ID Nr. 8）、NX-5（Seq ID Nr. 9）和WAC2928（Seq ID Nr. 10）；欧文氏菌属、尤其是菌株欧文氏菌属D12；放射形土壤杆菌、尤其是菌株放射形土壤杆菌MX-232；土生结克雷伯菌、尤其是菌株土生结克雷伯菌JCM 1687；克雷伯菌属、尤其是菌株克雷伯菌属FERM BP-2838、LX3（Seq ID Nr. 11）和NK33-98-8（Seq ID Nr. 12）；肺炎克雷伯菌、尤其是菌株肺炎克雷伯菌342（Seq ID Nr. 4）；新加坡克雷伯菌、尤其是菌株新加坡克雷伯菌LX21；嗜中酸假单胞菌、尤其是菌株嗜中酸假单胞菌MX-45（Seq ID Nr. 2）；分散泛菌、尤其是菌株分散泛菌UQ68J（Seq ID Nr. 3）；植物生克雷伯菌、尤其是菌株植物生克雷伯菌CCRC 19112、MX10和UQ14S（Seq ID Nr. 13）；肠杆菌属、尤其是菌株肠杆菌属FMB-1（Seq ID Nr. 16）、SZ62和Ejp617（Seq ID Nr. 14）；维涅兰德固氮菌DJ（Seq ID Nr. 15）。
4.根据前述权利要求中的至少一项所述的方法,
其特征在于，
所述酶复合物是细胞，尤其是选自得自下述菌的细胞：红色精蛋白杆菌、尤其是菌株红色精蛋白杆菌CBS 574.77；红色精朊杆菌Z12；普城沙雷菌、尤其是菌株普城沙雷菌ATCC 15928；气味沙雷氏菌、尤其是菌株气味沙雷氏菌4Rx13；粘质沙雷菌、尤其是菌株粘质沙雷菌NCIB 8285；肠膜明串珠菌、尤其是菌株肠膜明串珠菌ATCC 1083 a；大黄欧文氏菌、尤其是菌株大黄欧文氏菌ATCC29283、NCPPB 1578、DSM 4484、NX-5和WAC2928；欧文氏菌属、尤其是菌株欧文氏菌属D12；放射形土壤杆菌、尤其是菌株放射形土壤杆菌MX-232；土生结克雷伯菌、尤其是菌株土生结克雷伯菌JCM 1687；克雷伯菌属、尤其是菌株克雷伯菌属FERM BP-2838、LX3和NK33-98-8；肺炎克雷伯菌、尤其是菌株肺炎克雷伯菌342；新加坡克雷伯菌、尤其是菌株新加坡克雷伯菌LX21；嗜中酸假单胞菌、尤其是菌株嗜中酸假单胞菌MX-45；分散泛菌、尤其是菌株分散泛菌UQ68J；植物生克雷伯菌、尤其是菌株植物生克雷伯菌CCRC 19112、MX10和UQ14S；肠杆菌属FMB-1、SZ62和Ejp617；维涅兰德固氮菌DJ。
5.根据权利要求4所述的方法，
其特征在于，
所述细胞被固定在多糖诸如藻酸盐、果胶、角叉菜胶、壳聚糖或聚乙烯醇，例如Lentikats，或它们的混合物中，尤其是藻酸盐中。
6.根据前述权利要求中的至少一项所述的方法，
其特征在于，
在方法步骤B)中，存在4-9.5的pH-值。
7.根据前述权利要求中的至少一项所述的方法，
其特征在于，
在方法步骤B)中，存在20-40℃的温度。
8.根据前述权利要求中的至少一项所述的方法，
其特征在于，
以固体床的形式使用经固定化的酶复合物，所述含有蔗糖的溶液通过所述固体床流过。
CN201280021859.XA 2011-05-05 2012-02-08 从植物汁制备异麦芽酮糖的方法 Pending CN103501636A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102011100772A DE102011100772A1 (de) 2011-05-05 2011-05-05 Verfahren zur Herstellung von Isomaltulose aus Pflanzensäften
DE102011100772.9 2011-05-05
PCT/EP2012/052096 WO2012150051A1 (de) 2011-05-05 2012-02-08 Verfahren zur herstellung von isomaltulose aus pflanzensäften

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103501636A true CN103501636A (zh) 2014-01-08

Family

ID=45563056

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280021859.XA Pending CN103501636A (zh) 2011-05-05 2012-02-08 从植物汁制备异麦芽酮糖的方法
CN201280021863.6A Pending CN103501637A (zh) 2011-05-05 2012-05-04 从植物汁制备异麦芽酮糖的方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280021863.6A Pending CN103501637A (zh) 2011-05-05 2012-05-04 从植物汁制备异麦芽酮糖的方法

Country Status (7)

