CN113004299B - 山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法和应用 - Google Patents

山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113004299B
CN113004299B CN202110188695.0A CN202110188695A CN113004299B CN 113004299 B CN113004299 B CN 113004299B CN 202110188695 A CN202110188695 A CN 202110188695A CN 113004299 B CN113004299 B CN 113004299B
Authority
CN
China
Prior art keywords
methanol
xanthone
extracting
mangosteen
separating
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110188695.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113004299A (zh
Inventor
杨蕾
张丹
李嘉宝
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
General Hospital of Shenyang Military Region
Original Assignee
General Hospital of Shenyang Military Region
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by General Hospital of Shenyang Military Region filed Critical General Hospital of Shenyang Military Region
Priority to CN202110188695.0A priority Critical patent/CN113004299B/zh
Publication of CN113004299A publication Critical patent/CN113004299A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113004299B publication Critical patent/CN113004299B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/78—Ring systems having three or more relevant rings
    • C07D311/80—Dibenzopyrans; Hydrogenated dibenzopyrans
    • C07D311/82—Xanthenes
    • C07D311/84—Xanthenes with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 9
    • C07D311/86—Oxygen atoms, e.g. xanthones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及山竹皮中呫吨酮类化合物及其提取分离方法和在制备降低餐后药物中的应用。提取方法如下：取山竹皮用乙醇热回流提取减压蒸干得到浸膏；将上述浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿和正丁醇进行萃取，得到馏分A1～A3；将A2以不同比例的石油醚‑丙酮进行梯度洗脱，得到洗脱馏分B1～B8，将B4经硅胶柱色谱，二氯甲烷‑甲醇系统进行梯度洗脱，经硅胶薄层色谱检测，得到馏分C1～C6；其中C4通过ODS柱色谱，经甲醇‑水梯度洗脱得到D1～D5；D2～D3馏分经高效液相色谱分离，等度洗脱得到化合物Ⅰ‑Ⅴ。本发明所述呫吨酮类化合物，对体外α‑葡萄糖苷酶有较好的抑制作用，同时具有较好的体内降低餐后血糖的效果。

