CN103339134A - 三环吡咯并衍生物、它们的制备方法和它们作为激酶抑制剂的应用 - Google Patents

三环吡咯并衍生物、它们的制备方法和它们作为激酶抑制剂的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)的三环吡咯并衍生物，其调节蛋白激酶活性，且因此可用于治疗由失调的蛋白激酶活性引起的疾病。本发明还提供了制备这些化合物的方法、包含这些化合物的药物组合物和使用这些化合物或包含它们的药物组合物治疗疾病的方法。

Description

三环吡咯并衍生物、它们的制备方法和它们作为激酶抑制剂的应用
本发明涉及三环吡咯并衍生物、它们的制备方法、包含它们的药物组合物和它们作为治疗剂的应用、特别是在治疗癌症和细胞增殖性障碍中的应用。
因此本发明化合物可用于治疗由失调的蛋白激酶活性引起的疾病。本发明还提供了制备这些化合物的方法、包含这些化合物的药物组合物和使用包含这些化合物的药物组合物治疗疾病的方法。
蛋白激酶(PK)的功能失常是许多疾病的标志。与人类癌症相关的致癌基因和原癌基因的一大部分编码PK。PK活性的增强还与许多非恶性疾病有关，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病、息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化有关的血管平滑细胞增殖、肺纤维化、关节炎、肾小球肾炎及手术后的狭窄和再狭窄。
PK还与炎性病症以及病毒和寄生虫的增殖有关。PK可能还在神经变性疾病的发病机理和进展中起到重要作用。
关于PK功能失常或失调的一般参考文献，参见例如CurrentOpinion in Chemical Biology1999,3,459-465和Carcinogenesis2008,29,1087-1091。
有丝分裂抑制剂在癌症疗法中的应用是被广泛接受的用于治疗广泛人体癌症的临床策略。紫杉烷类(紫杉醇和多西他赛)和长春花生物碱类(长春新碱和长春碱)通过使微管稳定或使其失稳而在细胞经有丝分裂进展中产生灾难性的后果而起作用。它们是用于几种肿瘤类型的第一线疗法和顺铂顽固性卵巢、乳腺、肺、膀胱和食管癌的第二线疗法(紫杉烷类)。然而，由于微管在例如细胞运动、吞噬作用和轴突输送的过程中的作用，所以使用这些活性剂频繁观察到一些毒性例如周围神经病。通过有丝分裂的进展是所有增殖细胞所必需的，且由此以有丝分裂为标靶的癌症疗法一般适用于广泛肿瘤类型。
几种蛋白激酶在细胞周期编配中起关键作用，且其中的一些已经在包括Cdk-2和Aurora-A的肿瘤环境中经历了靶向疗法。有丝分裂的精确度具有首要的重要性，且几个“检验点”存在于正常细胞中以维持细胞周期过程中的染色体完整性。
纺锤体装配检验点(SAC)为细胞分裂后染色体适当分裂至两个子细胞中所特定需要。它确保排列在中期板上的姊妹染色单体不会在全部复制的染色体与有丝分裂纺锤体两极连接之前分离(在Musacchio A.和Salmon D.Nat Rev Mol Cell Biol，May；8(5)：379-93，2007中综述)。
即使单一未排列的染色体也足以触发SAC信号，这是紧密调节的途径，其最终导致后期促进复合物/周期小体(APC/C)-介导的两种关键有丝分裂成分多泛素化（polyubiquitylation）和降解抑制：细胞周期蛋白B1和分离酶抑制蛋白(Securin)。分离酶抑制蛋白是使姊妹染色单体分离和后期转变特定需要的，而细胞周期B1使主有丝分裂激酶CDK1失活，促进有丝分裂退出(在Musacchio A.和Salmon D.Nat RevMol Cell Biol，May；8(5)：379-93，2007中综述)。
一大组蛋白质已经被鉴定为在SAC功能中起作用：人MPS1(单极纺锤体1)激酶(也称作TTK)具有确定的主要作用。MPS1是从酵母至哺乳动物高度保守的双酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激。人类基因组仅编码一种MPS1基因家族成员，它与其他蛋白激酶不具有高度序列相似性。
MPS1是有丝分裂中经磷酸化后得到正调节和活化的细胞周期调节酶(Stucke VM等人，Embo J.21(7)：1723，2002)。
在酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)中，MPS1控制纺锤体极体复制(Winey M.等人，J.Cell Biol114：745，1991)、纺锤体装配(Jones，M.H.等人，Curr.Biol.15：160，2005)和纺锤体装配检验点(Weiss和Winey，J.Cell.Biol132：111，1996)。而在高级真核生物中，MPS1激酶活性主要涉及SAC调节和功能(Jelluma，N.等人，Cell132：233，2008)。
RNA干扰实验显示MPS1不存在时，SAC功能受损：有丝分裂期限减少和在无中期板排列的情况下细胞快速分裂，最终导致异常非整倍体化、有丝分裂突变和不再与细胞存活相容(Jelluma N.等人，Cell132：233，2008；Tighe A.等人，J Cell Biol2008；Jelluma N.等人，Plos ONE3(6)：e2415，2008)。此外，为了支持这些结果，描述了小分子ATP-竞争剂MPS1抑制剂，且尽管其选择性尚不清楚，但是显示能够使SAC功能失活，使诺考达唑失效和泰素介导的有丝分裂阻滞，并促进主要在致癌细胞系中的细胞死亡(Schmidt等人，EMBORep，6(9)：866，2005)。
尽管大部分肿瘤是非整倍体，但是始终未发现MPS1在癌中突变，反而在大量不同来源如膀胱、还原成形术的甲状腺、乳腺和前列腺癌的肿瘤中发现了其受到正调节(Yuan B.等人，Clin Cancer Res，12(4)：1121，2006)。此外，还发现了在CIN和非整倍体肿瘤中过度表达的前25种基因的符号，它们在乳腺和肺癌、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、间皮瘤和淋巴瘤中预测临床结果(Carter SL等人，Nat Genet.38(9)：1043，2006)。最终，在转移肿瘤中高度升高并且发现在p53突变的乳腺癌中过度表达(Bertheau P.等人，Plos Med4(3)：e90，2007)。
还发现了其他SAC成分如MAD2、BUBR1或BUB1在不同肿瘤中得到正调节(deCarcer G.等人，Curr Med Chem14(9)：969，2007)，这些事实共同显示SAC功能可能是保持能够分离的肿瘤高度非整倍性细胞所需和必需的，且可以预见SAC抑制剂的肿瘤选择性特别地用于高度非整倍体肿瘤如结肠、肺和乳腺癌(Kops G.J.等人，Nat.RevCancer，5：773，2005)。
最终，已经证实整块的非整倍性诱导和SAC失调减少了肿瘤倾向性小鼠的肿瘤发生，从而支持了SAC抑制可以赋予肿瘤生长抑制的推定(Weaver等人，Cancer Cell11(1)：25，2007)。因此，出于这些原因，MPS1功能的药理学减毒作用可以在治疗几种不同癌症中具有治疗有益性。
在淋巴瘤小鼠模型中通过前病毒诱变最初鉴定为激活的基因的PIM(在本申请上下文中PIM1、PIM2和/或PIM-3)是蛋白质-丝氨酸/酪氨酸激酶。PIM激酶在正常组织中很少表达，而在个别人类癌症中过表达或者甚至发生突变，包括淋巴瘤、白血病、前列腺癌、胰腺癌和胃癌[Shah等人Eur.J.Cancer,44,2144-51,(2008)]。
PIM激酶是组成性活化的，且通过修饰递增数量的通常的以及同工型特异性的底物(包括若干细胞周期调节剂和细胞凋亡调节剂)，它们的活性支持体外和体内肿瘤细胞生长和存活。PIM1而非PIM2似乎还通过调节趋化因子受体表面表达而介导正常和恶性造血细胞的归巢和迁移[Brault等人Haematologica951004-1015(2010)].
越来越多的证据表明PIM1和PIM2激酶可能牵涉于介导一些急性髓性白血病(AML)相关的癌基因的致癌作用。特别是，FLT3-突变(ITD和KD突变，存在于30%的AML)和/或易位的致癌作用涉及MLL基因(在20%的AML存在)[Kumar等人J.Mol.Biol.348,183-193,(2005)]。与WT骨髓细胞相比，PIM1更多表达于FLT3-ITD-转化的AML细胞中。数据表明PIM1和PIM2抑制可介导FLT3ITD-依赖性AML细胞死亡。令人感兴趣地是，通过FLT3突变转化的细胞(该突变赋予了对小分子酪氨酸激酶抑制剂的耐受)对于通过RNAi敲低PIM2或者PIM-1和PIM-2仍然敏感[Kim等人,Blood105,1759-67,(2005)]。
另外，还报道了PIM2被若干恶性肿瘤过表达并与其进展相关，所述恶性肿瘤来源于B-细胞谱系，例如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥散性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或骨髓瘤[Cohen等人Leuk.Lymphoma94512004,Huttmann等人Leukemia201774(2006)]。
令人感兴趣地是，PIM和AKT/PKB似乎在介导造血细胞生长和存活中部分发挥不必要的作用，这最可能是由于与如BAD,p21WAF1/CIP1、p27KIP1或Cot/Tpl-2的底物重叠[Choudhary等人,MolCell.36326-39(2009)]。
已显示PIM激酶控制mTOR抑制(雷帕霉素)耐受、增殖和存活。因此，对于强大的癌症治疗平台而言，靶向若干存活激酶的小分子抑制剂的组合可能是必需的[Amaravadi R.等人J.Clin.Invest.2005,115(10)2618-24]。经eIF4E结合的蛋白质1(4E-BP1)的致癌蛋白质合成似乎是mTOR-依赖性的并且由PIM-2所控制。该观察表明致癌的eIF4F翻译起始的复合物可以被小分子PIM-2抑制剂阻断[TamburiniJ.等人Blood2009,114(8),1718-27和Brault L.等人Haematologica2010,95(6)1004-1015]。
WO2009/089305中公开了本领域已知的作为免疫抑制剂并用于治疗和预防炎性病症、变态反应性疾病和免疫疾病的四氢苯并环庚烯衍生物。
WO2005/037843中公开本领域已知的作为蛋白激酶抑制剂的四氢环庚三烯并嘧啶衍生物。
WO2008/065054中已经公开了具有激酶抑制活性的三环吲哚衍生物(其以该申请中的名称呈现)；从本发明的通式中排除上述WO2008/065054中的一些特定的化合物。
尽管有这些发展，但对用于所述疾病的有效药物仍有需要。
本发明人现已发现如下文所述的式(I)化合物为激酶抑制剂，且因此可作为抗肿瘤剂用于治疗法，且在毒性和副作用方面没有现有抗肿瘤药物伴随的前述缺点。
因此，本发明的第一个方面是提供式(I)的取代的三环化合物或其可药用盐
Figure BDA00003570595300051
其中
R1是氢、卤素或选自氨基、直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；
R2是选自-NR"R'"、-N(OR'")R"和OR"的基团，其中R"和R'"各自独立地是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团，或者，R"和R'"与它们所连接的氮原子一起可形成5至6元杂芳基或杂环基，其任选地包含一个另外的选自N、O和S的杂原子；
R3是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；
R4是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；
X是单键或选自-NR'-、-CONR'-、-NH-CO-NH-、-O-、-S-、–SO2-和–OSO2-的二价基团，其中R'是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团，或者，R1和R′与它们所连接的氮原子一起可形成5至6元杂芳基或杂环基，其任选地包含一个另外的选自N、O和S的杂原子；
A是选自–CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-CH=CH-、-C(CH3)2-CH2-和-CH2-C(CH3)2的基团；
条件是排除以下的化合物:
2-氨基-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯、
2-氨基-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸、
2-氨基-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺、
2-氨基-8-苯基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯、
2-氨基-8-苯基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺、
2-氨基-9-甲基-8-苯基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺、和
2-氨基-9-甲基-8-苯基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺。
本发明还提供了合成式(I)表示的取代的三环化合物和异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、复合物、代谢产物、前药、载体、N-氧化物的方法，其中通过由标准合成转化组成的方法进行制备。
本发明还提供了治疗因失调的蛋白激酶活性引起和/或与之相关的疾病的方法，所述失调的蛋白激酶特别是ABL、ACK1、AKT1、ALK、AUR1、AUR2、BRK、BUB1、CDC7/DBF4、CDK2/CYCA、CHK1、CK2、EEF2K、EGFR1、EphA2、EphB4、ERK2、FAK、FGFR1、FLT3、GSK3beta、Haspin、IGFR1、IKK2、IR、JAK1、JAK2、JAK3、KIT、LCK、LYN、MAPKAPK2、MELK、MET、MNK2、MPS1、MST4、NEK6、NIM1、P38alpha、PAK4、PDGFR、PDK1、PERK、PIM1、PIM2、PIM3、PKAalpha、PKCbeta、PLK1、RET、ROS1、SULU1、Syk、TLK2、TRKA、TYK、VEGFR2、VEGFR3、ZAP70、更特别是MPS1、PIM1、PIM2、PIM3。
本发明的优选方法是治疗因失调的蛋白激酶活性导致和/或与之相关的疾病，所述疾病选自癌症、细胞增殖疾病、病毒感染、自身免疫疾病和神经变性疾病。
本发明的另一个优选方法是治疗具体类型的癌症，包括、但不限于：癌，例如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌，包括小细胞肺癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌，包括鳞状细胞癌；淋巴谱系血液肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病（acute lymphocitic leukaemia）、急性成淋巴细胞性白血病（acute lymphoblastic leukaemia）、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和Burkett淋巴瘤；骨髓谱系血液肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；间质来源肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和外周神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；其他肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤(Keratoxanthoma)、甲状腺毛囊癌、卡波西肉瘤和间皮瘤、高度非整倍体肿瘤和确实超表达有丝分裂关卡的肿瘤。
本发明的另一个优选方法是治疗特异性细胞增殖疾病，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤性息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化相关的血管平滑肌细胞增殖、肺纤维化、关节炎、肾小球肾炎和术后狭窄和再狭窄。
本发明的另一个优选方法是治疗免疫细胞相关疾病和障碍，例如炎性疾病和自身免疫性疾病、例如多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠疾病(IBD)、局限性回肠炎、肠易激综合征、胰腺炎、溃疡性结肠炎、憩室病、重症肌无力、血管炎、银屑病、硬皮病、哮喘、变态反应、系统性硬化病、白斑、关节炎例如骨关节炎、幼年型类风湿关节炎、强直性脊椎炎。
本发明的另一个优选方法是治疗病毒感染、特别是在感染HIV的个体中预防AIDS发展。
本发明的另一个优选方法是治疗神经变性疾病，例如阿尔茨海默病、帕金森病和亨延顿舞蹈病。
此外，本发明的方法还提供了肿瘤血管生成和转移抑制以及治疗器官移植排斥和宿主抗移植物疾病。
本发明还提供了药物组合物，其包含一种或多种式(I)的化合物或其可药用盐和可药用赋形剂、载体和/或稀释剂。
本发明还提供了药物组合物，其包含式(I)的化合物与已知的抗癌疗法（例如放疗或化疗方案）的组合，所述的例如放疗或化疗方案结合了细胞生长抑制剂或细胞毒类药物、抗生素类药剂、烷化剂、抗代谢药、激素药、免疫活性剂、干扰素类活性剂、环加氧酶抑制剂(例如COX-2抑制剂)、基质金属蛋白酶抑制剂、端粒末端转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗-生长因子受体活性剂、抗-HER剂、抗-EGFR剂、抗-血管发生剂(例如血管生成抑制剂)、法尼基转移酶抑制剂、ras-raf信号转导途径抑制剂、细胞周期抑制剂、其他cdks抑制剂、微管蛋白结合剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂等。
本发明还提供了在体外抑制蛋白激酶活性的方法，其包括将激酶与有效量的如上文所定义的式(I)化合物接触。
此外，本发明提供了产品或药盒，其包含如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐或其药物组合物和一种或多种化学治疗剂，在抗癌治疗法中作为组合的制剂同时、分开或依次使用。
在本发明另一个方面中提供了用作药物的如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐。
此外，本发明提供了如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐在制备具有抗癌活性的药物中的应用。
最后，本发明提供了用于治疗癌症的方法中的如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐。
除非另有指定，否则当涉及式(I)化合物自身及其任意药物组合物或包含它们的任意治疗方法时，本发明包括本发明化合物的所有水合物、溶剂化物、复合物、代谢物、前体药物、载体、N-氧化物和可药用盐。
换句话说，如果易于从如本文所定义的式(I)化合物得到，则所述化合物的异构体、互变体、水合物、溶剂化物、复合物、代谢物、前体药物、载体和N-氧化物也是本发明的目的。
式(I)化合物的代谢物是式(I)这种相同化合物例如在向有需要的哺乳动物施用后在体内转化成的任意化合物。典型地，在式(I)化合物施用后，这种相同衍生物可以被转化成各种化合物，例如，包括更可溶的衍生物，如羟基化衍生物，它们易于排泄，但这并不代表限制性实例。因此，根据由此出现的代谢途径的不同，任意的这些羟基化衍生物可以被视为式(I)化合物的代谢物。
前体药物是任意共价键合的化合物，其在体内释放式(I)的活性母体药物。
N-氧化物是式(I)的化合物，其中氮和氧通过配价键键合。
如果异构体中心的立体异构源（stereogenic）中心或另一种形式异构中心存在于本发明化合物中，则指定所有形式的这种异构体，包括对映体和非对映异构体被本文所涵盖。包含立体异构源中心的化合物可以作为外消旋混合物，富含对映体的混合物使用，或可以使用众所周知的技术分离外消旋混合物并且可以单独使用各对映体。就化合物具有不饱和碳-碳双键的情况而言，顺式(Z)和反式(E)异构体属于本发明的范围。
就化合物可以以互变体形式(例如酮-烯醇互变体)存在而言，互变体形式各自被构思为包括在本发明范围内，无论是以平衡形式还是主要以一种形式存在。
术语“芳基”包括具有1至2个环基团的碳环或杂环烃，所述环基团可以是稠合的或通过单键彼此连接，其中至少一个环是芳族的；如果存在的话，任何芳族杂环烃(也称为杂芳基)包含具有1至3个选自N、O和S的杂原子的5至6元环。
本发明的芳基的实例是，例如苯基、联苯基、α-或β-萘基、二氢萘基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、二氢喹啉基、喹喔啉基、苯并间二氧杂环戊烯基、茚满基、茚基、三唑基等。
我们将所谓术语“杂环基”(也称作“杂环烷基”)意指为3-7元饱和或部分不饱和碳环，其中一个或多个碳原子被杂原子(例如氮、氧和硫)替代。杂环基的非限制性实例是，例如吡喃、吡咯烷、吡咯啉、咪唑啉、咪唑烷、吡唑烷、吡唑啉、噻唑啉、噻唑烷、二氢呋喃、四氢呋喃、1,3-二氧戊环、哌啶、哌嗪、吗啉等。
除非另有指定，否则我们将所谓术语“C3-C7环烷基”意指为3-7元全碳单环，其可以包含一个或多个双键，但不具有完全共轭的π-电子系统。环烷基的实例是环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己烯、环己二烯、环庚烷、环庚烯、环庚二烯，但不限于此。
我们将所谓术语“直链或支链C1-C6烷基”（由此可理解C1-C4烷基）意指为例如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正-戊基、正-己基等的任意基团。
我们将所谓术语“直链或支链C2-C6烯基”意指为例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、1-己烯基等的任意基团。
我们将所谓术语“直链或支链C2-C6炔基”意指为例如乙炔基、2-丙炔基、4-戊炔基等的任意基团。
根据本发明且除非另有指定，否则任意上述的R1、R2、R3、R4、R’、R’’和R’’'基团可以任选在其任意未取代位置上被一个或多个基团（例如1至6个基团）取代，所述基团独立地选自：卤素原子、硝基、氧代基团(=O)、氰基、C1-C6烷基、多氟代烷基、多氟代烷氧基、烯基、炔基、羟基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、C3-C7环烷基、羟基、烷氧基、芳基氧基、杂环基氧基、亚甲二氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、环烯基氧基、杂环基羰基氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧羰基、芳基氧基羰基、环烷基氧基羰基、杂环基氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳氨基、二芳基氨基、杂环基氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧羰基氨基、羟基氨基羰基、烷氧基亚氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸酯和烷基膦酸酯。
依次地，在任何适合的情况下，上述取代基各自可以进一步被一个或多个上述举出的基团取代。
在这方面，我们将术语“卤素原子”意指为氟、氯、溴或碘原子。
我们将所谓术语“氰基”意指-CN基团。
我们将所谓术语“硝基”意指-NO2基团。
我们将所谓术语“烯基”或“炔基”意指任意上述直链或支链C2-C6烷基，其还带有双键或三键。本发明烯基或炔基的非限制性实例是，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、1-己烯基、乙炔基、2-丙炔基、4-戊炔基等。
我们将所谓术语“多氟代烷基或烷氧基”意指任意上述直链或支链C1-C6烷基或烷氧基，其被一个以上氟原子取代，例如三氟甲基、三氟乙基、1,1,1,3,3,3-六氟丙基、三氟甲氧基等。
我们将所谓术语“烷氧基”、“芳基氧基”、“杂环基氧基”及其衍生物意指任意上述C1-C6烷基、芳基或杂环基，其通过氧原子(-O-)与分子的其余部分连接。
从所有上述描述中，本领域技术人员清楚的是名称是复合名称的任意基团，例如芳氨基必然被指定通常解释为它所衍生自的部分，例如所谓氨基进一步被芳基取代，其中芳基如上述所定义。
同样，任意的术语，例如烷硫基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧羰基、烷氧羰基氨基、杂环基羰基、杂环基羰基氨基、环烷基氧基羰基等，包括这样的基团，其中烷基、烷氧基、芳基、C3-C7环烷基和杂环基部分如上述所定义。
式(I)化合物的可药用盐包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐，所述酸为例如硝酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、高氯酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、富马酸、乳酸、草酸、丙二酸、苹果酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、羟乙磺酸和水杨酸。优选本发明化合物的酸加成盐选自盐酸盐或甲磺酸盐。
式(I)化合物的可药用盐还包括与无机碱或有机碱形成的盐，所述碱为例如碱金属或碱土金属，尤其是钠、钾、钙、铵或镁的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，无环或环状胺类，优选甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、哌啶等。
优选的式(I)化合物是这样的化合物，其中X是–NR’-基团，且R2是选自-NHR"和-N(OR’’’)R"的基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’、R’’’、R1、R3、R4和A如上文所定义。
其他优选的化合物是式(I)化合物，其中X是-O-基团，且R2是选自-NHR"和-N(OR’’’)R"的基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’’’、R1、R3、R4和A如上文所定义。
其他优选的化合物是式(I)化合物，其中X是-S-基团，且R2是选自-NHR"和-N(OR’’’)R"的基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’’’、R1、R3、R4和A如上文所定义。
其他优选的化合物是式(I)化合物，其中X是单键，且R2是选自-NHR"和-N(OR’’’)R"的基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’’’、R1、R3、R4和A如上文所定义。
其他优选的化合物是式(I)化合物，其中X是–NR’-基团；R2是-NHR"或-N(OR’’’)R"基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’、R’’’、R3、R4和A如上文所定义。
其他优选的化合物是式(I)化合物，其中X是-O-基团；R2是-NHR"或-N(OR’’’)R"基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’’’、R3、R4和A如上文所定义。
