CN101002841A - 玫瑰花有效部位及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种玫瑰花有效部位及其制备方法和用途,该玫瑰花有效部位是干燥玫瑰花用含水乙醇回流提取后,经大孔吸附树脂分离和有机溶剂萃取的方法得到的有效部位。该有效部位用分光光度法测得总黄酮含量以无水芦丁(C27H30O16)计为80.2%-85.3%;经药理实验证明:能明显延长阈剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间,显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率;按常规制药方法将玫瑰花有效部位制成玫瑰花颗粒、玫瑰花胶囊、玫瑰花片、玫瑰花分散片,用作改善睡眠的保健品或者药品使用。本发明的提取和富集工艺操作简单,质量容易控制,安全无毒。
Description
技术领域
本发明涉及医药卫生、食品化工行业,具体地说是从玫瑰花中提取分离具有改善睡眠作用有效部位及制备方法和用途。
背景技术
玫瑰花(Rosa rugosa Thunb.)在全国各地皆有分布。新疆和田地处新疆南部沙漠边缘,日照时间长,昼夜温差大,所生长的玫瑰花肉厚、香味浓、留香持久,是当地农民发家致富的主种作物,种植面积已达万亩。Kezilguli是维吾尔医和维吾尔民间习用玫瑰花的名称,和田人以玫瑰花做长寿保健品历史悠久,玫瑰花已收载入中国药典2005年版一部和维吾尔药材标准上册,本品具有清热强心,消肿,润便,止血,润肤生辉,敛肤,止痛,定神等功能,用于肝炎、子宫炎、头痛、中耳炎、心力衰竭、心肌炎、心包炎、胃病、便秘等。
近年来世界的玫瑰花产业越来越兴旺发达,由玫瑰花提取的玫瑰精油被誉为“液体黄金”,是世界香料工业不可取代的原料,广泛用于高档化桩品、日化用品和食品和烟用香料的添加剂。国外已经注册了玫瑰花提取物的食品添加剂,日本HAKKO公司在第一届国际性健康保健食品配料展览会上力推出的玫瑰红粉,其抗细菌能力强,具有根除过敏性疾病的特殊功效,成为展会的一大亮点。
比起世界级研究水平,新疆玫瑰花系列产品一直处于传统、粗陋的生产状况,玫瑰花出口外省市场或国际市场,是用按季分批采收鲜花、及时低温干燥的方法来尽量保存其成分,这与新疆的玫瑰花产业、玫瑰花的独特品质与名气形成鲜明的对比差距。为此,本发明提取、分离具有改善睡眠的玫瑰花功效成分,寻找当地人用玫瑰花改善机体衰老、延年益寿的基础性物质,分离得到的数十个黄酮中有4个为首次从玫瑰花中得到。为使提取工艺臻于完备和可控,本发明对玫瑰花改善睡眠有效部位的有效成分进行归属,已指认出山萘酚、胡桃苷、黄芪苷、山萘酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(2→1)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和没食子酸,以玫瑰花单方用药在改善睡眠方面的应用还未见报道。
玫瑰花是维吾尔医常用药材,已经开发出两个国药准字号药:玫瑰花口服液和玫瑰花糖膏,具有补益支配器官(心、脑、肝)、舒心爽神,治疗心慌气短、肢瘫疼痛、神疲乏力,用于肝郁津滞引起的胁闷腹胀、胃痛、心烦、健忘、便秘和食少等。玫瑰花已经有了一些专利:徐春华等人发明的“芪莲瑰花茶饮及制备方法”公告号CN1410011;南开大学发明的“玫瑰花提取物及其应用”,公开专利号为CN1410111,其方法是用水提冷冻干燥,再经阳离子交换纤维素和葡聚糖凝胶层析柱纯化得到的玫瑰花提取物,含多糖、蛋白质、没食子酸衍生物等有效成分,占总提取物重量的30%;王福寿发明的“鲜玫瑰花饮料及其制造方法”,公开专利号为CN1192872;云南农业大学申请的题为“玫瑰花保健食品”(公开专利号CN1596734)。从已有的专利和查询的文献来看,把玫瑰花用于改善睡眠的方面还不见报道。
大孔吸附树脂是一种不含交换基团的、具有大孔结构的高分子吸附剂,也是一种亲脂性物质。大孔吸附树脂作为色谱填料具有选择性好、机械强度高、再生处理方便、吸附速度快、可大规模使用等优点,被广泛用于中草药化学成分特别是皂苷和黄酮的分离。
发明内容
本发明的目的是提供一种玫瑰花有效部位及其制备方法和用途,是将玫瑰花乙醇回流提取液,回收乙醇后经大孔吸附树脂分离和有机溶剂萃取的方法得到的有效部位。本发明的提取和富集工艺操作简单,质量容易控制,安全无毒,通过初步的体内药理实验,该有效部位具有促进睡眠和延长睡眠时间的作用。本发明的提取和富集工艺操作简单,质量容易控制,安全无毒。
本发明所述的一种用乙醇回流提取,经大孔吸附树脂分离和有机溶剂萃取的方法得到的玫瑰花有效部位,该有效部位含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计为80.2%—85.3%,其制备方法按下列步骤进行:
a、干燥玫瑰花加10倍量重量体积比50%—90%乙醇水浴加热,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、水洗脱得到的部位浓缩至适量后再用正丁醇或乙酸乙酯萃取,分取上层溶液,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后再用正丁醇或乙酸乙酯萃取,分取上层溶液,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位。
g、将玫瑰花有效部位按照常规制剂方法制成颗粒剂、胶囊、片剂和分散片。
玫瑰花有效部位的制备方法,按下列步骤进行:
a、干燥玫瑰花加10倍量重量体积比50%—90%乙醇水浴加热,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩后再用正丁醇或乙酸乙酯萃取, 分取上层溶液,减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用正丁醇或乙酸乙酯萃取,分取上层溶液,减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将50%乙醇洗脱部位减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位。