Description

山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法 和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及山竹皮中呫吨酮类化合物及其提取分离方法，本发明还涉及该类化合物在制备降糖药物中的应用。
背景技术
α-糖苷酶存在于小肠上皮细胞刷状缘，是多糖、双糖转化为单糖不可缺少的酶。食物中绝大部分碳水化合物为复合糖，如淀粉必须在唾液、肠液的作用下分解为葡萄糖，方可被吸收进入血液，这是引起餐后高血糖的主要原因。餐后高血糖可引起胰岛素敏感性降低，从而加重病情，并导致严重的并发症。α-糖苷酶抑制剂可以延缓寡聚糖和多糖的消化吸收，起到降低餐后血糖峰值的作用，对降低血糖波动以及糖化血红蛋白含量、防止糖尿病并发症的发生具有重要的意义。近年来已经开发了关于具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的降血糖药，包括阿卡波糖，米格列醇和伏格列波糖。然而，这些药物抑制剂多具有副作用，例如腹泻，肠胃气胀，肝脏疾病和腹部绞痛等。因此寻找天然的、副作用低的植物源α-葡萄糖苷酶抑制，引起了人们对糖代谢疾病的关注，也逐渐成为了学术的研究热点。
山竹(Garcinia mangostana L)为藤黄科藤黄属植物，俗称山竺、山竹子、倒捻子。为著名的热带水果，可生食或制果脯。被誉为“果中皇后”。原产马鲁古，亚洲和非洲热带地区广泛栽培，中国台湾、福建、广东和云南有引种或试种。山竹食用后产生的果皮占单果鲜质量的52％～68％，如不加综合利用，资源严重浪费。山竹皮呈深紫色、性凉、味涩，在泰国等东南亚国家一直作为传统医药，用于治疗腹痛、创伤、痢疾调节血糖等多种疾病。山竹皮资源被人忽视已久且资源丰富，且具有降糖活性报道，从山竹皮中寻找新的降糖活性化合物具有可行性。
发明内容
本发明旨在从山竹皮中寻找新的降糖前体药物，提供呫吨酮类化合物的提取、分离方法，并且研究它们的降糖活性和医药用途。本发明的另一个目的在于提供该类化合物的结构鉴定方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下，山竹皮中呫吨酮类化合物，结构式如I、Ⅱ、III、Ⅳ或V所示，
Figure BDA0002944300540000021
上述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，包括如下步骤：
1)取山竹皮用75％的乙醇水热回流提取2～3次，每次4～6小时，减压蒸干得到浸膏；
2)依次用石油醚、氯仿和正丁醇进行萃取，结合薄层色谱检测，合并为A1～A3；
3)A2用硅胶柱色谱，以不同比例的石油醚-丙酮进行梯度洗脱，配合硅胶薄层色谱检测，得到洗脱馏分B1～B8；
4)将B4经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，配合硅胶薄层色谱检测，配合硅胶薄层色谱进行检测合并得到馏分C1～C6；
5)C4经ODS柱色谱经甲醇-水梯度洗脱得到脱得到10～15个馏分，经分析液相合并得到D1～D5；
6)D2～D3馏分经高效液相色谱分离，以甲醇-水为流动相进行等度洗脱制备得到化合物I-V。
优选地，上述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，步骤1)中，所述的回流提取中，75％乙醇与干燥的桑叶的液料比为3.5:1～5:1。
优选地，上述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，步骤2)中，所述的萃取溶剂体积，石油醚、氯仿和正丁醇为浸膏水溶液的1.5-2.5倍。
优选地，上述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，步骤3)中，所述的石油醚-丙酮系统中，石油醚：丙酮的比例为100:0～0:100。
优选地，上述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，步骤4)中，所述的二氯甲烷-甲醇洗脱系统中，二氯甲烷与甲醇的比例为80:20～0:100。