Country Link
EP (2) EP2704594B1 (zh)
CN (2) CN103501636A (zh)
AU (2) AU2012251903A1 (zh)
BR (2) BR112013028369A2 (zh)
DE (1) DE102011100772A1 (zh)
TW (1) TW201307565A (zh)
WO (2) WO2012150051A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108779481A (zh) * 2015-11-12 2018-11-09 派迪瓦私人有限公司 用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法
CN109511849A (zh) * 2018-12-26 2019-03-26 广西壮族自治区农业科学院农产品加工研究所 一种调节肠道菌群的木薯汁饮料及其加工方法
CN112566512A (zh) * 2018-08-22 2021-03-26 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 作为食物和营养补充剂的蔗糖异构酶

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102012200907A1 (de) 2012-01-23 2013-07-25 Evonik Industries Ag Verfahren und Absorptionsmedium zur Absorption von CO2 aus einer Gasmischung
DE102012207509A1 (de) 2012-05-07 2013-11-07 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Absorption von CO2 aus einer Gasmischung
DE102015212749A1 (de) 2015-07-08 2017-01-12 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Entfeuchtung von feuchten Gasgemischen
DE102016206891B3 (de) 2016-04-22 2017-04-27 Zf Friedrichshafen Ag Hydropneumatisches Federbein
DE102016210484A1 (de) 2016-06-14 2017-12-14 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Entfeuchtung von feuchten Gasgemischen
EP3257568B1 (de) 2016-06-14 2019-09-18 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur entfeuchtung von feuchten gasgemischen mit ionischen flüssigkeiten
EP3257843A1 (en) 2016-06-14 2017-12-20 Evonik Degussa GmbH Method of preparing a high purity imidazolium salt
DE102016210481B3 (de) 2016-06-14 2017-06-08 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zum Reinigen einer ionischen Flüssigkeit
DE102016210478A1 (de) 2016-06-14 2017-12-14 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Entfeuchtung von feuchten Gasgemischen
DE102016210483A1 (de) 2016-06-14 2017-12-14 Evonik Degussa Gmbh Verfahren und Absorptionsmittel zur Entfeuchtung von feuchten Gasgemischen
WO2019166514A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 C-Lecta Gmbh Enzymatic in-situ fortification of food with functional carbohydrates
KR101964958B1 (ko) * 2018-04-20 2019-04-02 (주)네오크레마 결정 석출이 억제되고 혈당 상승 억제능을 갖는 팔라티노스 시럽
CN113621601B (zh) * 2021-06-24 2023-06-30 浙江工业大学 蔗糖异构酶突变体、编码基因及其应用
CN114703211A (zh) * 2022-02-16 2022-07-05 李宪臻 一种融合卷曲螺旋结构域的蔗糖异构酶活性包涵体
CN116179631B (zh) * 2023-04-27 2023-11-28 山东百龙创园生物科技股份有限公司 一种异麦芽酮糖晶体及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE47250B1 (en) * 1977-09-13 1984-01-25 Bayer Ag Process for the continuous isomerisation of sucrose to isomaltulose with the aid of micro-organisms
CN1044676A (zh) * 1989-02-03 1990-08-15 广东省微生物研究所 固定化α-葡糖基转移酶制备帕拉金糖

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1049800B (de) 1957-10-11 1959-01-29 Süddeutsche Zucker-Aktiengesellschaft, Mannheim VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG VON PALATINOSE (6-a-GLUCOSIDO-FRUCTOFURANOSE)
DE2217628C2 (de) 1972-04-12 1974-06-06 Sueddeutsche Zucker Ag Verfahren zur Herstellung von alpha-D-Glucopyranosido eckige Klammer auf 1-6 eckige Klammer zu sorbit (Isomaltit)
DE2741197A1 (de) * 1977-09-13 1979-03-29 Bayer Ag Verfahren zur kontinuierlichen fermentation von mikroorganismen mit gleichzeitiger umsetzung von saccharose in isomaltulose
ATE6163T1 (de) 1979-11-07 1984-02-15 Tate & Lyle Public Limited Company Herstellung von isomaltulose.
JPS5836959B2 (ja) 1980-08-21 1983-08-12 三井製糖株式会社 固定化α−グルコシルトランスフエラ−ゼによるパラチノ−スの製造法
JPS5762310A (en) 1980-10-02 1982-04-15 Matsushita Electric Ind Co Ltd Coil combustion wick
DE3038219A1 (de) 1980-10-09 1982-04-15 Süddeutsche Zucker AG, 6800 Mannheim Verfahren zur herstellung von isomaltulose (6-o-(alpha)-d-glucopyranosido-d-fructose) mit hilfe von immobilisierten bakterienzellen
DE3213107A1 (de) 1982-04-07 1983-10-13 Süddeutsche Zucker AG, 6800 Mannheim Verfahren zur herstellung von isomaltulose (6-o-(alpha)-d-glucopyranosido-d-fructose) mit hilfe von immobilisierten bakterienzellen
DE3241788A1 (de) 1982-11-11 1984-05-17 Süddeutsche Zucker AG, 6800 Mannheim Verfahren zur herstellung von 1-0-(alpha)-d-glucopyranosido-d-fructose und verwendung als suessungsmittel
DE3725974A1 (de) 1987-08-05 1989-02-16 Messerschmitt Boelkow Blohm Einsatz fuer ein zumindest teilweise aus kunststoff bestehendes bauteil
JPH02273192A (ja) 1989-04-13 1990-11-07 Meito Sangyo Kk イソマルチユロースの製造方法
DE9321600U1 (de) * 1993-05-06 2000-04-06 Suedzucker Ag Süssungsmittel
EP0625578B2 (de) 1993-05-06 2004-04-28 Südzucker Aktiengesellschaft Mannheim/Ochsenfurt Süssungsmittel, Verfahren zur Herstellung desselben sowie dessen Verwendung
FI104563B (fi) 1996-05-17 2000-02-29 Xyrofin Oy Menetelmä ja kantaja isomaltuloosin tuottamiseksi immobilisoitujen mikro-organismien avulla
FI105048B (fi) * 1997-05-22 2000-05-31 Xyrofin Oy Menetelmä isomaltuloosin ja muiden tuotteiden valmistamiseksi
AU2841600A (en) 2000-02-15 2001-08-27 Inst Of Molecular Agrobiology Bacterial isolates of the genus klebsiella, and an isomaltulose synthase gene isolated therefrom
DE102007031689A1 (de) 2007-07-06 2009-01-08 Evonik Goldschmidt Gmbh Enzympräparate