其他优选的化合物是式(I)化合物，其中X是-S-基团；R2是-NHR"或-N(OR’’’)R"基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’’’、R3、R4和A如上文所定义。
其他优选的化合物是式(I)化合物，其中X是单键；R2是-NHR"或-N(OR’’’)R"基团，其中R"是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；且R’’’、R3、R4和A如上文所定义。
优选的具体的式(I)化合物或其盐是以下列出的化合物:
1)N-(2,6-二乙基苯基)-9-(甲氧基甲基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2)2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
3)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
4)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
5)N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
6)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
7)2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
8)2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9)N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
10)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
11)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
12)N-(2,6-二乙基苯基)-2-[(4-{[3-(二甲基氨基)丙基](甲基)氨基}-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
13)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
14)2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-[(1S)-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-1-苯基乙基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺，
15)2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺,
16)N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺,
17)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺，和
18)N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺，
19)8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
20)8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
21)2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
22)2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
23)2-(二甲基氨基)-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
24)9-(2-羟基乙基)-8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
25)9-(2-羟基乙基)-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
26)2-(二甲基氨基)-8-甲基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
27)9-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
28)8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
29)9-(2-羟基乙基)-8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
30)8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
31)9-乙基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
32)2-(甲基硫烷基)-9-(哌啶-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
33)9-(顺式4-氨基环己基)-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
34)9-(顺式-4-氨基环己基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
35)2-(甲基硫烷基)-9-(哌啶-4-基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
36)2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
37)2-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺
38)9-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐
39)9-(氮杂环庚烷-3-基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐
对于任选地为可药用盐形式的任何特定的本发明的式(I)的化合物，参见实验部分和权利要求。
本发明还提供了通过使用下文所述的反应路线和合成流程、使用本领域可利用的技术和容易获得的原料制备如上文所定义的式(I)化合物的方法。本发明的某些实施方案的制备在以下的实施例中描述，但本领域的那些普通技术人员会认识到可以容易地修改所描述的制备以制备本发明的其他实施方案。例如，通过本领域技术人员显而易见的修改可进行本发明非示例性的化合物的合成，例如通过适当地保护干扰基团，通过变更成本领域已知的其他适合的试剂，或者通过对反应条件进行常规修改。或者本文涉及的或本领域已知的其他反应将被认为可适用于制备本发明其他的化合物。
所报道的流程1显示了式(I)化合物的制备。
流程1
在以上的流程1中，X是单键或选自-NR'、-O-和-S-的二价基团；R2是任选地被取代的烷氧基；A如式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-；R1、R3、R4，且R’如在式(I)中所定义，且R5是任选地被取代的C1-C6烷基。
本领域所有普通技术人员会理解根据所述方法进行的任何转化可能需要标准的修改，例如，保护干扰基团，变更为其他本领域已知的适合的试剂，或者对反应条件进行常规修改。
因此，本发明的方法包括以下步骤:
步骤A)将式(II)化合物
Figure BDA00003570595300191
其中A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，且R5是任选地被取代的C1-C6烷基(例如甲基、乙基或叔丁基)
与式(III)化合物反应
Figure BDA00003570595300192
其中R2是任选地被取代的烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或叔丁氧基)；
步骤B)将得到的式(IV)化合物:
Figure BDA00003570595300193
其中R2是任选地被取代的烷氧基，R5是任选地被取代的C1-C6烷基，且A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-
与甲苯磺酰甲基异腈在强碱的存在下反应；
步骤C)在酸或碱条件下选择性水解得到的式(V)化合物
Figure BDA00003570595300194
其中R3和R4是氢，A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，R2是任选地被取代的烷氧基，且R5是任选地被取代的C1-C6烷基，得到式(VI)化合物
Figure BDA00003570595300195
其中R3和R4是氢，A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，且R2是任选地被取代的烷氧基；
或者，
步骤Ca)可通过将式(VII)化合物
Figure BDA00003570595300201
其中A如上文所定义，与式(VIII)化合物反应
Figure BDA00003570595300202
其中R2和R4如上文所定义；
得到式(VI)化合物，其中R3是氢，R4如在式(I)中所定义，其中排除氢，A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，且R2是任选地被取代的烷氧基；
步骤D)在酸性条件下环化得到的式(VI)化合物，其中R2是任选地被取代的烷氧基，R3是氢，R4如在式(I)中所定义，且A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，以得到式(IX)化合物
Figure BDA00003570595300203
其中R2、R3、R4和A如上文所定义；
如果需要或要求，
步骤E)使用式(X)化合物:
R3-L     (X)
其中L是OH，或者是任选地经活化、可用作适合的离去基团例如碘、溴、氯或磺酸酯基团(例如–OS(O)2CF3、–OS(O)2CH3或–OS(O)2PhMe)的基团，且R3如在式(I)中所定义，其中排除氢；
烷基化式(IX)化合物，其中R3是氢；
步骤F)将得到的式(IX)化合物
Figure BDA00003570595300204
其中R2是任选地被取代的烷氧基，R3和R4如在式(I)中所定义，且A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，与N,N-二甲基甲酰胺衍生物反应；
步骤G)将得到的式(XI)化合物
Figure BDA00003570595300211
其中R2是任选地被取代的烷氧基，R3和R4如在式(I)中所定义，且A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，与式(XII)化合物反应
Figure BDA00003570595300212
其中X是单键或选自-NR'、-O-和-S-的二价基团；且R1和R’如在式(I)中所定义，以得到式(I)化合物
Figure BDA00003570595300213
其中X是单键或选自-NR'、-O-和-S-的二价基团；R2是任选地被取代的烷氧基；A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-；且R1、R3、R4和R’如在式(I)中所定义；任选地将式(I)化合物转化为另一种不同的式(I)化合物，且如需要，将式(I)化合物转化为其可药用盐或将盐转化为游离的化合物(I)。
如上文所述，通过根据众所周知的合成条件进行操作可以将根据本发明的方法制备的式(I)化合物方便地转化为其他的式(I)化合物，以下是可能的转化的实例:
转化1)在酸性或碱性条件下将式(I)化合物(其中R3是保护基团P、例如甲氧基甲基或对甲氧基苄基)转化为相应的式(I)化合物(其中R3是氢原子):
Figure BDA00003570595300214
转化2)通过与式R3-L(X)的化合物(其中L是OH或者是任选地经活化、可用作适合的离去基团例如碘、溴、氯或磺酸酯基团(例如–OS(O)2CF3、–OS(O)2CH3或–OS(O)2PhMe)的基团，且R3如上文所定义但不是氢原子)进行反应，将式(I)化合物(其中R3是氢)转化为相应的式(I)化合物(其中R3如在式(I)中所定义但不是氢):
Figure BDA00003570595300221
转化3)通过酸性或碱性水解将式(I)化合物(其中R2是OR5，其中R5是任选地被取代的C1-C6烷基)转化为相应的式(I)化合物(其中R2是羟基)或其相应的盐:
Figure BDA00003570595300222
转化4)通过在碱性条件下和在适合的缩合剂的存在下与式R"R"'NH(XIII)或R"NHOR’’’(XIV)的衍生物(其中R″和R’’’如上文所定义)进行反应，将式(I)化合物(其中R2是羟基)或其相应的盐转化为相应的式(I)化合物(其中R2是-NR"R'"或-N(OR’’’)R"基团，其中R″和R’’’如在式(I)中所定义)；
或者使用氯化剂将式(I)化合物(其中R2是羟基)可以首先转化为相应的氯化物衍生物，然后在碱性条件下将得到的化合物与式R"R"'NH(XIII)或R"NHOR’’’(XIV)的衍生物(其中R″和R’’’如上文所定义)反应以得到式(I)化合物(其中R2是-NR"R'"或-N(OR’’’)R"基团):
Figure BDA00003570595300223
转化5)通过与式R"R"'NH(XIII)或R"NHOR’’’(XIV)的衍生物(其中R″和R’’’如上文所定义)进行反应，将式(I)化合物(其中R2是OR5，其中R5是任选地被取代的C1-C6烷基)转化为相应的式(I)化合物(其中R2是-NR"R'"或-N(OR’’’)R"基团，其中R″和R’’’如在式(I)中所定义):
Figure BDA00003570595300231
转化6)通过用式R″R’’’-NH(XIII)的胺处理，将式(I)化合物(其中X如在式(I)中所定义，其中排除SO2和–OSO2-，且R1是芳基、即苯基，其被溴取代)转化为相应的式(I)化合物(其中R1是芳基、即苯基，其被NR″R’’’取代):
Figure BDA00003570595300232
其中Ra和Rb独立地是除溴外的卤素原子、氢、硝基、氰基、C1-C6烷基、多氟代烷基、多氟代烷氧基、链烯基、炔基、羟烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、C3-C7环烷基、羟基、烷氧基、芳基氧基、杂环基氧基、亚甲二氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、环烯基氧基、杂环基羰基氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧羰基、芳基氧基羰基、环烷基氧基羰基、杂环基氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳氨基、二芳氨基、杂环基氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧羰基氨基、羟基氨基羰基、烷氧基亚氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸酯或烷基膦酸酯；
转化7)通过在钯的存在下用式(XV)的碘代衍生物处理
Figure BDA00003570595300241
其中Ra、Rb和Rc如上文所定义
将式(I)化合物(其中X是–NH-，且R1是氢)转化为相应的式(I)化合物(其中R1是芳基、即苯基，其被Ra、Rb、Rc取代):
Figure BDA00003570595300242
其中Ra、Rb和Rc独立地是氢、硝基、氰基、C1-C6烷基、多氟代烷基、多氟代烷氧基、链烯基、炔基、羟烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、C3-C7环烷基、羟基、烷氧基、芳基氧基、杂环基氧基、亚甲二氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、环烯基氧基、杂环基羰基氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧羰基、芳基氧基羰基、环烷基氧基羰基、杂环基氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳氨基、二芳氨基、杂环基氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧羰基氨基、羟基氨基羰基、烷氧基亚氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸酯或烷基膦酸酯；
转化8)通过文献(参见Teodora W.Green,PereG.M.Wuts)中众所周知的条件将式(I)化合物(其中X如在式(I)中所定义，其中排除SO2和–OSO2-，且R1是芳基、即苯基，其被–COOPg取代，其中Pg是适合的保护基团)转化为相应的式(I)化合物(其中R1是芳基、即苯基，其被–COOH取代):
Figure BDA00003570595300251
其中Ra和Rb独立地是卤素原子、氢、硝基、氰基、C1-C6烷基、多氟代烷基、多氟代烷氧基、链烯基、炔基、羟烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、C3-C7环烷基、羟基、烷氧基、芳基氧基、杂环基氧基、亚甲二氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、环烯基氧基、杂环基羰基氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧羰基、芳基氧基羰基、环烷基氧基羰基、杂环基氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳氨基、二芳氨基、杂环基氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧羰基氨基、羟基氨基羰基、烷氧基亚氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸酯和烷基膦酸酯；
转化9)通过在适合的缩合剂的存在下用式R″R’’’-NH(XIII)的胺处理，将式(I)化合物(其中X如在式(I)中所定义，其中排除SO2和–OSO2-，且R1是芳基、即苯基，其被–COOH取代)转化为相应的式(I)化合物(其中R1是芳基、即苯基，其被–CONR″R’’’取代，其中R″和R’’’如上文所定义):
Figure BDA00003570595300252
其中Ra和Rb独立地是卤素原子、氢、硝基、氰基、C1-C6烷基、多氟代烷基、多氟代烷氧基、链烯基、炔基、羟烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、C3-C7环烷基、羟基、烷氧基、芳基氧基、杂环基氧基、亚甲二氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、环烯基氧基、杂环基羰基氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧羰基、芳基氧基羰基、环烷基氧基羰基、杂环基氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳氨基、二芳氨基、杂环基氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧羰基氨基、羟基氨基羰基、烷氧基亚氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸酯和烷基膦酸酯；
转化10)通过在碘和CuI的存在下与亚硝酸异戊酯和二碘甲烷或碘化铯进行反应，将式(I)化合物(其中R1是氢，且X是-NH-)转化为相应的式(I)化合物(其中R1是碘，且X是单键):
Figure BDA00003570595300261
转化11)通过在Pd(OAc)2和BINAP的存在下与式R1-NH2(XVI)的任选被取代的芳基胺(其中R1如上文所定义)进行反应，将式(I)化合物(其中R1是碘，且X是单键)转化为相应的式(I)化合物(其中X是–NH-，且R1是任选地被取代的芳基):
Figure BDA00003570595300262
转化12)通过与式(XVII)化合物进行反应，将式(I)化合物(其中R1是碘，且X是单键)转化为相应的式(I)化合物(其中X是单键，且R1如在式(I)中所定义):
R1-Q  (XVII)
其中R1如上文所定义，且Q是适合的基团、例如-B(OH)2、-B(OAlk)2、-Sn(Alk)4、ZnHal或MgHal，其可经历钯介导的碳键形成:
Figure BDA00003570595300271
转化13)在氧化条件下将式(I)化合物(其中R1如在式(I)中所定义，且X是–S-)转化为相应的式(I)化合物(其中X是-SO2-):
Figure BDA00003570595300272
转化14)通过磺酰基与式R1-NHR’(XVIa)的胺(其中R1和R’如在式(I)中所定义)进行反应，将式(I)化合物(其中R1如在式(I)中所定义，且X是-SO2-)转化为相应的式(I)化合物(其中X是–NR’-):
Figure BDA00003570595300273
转化15)通过磺酰基与式R1-OH(XVIII)的胺(其中R1如在式(I)中所定义，其中排除氢)进行反应，将式(I)化合物(其中R1如在式(I)中所定义，且X是-SO2-)转化为相应的式(I)化合物(其中X是–O-):
Figure BDA00003570595300274
转化16)将式(I)化合物(其中R1是甲基，且X是-O-)转化为相应的式(I)化合物(其中R1是氢，且X是–O-):
Figure BDA00003570595300281
转化17)通过与三氟甲磺酰化剂反应，将式(I)化合物(其中R1是氢，且X是-O-)转化为式(I)化合物(其中R1是三氟甲基，且X是–OSO2-):
Figure BDA00003570595300282
转化18)通过与式R1-OH(XVIII)的化合物(其中R1如上文所定义，排除氢)进行反应，将式(I)化合物(其中R1是三氟甲基，且X是–OSO2-)转化为相应的式(I)化合物(其中X是–O-，且R1如在式(I)中所定义):
Figure BDA00003570595300283
转化19)通过与式R1-NHR’(XVIa)的化合物(其中R1如上文所定义)进行反应，将式(I)化合物(其中R1是三氟甲基，且X是–OSO2-)转化为相应的式(I)化合物(其中X是–NR’-，且R1如在式(I)中所定义，其中排除氢):
Figure BDA00003570595300284
转化20)通过与式R1-SH(XIX)的硫醇(其中R1如上文所定义，其中排除氢)进行反应，将式(I)化合物(其中R1是三氟甲基，且X是–OSO2-)转化为相应的式(I)化合物(其中X是–S-和R1如在式(I)中所定义，其中排除氢):
Figure BDA00003570595300291
转化21)通过与式R1-Q(XVII)的化合物(其中R1如上文所定义，其中排除氢，且Q是适合的基团、例如-B(OH)2、-B(OAlk)2、-Sn(Alk)4、ZnHal或MgHal)进行反应，将式(I)化合物(其中R1是三氟甲基，且X是–OSO2-)转化为相应的式(I)化合物(其中X是单键，且R1如在式(I)中所定义，其中排除氢)，其可经历钯介导的碳键形成:
Figure BDA00003570595300292
转化22)通过在钯衍生物的存在下与式R1-B(OH)2(XVIIa)的芳基硼酸(其中R1是任选地被取代的芳基)进行反应，将式(I)化合物(其中R1是甲基，且X是-S-)转化为相应的式(I)化合物(其中R1是任选地被取代的芳基，且X是单键):
Figure BDA00003570595300293
转化23)通过使用氧化剂处理或在脱氢操作条件下在Pd或Pt催化剂的存在下，将式(I)化合物(其中A是二价基团，例如-CH2-CH2-)转化为相应的式(I)化合物(其中A是-CH=CH-基团):
Figure BDA00003570595300294
其中X、R1、R2、R3和R4如在式(I)中所定义。
转化24)将式(I)化合物(其中R4是氢，且A是二价基团，例如-CH2-CH2-)转化为相应的式(I)化合物(其中R4是氢且A是-CH=CH-基团)：通过首先使用过量的N-碘代琥珀酰亚胺将其转化为式(XX)化合物，接着在钯衍生物的存在下除去碘:
Figure BDA00003570595300301
其中X、R1、R2和R3如在式(I)中所定义，且R4是氢。
转化25)除去任何保护基团，且如需要，形成盐。
根据所述方法的步骤(步骤A)，将式(II)的醛与式(III)的正膦在适合的溶剂、例如甲苯、二甲苯、THF或Et2O中、在室温至回流的温度反应1至约12小时。优选地，以上的反应在甲苯中在回流下进行以得到式(IV)化合物。
根据步骤(步骤B)，将式(IV)化合物与TOSMIC在碱例如KOH、NaH、LiN(TMS)2的存在下、在适合的溶剂、例如甲苯、THF或Et2O中、在-78°C至室温的温度反应1至约12小时。优选地，在LiN(TMS)2的存在下在THF中在-78°C进行以上的反应以得到式(V)化合物。
根据步骤(步骤C)，在碱例如KOH、NaOH、LiOH或Na2CO3的存在下、在适合的溶剂例如H2O、二噁烷或其混合物中、在0°C至室温的温度，将式(V)化合物(其中R3是氢，R4是氢，且A如在式(I)中所定义，其中排除–CH=CH-，R2是任选地被取代的烷氧基，且R5是任选地被取代的烷基)转化为单-甲酸衍生物(VI)，转化进行1至约24小时。优选地，在LiOH的存在下、在二噁烷/H2O的混合物中、在室温进行以上的反应以得到式(VI)化合物。
或者根据步骤(步骤Ca)，将式(VII)化合物与式(VIII)化合物在AcONa或乙醇钠的存在下、在适合的溶剂、例如H2O、EtOH或AcOH中、在室温至回流的温度反应1至约24小时。优选地，在AcONa的存在下、在H2O中在回流下进行以上的反应以得到式(VI)化合物，其中R3是氢，R4如上文所定义，其中排除氢，且R2和A如上文所定义。
根据所述方法的步骤(步骤D)，在TFAA或PPA的存在下在适合的溶剂例如TFA中、在室温至回流的温度，可将式(VI)化合物(其中R4如在式(I)中所定义)转化为式(IX)化合物，转化进行1至约8小时。优选地，在TFAA的存在下、在TFA中、在室温进行以上的反应以得到式(IX)化合物。
根据所述方法的步骤(步骤E)，将式(IX)化合物(其中R3是氢原子)与如上文所定义的式(X)化合物反应，其中L是OH，在该情况下，可以使用光延反应（Mitsunobu）条件，或者是任选地经活化、可用作适合的离去基团例如卤素原子、甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基或三氟甲磺酸酯基的基团。
在之前的情况中，即当采用光延反应方案时，可以使用偶氮二甲酸二烷基酯、例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)等、在三烃基膦或三芳基膦、优选三苯基膦的存在下、在适合的溶剂、例如四氢呋喃、1,4-二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙腈中完成该反应。
当L是卤素或者是例如甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基或三氟甲磺酸酯基等的基团时，可以使用适合的碱、例如NaH、K2CO3、Cs2CO3、DBU、KO-t-Bu等、在适合的溶剂、例如四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺等中完成转化。上述反应可以在0°C至回流的温度进行30分钟至约48小时。
