CN103232427B

CN103232427B - 一种呫吨酮类化合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN103232427B
Application number: CN201310147495.6A
Authority: CN
Inventors: 高雪梅; 黄相忠; 胡秋芬; 李银科; 叶艳清; 杜刚
Original assignee: Yunnan Minzu University
Current assignee: Yunnan Minzu University
Priority date: 2013-04-25
Filing date: 2013-04-25
Publication date: 2014-10-08
Anticipated expiration: 2033-04-25
Also published as: CN103232427A

Abstract

本发明公开了一种呫吨酮类化合物及其制备方法和应用，所述的呫吨酮类化合物其结构式为：；所述的R为-OH，其分子式为C₁₇H₁₄O₇，该化合物命名为bracthoneA。所述的R为-OMe，其分子式为C₁₈H₁₆O₇，该化合物命名为bracthoneB。所述制备方法是以干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤。所述的应用为呫吨酮类化合物在制备抗癌药物中的应用。经细胞毒活性实验，bracthoneA对NB4,A549和PC3细胞株具有较好的细胞毒活性；bracthoneB对NB4,SHSY5Y,PC3和MCF7细胞株具有较好的细胞毒活性。本发明化合物结构简单活性好，可作为抗癌药物的先导性化合物，有良好的应用前景。

Description

一种呫吨酮类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种呫吨酮类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

藤黄属(Garcinia L.)植物全球约450种，产亚洲、非洲南部及波利尼西亚西部，我国有21种，分布于广东、广西、云南等南部省区。研究表明，藤黄属植物富含异戊烯基取代的呫吨酮，这类成分结构新颖多样，且具有广泛的药理活性，尤以藤黄酸(gambogic acid)最具代表性，具有广谱强效的抗肿瘤活性，是近年来抗肿瘤天然产物的研究热点之一，我国学者正在开发其注射液为抗肿瘤一类新药。除呫吨酮外，苯甲酮类(benzophenones)和双黄酮类(bioflavonoids)等化合物也是本属植物的特征性成分，也具有多种生物活性。为了更有效地利用我国藤黄属植物资源，从中寻找具有开发前景的抗癌活性成分，我们选择对藤黄属植物大苞藤黄开展较系统的活性成分研究工作。大苞藤黄属于藤黄科藤黄属的乔木，分布于云南和广西两省海拔400–1300m的林中。本发明从大苞藤黄中分离得到两个新的呫吨酮类化合物，这两个化合物具有显著的细胞毒活性。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种呫吨酮类化合物；第二目的在于提供所述呫吨酮类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述呫吨酮类化合物在制备抗癌药物中的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述的呫吨酮类化合物是以干燥的藤黄属乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，其结构式为：

所述的R为-OH，其分子式为C₁₇H₁₄O₇，该化合物命名为bracthone A。

所述的R为-OMe，其分子式为C₁₈H₁₆O₇，该化合物命名为bracthone B。

本发明的第二目的是这样实现的，所述的呫吨酮类化合物的制备方法，是以干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：

A、浸膏提取：将藤黄属乔木枝条、叶或果实粗粉碎到20~40目，用有机溶剂超声提取2~4次，每次30~60min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4 ~ 1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3~5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b；

C、硅胶柱层析：将浸膏b用重量比1.5~3倍量的丙酮溶解，然后用浸膏重0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏b重量6~8倍量；用体积比为1:0~0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

D、反相柱层析：将以20:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料C-18装柱；用体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的呫吨酮类化合物；

F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以70~90%的甲醇为流动相，流速10~14ml/min，21.2′ 250 mm，5mm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样45~60mL，收集20~35min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A；

G、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以70~90%的甲醇为流动相，流速10~14ml/min，21.2′ 250 mm，5mm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样45~60mL，收集35~50min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone B。

本发明的第三目的是这样实现的，所述的呫吨酮类化合物在制备抗癌药物中的应用。

本发明呫吨酮类化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和质谱测定方法确定为呫吨酮类化合物，并表征其具体结构为：

其异构体化合物bracthone A、bracthone B能通过本发明的方法分离出来。以bracthone A、bracthone B为原料，经对白血病急性早幼粒NB4细胞、肺腺癌A549细胞、人骨髓神经母细胞瘤SHSY5Y细胞、人前列腺癌PC3细胞、人乳腺癌MCF7细胞的细胞毒活性实验，bracthone A对NB4, A549和PC3细胞株具有较好的细胞毒活性，IC₅₀值分别达7.64、5.47、3.24 μM；bracthone B对NB4, SHSY5Y, PC3 和MCF7细胞株具有较好的细胞毒活性，IC₅₀值分别达5.47、4.26、2.15、7.68 μM。本发明化合物结构简单活性好，可作为抗癌药物的先导性化合物，有良好的应用前景。

