CN102846732A - 一种用于治疗乳腺增生的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于治疗乳腺增生的中药组合物及其制备方法。本发明提供的中药组合物，是由下列重量份的原料药制成的：蒲公英40～60份；赤芍20～30份；柴胡20～30份；以及延胡索20～30份。其中蒲公英、赤芍土、柴胡和延胡索经过加水煎煮提取后采用超滤技术进行纯化。本发明提供的中药组合物专门针对治疗乳腺增生而配制，其中仅包含四味原料药，即可实现舒肝解郁、消瘀散结、行气止痛的功效，可以用于肝气郁结、毒瘀互阻所致的乳腺增生，无任何毒副作用，制备方法简单，使用方便，疗程短，疗效稳定。

Description

一种用于治疗乳腺增生的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于治疗乳腺增生的中药组合物及其制备方法。

背景技术

近年来乳腺增生已成为城市女性主要杀手。据调查约有70％～80％的女性都有不同程度的乳腺增生，多见于25～45岁的女性。现代医学认为乳腺增生是指乳腺上皮和纤维组织增生，乳腺组织导管和乳小叶在结构上的退行性病变及进行性结缔组织的生长，其发病原因主要是由于内分泌激素失调。一旦患乳腺增生症，除了疼痛、肿块外，患者在情绪上必有烦躁，易怒，恐惧等，生理上有功能下降，如性欲淡漠，月经紊乱，体力下降，尿频等，在病理上多伴有妇科病等。

传统中医认为乳腺增生是由于郁怒伤肝、思虑伤脾、气滞血淤、痰凝成核所致，中医学称之为“乳癖”。中医认为肝肾两经与乳房关系最密切，其次是冲任两脉。肝郁气滞、情志内伤在乳癖的发病过程中有重要影响。平素情志抑郁，气滞不舒，气血周流失度，蕴结于乳房胃络，乳络经脉阻塞不通，不通则痛而引起乳房疼痛；肝气横逆犯胃，脾失健运，痰浊内生，气滞血瘀挟痰结聚为核，循经留聚乳中，故乳中结块。肝肾不足，冲任失调也是引起乳癖的重要原因。肾为五脏之本，肾气化生天癸，天癸激发冲任，冲任下起胞宫，上连乳房，冲任之气血，上行为乳，下行为经。若肾气不足，冲任失调，气血滞，积瘀聚于乳房、胞宫，或乳房疼痛而结块，或月事紊乱失调。

乳腺增生症临床以乳房疼痛及乳房肿块为主，且多与月经周期情志变化，劳累过度等因素有关，或伴乳头痛、溢液。其发病率已占乳腺病的首位，国内外研究表明乳癖(乳腺增生)病与乳癌的发生有肯定联系，乳腺上皮增生明显增加了癌变的危险。

目前已有的用于治疗肝气郁结，毒瘀互阻所致的乳腺增生的中成药主要是乳癖舒胶囊，其组分包括瓜蒌皮、蒲公英、丹参、赤芍、土贝母、柴胡和延胡索七味原料药。在中国专利申请CN101095825A中公开的用于治疗乳腺增生、乳腺炎的中成药，包括瓜蒌皮、蒲公英、赤芍、土贝母、柴胡和延胡索六味原料药。由于上述中成药中组分较多，制备工艺复杂，成本较高，日服用剂量大(0号胶囊，5粒/次，3次/日)，患者不但顺应性差，而且还要承受严重经济负担。

因此，有必要研究开发新的用于治疗乳腺增生的中药组合物，以消除已有药物的弊端。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗乳腺增生的中药组合物。

本发明的另一个目的是提供上述中药组合物的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。一方面，本发明提供一种用于治疗乳腺增生的中药组合物，其是由下列重量份的原料药制成的：蒲公英40～60份；赤芍20～30份；柴胡20～30份；以及延胡索20～30份。