优选地，上述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，步骤5)中，甲醇-水系统中甲醇与水的比例为20:80～40:60
优选地，上述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，步骤6)中，所述的甲醇-水系统中，甲醇与水的比例为20:80～40:60。
一种药物组合物，包含上述的山竹皮中呫吨酮类化合物和药学上可接受的载体。
上述的山竹皮中呫吨酮类化合物在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性药物中的应用。
本发明具有以下有益效果：
1.山竹皮作为我国南部沿海地区和东南亚国家的传统活性成分，资源丰富且长期得不到充分利用，本专利涉及从山竹皮中提取新呫吨酮类的方法简单、高效且重复率高，具有较强的应用价值。同时为山竹皮中继续发现此类成分起到借鉴作用。
2.本专利涉及呫吨酮类结构解析方法简单、快速具有特异性，适合山竹皮中同类结构的解析，同时对其它植物中此类成分的结构鉴定及结构解析具有指导意义。
3.本专利涉及呫吨酮类结构可以有效的抑制α-葡萄糖苷酶起到调节餐后血糖的作用，体内外效果明显。阐述了山竹皮活性成分的降糖功效和作用靶点，对资源开发具有重要意义。
附图说明
图1为化合物I的1H-NMR谱图。
图2为化合物I的13C-NMR谱图。
图3为化合物I的HSQC谱图。
图4为化合物I的HMBC谱图。
图5为化合物I的H-HCOSY谱图。
图6为化合物Ⅱ的1H-NMR谱图。
图7为化合物Ⅱ的13C-NMR谱图。
图8为化合物Ⅱ的HSQC谱图。
图9为化合物Ⅱ的HMBC谱图。
图10为化合物III的1H-NMR谱图。
图11为化合物III的13C-NMR谱图。
图12为化合物Ⅳ的1H-NMR谱图。
图13为化合物Ⅳ的13C-NMR谱图。
图14为化合物V的1H-NMR谱图。
图15为化合物V的13C-NMR谱图。
图16为化合物I-V降低小鼠餐后血糖效果图。
图17是化合物I-V降低小鼠餐后血糖应答曲线下的面积(AUC)的效果图。
具体实施方式
实施例1山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离
取山竹皮用75％的乙醇水热回流提取3次，每次5小时，液料比为4:1，减压蒸干得到浸膏；依次用石油醚、氯仿和正丁醇进行萃取，萃取溶剂体积为浸膏水溶液的1.5倍，结合薄层色谱检测，合并为A1～A3；A2用硅胶柱色谱，以不同比例的石油醚-丙酮进行梯度洗脱石油醚：丙酮的比例为100:0～0:100进行梯度洗脱得到16个馏分，配合硅胶薄层色谱检测检测合并为B1～B8；将B4经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，二氯甲烷与甲醇的比例为80:20～0:100，进行梯度洗脱得到12个馏分，配合硅胶薄层色谱进行检测合并得到馏分C1～C6；C4经ODS柱色谱经甲醇-水梯度洗脱得到脱得到10个馏分，经分析液相合并得到D1～D5；其中D2(30:70洗脱)馏分经高效液相色谱分离，39％甲醇-水为流动相等度洗脱制备得到化合物I-V。
实施例2山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离
取山竹皮用75％的乙醇水热回流提取3次，每次6小时，液料比为5:1，减压蒸干得到浸膏；依次用石油醚、氯仿和正丁醇进行萃取，萃取溶剂体积为浸膏水溶液的2倍，结合薄层色谱检测，合并为A1～A3；A2用硅胶柱色谱，以不同比例的石油醚-丙酮进行梯度洗脱石油醚：丙酮的比例为100:0～0:100进行梯度洗脱得到20个馏分，配合硅胶薄层色谱检测检测合并为B1～B8；将B4经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，二氯甲烷与甲醇的比例为80:20～0:100，进行梯度洗脱得到10个馏分，配合硅胶薄层色谱进行检测合并得到馏分C1～C6；C4经ODS柱色谱经甲醇-水梯度洗脱得到脱得到12个馏分，经分析液相合并得到D1～D5；其中D2(35:65洗脱)馏分经高效液相色谱分离，39％甲醇-水为流动相等度洗脱制备得到化合物I-V。
实施例3山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离