附图说明

图1为化合物bracthone A的核磁共振碳谱（¹³C NMR）；

图2为化合物bracthone A的核磁共振氢谱（¹H NMR）；

图3为化合物bracthone B的核磁共振碳谱（¹³C NMR）；

图4为化合物bracthone B的核磁共振氢谱（¹H NMR）；

图5化合物bracthone B的主要HMBC（→）和¹H-¹H COSY（–）相关。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。

本发明所述的呫吨酮类化合物是以干燥的藤黄属乔木的枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，其结构式为：

本发明所述的呫吨酮类化合物的制备方法，是以干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：

A步骤所述的有机溶剂为70~100%的丙酮、乙醇或甲醇。

B步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。

C步骤所述的混合有机溶剂为正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯。

C步骤所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1。

E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以70~90%的甲醇为流动相，流速10~14ml/min，21.2′ 250 mm，5mm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样45~60mL，收集20~50min的色谱峰，多次累加后蒸干。

本发明所述的呫吨酮类化合物在制备抗癌药物中的应用。

本发明所述的藤黄属植物不受地区和品种限制，均可以实现本发明。

实施例1

取干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实4.5kg，粗粉碎至40目，用70%的丙酮超声提取4次，每次60min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的1/4；静置，滤除沉淀物，浓缩成458g浸膏a；在浸膏a中加入458g水，用与水等体积的氯仿萃取5次，合并萃取相，减压浓缩成236g浸膏b；用200目硅胶1888g装柱，在浸膏b中加入708g的丙酮溶解，然后加入100目硅胶188.8g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的氯仿-甲醇混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到8个部分，体积比20:1的氯仿-甲醇混合有机溶剂的洗脱液c为78g；用反相材料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以75%的甲醇为流动相，流速10ml/min，21.2′250mm，5mm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样48mL，收集32min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A；收集45min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone B。

实施例2

取干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实5kg，粗粉碎至20目，用100%的乙醇超声提取2次，每次50min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的1/3；静置，滤除沉淀物，浓缩成503g浸膏a；在浸膏a中加入503g的水，用与水等体积的氯仿萃取3次，合并萃取相，减压浓缩成269g浸膏b；用160目硅胶2152g装柱，在浸膏b中加入807g的丙酮溶解，然后加入80目硅胶215.2 g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的正己烷-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用反相材料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以80%的甲醇为流动相，流速14ml/min，21.2′250mm，5mm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样45mL，收集27min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A；收集45min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone B。

实施例3

取干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实6kg，粗粉碎至30目，用80%的甲醇超声提取4次，每次30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的1/2；静置，滤除沉淀物，浓缩成612g浸膏a；在浸膏a中加入1224g的水，用与水等体积的乙醚萃取4次，合并萃取相，减压浓缩成354g浸膏b；用180目硅胶2478g装柱，在浸膏b中加入704g的丙酮溶解，然后加入90目硅胶 424.8g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的氯仿-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用反相材料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以85%的甲醇为流动相，流速12ml/min，21.2′250mm，5mm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50mL，收集23min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A；收集40min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone B。

实施例4

取干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实5.5kg，粗粉碎至40目，用90%的乙醇超声提取3次，每次45min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的1/4；静置，滤除沉淀物，浓缩成548g浸膏a；在浸膏a中加入822g的水，用与水等体积的石油醚萃取4次，合并萃取相，减压浓缩成275g浸膏b；用160目硅胶1650g装柱，在浸膏b中加入412.5g的丙酮溶解，然后加入80目硅胶275g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的石油醚-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用反相材料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以90%的甲醇为流动相，流速10ml/min，21.2′250mm，5mm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，收集20min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A；收集35min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone B。

实施例5

取干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实5kg，粗粉碎至20目，用70%的甲醇超声提取4次，每次35min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的1/2；静置，滤除沉淀物，浓缩成523g浸膏a；在浸膏a中加入1046g的水，用与水等体积的苯萃取5次，合并萃取相，减压浓缩成246g浸膏b；用200目硅胶1722g装柱，在浸膏b中加入738g的丙酮溶解，然后加入100目硅胶196.8g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的石油醚-乙酸乙酯混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；用反相材料C-18装柱，洗脱液c上反相柱，以体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；取以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以70%的甲醇为流动相，流速12ml/min，21.2′250mm，5mm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，收集35min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A；收集50min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone B。

实施例6

取实施例1制备的化合物bracthone A，为黄色胶状物；测定方法为：用核磁共振，结合其它波谱技术鉴定结构。

（1）紫外光谱（溶剂为甲醇），λ _max（log ε）：210 (4.22), 240 (3.22), 305 (3.87) nm；

（2）红外光谱（溴化钾压片）ν _max 3428, 3080, 2916, 2873, 1728, 1653, 1597, 1542, 1463, 1379, 1122, 1069, 873, 722 cm^–1；

（3）HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰m/z 353.0642 [M+Na]⁺（计算值为353.0637），结合¹³C 和¹H NMR谱（图1和图2，碳谱氢谱数据归属见表1）给出其分子式为C₁₇H₁₄O₇。¹H NMR（C₅D₅N，500 MHz）和¹³C NMR（C₅D₅N，125 MHz）数据，见表1。

Bracthone A 的¹H NMR谱(图2) 显示两个羟基、两个邻位芳香氢、两个间位芳香氢以及两个亚甲基氢。这些信号可归属为一个基本的呫吨酮骨架和一个乙醇基。HMBC谱中乙醇基的亚甲基信号(H₂-12，d _H2.50) 与两个芳环次甲基碳(C-2, d _C 110.7; C-4, d _C 107.9)和一个芳环季碳(C-3, d _C 144.1)相关，这说明乙醇基取代在C-3位。HSQC谱中邻位芳环氢(H-7, d _H 7.61) 与 C-7相关说明苯环的C-7位无取代。因此，另一个邻位芳环氢d _H 7.45可归属在C-6位。H-7 与C-11 (d _C 168.2)和C-8 (d _C127.0)的HMBC相关说明甲酯基取代在C-8位。因此，化合物1的结构确定为1,5-dihydroxy-3-ethanol-8-methoxycarbonyl-xanthone,命名为bracthone A.

实施例7

取实施例1制备的化合物bracthone B，为黄色胶状物；测定方法为：用核磁共振，结合其它波谱技术鉴定结构。

（1）紫外光谱（溶剂为甲醇），λ _max（logε）: 210 (4.31), 243 (3.31), 309 (3.94) nm；

（2）红外光谱（溴化钾压片），ν_max 3426, 3083, 2910, 2876, 1726, 1650, 1595, 1546, 1460, 1381, 1118, 1076, 885, 718 cm^-1；

（3）HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰m/z 367.0790 [M+Na]⁺ （计算值为367.0794），结合¹³C 和¹H NMR谱（图3和图4，碳谱数据归属见表1）给出其分子式C₁₈H₁₆O₇。¹H NMR（C₅D₅N，500 MHz） ¹³C NMR（C₅D₅N，125 MHz）数据，见表1。

Bracthone B的¹H和¹³C NMR谱和bracthone A的非常相似。通过对比发现这两个化合物的区别在于C-1位上的取代不同。Bracthone B的HMBC谱中甲氧基信号（δ _H 3.80）与C-1（δ _C 162.9）相关说明1个甲氧基取代在C-1，而bracthone A的C-1取代是羟基。这说明bracthone B是bracthone A的1-O-methyl衍生物。至此该化合物的结构得到确定。

表1 化合物的¹H和¹³C NMR数据（溶剂为C₅ND₅）(125 and 500 MHz)

实施例8

取实施例2制备的化合物bracthone A、bracthone B分别按实施例6、7中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例6、7，分子式分别为C₁₇H₁₄O₇和C₁₈H₁₆O₇。

实施例9

取实施例3制备的化合物bracthone A、bracthone B分别按实施例6、7中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例6、7，分子式分别为C₁₇H₁₄O₇和C₁₈H₁₆O₇。

实施例10

取实施例4制备的化合物bracthone A、bracthone B分别按实施例6、7中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例6、7，分子式分别为C₁₇H₁₄O₇和C₁₈H₁₆O₇。

实施例11

取实施例5制备的化合物bracthone A、bracthone B分别按实施例6、7中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例6、7，分子式分别为C₁₇H₁₄O₇和C₁₈H₁₆O₇。

实施例12

取实施例1~5所制备的任一呫吨酮类化合物进行细胞毒活性检测试验，试验情况如下：

细胞株: 白血病细胞(NB4)、肺癌细胞(A549)、人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)、前列腺癌细胞(PC3)、乳腺癌细胞(MCF7) 均由中国科学院上海药物研究所提供。

实验设计: 以上细胞与不同浓度化合物温育72小时, 每株细胞的实验均重复一次, 用两次实验的结果进行数据处理, 采用改良MTT 法及SRB 法评价化合物对细胞增殖的抑制程度, 计算抑制率, 根据抑制率采用Logit方法计算IC₅₀, 比较化合物的体外抗肿瘤活性。

细胞的增殖抑制率 = (空白对照OD值-加药孔的OD值) /空白对照OD值×100%。

改良MTT 法

取处于对数生长期的悬浮细胞, 将细胞浓度调整为4×10⁴/ml, 加入96 孔培养板, 90 μL/孔。阳性对照为顺铂, 用生理盐水溶解。每孔分别加入10μl 不同浓度的样品(1号试液-5号试液)。加样组及对照组均设4 个复孔, 加样组、阳性对照组的高浓度组还设培养基的加药平行孔, 每块板均设有4 个空白对照孔 (仅加培养基)。样品的终浓度分别为10^-2、10^-1、1、10 及10² μg/mL, 相应DMSO的终浓度分别为0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。样品在终浓度10² μg/mL时, 用0.1% DMSO作为溶剂对照, 其余浓度均用生理盐水作阴性对照。阳性对照药顺铂的终浓度为10^-1、1、10 μg/mL。细胞在37℃, 5% CO₂ 培养箱中分别孵育48h 后, 加入MTT (5 mg/ml, Sigma), 10 μL/孔。继续培养4 h后, 加入三联液 [10% SDS – 5%异丁醇 – 0.012mol/L HCL (w/v/v)], 100 μL/孔, 放置过夜后用酶标仪在570 nm、630 nm双波长下测定各孔的OD 值。

取处于对数生长期的贴壁细胞株, 用25%胰酶常规消化后, 再用15%小牛血清完全RPMI-1640培养基将细胞浓度调整为5×10⁴/mL, 加入96 孔培养板, 90 μL/孔。细胞在37℃, 5% CO₂培养箱中分别孵育24h 后加入阳性对照、阴性对照以及受试样品(各受试浓度同上MTT 法，10 μL/孔)，样品的终浓度分别为10^-2、10^-1、1、10、10² μg/mL, 相应DMSO 的终浓度分别为0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%。样品在终浓度10² μg/mL时用0.1%DMSO 作为溶剂对照, 其余浓度均用生理盐水作阴性对照。阳性对照药顺铂的终浓度为10^-1、1、10 μg/mL, 阴性对照为等体积的生理盐水。加样组及对照组均设4复孔, 加样组、阳性对照组的高浓度组还设培养基的加药平行孔, 每块板均设有4个空白对照孔 (仅加培养基)。将96 孔培养板置于37℃, 5% CO₂ 培养箱中孵育 (细胞与样品作用) 48h 后, 加入4℃、50%的TCA (三氯乙酸) 50 μL/孔。加完TCA后, 将96 孔培养板置于4℃孵育1小时, 取出培养板, 轻轻倾去板内液体。用自来水轻轻冲洗5遍 (将自来水由烧杯中轻轻倒入板中, 轻晃后再将水倒去), 置于空气中风干至不见水痕。然后加入配制好的0.4% SRB (用1%乙酸稀释), 50 μL/孔, 于室温下静置染色30分钟后倾去SRB 溶液, 用1%乙酸冲洗4遍, 以除去未与蛋白质结合的染料。置于空气中风干至无水痕后, 加入10 mM 未缓冲Tris (缓血氨酸) 溶液150 μL/孔 (PH10, 用三蒸水配制), 将染料溶解后, 于振荡器上振荡5分钟, 用酶标仪在570nm 波长下读取各孔OD 值。

实验结果

实验结果表明：经对白血病急性早幼粒NB4细胞、肺腺癌A549细胞、人骨髓神经母细胞瘤SHSY5Y细胞、人前列腺癌PC3细胞、人乳腺癌MCF7细胞的细胞毒活性实验，bracthone A对NB4, A549和PC3细胞株具有较好的细胞毒活性，IC₅₀值分别达7.64、5.47、3.24 μM；bracthone B对NB4, SHSY5Y, PC3 和MCF7细胞株具有较好的细胞毒活性，IC₅₀值分别达5.47、4.26、2.15、7.68 μM。

表2 化合物的细胞毒活性

Claims

1.一种呫吨酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的呫吨酮类化合物结构式为：

；R为-OH，其分子式为C₁₇H₁₄O₇，该化合物命名为bracthone A； R为-OMe，其分子式为C₁₈H₁₆O₇，该化合物命名为bracthone B；是以干燥的藤黄属乔木枝条、叶和/或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：

A、浸膏提取：将藤黄属乔木枝条、叶或果实粗粉碎到20~40目，用有机溶剂超声提取2~4次，每次30~60min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4~1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏a；该步骤所述的有机溶剂为70~100%的丙酮、乙醇或甲醇；

B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3~5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b；该步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯；

C、硅胶柱层析：将浸膏b用重量比1.5~3倍量的丙酮溶解，然后用浸膏重0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏b重量6~8倍量；用体积比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，所述的混合有机溶剂为正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将以体积含量70~95%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A和bracthone B；

F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以70~90%的甲醇为流动相，流速10~14ml/min，21.2×250mm、5μm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样45~60mL，收集20~35min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone A；

G、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以70~90%的甲醇为流动相，流速10~14ml/min，21.2×250mm、5μm 的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样45~60mL，收集35~50min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的呫吨酮类化合物bracthone B。