优选地，所述中药组合物是由下列重量份的原料药制成的：蒲公英50份；赤芍25份；柴胡25份；以及延胡索20份。

优选地，所述四种中药组合物经过加水煎煮提取，所得提取液再经过超滤纯化。

另一方面，本发明提供一种制备上述中药组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加8～12倍量水，煎煮1～3小时；第二次加8～10倍量水，煎煮1～2小时；第三次加6～8倍量水，煎煮0.5～1.5小时，合并三次滤液，备用；(2)取上述滤液用离心(10～30分钟，1500-5000转/分钟)的方法进行预处理，然后用分子量为1～10万道尔顿的超滤膜进行超滤，压力0.05-0.25MPa，超滤液备用；(3)将超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末，即得。

又一方面，本发明还提供了上述中药组合物在制备用于治疗乳腺增生的中药制剂中的应用。

此外，本发明还提供了一种用于治疗乳腺增生的中药制剂，其包含上述的中药组合物。优选地，所述制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。

随着中药现代化程度的日益提高，在中药药理和植物化学研究的基础上，越来越多的中药有效成分或有效部位被证明有确切的疗效并得到提纯，本发明就是在这个发展过程中应运而生的，其科学技术含量高，是现代化的中药品种，无任何毒副作用，使用方便，疗效稳定。

具体地，本发明基于祖国医学对治疗乳腺增生及其合并症发病机理的认识及治疗原则，参考现代药理研究成就，按中医组方理论，提取精华，使其发挥消痈散结、疏肝解郁、行气止痛之功效。本发明以蒲公英为君药，甘寒清解，苦以开泄，消痈散结，功专解毒消肿，为治乳痈要药；以赤芍、柴胡和延胡索为臣药，其中赤芍味苦，性微寒，归肝经，具有清热凉血，散瘀止痛，行气止痛之功效；柴胡疏肝解郁，用于肝郁气滞，胸肋胀痛；延胡索活血行气，调经止痛，以其性温，则于气血能行能畅，味辛则于气血能润能散，所以理一身上下诸痛；三药配伍加强君药消痈散结、疏肝解郁、散瘀止痛的作用；同时赤芍和柴胡在方中又发挥着使药的作用，能引诸药至肝经。以上四味药物合用，对于乳腺增生的疾病能起到标本兼治的功效。

总之，本发明提供的中药组合物是专门针对治疗乳腺增生而配制，其中仅包含蒲公英、赤芍、柴胡以及延胡索四味原料药，即可实现消痈散结、舒肝解郁、行气止痛的功效，可以用于肝气郁结、毒瘀互阻所致的乳腺增生。一方面，节约了原料药资源，为企业节约了成本、为患者减轻经济负担；另一方面，在制备过程中采用超滤技术，减少了服用量，提高了患者的顺应性。可见，本发明具有制备方法简单，无任何毒副作用，使用方便，疗程短，疗效稳定的特点。

药理学实验结果表明，本发明提供的中药组合物在不同给药剂量下对对大鼠或家兔的乳腺增生模型有一定的抑制作用，并且其作用效果与目前已有的包含瓜蒌皮、蒲公英、丹参、土贝母、延胡索、柴胡和赤芍七味原料药的中药组合物或者包含瓜蒌皮、蒲公英、土贝母、延胡索、柴胡和赤芍六味原料药的中药组合物相当，甚至更优。

此外，本发明提供的中药组合物中不含丹参。丹参使用不当会引起严重出血，造成生命危险。例如，有些心脏病患者，需要长期服用抗血凝结药物，预防血栓塞，其中有病人知道丹参对心脏病有好处，于是服用丹参，结果引起出血。丹参对胃肠有刺激作用，如长期服用可引起不同程度的出现胃痛，食欲减少，口咽干燥，恶心呕吐，与丹参能抑制消化液的分泌有关。本发明提供的中药组合物中不含瓜蒌皮。瓜蒌皮性寒，内服过量瓜蒌皮可能引起胃部不适，恶性呕吐和腹痛泄泻，并使个别病人月经过多。本发明提供的中药组合物中不含土贝母。土贝母虽然有散结，消肿，解毒的功效，但是使用不当会导致呕吐、腹泻、心慌、气短等，且白细胞、血小板减少。