根据所述方法的步骤(步骤F)，将式(IX)化合物与N,N-二甲基甲酰胺衍生物进行反应，例如与N,N-二甲基甲酰胺衍生物、例如N,N-二甲基甲酰胺-二叔丁基缩醛、N,N-二甲基甲酰胺-二异丙基缩醛、N,N-二甲基甲酰胺-二甲基缩醛、N,N-二甲基甲酰胺-二乙基缩醛或三(二甲基氨基)甲烷反应，所述反应在适合的溶剂、例如在DMF或甲苯中、在室温至回流的温度进行约1至约48小时。优选地，在纯净的三(二甲基氨基)甲烷的存在下或在DMF中在90°C进行该反应以得到式(XI)化合物。
根据所述方法的步骤(步骤G)，将式(XI)化合物通过嘧啶环形成反应与式(XII)衍生物(其中X是单键或选自-NR'-、-O-和-S-的二价基团，其中R'如在式(I)中所定义，R1如在式(I)中所定义)进行反应，从而得到如上文所定义的式(I)化合物(其中X和R1如上文所定义)，所述反应在碱、例如AcOK、K2CO3或Na2CO3的最终存在下在适合的溶剂、例如DMF、EtOH或甲苯中、在室温至回流的温度进行约1至约48小时。优选地，在DMF的存在下在120°C进行该反应。或者可以使用微波辐照代替加热。
根据所述方法的转化(转化1)，通过在酸性条件例如AcOH、TFA或HCl中反应，或者在碱性条件例如NaOH中反应，在适合的溶剂、例如MeOH、DCM或二噁烷的存在下、在室温至回流的温度进行1至约12小时，可将式(I)化合物(其中R3是选自甲氧基甲基或对甲氧基苄基的基团)转化为另一种式(I)化合物(其中R3是氢原子)。
根据所述方法的转化(转化2)，通过与如上文所定义的适合的式(X)化合物反应(在当L是OH时的情况中可使用光延反应条件，或者是任选地经活化、可用作适合的离去基团例如卤素原子、甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基或三氟甲磺酸酯基的基团)，可将式(I)化合物(其中R3是氢原子)转化为式(I)化合物(其中R2如上文所定义，其中排除氢原子)。
在之前的情况中，即当采用光延反应方案时，可以使用偶氮二甲酸二烷基酯、例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)等、在三烃基膦或三芳基膦、优选三苯基膦的存在下、在适合的溶剂、例如四氢呋喃、1,4-二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷、乙腈中完成该反应。
当L是卤素或者是例如甲苯磺酸酯基、甲磺酸酯基或三氟甲磺酸酯基等的基团时，可以使用适合的碱、例如NaH、K2CO3、Cs2CO3、DBU、KO-t-Bu等、在适合的溶剂、例如四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺等中完成转化。上述反应在0°C至回流的温度可以进行30分钟至约48小时。
根据所述方法的转化(转化3)，通过本领域中广泛已知的碱性或酸性水解条件可将式(I)化合物(其中R2是OR5其中R5是任选地被取代的烷基)转化为相应的式(I)的羧酸衍生物(其中R2是羟基)或它们的相应的盐。优选地，在NaOH的存在下、在二噁烷/H2O中在回流下进行该反应。
根据所述方法的转化(转化4)，可将式(I)化合物(其中R2是羟基)或相应的盐转化为式(I)衍生物(其中R2是NR″R’’’或N(OR’’’)R″基团，其中R″和R’’’如在式(I)中所定义)。在如上文所定义的式(XIII)或(XIV)的化合物的存在下、在碱例如DIPEA或TEA的存在下、在适合的溶剂、例如DCM、DMF、THF或二噁烷中、和在适合的缩合剂、例如DCC、EDCI或TBTU的存在下进行该反应；可能还需要催化量的PyBOP或HOBt。优选地，在DIPEA和TBTU的存在下、在DMF中、在室温进行该反应。
或者可如下进行相同的转化：通过首先将式(I)化合物(其中R2是羟基)或相应的盐与氯化剂、例如草酰氯或SOCl2在适合的溶剂、例如DCM、甲苯、THF、二噁烷或DMF中、在室温至100°C的温度进行反应以得到相应的氯化物衍生物。优选地，在SOCl2的存在下、在THF中在回流下进行该反应。
根据所述方法的转化(转化5)，将式(I)化合物(其中R2是OR5，其中R5是任选地被取代的烷基)与适合的如上文所定义的式(XIII)或(XIV)的化合物反应，所述反应在碱、例如NaH、NaN(TMS)2或LiN(TMS)2的存在下、在适合的溶剂、例如Et2O、THF或二噁烷中、在-10°C在40°C的温度进行约10分钟至约12小时以获得另一种式(I)化合物，其中R2是式–NR″R’’’或–N(OR’’’)R″的氨基。优选地，在LiN(TMS)2的存在下、在THF中、在0°C进行该反应。
根据所述方法的转化(转化6)，通过原料与如上文所述的式(XIII)的胺的反应完成–NR″R”’基团对溴的替代，所述反应在适合的溶剂、例如THF或二噁烷中、在催化量的Pd2(dba)3、2-二环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)-联苯和碱、例如LiN(TMS)2的存在下、在室温至回流的温度进行1至约24小时。
根据所述方法的转化(转化7)，根据常规的方法将如上文所定义的式(I)化合物与如上文所定义的式(XV)的化合物反应。例如，该反应可以在适合的溶剂、例如DMF、DME、二噁烷或CH3CN中、且在如上文所定义的式(XV)的任选地被取代的芳基碘、催化量的Pd2(dba)3、BINAP或2-(二环己基膦)-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(X-phos)和碱、例如K2CO3、磷酸钾或Cs2CO3的存在下、在室温至110°C的温度进行2至约24小时。
根据所述方法的转化(转化8)，使用本领域熟知的方法可以将羧酸残余物脱保护，成为相应的酸，所述脱保护在酸性条件下例如使用HCl或TFA、在适合的溶剂、例如THF或二噁烷中、在室温至60°C的温度进行约1至约12小时。
根据所述方法的转化(转化9)，通过酸衍生物与如上文所定义的式(XIII)的胺的反应可以将酸残余物转化为相应的酰胺衍生物–CONR″R’’’，其中R″和R’’’如上文所定义，所述反应在碱性条件下、优选使用DIPEA或TEA、在适合的溶剂、例如DCM、DMF、THF或二噁烷中、在适合的缩合剂、例如DCC、EDCI或TBTU的存在下、在室温至60°C的温度进行约1至约24小时；可能还需要催化量的PyBOP或HOBt。
根据所述方法的转化(转化10)，通过相应的式(I)化合物(其中R1是氢，且X是–NH-)可制备式(I)化合物(其中R1是碘，且X是单键)；该反应使用亚硝酸异戊酯和二碘甲烷或碘化铯、在碘和CuI的存在下、在适合的溶剂、例如THF、Et2O或DME中、在室温至约70°C的温度进行约8小时至约48小时的时间。
根据所述方法的转化(转化11)，式R1-NH2(XVI)的芳基胺对碘的替代可在适合的溶剂、例如DMF、DME或CH3CN中、在催化量的Pd(OAc)2、BINAP或Xantphos和碱、例如K2CO3、磷酸钾或Cs2CO3的存在下、在室温至110°C的温度进行约2至约24小时。
根据所述方法的转化(转化12)，通过利用任何适合形成碳-碳键的交叉偶联反应，可实施式R1的基团对碘的替代。本领域熟知的所述反应隐含包括与适合的有机金属试剂例如有机硼(Suzuki反应)、有机锡(Stille反应)、有机镁(Kumada反应)或有机锌(Negishi反应)等的偶联。优选的反应是Suzuki反应，其中在基于钯的催化剂、例如PdCl2(dppf)2CH2Cl2或Pd2(dba)3或Pd(PPh3)4的存在下、在适合的溶剂、例如DMF、DCM、MeOH、CH3CN中或者在溶剂的混合物、例如二甲氧基乙烷和水的混合物中、任选地在碱、例如碳酸钠、碳酸铯或氟化铯的存在下、在室温至100°C的温度使用适合的芳基或杂芳基硼酸衍生物。
根据所述方法的转化(转化13)，可以通过与本领域中技术人员熟知的氧化剂、例如臭氧进行反应将硫基转化为磺酰基，所述反应在适合的溶剂、例如四氢呋喃、1,4-二噁烷、丙酮中、任选地在作为共溶剂的水或在间-氯过苯甲酸的存在下、在适合的溶剂、优选DCM的存在下、在室温进行。
根据所述方法的转化(转化14)，优选地使用式R1-NHR’(XVIa)的胺在DMF、DME、二噁烷、CH3CN、N-甲基-吡咯烷酮或二甘醇二甲醚的存在下、在室温至约100°C的温度进行适合的氨基衍生物对磺酰基的替代。
根据所述方法的转化(转化15)，通过与式(XVIII)的醇或苯酚衍生物进行反应可容易地替代磺酰基。可在碱、例如K2CO3或Na2CO3、丁基锂、LiN(TMS)2、NaH等的存在下、在适合的溶剂、例如DMF或THF中，在室温至约100°C的温度进行该反应。
根据所述方法的转化(转化16)，在三甲基氯硅烷和碘化钠的存在下可除去甲基残基。该反应可在适合的溶剂、例如CH3CN中、且在室温至约回流的温度进行。
根据所述方法的转化(转化17)，通过式(I)化合物(其中X是-O-和R1是氢)与三氟甲磺酰化剂、例如三氟甲磺酸酐、三氟甲磺酰氯或N-苯基-双(三氟甲烷磺酰亚胺)、任选地在碱、例如TEA或DIPEA的存在下、在适合的溶剂、例如DCM、THF或二噁烷中、在-78°C至室温的温度进行反应可得到具有三氟甲磺酰基的化合物。
根据所述方法的转化(转化18)，可通过在适合的溶剂、例如二噁烷、THF、DME、CH3CN、DMF或DMSO中、在室温至约90°C的温度、任选地在碱、例如K2CO3、叔丁醇钾或NaH的存在下进行操作与式(XVIII)的醇进行该反应。
或者可在适合的溶剂、例如甲苯、DMF、DME或CH3CN中、在Pd(OAc)2、(±)-BINAP和碱、例如磷酸钾或K2CO3或CsCO3的存在下、在0°C至100°C的温度进行该反应。
根据所述方法的转化(转化19)，可以使用式R1-NHR’(XVIa)的胺从相应的三氟甲磺酰基化合物得到式(I)化合物(其中R1如在式(I)中所定义，其中排除氢，且X是–NR’-)。通常通过在适合的溶剂、例如二噁烷、THF、DME、CH3CN、DMF或DMSO中、在室温至90°C的温度、任选地在碱、例如K2CO3或TEA的存在下进行操作完成该反应。
根据所述方法的转化(转化20)，可以从相应的三氟甲磺酰基化合物得到式(I)化合物(其中R1如在式(I)中所定义，其中排除氢，且X是-S-)。通过在适合的溶剂、例如THF、DMF、DCM、MeOH、DME或CH3CN中、在室温至100°C的温度与式R1-SH(XIX)的硫醇(其中R1如上文所定义)反应进行所述转化。
根据所述方法的转化(转化21)，可以通过相应的三氟甲磺酰基得到式(I)化合物(其中R1如上文所定义)。通过在适合的溶剂、例如DMF、DCM、MeOH、DME或CH3CN中、在Pd2(dba)3、PdCl2(dppf)或Pd(PPh3)4的存在下、任选地在氟化铯的存在下、在室温至100°C的温度与式(XVII)的衍生物反应进行所述转化。
根据所述方法的转化(转化22)，通过相应的式(I)化合物(其中X是-S-，且R1是甲基)可以得到式(I)化合物(其中R1是任选地被取代的芳基，且X是单键)。通过在适合的溶剂、例如DMF、THF、DCM、MeOH、DME或CH3CN中、在CuTC和Pd2(dba)3或Pd(PPh3)4的存在下、任选地在氟化铯的存在下、在室温至回流的温度与式(XVIIa)的硼酸化合物反应进行所述转化。
根据所述方法的转化(转化23)，通过在适合的溶剂、例如甲苯、1,4-二噁烷、氯苯、二氯苯中、在90°C至回流的温度进行2小时至8小时的操作，式(I)化合物(其中A是–(CH2)2-)可以在任选地负载的钯或铂或2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)的存在下经历脱氢以得到相应的式(I)的芳族衍生物。
根据所述方法的转化(转化24)，可以将式(I)化合物(其中R4是氢和A是–(CH2)2-)与过量的N-碘代琥珀酰亚胺在DMF中、在室温进行反应，从而得到式(XX)的化合物，随后在钯催化剂、例如四(三苯基膦)钯和甲酸钠的存在下通过在适合的溶剂、例如N,N-二甲基甲酰胺中、在90°C至回流的温度、进行2小时至8小时的操作将其脱卤以得到相应的式(I)的芳族衍生物。
根据所述方法的转化(转化25)，可以根据能实现叔丁氧羰基、苄基、4-甲氧基苄基、2,4-二甲氧基苄基和三苯基甲基保护基团的选择性水解的常规方法完成式(I)化合物(其中R′是保护基团)的氮原子的脱保护。优选地该反应在酸性条件下、例如在无机或有机酸例如盐酸、三氟乙酸或甲磺酸的存在下、在适合的溶剂、例如DCM、1,4-二噁烷、低级醇、例如甲醇或乙醇中、在室温至回流的温度进行约1小时至约48小时。
根据制备式(I)化合物的方法的任何变通方法，原料和任何其他反应物是已知的或者通过已知的方法易于制备。
其中A是–CH2-且R5是甲基的式(II)化合物可商购获得。
其中A是–(CH2)2-且R5是甲基的式(II)化合物可以如J.Org.Chem.,1998,63(5),1668中所述制备。
其中A是–(CH2)3-且R5是甲基的式(II)化合物可以如EuropeanJournal of Organic Chemistry,2008,23,3917中所述制备。
其中A是-C(CH3)2-CH2-且R5是甲基的式(II)化合物可以如US5750769中所述制备。
其中A是-CH2-C(CH3)2-且R5是甲基的式(II)化合物可以如J.Org.Chem.,1964,29,801中所述制备。
其中R2是甲基、乙基和叔丁基的式(III)化合物可商购获得。
其中A是–CH2CH2-的式(VII)化合物可以如US2010/160318中所述制备。
其中R2是乙氧基且R4是甲基的式(VIII)化合物可商购获得。
式(X)、(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)、(XVI)、(XVIa)、(XVII)和(XVIIa)的化合物可商购获得，或者可以使用已知的方法制备。
实施例
在以下的实施例中描述一些本发明的式(I)化合物的合成制备。
还通过1H NMR或通过HPLC/MS分析数据表征根据以下实施例制备的本发明化合物；根据方法1、2、3和4中任意一种收集HPLC/MS数据。
HPLC/MS分析方法1
HPLC装置由配备Waters2996PDA检测器、Waters AcquityELSDTM检测器的Waters AcquityTM UPLC系统和配备电喷雾(ESI)离子源的Waters mod.SQD单四级杆质谱仪组成。由Empower2和MassLynx4.1软件提供仪器控制、数据采集和数据加工。
HPLC在45°C、在0.7mL/min的流速、使用Waters AcquityTMBEH C18,1.7微米(microm),50x2.1mm柱进行。流动相A是在H2O/CH3CN(95:5)中的0.1%的三氟乙酸，流动相B是H2O/CH3CN(5:95)；梯度为5至95%B进行2分钟，然后在95%B保持0.1分钟。进样体积是0.8微升。在正离子和负离子模式下操作质谱仪，毛细管电压设定在3KV(ES+和ES-)；锥孔电压是30V(ES+和ES-)；源温度是120°C；全扫描，设定了100至800amu的质量范围。
HPLC/MS分析方法2
HPLC装置由配备Waters2996PDA检测器的Waters AllianceTMHT2795系统和配备电喷雾(ESI)离子源的Waters mod.ZQ2000单四级杆质谱仪组成。由Empower2和MassLynx4.1软件提供仪器控制、数据采集和数据加工。
HPLC在25°C、在1.0mL/min的流速、使用Phenomenex GeminiC18,3微米,50x4.6mm柱进行。流动相A是5mM醋酸铵pH=5.2缓冲液与CH3CN(95:5)，流动相B是H2O/CH3CN(5:95)；梯度为10至90%B进行8分钟，然后在0.1分钟增加至100%B。进样体积是10微升。在正离子和负离子模式下操作质谱仪，毛细管电压设定在3.5kV(ES+)和2.8kV(ES-)；锥孔电压是14V(ES+)和28V(ES-)；源温度是120°C；全扫描，设定了100至800amu的质量范围。
HPLC/MS分析方法3
HPLC装置由配备996Waters PDA检测器的Waters2790HPLC系统和配备电喷雾(ESI)离子源的Waters mod.ZQ2000单四级杆质谱仪组成。由Empower2和MassLynx4.1软件提供仪器控制、数据采集和数据加工。
HPLC在25°C、在1mL/min的流速、使用RP18Waters X Terra3微米(3.0x20mm)柱。流动相A是0.05%氢氧化铵pH=10缓冲液与CH3CN(95:5)，和流动相B是H2O/CH3CN(5:95)；梯度为10至90%B进行4分钟，然后在90%B保持1分钟。进样体积是10微升。在正离子和负离子模式下操作质谱仪，毛细管电压设定在2.5KV；源温度是120°C；锥孔电压为10V；全扫描，设定了100至800amu的质量范围。
根据以下实施例制备的若干式(I)的本发明化合物经制备型HPLC纯化。
操作条件如下所示：
HPLC/MS制备方法1
HPLC装置由配备2996Waters PDA检测器的WatersFractionLynxTM系统和配备电喷雾(ESI)离子源的Waters mod.ZQ2000单四级杆质谱仪组成。由Empower2和MassLynx4.1软件提供仪器控制、数据采集和数据加工。
HPLC在25°C、在20mL/min的流速、使用RP18Waters X Terra10微米(19x250mm)柱进行。流动相A是0.05%氢氧化铵pH=10缓冲液与CH3CN(95:5)，流动相B是CH3CN；梯度为10至90%B进行15分钟，然后在90%B保持3分钟。进样体积是200微升。
在正离子和负离子模式下操作质谱仪，毛细管电压设定在2.5KV；源温度是120°C；锥孔电压为10V；全扫描，设定了100至800amu的质量范围。
HPLC/MS制备方法2
HPLC装置由配备2996Waters PDA检测器的FractionLynxTM系统和配备电喷雾(ESI)离子源的Waters mod.ZQ2000单四级杆质谱仪组成。由Empower2和MassLynx4.1软件提供仪器控制、数据采集和数据加工。
HPLC在25°C、在20mL/min的流速使用RP18Waters X Terra10微米(19x250mm)柱进行。流动相A是在H2O/CH3CN(95:5)中的0.1%TFA，流动相B是CH3CN；梯度为10至90%B进行15分钟，然后在90%B保持3分钟。进样体积是200微升。
在正离子和负离子模式下操作质谱仪，毛细管电压设定在2.5KV；源温度是120°C；锥孔电压为10V；全扫描，设定了100至800amu的质量范围。
准确MS
准确质量数据ESI(+)由如之前所述的直接连接微量HPLC1100Agilent的Waters Q-Tof Ultima获得(M.Colombo,F.Riccardi-Sirtori,V.Rizzo,Rapid Commun.Mass Spectrom.2004,18,511-517)。
NMR
在28°C的恒定温度、经在400.50MHz操作的并配备5mm z-轴PFG间接检测探头(1H{15N-31P})的Varian INOVA400波谱仪记录1H-NMR谱。
化学位移参照残余溶剂信号(DMSO-d6:对于1H为2.50ppm，其中没有另行说明)。以以下方式报道数据：化学位移(δ)，峰裂分(s=单峰，d=双峰，t=三重峰，q=四重峰，br.s=宽单峰，td=双三重峰，dd=双双峰，ddd=双双双峰，m=多重峰，spt=七重峰)，偶合常数(J,Hz)和质子数量。
在以下实施例以及本申请通篇中，以下缩写具有如下的含义。如果未定义，则数据具有它们被公认的含义。
Figure BDA00003570595300411
Figure BDA00003570595300421
Figure BDA00003570595300431
制备A(步骤A)
(2E)-庚-2-烯二酸二甲酯
将5-氧代戊酸甲酯(1.9g，14.6mmol)和(乙氧甲酰基亚甲基)三苯基膦(5.0g，14.9mmol)在甲苯(50mL)中的溶液回流8小时。在真空下除去溶剂，并将粗品通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:AcOEt/己烷2/8)，得到1.32g(48%收率)，为标题化合物的无色油状物。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.61-1.75(m,2H)2.16-2.27(m,2H)2.27-2.35(m,2H)3.58(s,3H)3.64(s,3H)5.87(dt,J=15.65,1.56Hz,1H)6.87(dt,J=15.65,6.94Hz,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
(2Z)-5,5-二甲基庚-2-烯二酸二甲基酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm0.98(s,6H)2.24(s,2H)2.63(dt,J=7.75,1.65Hz,2H))3.57(m,3H)3.62(s,3H)5.90(dt,J=11.60,1.65Hz,1H)6.38(dt,J=11.60,7.75Hz,1H)
(2E)-5,5-二甲基庚-2-烯二酸二甲基酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm0.96(s,6H)2.21(s,2H)2.22-2.24(m,2H)3.58(s,3H)3.65(s,3H)5.90(dt,J=15.50,5.85Hz,1H)6.88(dt,J=15.50,7.80Hz,1H)
(2E)-己-2-烯二酸二甲基酯
(2E)-辛-2-烯二酸二甲基酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.36-1.47(m,4H)1.37-1.57(m,2H)2.20(qd,J=7.05,1.60Hz,2H)2.31(t,J=7.32Hz,2H)3.58(s,3H)3.64(s,3H)5.88(dt,J=15.65,1.60Hz,1H)6.87(dt,J=15.65,7.05Hz,1H)
(2E)-辛-2-烯二酸1-乙酯8-甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.20(t,J=7.16Hz,3H)1.36-1.46(m,2H)1.47-1.57(m,2H)2.20(qd,J=7.10,1.46Hz,2H)2.31(t,J=7.14Hz,2H)3.58(s,3H)4.10(q,J=7.16Hz,2H)5.86(dt,J=15.56,1.46Hz,1H)6.86(dt,J=15.56,7.10Hz,1H)
(2E)-5,5-二甲基庚-2-烯二酸1-乙酯7-甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm0.96(s,6H)1.21(t,J=7.08Hz,3H)2.21(s,2H)2.22(dd,J=7.87,1.30Hz,2H)3.58(s,3H)4.11(q,J=7.08Hz,2H)5.88(dt,J=15.47,1.30Hz,1H)6.86(dt,J=15.47,7.87Hz,1H)
(2E)-庚-2-烯二酸1-乙酯7-甲基酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.20(t,J=7.14Hz,3H)1.68(quin,J=7.30Hz,2H)2.15-2.27(m,2H)2.31(t,J=7.30Hz,2H)3.58(s,3H)4.11(q,J=7.14Hz,2H)5.85(dt,J=15.65,1.59Hz,1H)6.86(dt,J=15.65,6.94Hz,1H)
制备B(步骤B)
4-(4-甲氧基-4-氧代丁基)-1H-吡咯-3-甲酸甲酯
Figure BDA00003570595300451
在氩气下将TOSMIC(1.15g，5.9mmol)在THF(15mL)中的溶液滴加至在-78°C冷却的1M LiN(TMS)2在THF(5.9mL，5.9mmol)中的溶液中。在-78°C40分钟后，在-78°C缓慢加入(2E)-庚-2-烯二酸二甲酯(1.1g，5.9mmol)在THF(15mL)中的溶液。将该溶液搅拌10分钟，然后移去冷却浴，并使该反应混合物在室温加温。将THF蒸发，并将残余物在H2O(200mL)和DCM(200mL)之间分配。将水层用DCM萃取，并将合并的有机层经Na2SO4干燥(anidrified)，过滤，并浓缩，得到残余物，将其经硅胶色谱分离(洗脱剂:AcOEt/己烷3/7)，得到633mg(收率:40%)标题化合物，为白色固体。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.77(quin,J=7.45Hz,2H)2.28(t,J=7.45Hz,2H)2.62(t,J=7.45Hz,2H)3.57(s,3H)3.66(s,3H)6.60(t,J=2.20Hz,1H)7.32(dd,J=3.17,2.20Hz,1H)11.15(br.s.,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
4-(4-甲氧基-2,2-二甲基-4-氧代丁基)-1H-吡咯-3-甲酸甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm0.90(s,6H)2.06(s,2H)2.74(s,2H)3.65(s,3H)6.60(s,1H)7.33(t,J=2.56Hz,1H)11.21(br.s.,1H)11.84(br.s.,1H)
4-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1H-吡咯-3-甲酸甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.52-2.58(m,2H)2.83-2.90(m,2H)3.58(s,3H)3.67(s,3H)6.60(t,J=2.25Hz,1H)7.33(dd,J=3.17,2.25Hz,1H)11.16(br.s.,1H)
4-(5-甲氧基-5-氧代戊基)-1H-吡咯-3-甲酸甲酯
MS计算值:240.1231；MS实测值:240.1226
4-(4-甲氧基-2,2-二甲基-4-氧代丁基)-1H-吡咯-3-甲酸乙酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm0.89(s,6H)1.24(t,J=7.08Hz,3H)2.15(s,2H)2.73(s,2H)3.56(s,3H)4.12(q,J=7.08Hz,2H)6.59(t,J=2.30Hz,1H)7.31(dd,J=3.11,2.30Hz,1H)11.21(br.s.,1H)
4-(4-甲氧基-4-氧代丁基)-1H-吡咯-3-甲酸乙酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.24(t,J=7.14Hz,3H)1.70-1.83(m,2H)2.28(t,J=7.51Hz,2H)2.61(t,J=7.51Hz,2H)3.57(s,3H)4.13(q,J=7.14Hz,1H)6.59(t,J=2.20Hz,1H)7.31(dd,J=3.17,2.20Hz,1H)11.13(br.s.,1H)
制备C(步骤C)
4-[4-(甲氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]丁酸
Figure BDA00003570595300461
将4-(4-甲氧基-4-氧代丁基)-1H-吡咯-3-甲酸甲酯(50mg，0.220mmol)混悬于无水二噁烷(2mL)中，并加入H2O(0.5mL)和LiOH(5.3mg，0.220mmol)。将该反应混合物在室温搅拌4小时。将该反应溶液用1N HCl酸化，并加入AcOEt(50mL)和H2O(20mL)。将水层用AcOEt萃取，并将合并的有机层经Na2SO4纯化，过滤，并浓缩，得到46mg(定量收率)标题化合物，为白色固体。
MS计算值:212.0918；MS实测值:212.0917
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.74(quin,J=7.50Hz,2H)2.19(t,J=7.50Hz,2H)2.62(t,J=7.50Hz,2H)3.66(s,3H)6.60(t,J=2.05Hz,1H)7.32(dd,J=3.10,2.05Hz,1H)11.14(br.s.,1H)11.93(br.s.,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
4-[4-(甲氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]-3,3-二甲基丁酸
MS计算值:240.1230；MS实测值:240.1229
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm0.90(s,6H)2.06(s,2H)2.74(s,2H)3.65(s,3H)6.60(s,1H)7.33(t,J=2.56Hz,1H)11.21(br.s.,1H)11.84(br.s.,1H)
3-[4-(甲氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]丙酸
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.45(t,J=7.50Hz,2H)2.84(t,J=7.50Hz,2H)3.67(s,3H)6.60(t,J=2.20Hz,1H)7.33(dd,J=3.17,2.20Hz,1H)11.15(br.s.,1H)11.96(br.s.,1H)
5-[4-(甲氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]戊酸
MS计算值:248.0893；MS实测值:248.0896
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.45-1.56(m,4H)2.20(t,J=6.90Hz,2H)2.60(t,J=6.90Hz,2H)3.66(s,3H)6.59(t,J=2.20Hz,1H)7.31(dd,J=3.17,2.20Hz,1H)11.11(br.s.,1H)11.92(br.s.,1H)
4-[4-(乙氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]-3,3-二甲基丁酸
4-[4-(乙氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]丁酸
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.24(t,J=7.08Hz,3H)1.74(quin,J=7.50Hz,2H)2.19(t,J=7.50Hz,2H)2.61(t,J=7.50Hz,2H)4.14(q,J=7.08Hz,2H)6.59(t,J=2.20Hz,1H)7.31(dd,J=3.17,2.20Hz,1H)11.12(br.s.,1H)11.92(br.s.,1H)
制备D(步骤Ca)
4-[4-(乙氧基羰基)-5-甲基-1H-吡咯-3-基]丁酸
Figure BDA00003570595300471
将6-氨基-5-氧代己酸盐酸盐(9.73g，49.8mmol)溶于H2O(35mL)中，并将乙酰乙酸乙酯(5.51g，42.34mmol)和AcONa(20.3g，14.95mmol)加入上述溶液中。将该反应溶液回流1小时，冷却至室温，并加入0.5N HCl直至pH约5。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩，得到7.15g(收率:60%)标题化合物，为棕色固体。
MS计算值:240.1231；MS实测值:240.1225
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.25(t,J=7.14Hz,3H)1.71(quin,J=7.50Hz,2H)2.18(t,J=7.50Hz,2H)2.36(s,3H)2.56(t,J=7.50Hz,2H)4.13(q,J=7.14Hz,2H)6.39(d,J=2.32Hz,1H)10.91(br.s.,1H)11.90(br.s.,1H)
制备E(步骤D)
7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
Figure BDA00003570595300481
将4-[4-(甲氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]丁酸(500mg，2.36mmol)溶于TFA(3mL)中。加入TFAA(0.329mL，2.36mmol)，并将该反应混合物在室温搅拌1小时。将有机溶剂蒸发至干燥，将残余物混悬于Et2O(15mL)中，并过滤，得到320mg(收率:64%)标题化合物，为淡黄色固体。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.02(quin,J=6.30Hz,2H)2.40(t,J=6.30Hz,2H)2.91(t,J=6.30Hz,2H)3.72(s,3H)7.58(d,J=3.42Hz,1H)12.38(br.s.,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
5,5-二甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm0.97(s,6H)2.30(s,2H)2.82(s,2H)3.72(s,3H)7.60(d,J=3.42Hz,1H)12.38(br.s.,1H)
6-氧代-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-3-甲酸甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.71-2.80(m,2H)2.87-2.93(m,2H)3.74(s,3H)7.85(s,1H)12.37(br.s.,1H)
8-氧代-1,4,5,6,7,8-六氢环庚三烯并[b]吡咯-3-甲酸甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.70-1.80(m,2H)1.81-1.89(m,2H)2.59-2.65(m,2H)3.06-3.15(m,2H)3.70(s,3H)7.51(d,J=3.66Hz,1H)12.01(br.s.,1H)
5,5-二甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.03(s,6H)1.26(t,J=7.08Hz,3H)2.30(s,2H)2.83(s,2H)4.19(q,J=7.08Hz,2H)7.57(d,J=3.42Hz,1H)12.36(br.s.,1H)
7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.24(t,J=7.08Hz,3H)1.74(quin,J=7.50Hz,2H)2.19(t,J=7.50Hz,2H)2.61(t,J=7.50Hz,2H)4.14(q,J=7.08Hz,2H)6.59(t,J=2.20Hz,1H)7.31(dd,J=3.17,2.20Hz,1H)11.12(br.s.,1H)11.92(br.s.,1H)
2-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
MS计算值:222.1125；MS实测值:222.1136
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.27(t,J=7.08Hz,3H)1.99(quin,J=6.30Hz,2H)2.36(t,J=6.30Hz,2H)2.43(s,3H)2.87(t,J=6.30Hz,2H)4.18(q,J=7.08Hz,2H)12.15(br.s.,1H)
制备F(步骤E)
1-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
向7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯(300mg，1.55mmol)在干燥DMF(5mL)中的溶液中加入K2CO3(429mg，3.10mmol)和甲基碘(0.193mL，3.10mmol)。将该反应混合物在室温搅拌3小时，然后加入H2O(100mL)，并将产物用DCM(3x30mL)萃取。将有机部分经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩，得到305mg(收率:95%)淡黄色固体。
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.95-2.03(m,2H)2.40(t,J=6.15Hz,2H)2.91(t,J=6.04Hz,2H)3.72(s,3H)3.85(s,3H)7.71(s,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
1-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢环戊二烯并[b]吡咯-3-甲酸甲酯
MS计算值:194.0812；MS实测值:194.0810
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.72-2.81(m,2H)2.83-2.92(m,2H)3.73(s,3H)3.74(s,3H)7.81-7.91(m,1H)
1,5,5-三甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
MS计算值:236.1281；MS实测值:236.1281
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.02(s,6H)2.30(s,2H)2.83(s,2H)3.72(s,3H)3.85(s,3H)7.72(s,1H)
1-甲基-8-氧代-1,4,5,6,7,8-六氢环庚三烯并[b]吡咯-3-甲酸甲酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.60-1.74(m,4H)2.53-2.62(m,2H)3.13(t,J=6.04Hz,2H)3.68(s,3H)3.78(s,3H)7.66(s,1H)
1,5,5-三甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
MS计算值:250.1438；MS实测值:250.1444
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.02(s,6H)1.26(t,J=7.08Hz,3H)2.30(s,2H)2.83(s,2H)3.85(s,3H)4.19(q,J=7.08Hz,2H)7.70(s,1H)
1-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
MS计算值:222.1125；MS实测值:222.1134
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.26(t,J=7.16Hz,3H)1.93-2.05(m,2H)2.40(t,J=6.10Hz,2H)2.92(t,J=6.10Hz,2H)3.86(s,3H)4.19(q,J=7.16Hz,2H)7.70(s,1H)
1-(甲氧基甲基)-2-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
MS计算值:266.1387；MS实测值:266.1376
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.29(t,J=7.12Hz,3H)1.92-2.03(m,2H)2.39-2.45(m,2H)2.53(s,3H)2.93(t,J=6.16Hz,2H)3.19(s,3H)4.22(q,J=7.12Hz,2H)5.75(s,2H)
1,2-二甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
MS计算值:236.1281；MS实测值:236.1283
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.28(t,J=7.08Hz,3H)1.95(quin,J=6.25Hz,2H)2.38(t,J=6.25Hz,2H)2.48(s,3H)2.90(t,J=6.25Hz,2H)3.83(s,3H)4.20(q,J=7.08Hz,2H)
制备G(步骤F)
(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
Figure BDA00003570595300511
将1-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯(288mg，1.39mmol)用三(二甲基氨基)甲烷(2.4mL，13.9mmol)处理，并将该反应混合物在90°C搅拌10小时。在减压下除去挥发物，并将残余物未经进一步纯化地使用。
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
(6E)-5,5-二甲基-6-[(甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
MS计算值:263.1390；MS实测值:263.1384
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.15(s,6H)2.74(s,2H)2.97(d,J=5.05Hz,3H)3.64-3.73(m,3H)6.91(d,J=12.30Hz,1H)7.40(d,J=3.30Hz,1H)9.58(dd,J=12.30,5.05Hz,1H)12.00(br.s.,1H)
(7E)-7-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-甲基-8-氧代-1,4,5,6,7,8-六氢环庚三烯并[b]吡咯-3-甲酸甲酯
MS计算值:277.1547；MS实测值:277.1554
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.76(quin,J=6.80Hz,2H)2.32(t,J=6.80Hz,2H)2.89(t,J=6.80Hz,2H)3.07(s,6H)3.69(s,3H)3.74(s,3H)7.36(s,1H)7.51(s,1H)
(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.25(t,J=7.14Hz,3H)2.76-2.89(m,4H)3.05(s,6H)3.87(s,3H)4.17(q,J=7.14Hz,2H)7.29(s,1H)7.53(s,1H)
(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-2-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
MS计算值:277.1547；MS实测值:277.1544
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.26(t,J=7.08Hz,3H)2.41(s,3H)2.77-2.83(m,2H)2.85-2.91(m,2H)3.04(s,6H)4.16(q,J=7.08Hz,2H)7.26(s,1H)11.86(br.s.,1H)
(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-(甲氧基甲基)-2-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯
(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.5min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.80-2.84(m,2H)2.88-2.92(m,2H)3.06(s,6H)3.70(s,3H)7.31(s,1H)7.41(d,J=2.75Hz,1H)12.06(br.s.,1H)。
(6E)-1-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
制备H(步骤E)
1-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯
Figure BDA00003570595300531
在室温向7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯(100mg0.52mmol)、4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(105mg，0.52mmol)和三苯基膦(136mg，0.52mmol)在无水THF(5mL)中的混合物中加入二氮杂二甲酸二叔丁基酯(DTAD)(120mg，0.52mmol)。将该混合物在室温搅拌8小时。HPLC/MS表明40%转化和60%SM剩余。加入试剂三苯基膦(136mg，0.52mmol)和DTAD(120mg，0.52mmol)，将该混合物搅拌4小时。HPLC/MS小时80%转化和20%SM剩余。再次加入试剂TPP(136mg，0.52mmol)和DTAD(120mg，0.526mmol)，并将该溶液再搅拌4小时。在真空下除去挥发物，将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(己烷/EtOAc7/3)，得到140mg(70%收率)标题化合物，为白色固体。
实施例1(步骤G)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-O-甲基，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300541
向(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯(365mg，1.39mmol)在DMF(5mL)中的混悬液中加入N-(4-溴-2-甲氧基-苯基)-胍(340mg，1.39mmol)。将该混合物在120°C搅拌3小时。将得到的混合物在室温冷却，并蒸发至干燥。将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:AcOEt/己烷4/6)，得到306mg(收率:50%)标题化合物，为淡橙色固体。
MS计算值:443.0714；MS实测值:443.0704
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.76(t,J=7.81Hz,2H)2.93(t,J=7.81Hz,2H)3.72(s,3H)3.88(s,3H)4.03(s,3H)7.12(dd,J=8.60,2.20Hz,1H)7.20(d,J=2.20Hz,1H)7.65(d,J=0.49Hz,1H)7.91(s,1H)8.07(d,J=8.60Hz,1H)8.21(s,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
MS计算值:457.087；MS实测值:457.0868
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.28(t,J=7.08Hz,3H)2.51(br.s.,3H)2.75-2.83(m,2H)2.91-2.98(m,2H)3.92(s,3H)4.19(q,J=7.08Hz,2H)7.13(dd,J=8.65,2.20Hz,1H)7.20(d,J=2.20Hz,1H)7.60(s,1H)8.17(s,1H)8.50(d,J=8.65Hz,1H)12.07(s,1H)
9-甲基-2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基，X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-]
MS计算值:447.2503；MS实测值:447.2485
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.27(t,J=7.08Hz,3H)2.22(s,3H)2.42-2.47(m,4H)2.70-2.77(m,2H)2.89-2.95(m,2H)3.02-3.09(m,4H)4.08(s,3H)4.19(q,J=7.08Hz,2H)6.84-6.90(m,2H)7.45-7.53(m,2H)7.61(s,1H)8.14(s,1H)8.97(s,1H)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300552
MS计算值:457.0870；MS实测值:457.0876
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.27(t,J=7.08Hz,3H)2.71-2.83(m,2H)2.89-2.98(m,2H)3.88(s,3H)4.03(s,3H)4.20(q,J=7.08Hz,2H)7.12(dd,J=8.60,2.20Hz,1H)7.20(d,J=2.20Hz,1H)7.63(s,1H)7.92(s,1H)8.06(d,J=8.60Hz,1H)8.20(s,1H)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酸甲酯[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-O-甲基，R3=甲基，R4=H，A=-(CH2)3-]
Figure BDA00003570595300561
MS计算值:457.0870；MS实测值:457.0851
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.92-2.07(m,2H)2.91(t,J=7.08Hz,2H)3.71(s,3H)3.85(s,3H)3.86(s,3H)7.13(dd,J=8.61,2.20Hz,1H)7.20(d,J=2.20Hz,1H)7.66(s,1H)7.93-8.08(m,2H)8.30(s,1H)
2-氨基-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=H，X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300562
9-(甲氧基甲基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基，X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=甲氧基甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300563
实施例2(转化3)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-OH,R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300571
将2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(300mg，0.68mmol)混悬于二噁烷(10mL)中，并在回流温度用2N NaOH溶液(5.1mL，10.2mmol)处理3小时。加入H2O(50mL)，并将该溶液用HCl2N酸化。通过过滤收集得到的沉淀，得到211mg(收率72%)标题化合物，为白色固体。
MS计算值:429.0557；MS实测值:429.0566
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.73(t,J=7.93Hz,2H)2.93(t,J=7.93Hz,2H)3.88(s,3H)4.03(s,3H)7.12(dd,J=8.67,2.20Hz,1H)7.20(d,J=2.20Hz,1H)7.57(s,1H)7.88(s,1H)8.08(d,J=8.67Hz,1H)8.20(s,1H)12.00(br.s.,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-OH,R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300572
MS计算值:443.0714；MS实测值:443.0703
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.53(s,3H)2.67-2.74(m,2H)2.87-2.97(m,2H)3.88(s,3H)4.00(s,3H)7.12(dd,J=8.54,2.20Hz,1H)7.20(d,J=2.20Hz,1H)7.86(s,1H)8.09(d,J=8.54Hz,1H)8.16(s,1H)12.02(br.s.,1H)
2-氨基-9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=H,X=-NH-，R2=-OH,R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300581
实施例3(转化4)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物8)
Figure BDA00003570595300582
将2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸(206mg，0.48mmol)混悬于干燥的THF(10mL)中，并在氩气下加入SOCl2(0.7mL，9.6mmol)。将该反应混合物回流2小时，然后减压除去所有的挥发物。将粗制的残余物溶于干燥的DCM(10mL)中，然后加入DIPEA(0.43mL，2.4mmol)和2,6-二乙基苯胺(143mg，0.96mmol)，并将该反应混合物回流2小时。加入DCM(100mL)，并将有机相用H2O(3x25mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，并将溶剂蒸发至干燥，得到190mg(收率:70%)标题化合物，为浅黄色固体。
MS计算值:560.1656；MS实测值:560.1655
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.57Hz,6H)2.55(q,J=7.57Hz,4H)2.72-2.79(m,2H)2.95-3.02(m,2H)3.89(s,4H)4.08(s,3H)7.08-7.16(m,3H)7.16-7.24(m,2H)7.74(s,1H)7.88(s,1H)8.12(d,J=8.70Hz,1H)8.20(s,1H)9.05(s,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-NH2，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300591
实施例4(转化5)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物2)
Figure BDA00003570595300592