取山竹皮用75％的乙醇水热回流提取3次，每次5.5小时，液料比为4.5:1，减压蒸干得到浸膏；依次用石油醚、氯仿和正丁醇进行萃取，萃取溶剂体积为浸膏水溶液的2.5倍，结合薄层色谱检测，合并为A1～A3；A2用硅胶柱色谱，以不同比例的石油醚-丙酮进行梯度洗脱石油醚：丙酮的比例为100:0～0:100进行梯度洗脱得到19个馏分，配合硅胶薄层色谱检测检测合并为B1～B8；将B4经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，二氯甲烷与甲醇的比例为80:20～0:100，进行梯度洗脱得到14个馏分，配合硅胶薄层色谱进行检测合并得到馏分C1～C6；C4经ODS柱色谱经甲醇-水梯度洗脱得到脱得到11个馏分，经分析液相合并得到D1～D5；其中D2(37:63洗脱)馏分经高效液相色谱分离，39％甲醇-水为流动相等度洗脱制备得到化合物I-V。
实施例4化合物I的鉴定
黄色针状结晶(石油醚-丙酮)，易溶于丙酮，难溶于氯仿；三氯化铁-铁氰化钾溶液显蓝色，提示结构中有酚羟基存在，10％硫酸乙醇溶液显色后黄色加深。(+)ESI-MS给出准分子离子峰m/z435[M+Na]+，(-)ESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z411，推测出该化合物的分子量412；HR-TOF-MS给出准分子离子峰m/z413.1596([M+H]+)，确定分子式为C23H24O7，不饱和度为12。紫外(257,332nm)光谱显示出了呫吨酮类化合物特征吸收信号。1H-NMR(600MHz,acetone-d6)谱中δ13.51(1H,s,1-OH)为与羰基缔合的酚羟基质子信号，如图1所示；δ7.52(1H,s,H-8)为一个孤立的芳香质子信号；δ7.52出现在较低场，可能是受到邻位羰基的磁各向异性效应的影响，其处于去屏蔽区使化学位移值偏大，推测其位于C-8位上；δ6.28(1H,s,H-2)为一个孤立的芳香质子信号；δ6.55(1H,dd,J＝17.6,10.6Hz,H-2')、5.08(1H,d,J＝17.6Hz,Ha-3')和4.92(1H,d,J＝10.6Hz,Hb-3')为末端双键上的烯氢质子信号，结合δ1.74(6H,s,CH3-4',5')的连接在季碳上的两个甲基质子信号，表明该结构中有1,1-二甲基-2-丙烯基取代；δH 4.86(1H,dd,J＝7.6,9.5Hz,H-2”),3.33(1H,dd,J＝7.6,15.9Hz,H2-1”),3.40(1H,dd,J＝9.5,15.9Hz,H2-1”),1.23 and 1.31(each 3H,s,H3-4”,5”)的氢信号，结合碳谱中出现的典型的信号δC 92.7(C-2”),71.6(C-3”),30.3(C-1”),25.8(C-5”),25.5(C-4”)，提示该结构中有一组2-(1-羟基-1-甲基乙基)-2,3-二氢呋喃环取代基存在。13C NMR(150MHz,acetone-d6)谱中共给出23个碳信号，其中δc 181.4为不饱和羰基碳信号，如图2所示。根据HMBC，HSQC,1H-1H COSY图谱(见图3-5)分析对氢、碳信号进行了归属，并确定了取代基位置。在HMBC谱中，δ13.51的缔合羟基质子信号与δc 162.5(C-1)，103.6(C-9a)和99.8(C-2)的碳信号有相关，确定羟基连接在1位；在HSQC谱中,δ6.28的氢信号与δc99.8(C-2)的碳直接相关，确定该芳香氢位于呫吨酮母核的C-2位上。根据H-1”与C-6,C-7,C-8，H-2”与C-6,C-7和H-8与C-6,C-1”存在的远程相关，可以确定2-(1-羟基-1-甲基乙基)-2,3-二氢呋喃环取代基以直线型的方式骈合在呫吨酮母核的C-6,C-7位上。δ7.97的游离酚羟基质子信号与δc 129.6(C-5)，147.0(C-10a)和153.7(C-6)的碳信号有相关，确定羟基连接在C-5位。综上所述，确定该化合物为6,8,11-trihydroxy-2-(2-hydroxypropan-2-yl)-9-(2-methylbut-3-en-2-yl)-2H-furo[3,2-b]xanthen-5(3H)-one，为一未见文献报道的新化合物，命名为bracteaxanthoneⅦ。其1H-NMR谱，13C-NMR谱信号归属见表1，关键HMBC谱图见下式，相关图谱见附图1-图5。
