TWI694829B

TWI694829B - 卷柏的萃取物用於提升角蛋白基因、透明質酸合成酶基因及絲聚蛋白基因的表現量、提升細胞的粒線體活性、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途

Info

Publication number: TWI694829B
Application number: TW108108700A
Authority: TW
Inventors: 林詠翔; 李姿儀
Original assignee: 大江生醫股份有限公司
Priority date: 2019-03-14
Filing date: 2019-03-14
Publication date: 2020-06-01
Also published as: TW202033206A; CN111686137A

Abstract

本發明提供一種卷柏的萃取物用於提升角蛋白基因、透明質酸合成酶基因及絲聚蛋白基因的表現量、提升細胞的粒線體活性、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途。

Description

卷柏的萃取物用於提升角蛋白基因、透明質酸合成酶基因及絲聚蛋白基因的表現量、提升細胞的粒線體活性、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途

本發明是有關於一種卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物用於提升角蛋白基因、透明質酸合成酶基因及絲聚蛋白基因的表現量、提升細胞的粒線體活性、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途。

皮膚是保護人類個體的最大屏障，它具有對抗水分散失、病原菌以及各種環境損害之功能。暴露於大量的紫外線(ultraviolet,UV)、游離輻射(ionizing radiation)、藥物或異生物質(xenobiotics)會促使皮膚生成活性氧族(reactive oxygen species,ROS)以及自由基(free radicals)。當所累積的活性氧族以及自由基的數量超過細胞或組織本身的抗氧化能力時，便會形成氧化性壓力(oxidative stress)。接著，活性氧族以及自由基會與細胞內的組成物(包括DNA、蛋白質以及脂質等)相反應，進而對皮膚產生非所欲的影響。

近年來，人類對於皮膚保濕(moisturizing)的需求與日俱增，因為一旦提升皮膚的保濕能力，就能夠達到抗老化的效用。然而，目前常見用來提升皮膚保濕能力的方式大多為利用塗抹於皮膚表面的化妝品、保養品，或口服宣稱具有提升皮膚保濕效用的健康食品。然而，習知的化妝品、保養品及健康食品大多由化學成分所製成，長期使用不但對人體健康有害無益，且這些產品往往價格昂貴，並非為一般使用者所能負擔。

另一方面，粒線體(mitochondria)亦被稱為細胞的發電站，因為它是細胞內合成三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)(一種傳遞能量的分子)的主要場所，為細胞的各項活動提供了化學能量。粒線體若損壞，對細胞以及生物個體的影響甚鉅。粒線體在合成ATP的過程中會產生很多的自由基，自由基的活性極強，會與體內任何物質發生強烈的氧化反應而破壞其正常功能。自由基日積月累地傷害粒線體內的酵素與DNA，漸漸地使其功能下降進而使各器官組織的功能衰退。因此，如何提升細胞的粒線體活性，進而達到抗老化之效用，成為本領域的重要課題。

為了解決上述問題，本領域的技術人員亟需研發出具有提升皮膚的保濕能力及抗老化效用的新穎醫藥品、食品產品或保養品以造福有此需求的廣大族群。

有鑑於此，本發明之目的為提供一種卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物用於製備一提升角蛋白(keratin,KRT)基因、透明質酸合成酶(hyaluronan synthase,HAS)基因及絲聚蛋白(filaggrin,FLG)基因的表現量之組成物的用途，其中該卷柏的萃取物是以水、醇類、含水醇類或其組合作為一萃取溶劑對該卷柏進行一第一階段萃取而得到一粗萃取物，接而以該萃取溶劑對該粗萃取物進行一第二階段萃取而製得，該萃取溶劑具有一水解酵素。

在本發明的一實施例中，該KRT基因是KRT1基因或KRT10基因，該HAS基因是HAS2基因或HAS3基因。

在本發明的一實施例中，該卷柏的萃取物的有效濃度為至少0.03125mg/mL。

本發明之另一目的為提供一種卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物用於製備一提升細胞的粒線體活性之組成物的用途，其中該卷柏的萃取物是以水、醇類、含水醇類或其組合作為一萃取溶劑對該卷柏進行一第一階段萃取而得到一粗萃取物，接而以該萃取溶劑對該粗萃取物進行一第二階段萃取而製得，該萃取溶劑具有一水解酵素。