另外，本发明提供的制备中药组合物的方法中，采用超滤技术对中药提取液进行纯化，具有以下优点：(1)过滤精度高，通过膜表面的微孔筛选可截留分子量为500-500,000之间的物质，通过不同分子截流量膜的选用可便利地浓缩、纯化目标物质，保留有效成分；(2)除杂效果好，可除去中药提取液中传统的水醇法不易除尽的鞣质、淀粉、树脂、蛋白、热原、细菌等，超滤后可得到无菌澄清的药液；(3)成本低适合在工业化大生产中应用，超滤机采用错流滤过原理可自动清洗不易堵塞，滤芯耐溶剂性好、使用寿命长，加之超滤机通量大，具有在短时间内处理大量提取液的能力，可减少工序缩短生产周期，因此每吨中药提取液的处理成本仅为传统水提纯沉法的几十分之一，也远远低于有醇洗过程的大孔树脂吸附工艺；(4)可在常温下进行操作，对分离热敏性、保味性的药物更为适用；(5)绿色环保，在对中药提取液的纯化处理过程中既不会像其他传统技术一样因添加化学试剂而带入有害物质，也没有有害物的排出。纯化过程不存在相的转换，不需加热，不损坏热敏感物质等；(6)可保持中药的原汁原味，而传统的化学萃取工艺分离过程比较复杂，技术要求高、分离效率低、药物有效成分损耗大。同时由于化学分离过分地注重单个组分的作用，使中药失去了原有的特色，影响药物的预期效果。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

以下实施例1-12为本发明提供的中药组合物处方及其制备方法。

实施例1

中药组合物处方：

蒲公英40份；赤芍20份；柴胡30份；延胡索30份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加12倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时；第三次加8倍量水，煎煮1小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液离心20分钟(1500转/分钟)，然后用分子量为5万道尔顿的醋酸纤维素膜进行超滤，压力0.1MPa，超滤液备用；

(3)将上述超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加硬脂酸镁适量，混合均匀，加入90％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，装入胶囊，即得。

实施例2

中药组合物处方：

蒲公英50份；赤芍25份；柴胡25份；延胡索20份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加12倍量水，煎煮3小时；第二次加8倍量水，煎煮1小时；第三次加6倍量水，煎煮0.5小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心处理(10分钟，3000转/分钟)，然后用分子量为10万道尔顿的聚醚砜膜进行超滤，压力0.05MPa，超滤液备用；

(3)取上述超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加碳酸钙适量，混合均匀，加入90％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，装入胶囊，即得。

实施例3

中药组合物处方：

蒲公英60份；赤芍25份；柴胡20份；延胡索25份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮两次，第一次加12倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时，合并两次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心预处理(10分钟，5000转/分钟)，然后用分子量为1万道尔顿的聚酰胺膜进行超滤，压力0.2MPa，超滤液备用；

(3)将超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加淀粉适量，混合均匀，加入80％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，装入胶囊，即得。

实施例4

中药组合物处方：

蒲公英50份；赤芍20份；柴胡20份；延胡索30份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加12倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时；第三次加8倍量水，煎煮1小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心预处理(30分钟，3000转/分钟)，然后用分子量为3万道尔顿的聚氟膜进行超滤，压力0.2MPa，超滤液备用；

(3)将超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加低取代适量，混合均匀，加入80％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，装入胶囊，即得。