Figure BDA0002944300540000061
实施例5化合物Ⅱ的鉴定
黄色针状结晶(石油醚-丙酮)，易溶于丙酮，难溶于水；三氯化铁-铁氰化钾溶液显蓝色，提示结构中有酚羟基存在，10％硫酸乙醇溶液显色后黄色加深，HR-TOF-MS给出准分子离子峰m/z328.0939[M+H]+,确定分子式为C18H16O6，不饱和度为11。紫外(246,286nm)光谱显示出了呫吨酮类化合物特征吸收信号。1H NMR(600MHz,acetone-d6)谱中δ13.19(1H,s,1-OH)为与羰基缔合的酚羟基质子信号；δ6.30(1H,s,H-2)为一个孤立的芳香质子信号；δ7.34(1H,d,J＝7.8Hz,H-6),7.26(1H,t,J＝7.8Hz,H-7),7.57(1H,d,J＝7.8Hz,H-8)为一组芳环ABC偶合系统质子，δH4.82(1H,t,J＝8.6Hz,H-2'),3.26(1H,d,J＝8.6Hz,H-1'),1.19(3H,s,H3-4'),and 1.18(3H,s,H3-5')的质子信号，表明该化合物中有2,3-epoxide-3-methylbut-1-yl侧链基团取代；13C NMR(100MHz,acetone-d6)谱中共给出18个碳信号，其中δc 180.6为不饱和羰基碳信号。根据HMBC，HSQC，图谱分析对氢、碳信号进行了归属，并确定了取代基位置。在HMBC谱中，δ13.19的缔合酚羟基质子信号与δC 163.9(C-1),103.8(C-9a),and 93.7(C-2)碳信号相关，确定羟基连接在1位；在HSQC谱中,δ6.30氢信号与δc 93.7(C-2)碳信号相关，确定该芳香氢位于C-2位上。根据H-1'与C-3,C-4,C-4a，H-2'与C-4存在的远程相关，确定2,3-epoxide-3-methylbut-1-yl基连接在呫吨酮母核的C-4位上。综上所述，确定该化合物为3,7,9,12-tetrahydroxy-2,2-dimethyl-10-(2-methylbut-3-en-2-yl)-3,4-dihydropyrano[3,2-b]xanthen-6(2H)-one，为一未见文献报道的新化合物，命名为bracteaxanthoneⅧ。其1H-NMR谱，13C-NMR谱信号归属见表1，关键HMBC谱图见下式，相关图谱见附图6-图9。
Figure BDA0002944300540000062
表1.新化合物I和Ⅱ的1H and 13C NMR数据
Figure BDA0002944300540000071
实施例6化合物III的鉴定
黄色针状结晶(石油醚-丙酮)，三氯化铁-铁氰化钾溶液显蓝色，提示结构中有酚羟基存在。10％硫酸香草醛乙醇溶液烘烤加热显色后黄色加深。1H NMR(300MHz,acetone-d6)谱(见表2)中δ13.64(1H,s,1-OH)为与羰基缔合的羟基质子信号；δ7.66(1H,dd,J＝1.5,7.9Hz,H-8)、7.35(1H,dd,J＝1.5,7.9Hz,H-6)和7.23(1H,t,J＝7.9Hz,H-7)为苯环上一组ABC偶合的芳香质子信号，其均处于较低场的化学位移值提示该呫吨酮母核的一侧芳环上C-5位有含氧基团取代。δ6.59(1H,dd,J＝17.4,10.5Hz,H-1″)、5.46(1H,d,J＝17.4Hz,Ha-3″)和5.33(1H,d,J＝10.5Hz,Hb-3″)为末端双键上的烯氢质子信号,δ1.79(6H,s,CH3-4″,5″)为连接在季碳上的两个甲基质子信号，以上质子信号表明有1,1-二甲基-2-丙烯基取代。δ5.21(1H,brt,J＝7.0Hz,H-2″)、3.36(2H,d,J＝7.0Hz,H-1″)、1.77(3H，s,CH3-4″)和1.64(3H,s,CH3-5″)为一组典型的异戊烯基上的质子信号，提示有一异戊烯基取代。13C NMR(150MHz,acetone-d6)谱中共给出23个碳信号(见表2)，除了呫吨酮母核的13个碳信号外，还给出一组1,1-二甲基-2-丙烯基的碳信号δc 151.2,112.5,42.1,28.5×2，一组异戊烯基上的碳信号δc132.1,123.1,25.9,22.3,18.0。故鉴定为allanxanthone A.
