CN112546105B - 玫瑰花萃取物用于制备抗老化及抗氧化的组合物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物提取物领域，尤其是有关于一种玫瑰花萃取物用于制备抗老化及抗氧化的组合物的用途。本发明提供玫瑰花萃取物用于制备抗老化及抗氧化的组合物的用途，其中所述玫瑰花萃取物是以一溶剂萃取一玫瑰花所获得，所述溶剂为水、甘油、含水甘油或其组合。所述玫瑰花萃取物可通过提升细胞的线粒体活性、减少细胞的自由基生成及抑制黑色素生成，达到保护皮肤细胞，强力抗氧化及抗老化的功效，藉此维持肌肤年轻活力。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取物领域，尤其是有关于一种玫瑰花萃取物用于制备抗老化及抗氧化的组合物的用途。
背景技术
皮肤是保护人类个体的最大屏障，它具有对抗水分散失、病原菌以及各种环境损害的功能。暴露于大量的3C蓝光(例如手机及平板计算机)、紫外线(ultraviolet,UV)、游离辐射(ionizing radiation)、药物或异生物质(xenobiotics)会促使皮肤生成活性氧族(reactive oxygen species,ROS)以及自由基(free radicals)。当所累积的活性氧族以及自由基的数量超过细胞或组织本身的抗氧化能力时，便会形成氧化性压力(oxidativestress)。接着，活性氧族以及自由基会与细胞内的组成物(包括DNA、蛋白质以及脂质等)相反应，进而对皮肤产生非所欲的影响。
黑色素生成(melanogenesis)(亦即黑色素合成(melanin synthesis))是指当皮肤黑色素细胞(dermal melanocyte)在受到环境因素(诸如蓝光、紫外线(ultraviolet,UV))或生理因素(诸如疲劳(fatigue)、压力(stress)、慢性发炎(chronic inflammation)以及体内不正常的α-促黑素细胞素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)的释放)的诱发之后，在黑色素细胞内的酪胺酸(tyrosine)经由酪胺酸酶(tyrosinase)的催化(它是黑色素生成的速率-限制步骤(rate-limiting step))以及一系列的氧化还原反应而被转化为黑色素(melanin)的过程。黑色素可以保护皮肤的下皮层(hypodermis)免于紫外线所造成的光损害(photodamage)，但是当黑色素被大量地累积于皮肤上或不正常地分布时可能会导致皮肤疾病(skin disorders)，诸如雀斑(lentigines)、斑点(freckle)、黑皮病(melasma)、老人斑(age spots)以及色素过多(hyperpigmentation)等。
近年来，人类对于抑制黑色素生成及减少细胞的自由基生成的需求与日俱增，因为一旦抑制黑色素生成及减少细胞的自由基生成，就能够达到抗老化及抗氧化的效用。然而，目前常见用来抑制黑色素生成及减少细胞的自由基生成的方式大多为利用涂抹于皮肤表面的化妆品、保养品，或口服宣称具有抑制黑色素生成及减少细胞的自由基生成功效的健康食品。然而，习知的化妆品、保养品及健康食品大多由化学成分所制成，长期使用不但对人体健康有害无益，且这些产品往往价格昂贵，并非为一般使用者所能负担。
另一方面，线粒体(mitochondria)亦被称为细胞的发电站，因为它是细胞内合成三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)(一种传递能量的分子)的主要场所，为细胞的各项活动提供了化学能量。线粒体若损坏，对细胞以及生物个体的影响甚巨。线粒体在合成ATP的过程中会产生很多的自由基，自由基的活性极强，会与体内任何物质发生强烈的氧化反应而破坏其正常功能。自由基日积月累地伤害线粒体内的酵素与DNA，渐渐地使其功能下降进而使各器官组织的功能衰退。因此，如何提升细胞的线粒体活性，进而达到抗老化及抗氧化的效用，成为本领域的重要课题。
为了解决上述问题，本领域的技术人员亟需研发出具有提升细胞的线粒体活性、减少细胞的自由基生成、抑制黑色素生成、抗老化及抗氧化效用的新颖医药品、食品产品或保养品以造福有此需求的广大族群。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的为提供一种玫瑰(Rosa rugosa)花萃取物用于制备一抗老化及抗氧化的组合物的用途，其中该玫瑰花萃取物是以一溶剂萃取一玫瑰花所获得，该溶剂为水、甘油、含水甘油或其组合。
在本发明的一实施例中，该抗老化及抗氧化包括提升细胞的线粒体活性、减少细胞的自由基生成及抑制黑色素生成。
在本发明的一实施例中，该细胞是一皮肤纤维母细胞。
在本发明的一实施例中，该自由基生成是由一蓝光或一过氧化氢所导致。