实施例5

中药组合物处方：

蒲公英45份；赤芍20份；柴胡20份；延胡索30份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加12倍量水，煎煮1.5小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时；第三次加10倍量水，煎煮1小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心(15分钟，4000转/分钟)预处理，然后用分子量为6万道尔顿的膜进行超滤，压力0.1MPa，超滤液备用；

(3)将超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加磷酸氢钙适量，混合均匀，加入80％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，装入胶囊，即得。

实施例6

中药组合物处方：

蒲公英40份；赤芍20份；柴胡30份；延胡索30份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加10倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮2小时；第三次加8倍量水，煎煮1小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液离心20分钟(1500转/分钟)，然后用分子量为5万道尔顿的醋酸纤维素膜进行超滤，压力0.1MPa，超滤液备用；

(3)将上述超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加硬脂酸镁适量，混合均匀，加入90％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，压片，包衣，即得。

实施例7

中药组合物处方：

蒲公英50份；赤芍25份；柴胡25份；延胡索20份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加10倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时；第三次加8倍量水，煎煮1小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心处理(10分钟，3000转/分钟)，然后用分子量为10万道尔顿的聚醚砜膜进行超滤，压力0.05MPa，超滤液备用；

(3)取上述超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加碳酸钙和低取代适量，混合均匀，加入90％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，压片，包衣，即得。

实施例8

中药组合物处方：

蒲公英60份；赤芍25份；柴胡20份；延胡索25份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮两次，第一次加12倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时，合并两次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心预处理(10分钟，5000转/分钟)，然后用分子量为1万道尔顿的聚酰胺膜进行超滤，压力0.2MPa，超滤液备用；

(3)将超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加淀粉适量，混合均匀，加入80％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，压片，包衣，即得。

实施例9

中药组合物处方：

蒲公英50份；赤芍25份；柴胡20份；延胡索20份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加12倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时；第三次加8倍量水，煎煮0.5小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心预处理(30分钟，3000转/分钟)，然后用分子量为3万道尔顿的聚氟膜进行超滤，压力0.2MPa，超滤液备用；

(3)将超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末；

(4)第(3)步所得细粉，加低取代适量，混合均匀，加入80％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，压片，包衣，即得。

实施例10

中药组合物处方：

蒲公英45份；赤芍20份；柴胡20份；延胡索30份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加10倍量水，煎煮1.5小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时；第三次加8倍量水，煎煮1小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心(15分钟，4000转/分钟)预处理，然后用分子量为6万道尔顿的聚醚砜膜进行超滤，压力0.1MPa，超滤液备用；

(3)将超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末。

(4)第(3)步所得细粉，加预交化淀粉适量，混合均匀，加入80％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，压片，包衣，即得。

实施例11

中药组合物处方：

蒲公英40份；赤芍20份；柴胡30份；延胡索30份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮3小时；第二次加10倍量水，煎煮2小时，合并两次滤液，备用；

(2)取上述滤液离心20分钟(1500转/分钟)，然后用分子量为5万道尔顿的醋酸纤维素膜进行超滤，压力0.1MPa，超滤液备用；

(3)将上述超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末。

(4)第(3)步所得细粉，加淀粉、柠檬酸和蔗糖适量，混合均匀，加入60％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，装袋，即得。

实施例12

中药组合物处方：

蒲公英50份；赤芍25份；柴胡25份；延胡索30份。

制备方法如下：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加12倍量水，煎煮2小时；第二次加10倍量水，煎煮1.5小时；第三次加8倍量水，煎煮1小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心处理(10分钟，3000转/分钟)，然后用分子量为10万道尔顿的聚醚砜膜进行超滤，压力0.05MPa，超滤液备用；

