CN102796066B

CN102796066B - 一种黄酮类化合物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN102796066B
Application number: CN201210317876.XA
Authority: CN
Inventors: 高雪梅; 胡秋芬; 崔明珠; 苏丽丹; 沈艳琼; 杨丽英
Original assignee: Yunnan Minzu University
Current assignee: Yunnan Minzu University
Priority date: 2012-08-31
Filing date: 2012-08-31
Publication date: 2014-09-03
Anticipated expiration: 2032-08-31
Also published as: CN102796066A

Abstract

本发明公开了一种黄酮类化合物及其制备方法与应用，所述的黄酮类化合物是从玫瑰花中分离得到，其分子式为C₂₀H₁₈O₇，具有下述结构：所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于以玫瑰花为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、石油醚-乙酸乙酯柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为：取玫瑰花，粉碎，用90~99%乙醇超声提取合并提取液、过滤，减压浓缩成浸膏；浸膏用硅胶干法装柱进行硅胶柱层析；以体积配比为20:1~1:1的氯仿-甲醇溶液进行梯度洗脱，合并相同的部分；9:1部分用体积配比为9:1~0:1的石油醚-乙酸乙酯溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩；7:3部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得所述的黄酮类化合物。本发明化合物结构简单，人工合成容易实现，化合物的活性好；可作为抗肿瘤药物的先导性化合物。

Description

一种黄酮类化合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从玫瑰花中提取的黄酮类化合物及其制备方法与应用。

背景技术

玫瑰花为蔷薇科植物玫瑰的干燥花蕾。春末夏初花将开放时分批采收。玫瑰花具有行气解郁，和血，止痛。用于肝胃气痛，食少呕恶，月经不调，跌扑伤痛多种功效。玫瑰花中含有数量丰富的活性化合物，玫瑰花中含有多种黄酮类化合物，是玫瑰花中一类非常重要的活性成分。黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-环与B-环）通过中央的三个碳原子相互连结而成的一系列化合物。黄酮类化合物在自然界中广泛存在并具有多种生物活性，它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的全阶段溢出，这种阻止氧化的能力是维生素E的十倍以上，可以阻止细胞的退化、衰老，也可防止癌症的发生。黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，向天果中的黄酮还含有一种PAF抗凝因子，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。目前国内外对该领域的研究十分活跃；无论是天然存在的，还是人工合成得到的黄酮类化合物，都引起了化学家的广泛关注。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种黄酮类化合物；第二目的在于提供该黄酮类化合物的制备方法；第三目的在于所述黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述化合物是从玫瑰花中分离得到，其分子式为C₂₀H₁₈O₇，具有下述结构：

该化合物为黄色胶状物，化学名称为4′-羟基-6,7,3′-三甲氧基-8-乙酰基-黄酮（8-acetyl-4′-hydroxy-6,7,3′-trimethoxy-flavone）。

本发明的第二目的是这样实现的，所述黄酮类化合物的制备方法是以玫瑰花为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、石油醚-乙酸乙酯柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为：

A、浸膏提取：取玫瑰花，粉碎至20~40目，用90~99%乙醇超声提取3~5次，每次30~60min，合并提取液、过滤，减压浓缩成浸膏；

B、硅胶柱层析：浸膏用重量比5~8倍量的80~200目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析；以体积配比为20:1~1:1的氯仿-甲醇溶液进行梯度洗脱，合并相同的部分，收集各部分洗脱液并浓缩；

C、石油醚-乙酸乙酯柱层析：B步骤洗脱液的9:1部分用体积配比为9:1~0:1的石油醚-乙酸乙酯溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩；

D、高压液相色谱分离：C步骤洗脱液的7:3部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得所述的黄酮类化合物。