在本發明的一實施例中，該細胞是一皮膚纖維母細胞。

在本發明的一實施例中，該卷柏的萃取物的有效濃度為至少0.25mg/mL。

本發明之另一目的為提供一種卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物用於製備一提升皮膚的保濕能力及抗老化之組成物的用途，其中該卷柏的萃取物是以水、醇類、含水醇類或其組合作為一萃取溶劑對該卷柏進行一第一階段萃取而得到一粗萃取物，接而以該萃取溶劑對該粗萃取物進行一第二階段萃取而製得，該萃取溶劑具有一水解酵素。

在本發明的一實施例中，該卷柏與該萃取溶劑的體積比例介於1~5：10~20。

在本發明的一實施例中，該水解酵素是Viscozyme L。

在本發明的一實施例中，該組成物是一醫藥品、一食品產品或一保養品。

綜上所述，本發明卷柏的萃取物之功效在於：可藉由提升角蛋白基因、透明質酸合成酶基因及絲聚蛋白基因的表現量，及提升細胞的粒線體活性，達到提升皮膚的保濕能力及抗老化的功效。此外，本發明的卷柏萃取物具有提升肌膚保濕基因，維持肌膚水分，且提升皮膚細胞粒線體活性，達到抗老保濕之潛力。

以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

圖1是本發明卷柏的萃取物在作用6小時之時提升與皮膚細胞保濕相關的FLG基因、HAS2基因、HAS3基因、KRT10基因及KRT1基因表現上的功效之數據圖，其中“*”表示與對照組比較，p<0.05；“**”表示與對照組比較，p<0.01；“***”表示與對照組比較，p<0.001。

圖2是本發明卷柏的萃取物在提升皮膚纖維母細胞的粒線體活性上之效用的數據圖，其中“***”表示與對照組比較，p<0.001。

定義

本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。

使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(standard deviation,STDEV)表示，個此之間的差異以單尾學生t檢驗(single-tailed student's t-test)分析。

依據本發明，卷柏(Selaginella tamariscina)別名為九死還魂草、或萬年松，為卷柏科(Selaginellaceae)卷柏屬(Selaginella)的岩生草本植物，廣泛分布於中國大陸、印度北部、中南半島、菲律賓、日本、韓國、及西伯利亞等地區。卷柏的常見用途為庭園岩壁美化、盆栽及藥用，有止血及收斂的功效，治療便血、尿血及鼻出血之效果顯著。

如本文中所使用的，用語「抗老化(anti-aging)」意指預防、減緩人類皮膚外觀之老化現象，例如：皺紋的產生及失去彈性等。評量實現此目的之程度將根據熟悉此項技藝者已知之諸多因素來決定，諸如消費者的全身狀態、年齡、性別等。

依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)、口服地(orally)或局部地(topically)投藥的劑型，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)、外部製劑(external preparation)以及類似之物。

依據本發明，醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它們的組合。

依據本發明，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：腹膜內注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、表皮內注射(intraepidermal injection)、皮內注射(intradermal injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)、靜脈內注射(intravenous injection)以及病灶內注射(intralesional injection)。

依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液 (lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。

依據本發明，該外部製劑是藉由將本發明的醫藥品與一為熟習此項技藝者所詳知的基底(base)相混合而被製備。

依據本發明，該基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普^®974P(carbopol^®974P)、微結晶纖維素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，保養品可進一步包含有一被廣泛地使用於保養品製造技術之可接受的佐劑(acceptable adjuvant)。例如，該可接受的佐劑可包含有一或多種選自於下列的試劑：溶劑、膠凝劑、活性劑、防腐劑、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、界面活性劑、染色試劑(coloring agent)、增稠劑(thickening agent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，保養品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於護膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，這包括，但不限於：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或複合型之乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、化妝水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妝產品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產品(body cleansing products)等。

依據本發明，保養品亦可與一或多種選自於下列之已知活性的外用劑(external use agents)一起合併使用：美白劑(whitening agents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、麴酸、熊果苷以及維生素C]、保濕劑、抗發炎劑(anti-inflammatory agents)、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[諸如蘆薈萃取物(aloe extract)]、皮膚營養劑(skin nutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acne agents)、止癢劑(antipruritics)、止痛劑(analgesics)、抗皮膚炎劑(antidermatitis agents)、抗過角化劑(antihyperkeratolytic agents)、抗乾皮膚劑(anti-dry skin agents)、抗汗劑(antipsoriatic agents)、抗老化劑(antiaging agents)、抗皺劑(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheic agents)、傷口治療劑(wound-healing agents)、皮質類固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有關這些外用劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，食品產品可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。

依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。

實施例1. 卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物之製備

首先，將來自於杭州博太植物科技有限公司的卷柏(Selaginella tamariscina)進行均質，接而以水、醇類、含水醇類或其組合作為萃取溶劑，較佳的萃取溶劑為水，對均質後的卷柏進行一第一階段萃取0.5~2小時，其中第一階段萃取的溫度介於50℃至80℃，萃取溶劑與卷柏的體積比介於10~20：1~5，且該萃取溶劑具有一水解酵素Viscozyme L(Novozyme Corp.)。經由第一階段萃取後得到一粗萃取物。接著，以該萃取溶劑(較佳的萃取溶劑為水)對該粗萃取物進行一第二階段萃取0.5~2小時，其中第二階段萃取的溫度介於50℃至100℃，且該萃取溶劑具有該水解酵素Viscozyme L(Novozyme Corp.)。接著，將所得到的產物冷卻至室溫，以400網目(mesh)的濾網對產物過濾而得到一濾液，然後於45~70℃下對濾液進行減壓濃縮而得到本發明卷柏的萃取物。

實施例2. 卷柏的萃取物在提升皮膚的保濕能力上的效用評估

本實施例藉由探討卷柏的萃取物可否藉由調控與皮膚細胞保濕相關的基因表現來達到提升皮膚的保濕能力之功效。

於角質細胞專用之無血清培養基(Keratinocyte-SFM；購自Thermo，產品編號：17005042)中培養人類表皮角質細胞(HPEK-50；購自CELLnTEC)於6-孔盤，2mL培養基的細胞濃度為1.5×10⁵細胞/孔。

之後，將細胞分成3組，其中包括1個對照組及2個實驗組(亦即實驗組1與2)。將卷柏的萃取物以培養基稀釋為具有0.03125mg/mL及0.0625mg/mL濃度的稀釋液，繼而分別將0.03125mg/mL稀釋液添加至實驗組1的細胞中，及將0.0625mg/mL稀釋液添加至實驗組2的細胞中，至於對照組的細胞則添加培養基。接著，於培養箱中培養各組細胞6小時，接而收取各組細胞培養物並拿來進行基因表現分析。

在本實施例中，用來分析與皮膚細胞保濕相關的基因包括絲聚蛋白(filaggrin,FLG)基因、透明質酸合成酶2(hyaluronan synthase 2,HAS2)基因、透明質酸合成酶3(hyaluronan synthase 3,HAS3)基因、角蛋白1(keratin 1,KRT1)基因、及角蛋白10(keratin 10,KRT10)基因。

以RNA萃取套組(Geneaid)對上面所得到的各組細胞培養物進行RNA的萃取。對由此所得到的各組RNA取2,000ng並以SuperScript^® III反轉錄酶(Invitrogen)將萃取出的RNA反轉錄為cDNA。接著，以cDNA作為模版，並且使用用來擴增標的基因的引子對，包括FLG、HAS2、HAS3、KRT1、KRT10及TBP(作為內部對照組)，它們的核苷酸序列顯示於下表1，在StepOne Plus即時PCR系統(ABI)中利用KAPA CYBR FAST qPCR套組(2x)(KAPA Biosystems)來進行定量即時PCR，俾以對標的基因進行擴增及定量。PCR產物的熔化曲線是在定量即時PCR反應期間進行確認。

