CN102764286B - 一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，包括以下步骤：利用大孔树脂吸附雪莲浸膏粉溶液，再经过水和一定浓度的乙醇洗脱后浓缩分别得到雪莲总多糖和雪莲总黄酮。本发明的有益效果为：本发明能分离与富集雪莲浸膏粉中的总黄酮，使总黄酮含量低的雪莲浸膏粉中总黄酮的含量进一步提高，可达35%以上，并同时得到了纯度在25%以上的雪莲总多糖，延伸了产品产业链，节约资源。

Description

一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法

技术领域

本发明涉及分离与富集中药分离物中活性成分的方法，具体涉及一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法。

背景技术

雪莲浸膏粉，是以新疆特产的享有“百草之王”美誉的珍稀药材雪莲为原料，采用现代科学技术方法与传统制备方法相结合生产的一种中药分离制剂，是一个含有多种成分的混合物，主要含有雪莲多糖类、黄酮类、蛋白质、氨基酸类、倍半萜类化合物等。该产品具有抗氧化、抗辐射、延缓衰老、抗炎镇痛、抗风湿、抗缺氧、抗癌等生物活性，广泛用作保健食品、化妆品的天然添加剂。雪莲黄酮类化合物是该制剂的主要化学成分之一，具有显著的清除超氧阴离子自由基、清除羟基自由基、对抗NADH过氧化物酶氧化的生物活性，表现出较强抗氧化、抗辐射、延缓衰老作用，因此，雪莲浸膏粉具有广阔的市场，已经远销韩国、台湾等地区。然而，随着下游产品市场变化，对雪莲浸膏粉中总黄酮的含量、纯度、溶解性、杂质等方面提出了更高的要求。现有生产工艺技术难以满足高标准要求，这为雪莲制剂市场发展带来了障碍。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的不足，采用大孔树脂分离与富集雪莲浸膏粉中的总黄酮，并得到副产品雪莲总多糖，延伸了产品产业链，节约资源。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，包括以下步骤：

1）将雪莲浸膏粉与水混合，得到雪莲浸膏粉溶液；

2）将步骤1）得到的雪莲浸膏粉溶液缓慢加入到经预处理的大孔树脂中，吸附后得到雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物；

3）将步骤2）得到的吸附后雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物用水洗脱，收集洗脱液，得洗脱液A；

4）将步骤3）得到的洗脱液A合并，浓缩至适量，再用乙醇溶液沉淀，得到雪莲总多糖；

5）将步骤2）经水洗脱后得到的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的剩余混合物用乙醇溶液再次洗脱，收集洗脱液,得洗脱液B，合并、浓缩、冻干，得到雪莲总黄酮。

进一步的，上述分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，所述步骤1）中，水的用量为，按照体积比水：大孔树脂柱床体积为（5-10）：1。

进一步的，上述分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，所述步骤2）中，大孔树脂的孔径为20-200                                                ，大孔树脂的预处理方法为：（A）除杂：取大孔树脂，用2-5倍量80%-95%乙醇加热回流洗脱，洗至洗脱液蒸干后几乎无残留物，挥干溶剂后保存备用；（B）装柱：用1-2.5倍量80%-95%乙醇与大孔树脂混合后缓慢一次性加入柱中，继续用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇，至流出液与水混合1：（3-8）不呈白色混浊为止；（C）换溶剂：用3-8倍大孔树脂柱床体积量的水洗去乙醇，抽干；吸附时间为8-16小时。

大孔树脂柱床体积（Bed Volume，BV）是指经充分膨胀的大孔树脂本身的体积以及大孔树脂内部和大孔树脂颗粒之间溶剂体积的总和。

进一步的，上述分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，所述步骤2）中，大孔树脂的用量为按照质量比大孔树脂：雪莲浸膏粉为（10-20）：1。

进一步的，上述分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，所述步骤3）中，洗涤用水的量为按照体积比水：大孔树脂柱床体积为（5-15）：1；洗涤用水的流速为每小时用水为大孔树脂柱床体积2-4倍的体积；浓缩至大孔树脂柱床体积的0.5-2.5倍。

进一步的，上述分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，所述步骤4）中，乙醇溶液浓度体积百分浓度为80-95%，乙醇溶液用量为按照体积计乙醇溶液：浓缩液为（1：2）-（3：2）。

进一步的，上述分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，所述步骤5）中，乙醇溶液浓度体积百分浓度为20-80%，乙醇溶液的用量按照体积计为大孔树脂柱床体积的5-15倍，乙醇溶液的流速为每小时大孔树脂柱床体积2-4倍的体积；洗脱液浓缩至相对密度为1.1-1.5；所述冻干条件为温度-50—-80℃，操作压力为-0.04—-0.1Mpa，时间为10-20小时。

本发明的有益效果为：本发明能分离与富集雪莲浸膏粉中的总黄酮和总多糖，使总黄酮含量低的雪莲浸膏粉中总黄酮的含量进一步提高，可达35%以上，并同时得到了纯度在25%以上的雪莲总多糖，延伸了产品产业链，节约资源。

具体实施方式

雪莲浸膏粉：新疆天山莲药业有限公司（20111001）。

大孔树脂：型号为D101（天津晶莹提取树脂有限责任公司）、AB-8（南开大学化工厂）、DM301（天津晶莹提取树脂有限责任公司）、XDA-5（郑州勤实科技有限公司）和HPD100（河北沧州宝恩化工有限公司）。

实施例1：

分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，包括以下步骤：

1）将100g雪莲浸膏粉与5倍大孔树脂柱床体积的水混合，得到雪莲浸膏粉溶液，

2）将步骤1）得到的雪莲浸膏粉溶液缓慢加入到经预处理的大孔树脂1000g中，大孔树脂孔径为130，吸附8小时后得到雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物；

3）将步骤2）得到的吸附后的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物用5倍大孔树脂柱床体积的水洗脱，洗涤流速为每小时2倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液A，合并、浓缩至0.5倍大孔树脂柱床体积，得到洗脱液A的浓缩液；

4）将步骤3）得到的洗脱液A的浓缩液用80%浓度的乙醇溶液沉淀，乙醇溶液的加入量为按照体积比乙醇溶液：洗脱液A的浓缩液为1：2，得到雪莲总多糖；

5）将步骤2）得到的经水洗脱后得到的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的剩余混合物用20%浓度的乙醇溶液再次洗脱，乙醇溶液用量为按体积计为5倍大孔树脂柱床体积，洗脱流速为每小时2倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液B，合并、浓缩至相对密度为1.1，再冻干，冻干条件为温度-50℃，压力-0.04Mpa，时间为10小时，得到雪莲总黄酮。

实施例2：

分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，包括以下步骤：

1）将100g雪莲浸膏粉与10倍大孔树脂柱床体积的水混合，得到雪莲浸膏粉溶液，

2）将步骤1）得到的雪莲浸膏粉溶液缓慢加入到经预处理的大孔树脂2000g中，大孔树脂孔径为30，吸附16小时后得到雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物；

3）将步骤2）得到的吸附后的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物用15倍大孔树脂柱床体积的水洗涤，洗涤流速为每小时4倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液A，合并、浓缩至2.5倍大孔树脂柱床体积，得到洗脱液A的浓缩液；

4）将步骤3）得到的洗脱液A的浓缩液用95%浓度的乙醇溶液沉淀，乙醇溶液的加入量为按照体积比乙醇溶液：洗脱液A的浓缩液为3：2，得到雪莲总多糖；

5）将步骤2）得到的经水洗脱后得到的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的剩余混合物用80%浓度的乙醇溶液再次洗脱，乙醇溶液用量为按体积计为15倍大孔树脂柱床体积，洗脱流速为每小时4倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液B，合并、浓缩至相对密度为1.5，再冻干，冻干条件为温度-80℃，压力-0.1Mpa，时间为20小时，得到总黄酮。

实施例3：

分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，包括以下步骤：

1）将100g雪莲浸膏粉与8倍大孔树脂体积的水混合，得到雪莲浸膏粉溶液，

2）将步骤1）得到的雪莲浸膏粉溶液缓慢加入到经预处理的大孔树脂1500g中，大孔树脂孔径为140，吸附12小时后得到雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物；

3）将步骤2）得到的吸附后的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物用10倍大孔树脂柱床体积的水洗涤，洗涤流速为每小时3倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液A，合并、浓缩至1.5倍大孔树脂柱床体积，得到洗脱液A的浓缩液；

4）将步骤3）得到的洗脱液A的浓缩液用90%浓度的乙醇溶液沉淀，乙醇溶液的加入量为按照体积比乙醇溶液：洗脱液A的浓缩液为1：1，得到雪莲总多糖；

5）将步骤2）得到经水洗脱后得到的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的剩余混合物用70%浓度的乙醇溶液再次洗脱，乙醇溶液用量为按体积计为10倍大孔树脂柱床体积，洗脱流速为每小时3倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液B，合并、浓缩至相对密度为1.3，再冻干，冻干条件为温度-65℃，压力-0.07Mpa，时间为15小时，得到总黄酮。

表1为实施例1-3处理过的雪莲浸膏粉得到的总黄酮含量和总多糖含量与对照组的对比结果。对照组为未以本发明提供的分离与富集方法处理过的雪莲浸膏粉中的总多糖含量和总黄酮含量。

表1

。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将100g雪莲浸膏粉与5倍大孔树脂柱床体积的水混合，得到雪莲浸膏粉溶液，

2）将步骤1）得到的雪莲浸膏粉溶液缓慢加入到经预处理的大孔树脂1000g中，大孔树脂孔径为130                                                ，吸附8小时后得到雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物；

3）将步骤2）得到的吸附后的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物用5倍大孔树脂柱床体积的水洗脱，洗涤流速为每小时2倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液A，合并、浓缩至0.5倍大孔树脂柱床体积，得到洗脱液A的浓缩液；

4）将步骤3）得到的洗脱液A的浓缩液用80%浓度的乙醇溶液沉淀，乙醇溶液的加入量为按照体积比乙醇溶液：洗脱液A的浓缩液为1：2，得到雪莲总多糖；

5）将步骤2）得到的经水洗脱后得到的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的剩余混合物用20%浓度的乙醇溶液再次洗脱，乙醇溶液用量为按体积计为5倍大孔树脂柱床体积，洗脱流速为每小时2倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液B，合并、浓缩至相对密度为1.1，再冻干，冻干条件为温度-50℃，压力-0.04Mpa，时间为10小时，得到雪莲总黄酮。

2.一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将100g雪莲浸膏粉与10倍大孔树脂柱床体积的水混合，得到雪莲浸膏粉溶液，

2）将步骤1）得到的雪莲浸膏粉溶液缓慢加入到经预处理的大孔树脂2000g中，大孔树脂孔径为30，吸附16小时后得到雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物；

3）将步骤2）得到的吸附后的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物用15倍大孔树脂柱床体积的水洗涤，洗涤流速为每小时4倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液A，合并、浓缩至2.5倍大孔树脂柱床体积，得到洗脱液A的浓缩液；

4）将步骤3）得到的洗脱液A的浓缩液用95%浓度的乙醇溶液沉淀，乙醇溶液的加入量为按照体积比乙醇溶液：洗脱液A的浓缩液为3：2，得到雪莲总多糖；

5）将步骤2）得到的经水洗脱后得到的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的剩余混合物用80%浓度的乙醇溶液再次洗脱，乙醇溶液用量为按体积计为15倍大孔树脂柱床体积，洗脱流速为每小时4倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液B，合并、浓缩至相对密度为1.5，再冻干，冻干条件为温度-80℃，压力-0.1Mpa，时间为20小时，得到总黄酮。

3.一种分离与富集雪莲浸膏粉中总黄酮和总多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将100g雪莲浸膏粉与8倍大孔树脂体积的水混合，得到雪莲浸膏粉溶液，

2）将步骤1）得到的雪莲浸膏粉溶液缓慢加入到经预处理的大孔树脂1500g中，大孔树脂孔径为140，吸附12小时后得到雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物；

3）将步骤2）得到的吸附后的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的混合物用10倍大孔树脂柱床体积的水洗涤，洗涤流速为每小时3倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液A，合并、浓缩至1.5倍大孔树脂柱床体积，得到洗脱液A的浓缩液；

4）将步骤3）得到的洗脱液A的浓缩液用90%浓度的乙醇溶液沉淀，乙醇溶液的加入量为按照体积比乙醇溶液：洗脱液A的浓缩液为1：1，得到雪莲总多糖；

5）将步骤2）得到经水洗脱后得到的雪莲浸膏粉溶液和大孔树脂的剩余混合物用70%浓度的乙醇溶液再次洗脱，乙醇溶液用量为按体积计为10倍大孔树脂柱床体积，洗脱流速为每小时3倍大孔树脂柱床体积，收集洗脱液，得洗脱液B，合并、浓缩至相对密度为1.3，再冻干，冻干条件为温度-65℃，压力-0.07Mpa，时间为15小时，得到总黄酮。