以上述方法制备的色烷酮类化合物的结构是通过以下方法测定出来的：

本发明所述黄酮类化合物为黄色胶状物，紫外光谱 (溶剂为甲醇), λ_max (logε) 370 (4.05), 285 (3.80) , 258 (4.28), 210 (4.68) nm；红外光谱 (溴化钾压片)ν_max 3465, 1698, 1659, 1618, 1531, 1480, 1453, 1120, 1096, 942, 877 cm^-1；高分辨质谱(HRESIMS)给出准分子离子峰m/z 393.0957 [M+Na]⁺ (计算值393.0950)。结合 ¹H 和¹³C NMR谱给出一个分子式C₂₀H₁₈O₇，不饱和度为12。从 ¹H和 ¹³CNMR谱(图-1和图-2，数据归属见表-1) 信号可以看出化合物中除黄酮母体(δ _C 164.8 s、105.1 d、179.2 s、122.0 d、146.6 s、158.2 s、113.8 s、150.8 s、120.1 s、123.0 s、112.0 d、148.2 s、149.2 s、116.3 d、119.3 d) 外，还有1个乙酰基(δ _C 200.1 s、28.6 q；δ _H 2.54 s)、3个甲氧基(δ _C 56.0 q、61.1 q、55.8 q；δ _C 3.76 s、3.81 s、3.84 s)和1个酚羟基 (δ _H 11.10 brs) 信号。通过甲氧基氢信号d _H 3.84 和C-3'(d _C 148.2)， d _H 3.76 和 C-6 (d _C 146.6), 以及d _H 3.81 和C-7 (d _C 158.2)的HMBC相关（图3），可推断3个甲氧基分别取代在C-3'、C-6、C-7位。而甲基氢信号d _H 2.54和C-8 (d _C 113.8) 的HMBC相关则说明乙酰基取代在C-8位。HMBC谱中羟基氢信号d _H 11.10 和C-3' (d _C 148.2), C-4' (d _C 149.2), C-5' (d _C 116.3)的相关说明酚羟基取代在 C-4'位。至此化合物的结构得到确认，该化合物被命名为4′-羟基-6,7,3′-三甲氧基-8-乙酰基-黄酮。

表-1 化合物的¹H NMR and¹³C NMR 数据(溶剂为吡啶)

No.	d_C (m)	d _H (m, J, Hz)
			2	164.8 s
3	105.1 d	6.60 s
			4	179.2 s
5	122.0 d	7.40 s
			6	146.6 s
7	158.2 s
			8	113.8 s
9	150.8 s
			10	120.1 s
1￠	123.0 s
			2￠	112.0 d	7.28 overlap
3￠	148.2 s
			4￠	149.2 s
5￠	116.3 d	7.03 d (8.0)
			6￠	119.3 d	7.28 overlap
1￠￠	200.1 s
			2￠￠	28.6 q	2.54 s
6-OMe	56.0 q	3.76 s
			7-OMe	61.1 q	3.81 s
3￠-OMe	55.8 q	3.84 s
			4￠-OH		11.10 brs

本发明的第三目的是这样实现的，即将所述黄酮类化合物应用于抗肿瘤药物的制备。

本发明黄酮类化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和质谱测定方法确定了为黄酮类化合物，并表征了其具体结构。经抗细胞毒活性检测试验，证明该黄酮类化合物对白血病细胞(NB4) 的IC₅₀值为0.84 μM、对肺癌细胞(A549) 的IC₅₀值为1.8 μM、对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y) 的IC₅₀值为5.1 μM、对前列腺癌细胞(PC3) 的IC₅₀值为6.0 μM、对乳腺腺癌细胞(MCF7) 的IC₅₀值为1.5 μM。化合物对NB4、A549、MCF7细胞具有很好的细胞毒活性，对测试的SHSY5Y、PC3细胞也具有较好的活性。本发明化合物结构简单，人工合成容易实现，化合物的活性好；可作为抗肿瘤药物的先导性化合物。

附图说明

图1为本发明黄酮类化合物的核磁共振氢谱（¹H NMR）图；

图2为本发明黄酮类化合物的核磁共振碳谱（¹³C NMR）图；

图3为本发明黄酮类化合物的主要HMBC相关图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。

本发明所述黄酮类化合物，是从玫瑰花中分离得到，其分子式为C₂₀H₁₈O₇，具有下述结构：

本发明所述的黄酮类化合物的制备方法，是以玫瑰花为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、石油醚-乙酸乙酯柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为：

所述A步骤中的乙醇浓度为94~96%。

所述B步骤中浸膏在经硅胶柱层析粗分前，用重量比1.5~3倍量的纯甲醇溶解后用重量比0.8~1.2倍80~100目硅胶硅胶拌样。

所述B步骤中氯仿-甲醇溶液体积配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5。

所述C步骤中石油醚-乙酸乙酯溶液体积配比为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、0:1。

所述D步骤中高压液相色谱分离纯化是采用20 mm × 250 mm，5μm 的C₁₈色谱柱，流速为10~20mL/min，流动相为30~46%的甲醇，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样190~210 μL，收集19.2~ 36.4 min的色谱峰，多次累加后蒸干。