g、将玫瑰花有效部位按照常规制药方法制成颗粒剂、胶囊、片剂和分散片。
该有效部位含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计为80.2%—85.3%。
玫瑰花有效部位在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
本发明所述的玫瑰花有效部位,用分光光度法测定有效部位中总黄酮的含量:
对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品200mg,置100ml量瓶中,加甲醇70ml,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密吸取10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml
与6.0ml,分别置25ml量瓶中,各加水至6ml,加5%亚硝酸钠溶液1ml,使混匀,放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,在500nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。
测定法取本品粉末约1g,于60℃干燥6小时,精密称定,置100ml容量瓶中,加50ml甲醇超声15分钟,再加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取3ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6ml”起依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg),计算,即得。
测定结果:玫瑰花有效部位中含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计为80.2%—85.3%。
本发明所述的玫瑰花有效部位及其制备方法和用途,该有效部位用分光光度法测得总黄酮含量以无水芦丁(C27H30O16)计为80.2%—85.3%;经药理实验证明能明显延长阈剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间,显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率;该有效部位按常规方法可以制成玫瑰花颗粒、玫瑰花胶囊、玫瑰花片、玫瑰花分散片,可用作改善睡眠的保健品或者药品使用。
具体实施方式
实施例1
a、干燥玫瑰花100g,加1L80%乙醇,水浴加热90℃,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于D140型大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩后再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位;
g、将玫瑰花有效部位按照常规制药方法制成颗粒剂或胶囊或片剂或分散片,作为在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
实施例2
a、干燥玫瑰花100g,加1L70%乙醇,水浴加热100℃,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于X-5型大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩后,再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位;
g、将玫瑰花有效部位按照常规制药方法制成颗粒剂或胶囊或片剂或分散片,作为在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
实施例3
a、干燥玫瑰花100g,加1L 90%乙醇,水浴加热80℃,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上述上清液上样于AB-8型大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩后,再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位;
g、将玫瑰花有效部位按照常规制剂方法制成颗粒剂或胶囊或片剂或分散片,作为在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
实施例4
a、干燥玫瑰花100g,加1 L 60%乙醇,水浴加热100℃,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于D101型大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩后,再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用正丁醇萃取,分取正丁醇层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位;
g、将玫瑰花有效部位按照常规制药方法制成颗粒剂或胶囊或片剂或分散片,作为在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
实施例5
a、干燥玫瑰花100g,加1 L50%乙醇,水浴加热90℃,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于D140型大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩后,再用乙酸乙酯萃取,分取乙酸乙酯层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d将步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用乙酸乙酯萃取,分取乙酸乙酯层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位;
g、将玫瑰花有效部位按照常规制药方法制成颗粒剂或胶囊或片剂或分散片,作为在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
实施例6
a、干燥玫瑰花100g,加1 L80%乙醇,水浴加热90℃,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于D101型大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩后,再用乙酸乙酯萃取,分取乙酸乙酯层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用乙酸乙酯萃取,分取乙酸乙酯层,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位;
g、将玫瑰花有效部位按照常规制药方法制成颗粒剂或胶囊或片剂或分散片,作为在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
实施例7
玫瑰花有效部位在改善睡眠用途的体内药理实验:
1)延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验:选用体重16~20g雄性小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分为空白对照组和3个剂量组,即25.0、75.0、125.0mg/kg体重,用蒸馏水配成所需浓度。第7d灌胃15min后,给各组动物按40mg/kg体重剂量腹腔注射戊巴比妥钠,注射量为0.1ml/10g体重,以小鼠翻正反射消失为睡眠指标,观察受试物对戊巴比妥钠睡眠时间的延长作用。结果见表1。
表1延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验结果
注:*P<0.05
2)戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验:选用体重16~20g雄性小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分为溶剂对照组和3个剂量组,即25.0、75.0、125.0mg/kg体重,用蒸馏水配成所需浓度。第7天灌胃15min后,给各组动物按30.0mg/kg体重剂量腹腔注射戊巴比妥钠,注射量为0.1ml/10g体重,以小鼠翻正反射消失达1min以上作为入睡判断标准,观察给戊巴比妥钠30min内各组动物发生睡眠的数目。结果见表2。
表2戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验
组别 | 剂量(mg/kg) | 戊巴比妥钠(mg/kg) | 动物数(只) | 入眠动物数(只) | 睡眠发生率(%) |
对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 0.025.075.0125.0 | 30.030.030.030.0 | 10101010 | 2458 | 20405080* |
注:*P<0.05
结果:高剂量组能明显延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间及增加戊巴比妥钠诱导的睡眠发生率(P<0.05)。
Claims (4)
1、一种用乙醇回流提取,经大孔吸附树脂分离和有机溶剂萃取的方法得到的玫瑰花有效部位,其特征在于该有效部位含总黄酮以无水芦丁C27H30O16计为80.2%-85.3%,其制备方法按下列步骤进行:
a、干燥玫瑰花加10倍量重量体积比50%-90%乙醇水浴加热,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、水洗脱得到的部位浓缩至适量后再用正丁醇或乙酸乙酯萃取,分取上层溶液,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将步骤b中25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后再用正丁醇或乙酸乙酯萃取,分取上层溶液,减压浓缩、真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将步骤b中50%乙醇洗脱部位减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位。
g、将玫瑰花有效部位按照常规制剂方法制成颗粒剂、胶囊、片剂和分散片。
2、一种玫瑰花有效部位的制备方法,其特征在于按下列步骤进行:
a、干燥玫瑰花加10倍量重量体积比50%-90%乙醇水浴加热,回流提取2次,每次2小时,过滤,滤液减压浓缩至无醇味,静置24小时,倾出上清液;
b、取上清液上样于大孔吸附树脂层析柱,然后分别用水,25%乙醇,50%乙醇,95%乙醇依次洗脱;
c、将水洗脱得到的部位浓缩至适量后再用正丁醇或者乙酸乙酯萃取,分取上层溶液,减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr1备用;
d、将25%乙醇洗脱得到的部位回收乙醇后,再用正丁醇或乙酸乙酯萃取,分取上层溶液,减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr2备用;
e、将50%乙醇洗脱部位减压浓缩,真空干燥,得到组分Fr3备用;
f、将Fr1,Fr2,Fr3三个组分混合,粉碎,过80目筛,得玫瑰花有效部位。
g、将玫瑰花有效部位按照常规制药方法制成颗粒剂、胶囊、片剂和分散片。
3、根据权利要求2所述的玫瑰花有效位的制备方法,其特征在于该有效部位含总黄酮以无水芦丁C27H30O16计为80.2%-85.3%。
4、一种玫瑰花有效部位在制备治疗失眠的药物的用途或改善睡眠中的保健品的用途。
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