实施例7化合物Ⅳ的鉴定
黄色针状结晶(石油醚-丙酮)，三氯化铁-铁氰化钾溶液显蓝色，提示结构中有酚羟基存在。10％硫酸香草醛乙醇溶液烘烤加热显色后黄色加深。1H NMR(300MHz,CDCl3)谱(见表2)中给出一个活泼质子信号δ13.23(1H,brs,1-OH)为与羰基缔合的羟基质子信号；在δ7.91(1H,d,J＝8.8Hz,H-8)和6.97(1H,d,J＝8.8Hz,H-7)处给出一对邻位偶合的芳香质子信号，根据较低场的化学位移(δ7.91)可将其归属为呫吨酮母核上的C-8,7位上；δ6.72,5.62(each 1H,d,J＝9.9Hz,H-1′,H-2′)为吡喃环上一对顺式偶合的烯氢质子信号，结合δ1.48(6H,s,H-4′,H-5′)质子信号推测该化合物为与吡喃环骈合的呫吨酮类化合物；δ5.16(1H,t,J＝7.0Hz,H-2″)、3.24(2H,d,J＝7.0Hz,H-1″)、1.85(3H,s,CH3-4″)和1.62(3H,s,CH3-5″)为典型的异戊烯基上的质子信号，提示有一异戊烯基取代；此外，δ4.12(3H,s,5-OCH3)为甲氧基质子信号。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱中共给出24个碳信号，其中δc 180.6为不饱和羰基碳信号；δc78.2为连氧碳信号；δc131.9,122.4,25.9,21.8，18.1为一组典型的异戊烯基上的碳信号。δc 61.0为甲氧基碳信号，其偏低场的化学位移表明甲氧基所在环上两个邻位被取代，即位于5位。故鉴定为5-O-methylxanthone V1。
实施例8化合物V的鉴定
黄色针状结晶(石油醚-丙酮)，三氯化铁-铁氰化钾溶液显蓝色，提示结构中有酚羟基存在。10％硫酸香草醛乙醇溶液烘烤加热显色后黄色加深，提示其可能为呫吨酮类化合物。氯化锶的氨性甲醇溶液反应后有沉淀生成，表明该化合物分子中可能存在邻二酚羟基取代。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)谱(见表2)中δ12.08(1H,s)为与羰基缔合的羟基质子信号；在δ7.23(1H,d,J＝8.7Hz)和6.62(1H,d,J＝8.7Hz)处给出两个邻位偶合的芳香质子信号；δ7.39(1H,s)由于受羰基的影响而位于较低场，推测为C-8位的芳氢质子。δ5.33(1H,t,J＝7.0Hz,H-2′)、3.32(2H,d,J＝7.0Hz,H-1′)、1.73(3H,s,CH3-4′)和1.69(3H,s,CH3-5′)为典型的异戊烯基上的质子信号，提示有一异戊烯基取代。13C NMR(150MHz,DMSO-d6)谱(见表2)中共给出18个碳信号，其中δc 181.0为羰基碳信号；δc 132.5，δc 121.9，δc 27.9，δc25.6，δc 17.7为典型的异戊烯基上的碳信号。故鉴定为1,4,5,6-tetrahydroxy-7-(3-methylbut-2-enyl)xanthone。
表2.化合物III-V的1H and 13C NMR数据
Figure BDA0002944300540000081
Figure BDA0002944300540000091
实施例9山竹皮呫吨酮类化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性实验
受试品：化合物I-V。
1.活性测定方法
0.1mL不同浓度(1、2、3、4、5mg/mL)的化合物I与0.1mLα－葡萄糖苷酶(1.25U/mL)充分混匀，加入0.1mL PNPG(1.5mmol/mL，pH7.4)，37℃水浴15min，加入3mL的碳酸钠溶(1mol/L)终止反应，在400nm处测定吸光度值。本底管和对照管中的pNPG和样品均用0.1mL的磷酸盐缓冲液(10mmol/L，pH7.4)代替。地参结合酚提取物对α－葡萄糖苷酶的抑制率用下式计算:
抑制率(％)＝[1－(A1－A2)]/A3×100式中：A1为样品管的吸光度值；A2为本底管的吸光度值；A3为对照管的吸光度值。
2.数据统计方法
实验数据用均值±标准差
Figure BDA0002944300540000103
表示，统计分析用SPSS17.0统计软件进行，组间比较采用单因素方差分析。以α＝0.05作为检验水准，P＜0.05提示存在统计学意义，P＜0.01提示差异显著。
实验结果:
表3化合物I-V的α-葡萄糖苷酶抑制活性
Figure BDA0002944300540000102
以上实验结果可以得出本发明涉及的2个新化合物(I-Ⅱ)，3个已知化合物(III-V)对α-葡萄糖苷酶具有较好抑制效果，化合物I活性相比阳性药阿卡波糖接近，化合物Ⅱ-V活性略低于阳性药，总体活性与阳性药效果相差不大。
实施例10山竹皮中呫吨酮类化合物体内动物降低餐后血糖实验
1.实验动物：
C57小鼠，4-6w，雄性，总共8组，每组8只，总计64只。
2.饲养条件：
SPF无菌环境饲养，25℃恒温环境，12h交替光照，充足食物和水供给。
3.动物分组：
第一组：正常组：正常饲料喂养。
第二组：模型组：2g/kg给予的蔗糖喂养。
