CN103074289A - 一种促进地衣芽孢杆菌bl63516生长的发酵培养基及发酵培养方法 - Google Patents
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Abstract
一种应用于微生物技术领域中的促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，所述蛋白胨为牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、鱼蛋白胨的一种或几种；一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，该方法包括以下步骤，将地衣芽孢杆菌BL63516的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养；选择种子液进行接种，整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数0-300r/min，温度为32-40℃。该发明通过调整培养基中菌种生长所需的碳源、氮源和无机离子的比例，控制整个发酵过程中各时段的温度、罐压、溶氧、pH等全方位指标，提高了地衣芽孢杆菌BL63516的萌发和生长速度，提高地衣芽孢杆菌BL63516活菌数和芽孢形成率。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法。
背景技术
发明专利92113318.9公开了一种地衣芽孢杆菌BL63516（保藏号：CGMCCNo.0183）制成的微生态制剂，即整肠生，可用于治疗成人急性、慢性腹泻及各种原因引起的肠道菌群失调症。1992年开始先后有整肠生胶囊和整肠生颗粒剂产品经国家药品监督管理局批准投放市场。经过20年的临床应用实践表明，整肠生具有较好的调整人体菌群失调的作用，市场、临床应用均未发现毒副作用及不良反应方面的相关报道。该专利提供的制备地衣芽孢杆菌BL63516原菌粉的技术方案是：菌种经pH6.0-7.8的营养肉汤培养基，37℃培养15-24小时，制成种子液；扩大培养时使用pH6.0-7.8的营养琼脂培养基，35-38℃培养48小时，制成菌苔液，离心获得菌泥，再按1:8的重量比加入无水碳酸钙，65-75℃脱水干燥制成原菌粉。
该技术出现在微生态制剂工业化的早期，菌泥产量低，生产周期长，工作量巨大。后经沈阳第一制药厂1998年技术改造将固态发酵法升级为液态深层发酵法，工业化水平得到了大幅提升，但依然使用用于一般细菌增菌培养的通用培养基，即营养肉汤培养基（Nutrient Broth），并未研发设计适合地衣芽孢杆菌BL63516专属培养基。
发明专利201010578718.0在液态深层发酵法的基础上，公开了地衣芽孢杆菌BL63516冻干菌种温度梯度复苏培养的方法。该专利提供的制备地衣芽孢杆菌BL63516原菌粉的技术方案是：菌种经pH7.0-7.4的营养肉汤培养基，恒温培养2-8小时，制成种子液；发酵罐扩大培养时使用pH7.0-7.4的营养肉汤培养基，温度37±1℃，罐压0.02-0.04MPa，培养12-36小时，制成发酵液，离心获得菌泥，再按1:3-7的比例加入无水碳酸钙，60±2℃脱水干燥制成原菌粉。
虽然他们都是针对地衣芽孢杆菌BL63516进行了一系列研究，但以上的发酵工艺及培养基配方设计上，均依然采用用于一般细菌增菌培养的通用培养基，即营养肉汤培养基（Nutrient Broth），都未研发设计适合地衣芽孢杆菌BL63516的专属培养基，且对该菌种都是采用一次配料、灭菌、批次发酵的工艺，在发酵过程中只对发酵温度和罐压进行着本领域技术人员所公知的干预控制，所以目前地衣芽孢杆菌BL63516发酵产物中，活菌数含量低，芽孢形成率不高，这一问题一直没有得到根本的解决。因此，研制开发一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法一直是亟待解决的课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法，通过调整培养基中菌种生长所需的碳源、氮源和无机离子的比例，控制整个发酵过程中各时段的温度、罐压、溶氧、pH等全方位指标，提高了地衣芽孢杆菌BL63516的萌发和生长速度，提高地衣芽孢杆菌BL63516活菌数和芽孢形成率。
本发明的目的是这样实现的：一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，各组分质量百分比为：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨0.5-2.0%、麦芽糊精0.1-0.5%、低聚半乳糖0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量为水，用NaOH调节pH为：6.5-9；优选各组分质量百分比为：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麦芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖0.11-0.2%、NaCl0.3-1.5%，余量为水，用NaOH调节pH为7.5-8.5；所述蛋白胨为牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、鱼蛋白胨的一种或几种；一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，该方法包括以下步骤，
（1）将地衣芽孢杆菌BL63516的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养；
（2）选择种龄8-15小时的种子液进行接种，接种量为0.03-1.0%；
（3）0-3小时调节溶解氧的通气量在0.1-0.6vvm，控制pH在6-9；3-15小时调节溶解氧通气量在0.4-1.1vvm，使pH其在3-7小时逐渐下降至4.5-6.5，7-15小时逐渐上升至8-9.5；自15小时开始调节溶解氧通气量在0.3-1.0vvm，控制pH稳定在8-9.5，自20小时开始定期取样检测，直至芽孢形成率达到80%以上，放罐；整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数0-300r/min，温度为32-40℃；
步骤（2）选择种龄8.5-14小时的种子液进行接种，接种量为0.07-0.29%；步骤（3）具体过程为：0-3小时调节溶解氧通气量在0.2-0.5vvm，控制pH在7-8.5；3-15小时调节通气量在0.6-1.0vvm，使pH在3-7小时逐渐下降至5-6，7-15小时逐渐上升至8.3-9；自15小时开始调节溶解氧通气量在0.5-0.9vvm，控制pH稳定在8.3-9，自20小时开始定期取样检测，直至芽孢形成率达到85-100%，放罐；整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数200-300r/min，温度为34-38℃。
本发明的要点在于它的发酵培养基及发酵培养方法。其原理是：通过研究找出各种物质的最有比例，以达到最有利于地衣芽孢杆菌BL63516生长过程中，细胞物质的合成、能量的供给以及新陈代谢的调节，同时，探索最优的外环境，以达到最有利于地衣芽孢杆菌BL63516生长过程中，渗透压的稳定及酶活力的维持。
一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基及发酵培养方法与现有技术相比，具有通过调整培养基中菌种生长所需的碳源、氮源和无机离子的比例，控制整个发酵过程中各时段的温度、罐压、溶氧、pH等全方位指标，提高了地衣芽孢杆菌BL63516的萌发和生长速度，提高地衣芽孢杆菌BL63516活菌数和芽孢形成率等优点，将广泛地应用于微生物技术领域中。
下面结合实施例对本发明进行详细说明。
具体实施方式
以下实施例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。
实施例一
1.发酵培养基的筛选
1.1筛选培养基的盐浓度
配制营养肉汤培养基各200ml：牛肉粉0.3%、牛蛋白胨1.0%、不同浓度NaCl，余量为水，用NaOH调节pH7.2-7.4。
NaCl浓度分别取0%、0.1%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养9小时，制成种子液。将种子液接种至不同盐浓度的营养肉汤培养基中，接种量同为0.1%。接种后36-38℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法，对发酵液分别进行活菌数测定，结果见表1。
表1盐浓度试验结果（活菌数单位：108CFU/ml）
| 盐浓度 | 0 | 0.1 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 2.5 | 3 |
| 活菌数 | 6.7 | 8.6 | 8.9 | 8.6 | 8.7 | 9.2 | 8.4 | 8.1 |
结果证明，当NaCl的浓度为0.1-2.0%时，效果最好。
1.2筛选发酵培养基氮源
配制不同氮源液体培养基各200ml：氮源1.0%、葡萄糖0.5%、NaCl0.5%，余量为水，用NaOH调节pH7.2-7.4。
氮源分别为：牛肉粉、牛蛋白胨、大豆蛋白胨、鱼蛋白胨、胰蛋白胨、酵母粉、高蛋白乳清粉、脱脂大豆蛋白粉、尿素、硝酸钾、硝酸铵、硫酸铵
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养9小时，制成种子液。将种子液接种至不同氮源液体培养基中，接种量同为0.1%。接种后36-38℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法，对发酵液分别进行活菌数测定，结果见表2。
表2最适氮源试验结果（活菌数单位：108CFU/ml）
结果证明，牛肉粉、牛蛋白胨、大豆蛋白胨均是较好的氮源选择，其中牛肉粉、牛蛋白胨效果最好。
1.3筛选发酵培养基氮源复配
配制复配氮源液体培养基各200ml：不同质量配比的牛肉粉和蛋白胨、NaCl0.5%，余量为水，用NaOH调节pH7.2-7.4。
牛肉粉和蛋白胨分别取：分别取0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养9小时，制成种子液。将种子液接种至不同比例复配氮源液体培养基中，接种量同为0.1%。接种后36-38℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法，对发酵液分别进行活菌数测定，结果见表3。