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE47250B1 (en) * 1977-09-13 1984-01-25 Bayer Ag Process for the continuous isomerisation of sucrose to isomaltulose with the aid of micro-organisms
CN1044676A (zh) * 1989-02-03 1990-08-15 广东省微生物研究所 固定化α-葡糖基转移酶制备帕拉金糖

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108779481A (zh) * 2015-11-12 2018-11-09 派迪瓦私人有限公司 用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法
CN112566512A (zh) * 2018-08-22 2021-03-26 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 作为食物和营养补充剂的蔗糖异构酶
CN109511849A (zh) * 2018-12-26 2019-03-26 广西壮族自治区农业科学院农产品加工研究所 一种调节肠道菌群的木薯汁饮料及其加工方法
CN109511849B (zh) * 2018-12-26 2022-03-01 广西壮族自治区农业科学院农产品加工研究所 一种调节肠道菌群的木薯汁饮料及其加工方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE102011100772A1 (de) 2012-11-08
EP2704595A1 (de) 2014-03-12
WO2012150332A1 (de) 2012-11-08
WO2012150051A1 (de) 2012-11-08
EP2704594A1 (de) 2014-03-12
EP2704594B1 (de) 2016-04-27
AU2012251596A1 (en) 2013-10-24
BR112013028369A2 (pt) 2017-03-01
AU2012251903A1 (en) 2013-10-24
TW201307565A (zh) 2013-02-16
CN103501637A (zh) 2014-01-08
BR112013028410A2 (pt) 2019-09-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103501636A (zh) 从植物汁制备异麦芽酮糖的方法
JP5455244B2 (ja) 遊離細胞によるガラクトオリゴ糖の製造方法
CN100577793C (zh) 微生物转化d-果糖制备d-阿洛酮糖的菌种和方法
CA3121566C (en) Aspergillus oryzae blcy-006 strain and application thereof in preparation of galactooligosaccharides
JP2013501519A (ja) プシコースエピメラーゼの固定化及びそれを用いたプシコースの製造方法
CN106520746A (zh) 一种高纯度d‑阿洛酮糖的制备方法
CN108251468A (zh) 生物法生产d-阿洛酮糖的工艺
JP6926155B2 (ja) イソマルツロース含有組成物を製造するための、最適化された方法
JPH0431673B2 (zh)
US11560580B2 (en) Process for production of a solid material containing isomaltulose crystals and trehalulose
CN112831489B (zh) 一种阿洛酮糖3-差向异构酶固定化酶、其固定化方法与应用
CA1200521A (en) Glucose isomerase process
CN104313009B (zh) 一种纤维二糖差向异构酶全细胞的固定化方法
US20240102062A1 (en) Method for producing tagatose by immobilized multi-enzyme system
JP3650632B2 (ja) マルトースをトレハロースに変換する組換え型酵素
CN108410749A (zh) 海洋低温(+)γ-内酰胺酶不对称水解制备(-)γ-内酰胺的方法
CN113621664A (zh) 一种以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法
JPH07123994A (ja) 高純度マルチトールの製造方法
JPH03160995A (ja) トレハルロースの製造法
CN111073830B (zh) 一株高产γ-谷氨酰转肽酶的干酪乳杆菌及其在L-茶氨酸生产中的应用
CN110564626B (zh) 一株米曲霉菌株及其培养方法与制备蔗果三糖的方法
CN106047855A (zh) 一种固定化菌及其制备κ‑卡拉胶寡糖的方法
CN107164434B (zh) 一种生物合成菊二糖的方法
CN105483100A (zh) 一种诱导海洋微生物发酵产κ-卡拉胶酶的组合诱导物
KR960003644B1 (ko) 이소말토올리고당의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20140108