第三组：阳性药组：2g/kg给予的蔗糖喂养，同时给予100mg/kg的阿卡波糖。
第四组：化合物I组：2g/kg给予的蔗糖喂养，同时给予100mg/kg的化合物I。
第五组：化合物Ⅱ组：2g/kg给予的蔗糖喂养，同时给予100mg/kg的化合物Ⅱ。
第六组：化合物III组：2g/kg给予的蔗糖喂养，同时给予100mg/kg的化合物III。
第七组：化合物Ⅳ组：2g/kg给予的蔗糖喂养，同时给予100mg/kg的化合物Ⅳ。
第八组：化合物V组：2g/kg给予的蔗糖喂养，同时给予100mg/kg的化合物V。
在给予蔗糖后0、15、30、60和120min从尾静脉采集血液样本，并用血糖仪测量血糖。根据梯形法计算120分钟内的曲线下面积(AUC)。
4.数据统计方法
实验数据用均值±标准差
Figure BDA0002944300540000111
表示，统计分析用SPSS17.0统计软件进行，组间比较采用单因素方差分析。以α＝0.05作为检验水准，P＜0.05提示存在统计学意义，P＜0.01提示差异显著。结果如图16和图17所示。
实验结果:
从图16(餐后血糖)和图17(血糖曲线下面积)可以看出在给予蔗糖喂养后小鼠的餐后血糖快速升高在餐后30min后达到血糖最高值，阿卡波糖和化合物I-V给药后，血糖具有明显降低，其化合物I-V降低餐后血糖效果与阿卡波糖相当。说明化合物I-V具有较好的降低体内餐后血糖的作用。
本发明所涉呫吨酮类新化合物，对α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用，体内动物验证具有较好的降低餐后血糖的效果，可用于开发抗糖尿病类药物，尤其针对临床阶段降糖药物。
本发明制备方法简单，重现性好，提取纯度高。获得的化合物具有较好的降糖活性。

Claims (10)

1.山竹皮中呫吨酮类化合物，其特征在于，结构式如式（Ⅰ）-式（Ⅱ）所示，
Figure DEST_PATH_IMAGE001
Figure 10769DEST_PATH_IMAGE002
。
2.权利要求1所述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）取山竹皮用75%的乙醇水热回流提取，减压蒸干得到浸膏；
2）依次用石油醚、氯仿和正丁醇进行萃取，结合薄层色谱检测，合并为A1~A3；
3）A2用硅胶柱色谱，以不同比例的石油醚-丙酮进行梯度洗脱，配合硅胶薄层色谱检测，得到洗脱馏分B1~B8；
4）将B4经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，配合硅胶薄层色谱检测，合并得到馏分C1~C6；
5）C4经ODS柱色谱经甲醇-水梯度洗脱得到10~15个馏分，经分析液相合并得到D1~D5；
6）D2~D3馏分经高效液相色谱分离，以甲醇-水为流动相进行等度洗脱制备得到化合物Ⅰ-Ⅱ。
3.根据权利要求2所述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤1）中，所述的回流提取中，回流提取2~3次，每次4~6小时，75%乙醇与干燥的桑叶的液料比为3.5:1~5:1。
4.根据权利要求3所述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤2）中，所述的萃取溶剂体积，石油醚、氯仿和正丁醇为浸膏水溶液的1.5-2.5倍。
5.根据权利要求4所述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤3）中，所述的石油醚-丙酮系统中，石油醚：丙酮的比例为100:0~0:100。
6.根据权利要求5所述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤4）中，所述的二氯甲烷-甲醇洗脱系统中，二氯甲烷与甲醇的比例为80:20~0:100。
7.根据权利要求6所述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤5）中，甲醇-水系统中甲醇与水的比例为20:80~40:60。
8.根据权利要求7所述的山竹皮中呫吨酮类化合物的提取分离方法，其特征在于，步骤6）中，所述的甲醇-水系统中，甲醇与水的比例为20:80~40:60。
9.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的山竹皮中呫吨酮类化合物和药学上可接受的载体。
10.权利要求1所述的山竹皮中呫吨酮类化合物在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性药物中的应用。
CN202110188695.0A 2021-02-19 2021-02-19 山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法和应用 Active CN113004299B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110188695.0A CN113004299B (zh) 2021-02-19 2021-02-19 山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110188695.0A CN113004299B (zh) 2021-02-19 2021-02-19 山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113004299A CN113004299A (zh) 2021-06-22