在本发明的一实施例中，该黑色素生成是由一蓝光所导致。
在本发明的一实施例中，该玫瑰花萃取物的有效浓度为至少0.25％(v/v)。
在本发明的一实施例中，该萃取是于一介于65～85℃的温度进行。
在本发明的一实施例中，该溶剂与该玫瑰花的体积比介于5～20：1～5。
在本发明的一实施例中，该组合物是一医药品、一食品产品或一保养品。
在本发明的一实施例中，该医药品包含一医药上可接受的载剂。
综上所述，本发明玫瑰花萃取物的功效在于：可通过提升细胞(例如皮肤纤维母细胞)的线粒体活性、减少细胞(例如皮肤纤维母细胞)的自由基生成(例如由蓝光所导致)及抑制黑色素生成(例如由3C蓝光产品如手机及平板计算机所导致)，达到保护皮肤细胞，强力抗氧化及抗老化的功效，藉此维持肌肤年轻活力。
以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
附图说明
图1是本发明玫瑰花萃取物在提升皮肤纤维母细胞的线粒体活性上的效用的柱形图，其中“***”表示与对照组比较，p<0.001；
图2是本发明玫瑰花萃取物在减少由蓝光所导致的细胞自由基生成上的功效的柱形图，其中“**”表示p<0.01；
图3是本发明玫瑰花萃取物在减少由过氧化氢所导致的细胞自由基生成上的功效的柱形图；
图4是本发明玫瑰花萃取物在抑制蓝光所导致的黑色素生成上的功效的柱形图。
具体实施方式
定义
本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。
使用Excel软件进行统计分析。数据以平均值±标准偏差(standard deviation,STDEV)表示，个此之间的差异以学生t检验(student's t-test)分析。
本发明使用的植物材料玫瑰(Rosa rugosa)是一种蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)的植物。明代田汝成《西湖游览志馀·委巷丛谈》提到『玫瑰花杂脑麝以为香囊，芬氤袅袅不絶』，故又名徘徊花，称之其香气悠长缭绕，受人喜爱。
如本文中所使用的，用语「抗老化(anti-aging)」意指预防、减缓人类皮肤外观的老化现象，例如：皱纹的产生及失去弹性等。评量实现此目的的程度将根据熟悉此项技艺者已知的诸多因素来决定，诸如消费者的全身状态、年龄、性别等。
如本文中所使用的，用语「抑制黑色素生成(inhibition of melanogenesis)」与「抑制黑色素合成(inhibition of melanin synthesis)」、「去色素(depigmenting)」、「淡化黑色素(lightening the melanin)」、「美白(whitening)」、「肤色淡化(skin colorlightening)」、「漂白(bleaching)」、「净白」、「增白(brightening)」、「退黑」以及「驱黑」可被交换地使用。
依据本发明，医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠地道(parenterally)、口服地(orally)或局部地(topically)投药的剂型，这包括，但不限于：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterile powder)、锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)、外部制剂(external preparation)以及类似物。
依据本发明，医药品可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，该医药上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelaying agent)、脂质体(liposome)以及类似物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，该医药上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成的群组中的溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它们的组合。
依据本发明，该医药品可以一选自于由下列所构成的群组中的非经肠道途径(parenteral routes)来投药：腹膜内注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)、肌肉内注射(intramuscular injection)、静脉内注射(intravenous injection)以及病灶内注射(intralesional injection)。