所述D步骤中高压液相色谱法分离纯化后的物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用凝胶柱层析分离，以进一步分离纯化。

所述的凝胶柱层析使用的是Sephadex LH-20 凝胶柱。

本发明所述黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明玫瑰不受地区和品种限制，均可以实现本发明，下面以来源于云南呈贡的玫瑰对本发明做进一步说明。

实施例1

取玫瑰花样3 kg粉碎到40目，以浓度为99%的乙醇用超声提取5次，每次60分钟，提取液合并、过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏310g。浸膏用重量比3倍的纯甲醇溶解后用248g的100目粗硅胶拌样，2.48kg的 200目硅胶装柱进行硅胶柱层析。用体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到6个部分；洗脱液的9:1部分进一步用石油醚-乙酸乙酯柱层，分别按9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、0:1的体积配比，进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液并浓缩；洗脱液的7:3部分用安捷仑1100半制备高压液相色谱分离，以30％的甲醇为流动相，采用20 mm × 250 mm，5μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为10 mL/min，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样190 μL，收集36.4 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即可得该黄酮类化合物。

实施例2

取玫瑰花样5 kg粉碎到20目，以浓度为90%的乙醇用超声提取3次，每次30分钟，提取液合并、过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏540 g。浸膏用重量比1.5倍的纯甲醇溶解后用648 g的80目粗硅胶拌样， 2.7 kg的 80目硅胶装柱进行硅胶柱层析。用体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到6个部分；洗脱液的9:1部分进一步用石油醚-乙酸乙酯柱层，分别按9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、0:1的体积配比，进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液并浓缩；洗脱液的7:3部分用安捷仑1100半制备高压液相色谱分离，以46％的甲醇为流动相，采用20 mm × 250 mm，5μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为20 mL/min，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样210 μL，收集19.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即可得该黄酮类化合物。

实施例3

取玫瑰花样4 kg粉碎到40目，以浓度为94%的乙醇用超声提取4次，每次45分钟，提取液合并、过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏430 g。浸膏用重量比3倍的纯甲醇溶解后用473g的90目粗硅胶拌样，2.58Kg的 100目硅胶装柱进行硅胶柱层析。用体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到6个部分；洗脱液的9:1部分进一步用石油醚-乙酸乙酯柱层，分别按9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、0:1的体积配比，进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液并浓缩；洗脱液的7:3部分用安捷仑1100半制备高压液相色谱分离，以38％的甲醇为流动相，采用20 mm × 250 mm，5μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为10~20 mL/min，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样190~210 μL，收集28.5 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即可得该黄酮类化合物。

实施例4

取玫瑰花样3.7 kg粉碎到40目，以浓度为95%的乙醇用超声提取4次，每次40分钟，提取液合并、过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏388g。浸膏用重量比2倍的纯甲醇溶解后用400 g的100目粗硅胶拌样，2.72 kg的 120目硅胶装柱进行硅胶柱层析。用体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到6个部分；洗脱液的9:1部分进一步用石油醚-乙酸乙酯柱层，分别按9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、0:1的体积配比，进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液并浓缩；洗脱液的7:3部分用安捷仑1100半制备高压液相色谱分离，以40％的甲醇为流动相，采用20 mm × 250 mm，5μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为15 mL/min，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样200 μL，收集30.1 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即可得该黄酮类化合物。

实施例5

取玫瑰花样4.3 kg粉碎到20～40目，以浓度为96%的乙醇用超声提取4次，每次50分钟，提取液合并、过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏458 g。浸膏用重量比3倍的纯甲醇溶解后用535g的100目粗硅胶拌样，3.664 kg的 180目硅胶装柱进行硅胶柱层析。用体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到6个部分；洗脱液的9:1部分进一步用石油醚-乙酸乙酯柱层，分别按9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、0:1的体积配比，进行梯度洗脱，收集各个部分洗脱液并浓缩；洗脱液的7:3部分用安捷仑1100半制备高压液相色谱分离，以38％的甲醇为流动相，采用20 mm × 250 mm，5μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为12 mL/min，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样200 μL，收集28.5 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即可得该黄酮类化合物。

实施例6

取实施例1制备的化合物，为黄色胶状物。

测定方法为：用核磁共振，结合其它波谱技术鉴定结构。

1）紫外光谱（溶剂为甲醇），_max（log）370（4.05），285（3.80），258（4.28），210（4.68）nm；

2）红外光谱（溴化钾压片）_max3465，1698，1659，1618，1531，1480，1453，1120，1096，942，877cm^-1；

3）高分辨质谱（HRESIMS）给出准分子离子峰m/z 393.0957[M+Na]⁺（计算值393.0950）。

结合¹H和¹³CNMR谱给出一个分子式C₂₀H₁₈O₇，不饱和度为12。从¹H和¹³CNMR谱（见图1、2，数据归属见表1）信号可以看出该化合物中含20个碳和18个氢，除黄酮母体（δ _C 164.8s、105.1d、179.2s、122.0d、146.6s、158.2s、113.8s、150.8s、120.1s、123.0s、112.0d、148.2s、149.2s、116.3d、119.3d）外，还有1个乙酰基（δ _C 200.1s、28.6q；δ _H 2.54s）、3个甲氧基（δ _C 56.0q、61.1q、55.8q；δ _C 3.76s、3.81s、3.84s）和1个酚羟基（δ _H 11.10brs）信号。通过甲氧基氢信号d _H 3.84 和C-3'(d _C 148.2)， d _H 3.76 和 C-6 (d _C 146.6), 以及d _H 3.81 和C-7 (d _C 158.2)的HMBC相关（图3），可推断3个甲氧基分别取代在C-3'、C-6、C-7位。而甲基氢信号d _H 2.54和C-8 (d _C 113.8) 的HMBC相关则说明乙酰基取代在C-8位。HMBC谱中羟基氢信号d _H 11.10 和C-3' (d _C 148.2), C-4' (d _C 149.2), C-5' (d _C 116.3)的相关说明酚羟基取代在 C-4'位。至此化合物的结构得到确认，该化合物被命名为4′-羟基-6,7,3′-三甲氧基-8-乙酰基-黄酮。

实施例7

取实施例2制备的化合物，为黄色胶状物。测定方法与实施例6相同，确认实施例2制备的化合物为所述的黄酮类化合物——4′-羟基-6,7,3′-三甲氧基-8-乙酰基-黄酮。

实施例8

取实施例3制备的化合物，为黄色胶状物。测定方法与实施例6相同，确认实施例3制备的化合物为所述的黄酮类化合物——4′-羟基-6,7,3′-三甲氧基-8-乙酰基-黄酮。

实施例9

取实施例4制备的化合物，为黄色胶状物。测定方法与实施例6相同，确认实施例4制备的化合物为所述的黄酮类化合物——4′-羟基-6,7,3′-三甲氧基-8-乙酰基-黄酮。

实施例10

取实施例5制备的化合物，为黄色胶状物。测定方法与实施例6相同，确认实施例5制备的化合物为所述的黄酮类化合物——4′-羟基-6,7,3′-三甲氧基-8-乙酰基-黄酮。

实施例11

取实施例1~5制备的黄酮类化合物进行细胞毒活性检测试验，试验情况如下：

癌细胞株：白血病细胞（NB4）、肺癌细胞（A549）、人神经母细胞瘤细胞（SHSY5Y）、前列腺癌细胞（PC3）、乳腺癌细胞（MCF7）均由中国科学院上海药物研究所提供。

试验设计：将上述癌细胞株与不同浓度化合物温育72h，每株细胞的试验均重复一次，用两次试验的结果进行数据处理，采用改良MTT法及SRB法评价化合物对细胞增殖的抑制程度，计算抑制率，根据抑制率采用Logit方法计算IC₅₀，比较化合物的体外抗肿瘤活性。

细胞的增殖抑制率=（空白对照OD值-加药孔的OD值）/空白对照OD值×100%。

（a）改良MTT法

取处于对数生长期的悬浮细胞，将细胞浓度调整为4×10⁴/ml，加入96 孔培养板，90μL/孔。阳性对照为顺铂，用生理盐水溶解。每孔分别加入10μl 不同浓度的样品（1号试液~5号试液）。加样组及对照组均设4 个复孔，加样组、阳性对照组的高浓度组还设培养基的加药平行孔，每块板均设有4 个空白对照孔（仅加培养基）。样品的终浓度分别为10^-2、10^-1、1、10及10²μg/mL，相应DMSO的终浓度分别为0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。样品在终浓度10²μg/mL时，用0.1% DMSO作为溶剂对照，其余浓度均用生理盐水作阴性对照。阳性对照药顺铂的终浓度为10^-1、1、10μg/mL。细胞在37℃，5% CO₂ 培养箱中分别孵育48h后，加入MTT（5 mg/ml， Sigma），10μL/孔。继续培养4 h后，加入三联液 [10% SDS–5%异丁醇–0.012mol/L HCL（w/v/v）]，100μL/孔，放置过夜后用酶标仪在570 nm、630 nm双波长下测定各孔的OD值。

（b）SRB法

取处于对数生长期的贴壁细胞株，用25%胰酶常规消化后，再用15%小牛血清完全RPMI-1640培养基将细胞浓度调整为5×10⁴/mL，加入96 孔培养板， 90μL/孔。细胞在37℃，5% CO₂培养箱中分别孵育24h后加入阳性对照、阴性对照以及受试样品的各受试浓度同上MTT 法（10 μL/孔），样品的终浓度分别为10^-2、10^-1、1、10、10²μg/mL，相应DMSO的终浓度分别为0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。样品在终浓度10²μg/mL时用0.1%DMSO作为溶剂对照，其余浓度均用生理盐水作阴性对照。阳性对照药顺铂的终浓度为10^-1、1、10μg/mL，阴性对照为等体积的生理盐水。加样组及对照组均设4复孔，加样组、阳性对照组的高浓度组还设培养基的加药平行孔，每块板均设有4个空白对照孔（仅加培养基）。将96 孔培养板置于37℃，5% CO₂ 培养箱中孵育（细胞与样品作用）48h 后，加入4℃、50%的TCA（三氯乙酸）50μL/孔。加完TCA后，将96孔培养板置于4℃孵育1h，取出培养板，轻轻倾去板内液体。用自来水轻轻冲洗5遍（将自来水由烧杯中轻轻倒入板中，轻晃后再将水倒去），置于空气中风干至不见水痕。然后加入配制好的0.4% SRB（用1%乙酸稀释）， 50μL/孔，于室温下静置染色30分钟后倾去SRB溶液，用1%乙酸冲洗4遍，以除去未与蛋白质结合的染料。置于空气中风干至无水痕后，加入10 mM 未缓冲Tris（缓血氨酸）溶液150μL/孔（PH10，用三蒸水配制），将染料溶解后，于振荡器上振荡5分钟，用酶标仪在570nm波长下读取各孔OD值。

（c）试验结果

试验结果表明：进行5次测试取平均值，本发明黄酮类化合物对白血病细胞（NB4）的IC₅₀值为0.84μM、对肺癌细胞（A549）的IC₅₀值为1.8μM、对人神经母细胞瘤细胞（SHSY5Y）的IC₅₀值为5.1μM、对前列腺癌细胞（PC3）的IC₅₀值为6.0μM、对乳腺腺癌细胞（MCF7）的IC₅₀值为1.5μM。化合物对NB4、A549、MCF7细胞具有很好的细胞毒活性，对测试的SHSY5Y、PC3细胞也具有较好的活性。

Claims

1.一种黄酮类化合物的制备方法，所述化合物是从玫瑰花中分离得到，其分子式为C₂₀H₁₈O₇，具有下述结构：

；其特征在于以玫瑰花为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、石油醚-乙酸乙酯柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为：

D、高压液相色谱分离：C步骤洗脱液的7:3部分进一步用高压液相色谱分离纯化；高压液相色谱法分离纯化后的物质再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，以进一步分离纯化后即得所述的黄酮类化合物。

2.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述A步骤中的乙醇浓度为94~96%。

3.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述B步骤中浸膏在经硅胶柱层析粗分前，用重量比1.5~3倍量的纯甲醇溶解后用重量比0.8~1.2倍80~100目硅胶拌样。

4.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述B步骤中氯仿-甲醇溶液体积配比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5。

5.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述C步骤中石油醚-乙酸乙酯溶液体积配比为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、0:1。

6.根据权利要求1所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于所述D步骤中高压液相色谱分离纯化是采用20 mm × 250 mm，5μm 的C₁₈色谱柱，流速为10~20mL/min，流动相为30~46%的甲醇，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样190~210 μL，收集19.2~ 36.4min的色谱峰，多次累加后蒸干。