(3)取上述超滤液进行喷雾干燥，得干燥粉末。

(4)第(3)步所得细粉，加淀粉、低取代、乳糖和枸橼酸适量，混合均匀，加入70％乙醇适量进行制粒，干燥，整粒，装袋，即得。

以下实施例13-16为本发明提供的中药组合物(以实施例3制备的中药组合物为例)的药效学试验，其中：

受试样品：实施例3制备的中药组合物。

阳性对照药物I：乳癖舒胶囊，购自西安千禾药业有限责任公司，生产批号：20100326；

阳性对照药物II：参照中国发明专利申请CN101095825A中公开的实施例1制备；

试验前将上述药物粉末用50℃蒸馏水缓慢浸溶，直至能通过受试动物的灌胃器，制得溶液。

空白对照药物：0.9％氯化钠灭菌注射液(规格：250ml/瓶，物理性状：无色透明液体)，购自西安京西双鹤药业有限公司，生产批号：2010121，国药准字H20023017。

受试动物为SD品系大鼠(体重180-220g，雌性)，ICR品系小鼠(体重18-22g，雌性)以及日本大耳白家兔(体重2-2.5kg，雌性未孕)，购自西安交大医学院实验动物中心，实验动物使用许可证号：SYXK(陕)2007-005、SYXK(陕)2007-004以及SYXK(陕)2007-007。

试验室温：20～22℃，相对湿度：65％～75％。

实施例13药物对大鼠乳腺增生模型的影响

本实施例给大鼠灌胃给药实施例3制备的中药组合物(受试样品)，观察药物对乳腺增生的影响。

1.分组：将8周龄健康未孕的SD雌性健康大鼠75只，随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组I和II、受试样品高、中、低剂量组。其中模型组15只，其余每组各10只。

2.制作模型：除空白对照组外，其余各组按体质量0.5mg/kg大鼠后肢外侧肌肉注射雌二醇注射液1次/d，连续25d后改为5mg/kg肌注黄体酮，1次/天，连续10天，空白对照组每天肌肉注射等量生理盐水，35天后随机取5只大模型组鼠处死，取其乳腺组织，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察乳腺组织，确认模型复制成功。

3.给药方法：造模成功后，空白组、模型组灌服生理盐水2ml/只；阳性对照组I和II分别灌阳性对照药物I和II，剂量为0.5g/kg；受试样品低、中、高剂量组分别灌胃实施例3制备的中药组合物0.25、0.5、1.0g/kg，连续30d，1次/d。灌胃给药容积均为20ml/kg。

4.检测指标及方法：

1)大鼠乳房外观的检测末次给药后用游标卡尺测量各鼠第二对乳头直径、高度。

2)乳腺病理组织的观察于大鼠第2对乳头向基底部最大切面取材，固定于10％福尔马林中，常规石蜡包埋切片，HE染色光镜下观察乳腺病理组织。将大鼠乳腺组织分为4类：无增生、轻度增生、中度增生、重度增生。病理切片的乳腺增生评分标准如下：

无增生，仅见小叶稀疏分布，每小叶内腺泡数5-10个腺泡，导管内无分泌，腺泡间有结缔组织；

轻度增生，小叶稍增，每个低倍视野可见5-10个小叶，小叶中的腺泡数也增至10个左右，腺泡间有少量结缔组织，有的导管扩张。

中度增生，低倍镜下可见10多个小叶，广泛分布，每个小叶有近20个腺泡，腺体呈“背靠背”状，导管扩张或有分泌。

重度增生，小叶较多，低倍视野下约占1/2-3/4，肌肉、皮下均有小叶分布，小叶、腺泡广泛增生，导管及小导管均有较多分泌物。

5.实验数据处理方法：采用SAS 12.0版统计软件进行分析。计量资料组间比较采用方差分析；各治疗组与对照组的比较采用t检验；等级分组资料组间比较采用Ridit检验。结果见表1和表2。

表1对乳腺增生大鼠乳头高度的影响

注：与正常对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组相比△P＜0.05，△△P＜0.01。

结果显示，用药各组大鼠的乳头高度同模型组相比较有不同程度的变化，乳头高度明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；乳头直径明显缩小(P＜0.05或P＜0.01)。表明本发明的中药组合物对乳腺增生病有一定的抑制作用，并且与阳性对照物比较(相同剂量)，其疗效相当，没有统计学差异。

表2对各组大鼠乳腺病理组织的影响

结果显示，实施例3制备的中药组合物用药各组对乳腺病理组织同模型组相比较，均有显著性差异(P＜0.01)，明显降低镜下观乳腺增生程度。表明本发明的中药组合物对乳腺增生病有一定的抑制作用。

实施例14药物对家兔乳腺增生模型的影响

本实施例给家兔灌胃给药实施例3制备的中药组合物，观察药物对乳腺增生的影响。

1.分组：取日本大耳白家兔75只，雌性，随机分为空白对照组、模型对照组、受试样品高、中、低剂量组、阳性对照组I和II。其中模型组15只，其余每组各10只。

2.制作模型：除空白对照组外，其余6组动物肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液(0.5mg/kg)，隔日一次，共15次，30天后，随机取5只模型组兔处死，摘取乳腺肉眼观察见乳头发红并增大，并对其进行病理组织切片检查，确认模型复制成功。

3.给药方法：造模成功后，空白组、模型组灌服生理盐水10ml/kg；阳性对照组I和II分别灌胃阳性对照药物I和II，剂量为0.4g/kg。受试样品低、中、高剂量组分别灌胃(实施例3制备的中药组合物)0.2、0.4、0.8g/kg，连续30天，1次/日。灌胃给药容积均为20ml/kg。

4.检测指标及方法：

(1)乳房大体形态观察：于造模前和末次给药结束时，家兔胸部第二对乳房处去毛，用精密游标卡尺深度尺测量自乳头最高处至皮肤间的垂直距离，取该对乳房高度的平均值作为乳头高度。

(2)乳腺病理组织的观察：取下第二对乳房，固定于10％福尔马林中，常规石蜡包埋切片，HE染色光镜下观察乳腺病理组织。将家兔乳腺组织分为4类：无增生、轻度增生、中度增生、重度增生。病理切片乳腺增生评分标准如下：

无增生，仅见小叶稀疏分布，每小叶内腺泡数5-10个腺泡，导管内无分泌，腺泡间有结缔组织；

轻度增生，小叶稍增，每个低倍视野可见5-10个小叶，小叶中的腺泡数也增至10个左右，腺泡间有少量结缔组织，有的导管扩张。

中度增生，低倍镜下可见10多个小叶，广泛分布，每个小叶有近20个腺泡，腺体呈“背靠背”状，导管扩张或有分泌。

重度增生，小叶较多，低倍视野下约占1/2-3/4，肌肉、皮下均有小叶分布，小叶、腺泡广泛增生，导管及小导管均有较多分泌物。

5.实验数据处理方法：采用SAS 12.0版统计软件进行分析。计量资料组间比较采用方差分析；各治疗组与对照组的比较采用t检验；等级分组资料组间比较采用Ridit检验。结果见表3和表4。

表3对家兔乳腺增生模型乳头高度的影响

注：与正常对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组相比△P＜0.05，△△P＜0.01。

结果显示，用药各组家兔的乳头高度同模型组相比较有不同程度的变化，乳头高度明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；乳头直径明显缩小(P＜0.05或P＜0.01)。表明本发明的中药组合物对乳腺增生病有一定的抑制作用，其中与阳性对照物比较(相同剂量)，其疗效相当，没有统计学差异。

表4对家兔乳腺增生模型乳腺病理组织的影响

结果显示，用药各组对乳腺病理组织同模型组相比较均有显著性差异(P＜0.01)，表明本发明的中药组合物对家兔乳腺增生病有一定的抑制作用。

实施例15药物对小鼠的镇痛作用

本实施例通过给小鼠灌胃给药实施例3的中药组合物，以乳癖舒胶囊为阳性对照品，观察本发明对小鼠疼痛扭体反应的影响。

1.分组：取小鼠60只，随机分六组，各组10只，雌雄各半。即：空白对照组(生理盐水0.2ml/10g)；受试样品高、中、低剂量组(实施例3中药组合物0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg)；阳性对照组I和II(阳性对照药物I和II，0.4g/kg)。

2.给药方法：将以上各组小鼠逐只按上述所示剂量灌胃给药3天，给药容积均为20ml/kg，2次/日，与末次灌胃给药后30分钟再静脉注射0.6％冰醋酸0.2ml/只。以上小鼠出现扭体为痛反应指标。记录10分钟内各组逐只小鼠扭体次数。经t检验，结果见表5。

表5对小鼠疼痛扭体反应的影响

注：与正常对照组相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果显示，受试样品大、中剂量能显著减少冰醋酸引起小鼠疼痛扭体反应次数(P＜0.01)。其中小剂量也具有很好的镇痛作用，这可能与处方中延胡索比例较大有关系。

实施例16药物对小鼠的急性毒性试验

本实施例通过给小鼠灌胃一次给药实施例3的中药组合物，观察小鼠的急性毒性反应和死亡情况。

1.试验方法：取小鼠30只，每组10只，分3组，即高、中、低3个剂量组(0.4、0.2、0.1ml/10g)灌胃给药3次/日，预测药物LD50范围。结果显示高测量组测不出LD50，故将药物灌胃给药LD50的测定改做最大体积下之最大浓度-最大耐受量的测定。

取小鼠30只，雌雄各半，空腹12小时后，以预测选定的0.4ml/10g剂量逐只灌胃给药给受试品3次/日，连续观察7天。

2.试验结果：在灌胃给受试品后24小时小鼠自发性活动下降，摄食、摄水减少；第二天自发性活动渐趋正常，大、小便未见异常小鼠活动、摄食量、体重增长、粪便等均正常，观察期满后受试小鼠全部存活。

观察期满后处死全部受试小鼠肉眼尸检，可见各重要脏器心、肝、脾、肺、肾、睾丸/卵巢、肠、胃等无明显病理形态改变。

以上最大给药量试验结果表明，30只小鼠给药后均无明显的毒性反应，一周内亦无死亡。给小鼠灌胃给药实施例3药物后测得最大耐受量为28.6g/kg·d，如按临床成人口服剂量2.7g/60kg计算，则该药的小鼠一日灌胃给药量为临床成人一日口服量的637[(28.6g/kg)÷(2.7g/60kg)]倍。

Claims (7)

1.一种用于治疗乳腺增生的中药组合物，其是由下列重量份的原料药制成的：

蒲公英40～60份；赤芍20～30份；柴胡20～30份；以及延胡索20～30份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物是由下列重量份的原料药制成的：

蒲公英50份；赤芍20份；柴胡20份；以及延胡索30份。

3.如权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物中，蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索是经过加水煎煮提取，再经过超滤纯化。

4.一种制备权利要求1至3中任一项所述中药组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)取处方量的蒲公英、赤芍、柴胡和延胡索加水煎煮三次，第一次加8～12倍量水，煎煮1～3小时；第二次加8～10倍量水，煎煮1～2小时；第三次加6～8倍量水，煎煮0.5～1.5小时，合并三次滤液，备用；

(2)取上述滤液进行离心预处理，然后用分子量为1-10万道尔顿的超滤膜进行超滤，压力0.05-0.25MPa，超滤液备用；

(3)将超滤液进行喷雾干燥，即得。

5.权利要求1至3中任一项所述的中药组合物在制备用于治疗乳腺增生的中药制剂中的应用。

6.一种用于治疗乳腺增生的中药制剂，其包含权利要求1至3中任一项所述的中药组合物。

7.如权利要求6所述的中药制剂，其特征在于，所述制剂为胶囊剂、片剂、或颗粒剂。