在0°C在氩气下向2,6-二乙基苯胺(300mg，2.01mmol)在干燥的THF(10mL)中的溶液中滴加1M LiN(TMS)2在THF中的溶液(4.02mL，4.02mmmol)。将该混合物在0°C搅拌10分钟，然后在0°C滴加在干燥的THF(10mL)中的2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯(0.315g，0.67mmol)。移去冰浴，并将该混合物在室温搅拌1小时。加入H2O(20mL)，并将该混合物用AcOEt(2x30mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，并将溶剂蒸发至干燥。将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:AcOEt/环己烷1/1)，得到355mg(92%收率)标题化合物，为淡黄色固体。
MS计算值:574.1812；MS实测值:574.1818
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.14(t,J=7.57Hz,6H)2.44(s,3H)2.58(q,J=7.57Hz,4H)2.71-2.81(m,2H)2.85-2.94(m,2H)3.89(s,3H)4.02(s,3H)7.10-7.16(m,3H)7.18-7.23(m,2H)7.85(s,1H)8.13(d,J=8.67Hz,1H)8.16(s,1H)8.84(s,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
N-(2,6-二乙基苯基)-9-(甲氧基甲基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲氧基甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物1)
MS计算值:624.3657；MS实测值:624.3660
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-(CH2)3-](化合物15)
Figure BDA00003570595300611
MS计算值:574.1812；MS实测值:574.1797
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.12(t,J=7.57Hz,6H)1.94-2.05(m,2H)2.55(q,J=7.57Hz,4H)2.92(t,J=7.14Hz,2H)3.88(s,3H)3.89(s,3H)7.09-7.20(m,4H)7.21(d,J=2.32Hz,1H)7.69(s,1H)7.98(s,1H)8.10(d,J=8.54Hz,1H)8.30(s,1H)9.05(s,1H)
实施例5(转化6)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物9)
Figure BDA00003570595300612
将在干燥的THF(5mL)中的Pd2(dba)3(10mg，0.010mmol)、2-二环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)-联苯(10mg，0.025mmol)和2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺(100mg，0.178mmol)装入经氩气冲洗的圆底烧瓶中。将烧瓶抽真空，并回填充氩气。加入LiN(TMS)2溶液(1M在THF中，1.39mL)和N-甲基哌嗪(0.058mL，0.522mmol)，并将该反应混合物在85°C加热0.5小时。然后将该反应混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发至干燥。将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:DCM/MeOH95/5)，得到72mg(70%收率)标题化合物，为黄色固体。
MS计算值:580.3395；MS实测值:580.3373
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.57Hz,6H)2.25(br.s.,3H)2.54(q,J=7.57Hz,4H)2.69-2.76(m,2H)2.91-2.99(m,2H)3.05-3.19(m,4H)3.82(s,3H)4.04(s,3H)6.49(dd,J=8.67,J=2.56Hz,1H)6.63(d,J=2.56Hz,1H)7.08-7.14(m,2H)7.16-7.23(m,1H)7.66(s,1H)7.69(s,1H)7.76(d,J=8.67Hz,1H)8.10(s,1H)9.03(s,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物3)
Figure BDA00003570595300621
MS计算值:648.4021；MS实测值:648.4026
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.13(t,J=7.57Hz,6H)1.47-1.61(m,2H)1.64-1.76(m,4H)1.88-1.98(m,2H)2.42(s,3H)2.52-2.63(m,8H)2.64-2.75(m,4H)2.83-2.92(m,2H)3.26-3.29(m,1H)3.54-3.65(m,2H)3.82(s,3H)3.98(s,3H)6.49(dd,J=8.65,2.50Hz,1H)6.63(d,J=2.40Hz,1H)7.08-7.15(m,2H)7.17-7.24(m,1H)7.62(s,1H)7.74(d,J=8.65Hz,1H)8.06(s,1H)8.81(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物4)
Figure BDA00003570595300631
MS计算值:622.3864；MS实测值:622.3868
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.13(t,J=7.57Hz,6H)1.44-1.60(m,2H)1.68-1.90(m,2H)2.23(br.s.,6H)2.42(s,3H)2.58(q,J=7.57Hz,4H)2.60-2.69(m,2H)2.69-2.75(m,2H)2.83-2.93(m,2H)3.61-3.70(m,2H)3.82(s,3H)3.98(s,3H)6.49(dd,J=8.70,2.50Hz,1H)6.63(d,J=2.50Hz,1H)7.06-7.16(m,2H)7.17-7.24(m,1H)7.62(s,1H)7.74(d,J=8.70Hz,1H)8.06(s,1H)8.81(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物5)
Figure BDA00003570595300632
MS计算值:594.3551；MS实测值:594.3554
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.13(t,J=7.57Hz,6H)2.25(s,3H)2.42(s,3H)2.58(q,J=7.57Hz,4H)2.68-2.79(m,2H)2.84-2.91(m,2H)3.07-3.17(m,4H)3.82(s,3H)3.99(s,3H)6.49(dd,J=8.80,2.45Hz,1H)6.63(d,J=2.45Hz,1H)7.06-7.17(m,2H)7.17-7.24(m,1H)7.62(s,1H)7.77(d,J=8.80Hz,1H)8.07(s,1H)8.82(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物6)
Figure BDA00003570595300641
MS计算值:624.3657；MS实测值:624.3643
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.13(t,J=7.57Hz,6H)2.42(s,3H)2.44-2.49(m,6H)2.58(q,J=7.57Hz,4H)2.73(m,2H)2.88(m,2H)3.06-3.20(m,4H)3.49-3.61(m,2H)3.82(s,3H)3.99(s,3H)4.41(br.s.,1H)6.48(dd,J=8.70,2.35Hz,1H)6.63(d,J=2.35Hz,1H)7.04-7.16(m,2H)7.17-7.23(m,1H)7.63(s,1H)7.76(d,J=8.70Hz,1H)8.06(s,1H)8.82(s,1H)
2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基，X=-NH-，R2=-NH2,R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物7)
Figure BDA00003570595300642
MS计算值:462.2612；MS实测值:462.2595
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm2.22(s,3H)2.38(s,3H)2.43-2.47(m,4H)2.61-2.69(m,2H)2.73-2.81(m,2H)3.06-3.13(m,4H)3.80(s,3H)3.93(s,3H)6.47(dd,J=8.70,2.56Hz,1H)6.61(d,J=2.56Hz,1H)6.89(br.s.,2H)7.58(s,1H)7.74(d,J=8.70Hz,1H)8.04(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物10)
Figure BDA00003570595300651
MS计算值:608.3708；MS实测值:608.3712
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.57Hz,6H)1.41-1.61(m,,2H)1.77-1.92(m,2H)2.17-2.32(m,7H)2.54(q,J=7.57Hz,46H)2.60-2.68(m,2H)2.69-2.77(m,2H)2.90-3.01(m,2H)3.59-3.64(m,2H)3.82(s,3H)4.03(s,3H)6.49(dd,J=8.80,2.56Hz,1H)6.63(d,J=2.56Hz,1H)7.05-7.16(m,2H)7.16-7.23(m,1H)7.66(s,1H)7.69(s,1H)7.74(d,J=8.80Hz,1H)8.10(s,1H)9.03(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物11)
Figure BDA00003570595300661
MS计算值:634.3864；MS实测值:634.3874
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.57Hz,6H)1.45-1.60(m,2H)1.64-1.74(m,4H)1.87-1.99(m,2H)2.04-2.16(m,1H)2.54(q,J=7.57Hz,4H)2.65-2.81(m,4H)2.90-3.03(m,2H)3.50-3.66(m,2H)3.82(s,3H)4.04(s,3H)6.49(dd,J=8.70,2.50Hz,1H)6.63(d,J=2.50Hz,1H)7.04-7.15(m,2H)7.15-7.29(m,1H)7.65(s,1H)7.69(s,1H)7.74(d,J=8.70Hz,1H)8.10(s,1H)9.03(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-[(4-{[3-(二甲基氨基)丙基](甲基)氨基}-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-{[3-(二甲基氨基)丙基]甲基氨基}-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物12)
Figure BDA00003570595300662
MS计算值:596.3708；MS实测值:596.3782
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.51Hz,6H)1.64(quin,J=6.80Hz,2H)2.15(s,6H)2.24(t,J=6.80Hz,2H)2.54(q,J=7.51Hz,4H)2.65-2.75(m,2H)2.87(s,3H)2.90-2.97(m,2H)3.79(s,3H)4.01(s,3H)6.27(dd,J=8.80,2.50Hz,1H)6.39(d,J=2.50Hz,1H)7.09-7.14(m,2H)7.16-7.23(m,1H)7.57(d,J=8.80Hz,1H)7.62(s,1H)7.67(s,1H)8.06(s,1H)9.02(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物13)
Figure BDA00003570595300671
MS计算值:610.3500；MS实测值:610.3498
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.51Hz,6H)2.45(t,J=6.10Hz,2H)2.52-2.61(m,8H)2.68-2.76(m,2H)2.91-3.00(m,2H)3.09-3.16(m,4H)3.54(q,J=6.10Hz,2H)3.82(s,2H)4.04(s,2H)4.37-4.45(m,1H)6.48(dd,J=8.79,2.44Hz,1H)6.62(d,J=2.44Hz,1H)7.09-7.13(m,2H)7.15-7.23(m,1H)7.66(s,1H)7.69(s,1H)7.75(d,J=8.79Hz,1H)8.10(s,1H)9.03(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-(CH2)3-](化合物16)
Figure BDA00003570595300672
MS计算值:594.3551；MS实测值:594.3524
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.57Hz,6H)1.89-2.03(m,2H)2.23(s,3H)2.43-2.48(m,4H)2.55(q,J=7.57Hz,4H)2.91(t,J=7.14Hz,2H)3.09-3.15(m,4H)3.80(s,3H)3.81(s,3H)6.49(dd,J=8.70,2.50Hz,1H)6.63(d,J=2.50Hz,1H)7.08-7.15(m,2H)7.15-7.23(m,1H)7.61-7.68(m,2H)7.79(s,1H)8.19(s,1H)9.01(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺[(I)，R1=4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-(CH2)3-](化合物17)
Figure BDA00003570595300681
MS计算值:622.3864；MS实测值:622.3876
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.57Hz,6H)1.42-1.58(m,2H)1.76-1.89(m,2H)1.92-2.02(m,2H)2.13-2.19(m,1H)2.18-2.23(m,6H)2.43-2.48(m,2H)2.55(q,J=7.57Hz,4H)2.60-2.70(m,2H)2.92(t,J=7.08Hz,2H)3.62-3.72(m,2H)3.79(s,3H)3.80(s,3H)6.50(dd,J=8.75,2.44Hz,1H)6.62(d,J=2.44Hz,1H)7.05-7.14(m,2H)7.13-7.24(m,1H)7.58-7.68(m,2H)7.79(s,1H)8.19(s,1H)9.01(s,1H)
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3',2':6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺[(I)，R1=2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基，X=-NH-，R2=-N-(2,6-二乙基苯基)，R3=甲基，R4=H，A=-(CH2)3-](化合物18)
Figure BDA00003570595300691
MS计算值:648.4021；MS实测值:648.4023
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.11(t,J=7.57Hz,6H)1.42-1.59(m,2H)1.63-1.76(m,4H)1.83-2.04(m,4H)2.04-2.18(m,1H)2.42-2.50(m,6H)2.54(q,J=7.57Hz,4H)2.65-2.77(m,2H)2.92(t,J=7.14Hz,2H)3.51-3.65(m,2H)3.79(s,3H)3.80(s,3H)6.50(dd,J=8.85,2.50Hz,1H)6.62(d,J=2.45Hz,1H)7.03-7.15(m,2H)7.15-7.24(m,1H)7.58-7.68(m,2H)7.78(s,1H)8.19(s,1H)9.01(s,1H)
实施例6(转化2)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300692
向2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯(50mg，0.11mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入Cs2CO3(73mg，0.22mmol)和甲基碘(0.007mL，0.11mmol)。将该混合物在室温搅拌8小时，在真空下除去溶剂，然后加入DCM(10mL)，并将有机相用水(2x15mL)洗涤。将有机部分经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:AcOEt/己烷4/6)，得到40mg(收率:80%)标题化合物，为浅黄色固体。
MS计算值:471.1027；MS实测值:471.1031
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)δppm1.28(t,J=7.08Hz,3H)2.53(s,3H)2.72(t,J=7.63Hz,2H)2.91(t,J=7.63Hz,2H)3.88(s,3H)4.00(s,3H)4.20(q,J=7.08Hz,2H)7.12(dd,J=8.55,2.14Hz,1H)7.20(d,J=2.14Hz,1H)7.89(s,1H)8.07(d,J=8.55Hz,1H)8.17(s,1H)
根据该相同的方法，但使用适合的被取代的衍生物，制备以下的化合物:
2-氨基-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=-H,X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300701
实施例7(转化7)
2-({2-甲氧基-4-[(1-甲基哌啶-4-基)氨基甲酰基]苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=2-甲氧基-4-[(1-甲基哌啶-4-基)氨基甲酰基]苯基，X=-NH-，R2=-O-乙基，R3=甲基，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300702
向2-氨基-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯(87mg，0.280mmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中加入4-碘-3-甲氧基-N-(1-甲基哌啶-基)苯甲酰胺(112mg，0.254mmol)和Cs2CO3(92mg，0.280mmol)，并将所述烧瓶抽真空，并回填充氩气。然后装入Pd2(dba)3(4.7mg，0.005mmol)和Xantphos(6.5mg，0.011mmol)，并在氩气下将该混合物在80°C加热8小时。冷却至室温后，将该反应混合物浓缩，混悬于H2O(10mL)中，并用AcOEt(3x15mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干燥，将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:DCM/MeOH9/2)，得到100mg(收率:70%)标题化合物，为黄色固体。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.29(t,J=7.00Hz,3H)1.54-1.67(m,2H)1.72-1.83(m,2H)1.91-2.08(m,2H)2.20(br.s.,3H)2.55(s,3H)2.70-2.76(m,2H)2.77.2.86(m,2H)2.89-2.98(m,2H)3.69-3.81(m,1H)3.94(s,2H)4.05(s,2H)4.20(q,J=7.00Hz,2H)7.40-7.54(m,2H)7.97(s,1H)8.12(d,J=7.69Hz,1H)8.22(s,1H)8.29(d,J=8.24Hz,1H)
实施例8(转化4)
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-[(1S)-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-1-苯基乙基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=4-溴-2-甲氧基苯基，X=-NH-，R2=N-[(1S)-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-1-苯基乙基]，R3=甲基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物14)
Figure BDA00003570595300711
将在干燥DMF(5.0mL)中的2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸(50mg，0.116mmol)用DIPEA(0.056mL，0.033mmol)和TBTU(65mg，0.200mmol)处理。然后用2-[(2S)-2-氨基-2-苯基乙基]-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(3mg，0.011mmol)处理该混合物。将该反应混合物在室温搅拌4小时。将该反应混合物用水稀释，并通过过滤收集得到的沉淀，得到35mg(收率:45%)标题化合物，为黄色固体。
MS计算值:677.1507；MS实测值:677.1521
实施例9(步骤G)
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-乙基，R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-]和2-(二甲基氨基)-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=甲基，X=-N(Me)-，R2=-O-乙基，R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300721
向2g(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-2-甲基-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸乙酯(7.22mmol)在20mL无水DMF中的溶液中加入1.41g(14.4mmol)无水醋酸钾和4.0g(14.4mmol)甲基异硫脲硫酸盐。将该反应混合物在100°C搅拌3小时。将该混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并蒸发。将粗品经硅胶色谱纯化(乙酸乙酯:己烷4:6)，得到作为主化合物的0.8g8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯(40%)。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.79min。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.28(t,J=7.05Hz,3H)2.52(s,3H)2.82(t,J=8.05Hz,2H)2.95(t,J=8.05Hz,2H)3.33(s,3H)4.18(q,J=7.05Hz,2H)8.25(s,1H)12.13(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C15H18N3O2S[M+H]+计算值304.1114实测值304.1120；
和作为副产物的0.2g2-(二甲基氨基)-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯(10%)。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.44min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.27(t,J=7.08Hz,3H)2.50(s,3H)2.70(t,J=7.88Hz,2H)2.89(t,J=7.88Hz,2H)3.13(s,6H)4.18(q,J=7.08Hz,2H)7.99(s,1H)11.78(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C16H21N4O[M+H]+计算值301.1659实测值301.1655。
应用相同的方法，制备以下的化合物：
2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=R4=H，A=-CH2CH2-]
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.02min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.53(s,3H)2.86(t,J=8.06Hz,2H)2.99(t,J=8.06Hz,2H)3.73(s,3H)7.57(s,1H)8.31(s,1H)12.42(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C13H14N3O2S[M+H]+计算值276.0801实测值276.0799。
实施例10(转化2)
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=O-乙基，R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300731
向8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯(100mg，0.33mmol)在干燥DMF(2mL)中的溶液中加入Cs2CO3(160mg，0.495mmol)和2-碘丙烷(0.08ml，0.825mmol)。将该反应混合物在80°C搅拌8小时。HPLC/MS分析显示50%的转化，因此将另外量的试剂加入反应锅中，并在相同的温度再搅拌8小时。将该混合物倾入H2O(100mL)中，并将产物用EtOAc(3x30mL)萃取。将有机部分经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:AcOEt/己烷1/9)，得到75mg(收率:66%)标题化合物，为米白色固体。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt7.34min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.28(t,J=7.08Hz,3H)1.55(d,J=7.14Hz,6H)2.51(s,3H)2.66(s,3H)2.70-2.74(m,2H)2.87-2.91(m,2H)4.20(q,J=7.08Hz,2H)5.90(br.s.,1H)8.28(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C18H24N3O2S[M+H]+计算值346.1584实测值346.1595。
实施例11(转化2)
9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300741
在室温向2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(60mg0.218mmol)、4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(88mg，0.436mmol)和三苯基膦(120mg，0.436mmol)在无水THF(5mL)中的混合物中加入二氮杂二甲酸二叔丁基酯(DTAD)(100mg，0.436mmol)。将该混合物在室温搅拌18小时。HPLC/MS表明30%转化，且70%SM剩余，加入试剂在5mL THF中的三苯基膦(120mg，0.436mmol)和DTAD(100mg,0.436mmol)，将该混合物搅拌6小时。HPLC/MS显示70%转化，且30%SM剩余。再次加入试剂在5mL THF中的TPP(120mg，0.436mmol)和DTAD(100mg，0.436mmol)，将该溶液再搅拌18小时。在真空下除去挥发物，将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(己烷/EtOAc7/3)，得到69mg(70%收率)标题化合物。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt8.10min。
应用相同的方法，制备以下的化合物：
9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-8-碘-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-乙基，R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=I,A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300751
实施例12(转化2)
9-{顺式-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基}-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=O-甲基，R3=顺式-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300752
向2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(100mg0.363mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入反式-4-羟基环己基氨基甲酸叔丁酯(156mg0.727mmol)、Ph3P(190mg，0.727mmol)和DEAD(113μl,0.727mmol)。将该混合物在室温搅拌16小时，HPLC/MS显示未反应的原料(80%)和所需产物(20%)，然后加入另外的190mg Ph3P和113μL DEAD。5小时后，通过旋转蒸发除去溶剂，得到粘稠的橙色油状物。将SM(60%)和所需产物(40%)的混合物通过快速色谱经硅胶(使用20:80EtOAc-己烷作为洗脱剂)分离。向溶于THF(5mL)中的该混合物再加入反式-4-羟基环己基氨基甲酸叔丁酯(156mg0.727mmol)、Ph3P(190mg，0.727mmol)、DEAD(113μl,0.727mmol)，并在室温搅拌16小时。HPLC/MS显示未反应的原料(40%)和所需产物(60%)，然后加入另外的95mg Ph3P和56μLDEAD，并搅拌4小时。该反应在完成前需要另外补充五次试剂。在真空下除去挥发物，并将粗品经硅胶色谱(己烷/EtOAc8/2)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(160mg，93%收率)。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt8.11min。
实施例13(转化3)
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=OH,R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300761
将8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯(110mg，0.36mmol)混悬于二噁烷(10mL)中，并用2N NaOH溶液(4.0ml，8mmol)在95°C处理18小时。加入H2O(20mL)，并将该溶液用HCl2N酸化。将该混合物在乙酸乙酯和水之间分配，将有机层经Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到95mg(95%)标题化合物，为米白色固体。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.13min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.48(s,3H)2.52(s,3H)2.77-2.83(m,2H)2.92-2.96(m,2H)8.24(s,1H)12.05(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C13H14N3O2S[M+H]+计算值276.0801实测值276.0804。
以类似的方式操作，制备以下的化合物:
2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=OH,R3=R4=H，A=-CH2CH2-]
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.61min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.53(s,3H)2.85(t,J=7.75Hz,2H),2.98(t,J=7.75Hz,2H)7.48-7.52(m,1H)8.30(s,1H)12.32(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C12H12N3O2S[M+H]+计算值262.0645实测值262.0649。
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=OH,R3=异-丙基，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300772
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.43min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.55(d,J=6.96Hz,6H)2.48(s,3H)2.66(s,3H)2.71(t,J=7.78Hz,2H)2.89(t,J=7.75Hz,2H)8.27(s,1H)12.20(br.s.,1H)
HRMS(ESI)对于C16H20N3O2S[M+H]+计算值318.1271实测值318.1263。
2-(二甲基氨基)-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-N(Me)-，R2=OH,R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300781
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.17min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.54(s,3H)2.79(t,J=7.20Hz,2H)2.98(t,J=7.20Hz,2H)3.23(s,6H)7.49(s,1H)7.91(s,1H)12.20(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C14H17N4O2[M+H]+计算值273.1346实测值273.1346。
9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=OH,R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300782
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.13min。
9-{顺式4-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基}-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=OH,R3=顺式4-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300783
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.38min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.13(br.s.,1H),8.31(s,1H),8.04(s,1H),7.23(d,J=8.97Hz,1H),5.45(ddd,J=4.03,8.33,12.00Hz,1H),3.81(br.s.,1H),2.91-2.96(m,2H),2.72-2.80(m,2H),2.00-2.12(m,2H),1.77-1.86(m,2H),1.67-1.75(m,2H),1.59(m,2H),1.42(s,9H)。
HRMS(ESI)对于C23H31N4O4S[M+H]+计算值459.2061实测值459.2066。
2-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=单键,R2=OH,R3=H，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300791
实施例14(转化4)
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=异-丙基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物19)
Figure BDA00003570595300792
将8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸(100mg，0.363mmol)在干燥DMA(2.0mL)中用NH4Cl(0.062g，0.108mmol)、DIPEA(0.253mL，0.14mmol)和TBTU(175mg，0.544mmol)处理。将该反应混合物在室温搅拌18小时。将该反应混合物用饱和的NaHCO3稀释，并通过过滤收集得到的沉淀，用二乙醚洗涤，得到90mg(收率:90%)标题化合物，为黄色固体。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.63min。
HRMS(ESI)对于C16H21N4OS[M+H]+计算值317.1431实测值317.1435。
通过根据该方法操作，制备以下的化合物:
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物20)
Figure BDA00003570595300801
LC/MS(254nm)HPLC方法3Rt4.63min。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.42(s,3H)2.52(s,3H)2.79(t,J=8.05Hz,2H)2.87(t,J=8.05Hz,2H)6.53-7.04(m,2H)8.21(s,1H)11.79(br.s.,1H)
HRMS(ESI)对于C13H15N4OS[M+H]+计算值275.0961实测值275.0968。
2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=R4=H，A=-CH2CH2-](化合物21)
Figure BDA00003570595300802
LC/MS(254nm)HPLC方法3Rt5.43min。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.52(s,3H)2.81(t,J=7.78Hz,2H)3.00(t,J=7.78Hz,2H)6.79(br.s.,1H)7.31(br.s.,1H)7.61(d,J=3.11Hz,1H)8.27(s,1H)12.02(br.s.,1H)
HRMS(ESI)对于C12H13N4OS[M+H]+计算值261.0805实测值261.0814。
2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=异-丙基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物22)
LC/MS(254nm)HPLC方法3Rt4.48min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.44(d,J=6.59Hz,6H)2.75(t,J=7.78Hz,2H)2.98(t,J=7.78Hz,2H)5.63-5.74(m,1H)6.81(br.s.,1H)7.30(br.s.,1H)7.88(s,1H)8.28(s,1H)
HRMS(ESI)对于C15H19N4OS[M+H]+计算值303.1274实测值303.1277。
2-(二甲基氨基)-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-N(Me)-，R2=NH2,R3=H，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物23)
Figure BDA00003570595300811
LC/MS(254nm)HPLC方法3Rt2.65min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.43(s,3H)2.67(t,J=7.69Hz,2H)2.81(t,J=7.69Hz,2H)3.13(s,6H)6.50-6.95(m,2H)7.96(s,1H)11.45(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C14H18N5O[M+H]+计算值272.1506实测值272.1509。
4-[7-氨基甲酰基-2-(甲基硫烷基)-5,6-二氢-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-9-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300812
LC/MS(254nm)HPLC方法1Rt1.473min。
{顺式-4-[7-氨基甲酰基-2-(甲基硫烷基)-5,6-二氢-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-9-基]环己基}氨基甲酸叔丁酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=顺式4-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300821
LC/MS(254nm)HPLC方法1Rt1.501min。
2-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=单键,R2=NH2,R3=H，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物37)
Figure BDA00003570595300822
HRMS(ESI)对于C14H18N5O[M+H]+计算值229.1084实测值229.1085。
4-(2-氨基-7-氨基甲酰基-5,6-二氢-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-9-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯[(I)，R1=H,X=-NH-，R2=NH2,R3=4-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300823
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)d ppm1.43(s,9H)1.56-1.67(m,2H)1.98-2.05(m,2H)2.61(t,J=7.69Hz,2H)2.92(t,J=7.69Hz,2H)2.95-3.05(m,2H)4.01-4.16(m,2H)5.57-5.68(m,1H)6.37(br.s.,2H)6.75(br.s.,2H)7.80(s,1H)7.95(s,1H)
HRMS(ESI)对于C15H18N4O2S[M+H]+计算值413.2296；实测值413.2296。
实施例15(转化2)
9-(2-羟基乙基)-8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=2-羟基乙基，R4=甲基，A=-CH2CH2-](化合物24)
向8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺(30mg，0.109mmol)在干燥二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入2-碘乙醇(37μL,0.437mmol)和碳酸铯(106mg0.327mmol)。将得到的混合物在90°C加热8小时。冷却至室温后，将该混合物倾入水中，并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将粗品经硅胶色谱用DCM/MeOH95/5洗脱纯化，得到8mg标题化合物(25%)。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.32min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.45(s,3H)2.47(s,3H)2.74(t,J=8.05Hz,2H)2.83(t,J=8.05Hz,2H)3.68(q,J=5.90Hz,2H)4.54(t,J=5.90Hz,2H)4.86(t,J=5.90Hz,1H)6.70-7.09(m,2H)8.22(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C15H18N4O2S[M+H]+计算值319.1223实测值319.1215。
通过根据该方法操作，制备以下的化合物:
9-(2-羟基乙基)-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=2-羟基乙基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物25)
Figure BDA00003570595300832
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.21min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.47(s,3H)2.77(t,J=7.80Hz,2H)2.99(t,J=7.80Hz,2H)3.71(q,J=5.50Hz,2H)4.52(t,J=5.50Hz,2H)4.90(t,J=5.50Hz,1H)6.81(br.s.,1H)7.30(br.s.,1H)7.63(s,1H)8.27(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C14H17N4O2S[M+H]+计算值305.1067实测值305.1062。
实施例16(转化23)
2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=R4=H，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300841
将250mg2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(0.91mmol)和330mg(1.82mmol)DDQ在氯苯中的溶液在140°C加热2小时。在真空下除去挥发物，将残余物用乙酸乙酯溶解，并用饱和的NaHCO3水溶液洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将粗制的物质经硅胶柱色谱用乙酸乙酯和己烷(1:4)洗脱纯化，得到180mg标题化合物(90%)。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.72min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.73(s,3H)3.86(s,3H)7.74(d,J=8.61Hz,1H)8.20(d,J=8.61Hz,1H)8.26(d,J=3.11Hz,1H)9.37(s,1H)13.23(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C13H12N3O2S[M+H]+计算值274.0645实测值274.065。
使用与以下实施例中所述相同的方法，还合成以下的类似物:
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=H，R4=甲基，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300842
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.95min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.38(t,J=7.14Hz,3H)2.73(s,3H)2.77(s,3H)4.33(q,J=7.14Hz,2H)7.68(d,J=8.61Hz,1H)8.15(d,J=8.61Hz,1H)9.32(s,1H)12.93(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C15H16N3O2S[M+H]+计算值302.0958实测值302.0957。
2-(二甲基氨基)-8-甲基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=H，R4=甲基，A=-CH=CH-](化合物26)
Figure BDA00003570595300851
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.52min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.67(s,3H)3.30(s,6H)7.01(s,2H)7.35(d,J=8.61Hz,1H)7.67(d,J=8.61Hz,1H)9.04(s,1H)12.08(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C14H16N5OS[M+H]+计算值270.1350实测值270.1352。
实施例17(转化2)
9-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=甲基，R4=H，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300852
向2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(80mg0.29mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入Cs2CO3(191mg，0.58mmol)和甲基碘(18μL,0.29mmol)。将该混合物在室温搅拌8小时，在真空下除去溶剂，然后加入DCM(10mL)，并将有机相用水(2x15mL)洗涤。将有机部分经Na2SO4干燥，过滤，在真空下浓缩。通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:AcOEt/己烷4/6)，得到58mg(收率:70%)标题化合物，为浅黄色固体。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.4min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.68(s,3H)3.86(s,3H)4.49(s,3H)7.75(d,J=8.67Hz,1H)8.21(d,J=8.67Hz,1H)8.35(s,1H)9.35(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C14H14N3O2S[M+H]+计算值288.0801实测值288.0802。
实施例18(转化3)
9-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-OH,R3=R4=H，A=-CH=CH-]
将9-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(50mg，0.174mmol)混悬于二噁烷(5mL)中，并用2N NaOH溶液(2.0mL，4mmol)在95°C处理2小时。加入H2O(20mL)，并将该溶液用HCl2N酸化(pH～6)。将固体过滤，并用水和二乙醚洗涤，得到40mg(85%)标题化合物，为米白色固体。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.13min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.68(s,3H)4.48(s,3H)7.71(d,J=8.61Hz,1H)8.23(d,J=8.61Hz,1H)8.26(s,1H)9.34(s,1H)12.35(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C13H12N3O2S[M+H]+计算值274.0645实测值274.064。
根据相同的方法操作制备以下的化合物:
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-OH,R3=H，R4=甲基，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300871
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.21min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.73(s,3H)2.76(s,3H)7.65(d,J=8.61Hz,1H)8.18(d,J=8.61Hz,1H)9.31(s,1H)12.23(br.s.,1H)12.83(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C13H12N3O2S[M+H]+计算值274.0645实测值274.065。
9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-OH，R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300872
2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-OH,R3=H，R4=甲基，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300873
实施例19(转化4)
9-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=甲基，R4=H，A=-CH=CH-](化合物27)
Figure BDA00003570595300874
将在干燥DMA(2.0mL)中的9-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸(30mg，0.109mmol)用NH4Cl(0.040g0.74mmol)、DIPEA(0.120ml，0.68mmol)和TBTU(70mg，0.218mmol)处理。将该反应混合物在室温搅拌3小时。将该反应混合物用饱和的NaHCO3稀释，并将该产物用EtOAc(3x30mL)萃取。将有机部分经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下蒸发，得到27mg(收率:93%)标题化合物，为米白色固体。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.84min。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ2.68(s,3H)4.46(s,3H)7.01(br.s.,1H)7.58(br.s.,1H)7.64(d,J=8.61Hz,1H)8.19(s,1H)8.39(d,J=8.61Hz,1H)9.31(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C13H13N4OS[M+H]+计算值273.0805实测值273.0814。
根据相同的方法操作制备以下的化合物:
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=H，R4=甲基，A=-CH=CH-](化合物28)
Figure BDA00003570595300881
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.54min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ2.71(s,3H)2.72(s,3H)7.14(s,2H)7.58(d,J=8.61Hz,1H)8.04(d,J=8.61Hz,1H)9.29(s,1H)12.57(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C13H13N3O2S[M+H]+计算值273.0805实测值273.0807。
4-[7-氨基甲酰基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-9-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-NH2,R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH=CH-]
2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-NH2,R3=H，R4=H，A=-CH=CH-](化合物36)
Figure BDA00003570595300892
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)d ppm2.72(s,3H)6.98(br.s.,1H)7.62(d,J=8.61Hz,1H)7.64(br.s.,1H)8.28(s,1H)8.37(d,J=8.61Hz,1H)9.33(s,1H)12.80(br.s.,1H)
HRMS(ESI)对于C13H13N3O2S[M+H]+计算值259.0648；实测值259.0646。
实施例20(转化2)
9-(2-羟基乙基)-8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=2-羟基乙基，R4=甲基，A=-CH=CH-](化合物29)
Figure BDA00003570595300893
向8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺(20mg0.072mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入2-碘乙醇(24μL,0.288mmol)和碳酸铯(70mg0.216mmol)。将得到的混合物在80°C加热8小时。冷却至室温后，将该反应混合物倾入水(10mL)中，并用乙酸乙酯分配。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩。将粗品经硅胶色谱纯化(DCM/MeOH/丙酮85/0.5/1)，得到10mg标题化合物(45%)，为白色固体。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.31min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.62(s,3H)2.73(s,3H)3.85(q,J=5.50Hz,2H)4.92(t,J=5.50Hz,1H)4.98(t,J=5.50Hz,2H)7.29(br.s.,2H)7.62(d,J=8.61Hz,1H)8.01(d,J=8.61Hz,1H)9.28(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C15H17N4O2S[M+H]+计算值317.1067实测值317.1064。
以类似的方式操作，制备以下的化合物:
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=异-丙基，R4=甲基，A=-CH=CH-](化合物30)
Figure BDA00003570595300901
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt6.1min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.54-1.93(m,6H)2.63(s,3H)2.79(s,3H)4.96-5.10(m,1H)7.35(br.s.,2H)7.57-7.68(m,1H)7.90-8.04(m,1H)9.28(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C16H19N4OS[M+H]+计算值315.1274实测值315.1281。
9-乙基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=乙基，R4=H，A=-CH=CH-](化合物31)
Figure BDA00003570595300902
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt4.13min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.51(t,J=7.14Hz,3H)2.66(s,3H)4.94(q,J=7.14Hz,2H)7.02(br.s.,1H)7.56(br.s.,1H)7.65(d,J=8.61Hz,1H)8.28(s,1H)8.41(d,J=8.61Hz,1H)9.32(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C14H15N4OS[M+H]+计算值287.0961；287.0961。
实施例21(转化23)
{顺式-4-[7-氨基甲酰基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-9-基]环己基}氨基甲酸叔丁酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=顺式4-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基，R4=H，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300911
将15mg{顺式-4-[7-氨基甲酰基-2-(甲基硫烷基)-5,6-二氢-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-9-基]环己基}氨基甲酸叔丁酯(0.032mmol)和15mg(0.064mmol)DDQ在氯苯中的溶液在140°C加热2小时。在真空下除去挥发物，将残余物用乙酸乙酯溶解，并用饱和的NaHCO3水溶液洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将粗制的物质经硅胶柱色谱用DCM/MeOH(97:3)洗脱纯化，得到10mg标题化合物(71%)。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt5.72min。
实施例22(转化24)
2-(甲基硫烷基)-9-(哌啶-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯盐酸盐[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300921
将10mg9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(0.021mmol)溶于1,4二噁烷(2mL)中，并加入4M在1,4-二噁烷3mL(3mmol)中的HCl。将该混合物在室温搅拌1小时。在真空下除去挥发物，并将得到的残余物与二乙醚研磨，过滤，并干燥，得到8mg标题化合物(97%)。
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.64min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ82.08-2.19(m,2H)2.22-2.29(m,2H)2.54(s,3H)2.81(t,J=7.88Hz,2H)2.97(t,J=7.88Hz,2H)2.99-3.03(m,2H)3.44-3.51(m,2H)3.75(s,3H)5.51-5.59(m,1H)7.71(s,1H)8.38(s,1H)8.78(br.s.,1H)8.83(br.s.,1H)。
HRMS(ESI)对于C18H24N4O2S[M+H]+计算值359.1536实测值359.1531。
以类似的方式操作，制备以下的化合物:
2-(甲基硫烷基)-9-(哌啶-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物32)
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.61min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.91-2.11(m,2H)2.23-2.32(m,2H)2.53(s,3H)2.76(t,J=7.60Hz,2H)2.89-3.06(m,4H)3.45-3.56(m,2H)5.40-5.50(m,1H)6.89(br.s.,1H)7.45(br.s.,1H)7.83(s,1H)8.33(s,1H)8.85(br.s.,2H)。
HRMS(ESI)对于C17H23N5OS[M+H]+计算值344.154实测值344.1544。
9-(顺式4-氨基环己基)-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=顺式4-氨基环己基，R4=H，A=-CH2CH2-](化合物33)
Figure BDA00003570595300931
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.91min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.72-1.86(m,2H)1.89-2.01(m,4H)2.01-2.13(m,2H)2.76(t,J=7.70Hz,2H)2.94(t,J=7.70Hz,2H)3.43-3.54(m,1H)5.31-5.44(m,1H)6.93(br.s.,1H)7.16(br.s.,1H)8.00(s,1H)8.08(br.s.,3H)8.30(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C18H24N5OS[M+H]+计算值358.1696实测值358.1694。
9-(顺式-4-氨基环己基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=顺式4-氨基环己基，R4=H，A=-CH=CH-](化合物34)
Figure BDA00003570595300932
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.15min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.85-1.96(m,2H)2.00-2.07(m,2H)2.07-2.14(m,2H)2.17-2.29(m,2H)2.68(s,3H)3.51-3.58(m,1H)6.01-6.11(m,1H)7.11(br.s.,1H)7.54(br.s.,1H)7.67(d,J=8.61Hz,1H)8.13(br.s.,3H)8.38(d,J=8.61Hz,1H)8.64(s,1H)9.33(s,1H)。
HRMS(ESI)对于C18H22N5OS[M+H]+计算值356.1696实测值356.1694。
9-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=3-氨基-2,2-二甲基丙基，R4=H，A=-CH=CH-](化合物38)
Figure BDA00003570595300941
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.89min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),8.47(d,J=8.61Hz,1H),8.28(s,1H),7.83(br.s.,4H),7.69(d,J=8.79Hz,1H),7.08(br.s.,1H),5.11(s,2H),2.76(d,J=5.86Hz,2H),2.71(s,3H),1.02-1.07(m,6H)。HRMS(ESI)对于C17H22N5OS[M+H]+计算值344.1540实测值344.1544。
9-(氮杂环庚烷-3-基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=氮杂环庚烷-3-基，R4=H，A=-CH=CH-](化合物39)
Figure BDA00003570595300942
LC/MS(254nm)HPLC方法2Rt3.82min。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.80-9.09(m,2H),8.50(s,1H),8.43(d,J=8.61Hz,1H),7.72-7.75(m,1H),7.67(d,J=8.61Hz,1H),6.90-7.17(m,1H),6.26(br.s.,1H),3.21(m,2H),2.69(s,3H),2.32-2.46(m,3H),2.07-2.11(m,2H),1.91(m,1H)。
HRMS(ESI)对于C18H22N5OS[M+H]+计算值356.1540实测值356.1538。
2-氨基-9-(哌啶-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐[(I)，R1=H,X=-NH-，R2=NH2,R3=哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300951
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)d ppm1.95-2.11(m,2H)2.22-2.33(m,2H)2.53(s,3H)2.76(t,J=7.60Hz,1H)2.89-3.06(m,4H)3.45-3.55(m,2H)5.40-5.50(m,1H)6.89(br.s.,1H)7.45(br.s.,1H)7.83(s,1H)8.33(s,1H)8.85(br.s.,2H)
HRMS(ESI)对于C18H22N5O[M+H]+计算值344.1540；实测值344.1544。
2-(甲基硫烷基)-9-(哌啶-4-基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=NH2,R3=哌啶-4-基，R4=H，A=-CH=CH-](化合物35)
Figure BDA00003570595300952
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)d ppm1.80-1.94(m,2H)2.11-2.19(m,2H)2.71(s,3H)2.72-2-80(m,2H)3.15-3.24(m,2H)6.07-6-17(m,1H)7.01(br.s.,1H)7.63(br.s.,1H)7.66(d,J=8.61Hz,1H)8.45(d,J=8.61Hz,1H)8.55(s,1H)9.32(s,1H)
HRMS(ESI)对于C18H22N5O[M+H]+计算值245.1033；实测值245.1041。
实施例23(步骤G)
2-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=单键，R2=-O-甲基，R3=H，R4=H，A==-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300961
向(6E)-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯(50mg，0.2mmmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入盐酸乙脒(190mg，2.0mmol)和K2CO3(275mg，2.0mmol)，并将该混合物在微波辐照下在180°C加热1小时。在真空下除去挥发物，将残余物用DCM溶解，并用H2O洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将粗制的物质经硅胶柱色谱用DCM/MeOH(10:1)洗脱纯化，得到标题化合物20mg(40%)，为暗黄色固体。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)d ppm2.55(s,3H)2.85-2.90(m,2H)2.96-2.99(m,2H)3.72(s,3H)7.50(s,1H)8.35(s,1H)12.40(br.s.,1H)
HRMS(ESI)对于C18H22N5O[M+H]+计算值244.1081；实测值244.1087。
实施例24(步骤G)
2-氨基-9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=H,X=-NH-，R2=-O-甲基，R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300962
向(6E)-1-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-甲酸甲酯(10mg，0.023mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入碳酸胍(10mg，0.055mmol)。将该混合物在110°C搅拌8小时。将得到的混合物在室温冷却，并蒸发至干燥。将粗制的固体通过快速色谱经硅胶纯化(洗脱剂:AcOEt)，得到8mg(收率:80%)标题化合物，为棕色固体。
MS计算值:428.2293；MS实测值:428.2292
1H NMR(401MHz,DMSO-d6)d ppm1.43(s,9H)1.66-1.84(m,2H)1.92-2.04(m,2H)2.62-2.69(m,2H)2.86-2.92(m,2H)2.92-3.10(m,2H)3.71(s,3H)3.98-4.07(m,2H)5.59-5.72(m,1H)6.28(s,2H)7.72(s,1H)7.99(s,1H)
以类似的方式操作，制备以下的化合物:
2-氨基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=H,X=-NH-，R2=-O-甲基，R3=H，R4=H，A==-CH2CH2-]
Figure BDA00003570595300971
MS计算值:245.1033；MS实测值:245.1041
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)d ppm2.71(t,J=7.78Hz,2H)2.91(t,J=7.78Hz,2H)3.71(s,3H)6.08_(br.s.,2H)7.44(d,J=2.93Hz,1H)7.98(s,1H)12.09(br.s.,1H)
制备I
2-(甲基硫烷基)-8-碘--9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=H，R4=I,A=-CH=CH-]
向2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(100mg，0.363mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入N-碘代琥珀酰亚胺(3.25mg，1.44mmol)，并将该混合物在室温搅拌24小时。在真空下除去挥发物，将残余物用DCM溶解，并用H2O洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将粗制的物质经硅胶柱色谱用己烷/AcOEt(4:2)洗脱纯化，得到85mg标题化合物(60%)，为黄色固体。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)d ppm2.75(s,3H)3.89(s,3H)7.69(d,J=8.79Hz,1H)8.15(d,J=8.79Hz,1H)9.35(s,1H)13.75(s,1H)
MS计算值:399.9611；MS实测值:399.9610
实施例25(转化23)
9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基，R4=H，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300981
向9-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]-8-碘-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯(30mg，0.05mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入甲酸钠(7mg，10mmol)和Pd(PPh3)4(50mg,0.004mmol)，并将该混合物在120°C加热3小时。在真空下除去挥发物。将粗制的物质经硅胶柱色谱用DCM/MeOH(95:5)洗脱纯化，得到15mg标题化合物(65%)，为白色固体。
以类似的方式操作，制备以下的化合物:
2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸甲酯[(I)，R1=甲基，X=-S-，R2=-O-甲基，R3=H，R4=H，A=-CH=CH-]
Figure BDA00003570595300991
药理学
式(I)化合物是作为蛋白激酶抑制剂的活性成分，且因此可用于例如限制肿瘤细胞的未调节的增殖。
在疗法中，它们可以用于治疗各种肿瘤，例如上述定义的那些肿瘤，且可用于治疗其他细胞增殖性疾病，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤性息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化相关的血管平滑肌细胞增殖、肺纤维化、关节炎、肾小球肾炎和术后狭窄和再狭窄。
通过如下所述的测定法测定推定的MPS1抑制剂的抑制活性和选择的化合物的功效。
本文所用的短语形式和缩写具有如下含义：
Ci          居里
DMSO        二甲基亚砜
KDa         千道尔顿
microCi     微居里
mg          毫克
microg      微克
ng          纳克
L           升
mL          毫升
microL      微升
M           摩尔
mM          毫摩尔
microM      微摩尔
nM          纳摩尔
Et          乙基
重组MPS1全长蛋白的克隆、表达和纯化
MPS1全长(对应于全长序列的残基2-857，参见Swiss-Prot登记号P33981)是从存在于马中的全长人MPS1基因PCR扩增为克隆pGEX4t_MPS1。
使用正向寡核苷酸：
5’ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggcttactggaagttctgttccaggggcccgaatccgaggatttaagtggcagag3’
和反向寡核苷酸进行扩增：
5’ggggaccactttgtacaagaaagctgggttttatttttttcccctttttttttcaaaagtcttggaggatgaag3’]。
这两种寡核苷酸均在2009年12月30日公布的WO2009/156315中描述。
为了克隆目的，寡核苷酸包括attB位点以得到适合于使用
Figure BDA00003570595301004
技术(Invitrogen)克隆的attB-侧接的PCR产物。此外，为了纯化目的，正向引物包括蛋白酶切割位点。在pDONR201质粒中克隆得到的PCR产物，然后转入-修饰的杆状病毒表达载体pVL1393GST(Invitrogen)。根据
Figure BDA00003570595301002
手册中所述的方案进行克隆。
通过用该表达载体和病毒DNA、使用
Figure BDA00003570595301003
转染试剂盒(Pharmingen)共转染Sf9昆虫细胞生成杆状病毒。5天后回收病毒上清液，进行3个周期的扩增以增加病毒滴度。通过感染High5的昆虫细胞产生重组蛋白。在21℃感染72小时后，回收细胞，沉淀，在-80℃冷冻。为了纯化重组蛋白，融化沉淀，重新混悬于裂解缓冲液(PBS、NaCl150mM、甘油10%、CHAPS0.1%、DTT20mM、蛋白酶和磷酸酶抑制剂)，用Gaulin裂解。通过离心使裂解液澄清，上载于GST亲和柱。充分洗涤后，用特异性蛋白酶裂解重组蛋白，通过温育洗脱。
为了得到完全活化的酶，然后在25℃、在ATP1mM的存在下使所述蛋白质在激酶缓冲液(Hepes pH7.550mM、MgCl22.5mM、MnCl21mM、DTT1mM磷酸酶抑制剂)进行自磷酸化2小时；然后从脱盐柱上除去ATP。
MPS1激酶活性抑制剂的生化测定
使用转磷酸作用测定法测定公认的激酶抑制剂的抑制活性和选择的化合物的功效。
特异性肽或蛋白质底物被其特异性ser-thr或tyr激酶在用33P-γ-ATP示踪的ATP及其自身拥有的最佳缓冲液和辅因子的存在下转-磷酸化。
在磷酸化反应结束时，用过量的离子交换dowex树脂俘获98%以上未标记的ATP和放射性ATP；然后树脂因重力沉降在反应板的底部。
然后抽吸上清液，转入计数平板，然后通过β-计数评价。
试剂/测定条件
i.Dowex树脂制备
称重500g湿树脂(SIGMA，定制的树脂DOWEX1x8200-400目，2.5Kg)，用150mM甲酸钠（pH3.00）稀释至2L。
使该树脂沉降(几小时)，然后弃去上清液。
在几天内如上所述3次洗涤后，使树脂沉降，加入2个体积(相对于树脂体积)150mM甲酸钠缓冲液。
然后测定pH，pH应在约3.00。
洗涤的树脂稳定1周以上；在使用前将储备树脂保存在4℃。
ii.激酶缓冲液(KB)
用于MPS1测定的缓冲液由HEPES50mM、pH7.5、2.5mMMgCl2、1mM MnCl2、1mM DTT、3microM Na3VO4、2mMβ-甘油磷酸盐和0.2mg/mL BSA组成。
iii.测定条件
本测定法使用MPS15nM终浓度、在15microM ATP和1.5nM33P-γ-ATP的存在下进行；底物是P38-βtide，以200microM使用。
自动化dowex测定
本测试混合物由如下组成：
1)3x酶混合物(在激酶缓冲液3X中进行)，5微升/孔
2)3x底物和ATP混合物(在ddH2O中进行)与33P-γ-ATP，5微升/孔
3)3x测试化合物(稀释入ddH2O-3%DMSO)-5微升/孔
参见如下的化合物稀释和测定方案。
化合物稀释和测定方案如下所定义：
i.化合物的稀释
将测试化合物接受为1mM的100%DMSO溶液，分配至96或384孔板中：
a)为了进行抑制百分比研究(HTS)，使用Beckman NX自动化吸液平台以在ddH2O中3X浓度(30microM)(3%DMSO=终浓度)稀释1mM的各稀释培养板。相同仪器用于将稀释的母培养板分配成测试培养板。
b)为了进行IC50测定(KSS平台)，将1mM的100%DMSO溶液的100微升各化合物从原始培养板转入另一96孔培养板的第一列(A1-G1)；空置孔H1以用于内标抑制剂，通常是星形孢菌素。
自动化工作站(Biomek FX，Beckman)用于系列稀释，生成在100%DMSO中的1：3稀释液，从A1到A10行，并且用于在列中的所有7种化合物。此外，通过将5微升这第一组100%DMSO稀释培养板重新安排到384深孔-板中来制备4-5个拷贝的子板：将具有测试化合物系列稀释液的子板的1个拷贝在实验的当天解冻，用水以3X浓度重构，用于IC50测定试验。在标准实验中，全部化合物的最高浓度(3X)是30microM，而最低浓度是1.5nM。
每个384孔-培养板会包含用于Z’和信号对比背景评价的对比孔(总酶活性对比无酶活性)。
ii.测定方案
用5微升化合物稀释液(3X)制备V底384-孔培养板(测试培养板)，然后放入PlateTrak12自动化工作站(Perkin Elmer；自动机械具有一个384个头的用于启动测定的移液头+一个96个头的用于调配树脂的头)与一个用于酶混合(3X)的储器和一个用于ATP混合(3X)的储器。
在运转开始后，自动机械抽吸5微升ATP混合物，在头内部形成空气隙(2微升)，抽吸5微升MPS1混合物。接下来的调配入培养板使得激酶反应在由自动机械自身进行的3个循环混合后开始。
此时，恢复全部试剂的正确浓度。
自动机械在室温将培养板温育60分钟，然后通过吸取70微升dowex树脂混悬液进入反应混合物终止反应。在添加树脂后即刻进行3个循环的混合。
树脂混悬液极为稠密，为避免尖部堵塞，用宽口吸头以调配它。
在所有培养板停止后进行另一个混合循环，此时使用标准的尖部：然后使培养板静置约1小时，以使ATP俘获最大化。此时，将22微升上清液转入具有50微升Microscint40(Perkin-Elmer)的384-Optiplates(Perkin-Elmer)；轨道振荡5分钟后，用Perkin-ElmerTop Count放射性计数器读取培养板。
iii.数据分析
用SW软件包“Assay Explorer”的内部定制版分析数据，该软件包提供初步测定的%抑制或二次测定/hit证明途径中用于IC50测定的10-稀释曲线的S形拟合。
体外细胞增殖测定
将A2780人卵巢癌细胞、MCF7人乳腺癌细胞和MV-4-11(双表型B粒单核细胞白血病)细胞(1250个细胞/孔)接种在白色384孔-微孔板内的完全培养基(RPMI1640或EMEM＋10%胎牛血清)中，接种后24h用溶于0.1%DMSO的化合物处理。在37℃和5%CO2温育细胞，72小时后，使用CellTiter-Glo测定法(Promega)、按照制造商的说明处理培养板。
CellTiter-Glo是基于存在的ATP定量的同源方法，其为代谢活性细胞的指示剂。使用基于荧光素酶和导致光生成的D-荧光素的系统对ATP定量。发光信号与存在于培养物中的细胞数量成正比。
简言之，将25微升/孔试剂溶液加入到各孔中，5分钟振荡后，用Envision(PerkinElmer)发光计读取微孔板。发光信号与存在于培养物中的细胞数量成正比。
使用Assay Explorer(MDL)程序评价抑制活性，从而比较处理数据与对照数据。使用S形内插曲线计算IC50。
基于上述抑制测定，发现本发明式(I)的化合物具有良好的MPS1抑制活性，典型地具有0.001-5microM的IC50。
此外，本发明式(I)化合物显示良好的细胞增殖抑制活性，在A2780细胞中通常具有范围为0.010-5μM的IC50。
PIM-1激酶活性抑制剂的生化测定
使用转磷酸作用测定法测定公认的激酶抑制剂的抑制活性和选择的化合物的功效。
特异性肽或蛋白质底物被其特异性ser-thr或tyr激酶在用33P-γ-ATP示踪的ATP及其自身拥有的最佳缓冲液和辅因子的存在下转-磷酸化。
在磷酸化反应结束时，用过量的离子交换dowex树脂俘获98%以上未标记的ATP和放射性ATP；然后树脂因重力沉降在反应板的底部。
然后抽吸上清液，转入计数平板，然后通过β-计数评价。
试剂/测定条件
Dowex树脂制备
称重500g湿树脂(SIGMA，定制的树脂DOWEX1x8200-400目，2.5Kg)，用150mM甲酸钠（pH3.00）稀释至2L。
使该树脂沉降(几小时)，然后弃去上清液。
在几天内如上所述3次洗涤后，使树脂沉降，加入2个体积(相对于树脂体积)150mM甲酸钠缓冲液。
然后测定pH，pH应在约3.00。
洗涤的树脂稳定1周以上；在使用前将储备树脂保存在4℃。
激酶缓冲液(KB)
用于PIM-1测定的缓冲液由HEPES50mM、pH7.5、10mMMgCl2、1mM DTT、3microM NaVO3和0.2mg/ml BSA组成。
如Bullock AN等人,J.Biol.Chem.2005,280,41675-82中所述进行全长人PIM-1的表达和纯化。
在以下条件中通过自磷酸化的预活化的步骤之后所述酶显示线性动力学:
将1.7microM PIM1在28°C在125microM ATP的存在下温育1小时。
测定条件
ATP浓度:200microM
33P-γ-ATP:6nM
酶浓度:1nM
底物浓度Aktide(化学文摘服务社登记号324029-01-8):25microM
自动化dowex测定
本测试混合物由如下组成：
1)3x酶混合物(在激酶缓冲液3X中进行)，5微升/孔
2)3x底物和ATP混合物(在ddH2O中进行)与33P-γ-ATP，5微升/孔
3)3x测试化合物(稀释入ddH2O-3%DMSO)-5微升/孔
参见如下的化合物稀释和测定方案。
化合物的稀释
为了IC50测定，将测试化合物接受为1mM的100%DMSO溶液，分配至96孔板中：然后将化合物在新的96孔板的第一列(A1-G1)内铺板，100微升/孔。
自动化工作站(Biomek FX，Beckman)用于系列稀释，生成在100%DMSO中的1：3稀释液，从A1到A10行，用于在列中的所有化合物。此外，通过将5微升这第一组100%DMSO稀释板重新安排到384深孔-板中来制备4-5个拷贝的子板：具有测试化合物的这些系列稀释板的1个拷贝在研究当天解冻，用162微升/孔的水以工作浓度(3倍最终浓度浓度)重构，并用于IC50测定试验。在标准实验中，化合物的最高浓度(3X)通常为30microM，而最低浓度通常是1.5nM。
每个384孔-培养板生成至少一条标准抑制剂星状孢子碱的曲线以及用于Z’和信号对背景(S/B)比例的评价的对比孔(总酶活性对比无酶活性)。
测定方案
用如前述稀释的5微升化合物(3X)制备V底384-孔培养板(测试培养板)，然后放入PlateTrak12自动化工作站(Perkin Elmer；该自动机械具有一个用于启动测定的384-头的移液头+一个用于调配树脂的96-头的移液头)与一个用于酶混合(3X)的储器和一个用于ATP混合(3X)的储器。
用“Assay Explorer”SW软件包的内部定制版分析数据，该软件包提供在二次测定/hit证明途径中用于IC50测定的10-稀释曲线的S形拟合。
PIM-2激酶抑制测定的方法:Dowex技术
激酶缓冲液(KB)
用于PIM-2测定的缓冲液由HEPES50mM、pH7.5、1mMMgCl2、1mM DTT、3microM Na3VO4和0.2mg/mL BSA组成。
如Fedorov O等人,PNAS2007104,51,20523-28中所述进行全长人PIM-2的表达和纯化。
测定条件(最终浓度)
酶浓度=1.5nM
Aktide底物(化学文摘服务社登记号324029-01-8)=5microM
ATP=4microM
33P-γ-ATP=1nM
自动化Dowex测定
参见上文:与对于PIM-1描述相同的操作。
以下的表A报道了在上述特定的体外激酶测试中针对MPS1、PIM-1和PIM-2酶测试的本发明的一些代表性的式(I)化合物的实验数据(IC50microM)。
以下的表A还报道了现有技术中的一些最接近的化合物的抑制活性。
参比化合物1、2、3和4分别对应于上文引用的专利申请WO2008/065054中的编号M3、N9、N4和N10的化合物；这些化合物分别对应于本发明的第三、第五、第七和第六个放弃的化合物。
表A
Figure BDA00003570595301081
Figure BDA00003570595301091
Figure BDA00003570595301101
Figure BDA00003570595301111

Claims (27)

1.式(I)化合物或其可药用盐:
Figure FDA00003570595200011
其中
R1是氢、卤素或选自氨基、直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；
R2是选自-NR″R″′、-N(OR”’)R″和OR″的基团，其中R″和R″′各自独立地是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团，或者R″和R″′与它们所连接的氮原子一起可形成5至6元杂芳基或杂环基，其任选地包含一个另外的选自N、O和S的杂原子；
R3是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；
R4是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团；
X是单键或选自-NR′-、-CONR′-、-NH-CO-NH-、-O-、-S-、–SO2-和–OSO2-的二价基团，其中R′是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团，或者，R1和R’与它们所连接的氮原子一起可形成5至6元杂芳基或杂环基，其任选地包含一个另外的选自N、O和S的杂原子；
A是选自–CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-CH=CH-、-C(CH3)2-CH2-和-CH2-C(CH3)2的基团；
条件是排除以下化合物:
2-氨基-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯、
2-氨基-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸、
2-氨基-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺、
2-氨基-8-苯基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酸乙酯、
2-氨基-8-苯基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺、
2-氨基-9-甲基-8-苯基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺、和
2-氨基-9-甲基-8-苯基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺。
2.如权利要求1中所定义的式(I)化合物，其中:
X是–NR’-基团，且R2是选自-NHR″和-N(OR”’)R″的基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
3.如权利要求1或2中所定义的式(I)化合物，其中:
X是–NR’-基团；R2是-NHR″或-N(OR”’)R″基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
4.如权利要求1中所定义的式(I)化合物，其中:
X是-O-基团，且R2是选自-NHR″和-N(OR”’)R″的基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
5.如权利要求1或4中所定义的式(I)化合物，其中:
X是-O-基团；R2是-NHR″或-N(OR”’)R″基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
6.如权利要求1中所定义的式(I)化合物，其中:
X是-S-基团，且R2是选自-NHR″和-N(OR”’)R″的基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
7.如权利要求1或6中所定义的式(I)化合物，其中:
X是–S-基团；R2是-NHR″或-N(OR”’)R″基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
8.如权利要求1中所定义的式(I)化合物，其中:
X是单键，且R2是选自-NHR″和-N(OR”’)R″的基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
9.如权利要求1或8中所定义的式(I)化合物，其中:
X是单键；R2是-NHR″或-N(OR”’)R″基团，其中R″是氢或选自直链或支链的C1-C4烷基和芳基的任选地被取代的基团；且R1是选自直链或支链的C1-C6烷基、C3-C7环烷基、环烷基-烷基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基烷基的任选地被取代的基团。
10.如权利要求1中所定义的式(I)化合物或其可药用盐，其选自:
N-(2,6-二乙基苯基)-9-(甲氧基甲基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-8,9-二甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-[(4-{[3-(二甲基氨基)丙基](甲基)氨基}-2-甲氧基苯基)氨基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-[(1S)-2-(1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)-1-苯基乙基]-9-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-[(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基]-N-(2,6-二乙基苯基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3′,2′:6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-{[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3′,2′:6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({4-[4-(二甲基氨基)哌啶-1-基]-2-甲氧基苯基}氨基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3′,2′:6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺,
N-(2,6-二乙基苯基)-2-({2-甲氧基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基]苯基}氨基)-10-甲基-5,6,7,10-四氢吡咯并[3′,2′:6,7]环庚三烯并[1,2-d]嘧啶-8-甲酰胺,
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-(二甲基氨基)-8-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-(2-羟基乙基)-8-甲基-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-(2-羟基乙基)-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-(二甲基氨基)-8-甲基-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-(2-羟基乙基)-8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
8-甲基-2-(甲基硫烷基)-9-(丙-2-基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-乙基-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-(甲基硫烷基)-9-(哌啶-4-基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-(顺式4-氨基环己基)-2-(甲基硫烷基)-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-(顺式-4-氨基环己基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-(甲基硫烷基)-9-(哌啶-4-基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
2-甲基-6,9-二氢-5H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺,
9-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐，和
9-(氮杂环庚烷-3-基)-2-(甲基硫烷基)-9H-吡咯并[3,2-h]喹唑啉-7-甲酰胺盐酸盐。
11.制备如权利要求1中所定义的式(I)化合物或其可药用盐的方法，其中所述方法包含以下步骤:
步骤A)将式(II)化合物
Figure FDA00003570595200061
(II)
其中A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，且R5是任选地被取代的C1-C6烷基，与式(III)化合物反应
Figure FDA00003570595200062
(III)
其中R2是任选地被取代的烷氧基；
步骤B)将得到的式(IV)化合物:
Figure FDA00003570595200071
(IV)
其中R2是任选地被取代的烷氧基、R5是任选地被取代的C1-C6烷基和A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，与甲苯磺酰甲基异腈在强碱的存在下反应；
步骤C)在酸或碱条件下选择性水解得到的式(V)化合物
Figure FDA00003570595200072
(V)
其中R3和R4是氢、A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，R2是任选地被取代的烷氧基，且R5是任选地被取代的C1-C6烷基，得到式(VI)化合物
Figure FDA00003570595200073
(VI)
其中R3和R4是氢，A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，且R2是任选地被取代的烷氧基；
或者，
步骤Ca)将式(VII)化合物
(VII)
其中A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，与式(VIII)化合物反应
(VIII)
其中R2是任选地被取代的烷氧基和R4如权利要求1所定义，其中排除氢；得到式(VI)化合物，其中R3是氢，R4如权利要求1所定义，其中排除氢，A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，且R2是任选地被取代的烷氧基；
步骤D)在酸性条件下环化得到的式(VI)化合物，其中R2是任选地被取代的烷氧基，R3是氢，R4如权利要求1所定义，且A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，得到式(IX)化合物
Figure FDA00003570595200081
(IX)
其中R2是任选地被取代的烷氧基，R3是氢，R4如权利要求1所定义，且A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-；
如果需要或要求，
步骤E)使用式(X)化合物:
R3-L   (X)
其中L是适合的离去基团例如甲磺酰基、甲苯磺酰基、卤素原子，且R3如权利要求1所定义，其中排除氢；
烷基化式(IX)化合物，其中R3是氢；
步骤F)将得到的式(IX)化合物
Figure FDA00003570595200082
(IX)
其中R2是任选地被取代的烷氧基，R3和R4如权利要求1所定义，且A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，与N,N-二甲基甲酰胺衍生物反应；
步骤G)将得到的式(XI)化合物
Figure FDA00003570595200084
(XI)
其中R2是任选地被取代的烷氧基，R3和R4如权利要求1所定义，且A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-，与式(XII)化合物反应
Figure FDA00003570595200085
(XII)
其中X是单键或选自-NR′、-O-和-S-的二价基团；且R1和R’如权利要求1所定义，得到式(I)化合物
Figure FDA00003570595200091
(I)
其中X是单键或选自-NR′、-O-和-S-的二价基团；R2是任选地被取代的烷氧基；A如权利要求1所定义，其中排除–CH=CH-；且R1、R3、R4和R’如权利要求1所定义；任选地将式(I)化合物转化为另一种不同的式(I)化合物，且如需要，将式(I)化合物转化为其可药用盐或将盐转化为游离的化合物(I)。
12.治疗由失调的蛋白激酶活性引起和/或与之相关的疾病的方法，所述方法包括向有需要的哺乳动物施用有效量的如权利要求1所定义的式(I)化合物。
13.权利要求12的方法，其用于治疗由失调的MPS1、PIM-1、PIM-2、PIM-3激酶活性引起和/或与之相关的疾病。
14.权利要求12的方法，其中所述疾病选自癌症、细胞增殖疾病、病毒感染、自身免疫疾病和神经变性疾病。
15.权利要求14的方法，其中所述癌症选自：癌，例如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌，包括小细胞肺癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌，包括鳞状细胞癌；淋巴谱系血液肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和Burkett淋巴瘤；骨髓谱系血液肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；间质来源肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和外周神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；其他肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺毛囊癌和卡波西肉瘤和间皮瘤、高度非整倍体肿瘤和确实超表达有丝分裂关卡的肿瘤。
16.权利要求14的方法，其中所述细胞中增殖性疾病选自良性前列腺增生、家族性腺瘤性息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化相关的血管平滑肌细胞增殖、肺纤维化、关节炎、肾小球肾炎和术后狭窄和再狭窄。
17.权利要求14的方法，其中所述自身免疫疾病和神经变性疾病选自多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠疾病(IBD)、局限性回肠炎、肠易激综合征、胰腺炎、溃疡性结肠炎、憩室病、重症肌无力、血管炎、银屑病、硬皮病、哮喘、变态反应、系统性硬化病、白斑、关节炎例如骨关节炎、幼年型类风湿关节炎、强直性脊椎炎。
18.权利要求12的方法，其还包括对有需要的哺乳动物进行与至少一种细胞生长抑制剂或细胞毒素剂组合的放射疗法或化学疗法方案。
19.权利要求12的方法，其中所述有需要的哺乳动物是人。
20.体外抑制激酶蛋白活性的方法，所述方法包括将所述蛋白质与有效量的如权利要求1所定义的式(I)化合物接触。
21.权利要求12的方法，其提供了肿瘤血管生成和转移抑制。
22.药物组合物，其包含一种或多种如权利要求1所定义的式(I)化合物或其可药用盐，以及至少一种可药用赋形剂、载体和/或稀释剂。
23.权利要求22的药物组合物，其还包含一种或多种化学治疗剂。
24.产品或药盒，其包含如权利要求1所定义的式(I)化合物或其可药用盐或如权利要求22所定义的其药物组合物和一种或多种化学治疗剂，在抗癌治疗法中作为组合的制剂同时、分开或依次使用。
25.如权利要求1所定义的式(I)化合物或其可药用盐，其用作药物。
26.如权利要求1所定义的式(I)化合物或其可药用盐，其在治疗癌症的方法中使用。
27.如权利要求1所定义的式(I)化合物或其可药用盐在制备具有抗癌活性的药物中的应用。
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