CN113004299B true CN113004299B (zh) 2022-11-11

Family

ID=76402937

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110188695.0A Active CN113004299B (zh) 2021-02-19 2021-02-19 山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113004299B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114957273B (zh) * 2022-06-17 2023-04-18 右江民族医学院 弯萼金丝桃中4种具有抑制群感效应活性的氧杂蒽酮类新化合物及其分离纯化方法和应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102796113B (zh) * 2012-09-03 2014-02-19 云南民族大学 一种呫吨酮类化合物及其制备方法与应用
CN103232427B (zh) * 2013-04-25 2014-10-08 云南民族大学 一种呫吨酮类化合物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113004299A (zh) 2021-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3412679B1 (en) Baicalin magnesium, preparation method thereof and application of same
CN111704544B (zh) 一种半日花烷型二萜类化合物及其分离方法和应用
He et al. Antifungal and wound healing promotive compounds from the resins of Dracaena cochinchinensis
CN113004299B (zh) 山竹皮中具有降低餐后血糖的呫吨酮类化合物及其提取方法和应用
CN112898357B (zh) 金莲花中一种二萜苷类新化合物及其分离纯化方法和应用
CN101676281B (zh) 苯并大环内酯类化合物(3r)-去-o-甲基毛狄泼老素、其衍生物及其制备方法和用途
CN114146083B (zh) 小槐花提取物和活性成分及其在制备治疗糖脂代谢综合紊乱的产品方面中的应用
CN111217873B (zh) 一种倍半萜苷单体化合物及其制备方法与应用
CN111253352B (zh) 一种从中药斑叶兰中提取分离的化合物及其制备方法和应用
CN111067924A (zh) 一种具有抑制醛糖还原酶活性的琼花果实总木脂素提取物及其活性成分和用途
CN107281255B (zh) 刺槐叶活性部位及其制备方法和应用
CN107513092B (zh) 一种丙二酰基人参皂苷Rb1的制备方法及其医用用途
CN110143989A (zh) 一种新型鞣花单宁类α-葡萄糖苷酶抑制剂及其制备方法
CN112176018B (zh) 基于炙甘草制备甘草次酸及其衍生物的方法和用途
CN114177164B (zh) 白花败酱蒽醇i的制备方法及其应用
CN110117630A (zh) 一种右旋糖酐蔗糖酶的糖基化应用以及将其用于制备咖啡酸苯乙酯糖苷的方法
KR100200182B1 (ko) 황기 유래의 이소플라본을 함유하는 간기능 개선제
CN112538100B (zh) 一种从黄柏中提取的具有抗炎活性的异喹啉生物碱苷类化合物及其制备方法与应用
CN114507264B (zh) 金丝皇菊的提取单体皇菊素a及其提取方法和应用
CN114276339B (zh) 一种倍半木脂素类化合物及其分离方法和应用
CN118126050B (zh) 一种6-甲氧基咔唑生物碱类化合物及其制备方法和应用
AU2021104334A4 (en) Phenanthroindolizidine alkaloid and preparation method thereof
CN111812252B (zh) 一种对植物中降糖功能化合物的筛选及分离方法
CN111620819B (zh) 芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途
CN102000061B (zh) 硝基苯甲酰水飞蓟宾用于制备糖苷酶抑制剂的药物用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant