ES2966392T3 - Biomarcadores pronósticos para quimioterapia inhibidora de TTK - Google Patents

Biomarcadores pronósticos para quimioterapia inhibidora de TTK Download PDF

Info

Publication number
ES2966392T3
ES2966392T3 ES16716563T ES16716563T ES2966392T3 ES 2966392 T3 ES2966392 T3 ES 2966392T3 ES 16716563 T ES16716563 T ES 16716563T ES 16716563 T ES16716563 T ES 16716563T ES 2966392 T3 ES2966392 T3 ES 2966392T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
alkyl
group
alkoxy
ctnnb1
heterocycloalkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES16716563T
Other languages
English (en)
Inventor
Roos Jeroen De
Joost Uitdehaag
Man Adrianus De
Rogier Buijsman
Guido Zaman
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Crossfire Oncology Holding BV
Original Assignee
Crossfire Oncology Holding BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Crossfire Oncology Holding BV filed Critical Crossfire Oncology Holding BV
Application granted granted Critical
Publication of ES2966392T3 publication Critical patent/ES2966392T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/74—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/14—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/16—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

La presente invención proporciona un método para identificar un tumor - en un individuo humano o en un animal - que es susceptible de tratamiento con un inhibidor de TTK, comprendiendo dicho método: a] proporcionar una muestra de un tumor; b] determinar la presencia de un gen CTNNB1 mutado en dicha muestra de tumor, en donde dicha mutación está ubicada en el exón 3 de CTNNB1 y por el cual la presencia de un gen CTNNB1 mutado indica que el tumor es susceptible al tratamiento con un inhibidor de TTK. En un aspecto alternativo, la etapa b] del método definido anteriormente se reemplaza por la etapa de determinar la presencia de una proteína CTNNB1 mutada en dicha muestra de tumor, en donde dicha mutación se localiza en el exón 3 de CTNNB1 y mediante la cual se detecta la presencia de una CTNNB1 mutada. La proteína indica que el tumor es susceptible al tratamiento con un inhibidor de TTK. En una alternativa adicional, la etapa b] comprende determinar una expresión alterada de un gen regulado por CTNNB1, mediante lo cual una expresión alterada de un gen regulado por CTNNB1 indica que el tumor es susceptible al tratamiento con un inhibidor de TTK. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Biomarcadores pronósticos para quimioterapia inhibidora de TTK
Campo de la invención
La presente invención se refiere a métodos para detectar el estado mutante del genCTNNB1o la proteína CTNNB1 o la expresión alterada de un gen regulado por CTNNB1(Axin2)para identificar tumores que son susceptibles a tratamiento antineoplásico con un inhibidor de TTK. La presente invención también se refiere a métodos para predecir el desenlace, o la progresión de la enfermedad, de cánceres que se tratan con un inhibidor de TTK, mediante detección del estado mutante del genCTNNB1o la proteína CTNNB1 o la expresión alterada de un gen regulado por CTNNB1(Axin2).
Antecedentes de la invención
Los tratamientos dirigidos brindan gran beneficio a pacientes con cáncer porque pueden mejorar las tasas de supervivencia con menos efectos secundarios que los fármacos citotóxicos tradicionales, menos selectivos. Los inhibidores micromoleculares de proteína cinasas son un fundamental del éxito del tratamiento dirigido: muchos de estos inhibidores explotan los rasgos característicos únicos de las células tumorales, permitiendo especificidad del cáncer mientras tienen efectos limitados sobre las células sanas. Un ejemplo clásico del tratamiento dirigido es el uso de inhibidores de tirosina cinasa y anticuerpos en pacientes con cáncer de mama con amplificación o sobreexpresión del genHER2(Higgins, M.J., y Baselga, J., J. Clin. Invest. 121: 3797; 2011).
Para determinar si es probable que un paciente responda a un determinado tratamiento dirigido, es importante determinar el estado y la presencia de biomarcadores que se correlacionen con la sensibilidad al fármaco en muestras del tumor del paciente, antes del inicio del tratamiento.
La proteína cinasa TTK (EC 2.7.12.1), habitualmente denominada Mps1, es un componente del punto de control de ensamblaje del huso (SAC), un mecanismo de vigilancia que garantiza la fidelidad de la segregación de los cromosomas (Liu, X., y Winey, M., Annu. Rev. Biochem. 81: 561; 2012). Defectos en el funcionamiento de SAC pueden dar lugar a errores en la segregación de los cromosomas al permitir la salida mitótica en presencia de cinetocoros libres. La pérdida completa de la función de SAC es mortal en ratones (Baker, D.J.,et al.,Curr. Opin. Cell Biol. 17, 583; 2005) e incompatible con la viabilidad de líneas celulares humanas (Michel, L.,et al.Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101,4459; 2004; Kops G.J.,et al.Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, 8699; 2004). Los niveles de ARNm de TTK están elevados en diversos cánceres humanos, incluyendo de mama, carcinoma papilar de tiroides, carcinoma hepatocelular, adenocarcinoma ductal pancreático, glioma, gástrico, broncogénico y de pulmón (Daniel, J.,et al.Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108: 5384; 2011; Maire, V.,et al.,PLoS ONE 8(5) e63712; 2013; Kilpinen, S.,et a l,PLoS ONE 5(12), e15068; 2010; Landi, M.T.,et al.,PLoS ONE 3(2) e1651; 2008; Liang, X.D.,et al.PLoS ONE 9(6), e97739; 2014; Mills, G.B.,et al.J. Biol. Chem. 267: 16000; 1992; Mir, S.E.,et al.,Cancer Cell 18: 244; 2010; Salvatore, G.,et al.,Cancer Res.
67: 10148; 2007: Slee, R.B.,et al.,Mol. Cancer Ther. 13: 307; 2014; Tannous, B.A.,et a l,J. Natl. Cancer Inst. 105: 1322; 2013; Yuan, B.,et al.,Clin. Cancer Res. 12: 405; 2006). Por lo tanto, los compuestos químicos que inhiben la actividad de TTK son útiles en el tratamiento de una diversidad de cánceres. Estos compuestos pueden aplicarse como agentes individuales, o en combinación con otros agentes antineoplásicos.
Se han divulgado diferentes compuestos que muestran un efecto inhibidor sobre TTK. AstraZeneca UK Ltd. divulgó 2-anilinopurin-8-onas como inhibidores de t Tk en el documento WO2009/024824 A1. En el documento WO2011/013729 A1, se divulgan imidazoles condensados, y en el documento WO2011/016472 A1 derivados de piridina y pirimidina como inhibidores de TTK por Oncotherapy Science Inc. Los indazoles para la inhibición de TTK se han divulgado por University Health NetWork en los documentos WO2011/123937 A1, WO2013/053051 A1 y WO2014/056083 A1. Dana Farber Cancer Institute divulgó pirimidodiazepinonas como inhibidores de TTK en el documento WO2010/080712 A1. En el documento WO2009/156315 A1, se divulgan pirazoloquinazolinas, en el documento WO2012/101029 A1 derivados tricíclicos, en el documento WO2010/108921 A1, N-aril-2-(2-arilaminopirimidin-4-il)pirrol-4-carboxamidas, en el documento WO2012/013557 A1, isoxazoloquinazolinas, en el documento WO2012/101032 A1, pirroloderivados tricíclicos y en el documento WO2012/139930 A1, pirazolilpirimidinas como inhibidores de TTK por Nerviano Medical Sciences S.R.L.
Myriad Pharmaceuticals Inc. divulgó purinas como inhibidores de TTK en el documento WO2010/111406 A2. Además, Cancer Research Technology Ltd. divulgó derivados de pirrolopiridinamino en el documento WO2012/123745 A1 y biciclos en el documento WO2014/037750 A1 y en el documento WO2014/037751 A1 como inhibidores de TTK.
En el documento WO2010/124826 A1, se divulgan imidazoquinoxalinas, en el documento WO2011/026579 A1, aminoquinoxalinas, en los documentos WO2011/063907 A1, WO2011/063908 A1, WO2011/064328 A1, WO2011/157688 A1, WO2012/143329 A1, WO2014/009219 A1, WO2014/195274 A1, WO2014/195276 A1 y WO2014/198647 A1, triazolopiridinas, en el documento WO2012/136531 A1, imidazopiridinas, en el documento WO2012/130905 A1, bencimidazoles sustituidos, en los documentos WO2012/032031 A1, WO2013/135612 A1 y WO2014/131739 A1, imidazopiridazinas, en los documentos WO2011/113862 A1, WO2011/151259 A1, WO2012/080228 A1, WO2012/080229 A1, WO2012/080230 A1, WO2012/080232 A1, WO2012/080234 A1 y WO 2012/080236 A1, imidazopirazinas respectivamente como inhibidores de TTK por Bayer Schering Pharma A.G.
Se han investigado compuestos representativos de las diferentes clases químicas en ensayos de proliferación celular con diferentes líneas celulares de cáncer humano. Un inhibidor representativo de TTK de las imidazopirazinas, Mps-BAY2b, demostró inhibir la proliferación de veintisiete líneas celulares de cáncer humano de diferentes orígenes tumorales con una CI<50>de 160 nM a 4,3 pM (Jemaa, M.,etal.,Cell Death Different 20: 1532; 2013); no se encontró correlación entre la respuesta y el patrón de inestabilidad genómica, la actividad de varias proteínas relevantes para la oncogénesis, o la funcionalidad del SAC.
NMS-P715, un representante de la clase de pirazoloquinazolina, inhibió la proliferación de una amplia gama de líneas celulares en un panel de 127 líneas celulares de cáncer (Colombo, R.,et al.,Cancer Res. 70: 10255; 2010); las CI<50>estaban cerca de 1 pM o mayor y no hubo correlación observada entre los efectos antiproliferativos y el tiempo de duplicación celular.
MPI-04079605, un inhibidor de TTK divulgado por Myriad, demostró inhibir el crecimiento de catorce líneas celulares de cáncer humano de diferentes orígenes tumorales, pero solamente después de un tiempo prolongado de incubación (Tardif, K.D.,et al.,Mol. Cancer Res. 10: 2267; 2011).
CCT251455, un representante de la clase de 1 H-pirrolo[2,3-c]piridina, inhibió la proliferación de células HCT116 con una GI<50>de 160 nM (Naud, S.,et al.,J. Med. Chem. 56: 10045; 2013).
Un inhibidor de TTK basado en imidazo[1,2-b]piridazina divulgado por Shionogi, demostró inhibir la proliferación de catorce líneas celulares de cáncer humano de diferentes orígenes tumorales con una CI<50>de 3,3 nM a 320 nM (Kusakabe, K.,et al.,J. Med. Chem. 58: 1716; 2015).
CFI-401870, un representante de los indazoles, inhibió la proliferación de una amplia gama de líneas celulares en un panel de 22 líneas celulares de cáncer (Liu, Y.,et al.,J. Med. Chem. 58: ASAP; 2015) con GI<50>de 8 nM a 70 nM.
Aunque, en los experimentos de perfilado mencionados anteriormente, las diferentes líneas celulares de cáncer mostraron diferentes sensibilidades relativas para inhibidores de TTK, no se identificaron marcadores genómicos u otros que se correlacionaran con la sensibilidad a los inhibidores de TTK.
Varios inhibidores de TTK de las clases químicas mencionadas anteriormente han demostrado reducir el crecimiento de xenoinjertos en modelos de ratón de melanoma (Colombo, R.,et al.),carcinoma colorrectal (Jemaa, M.,et al.;Tardif,et al.;Laufer, R.,et al.,Bioorg. Med. Chem. 22: 4968; 2014), carcinoma cervicouterino (Jemaa, M.,et al.)y células de glioblastoma (Tannous, B.A.et al.),lo que demuestra el posible uso de inhibidores de TTK en el tratamiento de diversos cánceres.
El documento WO2012/168721 describe el uso de inhibidores de cinasas mitóticas tales como proteína cinasa TTK, en el tratamiento de cánceres, que se caracterizan como cánceres deficientes de o mutados en el homólogo de fosfatasa y tensina (PTEN). Marieke Aartset al.,Current Opinion in Pharmacology 2013, 13:529-535, describe que cánceres aneuploides deficientes en PTEN son sensibles a inhibidores de TTK.
En vista de la amplia actividad de los inhibidores de TTK en muchas líneas celulares diferentes y tipo de tumor, hay una clara necesidad de biomarcadores que puedan usarse para predecir los cánceres que tengan más probabilidad de responder a tratamiento quimioterápico con un inhibidor de TTK. Dicho biomarcador pronóstico de sensibilidad a fármaco puede usarse para identificar la población de pacientes más óptima para la aplicación de tratamiento farmacológico con un inhibidor de TTK, o puede usarse para predecir la progresión, o desenlace de la enfermedad tratada con un inhibidor de TTK.
Declaración de la invención
De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un método como se define en la reivindicación 1 adjunta a la misma.
Los autores de la presente invención han observado sorprendentemente que las células cancerosas que albergan mutaciones en el genCTNNB1(nombre HUGO: CTNNB1) son más sensibles a inhibidores de TTK que células normales o células cancerosas que no expresanCTNNB1mutante (células sin alteración deCTNNB1).
El genCTNNB1codifica una proteína de doble función, p-catenina, que regula la coordinación de la adhesión celular y regula la transcripción génica en la ruta de señalización de Wnt (Logan, C.Y., y Nusse, R., Annu. Rev. Cell. Dev. Biol.
896: 1998; 2004). Se han encontrado mutaciones en el genCTNNB1en muchos cánceres, incluyendo colorrectal (Morin, P.J.et al.,Science 275: 1787; 1997; Iwao, K.,et al.,Cancer Res. 58: 1021; 1998; Sparks, A.B.,et al.Cancer Res. 58: 1130; 1998) y carcinoma hepatocelular (Miyoshi, Y.,et al.,Cancer Res. 58: 2524; 1998; Chen, Y.W.,et al.,Hepatology 36: 927; 2002), melanoma (Rubinfeld, B.,et al.,Science 275: 1790; 1997), meduloblastoma (Zurrawel, R.H.,et al.Cáncer Res. 58: 896; 1998), pulmonar (Shigemitsu, K.,et al.,Oncogene 20: 4249; 2001), endometrial (Fukuchi, T.,et al.,Cancer Res. 58: 3526; 1998; Liu, Y.,et al.,J. Natl. Canc. Inst. 106(9); 2014), de ovario (Palacios, J., y Gamallo, C., Cancer Res. 58: 1344; 1998) y cáncer de próstata (Voeller, H.J., y Gelmann, E.P., Cancer Res. 58, 2520; 1998). Y. Liuet al.,JNCI, Vol. 106 (9), dju245, 10 de septiembre de 2014, describe que mutaciones en el exón 3 de CTNNB1 probablemente son un iniciador que caracteriza la aparición agresiva de carcinoma endometrioide endometrial (EEC) de bajo grado y bajo estadio que se produce en mujeres jóvenes. Ayami Kominamiet al.,Pathology International, vol. 6(9) pág. 460-464, 1 de septiembre de 2014, describe un análisis de mutaciones del gen CTNNB1, que revela una mutación puntual en el exón 3 que provoca el remplazo de serina con fenilalanina en el codón 37. Minhee Parket al.,Modern Pathology, vol. 7(4), 27 de septiembre de 2013, pág. 580-593, describe que neoplasias sólidas-pseudopapilares con rasgos característicos clinicopatológicos distintivos se caracterizan por mutaciones en el exón 3 de CTNNB1, e identifica las rutas de señalización activadas en estos tumores.
La actividad de p-catenina se regula por fosforilación en residuos de serina y treonina por las proteína cinasas glucógeno sintasa cinasa 3p (GSK3p) y caseína cinasa I (CKI), seguida de ubiquitinación y degradación por el proteasoma (Liu, C.,et al.Cell 108, 837; 2002). Mutaciones en el genCTNNB1que provocan eliminación o sustitución de uno o más de estos residuos de serina o treonina alteran la fosforilación y degradación, produciendo una p-catenina sobrerreactiva, y crecimiento celular incontrolado (Morin, P.J.et al.,Science 275: 1787; 1997; Liu, C.,et al.).
La presente invención proporciona métodos para determinar el estado mutante deCTNNB1en materiales derivados de tumor, para determinar la susceptibilidad de dichos tumores a tratamiento antineoplásico con un inhibidor de TTK. La presente invención también proporciona métodos para determinar el estado mutante deCTNNB1para supervisar la eficacia del tratamiento de la enfermedad proliferativa con un inhibidor de TTK, o para predecir el desenlace de cánceres que se tratan con un inhibidor de TTK.
El análisis del estado mutante deCTNNB1puede realizarse en combinación con análisis del estado mutante o expresión de otros genes y/o proteínas, o puede confinarse a un análisis de solamente el estado del genCTNNB1.La presente invención constituye un método de diagnóstico. Sin embargo, el método no se realiza directamente sobre el organismo humano o animal. El método de diagnóstico puede realizarse en un laboratorio, pero proporciona resultados que permiten a un médico hacer un pronóstico preciso de la progresión de la enfermedad en un paciente con cáncer, particularmente con respecto a si un paciente tiene probabilidad de responder a quimioterapia con un inhibidor de TTK, aplicado como un agente individual, o en combinación con otros agentes terapéuticos o radioterapia.
Más específicamente, la presente invención proporciona métodos para determinar el estado de mutaciones oncógenas deCTNNB1en materiales derivados de tumor para determinar la susceptibilidad de dichos tumores en tratamiento antineoplásico con un inhibidor de TTK como se define en lasfórmulas I-VIIIdetalladas en este documento.
Se han observado muchas mutaciones diferentes en p-catenina en pacientes con cáncer, y estas se han clasificado en bases de datos tales como COSMIC (http://cancer.sanger.ac.uk/cancergenome/proiects/cosmic/). La expresión de mutaciones deCTNNB1en cánceres humanos se presenta en The Cancer Genome Atlas, al que se puede acceder en http://www.cancergenome.nih.gov.
Puede encontrarse un enlace a la secuencia de ácido nucleico y proteínica de CTNNB1 en http://www.genenames.org/cgi-bin/gene symbol report?hgnc id=2514 cuya divulgación se incorpora en este documento por referencia. La secuencia proteínica y la numeración de aminoácidos de CTNNB1 se da también en la figura 1 adjunta a la presente.
El exón 3 deCTNNB1contiene un punto caliente de mutaciones que afectan a la capacidad de las cinasas de fosforilar p-catenina (Morin, P.J.et al.,1997). La ausencia de esta fosforilación provoca la acumulación de p-catenina en el núcleo (Liu, C.et al.,2002). Más específicamente, la mutación o eliminación de residuos de serina en las posiciones 33, 37 o 45, o la mutación o eliminación del residuo de treonina en la posición 41 altera los motivos de fosforilación de GSK3p que participan en la degradación de p-catenina (Rubinfeld, B.,et al.;Morin, P.J.,et al.).En consecuencia, estas mutaciones provocan señalización oncógena aumentada (Rubinfeld, B.,et al.;Morin, P.J.,et al.).
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un método de acuerdo con la reivindicación 19 adjunta a la presente. Específicamente, se describe un método para determinar si un compuesto químico es un inhibidor de TTK, comprendiendo dicho método las etapas de: a) proporcionar una primera y segunda línea celular de mamífero, en donde la primera línea celular tienenCTNNB1mutado y la segunda línea celular no tiene alteración deCTNNB1;b) poner en contacto dicha primera y segunda línea celular con un primer compuesto candidato; y, c) determinar por ensayo la inhibición de la proliferación celular de dicha primera y segunda línea celular. La primera y segunda línea celular usadas en este método son líneas celulares cancerosas isogénicas.
En una variante importante de este método, las etapas b) y c) mencionadas anteriormente se repiten con un segundo compuesto candidato y se hace una selección de compuestos candidatos en función de la actividad de los compuestos candidatos respectivos en el ensayo con dicha primera línea celular.
Los autores de la presente invención han observado sorprendentemente que la expresión de tres de las mutaciones descritas anteriormente se correlaciona con susceptibilidad aumentada de las células cancerosas a inhibidores químicos de TTK. Por lo tanto, la detección del estado mutante del genCTNNB1en la serina 33, treonina 41 o serina 45 puede usarse para determinar la susceptibilidad de los tumores al tratamiento con inhibidores de TTK.
Breve descripción de las figuras
La invención se describirá con referencia a las figuras adjuntas en que:
Lafigura 1es la secuencia proteínica y la numeración de aminoácidos de CTNNB1 (p-catenina) (código UniProt P35222). La mutación o eliminación de los residuos de serina (S) o treonina (T) subrayados en las posiciones 33, 37, 41 y 45 altera la fosforilación y degradación de p-catenina (Rubinfeld, B.,e ta l.; Morin, P.J.,et al.).
Lafigura 2representa los diagramas de volcán de perfilado celular en 66 líneas celulares cancerosas para los ejemplos 5, 8, 9, 12, 13, 17 y 20.
Por cuestiones de exhaustividad, un diagrama de volcán es una representación gráfica de un análisis de la varianza (Anova) de la asociación de mutaciones génicas cancerosas presentes en líneas celulares y la respuesta de estas líneas celulares en ensayos de proliferación con compuestos. El diagrama de volcán muestra el promedio de desplazamiento de CI50 entre líneas celulares mutantes y no mutantes (eje de abscisas) y la significación del ensayo Anova (eje de ordenadas). La significación se corrigió para ensayo múltiple y todas las asociaciones por encima del nivel umbral (línea de puntos) estánrellenas de negro.Las áreas de círculos son proporcionales al número de líneas celulares que portan mutaciones. Las líneas celulares cancerosas usadas en el análisis de sensibilidad a fármacos se enumeran en latabla 1en este documento a continuación.
Descripción detallada de la invención
Los métodos de obtención de una muestra de un tumor para análisis son ben conocidos en la técnica y no requieren aclaración específica aquí. El estado mutante del genCTNNB1de un tumor de un individuo con cáncer puede determinarse analizando la secuencia de ADN de una muestra del tumor, y comparando la secuencia de ADN del tumor con la de tejido sano, o con la secuencia deCTNNB1"natural", denominada en la base de datos UniProt P35222, y presentada en lafigura1. Una muestra de ADN puede tomarse directamente de una biopsia de tumor, o puede obtenerse de ADN tumoral circulante (Diaz, L.A.,et al.,Nature 486: 537; 2012). El estado mutante del genCTNNB1también puede determinarse secuenciando el ARNm de la muestra de tumor, o puede determinarse indirectamente por análisis de la secuencia de aminoácidos de p-catenina, o mediante determinación del estado de fosforilación de p-catenina usando anticuerpos específicos.
Como las mutaciones afectan a la degradación de p-catenina, afectan a los niveles celulares totales de p-catenina y la cantidad de p-catenina en el núcleo. Por lo tanto, el estado mutante del genCTNNB1también puede determinarse indirectamente al determinar los niveles totales o nucleares de p-catenina en células tumorales.
Como alternativa, el estado mutante deCTNNB1puede determinarse analizando la expresión del genAxin2que está regulada por p-catenina. La detección del genAxin2regulado por p-catenina puede determinarse extrayendo ARN de una muestra de un tumor y midiendo la expresión génica usando reacción en cadena de la polimerasa con retrotranscriptasa (RT-PCR) o usando análisis de micromatriz. Se han descrito muchos genes regulados por pcatenina, e incluyenAxin2(Yan, D.et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 14973; 2001),c-myc(He, T.C.et al.,Science 281: 1509; 1998) yLGR5(Barker, N.et al.,Nature 499: 1003; 2007). Puede encontrarse una lista detallada de genes regulados por p-catenina en la página de inicio de Wnt (http://web.stanford.edu/group/nusselab/cgibin/wnt/target_genes) y en artículos científicos (Willert, J.et al.,BMC Dev. Biol. 2:8; van de Wetering, Met al.,Cell 111: 241; 2002).
La expresión del genAxin2regulado por p-catenina también puede determinarse a nivel proteínico, usando anticuerpos específicos o métodos basados en espectroscopia de masas.
Ejemplos de inhibidores de TTK son compuestos químicos que pertenecen a la clase de (5,6-dihidro)pirimido[4,5-e]indolizinas de acuerdo con la fórmula I o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
en donde,
R1 se selecciona del grupo que consiste en:
R<11>es H, halógeno, alquilo(C1-2), alquenilo(C2-3), alquinilo(C2-3) o alcoxi(C1-2), estando todos los grupos alquilo y alcoxi opcionalmente sustituidos con uno o más halógenos;
R<12>es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2);
R<13>es R<131>CH<2>, R<132>O, R<133>R<134>N, R<135>C(O), R<136>S, R<136>S(O), R<136>S(O)(NH), R<137>SO<2>, heterocicloalquilo(C2-7), o heteroarilo(C1 -5), estando cada heterocicloalquilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1 -2), fluoro, hidroxilo, oxo, alcoxi(C1-2), alquilcarbonilo(C1-6), alquilsulfonilo(C1-6), alcoxicarbonilo(C1-5), alquilaminocarbonilo(C1-6), cicloalquilcarbonilo(C3-6), heterocicloalquilcarbonilo(C2-7) o di[alquil(C1-2)]amino, estando cada alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, cicloalquilcarbonilo o heterocicloalquilcarbonilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo, ciano, oxo o alcoxi(C1-2);
R<131>es alquilcarbonilamino(C1-6), cicloalquilcarbonilamino(C3-6) o heterocicloalquilcarbonilamino(C2-7), estando cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo o alcoxi(C1 -2);
R<132>es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7), arilo(C6-10) o heterorarilo(C1-5) cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), halógeno, hidroxilo, alcoxi(C1-2), di[alquil(C1-2)]amino o heterocicloalquilo(C2-7);
R<133>es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7), alquilcarbonilo(C1-6), alcoxicarbonilo(C1-5), cicloalquilcarbonilo(C3-6) o heterocicloalquilcarbonilo(C2-7), cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), halógeno, hidroxilo o alcoxi(C1-2), di[alquil(C1-2)]amino o heterocicloalquilo(C2-7);
R<134>es hidrógeno o alquilo(C1-2);
R<135>es heterocicloalquilo(C2-7), alquilamino(C1-6), di[alquil(C1-6)]amino, heterocicloalquilamino(C2-7) o cicloalquilamino(C3-6) cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo, alcoxi(C1-2), di[alquil(C1-2)]amino, heterocicloalquilo(C2-7), oxo, ciano o amino;
R<136>es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7) cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo o alcoxi(C1-2);
R<137>es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7), alquilamino(C1-6), di[alquil(C1-6)]amino, heterocicloalquilamino(C2-7) o cicloalquilamino(C3-6), cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo o alcoxi(C1-2);
R<14>es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2); y
R<15>es H, halógeno.
En la anterior fórmula I, R<2>se selecciona del grupo que consiste en:
R<21>es H, halógeno, alquilo(C1 -3), alcoxi(C1-2), hidroxialquilo(C1 -2), cicloalquilo(C3-4), alquenilo(C2-3) o ciano;
R<22>es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2);
R<23>es H, halógeno, alquilo(C1-2), alcoxi(C1-2), ciano o hidroxi;
R<24>es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2);
R<25>es H, halógeno, alquilo(C1-3), alcoxi(C1-2), hidroxialquilo(C1-2), cicloalquilo(C3-4), alquenilo(C2-3) o ciano;
R<26>es H, alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-5), alcoxi(C1-2)[alcoxi(C2-4)]<n>alquilo(C1-6), en donde n representa un número entero de 1,2, 3 o 4, todos los grupos alquilo, heterocicloalquilo y alcoxi(C1 -2)[alcoxi(C2-4)]<n>alquilo(C1-6) opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), alcoxi(C1-2), hidroxilo, oxo, amino, cicloalquilo(C3-6), di[alquil(C1-2)]amino o heterocicloalquilo(C2-5). En la anterior fórmula I solamente uno de R<21>y R<25>en R<2>puede ser H.
Otros ejemplos de inhibidores de TTK conocidos son compuestos químicos que pertenecen a la clase de pirazoloquinazolinas de acuerdo con la fórmula II o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos como se describe en el documento WO2009/156315 A1.
en donde,
R1 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en arilo(C6-10) y heteroarilo(C1-5), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
R2 se selecciona del grupo que consiste en alquilo(C1-6) y alquenilo(C2-6), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo(C1 -6), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
R5 y R6 son independientemente hidrógeno o metilo.
Otros inhibidores de TTK conocidos son compuestos químicos que pertenecen a la clase de imidazopirazinas de acuerdo con la fórmula III o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos como se describe en los documentos WO2011/013729 A1, WO2011/113862 A1, WO2011/151259 A1, WO2012/080228 A1, WO2012/080229 A1, WO2012/080230 A1, WO2012/080232 A1, WO2012/080234 A1 y WO 2012/080236 A1.
en donde,
R<1>se selecciona del grupo que consiste en alquilo(C1-6), haloalquilo(C1-6), HO-alquilo(C1-6), H<2>N-alquilo(C1-6), cianoalquilo(C1-6), alcoxi(C1-6)alquilo(C1-6), alquenilo(C2-6), alquinilo(C2-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C3-7), arilo(C6-10) y heteroarilo(C1-5), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
R<2>se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10) y heteroarilo(C1-9), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
R<3>se selecciona del grupo que consiste en: alquilo(C1-6), -(CH<2>)<n>-heterocicloalquilo(C3-7)), -(CH<2>)<n>-heterocicloalquenilo(C4-8)), heterocicloalquilo(C3-7), arilo(C6-10), heteroarilo(C1-9), -(CH<2>)<n>-arilo(C6-10), -O-arilo(C6-10), -C(=O)N y ciano, en donde dichos grupos pueden estar sustituidos y además en donde n es un número entero de 0, 1 o 2.
Otros ejemplo de inhibidores de TTK conocidos son compuestos químicos que pertenecen a la clase de purinas de acuerdo con la fórmula IV o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos como se describe en el documento WO2010/111406 A1.
en donde,
R1 se selecciona del grupo que consiste en cicloalquilo(C3-6) y heterocicloalquilo(C3-7), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; y,
R2 se selecciona del grupo que consiste en:
a) arilo(C6-10), y,
b) heteroarilo(C1-5),
en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos.
Además, otros inhibidores de TTK conocidos son compuestos químicos que pertenecen a la clase de imidazopiridazinas de acuerdo con la fórmula V o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos como se describe en los documentos WO2011 /013729 A1, WO2012/032031 A1, WO2013/135612 A1 y WO2014/131739 A1.
en donde,
R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo(C1-6), haloalquilo(C1-6), HOalquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C3-7) y heteroarilo(C1-5), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
R2 es arilo(C6-10) o heteroarilo(C1-9), de los que cada uno puede estar opcionalmente sustituido;
R3 se selecciona del grupo que consiste en X-arilo(C6-10) o X-heteroarilo(C1-9), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos, en donde X representa S(=O)p, O, NR4, CR4aR4b, C=CR4aR4b y además en donde p es un número entero de 0, 1, 2;
R4, R4a, R4b representan independientemente entre sí un átomo de hidrógeno o alquilo(C1-6).
Otros inhibidores de TTK conocidos son compuestos químicos que pertenecen a la clase de triazolopiridinas de acuerdo con la fórmula VI o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos como se describe en los documentos WO2011/063907 A1, WO2011/063908 A1, WO2011/064328 A1, WO2011/157688 A1, WO2012/143329 A1, WO2014/009219 A1, WO2014/195274 A1, WO2014/195276 y WO2014/198647 A1.
en donde,
R<1>representa un grupo fenilo, un grupo piridilo o un grupo indolilo en donde dichos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos;
R<2>representa un grupo fenilo, un grupo piridilo o un grupo pirimidilo en donde dichos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos;
R<3>representa un grupo seleccionado de: hidrógeno o -C(=O)-O-(CR<7>R<8>)-O-C(=O)-R<4>, en donde R<4>representa un grupo seleccionado de: alquilo(C1-6), sustituido una o más veces, de manera idéntica o diferente, con un grupo seleccionado de: -NH<2>, -N(H)R<5>,-N(R<5>)R<6>, heterocicloalquilo(C4-7), opcionalmente sustituido, una o más veces, de manera idéntica o diferente, con un grupo seleccionado de -NH<2>, -N(H)R<5>, -N(R<5>)R<6>.
R<5>y R<6>, independientemente entre sí, representan un grupo seleccionado de un átomo de hidrógeno y alquilo(C1-3).
R<7>representa un grupo seleccionado de un átomo de hidrógeno y alquilo(C1-3).
R<8>representa un átomo de hidrógeno
Otro ejemplo de inhibidores de TTK conocidos son compuestos químicos que pertenecen a la clase de pirrolopiridinas de acuerdo con la fórmula VII o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos como se describe en los documentos WO2009/032694 A1, WO2009/032703 A1 y Nature Chemical Biology 6 (2010), 359.
en donde,
R1 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), en donde dicho grupo opcionalmente puede estar sustituido;
R2 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), en donde dicho grupo opcionalmente puede estar sustituido.
Además, otros ejemplo de inhibidores de TTK conocidos son compuestos químicos que pertenecen a la clase de aminopiridinas y aminopirimidinas de acuerdo con la fórmula VIII o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos como se describe en el documento WO2011/016472 A1, ACS Med. Chem. Letters 3 (2012), 560 y Bioorg. Med. Chem. Letters 23 (2015), 2247.
Fórmula VIII
en donde,
R<1>se selecciona del grupo que consiste en átomo de hidrógeno o amino;
R<2>se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), heteroarilo(C1 -5), alquilo(C1 -6), cicloalquilo(C3-6) y heterocicloalquilo(C3-7), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
R<3>se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos;
X es C o N.
Las expresiones como se usan en este documento se refieren a lo siguiente:
Halógeno significa flúor, cloro, bromo o yodo.
Alquilo(C1 -2) significa un grupo alquilo que tiene de 1 a 2 átomos de carbono, que es metilo o etilo. Un grupo metilo puede indicarse como Me o CH<3>.
Alquilo(C1-3) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1-3 átomos de carbono, que es metilo, etilo, propilo o isopropilo.
Alquilo(C1-4) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1-4 átomos de carbono, que es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo o terc-butilo, siendo preferidos los grupos alquilo(C1 -3).
Alquilo(C1-5) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1-5 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo y isopentilo, siendo preferidos los grupos alquilo(C1-4).
Alquilo(C1-6) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1-6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, terc-butilo, n-pentilo y n-hexilo. Se prefieren grupos alquilo(C1 -5), siendo alquilo(C1-4) más preferido.
Alcoxi(C1-2) significa un grupo alcoxi que tiene 1-2 átomos de carbono, teniendo el resto alquilo el mismo significado que el definido previamente.
Alcoxi(C2-4) significa un grupo alcoxi que tiene 2-4 átomos de carbono, por ejemplo, etoxi, propiloxi, butiloxi, isopropiloxi, isobutiloxi y terc-butiloxi. Siendo preferidos etiloxi y propiloxi. Siendo más preferidos los grupos etiloxi.
Alcoxi(C1-3) significa un grupo alcoxi que tiene 1-3 átomos de carbono, teniendo el resto alquilo el mismo significado que el definido previamente. Se prefieren los grupos alcoxi(C1-2).
Alcoxi(C1-4) significa un grupo alcoxi que tiene 1-4 átomos de carbono, teniendo el resto alquilo el mismo significado que el definido previamente. Se prefieren los grupos alcoxi(C1-3), siendo los más preferidos los grupos alcoxi(C1-2).
Alcoxi(C1-5) significa un grupo alcoxi que tiene 1-5 átomos de carbono, teniendo el resto alquilo el mismo significado que el definido previamente. Se prefieren los grupos alcoxi(C1-4), siendo más preferidos los grupos alcoxi(C1-3).
Alquenilo(C2-3) significa un grupo alquenilo ramificado o sin ramificar que tiene 2-3 átomos de carbono, tales como etenilo o 2-propenilo.
Alquinilo(C2-3) significa etinilo o 2-propinilo.
Cicloalquilo(C3-4) significa un grupo cicloalquilo que tiene 3-4 átomos de carbono, que es ciclopropilo o ciclobutilo.
Cicloalquilo(C3-6) significa un grupo cicloalquilo que tiene 3-6 átomos. Ejemplos de "cicloalquilo" incluyen, aunque sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo.
Heterocicloalquilo(C2-5) significa un grupo heterocicloalquilo que tiene 2-5 átomos de carbono, preferiblemente 3-5 átomos de carbono; y uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y/o S, que pueden estar fijados mediante un heteroátomo si es factible, o un átomo de carbono. Heteroátomos preferidos son N u O. Se prefieren oxetanilo, azetidinilo, piperidinilo, morfolinilo, pirrolidinilo y piperazinilo. El heterocicloalquilo(C2-5) más preferido es oxetanilo y azetidinilo.
Heterocicloalquilo(C2-7) significa un grupo heterocicloalquilo que tiene 2-7 átomos de carbono, preferiblemente 2-5 átomos de carbono, y uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y/o S. Heteroátomos preferidos son N u O. Grupos heterocicloalquilo(C2-7) preferidos son azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, homopiperidinilo, morfolinilo o tiomorfolinilo. El grupo heterocicloalquilo puede estar fijado mediante un heteroátomo si es factible.
Arilo(C6-10) significa un grupo hidrocarburo aromático que tiene 6-10 átomos de carbono. Ejemplos de "arilo(C6-10)" incluyen, aunque sin limitación, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo o indenilo.
Heteroarilo(C1-5) significa un grupo aromático sustituido o sin sustituir que tiene 1-5 átomos de carbono y 1 4 heteroátomos seleccionados de N, O y/o S. El heteroarilo(C1-5) puede estar opcionalmente sustituido. Ejemplos de "heteroarilo(C1-5)" incluyen, aunque sin limitación, tetrazolilo, imidazolilo, piridilo, pirimidilo, triazinilo, tienilo, furilo, pirolilo o pirazolilo.
Cicloalquilamino(C3-6) significa un grupo amino, monosustituido con un grupo cicloalquilo que contiene 3-6 átomos de carbono que tiene el mismo significado que el definido previamente.
Alquilamino(C1 -6) significa un grupo amino, monosustituido con un grupo alquilo que contiene 1 -6 átomos de carbono que tiene el mismo significado que el definido previamente. Un grupo alquilamino(C1 -6) preferido es metilamino.
Di[alquil(C1-2)]amino significa un grupo amino, disustituido con grupo(s) alquilo, conteniendo cada uno independientemente 1-2 átomos de carbono y teniendo el mismo significado que
el definido previamente. Un grupo di[alquil(C1-2)]amino preferido es dimetilamino. Di[alquil(C1-6)]amino significa un grupo amino, disustituido con grupo(s) alquilo, conteniendo cada uno independientemente 1-6 átomos de carbono y teniendo el mismo significado que el definido previamente. Un grupo di[alquil(C1-6)]amino preferido es W-metilpropan-1-amino.
Heterocicloalquilamino(C2-7) significa un grupo amino, monosustituido con un grupo heterocicloalquilo(2-7) que contiene 2-7 átomos de carbono que tiene el mismo significado que el definido previamente.
Alquilaminocarbonilo(C1-6) significa un grupo carbonilo sustituido con un grupo amino. Estando dicho grupo amino monosustituido con un grupo alquilo que tiene 1 -6 átomos de carbono y teniendo el mismo significado que el definido previamente.
Heterocicloalquilcarbonilo(C2-7) significa un grupo carbonilo sustituido con un grupo heterocicloalquilo(C2-7) que tiene 2-7 átomos de carbono y que tiene el mismo significado que el definido previamente.
Alcoxicarbonilo(C1-5) significa un grupo carbonilo sustituido con un grupo alcoxi, cuyo resto alquilo tiene 1-6 átomos de carbono como se define previamente.
Alquilsulfonilo(C1-6) significa un grupo sulfonilo sustituido con un grupo alquilo(C1-6) que tiene 1-6 átomos de carbono y que tiene el mismo significado que el definido previamente.
Alquilcarbonilo(C1 -6) significa un grupo carbonilo sustituido con un grupo alquilo(C1 -6) que tiene 1 -6 átomos de carbono y que tiene el mismo significado que el definido previamente.
Cicloalquilcarbonilo(C3-6) significa un grupo carbonilo sustituido con un grupo cicloalquilo(C3-6) que tiene 3 6 átomos de carbono y que tiene el mismo significado que el definido previamente.
Alquilaminocarbonilo(C1-6) significa un grupo carbonilo sustituido con un grupo amino. Estando dicho grupo amino monosustituido con un grupo alquilo que tiene 1 -6 átomos de carbono y teniendo el mismo significado que el definido previamente.
Alquilcarbonilamino(C1-6) significa un grupo amino sustituido con un grupo carbonilo. Estando dicho grupo carbonilo monosustituido con un grupo alquilo que tiene 1-6 átomos de carbono y teniendo el mismo significado que el definido previamente.
Cicloalquilcarbonilamino(C3-6) significa un grupo amino sustituido con un grupo carbonilo. Estando dicho grupo carbonilo monosustituido con un grupo cicloalquilo que tiene 3-6 átomos de carbono y teniendo el mismo significado que el definido previamente.
Heterocicloalquilcarbonilamino(C2-7) significa un grupo amino sustituido con un grupo carbonilo. Estando dicho grupo carbonilo monosustituido con un grupo heterocicloalquilo(C2-7) que tiene 2-7 átomos de carbono y teniendo el mismo significado que el definido previamente.
Hidroxialquilo(C1-2) significa un grupo alquilo(C1-2) que tiene 1-2 átomos de carbono con el mismo significado que el definido previamente, sustituido con un grupo hidroxilo.
Alcoxi(C1 -2)[alcoxi(C2-4)]<n>alquilo(C1 -6) significa un grupo alquilo(C1 -6) que tiene 1 -6 átomos de carbono con el mismo significado que el definido previamente, sustituido con uno o más grupos alquiloxi(C2-4), en donde n representa un número entero de 1, 2, 3 o 4, estando los grupos alcoxi conectados linealmente entre sí. Estando el último grupo alquiloxi(C2-4) sustituido con un grupo alquiloxi(C1-2). En el grupo alcoxi(C1-2)[alcoxi(C2-4)]<n>alquilo(C1-6), el grupo alcoxi(C1-2) preferido es metoxi, el alcoxi(C2-4) preferido es etoxi, y el alquilo(C1-6) preferido es etilo, preferiblemente n es 1,2, 3, 4, siendo los más preferido que n sea 1 o 2. Heteroarilo(C1-9) significa un grupo aromático sustituido o sin sustituir que tiene 1-9 átomos de carbono y 1 4 heteroátomos seleccionados de N, O y/o S. El heteroarilo(C1-9) puede estar opcionalmente sustituido. Ejemplos de "heteroarilo(C1-9)" incluyen, aunque sin limitación, quinolona, isoquinolina, indazol, bencisoxazol e indol.
Alquenilo(C2-6) significa un grupo alquenilo ramificado o sin ramificar que tiene 2-6 átomos de carbono. Ejemplos de "alquenilo(C2-6)" incluyen, aunque sin limitación, etenilo, 2-butenilo y n-pentenilo.
Alquinilo(C2-6) significa un grupo alquinilo ramificado o sin ramificar que tiene 2-6 átomos de carbono. Ejemplos de "alquinilo(C2-6)" incluyen, aunque sin limitación, etinilo, propinilo, n-butinilo, n-pentinilo, isopentinilo, isohexinilo o n-hexinilo.
Heterocicloalquilo(C3-7) significa un grupo heterocicloalquilo que tiene 3-7 átomos de carbono, preferiblemente 3-5 átomos de carbono, y uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y/o S. Ejemplos de "heterocicloalquilo" incluyen, aunque sin limitación, azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, homopiperidinilo o morfolinilo.
Heterocicloalquenilo(C4-8) significa un grupo heterocicloalquenilo que tiene 4-8 átomos de carbono, preferiblemente 3-5 átomos de carbono que tiene un doble enlace en los mismos; y 1 heteroátomo seleccionado de N, O y/o S. Ejemplos de "heteroalquenilo" incluyen, aunque sin limitación, oxiciclohexenilo y azaciclohexenilo.
Haloalquilo(C1-6) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1-6 átomos de carbono, en que de uno hasta todos los átomos de hidrógeno están remplazados por un halógeno como se define en este documento. Ejemplos de dichos grupos haloalquilo de cadena ramificada o lineal útiles en la presente invención incluyen, aunque sin limitación, metilo, etilo, propilo, isopropilo, isobutilo y n-butilo sustituidos independientemente con uno o más átomos de halógeno, por ejemplo, fluoro, cloro, bromo y yodo. Ejemplos específicos de "haloalquilo incluyen, aunque sin limitación, fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, 1-fluoroetilo, 2-fluoroetilo, 2,2-difluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo, y perfluoro-n-propilo.
HOalquilo(C1 -6) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1 -6 átomos de carbono, en que uno, dos o tres átomos de hidrógeno están remplazados por un grupo hidroxilo. Ejemplos de "HOalquilo(C1-6)" incluyen, aunque sin limitación, hidroximetilo, 1 -hidroxietilo, 2-hidroxietilo y 1,2-dihidroxietilo.
H<2>Nalquilo(C1-6) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1-6 átomos de carbono, en que uno, dos o tres átomos de hidrógeno están remplazados por un grupo amino. Ejemplos de "H<2>Nalquilo(C1 -6)" incluyen, aunque sin limitación, aminometilo, 1 -aminoetilo, 2-aminoetilo y 1,2-diaminoetilo. Cianoalquilo(C1-6) significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1-6 átomos de carbono, en que uno, dos o tres átomos de hidrógeno están remplazados por un grupo ciano. Ejemplos de "cianoalquilo(C1-6)" incluyen, aunque sin limitación, cianometilo, 1-cianoetilo, 2-cianoetilo y 1,2-dicianoetilo. En las definiciones anteriores con grupos multifuncionales, el punto de fijación está en el último grupo.
Cuando, en la definición de un sustituyente, se indica que "todos los grupos alquilo" de dicho sustituyente están opcionalmente sustituidos, esto también incluye el resto alquilo de un grupo alcoxi.
El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos en el átomo o átomos indicados están remplazados con una selección del grupo indicado, con la condición de que no se exceda la valencia normal del átomo indicado en las circunstancias existentes, y que la sustitución produzca un compuesto estable. Son permisibles combinaciones de sustituyentes y/o variables solamente si dichas combinaciones producen compuestos estables.
"Compuesto estable" o "estructura estable" se define como un compuesto o estructura que es suficientemente robusta para sobrevivir al aislamiento hasta un grado de pureza útil a partir de una mezcla de reacción, y a la formulación en un agente terapéutico eficaz.
La expresión "opcionalmente sustituido" significa sustitución opcional con los grupos, radicales o restos especificados. La presente invención se describirá ahora en los siguientes ejemplos. Estos ejemplos están destinados a ser ilustrativos de la invención, y no están destinados a ser limitantes de la invención.
Ejemplos
Métodos
Líneas celulares cancerosas
Para determinar si la sensibilidad de células derivadas de cáncer a inhibidores de TTK se correlaciona con la presencia de un marcador genómico específico, se perfilaron diversos inhibidores de TTK en paralelo en un panel de sesenta y seis líneas celulares cancerosas derivadas de diferentes orígenes tumorales y que se han caracterizado con respecto a la expresión y estado mutante de diversos oncogenes y genes supresores tumorales (Uitdehaag, J.C.M.,etal.,PLoS ONE 9(3), e92146; 2014). Las líneas celulares cancerosas usadas se enumeran en latabla 1. Todas las líneas celulares se adquirieron de la American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA, EE. UU.).
Tabla 1.Líneas celulares cancerosas usadas en el análisis de sensibilidad a fármacos.
El estado genético de los treinta y un genes cancerosos más frecuentemente cambiados en el panel de líneas celulares se ha establecido como "mutante" o "natural" a partir de datos públicos de secuenciación (Garnett, M.J.,etal.,Nature 483: 570; 2012). En latabla 2se enumeran las líneas celulares que tiene mutaciones en el genCTNNB1.A427, LS 174T, HCT116 y SW48 tienen mutaciones en los residuos de serina o treonina que regulan la estabilidad de p-catenina mediante fosforilación en residuos específicos de serina y treonina (Polakis, P., Curr. Opin. Gen. Dev. 9: 15; 1999). Las otras líneas celulares enumeradas en la tabla y las líneas celulares del panel de sesenta y seis líneas celulares cancerosas que no se mencionan, tienen mutaciones deCTNNB1que no están implicadas en la regulación de la estabilidad de la proteína, o no tienen ninguna mutación en el genCTNNB1.
Tabla 2.Mutaciones del genCTNNB1en líneas celulares cancerosas incluidas en el análisis de sensibilidad a fármacos.
Referencias
1. Cosmic Cell Lines project, estado de 2 de febrero de 2015
2. Garnett, M.J.,et al.
3. Wang, Z.,et al.,Cancer Res. 63: 5234; 2003
4. Cancer Cell Line Encyclopedia, estado de 2 de febrero de 2015
5. Morin,et al.,1997; Ilyas, M.,et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 10330; 1997
Ensayos de proliferación celular
Todas las líneas celulares se cultivaron en el medio recomendado por la ATCC. Los medios de cultivo se adquirieron de Life Technologies (Bleiswijk, Países Bajos). Los ensayos de proliferación se realizaron como se describe (Uitdehaag J.C.M.,et al.)en placas de 384 pocillos con incubación con compuesto durante 120 horas. Los efectos de los inhibidores de TTK se midieron en una serie de dilución de 9 puntos por duplicado. La concentración final de DMSO durante la incubación fue un 0,4 % (v/v) en todos los pocillos. Como lectura, el contenido de ATP intracelular se usó como una medida indirecta del número de células, usando solución de 1 etapa ATPIite<™>(Perkin Elmer, Groningen, Países Bajos). El efecto de los compuestos sobre el crecimiento celular se calculó con respecto a los pocillos de control que contenían solamente un 0,4 % (v/v) de DMSO. Se ajustaron las potencias inhibidoras semimáximas (CI<50>s) mediante regresión no lineal usando XLfit<™>5 (ID Business Solutions, Ltd., Surrey, Reino Unido).
Análisis de datos de respuesta del panel de células
Se usó análisis de la varianza (Anova) para determinar si había correlación estadística entre un cambio genético particular en el panel de líneas celulares y la sensibilidad a fármacos. Las mutaciones y el<10>logCI<50>de los ensayos de proliferación celular se analizaron con un análisis Anova de tipo II usando el programa estadístico R (R Foundation for statistical computing, Viena, Austria) y se presentaron en diagramas de volcán tal como se muestra en lafigura 2.El valor dep(eje de ordenadas en el diagrama de volcán) indica el nivel de confianza para la asociación genética de mutaciones en un gen particular con un desplazamiento de CI<50>. El factor promedio con el que la CI<50>se desplaza se indica en el eje de abscisas. Las áreas de los círculos son proporcionales al número de mutantes en el panel de células (cada mutación está presente al menos dos veces). Para calcular la significación, los valores depse sometieron a una correlación de ensayo múltiple de Benjamini-Hochberg (Benjamini, Y., y Hochberg, Y., J. Royal. Statistic. Soc. B 57:289; 1995). Las asociaciones genéticas con <20 % de tasas de falsos descubrimientos se consideraron significativas.
Análisis estadístico de diferencia en la sensibilidad
Para cuantificar las diferencias en la sensibilidad entreCTNNB1mutante yCTNNB1sin alteraciones, la potencia inhibidora de los inhibidores de TTK se expresó como pCI<sü>(-<10>logCI<5ü>). Se realizó un ensayo de latde Student bilateral para determinar si las diferencias en la sensibilidad (ApCl<50>) entre células conCTNNB1mutante yCTNNB1sin alteraciones eran estadísticamente significativas (es decir,p<0,05).
Comparación de la sensibilidad en líneas celulares isogénicas
Para determinar siCTNNB1mutado era suficiente para conferir sensibilidad aumentada a inhibidores de TTK, se realizó el ensayo de proliferación con un par de líneas celulares isogénicas. Las células HCT116 originales albergan una eliminación de tres pares de bases en una copia del genCTNNB1,que provoca una eliminación del residuo de serina regulador en la posición 45 (S45del) de p-catenina (tabla 2). Las células HCT116 originales además son heterocigóticas con respecto a la mutación en el genCTNNB1,es decir, el genotipo de HCT116 original con respecto aCTNNB1es S45del/+. Se adquirió una línea celular isogénica derivada de HCT116 que carece de copia del genCTNNB1mutado (+/-) de Horizon Discovery (Cambridge, Reino Unido) (Chan, T.A.,et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 8265; 2002). Los derivados originales e isogénicos de HCT116 se cultivaron en medios idénticos, como se recomienda por el proveedor. Se realizaron ensayos de proliferación como se describe para líneas celulares cancerosas (Uitdehaag J.C.M.,et al.).Se trazaron las curvas de respuesta a la dosis, se calcularon la CI<50>, pCl<50>y el porcentaje máximo de efecto (eficacia) usando XLfit<™>5. La diferencia en la sensibilidad del derivado original e isogénico se expresó como la diferencia en pCl<50>(ApCl<50>) y la diferencia en la eficacia (Aeficacia).
Inhibidores de TTK (ejemplos 1 a 31)
Los siguientes ejemplos son realizaciones ilustrativas de la invención, que no limitan el alcance de la invención de ninguna manera. Los reactivos están disponibles en el mercado o se preparan de acuerdo con procedimientos de la bibliografía.
Método de LCMS (A)
Método de LCMS (B)
Método de LCMS (C)
Método de HPLC preparativa
Se usan las siguientes abreviaturas en toda la solicitud con respecto a la terminología química:
TFA Ácido trifluoroacético
HATU Hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
DMF W,W-Dimetilformamida
THF Tetrahidrofurano
MeOH Metanol
EtOAc Acetato de etilo
DCM Diclorometano
Na2SO4 Sulfato de sodio
TMS-Cl Clorotrimetilsilano
DiPEA W,W-Diisopropiletilamina
EtOH Etanol
10 % de Pd/C 10 % de paladio sobre carbón
HPLC Cromatografía de líquidos de alto rendimiento
LCMS Cromatografía de líquidos con detección por espectrometría de masas
NaOH Hidróxido de sodio
KOH Hidróxido de potasio
HCl Cloruro de hidrógeno
NaHCO3 Bicarbonato de sodio
4-DMAP 4-Dimetilaminopiridina
Boc terc-Butiloxicarbonilo
Cbz Benciloxicarbonilo
HNO3 Ácido nítrico
LiHMDS bis(Trimetilsilil)amida de litio
DDQ 2,3-Dicloro-5,6-diciano-p-benzoquinona
DEAD Azodicarboxilato de dietilo
o/n durante la noche
Los nombres de los productos finales en los ejemplos se generan usando Accelrys Draw (versión 4.1).
Ejemplo 1 (WITJ0018D)
M5-c¡clohex¡l-M2-(2-met¡l-4-morfol¡no-fen¡l)-9fí-purín-2.6-d¡am¡na
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO2010/111406 A2 y Bioorg. Med. Chem. Letters 22 (2012) 4377. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (338 mg). Datos: LCMS (C) Rt: 10,995 min;m /z408,3 (M+H)+.
Ejemplo 2 (JGS0282C)
M-c¡cloprop¡l-4-r8-(¡sobut¡lam¡no)¡m¡dazoH.2-alp¡raz¡n-3-¡llbenzam¡da
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO2012/080229 A1 y Cell Death and Differentiation 20 (2013), 1532. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (47 mg). Datos: lCm S (B) Rt : 8,088 min;m/z350,2 (M+H)+.
Ejemplo 3 (BTHO238B)
M-(2.6-d¡et¡lfen¡l)-1-met¡l-8-r4-r(1-met¡l-4-p¡per¡d¡l)carbamo¡ll-2-(tr¡fluorometox¡)an¡l¡nol-4.5-d¡h¡drop¡razolor4.3-ñlau¡nazol¡n-3-carboxam¡da
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO2009/156315 A1 y Cancer Res. 70 (2010), 10255. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (191 mg). Datos: LCMS (A) Rt : 5,810 min;m/z677,6 (M+H)+ .
Ejemplo 4 (WITJ113B)
M-(2.6-d¡et¡lfen¡l)-8-(2-metox¡-4-p¡peraz¡n-1-¡l-an¡l¡no)-1-met¡l-4.5-d¡h¡drop¡razolor4.3-ftlau¡nazolin-3-carboxamida
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO2009/156315 A1. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (7,3 mg). Datos: LCMS (C) Rt : 12,954 min; m/z 567,3 (M+H)+ .
Ejemplo 5 (JGS0716D)
M-c¡cloprop¡l-4-r6-(2.3-d¡fluoro-4-metox¡-fenox¡)-8-(tetrah¡drop¡ran-4-¡lmet¡lam¡no)¡m¡dazori.2-blp¡r¡daz¡n-3-¡ll-2-met¡l-benzam¡da
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO 2014/131739 A1. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (90 mg). Datos: LCMS (B) Rt : 13,496 min;m/z564,5 (M+H)+ .
Ejemplo 6 (JGS0728A)
M-c¡cloprop¡l-4-r6-(3-fluoro-4-metox¡-fenox¡)-8-(oxetan-3-¡lmet¡lam¡no)¡m¡dazori.2-blp¡r¡daz¡n-3-¡ll-2-met¡lbenzamída
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO 2014/131739 A1. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (45 mg). Datos: LCMS (B) Rt : 11,640 min;m/z518,4 (M+H)+ .
Intermed¡o 1
2-Cloro-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndoliz¡n-7-carbox¡lato de etilo
(a) 5-Bromo-2-cloro-p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (WITJ0221)
A una solución de 5-bromo-2,4-dicloro-pirimidina (150 g; 658 mmol) en THF (445 ml) se le añadió hidróxido de amonio (25 % en agua, 250 ml) y la mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 90 min. La mezcla posteriormente se concentró al vacío hasta un pequeño volumen y se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró para dar 137,3 g (rendimiento cuant.) de 5-bromo-2-cloro-pirimidin-4-amina.
(b) 5-Bromo-2-metox¡-p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (WITJ0223)
A una suspensión de 5-bromo-2-cloro-pirimidin-4-amina (137,3 g, 658 mmol) en metanol (1 l) se le añadió en porciones metóxido de sodio (83,5 g; 1,54 mol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a reflujo. La mezcla de reacción se concentró hasta un pequeño volumen (~400 ml) y se vertió en una solución saturada de cloruro de amonio en agua (1,2 l). Esta mezcla se dejó en agitación durante 15 min, tras lo que la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las capas combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 5-bromo-2-metoxipirimidin-4-amina (133,7 g, 99,4 %).
(c) (E)-3-(4-am¡no-2-metox¡-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)prop-2-enoato de et¡lo (WITJ0256)
Se disolvieron acetato de paladio (II) (1,21 g, 5,5 mmol) y trifenilfosfina (3,40 g, 13,0 mmol) en DMF anhidro y sin oxígeno (53 ml) y se agitaron durante 5 min a 30 °C para dar una suspensión naranja. A esta suspensión se le añadió una solución de 5-bromo-2-metoxipirimidin-4-amina (44,1 g, 216 mmol) en DMF (270 ml), trietilamina (60,2 ml, 432 mmol) y una solución de acrilato de etilo (23,5 ml, 216 mmol) en DMF (50 ml). La mezcla de reacción se agitó a 100 °C o/n en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se evaporó hasta un pequeño volumen. Se añadieron agua (300 ml) y salmuera (300 ml) a la mezcla, seguido de una extracción con acetato de etilo (300 ml, dos veces). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna de sílice (acetato de etilo:heptano = 2:1 % v/v) para producir el compuesto del título (38,2 g, 77 %).
(d) 2-Metox¡-6.8-d¡h¡dro-5fí-p¡r¡dor2.3-d1p¡r¡m¡d¡n-7-ona (WITJ0262)
A una solución agitada de (£)-3-(4-amino-2-metoxi-pirimidin-5-il)prop-2-enoato de etilo (12,52 g, 56,1 mmol) en metanol (250 ml) se le añadió una suspensión de Pd al 10 % sobre carbón (1,19 g) en metanol/etanol = 3/1 % v/v (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 min en atmósfera de nitrógeno. Entonces, se añadió formiato de amonio (35,3 g, 561 mmol) y la mezcla de reacción resultante se calentó a reflujo o/n. Después de enfriar la mezcla de reacción, se añadió una porción reciente de formiato de amonio (20 g, 317 mmol) y la agitación se continuó una noche adicional a reflujo. La mezcla de reacción se filtró sobre Decalite® y el residuo de Pd-C/Decalite® se lavó con diclorometano/metanol = 8/2 % v/v y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con agua, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío para obtener 9,4 g (94 %) de 2-metoxi-6,8-dihidro-5H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.
(e) 2-Metox¡-5.6.8.9-tetrah¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxilato de etilo (JGS0241)
Se suspendió 2-metoxi-6,8-dihidro-5H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (4,79 g, 26,8 mmol) en THF (200 ml) en un matraz de tres bocas (500 ml), equipado con un agitador mecánico, un termómetro y un condensador de reflujo. La mezcla se enfrió hasta 0 °C y se añadió hidruro de sodio (dispersión al 60 % en aceite, 1,18 g, 29,4 mmol) en dos lotes. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min. Se añadió tetrafluoroborato de (1-etoxicarbonilciclopropil)trifenilfosfonio (13,6 g, 29,4 mmol) y la suspensión resultante se calentó hasta reflujo y se mantuvo a temperatura de reflujo durante 3 días. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en una mezcla 1/1/1 de salmuera/agua/EtOAc (450 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vacío para dar 18,05 g de un aceite naranja. El producto en bruto se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
(f) 2-Metox¡-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carbox¡lato de et¡lo (JGS244)
A una solución agitada de 2-metoxi-5,6,8,9-tetrahidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (18,05 g, 26,2 mmol) en diclorometano (100 ml) se le añadió ácido acético (3,15 g, 3 ml) y acetato de plomo (IV) (13,9 g, 31,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente, después se filtró sobre un filtro de PE para retirar las sales de Pb y el residuo de Pb se lavó con 2 x 30 ml de DCM. El filtrado se concentró al vacío y el residuo resultante se disolvió en acetato de etilo (300 ml). Se añadió una solución de bicarbonato de sodio (5 %) hasta pH ~8,5. Tanto las capas orgánicas como las acuosas se filtraron sobre Decalite® para retirar cualquier sal restante. La capa acuosa posteriormente se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución al 5 % de bicarbonato de sodio (100 ml), agua (100 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre sílice (heptano:acetato de etilo = 1/0 a 1/1 % v/v) para producir el compuesto del título (4,74 g, 66 % en dos etapas).
(g) 2-H¡drox¡-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carbox¡lato de et¡lo (JGS0245)
Se añadió yoduro de sodio (7,83 g, 52,2 mmol) a una solución agitada de 2-metoxi-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (4,74 g, 17,3 mmol) en acetonitrilo (150 ml). Se añadió gota a gota cloruro de trimetilsililo (5,64 g, 6,59 ml) disuelto en acetonitrilo (30 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente o/n. Se añadió Nal (1 equiv.) y se añadió gota a gota TMS-Cl adicional (0,94 g, 1,1 mmol) en acetonitrilo (6 ml) y la reacción se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. La mezcla se concentró y el residuo se suspendió en 200 ml de DCM/MeOH (4/1) y se extrajo con una mezcla de solución saturada de tiosulfato de sodio (200 ml) y agua (200 ml). La capa acuosa se extrajo con 3 x 150 ml de DCM/MeOH (4/1). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida para dar un sólido amarillo. El residuo se secó a 40 °C al vacío durante 18 h para dar 3,89 g de 2-hidroxi-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (86 %).
(h) 2-Cloro-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carbox¡lato de et¡lo (¡ntermed¡o 1) (JGS0248)
Se añadió W,W-dimetilanilina (182 mg, 191 ul, 1,50 mmol) a una solución de 2-hidroxi-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (3,89 g, 15,0 mmol) en acetonitrilo (100 ml). Se añadió gota a gota una solución de oxicloruro de fósforo (V) (11,5 g, 7,00 ml, 75,0 mmol) en acetonitrilo (15 ml) a la mezcla de reacción. La suspensión amarilla se calentó durante 4 horas hasta 65 °C durante lo que la suspensión se transformó en una solución transparente. Después de un periodo de refrigeración, la mezcla se vertió lentamente en una mezcla agitada de amoniaco ac. al 25 % (200 ml, 86,7 equiv.) y agua helada (250 ml) manteniendo la temperatura por debajo de 10 °C en 15-20 minutos. Después de agitar durante otros 15 minutos, los sólidos se filtraron. Los sólidos se disolvieron en 200 ml de EtOAc y se lavaron con salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró al vacío para dar un sólido blanquecino. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre sílice (heptano/acetato de etilo = 1/0 a 1/1 % v/v) para producir el compuesto del título (3,05 g, 73 %).
Intermed¡o A
4-(4-Am¡no-3-met¡l-fen¡l)p¡peraz¡n-1-carbox¡lato de benc¡lo
(a) 4-(3-Met¡l-4-nitro-fen¡l)p¡peraz¡n-1-carbox¡lato de bencilo (WITJ404)
Se añadieron piperazin-1-carboxilato de bencilo (1,05 ml, 5,25 mmol) y carbonato de potasio (1,38 g, 10 mmol) a una solución de 4-fluoro-2-metil-1 -nitro-benceno (776 mg, 5 mmol) en DMF (10 ml) y la mezcla resultante se agitó a 100 °C durante 18 h. Se añadió agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna de sílice (heptano/acetato de etilo = 1/0 a 6/4 % v/v) para producir el compuesto del título (1,75 g, 98 %).
(b) 4-(4-Am¡no-3-met¡l-fen¡l)p¡peraz¡n-1-carbox¡lato de bencilo (¡ntermed¡o A) (WITJ406)
4-(3-Metil-4-nitro-fenil)piperazin-1-carboxilato de bencilo (355 mg, 1 mmol) se disolvió en THF (5 ml) y se añadió ácido acético (1,1 ml). La mezcla se enfrió hasta 0 °C y se añadió cinc (1,31 g, 20 mmol) en pequeñas porciones para mantener la temperatura por debajo de 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente o/n. Después de que el análisis por TLC indicara una conversión completa del material de partida, la mezcla se filtró sobre Decalite® y el residuo de Zn-Decalite® se lavó con EtOAc (20 ml). Los filtrados combinados se lavaron con una solución de NaOH 1 N (25 ml), seguida de agua (25 ml) y salmuera (25 ml). La capa orgánica se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró al vacío para dar 4-(4-amino-3-metil-fenil)piperazin-1-carboxilato de bencilo (327 mg, cuantitativo).
Intermed¡o 2
4-r4-r(7-Clorocarbon¡l-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-2-¡l)am¡no1-3-met¡lfen¡l1p¡peraz¡n-1-carbox¡lato de bencilo
(a) 2-r4-(4-Benc¡lox¡carbon¡lp¡peraz¡n-1-¡l)-2-met¡l-an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndoliz¡n-7-carbox¡lato de etilo (WITJ407)
A una suspensión de 2-cloro-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (intermedio 1, 292 mg, 1,05 mmol) en n-butanol (8 ml) se le añadió 4-(4-amino-3-metil-fenil)piperazin-1-carboxilato de bencilo (intermedio A, 327 mg, 1,0 mmol) y ácido trifluoroacético (153 pl, 2,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó durante 12 horas a 120 °C con radiación microondas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna de sílice (heptano/acetato de etilo = 4/6 a 0/1 % v/v). Las fracciones que contenían producto se recogieron y se evaporaron para producir 2-[4-(4-benciloxicarbonilpiperazin-1-il)-2-metil-anilino]-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (423 mg, 75 % de rendimiento).
(b) 4-f4-f(7-Clorocarbon¡l-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dof4.5-e1¡ndol¡z¡n-2-¡l)am¡no1-3-met¡l-fen¡l1p¡peraz¡n-1-carboxilato de bencilo (intermedio 2) (WITJ408/WITJ414)
A una solución de 2-[4-(4-benciloxicarbonilpiperazin-1-il)-2-metil-anilino]-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (423 mg, 0,75 mmol) en 15 ml de etanol absoluto se le añadió una solución de NaOH 2 M (935 pl (2,5 equiv.). 1,87 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 65 °C o/n. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y se secó a alto vacío. El residuo resultante se disolvió en agua, se agitó o/n a temperatura ambiente y se liofilizó para producir el 2-[4-(4-benciloxicarbonilpiperazin-1 -il)-2-metil-anilino]-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de sodio en bruto.
Se añadió cloruro de tionilo (561 pl, 7, mmol) a una suspensión fría (0 °C) del 2-[4-(4-benciloxicarbonilpiperazin-1-il)-2-metil-anilino]-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de sodio en bruto (217 mg, 0,39 mmol teor.) en diclorometano (8 ml). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente o/n. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se coevaporó con tolueno (2 x 10 ml) para dar 4-[4-[(7-clorocarbonil-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-2-il)amino]-3-metil-fenil]piperazin-1-carboxilato de bencilo como un polvo amarillo/pardo (261 mg, rendimiento en bruto cuant.).
Ejemplo 7 (WIT J0416/WITJ429A)
M-(2.6-d¡met¡lfen¡0-2-(2-met¡l-4-p¡peraz¡n-1-¡l-an¡l¡no)-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndoliz¡n-7-carboxam¡da
A una suspensión de 4-[4-[(7-clorocarbonil-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-2-il)amino]-3-metil-fenil]piperazin-1-carboxilato de bencilo (¡ntermed¡o 2, 45 mg, 0,081 mmol teor.) en acetonitrilo (3 ml) se le añadió 2,6-dimetilanilina (15 pl, 0,12 mmol) y una cantidad catalítica de 4-DMAP. La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 1 h. Después de la evaporación del disolvente, el grupo Cbz se desprotegió usando TFA/tioanisol y el producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Las fracciones que contenían producto se recogieron y se concentraron al vacío. El residuo se repartió entre diclorometano y solución de NaHCÜ3 al 5 %. La fase orgánica se separó sobre un filtro de PE y se evaporó para producir el compuesto del título (20 mg, 64 %). Datos: LCMS (B) Rt : 9,706 min;m /z508,3 (M+H)+.
Ejemplo 8 (JGS439C)
M-(2,6-d¡met¡lfen¡l)-2-r2-metox¡-4-(tetrah¡drop¡ran-4-¡lcarbamo¡l)an¡l¡no1-5,6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4,5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxamída
(a) 2-(4-Bromo-2-metox¡-an¡l¡no)-M-(2.6-d¡met¡lfen¡l)-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da (JGS453)
Este compuesto se preparó a partir de su cloruro de ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2, usando 4-bromo-2-metoxianilina disponible en el mercado como material de partida. El cloruro de ácido posteriormente se hizo reaccionar con 2,6-dimetilanilina de acuerdo con procedimientos descritos en elejemplo 7para producir el compuesto del título (1,35 g, 84 %).
(b) 2-(4-C¡ano-2-metox¡-an¡l¡no)-M-(2.6-d¡met¡lfen¡l)-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-el¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da (JGS455)
A una solución de 2-(4-bromo-2-metoxi-anilino)-N-(2,6-dimetilfenil)-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxamida (1,35 g, 2,6 mmol) y cianuro de cinc (321 mg, 2,73 mmol) en DMF (4 ml) se le añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (300 mg, 0,26 mmol). La mezcla de reacción se calentó durante 30 minutos a 170 °C con radiación microondas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se concentró y el residuo se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío para producir el compuesto del título en bruto (1,05 g, 87 %).
(c) Ácido 4-rr7-r(2.6-d¡met¡lfen¡0carbamo¡n-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-él¡ndol¡z¡n-2-¡nam¡no1-3-metox¡-benzo¡co (JGS0457)
A una suspensión agitada de 2-(4-ciano-2-metoxi-anilino)-W-(2,6-dimetilfenil)-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxamida (750 mg, 1,61 mmol) en MeOH (25 ml) se le añadió una solución de hidróxido de potasio (453 mg, 8,07 mmol) en agua (12,5 ml). La mezcla de reacción se calentó durante 2 horas a 120 °C con radiación microondas. Después de la evaporación de la fracción de metanol, la capa acuosa resultante se acidificó mediante la adición de solución de HCl 2 N hasta pH 2. Después de la extracción con diclorometano, las capas orgánicas combinadas se filtraron sobre un filtro de PE para dar 330 mg del compuesto del título (rendimiento: 42 %).
(d) N-(2.6-d¡met¡lfen¡l)-2-r2-metox¡-4-(tetrah¡drop¡ran-4-¡lcarbamo¡l)an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da (JGS439C)
Se disolvió ácido 4-[[7-[(2,6-dimetilfenil)carbamoil]-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-2-il]amino]-3-metoxi-benzoico (30 mg, 0,062 mmol) en Ñ,W-dimetilformamida (3 ml). Posteriormente se añadieron HATU (25,9 mg, 0,068 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (43,1 pl, 0,25 mmol) y la mezcla se agitó durante 10 min a temperatura ambiente. Se añadió clorhidrato de 4-aminotetrahidropirano (12,8 mg, 0,093 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente o/n. La mezcla se vertió en una mezcla de acetato de etilo/agua/salmuera (1/1/1) y se agitó durante 15 min. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (5 mg, 18 %). Datos: LCMS (B) Rt : 14,407 min;m/z567,3 (M+H)+.
Intermed¡o B(NV0068/NV0076)
2-Metox¡-4-(1.3.5-tr¡met¡lp¡razol-4-¡l)an¡l¡na
(a) M-r2-metox¡-4-(1 ■3.5-tr¡met¡lp¡razol-4-¡l)fen¡l1carbamato de terc-but¡lo (NV0068)
Una mezcla de N-(4-bromo-2-metoxi-fenil)carbamato de terc-butilo (150 mg, 0,5 mmol), 1,3,5-trimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazol (118 mg, 0,5 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (58 mg, 0,05 mmol) y carbonato de potasio (207 mg, 1,5 mmol) en dioxano (4 ml) se calentó a 100 °C con irradiación microondas durante 20 minutos en un tubo sellado. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se concentró y el residuo se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (heptano/acetato de etilo = 100/0 a 25/75 % v/v) para producir W-[2-metoxi-4-(1,3,5-trimetilpirazol-4-il)fenil]carbamato de terc-butilo (126,8 mg, 77 %).
(b) 2-Metox¡-4-(1.3.5-tr¡met¡lp¡razol-4-¡l)an¡l¡na (¡ntermed¡o B) (NV0076)
Se disolvió W-[2-metoxi-4-(1,3,5-trimetilpirazol-4-il)fenil]carbamato de terc-butilo (127 mg, 0,38 mmol) en DCM (2 ml). Se añadió TFA (3 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se concentró al vacío para dar un aceite pardo (313 mg) que se usó sin purificación adicional.
Intermed¡o C(JDM0438/JDM0435)
1-r2-r2-(2-Metox¡etox¡)etox¡1et¡l1-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-am¡na
(a) 1-r2-r2-(2-Metox¡etox¡)etox¡1et¡l1-3.5-d¡met¡l-4-n¡tro-p¡razol
A una solución fría (0 °C) de 3,5-dimetil-4-nitro-1H-pirazol (250 mg, 1,77 mmol), éter monometílico de trietilenglicol (482 pl, 3,01 mmol) y trifenilfosfina (789 mg, 3,01 mmol) en THF (10 ml) se le añadió gota a gota una solución de DEAD al 40 % en tolueno (1,31 ml, 3,01 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. Se añadió acetato de etilo y se lavó con una solución de NaCl al 10 %. La capa orgánica se secó (Na2SÜ4), se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH = 99/1 a 95/5 % v/v) para producir 1-[2-[2-(2-metoxietoxi)etoxi]etil]-3,5-dimetil-4-nitro-pirazol (1,7 g, en bruto) que se usó sin purificación en la siguiente etapa.
(b) 1-r2-r2-(2-metox¡etox0etox¡1et¡l1-3.5-dimet¡l-p¡razol-4-am¡na (intermedio C)
Se disolvió 1-[2-[2-(2-metoxietoxi)etoxi]etil]-3,5-dimetil-4-nitro-pirazol (1,5 g, 1,77 mmol teor.) en THF (15 ml) y se añadió ácido acético (1,6 ml). La mezcla se enfrió hasta 0 °C y se añadió cinc (2,3 g, 35,4 mmol) en pequeñas porciones manteniendo la temperatura por debajo de 20 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente o/n. Después de que el análisis por TLC indicara una conversión completa del material de partida, la mezcla se filtró sobre Decalite® y el residuo de Zn-Decalite® se lavó con acetato de etilo. Los filtrados combinados se lavaron con una solución de NaOH 1 N, seguida de agua y salmuera. La capa orgánica se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en metanol y después se filtró sobre una columna de SCX-2. Después de aclarar la columna con metanol, el producto deseado se eluyó con una solución 0,7 N de amoniaco/metanol para dar el compuesto del título (340,1 mg, 74,7 %).
Ejemplo 9 (JDM0641A)
M-ri-r2-r2-(2-metox¡etox¡)etox¡let¡ll-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-¡ll-2-r2-metox¡-4-(1.3.5-tr¡met¡lp¡razol-4-¡l)an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2b, usando¡ntermed¡o Bcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Cde una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (19,5 mg, 42,6 %). Datos: LCMS (B) Rt : 10,946 min;m/z684,7 (M+H)+.
Intermed¡o D(JGS88/92)
2-Metox¡-4-(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)an¡l¡na
Este compuesto se preparó de una manera análoga como se describe para el¡ntermed¡o A, partiendo de N-metilpiperazina y 2-metoxi-4-fluoronitrobenceno para producir el compuesto del título (1,38 g, 94 %).
Ejemplo 10 (JDM0443A)
MLri-r2-r2-(2-metox¡etox¡)etox¡1et¡l1-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-¡l1-2-r2-metox¡-4-(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndoliz¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su cloruro de ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2, usando¡ntermed¡o Dcomo material de partida. El cloruro de ácido posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Cde acuerdo con procedimientos descritos en elejemplo 8d.La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (11,6 mg, 28,6 %). Datos: LCMS (B) Rt : 6,985 min;m/z674,3 (M+H)+.
Ejemplo 11 (JGS79C)
M-(2,6-d¡et¡lfen¡l)-2-r2-metox¡-4-(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)an¡l¡no1-5,6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4,5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxamída
Este compuesto se preparó a partir de su éster correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones como se describe para el¡ntermed¡o 2a, usando¡ntermed¡o Dcomo material de partida. Se añadió LiHDMS (1 M en THF/etilbenceno, 412 pl, 0,412 mmol) a una solución fría (0 °C) de 2,6-dietilanilina (50,8 pl, 0,31 mmol) en THF (1 ml). Después de 15 minutos de agitación a 0 °C, se añadió gota a gota 2-[2-metoxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)anilino]-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (48 mg, 0,103 mmol) en THF (2 ml) a la mezcla de reacción y la agitación se continuó durante 90 min a 0 °C. Se añadió gota a gota LiHMDS adicional (100 pl) a temperatura ambiente y la agitación se continuó durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se inactivó con 20 ml de solución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (13,5 mg, 23,2 %). Datos: LCMS (C) Rt : 12,686 min;m/z566,4 (M+H)+.
Intermed¡o E(/WITJ437WITJ438/WITJ440)
2-(D¡fluorometox¡)-4-(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)an¡l¡na
A una solución de 5-fluoro-2-nitro-fenol (500 mg, 3,18 mmol) en DMF (6 ml) se le añadió 2-cloro-2,2-difluoro-acetato de sodio (970 mg, 6,36 mmol) y dicarbonato de sodio (405 mg, 3,82 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 3,5 horas y posteriormente a temperatura ambiente durante 3 días. Se añadió una solución de HCl 4 M hasta que se obtuvo una solución transparente y la mezcla se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución de NaOH 1 M y salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (heptano/acetato de etilo = 10/0 a 8/2 % v/v) para producir 2-(difluorometoxi)-4-fluoro-1-nitro-benceno (493 mg, 75 %).
El compuesto del título se preparó de una manera análoga como se describe para el¡ntermed¡o A, partiendo de N-metilpiperazina y 2-(difluorometoxi)-4-fluoro-1 -nitro-benceno para producir 180 mg (80 %).
Intermedio F(JDM300/WITJ410/WITJ411/WITJ413)
3,5-Dietil-1 H-pirazol-4-amina
(a) 3.5-Dietil-1 H-pirazol
A una solución de 3,5-heptanodiona (2 g, 15,6 mmol) e hidrazina hidrato (0,77 g, 15,8 mmol) en agua (10 ml) se le añadió ácido acético (1 gota) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 h. La mezcla de reacción entonces se enfrió, y se concentró a presión reducida para proporcionar 1,8 g del compuesto del título. Este compuesto se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
(b) 3■5-D¡et¡l-4-n¡tro-1 H-pirazol
A una mezcla fría (0 °C) de 3,5-dietil-1 H-pirazol (1,8 g, 14,5 mmol) y ácido sulfúrico concentrado (1,5 ml) se le añadió lentamente, en agitación vigorosa, HNO3 humeante (4,35 ml). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a 60 °C. La mezcla posteriormente se enfrió hasta temperatura ambiente, después se añadió cuidadosamente a una solución saturada helada de bicarbonato de sodio y se agitó durante 15 min. La mezcla entonces se extrajo tres veces con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron al vacío para dar: 2,52 g de 3,5-dietil-4-nitro-1 H-pirazol.
(c) 3.5-Dietil-1 H-pirazol-4-amina (intermedio F)
El compuesto del título se preparó de una manera análoga como se describe para elintermedio C, partiendo de 3,5-dietil-4-nitro-1 H-pirazol para dar 3,5-dietil-1 H-pirazol-4-amina (174 mg, 71 %).
Ejemplo 12 (WITJ453B)
M-(3.5-dietil-1H-pirazol-4-il)-2-r2-(difluorometoxi)-4-(4-metilpiperazin-1-il)anilinol-5.6-dihidropirimidor4.5-elindolizin-7-carboxamida
Este compuesto se preparó a partir de su ácido carboxílico correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones como se describe para elintermedio 2b, usandointermedio Ecomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar conintermedio Fde una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (9,6 mg, 23 %). Datos: LCMS (B) Rt : 8,864 min; m/z 592,3 (M+H)+.
Intermedio G(JDM617/JDM622/JDM630)
3.5-Dietil-1-r2-r2-(2-metoxietoxi)etoxiletillpirazol-4-amina
El compuesto del título se preparó de una manera análoga como se describe para elintermedio C, partiendo de 3,5-dietil-4-nitro-1 H-pirazol (intermedio Fb) y éter monometílico de trietilenglicol para dar 660 mg de 3,5-dietil-1-[2-[2-(2-metoxietoxi)etoxi]etil]pirazol-4-amina (41,7 %).
Intermedio M(WITJ461/WITJ458)
4-(4-Am¡no-3-metox¡-fen¡l)p¡perazin-1-carbox¡lato de bencilo
Este compuesto se preparó de una manera análoga como se describe para el¡ntermed¡o A, partiendo de piperazin-1-carboxilato de bencilo y 2-metoxi-4-fluoronitrobenceno para producir el compuesto del título (1,2 g, 95 %).
Ejemplo 13 (JDM0684A)
M-r3.5-d¡et¡l-1-r2-r2-(2-metox¡etox¡)etox¡1et¡llp¡razol-4-¡l1-2-r2-metox¡-4-r4-(2-metox¡acet¡l)p¡peraz¡n-1-¡l1an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su amina correspondiente (preparada como se describe para elejemplo 7partiendo de¡ntermed¡o 1e¡ntermed¡o M) y ácido metoxiacético, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (17,8 mg, 57,1 %). Datos: LCm S (B) Rt : 9,908 min;m/z760,8 (M+H)+.
Intermed¡o H(JDM221/JDM0222/JDM393)
1-(2-Metox¡et¡l)-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-am¡na
(a) 1-(2-Metox¡et¡l)-3.5-d¡met¡l-4-n¡tro-p¡razol
A una solución de 3,5-dimetil-4-nitro-1 H-pirazol (2,5 g, 17,7 mmol) y carbonato de cesio (6,06 g, 18,6 mmol) en DMF (50 ml) se le añadió éter 2-bromoetil metílico (2,59 g, 1,75 ml, 18,6 mmol). La mezcla se calentó a 100 °C durante 3,5 h. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (EtOAc/heptanos = 1/4 % v/v) para producir 1-(2-metoxietil)-3,5-dimetil-4-nitro-pirazol (2,66 g, 75,4 %) como un sólido cristalino blanco.
(b) 1-(2-Metox¡et¡l)-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-am¡na
Se disolvió 1-(2-metoxietil)-3,5-dimetil-4-nitro-pirazol (245 mg, 1,22 mmol) en metanol (25 ml). La solución resultante se hidrogenó usando un reactor de hidrogenación de flujo continuo H-Cube, un 10 % de Pd/C, a 30 °C, 8-10 bar, 1 ml/min, modo Hz completo. La solución resultante se concentró al vacío para producir 208 mg (rendimiento cuant.) del compuesto del título como un aceite pardo claro.
Intermedio I(JDM464/JDM450)
3,5-D¡et¡l-1-r2-(2-metox¡etoxi)et¡llp¡razol-4-am¡na
El compuesto del título se preparó de una manera análoga como se describe para el¡ntermed¡o H, partiendo de 3,5-dietil-4-nitro-1 H-pirazol (¡ntermed¡o Fb) y 1-bromo-2-(2-metoxietoxi)-etano para dar 290 mg de 3,5-dietil-1 -[2-(2-metoxietoxi)etil]pirazol-4-amina (72,2 %.).
Ejemplo 14 (JDM0466A)
M-r3,5-d¡et¡l-1-r2-(2-metox¡etox¡)et¡llp¡razol-4-¡l1-2-r2-metox¡-4-(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)an¡l¡no1-5,6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4,5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su cloruro de ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2, usando¡ntermed¡o Dcomo material de partida. El cloruro de ácido posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Ide acuerdo con procedimientos descritos en elejemplo 7.La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (22 mg, 54,4 %). Datos: LCMS (B) Rt : 7,845 min;m/z658,3 (M+H)+.
Intermed¡o J(WITJ277/WITJ84)
4-(4-Am¡no-3-metox¡-fen¡l)p¡peraz¡n-1 -carboxílato de fórc-butMo
Este compuesto se preparó de una manera análoga como se describe en el¡ntermed¡o A, partiendo de piperazin-1-carboxilato de terc-butilo y 2-metoxi-4-fluoronitrobenceno para producir el compuesto del título (245 mg, 91 %).Ejemplo 15 (WITJ349B)
N-\1 -(2-metox¡et¡l)-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-¡l1-2-(2-metox¡-4-p¡peraz¡n-1-¡l-an¡l¡no)-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡do\4.5-elindolizin-7-carboxamida
Se suspendieron 2-cloro-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (intermedio 1,296 mg, 1,07 mmol), 4-(4-amino-3-metoxi-fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (intermedio J, 328 mg, 1,07 mmol) y carbonato de cesio (1,39 g, 4,27 mmol) en dioxano (25 ml). Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla a 30 °C durante 5 minutos, seguido de la adición de 9,9-bis-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)xanteno (62 mg, 0,11 mmol) y tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) (49 mg, 53 pmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 20 horas bajo un flujo de gas nitrógeno.
Se añadieron acetato de etilo/agua/salmuera (1/1/1 % v/v, 50 ml) a la mezcla de reacción y la agitación se continuó durante 15 min. Después de la filtración sobre Decalite®, la capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas posteriormente se lavaron con agua (40 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre sílice (heptano/acetato de etilo = 1/0 a 0/1 % v/v) para dar 2-[4-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-1-il)-2-metoxi-anilino]-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (115 mg, 20 %).
El éster etílico obtenido de este modo posteriormente se hidrolizó usando condiciones descritas para el¡ntermed¡o 2b. La sal de sodio del ácido carboxílico correspondiente posteriormente se hizo reaccionar conintermedio Hde una manera análoga como se describe para elejemplo 8d.Después de la desprotección del grupo Boc, la purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (5,2 mg, 28 %). Datos: LCMS (B) Rt : 8,140 min;m/z572,3 (M+H)+.
Intermedio K(JDM251/JDM302)
2-Metox¡-4-\(1-met¡l-4-p¡per¡d¡l)ox¡1an¡l¡na
(a) 4-(3-Metox¡-4-n¡tro-fenoxi)-1-met¡l-p¡per¡d¡na
A una solución de 4-fluoro-2-metoxi-1 -nitro-benceno (750 mg, 4,38 mmol) en tolueno (10 ml) se le añadieron 10 ml de una solución de KOH al 25 %, 4-hidroxi-W-metilpiperidina (1009 mg, 8,76 mmol) y bromuro de tetra-n-butil amonio (282 mg, 0,876 mmol). La mezcla se calentó a 60 °C o/n. Entonces la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (diclorometano/metanol = 99/1 a 9/1 % v/v) para obtener el compuesto del título. (650 mg, 55,7 %)
(b) 2-Metox¡-4-\(1-met¡l-4-p¡per¡d¡l)ox¡1an¡l¡na (intermedio K)
Se añadió un 10 % de Pd/C (20 mg) como una suspensión en etanol a una solución de 4-(3-metoxi-4-nitro-fenoxi)-1-metil-piperidina (200 mg, 0,75 mmol) en etanol (5 ml). La mezcla resultante se agitó durante 15 min a temperatura ambiente. Se añadió formiato de amonio (473 mg, 7,5 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a reflujo en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró sobre Decalite<®>. El filtrado se concentró al vacío, tras lo que se añadió diclorometano y la fase orgánica se lavó con solución al 5 % de NaHCO<3>. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío para producir 2-metoxi-4-[(1-metil-4-piperidil)oxi]anilina (169,5 mg, 95,6 %).
Intermedio L(JDM221/JDM0222)
3.5-Dimetil-1 rt-pirazol-4-amina
El compuesto del título se preparó de una manera análoga como se describe para elintermedio Hb, partiendo de 3,5 dimetil-4-nitro-1 H-pirazol para dar 110 mg de 3,5-dimetil-1 H-pirazol-4-amina (cuant.).
Ejemplo 16 (JDM323A)
M-(3,5-dimetil-1 H-p¡razol-4-¡l)-2-[2-metox¡-4-[(1-met¡l-4-p¡per¡d¡l)ox¡^an¡l¡no^-5■6-d¡h¡drop¡r¡m¡dof4.5-e^¡ndol¡z¡n-7-carboxamida
Este compuesto se preparó a partir de su cloruro de ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para elintermedio 2, usandointermedio Kcomo material de partida. El cloruro de ácido posteriormente se hizo reaccionar conintermedio Lde acuerdo con procedimientos descritos en elejemplo 7.La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (14,1 mg, 37 %). Datos: LCMS (B) Rt : 7,902 min; m/z 543,2 (M+H)+.
Ejemplo 17 (WITJ0529B)
M-(2.6-d¡met¡lfen¡l)-2-[2-metox¡-4-[4-(2-metox¡acet¡l)p¡peraz¡n-1-¡l1an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡do[4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxamida
Este compuesto se preparó a partir de su amina correspondiente (preparada como se describe para elejemplo 7partiendo deintermedio 1eintermedio M) y ácido metoxiacético, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (10 mg, 49 %). Datos: LCMS (b ) Rt : 12,973 min;m/z596,3 (M+H)+.
2-Clorop¡r¡m¡dof4.5-e^¡ndol¡z¡n-7-carbox¡lato de etilo
(a) 2-Metox¡p¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxilato de etilo (JGS362)
Se añadió DDQ (1,53 g, 6,76 mmol) a una solución agitada de 2-metoxi-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (1,54 g, 5,63 mmol) en DCM (50 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. Se añadió una cantidad adicional de 200 mg de DDQ y la mezcla de reacción se agitó durante otros 7 días a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y se concentró al vacío hasta un pequeño volumen. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre sílice (heptano/acetato de etilo = 1/0 a 1/1 % v/v) para producir el compuesto del título (750 mg, 50 %).
(b) 2-H¡drox¡p¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carbox¡lato de et¡lo (JGS377)
Se añadió yoduro de sodio (1,24 g, 8,29 mmol) a una solución agitada de 2-metoxi-pirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (750 mg, 2,76 mmol) en acetonitrilo (19 ml). Se añadió gota a gota una solución de cloruro de trimetilsililo (896 mg, 1,05 ml) en acetonitrilo (3 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla se agitó a temperatura ambiente o/n. Se añadieron gota a gota yoduro de sodio adicional (3,33 g), TMS-Cl (2,4 g, 2,8 ml) en acetonitrilo (6 ml) y la reacción se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió en 200 ml de DCM/MeOH (4/1) y se extrajo con una mezcla de una solución saturada de tiosulfato de sodio (50 ml) y agua (100 ml). La capa acuosa se extrajo con DCM/MeOH (4/1,2 x 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida para dar un sólido. El sólido se trituró en acetato de etilo hirviendo (50 ml). Después de un periodo de refrigeración, el sólido se agitó 1 h a temperatura ambiente y se filtró. El residuo se secó a 40 °C al vacío para dar 1,0 g de 2-hidroxi-5,6-dihidropirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo en bruto (rendimiento cuant.).
(c) 2-Clorop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carbox¡lato de et¡lo (¡ntermed¡o 3) (JGS380)
Se añadió W,W-dimetilanilina (47 mg, 50 gl, 1,50 mmol) a una solución de 2-hidroxipirimido[4,5-e]indolizin-7-carboxilato de etilo (1,0 g, 3,89 mmol) en acetonitrilo (30 ml). Se añadió gota a gota una solución de oxicloruro de fósforo (V) (2,99 g, 1,81 ml, 19,5 mmol) en acetonitrilo (4 ml) a la mezcla de reacción. La suspensión parda/roja se calentó hasta 65 °C durante 4 horas. Después de un periodo de refrigeración, la mezcla se vertió lentamente en una mezcla agitada de amoniaco ac. al 25 % (50 ml) y agua helada (100 ml) manteniendo la temperatura por debajo de 10 °C. Después de agitar durante otros 15 minutos, la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas posteriormente se lavaron con agua (50 ml), HCl 0,2 N (50 ml) y salmuera (25 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre sílice (heptano/acetato de etilo =1/0 a 1/1 % v/v) para producir 200 mg del compuesto del título.
Ejemplo 18 (WITJ490B)
M-(2,6-d¡met¡lfen¡l)-2-r2-metox¡-4-r(1-met¡l-4-p¡per¡d¡l)ox¡1an¡l¡nolp¡r¡m¡dor4,5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su cloruro de ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones como se describe para el¡ntermed¡o 2, partiendo de¡ntermed¡o 3e¡ntermed¡o Kcomo material de partida. El cloruro de ácido posteriormente se hizo reaccionar con 2,6-dimetilanilina de acuerdo con procedimientos descritos en elejemplo 7. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (30 mg, 45 %). Datos: LCMS (B) Rt : 12,491 min;m/z551,3 (M+H)+.
Intermed¡o N(JDM618/JDM626/JDM634)
1-r2-(2-Etox¡etox¡)et¡l1-3.5-d¡et¡l-p¡razol-4-am¡na
(a) 4-Met¡lbencenosulfonato de 2-(2-etox¡etox¡l)et¡lo
A una solución de éter etílico de di(etilenglicol) (4,92 ml, 36,2 mmol) en 15 ml de THF, enfriada a 0 °C, se le añadió NaOH (2,46 g, 61,5 mmol) disuelto en 15 ml de agua con agitación vigorosa. A esta mezcla se le añadió gota a gota una solución de cloruro de tosilo (8,28 g, 43,4 mmol) en 15 ml de THF durante 10 min a 0 °C. La mezcla de reacción entonces se aumentó hasta ta y se agitó durante 1 h en atmósfera de nitrógeno. La mezcla entonces se extrajo dos veces con 50 ml de éter dietílico, y la capa orgánica se lavó con NaOH ac. 1 M y agua y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se retiró a presión reducida para producir 4-metilbencenosulfonato de 2-(2-etoxietoxi)etilo como un líquido incoloro (10 g, 95,8 %).
(b) 1-r2-(2-Etox¡etox¡)et¡n-3.5-d¡met¡l-4-n¡tro-p¡razol
A una solución de 3,5-dimetil-4-nitro-1 H-pirazol (1 g, 7,08 mmol) y carbonato de cesio (2,31 g, 7,08 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió 4-metilbencenosulfonato de 2-(2-etoxietoxi)etilo (2,04 g, 7,08 mmol). La mezcla se calentó a 100 °C durante 1 h. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se vertió en agua/salmuera y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró a presión reducida para producir 1,69 g del compuesto del título (92,8 %).
(c) 1-[2-(2-Etox¡etox¡)et¡l]-3,5-d¡met¡l-p¡razol-4-am¡na (¡ntermed¡o N)
A una solución agitada de 1-[2-(2-etoxietoxi)etil]-3,5-dimetil-4-nitro-pirazol (1,69 g, 6,57 mmol) en metanol (25 ml) se le añadió una suspensión de Pd al 10 % sobre carbón (200 mg) en etanol (1 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 min en una atmósfera de nitrógeno. Entonces se añadió formiato de amonio (4,14 g, 65,7 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura de reflujo durante 15 min. La mezcla de reacción se enfrió, se filtró sobre Decalite® y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en metanol y después se filtró sobre una columna de SCX-2. Después de aclarar la columna con metanol, el producto deseado se eluyó con una solución 0,7 N de amoniaco/metanol. El eluido resultante se concentró al vacío para dar el compuesto del título (520 mg, 34,8 %).
Ejemplo 19 (JDM640A)
M-f1-f2-(2-etox¡etox¡)et¡n-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-¡n-2-[2-metox¡-4-(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡do[4,5-e]¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2b, usando¡ntermed¡o Dcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Nde una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (32,3 mg, 53,9 %). Datos: LCMS (B) Rt : 7,432 min;m/z644,6 (M+H)+.
Ejemplo 20 (JDM677A)
M-f1-f2-[2-(2-metox¡etox¡)etox¡1et¡n-3.5-d¡met¡l-p¡razol-4-¡n-2-[2-metox¡-4-[4-(2-metox¡acet¡l)p¡peraz¡n-1-¡l1an¡l¡no1-5,6-d¡h¡drop¡r¡m¡do[4,5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2b, usando¡ntermed¡o Mcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar conintermedio Cde una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La amina correspondiente se obtuvo después de desprotección del grupo Cbz y se introdujo ácido metoxiacético, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (19,0 mg, 63,4 %). Datos: LC<m>S (B) Rt : 8,815 min; m/z 732,7 (M+H)+.
Ejemplo 21 (JDM711A)
M-r3,5-d¡et¡l-1-r2-(2-metox¡etox¡)et¡llp¡razol-4-M1-2-r2-metox¡-4-r4-(3-met¡lazetid¡n-3-carbon¡l)p¡peraz¡n-1-¡l1an¡l¡no1-5,6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4,5-e1¡ndoliz¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para elintermedio 2b, usandointermedio Mcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar conintermedio Ide una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La amina correspondiente se obtuvo después de desprotección del grupo Cbz y se introdujo ácido 1-(terc-butoxicarbonil)-3-metilazetidin-3-carboxílico, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó, después de desprotección del grupo Boc, usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (16,3 mg, 55 %). Datos: LCMS (B) Rt : 8,107 min; m/z 741,8 (M+H)+.
Intermedio O(JDM618/JDM625/JDM633)
1-r2-(2-Etox¡etox¡)et¡l1-3,5-d¡etil-p¡razol-4-am¡na
El compuesto del título se preparó de una manera análoga como se describe para elintermedio N, partiendo de 3,5-dietil-4-nitro-1 H-pirazol (intermedio Fb)y éter etílico de di(etilenglicol) para dar 550 mg de 1-[2-(2-etoxietoxi)etil]-3,5-dietil-pirazol-4-amina (79,8 %).
Ejemplo 22 (JDM713A)
M-r3.5-d¡et¡l-1-r2-(2-metox¡etox¡)et¡llp¡ ¡d¡n-3-carbonil)p¡peraz¡n-1-¡l1an¡l¡no1-5,6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4,5-e1¡ndoliz¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para elintermedio 2b, usandointermedio Mcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar conintermedio Ode una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La amina correspondiente se obtuvo después de desprotección del grupo Cbz y se introdujo Boc-N-etil-glicina, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó, después de desprotección del grupo Boc, usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (15 mg, 53,1 %). Datos: Lc Ms (B) Rt: 8,619 min; m/z 743,8 (M+H)+.
Ejemplo 23 (JDM697A)
M-ri-r2-(2-etox¡etox¡)et¡l1-3.5-d¡et¡l-p¡razol-4-¡l1-2-r2-metox¡-4-r4-(2-metox¡acet¡l)p¡peraz¡n-1-¡l1an¡l¡no1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndoliz¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2b, usando¡ntermed¡o Mcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Ode una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La amina correspondiente se obtuvo después de desprotección del grupo Cbz y se introdujo ácido metoxiacético, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (17,0 mg, 61,4 %). Datos: LCMS (B) Rt :10,554 min; m/z 730,7 (M+H)+.
Ejemplo 24 (JDM636A)
M-r3.5-d¡et¡l-1-r2-r2-(2-metox¡etox¡)etox¡let¡llp¡razol-4-¡ll-2-r2-metox¡-4-(4-met¡lp¡peraz¡n-1-¡l)an¡l¡nol-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2b, usando¡ntermed¡o Dcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Gde una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (22,5 mg, 34,5 %). Datos: LCMS (B) Rt: 7,879 min;m/z702,7 (M+H)+.
Ejemplo 25 (JDM703A)
M-r3.5-d¡et¡l-1-r2-r2-(2-metox¡etox¡)etox¡1et¡llp¡razol-4-¡l1-2-r4-r4-r2-(et¡lam¡no)acet¡llp¡perazin-1-¡l1-2-metox¡-an¡l¡no1-5,6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4,5-e1¡ndoliz¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2b, usando¡ntermed¡o Mcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Gde una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La amina correspondiente se obtuvo después de desprotección del grupo Cbz y se introdujo Boc-N-etil-glicina, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó, después de desprotección del grupo Boc, usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (18,4 mg, 59,4 %). Datos: LCMS (B) Rt: 8,194 min; m/z 773,8 (M+H)+.
Ejemplo 26 (JDM709A)
2-r4-r4-r(2fí)-azet¡d¡n-2-carbon¡l1p¡peraz¡n-1-¡l1-2-metox¡-an¡l¡no1-N-r3.5-d¡et¡l-1-r2-(2-metox¡etox¡)et¡l1p¡razol-4-¡l1-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2b, usando¡ntermed¡o Mcomo material de partida. El ácido carboxílico posteriormente se hizo reaccionar con¡ntermed¡o Ide una manera análoga como se describe para elejemplo 8d. La amina correspondiente se obtuvo después de desprotección del grupo Cbz y se introdujo ácido (fi)-N-Boc-azetidin-2-carboxílico, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.
La purificación se realizó, después de desprotección del grupo Boc, usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (16,8 mg, 57,7 %). Datos: LCMS (B) Rt: 8,017 min; m/z 727,9 (M+h )+.
Ejemplo 27 (JDM666A)
M-(2.6-d¡met¡lfen¡l)-2-r4-r4-r2-(et¡lam¡no)acet¡llp¡peraz¡n-1-¡ll-2-metox¡-an¡l¡nol-5.6-d¡h¡drop¡r¡m¡dor4.5-e1¡ndol¡z¡n-7-carboxam¡da
Este compuesto se preparó a partir de su cloruro de ácido correspondiente, usando la misma secuencia de reacciones, como se describe para el¡ntermed¡o 2, usando¡ntermed¡o Mcomo material de partida. El cloruro de ácido posteriormente se hizo reaccionar con 2,6-dimetilanilina de una manera análoga como se describe para elejemplo 7.
La amina correspondiente se obtuvo después de desprotección del grupo Cbz y se introdujo Boc-N-etil-glicina, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de HATU como se describe en elejemplo 8d.La purificación se realizó, después de desprotección del grupo Boc, usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (1 mg, 13,2 %). Datos: LCMS (B) Rt: 9,388 min; m/z 609,6 (M+H)+.
Ejemplo 28 (JGS0715B)
M-c¡cloprop¡l-4-r6-(2,3-d¡fluoro-4-metox¡-fenox¡)-8-(3,3,3-tr¡fluoroprop¡lam¡no)¡m¡dazori,2-blp¡r¡daz¡n-3-¡l1-2-metil-benzamida
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO 2014/131739 A1. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (30 mg). Datos: LCMS (B) Rt: 14,958 min;m/z562,5 (M+H)+.
Ejemplo 29 (JDM943D)
(2fí)-2-(4-fluorofen¡l)-N-r4-r2-(2-metox¡-4-met¡lsulfon¡l-an¡l¡no)-ri.2.41tr¡azolori.5-alp¡r¡d¡n-6-¡l1fen¡l1propanam¡da
Este compuesto se preparó como se describe en el documento WO 2014/009219 A1. La purificación se realizó usando HPLC preparativa para producir el compuesto del título (107,1 mg). Datos: LCMS (B) Rt : 13,703 min;m/z558,0 (M-H)-.
Ejemplo 30 (JDM969A)
1-r4-rr4-(2-Isoprop¡lsulfon¡lan¡l¡no)-1H-p¡rrolor2.3-b1p¡r¡d¡n-6-¡l1am¡no1-3-metox¡fen¡l1p¡per¡d¡n-4-ol (Mps1-IN-1)Este compuesto se adquirió de Tocris.
Ejemplo 31 (JDM969B)
4-ff4-Am¡no-6-(terc-but¡lam¡no)-5-c¡ano-2-p¡r¡d¡llam¡nolbenzam¡da (TC Mps1 12)
Este compuesto se adquirió de Tocris.
Ensayo enzimático de TTK
La actividad inhibidora de los compuestos sobre TTK de longitud completa bioquímicamente purificada (Life Technologies, Madison, WI, EE. UU.) se determinó en el ensayo IMAP® (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, EE. UU.). Los compuestos se disolvieron en dimetilsulfóxido (DMSO) al 100 %. En el día del experimento, la solución madre de compuesto se diluyó en etapas de factor 3,16 en DMSO al 100 %, para obtener una serie de dilución de 10 puntos, seguido de dilución adicional en tampón de reacción IMAP, que consiste en Tris-HCl 10 mM, pH 7,5, MgCL 10 mM, Tween-20 al 0,01 %, NaN30,1 % y ditiotreitol recién preparado 1 mM. La solución de compuesto se mezcló con un volumen igual de enzima TTK de longitud completa en tampón de reacción IMAP. Después de preincubación de 1 hora en la oscuridad a temperatura ambiente, se añadió péptido de sustrato derivado de MBP marcado con fluoresceína (Molecular Devices) y ATP para iniciar la reacción. La concentración final de enzima fue 3,9 nM, la concentración final de sustrato 50 nM y la concentración final de ATP fue 5 pM. Se dejó que la reacción prosiguiera durante 2 horas a temperatura ambiente en la oscuridad. La reacción se detuvo interrumpiendo con solución de unión progresiva IMAP de acuerdo con el protocolo del fabricante (Molecular Devices). Se midió la polarización de fluoresceína en un lector multimodal Envision (Perkin Elmer, Waltham, MA, EE. UU.). Las curvas de respuesta a la dosis se ajustaron a una ecuación logarítmica de cuatro parámetros en XLfit™5 (ID Business Solutions, Ltd., Guildford, Reino Unido). Latabla 3muestra la potencia inhibidora semimáxima de varios inhibidores de TTK de diferentes clases químicas en un ensayo enzimático para TTK.
Tabla 3.Actividad de inhibidores micromoleculares de TTK en ensa o enzimático de TTK.
Para identificar biomarcadores genómicos que se correlacionen con la sensibilidad de las células cancerosas a los inhibidores de TTK, los compuestos se ensayaron en ensayos de proliferación con sesenta y seis diferentes líneas celulares cancerosas genéticamente bien caracterizadas.
El análisis estadístico de la actividad antiproliferativa de los inhibidores con la presencia de mutaciones génicas cancerosas específicas en las líneas celulares reveló que los inhibidores de TTK destruyen preferentemente células que albergan mutación en el genCTNNB1conocido por estar implicado en la regulación de la estabilidad de la proteína p-catenina codificada porCTNNB1.
Lafigura 2muestra el diagrama de volcán del análisis Anova de los ejemplos 5, 8, 9, 12, 13 y 17. Para verificar si un inhibidor de TTK era significativamente más potente en líneas celulares que expresabanCTNNB1mutante en comparación con líneas celulares que no albergan mutación enCTNNB1,se realizó un ensayo de latde Student. La tabla 4 muestra la diferencia en la sensibilidad (ApCI5ü) de varios inhibidores de TTK representativos de diferentes clases químicas. Un valor negativo de ApCl50 indica que las líneas celulares conCTNNB1mutante son más sensibles al inhibidor que líneas celulares que no albergan mutaciones en el dominio regulador del genCTNNB1(tabla 2).Un valor dep<0,05 indica que la diferencia es significativa.
Tabla 4.Diferencia en la sensibilidad de líneas celulares conCTNNB1mutante no mutantes a inhibidores de TTK
Para verificar que la presencia de una copia del genCTNNB1mutada es suficiente para conferir sensibilidad aumentada a inhibidores de TTK, se realizaron ensayos de proliferación con células HCT116 originales (S45del/+) y un derivado isogénico que carece deCTNNB1mutado (-/+). La tabla 5 resume la diferencia en la sensibilidad de varios inhibidores de TTK representativos de diferentes clases químicas en la línea celular isogénica en comparación con células HCT116 originales. Una ApCI50 negativa o una Aeficacia negativo indica que las células originales HCT116, que expresanCTNNB1mutante (S45del/+) son más sensibles al inhibidor que el derivado isogénico, en que el genCTNNB1mutado se ha eliminado (-/+). Por tanto, los inhibidores con una ApCI50 negativa o una Aeficacia negativa inhiben mejor la línea celular donde está presente la señalización deCTNNB1mutante.
Tabla 5.Diferencia en la sensibilidad por inhibidores de TTK en células HCT116 que expresan una copia mutada del enCTNNB1o no

Claims (19)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un método para identificar un tumor en un individuo humano o un animal que es susceptible a tratamiento con un inhibidor de TTK, comprendiendo dicho método: a) proporcionar una muestra de tumor obtenida de dicho individuo humano o animal; b) determinar la presencia de un genCTNNB1mutado en dicha muestra de tumor, en donde dicha mutación está ubicada en el exón 3 deCTNNB1,por lo que la presencia de un genCTNNB1mutado indica que el tumor es susceptible a tratamiento con un inhibidor de TTK.
  2. 2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha mutación provoca una sustitución de uno o más residuos de serina o treonina en la correspondiente proteína codificada porCTNNB1en una posición seleccionada de S33, S37, S45 y T41, o en donde dicha mutación es una eliminación de uno o más residuos de serina o treonina en la correspondiente proteína codificada porCTNNB1en una posición seleccionada de S33, S37, S45 y T41.
  3. 3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha mutación es una mutación de aminoácido o una eliminación del residuo de serina correspondiente al codón 33 deCTNNB1.
  4. 4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha mutación es una mutación de aminoácido o una eliminación del residuo de treonina correspondiente al codón 41 deCTNNB1.
  5. 5. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha mutación es una mutación de aminoácido o una eliminación del residuo de serina correspondiente al codón 45 deCTNNB1.
  6. 6. Un método para identificar un tumor en un individuo humano o un animal que es susceptible a tratamiento con un inhibidor de TTK, comprendiendo dicho método: a) proporcionar una muestra de tumor obtenida de dicho individuo humano o animal; b) determinar la presencia de una proteína codificada porCTNNB1mutado en dicha muestra de tumor, en donde dicha mutación está ubicada en el exón 3 deCTNNB1,por lo que la presencia de una proteína codificada por CTNNB1mutado indica que el tumor es susceptible a tratamiento con un inhibidor de TTK.
  7. 7. El método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha mutación provoca una sustitución de uno o más residuos de serina o treonina en la correspondiente proteína codificada porCTNNB1en una posición seleccionada de S33, S37, S45 y T41, o en donde dicha mutación es una eliminación de uno o más residuos de serina o treonina en la correspondiente proteína codificada porCTNNB1en una posición seleccionada de S33, S37, S45 y T41.
  8. 8. El método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha mutación provoca una sustitución o una eliminación del residuo de serina correspondiente al codón 33 deCTNNB1.
  9. 9. El método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha mutación provoca una sustitución o una eliminación del residuo de treonina correspondiente al codón 41 deCTNNB1.
  10. 10. El método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha mutación provoca una sustitución o una eliminación del residuo de serina correspondiente al codón 45 deCTNNB1.
  11. 11. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en donde la presencia de la proteína codificada porCTNNB1mutado se determina analizando la secuencia de aminoácidos o la fosforilación de p-catenina en la muestra de tumor.
  12. 12. Un método para identificar un tumor en un individuo humano o un animal que es susceptible a tratamiento con un inhibidor de TTK, comprendiendo dicho método: a) proporcionar una muestra de tumor obtenida de dicho individuo humano o animal; b) determinar una expresión alterada de un genAxin2,por lo que una expresión alterada de dicho genAxin2indica la presencia de un genCTNNB1mutado en el exón 3, por lo que la presencia de un genCTNNB1mutado indica que el tumor es susceptible a tratamiento con un inhibidor de TTK.
  13. 13. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde la muestra se toma de una biopsia de tumor.
  14. 14. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y 12, en donde la muestra es una muestra de ADN y deriva de ADN tumoral circulante.
  15. 15. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula I:
    en donde: R1 se selecciona del grupo que consiste en:
    R11 es H, halógeno, alquilo(C1-2), alquenilo(C2-3), alquinilo(C2-3) o alcoxi(C1-2), estando todos los grupos alquilo y alcoxi opcionalmente sustituidos con uno o más halógenos; R12 es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2); R13 es R131CH2, R132O, R133R134N, R135C(O), R136S, R136S(O), R136S(O)(NH), R137SO2, heterocicloalquilo(C2-7), o heteroarilo(C1-5), estando cada heterocicloalquilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo, oxo, alcoxi(C1-2), alquilcarbonilo(C1-6), alquilsulfonilo(C1-6), alcoxicarbonilo(C1-5), alquilaminocarbonilo(C1-6), cicloalquilcarbonilo(C3-6), heterocicloalquilcarbonilo(C2-7) o di[alquil(C1-2)]amino, estando cada alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, cicloalquilcarbonilo o heterocicloalquilcarbonilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo, ciano, oxo o alcoxi(C1-2); R131 es alquilcarbonilamino(C1-6), cicloalquilcarbonilamino(C3-6) o heterocicloalquilcarbonilamino(C2-7), estando cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1 -2), fluoro, hidroxilo o alcoxi(C1 -2); R132 es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7), arilo(C6-10) o heterorarilo(C1-5) cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), halógeno, hidroxilo, alcoxi(C1-2), di[alquil(C1-2)]amino o heterocicloalquilo(C2-7); R133 es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7), alquilcarbonilo(C1-6), alcoxicarbonilo(C1-5), cicloalquilcarbonilo(C3-6) o heterocicloalquilcarbonilo(C2-7), cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), halógeno, hidroxilo o alcoxi(C1-2), di[alquil(C1-2)]amino o heterocicloalquilo(C2-7); R134 es hidrógeno o alquilo(C1-2); R135 es heterocicloalquilo(C2-7), alquilamino(C1-6), di[alquil(C1-6)]amino, heterocicloalquilamino(C2-7) o cicloalquilamino(C3-6) cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1 -2), fluoro, hidroxilo, alcoxi(C1-2), di[alquil(C1-2)]amino, heterocicloalquilo(C2-7), oxo, ciano o amino; R136 es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7) cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo o alcoxi(C1-2); R137 es alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-7), alquilamino(C1-6), di[alquil(C1-6)]amino, heterocicloalquilamino(C2-7) o cicloalquilamino(C3-6), cada uno opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo o alcoxi(C1-2); R14 es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2); y R15 es H, halógeno; y en donde en la anterior fórmula I, R2 se selecciona del grupo que consiste en:
    R21 es H, halógeno, alquilo(C1-3), alcoxi(C1-2), hidroxialquilo(C1 -2), cicloalquilo(C3-4), alquenilo(C2-3) o ciano; R22 es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2); R23 es H, halógeno, alquilo(C1-2), alcoxi(C1-2), ciano o hidroxi; R24 es H, halógeno, alquilo(C1-2) o alcoxi(C1-2); R25 es H, halógeno, alquilo(C1-3), alcoxi(C1-2), hidroxialquilo(C1-2), cicloalquilo(C3-4), alquenilo(C2-3) o ciano; R26 es H, alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-5), alcoxi(C1-2)[alcoxi(C2-4)]nalquilo(C1-6), en donde n representa un número entero de 1, 2, 3 o 4, todos los grupos alquilo, heterocicloalquilo y alcoxi(C1-2)[alcoxi(C2-4)]nalquilo(C1-6) opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados de alquilo(C1-2), alcoxi(C1-2), hidroxilo, oxo, amino, cicloalquilo(C3-6), di[alquil(C1-2)]amino o heterocicloalquilo(C2-5); y en donde en la anterior fórmula I solamente uno de R21 y R25 en R2 puede ser H.
  16. 16. El método de acuerdo con la reivindicación 15, en donde R13 es R132O, R135C(O), heterocicloalquilo(C2-7), o heteroarilo(C1-5), estando cada heterocicloalquilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo, oxo, alcoxi(C1-2), alquilcarbonilo(C1-6), alquilsulfonilo(C1 -6), alcoxicarbonilo(C1 -5), alquilaminocarbonilo(C1 -6), cicloalquilcarbonilo(C3-6), heterocicloalquilcarbonilo(C2-7) o di[alquil(C1-2)]amino, estando cada alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, cicloalquilcarbonilo o heterocicloalquilcarbonilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo, ciano, oxo o alcoxi(C1-2).
  17. 17. El método de acuerdo con la reivindicación 15, en donde R13 es R132O, R135C(O), heterocicloalquilo(C2-7), o heteroarilo(C1-5), estando cada heterocicloalquilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1-2), alquilcarbonilo(C1-6), o heterocicloalquilcarbonilo(C2-7), estando cada alquilcarbonilo o heterocicloalquilcarbonilo opcionalmente sustituido con alquilo(C1-2), fluoro, hidroxilo, ciano, oxo o alcoxi(C1-2).
  18. 18. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula II:
    en donde: R1 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en arilo(C6-10) y heteroarilo(C1-5), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R2 se selecciona del grupo que consiste en alquilo(C1-6) y alquenilo(C2-6), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo(C1-6), en donde dicho grupo alquilo opcionalmente puede estar sustituido; y, R5 y R6 son independientemente hidrógeno o metilo; o en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula III:
    en donde, R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo(C1-6), haloalquilo(C1-6), HO-alquilo(C1-6), H2N-alquilo(C1-6), cianoalquilo(C1-6), alcoxi(C1-6)alquilo(C1-6), alquenilo(C2-6), alquinilo(C2-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C3-7), arilo(C6-10) y heteroarilo(C1-5), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R2 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10) y heteroarilo(C1-9), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R3 se selecciona del grupo que consiste en: alquilo(C1-6), -(CH2)n-heterocicloalquilo(C3-7)), -(CH2)nheterocicloalquenilo(C4-8)), heterocicloalquilo(C3-7), arilo(C6-10), heteroarilo(C1-9), -(CH2)n-arilo(C6-10), -O-arilo(C6-10), -C(=O)N , y ciano, en donde dichos grupos pueden estar sustituidos y en donde n es un número entero de 0, 1 o 2; o en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula IV:
    en donde, R1 se selecciona del grupo que consiste en cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C3-7), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R2 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10) y heteroarilo(C1-5), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; o en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula V:
    en donde, R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo(C1-6), haloalquilo(C1-6), HOalquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C3-7) o heteroarilo(C1-5), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R2 es arilo(C6-10) o heteroarilo(C1-9), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R3 se selecciona del grupo que consiste en X-arilo(C6-10) y X-heteroarilo(C1-9), en donde ambos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos, en donde X representa S(=O)p, O, NR4, CR4aR4b, C=CR4aR4b, en donde p es un número entero de 0, 1, 2 y además en donde R4, R4a, R4b representan independientemente entre sí un átomo de hidrógeno o alquilo(C1-6); o en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula VI:
    en donde, R1 representa un grupo fenilo, un grupo piridilo o un grupo indolilo en donde dichos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos; R2 representa un grupo fenilo, un grupo piridilo o un grupo pirimidilo en donde dichos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos; R3 representa un grupo seleccionado de un átomo de hidrógeno o -C(=O)-O-(CR7R8)-O-C(=O)-R4, en donde R4 representa un grupo seleccionado de: alquilo(C1-6), sustituido una o más veces, de manera idéntica o diferente, con un grupo seleccionado de: -NH2, -N(H)R5,-N(R5)R6, heterocicloalquilo(C4-7), opcionalmente sustituido, una o más veces, de manera idéntica o diferente, con un grupo seleccionado de -NH2, -N(H)R5, -N(R5)R6. R5 y R6, independientemente entre sí, representan un grupo seleccionado de un átomo de hidrógeno y alquilo(C1-3). R7 representa un grupo seleccionado de un átomo de hidrógeno y alquilo(C1-3). R8 representa un átomo de hidrógeno; o en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula VII:
    Fórmula VII en donde, R1 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), en donde dicho opcionalmente puede estar sustituido; R2 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), en donde dicho grupo opcionalmente puede estar sustituido; o en donde dicho inhibidor de TTK es un compuesto químico que pertenece a la clase de compuestos de acuerdo con la fórmula VIII:
    Fórmula VIII en donde, R1 se selecciona del grupo que consiste en átomo de hidrógeno o amino; R2 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), heteroarilo(C1-5), alquilo(C1-6), cicloalquilo(C3-6) y heterocicloalquilo(C3-7), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; R3 se selecciona del grupo que consiste en arilo(C6-10), en donde dichos grupos opcionalmente pueden estar sustituidos; X es C o N.
  19. 19. Un método para determinar si un compuesto químico es un inhibidor de TTK, comprendiendo dicho método las etapas de: a) proporcionar una primera y segunda línea celular de mamífero, en donde la primera línea celular tieneCTNNB1mutado, y por lo que dicha mutación está ubicada en el exón 3 del genCTNNB1,y la segunda línea celular tieneCTNNB1sin alteraciones; b) poner en contacto dicha primera y segunda línea celular con un primer compuesto candidato; y, c) determinar mediante ensayo la inhibición de la proliferación celular de dicha primera y segunda línea celular; en donde dicha primera y segunda línea celular son líneas celulares cancerosas isogénicas; y opcionalmente en donde las etapas b) y c) se repiten con un segundo compuesto candidato y se hace una selección de compuestos candidatos en función de la actividad de los compuestos candidatos respectivos en el ensayo con dicha primera línea celular.
ES16716563T 2015-04-17 2016-04-14 Biomarcadores pronósticos para quimioterapia inhibidora de TTK Active ES2966392T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15164133 2015-04-17
PCT/EP2016/058292 WO2016166255A1 (en) 2015-04-17 2016-04-14 Prognostic biomarkers for ttk inhibitor chemotherapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2966392T3 true ES2966392T3 (es) 2024-04-22

Family

ID=52997899

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES16716563T Active ES2966392T3 (es) 2015-04-17 2016-04-14 Biomarcadores pronósticos para quimioterapia inhibidora de TTK

Country Status (15)

Country Link
US (2) US11208696B2 (es)
EP (1) EP3283642B1 (es)
JP (2) JP6993233B2 (es)
KR (1) KR20180011089A (es)
CN (2) CN114592061A (es)
AU (1) AU2016247476B2 (es)
CA (1) CA2981844A1 (es)
DK (1) DK3283642T3 (es)
ES (1) ES2966392T3 (es)
FI (1) FI3283642T3 (es)
HK (1) HK1249145A1 (es)
HU (1) HUE064630T2 (es)
PL (1) PL3283642T3 (es)
PT (1) PT3283642T (es)
WO (1) WO2016166255A1 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106551938B (zh) * 2016-11-26 2017-11-24 广东安诺药业股份有限公司 一种治疗非酒精性脂肪肝的药物及其应用
CN108299311A (zh) * 2018-02-28 2018-07-20 杭州福斯特药业有限公司 一种5-溴-2-氯-n-环戊基嘧啶-4-胺的制备方法
CA3241213A1 (en) * 2021-12-15 2023-06-22 Heidi Lane Pharmaceutical combinations for use in the treatment of neoplastic diseases
CA3241111A1 (en) * 2021-12-15 2023-06-22 Heidi Lane Methods of treating neoplastic diseases
WO2023167549A1 (en) * 2022-03-04 2023-09-07 Sillajen, Inc. Pharmaceutical combinations for use in the treatment of neoplastic diseases

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL149404A0 (en) * 2002-04-29 2002-11-10 Yissum Res Dev Co METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING β-CATENIN PHOSPHORYLATION
BRPI0815709A2 (pt) 2007-08-23 2017-06-13 Astrazeneca Ab composro, composição farmacêutica, e, uso de um composto.
WO2009032694A1 (en) 2007-08-28 2009-03-12 Dana Farber Cancer Institute Amino substituted pyrimidine, pyrollopyridine and pyrazolopyrimidine derivatives useful as kinase inhibitors and in treating proliferative disorders and diseases associated with angiogenesis
WO2009156315A1 (en) 2008-06-26 2009-12-30 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Pyrazolo-quinazolines
JP5908728B2 (ja) 2009-01-06 2016-04-26 ダナ ファーバー キャンサー インスティテュート インコーポレイテッド ピリミド−ジアゼピノンキナーゼ骨格化合物及び疾患を治療する方法
WO2010111406A2 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Myriad Pharmaceuticals, Inc. Compounds and therapeutic uses thereof
ES2552282T3 (es) 2009-03-27 2015-11-26 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Derivados de N-aril-2-(2-arilaminopirimidin-4-il)pirrol-4-carboxamida como inhibidores de la cinasa MPS1
CN102413831B (zh) 2009-04-29 2014-06-04 拜耳知识产权有限责任公司 取代的咪唑并喹喔啉
TW201107329A (en) 2009-07-30 2011-03-01 Oncotherapy Science Inc Fused imidazole derivative having ttk inhibitory action
JP2012197231A (ja) * 2009-08-06 2012-10-18 Oncotherapy Science Ltd Ｔｔｋ阻害作用を有するピリジンおよびピリミジン誘導体
CA2772790C (en) 2009-09-04 2017-06-27 Benjamin Bader Substituted aminoquinoxalines as tyrosine threonine kinase inhibitors
EP2343297A1 (en) 2009-11-30 2011-07-13 Bayer Schering Pharma AG Triazolopyridines
EP2343295A1 (en) 2009-11-30 2011-07-13 Bayer Schering Pharma AG Triazolopyridine derivates
EP2343294A1 (en) 2009-11-30 2011-07-13 Bayer Schering Pharma AG Substituted triazolopyridines
US9468642B2 (en) 2010-03-18 2016-10-18 Bayer Intellectual Property Gmbh Imidazopyrazines
WO2011123937A1 (en) 2010-04-06 2011-10-13 University Health Network Kinase inhibitors and method of treating cancer with same
CN103038235B (zh) 2010-06-01 2015-07-29 拜耳知识产权有限责任公司 取代的咪唑并吡嗪
UY33452A (es) 2010-06-16 2012-01-31 Bayer Schering Pharma Ag Triazolopiridinas sustituidas
WO2012013557A1 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Isoxazolo-quinazolines as modulators of protein kinase activity
TWI541243B (zh) 2010-09-10 2016-07-11 拜耳知識產權公司 經取代咪唑并嗒
EP2649063A1 (en) * 2010-12-08 2013-10-16 Oslo University Hospital HF Triazole derivatives as wnt signaling pathway inhibitors
CA2821829A1 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Imidazopyrazines for use as mps-1 and tkk inhibitors in the treatment of hyperproliferative disorders
CN103403006B (zh) 2010-12-17 2015-11-25 拜耳知识产权有限责任公司 在过度增殖性病症的治疗中用作mps-1和tkk抑制剂的6-硫代-取代的咪唑并吡嗪
EP2651945A1 (en) 2010-12-17 2013-10-23 Bayer Intellectual Property GmbH 6-substituted imidazopyrazines for use as mps-1 and tkk inhibitors in the treatment of hyperproliferative disorders
CA2821837A1 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Bayer Intellectual Property Gmbh 2-substituted imidazopyrazines for use as mps-1 and tkk inhibitors in the treatment of hyperproliferative disorders
ES2556458T3 (es) 2010-12-17 2016-01-18 Bayer Intellectual Property Gmbh 6-Imidazopirazinas sustituidas para uso como inhibidores de Mps-1 y TKK en el tratamiento de trastornos hiperproliferativos
EP2651950A1 (en) 2010-12-17 2013-10-23 Bayer Intellectual Property GmbH 6 substituted imidazopyrazines for use as mps-1 and tkk inhibitors in the treatment of hyperproliferative disorders
ES2602791T3 (es) 2011-01-26 2017-02-22 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Derivados de pirrolo tricíclicos, proceso para su preparación y su uso como inhibidores de cinasa
WO2012101029A1 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Tricyclic derivatives, process for their preparation and their use as kinase inhibitors
GB201104267D0 (en) 2011-03-14 2011-04-27 Cancer Rec Tech Ltd Pyrrolopyridineamino derivatives
JP6001049B2 (ja) 2011-03-31 2016-10-05 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ Ｍｐｓ−１キナーゼ阻害剤としての置換ベンズイミダゾール類
ES2545135T3 (es) 2011-04-06 2015-09-08 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Imidazopiridinas sustituidas y compuestos intermedios de las mismas
US9284298B2 (en) 2011-04-11 2016-03-15 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Pyrazolyl-pyrimidine derivatives as kinase inhibitors
PT2699575E (pt) 2011-04-21 2015-07-29 Bayer Ip Gmbh Triazolopiridinas
GB201109966D0 (en) * 2011-06-10 2011-07-27 Cancer Res Inst Royal Materials and methods for treating pten mutated or deficient cancer
US20140051679A1 (en) 2011-10-12 2014-02-20 Univeristy Health Networks Kinase inhibitors and method of treating cancer with same
CN104284896B (zh) 2012-03-14 2016-06-01 拜耳知识产权有限责任公司 取代的咪唑并哒嗪
WO2014009219A1 (en) 2012-07-10 2014-01-16 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Method for preparing substituted triazolopyridines
GB201216018D0 (en) 2012-09-07 2012-10-24 Cancer Rec Tech Ltd Pharmacologically active compounds
GB201216017D0 (en) 2012-09-07 2012-10-24 Cancer Rec Tech Ltd Inhibitor compounds
WO2014056083A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 University Health Network Kinase inhibitors and method of treating cancer with same
TW201437211A (zh) 2013-03-01 2014-10-01 Bayer Pharma AG 經取代咪唑并嗒□
CA2914521A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted triazolopyridines having activity as mps-1 inhibitors
WO2014195274A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted triazolopyridines
AP2015008898A0 (en) 2013-06-11 2015-12-31 Bayer Pharma AG Prodrug derivatives of substituted triazolopyridines
RU2692479C2 (ru) * 2014-04-07 2019-06-25 Недерлэндс Транслэшинал Рисерч Сентер Б.В. (5,6-дигидро)пиримидо[4,5-е]индолизины

Also Published As

Publication number Publication date
KR20180011089A (ko) 2018-01-31
JP6993233B2 (ja) 2022-01-13
DK3283642T3 (da) 2024-01-02
HUE064630T2 (hu) 2024-04-28
JP2021072776A (ja) 2021-05-13
US11208696B2 (en) 2021-12-28
US20190211401A1 (en) 2019-07-11
US20220056540A1 (en) 2022-02-24
EP3283642B1 (en) 2023-10-11
PL3283642T3 (pl) 2024-04-22
FI3283642T3 (fi) 2024-01-11
WO2016166255A1 (en) 2016-10-20
CN114592061A (zh) 2022-06-07
CN107567503B (zh) 2022-03-22
AU2016247476A1 (en) 2017-10-26
CN107567503A (zh) 2018-01-09
HK1249145A1 (zh) 2018-10-26
JP2018512859A (ja) 2018-05-24
PT3283642T (pt) 2024-01-02
EP3283642A1 (en) 2018-02-21
CA2981844A1 (en) 2016-10-20
AU2016247476B2 (en) 2021-12-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2966392T3 (es) Biomarcadores pronósticos para quimioterapia inhibidora de TTK
JP7095052B2 (ja) Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤及びその使用方法
EP4065583A1 (en) A compound having inhibitory activity against kras g12d mutation
US9334267B2 (en) RAF inhibitor compounds
JP2021522281A (ja) がんの治療のためのｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤
US7129351B2 (en) Pyrimido compounds having antiproliferative activity
US20220251081A1 (en) Heterobicyclic inhibitors of mat2a and methods of use for treating cancer
US20230174518A1 (en) Kras g12d protein inhibitors
ES2572105T3 (es) Compuesto de piridopirimidina o pirimidopirimidina, su método de preparación, su composición farmacéutica y su uso
BR112021012599A2 (pt) Inibidores aza-heterobicíclicos de mat2a e métodos de uso para tratamento de câncer
JP2024514322A (ja) ユビキチン特異的プロテアーゼ１（ｕｓｐ１）を阻害すること
BR112021012595A2 (pt) Inibidores aza-heterobicíclicos de mat2a e métodos de uso para tratamento de câncer
ES2516940T3 (es) 6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-3-(2-metil-2H-indazol-5-iltio)-[1,2,4] triazolo[4,3-b]piridazina como inhibidor de c-Met
KR20220027062A (ko) Dna-의존적 단백질 키나제 억제제
TWI665203B (zh) 一種氮雜芳基衍生物、其製備方法和在藥學上的應用
BR112016022342B1 (pt) Derivados de (5,6-di-hidro)pirimido[4,5-e] indolizinas, suas composições farmacêuticas, e seus usos
Liu et al. Pyridazinone derivatives displaying highly potent and selective inhibitory activities against c-Met tyrosine kinase
CN113646305A (zh) 用于治疗炎性障碍的新化合物及其药物组合物
US11142522B2 (en) Compounds, compositions and methods for cancer treatment
CN110885331B (zh) 一种6-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶类JAK激酶抑制剂的制备与应用
WO2019223777A1 (zh) 一种含有芳胺基取代的吡咯并嘧啶类化合物、制备方法及其应用
CN113677679A (zh) 用于治疗炎性障碍的新化合物及其药物组合物
JP2015519402A (ja) Ｐｄｅ１０阻害剤として有用なアゼチジンおよびピペリジン化合物
Zhang et al. Design, synthesis, and antitumor activity evaluation of potent fourth-generation EGFR inhibitors for treatment of Osimertinib resistant non-small cell lung cancer (NSCLC)
BR112019020309A2 (pt) derivados de quinoxalina e piridopirazina como inibidores de pi3k-beta