依据本发明，医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于局部地施用于皮肤上的外部制剂(external preparation)，这包括，但不限于：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。
依据本发明，该外部制剂是通过将本发明的医药品与一为熟习此项技艺者所详知的基底(base)相混合而被制备。
依据本发明，该基底可包含有一或多种选自于下列的添加剂(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellowwax)]、保存剂(preserving agents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorption enhancers)、安定剂(stabilizing agents)、胶凝剂(gelling agents)[诸如
微结晶纤维素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(active agents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH调整剂(pH adjusting agents)、螯合剂(chelating agents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusive agents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizing agents)、渗透增强剂(penetration enhancers)、抗刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂(propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，保养品可进一步包含有一被广泛地使用于保养品制造技术的可接受的佐剂(acceptable adjuvant)。例如，该可接受的佐剂可包含有一或多种选自于下列的试剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂(screening agent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，保养品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于护肤(skincare)或化妆(makeup)的形式，这包括，但不限于：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或复合型的乳剂、凝胶、软膏、乳霜、面膜(mask)、贴片、贴布(pack)、擦剂、粉末、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫、分散液、滴剂、慕斯(mousse)、防晒油(sunblock)、化妆水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妆产品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身体清洁产品(body cleansingproducts)等。
依据本发明，保养品亦可与一或多种选自于下列的已知活性的外用剂(externaluse agents)一起合并使用：美白剂(whitening agents)[诸如维生素A酸(tretinoin)、儿茶素(catechin)、曲酸、熊果苷以及维生素C]、保湿剂、抗发炎剂(anti-inflammatoryagents)、杀菌剂(bactericides)、紫外线吸收剂(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[诸如芦荟萃取物(aloe extract)]、皮肤营养剂(skin nutrients)、麻醉剂(anesthetics)、抗痘剂(anti-acne agents)、止痒剂(antipruritics)、止痛剂(analgesics)、抗皮肤炎剂(antidermatitis agents)、抗过角化剂(antihyperkeratolytic agents)、抗干皮肤剂(anti-dry skin agents)、抗汗剂(antipsoriatic agents)、抗老化剂(antiaging agents)、抗皱剂(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出剂(antiseborrheic agents)、伤口治疗剂(wound-healing agents)、皮质类固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有关这些外用剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，食品产品可被当作食品添加物(food additive)，藉由习知方法于原料制备时添加，或是于食品的制作过程中添加，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。
