CN105112263A - 一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：斜面培养：将扣囊复膜酵母FBKL2.0094接种于斜面培养基上，在28℃下培养24-48h，待菌丝长满试管；菌种活化；种子液制备；三角瓶固态发酵，得发酵品；调香液的制备：26.47%食盐水，10%v/v乙醇溶液与发酵品按1ml：1ml：1g混合，搅拌均匀，搅拌时间持续5-10min，再置于50℃水浴锅中水浴30min；常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20-40min，收集馏分25-75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存。本发明生产周期短、优质品率高、生产成本低。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法。
背景技术
中国酱香型白酒酱香突出、幽雅细致、酒体醇厚、回味悠长、清澈透明，同时酱香型酒“高温堆积、高温发酵、高温馏酒”的特点，蒸馏时接酒温度高达40℃以上，比其他香型的酒接酒时的温度高出近一倍，高温下有效地挥发了有害于人体健康的物质，而且酱香型酒要经过三年以上的贮存，容易挥发的物质更能挥发掉绝大部分，所以酒体中保存的易挥发物质少，对人体的刺激小，有利于健康，在人们日常生活中扮演着十分重要的角色。但是，就目前而言优质酱香型白酒在生产时还面对着诸如生产周期长、优质率低和生产成本较高等亟待解决的问题。
醇类是白酒的助香剂和醇甜物质，也是形成酯类的前体物质，醇与酸作用生成各种酯，从而构成白酒的芳香、改善酒质和增加酒体醇厚感。研究发现，在白酒酿造过程中醇类成分绝大部分由酵母产生，而酸类成分绝大部分由细菌产生，白酒中的香味成分正是由醇类及醇和酸酯化后的酯类共同产生，可将由酵母固态发酵出的香味物质制成调香液，使白酒香气和口味达到平衡协调，但是目前广泛用酵母生产调香液并无任何报道，因此开展利用酵母生产调香液的研究应用于提高白酒品质及食品增香具有很好的实用性及前景。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种生产周期短、优质品率高、生产成本低的利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法。
本发明的一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：将扣囊复膜酵母FBKL2.0094(SaccharomycopsisfibuligeraFBKL2.0094)接种于斜面培养基上，在28℃下培养24-48h，待菌丝长满试管；
（2）菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24-48h；
（3）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24-48h；
（4）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量40%-50%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃准确蒸煮20min；待培养基冷却到60±2℃加入200-250u/g糖化酶，调节pH4.0-4.5，在60±2℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40±2℃后，往三角瓶中接入质量百分比为4-8%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔8-12h扣瓶一次，得发酵品；
（5）调香液的制备：
配制质量浓度为26.47%（按36gNacl溶于100g蒸馏水的配比）的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制10%v/v乙醇溶液200ml；
称取50-150g发酵品置于圆底烧瓶中并加入玻璃珠和小碎瓷片；
将上述配制的食盐水，乙醇溶液与发酵品按1ml：1ml：1g混合，搅拌均匀，搅拌时间持续5-10min，再置于50℃水浴锅中水浴30min；
连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20-40min，收集馏分25-75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存。
上述的一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，其中斜面培养基为麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2；种子液制备采用液体培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2。
扣囊复膜酵母FBKL2.0094(SaccharomycopsisfibuligeraFBKL2.0094)菌种已于2015年6月17日保藏到中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCNO：M2015382。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：该方法以贵州省珍酒酿酒有限公司的大曲为试验材料，经筛菌、分离、纯化、镜检、生理生化以及采用16SrDNA测序方法对菌株进行分子鉴定，并参照《酵母菌的特征与鉴定手册》，分离到扣囊复膜酵母FBKL2.0094(SaccharomycopsisfibuligeraFBKL2.0094)，并将分离到的菌株为生产菌株，以高粱、小麦为发酵培养基，采用固态发酵，利用发酵所得的产物，提取其中的香味成分，制得调香液。该方法操作简单，工艺清晰，且不易污染，对生产环境要求不高，生产出的调香液除能较好的应用于白酒的勾兑外，还可作为其余食品调香剂。且从白酒酿造过程中分离到的扣囊复膜酵母所制成的调香液具有安全性，且该菌株在发酵过程中高产芳香醇，香味突出，无明显刺激感。
具体实施方式
实施例1
一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。将扣囊复膜酵母FBKL2.0094菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
（2）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量40%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃蒸煮20min；待培养基冷却到60℃加入糖化酶（200u/g），调节pH4.0—4.5，在60℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比为4%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔8h扣瓶一次，得发酵品；
（4）调香液的制备：
配制浓度为26.47%（按36gNacl溶于100g蒸馏水的配比）的食盐水溶液100ml，过滤备用，再配制10%乙醇溶液（按90ml蒸馏水加10ml无水乙醇的配比）100ml；
