CN102899354A - 一种利用红曲霉生产酯香液的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用红曲霉生产酯香液的方法，包括：将红曲霉菌种接种于斜面培养基上培养，待菌丝长满试管并产生红曲霉孢子；用无菌水将红曲霉孢子制成孢子液、接种于固体培养基上，恒温培养48h-68h，得种子液；将麸皮100-2000g，自来水100-2000ml混合搅拌均匀，121℃灭菌三十分钟；取出后，将成团麸皮摇散，待冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比3-15%的种子液，摇匀，恒温培养，待长满菌丝后打散，以后每隔8-12h扣瓶一次，培养72h；将己酸和乙醇按摩尔比10∶1-17∶1的量添加，32℃酯化7-10d，得酯香液。本发明生产周期短、优质品率高、生产成本低。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用红曲霉生产酯香液的方法。
背景技术
众所周知，中国浓香型白酒酿制传统工艺是在窖池内进行的，酒窖愈老酒质愈好，同时，浓香型白酒是是中国白酒品种中产量最大、市场占有率最广的一类白酒，在人们日常生活中扮演着十分重要的角色。但是，就目前而言优质浓香型白酒在生产时还面对着诸如生产周期长、优质率低和生产成本较高等亟待解决的问题。己酸乙酯作为浓香型白酒的主要香味成分之一，其含量高低直接决定了浓香型白酒的优质品率。研究发现，细菌、酵母、霉菌都可以用于酯香液的生产，这类微生物被称作酯化微生物，但是广泛用于酯香液生产的微生物并不多。
红曲霉（ Monascus purpureus Went），中文别名红曲、红糟、红大米。散囊菌目中的一属子囊菌曲霉科真菌。我国是红曲的发源地，历史悠久、经验丰富、菌种资源多。作为我国传统的药用真菌，具有活血化瘀健胃消食之功效。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种生产周期短、优质品率高、生产成本低的利用红曲霉生产酯香液的方法。
本发明的一种利用红曲霉生产酯香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：将红曲霉菌种接种于斜面培养基上，在34℃下培养68h，待菌丝长满试管并产生红曲霉孢子；
（2） 种子液制备：将麸皮作为碳氮源，豆粕作为补充氮源，与水按固液比0.7:0.3:1- 0.7:0.3:1.5进行混合，三角瓶盛装，灭菌，得固体培养基，待固体培养基冷却至40℃以下之后，用无菌水将红曲霉孢子制成孢子液（孢子达108数量级），以质量百分比3%-15%接种量接种于固体培养基上，于28℃-34℃、150r/min恒温培养48h-68h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：
麸皮100-2000g，自来水100-2000ml，将二者混合搅拌均匀，用牛皮纸将瓶口包好，于灭菌锅中121℃灭菌三十分钟。取出后，将成团麸皮摇散，待冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比3-15%的种子液，摇匀，在31℃下恒温培养，待长满菌丝后打散，以后每隔8-12h扣瓶一次，培养72h；
（4）酯香液的制备：加入己酸和乙醇按摩尔比10:1-17:1的量的混合液中，32℃酯化7-10d。
上述的一种利用红曲霉生产酯香液的方法，其中斜面培养基为麸皮浸出液培养基：麸皮250g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，琼脂15g/L，pH自然。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：该方法以实验室分离到的高产酯香液红曲霉菌株为生产菌株，以麸皮、豆粕、己酸为发酵培养基，采用固态发酵，利用发酵所得产物，加入己酸和乙醇制得酯香液。该方法操作简单，工艺清晰，且不易污染对生产环境要求不高，生产出的酯香液能较好的应用于浓香型白酒的勾兑。
麸皮浸出液培养基：麸皮250g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，琼脂15g/L，pH自然；将红曲霉菌种接种于斜面培养基上，在31℃下培养68h，待菌丝长满试管并产生孢子。
将麸皮作为碳氮源，豆粕作为补充氮源，与水按固液比0.7:0.3:1- 0.7:0.3:1.5进行混合，三角瓶盛装，灭菌，待固体培养基冷却至40℃以下之后，将红曲霉孢子液（孢子达108数量级）以3%-15%的接种量接种于培养基上，于28℃-34℃恒温培养超过68h，待长满菌丝后打散，以后每隔8h扣瓶一次，培养72h。己酸和乙醇，32℃进行全细胞酯化7d，酯化反应在带玻璃塞的容器中进行，制得酯香液。
与国内同行业相比，我们用红曲霉生产的酯香调味液，成品调味液的己酸乙酯含量可达1450mg ∕100ml以上（以酒度550计算），如果大生产中蒸馏汽压控制得当，这个数据还有上升，生产的酯香调味液，酯香突出，口感醇和，无明显刺激感，入口甜味好。色谱分析结果，其它酸类物质含量丰富。
具体实施方式
实施例1
一种利用红曲霉生产酯香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：
斜面培养基：麸皮250g/L、葡萄糖20g/L、酵母粉5g/L、琼脂15g/L，pH自然；将购于上海志研生物科技有限公司红曲霉菌种接种于斜面培养基上，在34℃下培养68h，待菌丝长满试管并产生红曲霉孢子。
（2） 种子液制备：将麸皮作为碳氮源，豆粕作为补充氮源，与水按固液比0.7:0.3:1进行混合，三角瓶盛装，灭菌，得固体培养基，待固体培养基冷却至40℃以下之后，用无菌水将红曲霉孢子制成孢子液（孢子达108数量级）以3%（质量百分比）接种量接种于固体培养基上，于32℃，150r/min恒温培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：
麸皮100g，自来水100ml，将二者混合搅拌均匀，用牛皮纸将瓶口包好，于灭菌锅中121℃灭菌三十分钟。取出后，将成团麸皮摇散，待冷却至40℃后，往三角瓶中接入3%（质量百分比）的种子液，摇匀，在31℃下恒温培养，待长满菌丝后打散，以后每隔8h扣瓶一次，培养72h。
（4）酯香液的制备：然后加入到己酸和乙醇混合液中，两者的量分别为1.37mol/L和0.08mol/L，32℃酯化7天。
酯香液中己酸乙酯含量：经测定1703mg∕100ml。
实施例2
一种利用红曲霉生产酯香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：
斜面培养基：麸皮250g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，琼脂15g/L，pH自然；将购于上海志研生物科技有限公司红曲霉菌种接种于斜面培养基上，在34℃下培养68h，待菌丝长满试管并产生红曲霉孢子。
（2）种子液制备：将麸皮作为碳氮源，豆粕作为补充氮源，与水按固液比0.7:0.3:1.5进行混合，三角瓶盛装，灭菌，待固体培养基冷却至40℃以下之后，用无菌水将红曲霉孢子制成孢子液（孢子达108数量级），以15%接种量接种于固体培养基上，28℃，150r/min恒温培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：
麸皮2000g，自来水2000ml，将二者混合搅拌均匀，用牛皮纸将瓶口包好，于灭菌锅中121℃灭菌三十分钟。取出后，将成团麸皮摇散，待冷却至40℃后，往三角瓶中接入15%（质量比）的种子液，摇匀，在31℃下恒温培养，待长满菌丝后打散，以后每隔12h扣瓶一次，培养72h。
（4）酯香液的制备：然后加入到己酸和乙醇混合液中，两者的量分别为27.4mol/L和1.36mol/L，32℃酯化10天。
酯香液中己酸乙酯含量：经测定2930mg ∕100ml。
实施例3：
一种利用红曲霉生产酯香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：
斜面培养基：麸皮250g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，琼脂15g/L，pH自然；将购于上海志研生物科技有限公司红曲霉菌种接种于斜面培养基上，在34℃下培养68h，待菌丝长满试管并产生红曲霉孢子；
（2） 种子液制备：将麸皮作为碳氮源，豆粕作为补充氮源，与水按固液比0.7:0.3:1.5进行混合，三角瓶盛装，灭菌，待固体培养基冷却至40℃以下之后，用无菌水将红曲霉孢子制成孢子液（孢子达108数量级），以质量百分比15%接种量接种于培养基上，于34℃恒温培养68h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：
麸皮100g，自来水100ml，将二者混合搅拌均匀，用牛皮纸将瓶口包好，于灭菌锅中121℃灭菌三十分钟。取出后，将成团麸皮摇散，待冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比15%的液体种子，摇匀，在31℃下恒温培养，待长满菌丝后打散，以后每隔8h扣瓶一次，培养72h。
（4）酯香液的制备：然后加入到己酸和乙醇混合液中，两者的量分别为274mol/L和16mol/L，32℃酯化7天。
酯香液中己酸乙酯含量：经测定3230mg/100ml。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (2)
1. 一种利用红曲霉生产酯香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：将红曲霉菌种接种于斜面培养基上，在34℃下培养68h，待菌丝长满试管并产生红曲霉孢子；
（2）种子液制备：将麸皮作为碳氮源，豆粕作为补充氮源，与水按固液比0.7:0.3:1- 0.7:0.3:1.5进行混合，三角瓶盛装，灭菌，得固体培养基，待固体培养基冷却至40℃以下之后，用无菌水将红曲霉孢子制成孢子液、孢子达108数量级，以质量百分比3%-15%接种量接种于固体培养基上，于28℃-34℃、150r/min恒温培养48h-68h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：麸皮100-2000g，自来水100-2000ml，将二者混合搅拌均匀，用牛皮纸将瓶口包好，于灭菌锅中121℃灭菌三十分钟；取出后，将成团麸皮摇散，待冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比3-15%的种子液，摇匀，在31℃下恒温培养，待长满菌丝后打散，以后每隔8-12h扣瓶一次，培养72h；
（4）酯香液的制备：然后将己酸和乙醇按摩尔比10:1-17:1的量加入，32℃酯化7-10d。
2.如权利要求1所述的一种利用红曲霉生产酯香液的方法，其中斜面培养基为麸皮浸出液培养基：麸皮250g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，琼脂15g/L，pH自然。
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|---|---|---|---|---|
| CN103146585A (zh) * | 2013-02-28 | 2013-06-12 | 贵州大学 | 一种紫色红曲霉及其用途 |
| CN105112264A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-02 | 贵州大学 | 一种利用平常假丝酵母生产调香液的方法 |
| CN105199928A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-30 | 贵州大学 | 一种利用毕赤氏酵母生产调香液的方法 |
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