依据本发明，食品产品的种类包括但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。
实施例1.玫瑰(Rosa rugosa)花萃取物的制备
首先，对玫瑰花(Rosa rugosa)(购自于宣洋实业股份有限公司的伊朗产的玫瑰干料)进行均质处理，然后于65～85℃下，以溶剂对经均质处理的玫瑰花以5～20：1～5的体积比进行萃取而得到一粗萃取物，其中溶剂是水、甘油、含水甘油或其组合。接着，以滤网对粗萃取物过滤而得到一滤液，然后进行离心，接而收集上清液并进行过滤，而得到玫瑰花萃取物。
实施例2.玫瑰花萃取物在提升细胞的线粒体活性上的效用评估
本实施例以人类皮肤纤维母细胞CCD-966SK进行皮肤细胞线粒体活性分析，并利用流式细胞仪线粒体膜电位侦测套组(Flow cytometry Mitochrondrial membranepotential detection kit,BD)进行实验。人类皮肤纤维母细胞购自中国台湾生物资源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center,BCRC)，编号BCRC 60153。将该细胞培养于添加10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(GIBCO公司，编号10438-026，美国)、0.1mM非必需氨基酸、1.5g/L碳酸氢钠(Sigma公司，编号S5761，美国)、1mM丙酮酸钠(GIBCO公司，编号11360-070，美国)的最低必需培养液(Minimum essential medium,MEM)(Eagle)(配于厄尔平衡盐溶液(Earle's Balanced Salt Solution,Earle's BSS))(GIBCO公司，编号41500-034，美国)。
在含有2mL上述培养基的6孔培养盘中每个孔洞接种1×105个人类皮肤纤维母细胞(n＝3)。之后，将细胞分成二组，其中包括对照组及实验组。将0.5％(v/v)玫瑰花萃取物添加至实验组的细胞中，至于对照组的细胞则添加培养基。接着，将各组细胞于37℃下培养24小时。在使用BDTMMitoScreen(JC-1)试剂套组前，需先将10x JC-1染色测定缓冲液(JC-110x assay buffer)置于37℃下预热，并以无菌的1x磷酸盐缓冲溶液(1x Phosphatebuffered saline,1x PBS)配制1x JC-1染色测定缓冲液，且维持温度为37℃，接着加入130μL的二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)于该1x JC-1染色测定缓冲液中进行冷冻干燥，即为JC-1染色测定缓冲液的储存溶液，其能够在-20℃下保存6个月；待使用时，将JC-1染剂与该1x JC-1测定缓冲液以1:100的比例均匀，即为JC-1作用染剂。之后，加入胰蛋白酶(trypsin)/EDTA处理3分钟后，吸取悬浮的细胞至1.5mL的微离心管，以400g转速离心5分钟收集沉淀的细胞。
在移除上清液后，以1mL的1X PBS再悬浮细胞，然后转移至1.5mL的离心管，以400g转速离心5分钟。在移除上清液后，添加100μL的JC-1工作溶液，混合均匀后在避光下作用15分钟。之后，以400g转速离心5分钟，再以1mL的1X清洗缓冲液清洗并以400g转速离心5分钟，然后以1mL的1X清洗缓冲液清洗并以400g转速离心5分钟。以含有2％FBS的500μL的1X PBS再悬浮细胞，然后利用流式细胞仪(Beckman)分析观察细胞凋亡时线粒体膜电位改变，并以Excel进行t-检验(student t-test)统计分析样品群体之间差异的统计学意义。
图1是本发明玫瑰花萃取物在提升皮肤纤维母细胞的线粒体活性上的效用的柱形图。由图1可见，与对照组相较之下，实验组的皮肤纤维母细胞的线粒体活性(即相对的JC-1聚合体(aggregate))有显着提升，其中与对照组比较，实验组的皮肤纤维母细胞的线粒体活性提升达55.4％。本实施例的结果显示，本发明玫瑰花萃取物可以显着提升细胞线粒体活性，维持肌肤年轻活力，达到抗老的潜力。
实施例3.玫瑰花萃取物在减少由蓝光所导致的细胞自由基生成上的效用评估
