CN105796620A - 三七及三七提取物在制备治疗银屑病药物方面的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及三七及三七提取物的新用途,即三七及三七提取物在制备治疗银屑病药物方面的新用途,特别是三七提取物中的人参皂苷类Rb含量不低于35%的药物制剂在制备治疗银屑病药物方面的新用途。三七通过乙醇提取,提取液经调整pH值,经大孔树脂吸附、洗脱后,所得三七醇提取物能显著抑制小鼠阴道上皮有丝分裂,且对C57小鼠尾部鳞片颗粒层形成有显著的促进作用。以上结果提示本发明的三七醇提物具有治疗银屑病的作用。
Description
技术领域
本发明涉及三七的新用途,特别是三七提取物的新用途,即在制备治疗银屑病药物方面的新用途。
背景技术
银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,典型皮损为红斑、鳞屑,由此传统中医学也称之为“白疕”“松皮癣”。银屑病该病在我国的发病率高,有研究表明我国银屑病患者占世界人口的3%左右,且有逐年增长的趋势。银屑病皮肤受损明显,自觉瘙痒,常反复发作,迁延难愈,因此只能通过药物控制,使用药物防治每次发作,尽可能延长其缓解时间。目前银屑病的发病机制尚未明确,在中医上将银屑病辨证分为血热论、血瘀论、血虚论进行治疗。
目前银屑病的治疗大多以外用的糖皮质激素软膏等外用剂及内服的雷公藤多苷片等制剂制剂治疗,这些治疗手段长期使用时都具有较大的毒副作用,多数一旦停药即出现反跳现象,较难控制。
目前本专利发明人在研究中发现三七提取物中的人参皂苷类Rb具有治疗银屑病的作用,且并未检索到三七提取物中的人参皂苷Rb可用于治疗银屑病的文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供三七在制备治疗银屑病药物方面的新用途。
本发明的另一目的是提供三七提取物在制备治疗银屑病药物方面的新用途。
本发明的另一目的是提供三七醇提取物在制备治疗银屑病药物方面的新用途。
优选地,所述三七提取物中人参皂苷Rb含量不低于35%。
本发明的另一目的是提供用于治疗银屑病的三七提取物的制备方法。
本发明的目的是通过下列的技术方案实现的:
本发明原料来源:
三七:本品为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎。秋季花开前采挖,洗净,分开主根、支根及根茎,干燥。支根习称“筋条”,根茎习称“剪口”【性味归经】甘、微苦、温。归肝、胃经【功能与主治】散瘀止血,消肿定痛。用于咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛。
方解:在传统中医上看,银屑病由外邪内侵,脾胃失调等因素所致。且在中医上将银屑病的病因病机辨证为血热论、血瘀论、血虚论。其中血瘀型银屑病发病后,久病难愈,而久病成瘀,淤血阻络,郁久化火,使得肌肤因瘀失养,致使风邪入侵而发病。而三七为传统的止血化瘀良药,又因其归肝胃心经,从而起化瘀作用,疏通经络,使气血运行通畅,使精血得以到达肌肤,从内蕴养肌表,从外抵抗风邪而起效。另一方面,现代药理学表明三七中的有效成份为三七总皂苷,而三七总皂苷,尤其其中的人参皂苷Rb经现代药理学研究发现,其具有抗血栓形成,消炎止痛,提高免疫力作用。
本发明专利临床应用的安全性较高,在银屑病的药物治疗中不失为一种好药,其拓宽了治疗银屑病的新方法,同时为患者解决了现有技术治疗银屑病时出现的不良反应。
因此,申请人提供三七用于治疗银屑病药物方面的新用途。
本发明还公开了三七醇提取物在制备治疗银屑病药物的应用,所述三七醇提取物的制备包括以下步骤:
三七粉碎为细粉,加入体积百分比30~95%的乙醇润湿,浸泡30~90分钟,超声5~10分钟,加压提取1~3次,每次加入10~20倍药材重量的乙醇,每次提取15~40分钟,合并提取液,过滤,浓缩,4~9℃下静置48~72小时,过滤,离心,经大孔吸附树脂HPD-400吸附后,用水和30%~90%乙醇梯度洗脱,通过紫外检测器在线监测洗脱液,收集合格的洗脱液,浓缩,加入丙酮溶液,过滤,收集沉淀,冻干,即得。
优选地,加压提取时温度为50~100℃,压力为0.4~0.8MPa。
本发明提供的三七醇提取物用于治疗银屑病药物方面的新用途具有以下优点:
1、三七醇提取物从五加科植物三七中提取,并经过各工序纯化而得,成分纯度较高,性质稳定,毒副作用较小,制备成常规剂型后便于长期服用。
2、实验结果显示,三七醇提取物均可以显著性地抑制小鼠阴道上皮有丝分裂,且对C57小鼠尾部鳞片颗粒层形成有显著的促进作用。以上结果提示本发明的三七醇提物具有治疗银屑病的作用。