標的基因的相對表現量是推導自方程式2^-△△Ct，並利用TBP基因(作為內部對照組)及基準基因的循環閾值及藉由標準差來計算相對倍數變化，其中△Ct=Ct_{目標基因/基準基因}-Ct_TBP，△△Ct=△Ct_目標基因-△Ct_基準基因，倍數變化=2^-△△Ct _平均 _值。以對照組的標的基因表現量作為1的比較基準。各組之間的統計學顯著差異是藉由單尾史徒登氏t-檢定來決定。本實施例的結果顯示於圖1。

圖1是本發明卷柏的萃取物在作用6小時之時提升與皮膚細胞保濕相關的FLG基因、HAS2基因、HAS3基因、KRT10基因及KRT1基因表現上的功效之數據圖。由圖1可見，無論是FLG基因、HAS3基因、KRT10基因或KRT1基因，與對照組相較之下，實驗組1及實驗組2的基因相對表現量有顯著的提升。就HAS2基因而言，與對照組相較之下，實驗組2的基因相對表現量有顯著的提升。本實施例的結果顯示，本發明卷柏的萃取物可藉由提升KRT1基因及KRT10基因的表現量來維持角質細胞排列，使皮膚角質組織完整，防止肌膚水分散失。另一方面，本發明卷柏的萃取物可藉由提升HAS2基因及HAS3基因的表現量來促進內生性玻尿酸生成，透過吸附水分支撐肌膚，維持肌膚彈性及光澤。再者，本發明卷柏的萃取物可藉由提升FLG基因的表現量來促進天然保濕因子(natural moisturizing factor,NMF)生成，持續維持肌膚保濕狀態。

實施例3. 卷柏的萃取物在提升細胞的粒線體活性上之效用評估

本發明以人類皮膚纖維母細胞進行皮膚細胞粒線體活性分析。人類皮膚纖維母細胞購自台灣生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center,BCRC)，編號BCRC 60153。將該細胞培養於添加10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(GIBCO公司，編號10438-026，美國)、0.1mM非必需胺基酸、1.5g/L碳酸氫鈉(Sigma公司，編號S5761，美國)、1mM丙酮酸鈉(GIBCO公司，編號11360-070，美國)的最低必需培養液(Minimum essential medium,MEM)(Eagle)(配於厄爾平衡鹽溶液(Earle's Balanced Salt Solution,Earle's BSS))(GIBCO公司，編號41500-034，美國)。

在含有2mL上述培養基的6孔培養盤中每個孔洞接種1×10⁵個人類皮膚纖維母細胞(n=3)。之後，將細胞分成3組，其中包括1個對照組及2個實驗組(亦即實驗組1與2)。將卷柏的萃取物以培養基稀釋為具有0.5mg/mL及0.25mg/mL濃度的稀釋液，繼而分別將0.5mg/mL稀釋液添加至實驗組1的細胞中，及將0.25mg/mL稀釋液添加至實驗組2的細胞中，至於對照組的細胞則添加培養基。接著，將各組細胞於37℃下培養24小時，然後於37℃下預熱10X分析緩衝液。之後，以無菌的1X磷酸鹽緩衝液(phosphate buffered saline，PBS)(GIBCO公司，編號14200-075，美國)製備1X分析緩衝液，混合均勻並置於37℃，然後添加130μL的二甲基亞碸(Dimethyl sulfoxide,DMSO)至凍乾JC-1粒線體染劑以製備JC-1儲備溶液，儲備溶液可儲存於-20℃歷時6個月。接著，將JC-1粒線體染劑與1X分析緩衝液以1：100的比例製備工作溶液，然後移除培養基並以1XPBS潤洗兩次。之後，加入胰蛋白酶(trypsin)/EDTA處理3分鐘後，吸取懸浮的細胞至1.5mL的微離心管，以400g轉速離心5分鐘收集沈澱的細胞。

在移除上清液後，以1mL的1X PBS再懸浮細胞，然後轉移至1.5mL的離心管，以400g轉速離心5分鐘。在移除上清液後，添加100μL的JC-1工作溶液，混合均勻後在避光下培養15分鐘。之後，以400g轉速離心5分鐘，再以1X清洗緩衝液清洗並以400g轉速離心5分鐘，然後以1X清洗緩衝液清洗並以400g轉速離心5分鐘。以含有2%FBS的500μL之1X PBS再懸浮細胞，然後利用流式細胞儀(BD Accuri C6 Plus)分析觀察細胞凋亡時粒線體膜電位改變，並以Excel進行t-檢驗(student t-test)統計分析樣品群體之間差異的統計學意義。