首先，以添加有10％胎牛血清(Gibco)、0.5mM丙酮酸钠(sodium pyruvate)及15mMHEPES的杜贝可氏改良的依格氏培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium,DMEM)与Ham′s F12培养基(1:1混合)培养人类皮肤纤维母细胞CCD-966SK(BCRC 60153)于6-孔盘，2mL培养基的细胞浓度为1.5×105细胞/孔，接而于37℃进行培养24小时，并移除培养基。接着，将经培养的细胞分成三组，其中包括对照组、蓝光组，及实验组。将0.5％(v/v)玫瑰花萃取物添加至实验组的细胞中，并照射蓝光(品牌：ZAMI STUDIO，蓝光波长：415nm；剂量50J/cm2)15分钟。蓝光组的细胞被照射蓝光15分钟，至于对照组的细胞则未添加玫瑰花萃取物及未照射蓝光。将各组细胞于37℃进行培养1小时之后，添加5μg/mL二氯二氢荧光黄二乙酸酯(Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)(Sigma/SI-D6883-50MG)(储备溶液为5mg/mL溶于DMSO中)并于37℃反应15分钟。接着，以1mL的1X PBS(Gibco)清洗每孔两次，然后添加200μL胰蛋白酶(trypsin)并于避光环境反应5分钟，接而将细胞培养物收集至1.5mL体积的离心管，并以400×g进行离心10分钟。之后，移除上清液并以1X PBS清洗一次，接而以400×g进行离心10分钟。接着，移除上清液并以1mL的1X PBS再悬浮细胞沉淀物。之后，以流式细胞仪(Beckman)藉由激发波长(excitation wavelength)450～490nm及放射波长(emission wavelength)510～550nm来侦测DCFH-DA的荧光讯号，藉此计算出受到ROS伤害的细胞百分比。各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图2。
图2是本发明玫瑰花萃取物在减少由蓝光所导致的细胞自由基生成上的功效的柱形图。由图2可见，与对照组相较之下，蓝光组测得的受到ROS伤害的细胞百分比(即氧化压力高表现细胞)有显著提升，这表示蓝光会对皮肤纤维母细胞产生大量ROS伤害；而与蓝光组相较之下，实验组测得的受到ROS伤害的细胞百分比有显著降低(降低蓝光所导致的ROS表现量约21％)。本实施例的结果显示，本发明玫瑰花萃取物具有减少由蓝光所导致的细胞自由基生成的功效。
实施例4.玫瑰花萃取物在减少由过氧化氢所导致的细胞自由基生成上的效用评估
首先，以添加有10％胎牛血清(FBS)(GIBCO)、0.1mM非必需氨基酸、1.5g/L碳酸氢钠及1mM丙酮酸钠(sodium pyruvate)(90％)的最低必需培养基(MEM)(Eagle)(配于厄尔平衡盐溶液(Earle's Balanced Salt Solution,Earle's BSS))(GIBCO公司，编号41500-034，美国)培养人类皮肤纤维母细胞CCD-966SK(BCRC 60153)于6-孔盘，2mL培养基的细胞浓度为2×105细胞/孔，接而于37℃进行培养24小时，并移除培养基。接着，将经培养的细胞分成三组，其中包括对照组、过氧化氢组，及实验组。将0.25％(v/v)玫瑰花萃取物及1mMH2O2(Sigma)添加至实验组的细胞中。过氧化氢组的细胞被添加以1mM H2O2，至于对照组的细胞则不做任何处理。之后，添加5μg/mL二氯二氢荧光黄二乙酸酯(Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)(Sigma/SI-D6883-50MG)(储备溶液为5mg/mL溶于DMSO中)并于37℃反应15分钟，然后于37℃下以H2O2处理细胞1小时，接而以1mL的1X PBS(Gibco)清洗每孔两次。接着，添加200μL胰蛋白酶(trypsin)并于避光环境反应5分钟，接而将细胞培养物收集至1.5mL体积的离心管，并以400×g进行离心10分钟。之后，移除上清液并以1XPBS清洗一次，接而以400×g进行离心10分钟。接着，移除上清液并以1mL的1X PBS再悬浮细胞沉淀物。之后，以流式细胞仪(Beckman)藉由激发波长(excitation wavelength)450～490nm及放射波长(emission wavelength)510～550nm来侦测DCFH-DA的荧光讯号，藉此计算出受到ROS伤害的细胞百分比。各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图3。
图3是本发明玫瑰花萃取物在减少由过氧化氢所导致的细胞自由基生成上的功效的柱形图。由图3可见，与对照组相较之下，过氧化氢组测得的受到ROS伤害的细胞百分比(即氧化压力高表现细胞)有显著提升，这表示过氧化氢会对皮肤纤维母细胞产生大量ROS伤害；而与过氧化氢组相较之下，实验组测得的受到ROS伤害的细胞百分比有显著降低(降低ROS表现量至少97％)。本实施例的结果显示，本发明玫瑰花萃取物具有减少由过氧化氢所导致的细胞自由基生成的功效。
实施例5.玫瑰花萃取物在抑制蓝光所导致的黑色素生成上的效用评估
首先，将老鼠皮肤黑色素瘤细胞株B16F10(对应于ATCC CRL-6475)培养于杜贝可氏改良的依格氏培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium,DMEM)(添加有1％青霉素/链霉素(Gibco)及10％FBS(Gibco))中。于6孔培养盘的每孔中加入3mL的培养基，使每孔具有1.5x 105个B16F10细胞。在37℃下培养24小时后，移除培养基。
之后，将B16F10细胞分成三组，其中包括实验组、蓝光组以及对照组。将0.5％(v/v)玫瑰花萃取物添加至实验组的细胞中，于37℃下培养1小时后，并照射蓝光3小时。蓝光组的细胞被照射蓝光3小时，至于对照组的细胞则未添加玫瑰花萃取物及未照射蓝光。
各组细胞培养物在37℃下培养48小时后，移除培养基并以1xPBS(Gibco)冲洗两次。之后，加入胰蛋白酶(trypsin)来处理细胞3分钟并将悬浮的细胞收集于15mL体积的离心管中，接而以400xg/5分钟进行旋转(spin)以沉淀细胞。在以1xPBS冲洗两次之后，以200μL的1XPBS再悬浮细胞沉淀物(cell pellet)。接着，将细胞溶液于液态氮中放置10分钟，接而于室温下静置30分钟进行解冻。在解冻完全之后，以12,000xg进行旋转30分钟，接而移除上清液并添加120μL的1N NaOH(配于ddH2O)。在混合均匀之后，于60℃干浴槽中静置1小时。之后，取100μL的体积至96孔培养盘中并于450nm的波长下以ELISA读取仪来读取各孔的吸光值(OD450)。
黑色素含量(％)是藉由将所测得的吸光值(OD450)代入下列公式(1)而计算出：
黑色素含量(％)＝(各组所测得的OD450吸光值/对照组所测得的OD450吸光值)×100％(1)
各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图4。
图4是本发明玫瑰花萃取物在抑制蓝光所导致的黑色素生成上的功效的柱形图。由图4可见，与对照组相较之下，蓝光组的黑色素含量有显着提升，这表示蓝光会对细胞产生大量黑色素；而与蓝光组相较之下，实验组的黑色素含量有显著的降低(与蓝光组比较，实验组的黑色素含量降低至少38.8％)。本实施例的结果显示，本发明玫瑰花萃取物具有抑制蓝光所导致的黑色素生成的功效。
综上所述，本发明玫瑰花萃取物可藉由提升细胞(例如皮肤纤维母细胞)的线粒体活性、减少细胞(例如皮肤纤维母细胞)的自由基生成(例如由蓝光所导致)及抑制黑色素生成(例如由3C蓝光产品如手机及平板计算机所导致)，达到保护皮肤细胞，强力抗氧化及抗老化的功效，藉此维持肌肤年轻活力。
以上所述仅为举例性，而非为限制性者。任何未脱离本发明的精神与范畴，而对其进行的等效修改或变更，均应包含于后附的申请专利范围中。
Claims (7)
1.一种玫瑰花萃取物用于制备一抗老化及抗氧化的组合物的用途，其中所述玫瑰花萃取物是以一溶剂萃取一玫瑰花所获得，所述溶剂为水、甘油、含水甘油或其组合，所述玫瑰花萃取物是通过提升皮肤纤维母细胞的线粒体活性、减少所述皮肤纤维母细胞的蓝光所致的自由基生成及抑制黑色素生成来达到所述抗老化及抗氧化。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述黑色素生成是由一蓝光所导致。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述玫瑰花萃取物的有效浓度为至少0.25％(v/v)。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述萃取是于一介于65～85℃的温度进行。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述溶剂与所述玫瑰花的体积比介于5～20：1～5。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物是一医药品、一食品产品或一保养品。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述医药品包含一医药上可接受的载剂。
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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