准确称取50g发酵品置于250ml圆底烧瓶中并加入10粒玻璃珠和3块小碎瓷片；
向圆底烧瓶中加已配制的食盐水50ml，再加10%乙醇50ml，搅拌均匀，搅拌时间持续5min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20min，收集馏分25ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存；
感官评定：香气感官评定香气情况4，能较完整保留固态发酵品中的香气成分。
实施例2
一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。将扣囊复膜酵母FBKL2.0094菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
（2）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量45%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃蒸煮20min；待培养基冷却到60℃加入糖化酶（225u/g），调节pH4.0-4.5，在60℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比为6%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔10h扣瓶一次，得发酵品；
（4）调香液的制备：
配制浓度为26.47%（按36gNacl溶于100ml蒸馏水的配比）的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制10%乙醇溶液（按90ml蒸馏水加10ml无水乙醇的配比）200ml；
准确称取100g发酵品置于500ml圆底烧瓶中并加入15粒玻璃珠和6块小碎瓷片；
向圆底烧瓶中加已配制的食盐水100ml，再加10%乙醇100ml，搅拌均匀，搅拌时间持续5min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为30min，收集馏分50ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存；
感官评定：香气感官评定香气情况5，能较完整保留固态发酵品中的香气成分，香味较浓。
实施例3
一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化：麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。将扣囊复膜酵母FBKL2.0094菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌丝长满试管；
（2）种子液制备：配制液体培养基（麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2），三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h，得种子液；
（3）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量50%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃蒸煮20min；待培养基冷却到60℃加入糖化酶（250u/g），调节pH4.0-4.5，在60℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40℃后，往三角瓶中接入质量百分比为8%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔12h扣瓶一次，得发酵品；
（4）调香液的制备：
配制浓度为26.47%（按36gNacl溶于100ml蒸馏水的配比）的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制10%乙醇溶液（按90ml蒸馏水加10ml无水乙醇的配比）200ml；
准确称取150g发酵品置于500ml圆底烧瓶中并加入20粒玻璃珠和9块小碎瓷片；
向圆底烧瓶中加已配制的食盐水150ml，再加10%乙醇150ml，搅拌均匀，搅拌时间持续5min，再将烧瓶置于50℃水浴锅中水浴30min；
连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为40min，收集馏分75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存；
感官评定：香气感官评定香气情况5，能较完整保留固态发酵品中的香气成分，香味较浓。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (3)
1.一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：将扣囊复膜酵母FBKL2.0094接种于斜面培养基上，在28℃下培养24-48h，待菌丝长满试管；
（2）菌种活化：将斜面培养的菌种在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24-48h；
（3）种子液制备：配制液体培养基，三角瓶盛装，115℃灭菌20min，然后在超净工作台接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24-48h；
（4）三角瓶固态发酵：采用高粱麦粒培养基，小麦1:1粉碎，高粱3:1粉碎，再以高粱：小麦质量比为1:1混料；接着90℃热水润粮4h，其中加水量40%-50%；将培养基盛装放入灭菌锅内121℃准确蒸煮20min；待培养基冷却到60±2℃加入200-250u/g糖化酶，调节pH4.0-4.5，在60±2℃水浴锅糖化4h；装瓶，灭菌；灭菌完成待培养基冷却至40±2℃后，往三角瓶中接入质量百分比为4-8%的种子液，搅拌均匀，在28℃下恒温培养7d，以后每隔8-12h扣瓶一次，得发酵品；
（5）调香液的制备：
配制质量浓度为26.47%的食盐水溶液200ml，过滤备用，再配制10%v/v乙醇溶液200ml；
称取50-150g发酵品置于圆底烧瓶中并加入玻璃珠和小碎瓷片；
将上述配制的食盐水，乙醇溶液与发酵品按1ml：1ml：1g混合，搅拌均匀，搅拌时间持续5-10min，再置于50℃水浴锅中水浴30min；
连接好蒸馏装置，在圆底烧瓶的顶部用封口膜密封，插入量程为0℃-100℃的温度计，常压蒸馏，控制温度100℃，待有馏分馏出时计时，蒸馏时间为20-40min，收集馏分25-75ml于容量瓶中，置于4℃冰箱冷藏保存。
2.如权利要求1所述的一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，其中斜面培养基为麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8-6.2。
3.如权利要求1或2所述的一种利用扣囊复膜酵母生产调香液的方法，其中种子培养基为麦芽汁液体培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2。
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