圖2是本發明卷柏的萃取物在提升皮膚纖維母細胞的粒線體活性上之效用的數據圖。由圖2可見，與對照組相較之下，實驗組1及實驗組2的皮膚纖維母細胞的粒線體活性有顯著提升。本實施例的結果顯示，本發明卷柏的萃取物在刺激人類皮膚纖維母細胞後，可以顯著提升細胞粒線體活性，維持細胞活力及正常代謝。

綜上所述，本發明卷柏的萃取物可藉由提升角蛋白基因、透明質酸合成酶基因及絲聚蛋白基因的表現量，透過維持肌膚細胞排列及維持肌膚水分恆定，並在刺激人類皮膚纖維母細胞後，透過提升細胞粒線體活性，維持細胞活力及正常代謝，達到提升皮膚的保濕能力及抗老化的功效。此外，本發明卷柏經過萃取使黃酮類及多醣類化合物被有效釋出，使卷柏的萃取物具有提升肌膚保濕基因，維持肌膚水分，且提升皮膚細胞粒線體活性，達到抗老保濕之潛力。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

<110> 大江生醫股份有限公司

<120> 卷柏的萃取物用於提升角蛋白基因、透明質酸合成酶基因及絲聚蛋白基因的表現量、提升細胞的粒線體活性、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途

<130> 108B0004-I1

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 1

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<213> 人工序列

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Claims

一種卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物用於製備一提升角蛋白(keratin,KRT)基因、透明質酸合成酶(hyaluronan synthase,HAS)基因及絲聚蛋白(filaggrin,FLG)基因的表現量之組成物的用途，其中該卷柏的萃取物是以水作為一萃取溶劑對該卷柏進行一第一階段萃取而得到一粗萃取物，接而以該萃取溶劑對該粗萃取物進行一第二階段萃取而製得，其中該第一階段萃取之溫度介於50℃至80℃，該第二階段萃取之溫度介於50℃至100℃，該萃取溶劑具有一水解酵素。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該KRT基因是KRT1基因或KRT10基因，該HAS基因是HAS2基因或HAS3基因。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該卷柏的萃取物的有效濃度為至少0.03125mg/mL。
一種卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物用於製備一提升細胞的粒線體活性之組成物的用途，其中該卷柏的萃取物是以水作為一萃取溶劑對該卷柏進行一第一階段萃取而得到一粗萃取物，接而以該萃取溶劑對該粗萃取物進行一第二階段萃取而製得，其中該第一階段萃取之溫度介於50℃至80℃，該第二階段萃取之溫度介於50℃至100℃，該萃取溶劑具有一水解酵素。
如申請專利範圍第4項所述的用途，其中該細胞是一皮膚纖維母細胞。
如申請專利範圍第4項所述的用途，其中該卷柏的萃取物的有效濃度為至少0.25mg/mL。
一種卷柏(Selaginella tamariscina)的萃取物用於製備一提升皮膚的保濕能力及抗老化之組成物的用途，其中該卷柏的萃取物是以水作為一萃取溶劑對該卷柏進行一第一階段萃取而得到一粗萃取物，接而以該萃取溶劑對該粗萃取物進行一第二階段萃取而製得，其中該第一階段萃取之溫度介於50℃至80℃，該第二階段萃取之溫度介於50℃至100℃，該萃取溶劑具有一水解酵素。
如申請專利範圍第7項所述的用途，其中該卷柏的萃取物的有效濃度為至少0.03125mg/mL。
如申請專利範圍第1項、第4項或第7項所述的用途，其中該卷柏與該萃取溶劑的體積比例介於1~5：10~20。
如申請專利範圍第1項、第4項或第7項所述的用途，其中該水解酵素是Viscozyme L。
如申請專利範圍第1項、第4項或第7項所述的用途，其中該組成物是一醫藥品、一食品產品或一保養品。