3、本发明使用的三七提取方法能在较低温度下快速有效的提取得到纯度较高的三七醇提取物。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是,本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明,本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数,v/v表示溶液的体积比。
实施例1:
三七粉碎为细粉,加入10倍药材重量的30%乙醇润湿,浸泡30分钟,超声5分钟,密封加压提取1次,提取温度为50℃,最高压力为0.4MPa,提取15分钟,提取液过滤,浓缩,置于4℃下静置48小时,过滤,离心,经大孔吸附树脂HPD-400吸附后,用水和30%~90%乙醇按梯度洗脱,通过紫外检测器在线监测洗脱液,收集合格部分(在线监测,符合权利要求4所述的部分为合格部分),浓缩,加入丙酮溶液,过滤,收集沉淀,冻干,加入辅料微晶纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠混合均匀,用60%乙醇制软材,过20目筛制粒,干燥,整粒,加入润滑剂滑石粉、硬脂酸镁混合均匀,压片,制成片剂,即得。
以Rb1作为对照品,采用HPLC测得三七醇提取物中人参皂苷Rb含量为:35%。
实施例2:
三七粉碎为细粉,加入95%乙醇润湿,浸泡90分钟,超声10分钟,置于加压提取容器中,提取温度为100℃,最大压力为0.8MPa,密封加压提取3次,每次加入20倍药材重量的乙醇量,每次提取40分钟,合并提取液,过滤,浓缩,置于9℃下静置72小时,过滤,离心,经大孔吸附树脂HPD-400吸附后,用水和30%~90%乙醇按梯度洗脱,通过紫外检测器在线监测洗脱液,收集合格部分(在线监测,符合权利要求4所述的部分为合格部分),浓缩,加入丙酮溶液,过滤,收集沉淀,冻干,加入辅料淀粉、蔗糖粉混合均匀,用60%乙醇制软材,过20目筛制粒,干燥,整粒,分装,制成颗粒剂,即得。
以Rb1作为对照品,用HPLC法测得三七醇提取物中人参皂苷Rb含量为:58%。
实施例3:
三七粉碎为细粉,加入75%乙醇润湿,浸泡60分钟,超声8分钟,置于加压提取容器中,密封加压提取2次,每次加入15倍药材重量的乙醇量,每次提取30分钟,合并提取液,过滤,浓缩,置于9℃下静置55小时,过滤,离心,经大孔吸附树脂HPD-400吸附后,用水和30%~90%乙醇按梯度洗脱,通过紫外检测器在线监测洗脱液,收集合格部分(在线监测,符合权利要求4所述的部分为合格部分),浓缩,加入丙酮溶液,过滤,收集沉淀,冻干,用注射用水溶解,活性炭处理,过滤,灌封,冷冻干燥,制得冻干注射剂,即得。
以Rb1作为对照品,测得三七醇提取物中人参皂苷Rb含量为:54%。
对比例1:
三七粉碎为细粉,加入75%乙醇润湿,浸泡10小时,热回流提取3次,每次加入15倍药材重量的乙醇量,每次提取2小时,合并提取液,过滤,浓缩,置于4℃下静置55小时,过滤,离心,经D101大孔吸附树脂吸附后,用水和30%~90%乙醇按梯度洗脱,收集洗脱液,浓缩,加入丙酮溶液,过滤,收集沉淀,冻干,用注射用水溶解,活性炭处理,过滤,灌封,冷冻干燥,制得冻干注射剂,即得。
以Rb1作为对照品,测得三七醇提取物中人参皂苷Rb含量为:29.1%。
药效实验:
1实验材料
1.1动物
健康SPF级昆明种雌性小鼠90只,体重18-22g,由广西医科大学医学实验动物中心提供,许可证号SCXKG桂2003-0003。C57BL/6J90只,体重18-22g,雌雄各半,由广州中医药大学实验动物中心提供,动物合格证号:粤医实动准字第A006号。
1.2受试样品与试剂
本发明实施例1、实施例2。
对比例1
雷公藤多苷片,10ng/片
己烯雌酚注射液,2mg/ml
秋水仙碱
苦味酸
碘酒
10%福尔马林
HE染色液
2实验分组及给药方法
分别为空白组、对比例组、阳性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。
空白对照组:给予生理盐水,
高剂量组:小鼠分别给予实施例1、实施例2制备的样品,给药量按所制备所得的120mg/kg计,每天灌胃1次。
中剂量组:小鼠分别给予实施例1、实施例2制备的样品,给药量按所制备所得的60mg/kg计,每天灌胃1次。
低剂量组:小鼠分别给予实施例1、实施例2制备的样品,给药量按所制备所得的30mg/kg计,每天灌胃1次。
对比例组:小鼠分别给予对比例1制备的样品,给药量按制备所得的60mg/kg计,每天灌胃1次。
阳性对照组:小鼠分别给予雷公藤多苷片1.5mg/kg,每天灌胃1次。
给药方法:每天灌胃1次,连续28d。
3实验方法