表3复配氮源试验结果（活菌数单位：108CFU/ml）
结果证明，牛肉粉在1.0%-2.5%；牛蛋白胨在0.5%-2.0%的复配氮源效果最好。
1.4筛选发酵培养基碳源
配制不同碳源液体培养基各200ml：碳源0.5%、牛肉粉1.0%、NaCl0.5%，余量为水，用NaOH调节pH7.2-7.4。
不同碳源分别为：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽糊精、可溶性淀粉、低聚半乳糖、乳糖、甘油、甘露醇
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养9小时，
制成种子液。将种子液接种至不同碳源液体培养基中，接种量同为0.1%。接种后36-38℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法，对发酵液分别进行活菌数测定，结果见表4。
表4最适碳源试验结果（活菌数单位：108CFU/ml）
结果证明，麦芽糖、麦芽糊精、低聚半乳糖均是较好的碳源选择，其中麦芽糊精、低聚半乳糖效果最好。
1.5筛选发酵培养基碳源复配
配制复配碳源液体培养基各200ml：不同质量配比的麦芽糊精和低聚半乳糖、牛肉粉1.0%、NaCl0.5%，余量为水，用NaOH调节pH7.2-7.4。
麦芽糊精质量百分比：分别取0.1%、0.3%、0.5%、1.0%、1.5%
低聚半乳糖质量百分比：分别取0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养9小时，制成种子液。将种子液接种至不同比例复配碳源液体培养基中，接种量同为0.1%。接种后36-38℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法，对发酵液分别进行活菌数测定，结果见表5。
表5复配碳源试验结果（活菌数单位：108CFU/ml）
结果证明，麦芽糊精在0.1%-0.5%；低聚半乳糖在0.1%-0.3%的复配氮源效果最好。
实施例二
发酵培养基的配制（1L）：牛肉粉1.0%、牛蛋白胨0.5%、麦芽糊精0.1%、低聚半乳糖0.1%、NaCl0.1%，余量为水，NaOH调节pH为：7.5。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养14小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为0.15%。接种后36-38℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为18.7×108CFU/ml和8.5×108CFU/ml。
实施例三
发酵培养基的配制（1L）：牛肉膏1.0%、牛蛋白胨0.5%、麦芽糊精0.1%、低聚半乳糖0.11%、NaCl0.1%，余量为水，NaOH调节pH为：7.5。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养15小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为0.15%。接种后38-40℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为16.8×108CFU/ml和7.6×108CFU/ml。
实施例四
发酵培养基的配制（1L）：牛肉粉1.0%、牛蛋白胨0.7%、麦芽糊精0.3%、低聚半乳糖0.2%、NaCl0.3%，余量为水，NaOH调节pH为：8.0。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养15小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为0.03%。接种后39-40℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为29.0×108CFU/ml和8.7×108CFU/ml。
实施例五
发酵培养基的配制（1L）：牛肉粉1.5%、牛蛋白胨1.0%、麦芽糊精0.4%、低聚半乳糖0.3%、NaCl1.0%，余量为水，NaOH调节pH为：8.0。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养8.5小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为0.25%。接种后35-37℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为34.1×108CFU/ml和8.2×108CFU/ml。
实施例六
发酵培养基的配制（1L）：牛肉膏1.5%、大豆蛋白胨1.0%、麦芽糊精0.5%、低聚半乳糖0.2%、NaCl1.0%，余量为水，NaOH调节pH为：8.0。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养11小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为0.1%。接种后33-35℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为31.2×108CFU/ml和8.7×108CFU/ml。
实施例七
发酵培养基的配制（1L）：牛肉粉2.5%、牛蛋白胨2.0%、麦芽糊精0.5%、低聚半乳糖0.3%、NaCl2.0%，余量为水，NaOH调节pH为：8.5。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养12小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为0.29%。接种后32-35℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为29.9×108CFU/ml和8.4×108CFU/ml。
实施例八
发酵培养基的配制（1L）：牛肉粉1.5%、胰蛋白胨1.7%、麦芽糊精0.5%、低聚半乳糖0.2%、NaCl1.0%，余量为水，NaOH调节pH为：6.5。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养14小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为0.07%。接种后32-35℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为25.3×108CFU/ml和8.1×108CFU/ml。
实施例九
发酵培养基的配制（1L）：牛肉粉1.5%、酪蛋白胨1.0%、麦芽糊精0.5%、低聚半乳糖0.2%、NaCl1.0%，余量为水，NaOH调节pH为：9.0。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌BL63516，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养8小时，制成种子液。将种子液分别接种至该配方发酵培养基和对照的营养肉汤培养基中，接种量同为1.0%。接种后39-40℃、150r/min培养24h取样，采用10倍系列稀释涂平板法测定发酵液活菌数，分别为21.2×108CFU/ml和8.6×108CFU/ml。
实施例十
发酵培养基的配制（35L）：牛肉粉1.4%、牛蛋白胨1.2%、麦芽糊精0.3%、低聚半乳糖0.2%、NaCl0.7%，余量为水，NaOH调节pH为：7.5。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养9小时，制成种子液。将种子液接种至50L发酵罐，扩大培养使用BL63516发酵培养基，同时，以营养肉汤培养基作为对照，接种量同为0.29%。
使用BL63516发酵培养基的发酵具体过程为：0-3小时调节通气量在0.1vvm，通过调节通气量控制pH在7-7.5；3-15小时调节通气量在0.4vvm，通过调节通气量控制pH，使其在3-7小时逐渐下降至5-6，7-15小时逐渐上升至8.3-8.5；自15小时开始调节通气量在0.3vvm，通过调节通气量控制pH稳定在8.3-8.5，20小时开始定期取样检测，染色镜检观察，发酵至26小时，芽孢形成率达到80%以上，放罐。整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，温度为36-38℃，转数200r/min。
使用营养肉汤培养基的发酵具体过程为：维持罐压为0.02-0.04MPa，温度为36-38℃，转数200r/min。20小时开始定期取样检测，染色镜检观察，发酵至24小时，芽孢形成率达到80%以上，放罐。
采用10倍系列稀释涂平板法，分别对两批发酵液进行活菌数测定；同时对发酵液采用62.5℃加热15min杀死营养体，再进行10倍系列稀释涂平板法，对两批发酵液进行芽孢数测定。活菌分别为49.3×108CFU/ml和11.6×108CFU/ml；芽孢形成率提高6.4%。
实施例十一
BL63516发酵培养基配制（35L）：牛肉粉2.0%、大豆蛋白胨1.5%、麦芽糊精0.4%、低聚半乳糖0.2%、NaCl1.0%，余量为水，NaOH调节pH为：8.5。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养12小时，制成种子液。将种子液接种至50L发酵罐，扩大培养使用BL63516发酵培养基，同时，以营养肉汤培养基作为对照，接种量同为0.1%。
使用BL63516发酵培养基的发酵具体过程为：0-3小时调节通气量在0.3vvm，通过调节通气量控制pH在7.5-8；3-15小时调节通气量在0.7vvm，通过调节通气量控制pH，使其在3-7小时逐渐下降至5.5-6，7-15小时逐渐上升至8.3-9；自15小时开始调节通气量在0.5vvm，通过调节通气量控制pH稳定在8.3-9，20小时开始定期取样检测，染色镜检观察，发酵至24小时，芽孢形成率达到80%以上，放罐。整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，温度为34-36℃，转数200r/min。
使用营养肉汤培养基的发酵具体过程为：维持罐压为0.02-0.04MPa，温度为34-36℃，转数200r/min。20小时开始定期取样检测，染色镜检观察，发酵至24小时，芽孢形成率达到80%以上，放罐。
采用10倍系列稀释涂平板法，分别对两批发酵液进行活菌数测定；同时对发酵液采用62.5℃加热15min杀死营养体，再进行10倍系列稀释涂平板法，对两批发酵液进行芽孢数测定。活菌分别为52.6×108CFU/ml和10.8×108CFU/ml；芽孢形成率提高5.5%。
实施例十二
BL63516发酵培养基配制（700L）：牛肉粉2.5%、牛蛋白胨2.0%、麦芽糊精0.5%、低聚半乳糖0.3%、NaCl1.5%，余量为水，NaOH调节pH为：9。
无菌钩取一环地衣芽孢杆菌，接种营养肉汤培养基，36-38℃培养14小时，制成种子液。将种子液接种至1000L发酵罐，扩大培养使用BL63516发酵培养基，同时，以营养肉汤培养基作为对照，接种量同为0.07%。
使用BL63516发酵培养基的发酵具体过程为：0-3小时调节通气量在0.6vvm，通过调节通气量控制pH在8.5-9；3-15小时调节通气量在1.1vvm，通过调节通气量控制pH，使其在3-7小时逐渐下降至4.5-5.5，7-15小时逐渐上升至8.7-9.5；自15小时开始调节通气量在1.0vvm，通过调节通气量控制pH稳定在8.7-9.5，20小时开始定期取样检测，染色镜检观察，发酵至21小时，芽孢形成率达到80%以上，放罐。整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，温度为32-35℃，转数300r/min。
使用营养肉汤培养基的发酵具体过程为：维持罐压为0.02-0.04MPa，温度为32-35℃，转数300r/min。20小时开始定期取样检测，染色镜检观察，发酵至21小时，芽孢形成率达到80%以上，放罐。
采用10倍系列稀释涂平板法，分别对两批发酵液进行活菌数测定；同时对发酵液采用62.5℃加热15min杀死营养体，再进行10倍系列稀释涂平板法，对两批发酵液进行芽孢数测定。活菌分别为41.7×108CFU/ml和9.3×108CFU/ml；芽孢形成率提高9.7%。
Claims (6)
1.一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麦芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，其特征在于：各组分质量百分比为：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨0.5-2.0%、麦芽糊精0.1-0.5%、低聚半乳糖0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量为水，用NaOH调节pH为：6.5-9。
2.根据权利要求1所述的促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，其特征在于：优选各组分质量百分比为：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麦芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖0.11-0.2%、NaCl0.3-1.5%，余量为水，用NaOH调节pH为7.5-8.5。
3.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基，其特征在于：所述蛋白胨为牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、鱼蛋白胨的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，其特征在于：该方法包括以下步骤，
（1）将地衣芽孢杆菌BL63516的种子液接种于发酵培养基中进行液体发酵培养；
（2）选择种龄8-15小时的种子液进行接种，接种量为0.03-1.0%；
（3）0-3小时调节溶解氧的通气量在0.1-0.6vvm，控制pH在6-9；3-15小时调节溶解氧通气量在0.4-1.1vvm，使pH其在3-7小时逐渐下降至4.5-6.5，7-15小时逐渐上升至8-9.5；自15小时开始调节溶解氧通气量在0.3-1.0vvm，控制pH稳定在8-9.5，自20小时开始定期取样检测，直至芽孢形成率达到80%以上，放罐；整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数0-300r/min，温度为32-40℃。
5.根据权利要求1或4所述的一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，其特征在于：步骤（2）选择种龄8.5-14小时的种子液进行接种，接种量为0.07-0.29%。
6.根据权利要求1或4所述的一种促进地衣芽孢杆菌BL63516生长的发酵培养基的发酵培养方法，其特征在于：步骤（3）具体过程为：0-3小时调节溶解氧通气量在0.2-0.5vvm，控制pH在7-8.5；3-15小时调节通气量在0.6-1.0vvm，使pH在3-7小时逐渐下降至5-6，7-15小时逐渐上升至8.3-9；自15小时开始调节溶解氧通气量在0.5-0.9vvm，控制pH稳定在8.3-9，自20小时开始定期取样检测，直至芽孢形成率达到85-100%，放罐；整个发酵过程维持罐压为0.02-0.04MPa，转数200-300r/min，温度为34-38℃。
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