3.1实验一:昆明种小鼠阴道上皮模型制模给昆明种小鼠ip己烯雌酚,02mg/次,1次/日,连续3天,使所有小鼠处于雌激素期,制模成功后随机分成9组,每组10只,分别标记为空白组、对比例组、阳性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。空白组每天给予与中剂量组等剂量的生理盐水灌胃,各组按上述的给药量及给药方法给与相应的受试物。第28d统一给药后一个小时后,每只小鼠腹腔注射秋水仙碱2mg/kg,4h后杀死小鼠,取阴道标本以体积分数10%福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色。用光学显微镜观察细胞有丝分裂,计数300个基底细胞的有丝分裂数,并算出每100个细胞的有丝分裂数,成为有丝分裂指数。
3.2实验二:取C57BL/6J小鼠雌雄各45只,随机分成9组,每组10只,分别标记为空白组,对比例组,阳性对照组、高剂量组,中剂量组,低剂量组,空白组每天给予与中剂量组等剂量的生理盐水灌胃,各组按上述的给药量及给药方法给与相应的受试物。在第28d灌胃24h后,称重,脱颈椎处死小鼠,取样检测下列指标:取距离尾根约2cm处尾背面皮肤一长条。用体积分数为10%福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色。在光学显微镜下逐一观察每只小鼠的尾部鳞片。凡是一个鳞片有连接成行的颗粒层细胞者,称为有颗粒层的鳞片。计数每100个鳞片中有颗粒层的鳞片数。
3.3实验数据统计分析
采用方差分析比较各变量间的差别,如果方差齐性或正态性不能满足方差分析的要求则改用H检验。
4.实验结果
4.1实验一:结果见表1。
表1本发明对昆明种小鼠阴道上皮有丝分裂的影响
注:与空白组相比:*P<0.01;与阳性对照组:##P<0.01
表1结果显示:服用本发明的各组、对比例组及阳性对照组,和空白对照组比较,具有显著性差异(p<0.01),本发明的中剂量组、高剂量组及阳性对照组的抑制作用较强,本发明的高剂量组、中剂量组与阳性对照组相比无统计学意义(p>0.05),而对比例组的抑制作用较弱,与空白组及阳性对照组相比均具有显著性差异,说明本发明对昆明种小鼠阴道上皮有丝分裂均有显著的抑制作用,且效果优于对比例组,即三七提取物中人参皂苷Rb含量不低于35%时其疗效更理想。
4.2实验二:结果见表2。
表2本发明对C57小鼠尾部鳞片颗粒层形成的影响
注:与空白组相比:*P<0.01;与阳性对照组:#P<0.05,##P<0.01
表2结果显示:服用本发明的各组、阳性对照组、对比例组,和空白对照组比较,具有显著性差异(p<0.01),服用本发明的高剂量组、中剂量组与阳性对照组相比无统计学意义(p>0.05),对比例组与阳性对照组具有显著性差异,说明本发明对C57小鼠尾部鳞片颗粒层形成有显著的促进作用,且作用强于对比例组,即,三七提取物中人参皂苷Rb含量不低于35%时其疗效更理想。
结论:研究表明,本发明具有治疗银屑病的作用,在小鼠阴道上皮有丝分裂实验中,服用本发明的各组均对小鼠阴道上皮有丝分裂具有显著的抑制作用;在小鼠尾部鳞片颗粒层形成实验结果中可以看到,服用本发明的各组对小鼠尾部鳞片颗粒层形成具有促进作用,结合两个实验的实验结果即可以证明本发明具有治疗银屑病的作用。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (6)
1.三七在制备治疗银屑病药物的新用途。
2.三七提取物在制备治疗银屑病药物方面的新用途。
3.根据权利要求2所述用途,其特征在于:所述的三七提取物为三七醇提取物。
4.根据权利要求3所述的新用途,所述三七提取物中人参皂苷Rb含量不低于35%。
5.根据权利要求4所述的新用途,其特征在于所述三七提取物通过以下步骤制备而得:三七粉碎为细粉,加入体积百分比30~95%的乙醇润湿,浸泡30~90分钟,超声5~10分钟,加压提取1~3次,每次加入10~20倍药材重量的乙醇,每次提取15~40分钟,合并提取液,过滤,浓缩,4~9℃下静置48~72小时,过滤,离心,经大孔吸附树脂HPD-400吸附后,用水和30%~90%乙醇梯度洗脱,通过紫外检测器在线监测洗脱液,收集合格的洗脱液,浓缩,加入丙酮溶液,过滤,收集沉淀,冻干,即得。
6.根据权利要求5所述的新用途,其特征在于加压提取时温度为50~100℃,压力为0.4~0.8MPa。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160727 |
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |