CN102740888A - Il-6抗体及其用途 - Google Patents

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B·科瓦斯维奇
J·T·L·史密斯
M·利顿
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Abstract

本发明涉及使用IL-6拮抗剂，例如对IL-6具有结合特异性的Ab1抗体或抗体片段，来预防或治疗疾病或提高有相应需要的患者的生命力或生活质量的治疗方法。在优选实施方案中，这些患者将包括在治疗之前表现出(或有风险发生)升高的血清C反应蛋白水平、降低的血清白蛋白水平、升高的D-二聚体或其它凝血级联相关蛋白、恶病质、发热、虚弱和/或疲劳的那些患者。本发明的疗法还可包括施用其它活性物，如化疗药物、抗凝血剂、他汀类药物及其它。本发明的其它优选实施方案涉及使用根据本发明的IL-6拮抗剂治疗或预防类风湿性关节炎的治疗组合物和方法，尤其是皮下和静脉制剂和给药方案，以及预防或治疗接受移植细胞、组织或器官的受试者的GVHD或白血病复发的方法，其在治疗或预防粘膜炎中的用途，以及其增强化疗药物和放射对癌症、尤其对放疗或化学疗法(如EGFR抑制剂)产生耐药性的癌症的细胞毒性、细胞凋亡和抗转移或抗侵袭作用的用途。

Description

IL-6抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2010年11月4日提交的临时申请第61/410,169号、2010年6月25日提交的临时申请第61/358,615号、2010年6月17日提交的临时申请第61/355,819号和2010年4月19日提交的临时申请第61/325,547号的优先权。本申请还要求均在2009年11月24日提交的美国专利第12/624,965号、第12/624,830号、第12/624,816号和第12/624,778号的优先权。前面提到的每个临时或非临时申请的公开内容包括所有序列信息在此通过引用整体并入。
2009年11月23日创建的大小为332,081字节的名为“67858o706005.txt”的文件中的序列表在此通过引用整体并入。
发明背景
发明领域
本发明是公开于上文提到的专利申请的申请人的在先发明的延伸，涉及新的抗IL-6抗体、使用抗IL-6抗体的新疗法和治疗方案，和含有抗IL-6抗体的药物制剂。在优选实施方案中，抗IL-6抗体是Ab1，其包括其兔和人源化形式，以及其重链、轻链、片段、变体和CDRs，或如Ab1一样特异性结合其完整人IL-6多肽片段上的相同的线性或构象性表位的抗体或抗体片段。本发明的申请尤其涉及本文称之为Ab1的示例性人源化抗体和其变体的优选制剂和治疗用途。在优选实施方案中，抗IL-6抗体具有至少约25天的体内半衰期、提高白蛋白的体内作用、具有降低C反应蛋白的体内作用、具有恢复正常凝血状况的体内作用、拥有对IL-6的小于约50皮摩尔浓度的结合亲和力(Kd)，和/或与IL-6的小于或等于10-4S-1的离解率。
本发明还涉及筛选与IL-6有关的疾病和病症的方法，和通过施用所述的抗体或其片段或变体来预防或治疗与IL-6有关的疾病或病症的方法。
在一方面，本发明涉及提高有需要患者的生命力或生活质量的方法，其包括给患者施用抗IL-6抗体，如Ab1或其片段或变体，从而降低患者的C反应蛋白(“CPR”)水平，和/或提高患者的白蛋白水平，和任选地监测患者以测定患者的CPR和/或白蛋白水平。
在另一方面，本发明涉及降低有需要患者的C反应蛋白水平的方法，其包括给患者施用IL-6拮抗剂如Ab1，从而降低患者的CPR水平，并监测患者以评估CPR水平。在另一方面，本发明涉及提高有需要患者的白蛋白水平的方法，其包括给患者施用IL-6拮抗剂如Ab1，从而提高患者的白蛋白水平，并监测患者以评估白蛋白水平。
在另一方面，本发明涉及预防或治疗有需要患者(例如，CPR水平升高的患者)的恶病质、虚弱、疲劳和/或发热的方法，其包括给患者施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体，从而使患者的恶病质、虚弱、疲劳和/或发热改善或恢复到正常状态，和任选地监测患者以评估恶病质、虚弱、疲劳和/或发热。在另一个实施方案中，本发明还涉及本发明的抗IL-6抗体和抗体片段用于预防或治疗粘膜炎(例如，口腔或胃肠道粘膜炎)的用途。口腔和胃肠道粘膜炎是多种形式的放疗和化学疗法引起的毒性。它对健康、生活质量和与治疗有关的经济后果有很大的影响。它还通过限制患者对最佳的杀肿瘤治疗的忍受能力，间接影响抗肿瘤治疗的成功。粘膜炎的复杂的发病机理最近才被知晓且反映出包含上皮和粘膜下层的所有细胞和组织类型的动态相互作用。对引起治疗诱导性粘膜损伤的分子事件的识别已经为机制干预提供靶标以预防和治疗粘膜炎。
在历史上，认为粘膜炎单独是上皮损伤引起的结果。据假设，放疗或化学疗法非特异性靶向基底上皮的快速增殖的细胞，导致组织的自我更新能力丧失。和粘膜炎有关的粘膜上皮萎缩、变薄和溃烂被认为是这些事件引发的结果。另外，我们相信创伤和口腔微生物会促进这一过程。
通常认为放疗诱导性粘膜炎是‘由外而内’的过程，其中DNA链断裂发生在口腔基底上皮细胞内。化学疗法诱导性粘膜炎主要由基底细胞损伤引起，基底细胞损伤发生在药物从粘膜下层血液供给渗透到这些细胞时。唾液传播的化疗剂在粘膜炎诱导中的作用也已被提出，但未被证实。化学疗法诱导性粘膜炎还会因伴随的骨髓抑制进一步加剧。
放疗或化学疗法诱导性粘膜炎始发于对基底上皮细胞和下面的组织的细胞的直接损伤。DNA链断裂会引起细胞死亡或损伤。非DNA损伤始发于多种机制，其中一些是活性氧物种的生成所介导的。放疗或化学疗法是内皮细胞、成纤维细胞和上皮细胞中若干损伤产生途径的有效活化剂。在这些细胞中，转录因子如核因子κB(NF-κB)和NRF2的活化作用引起调制损害应答的基因的上调。免疫细胞(巨噬细胞)产生促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6，引起进一步的组织损伤。这些信号传导分子还参与了增强放疗和化学疗法的原始作用的正反馈回路。例如，TNF-α激活粘膜中的NF-κB和神经磷脂酶的活性，从而引起更多的细胞死亡。另外，对上皮干细胞的直接和间接损害导致更新能力丧失。结果，上皮开始变薄，患者开始经历粘膜炎的早期症状。
观察到粘膜炎出现在对许多不同的癌症包括头颈癌、多发性骨髓瘤、结肠直肠癌进行化学疗法或放疗期间，因为粘膜炎引起的问题，可能妨碍进一步的放疗或化疗并且还阻碍营养作用(这是因为粘膜炎在吞咽和消化期间引起不适)。
粘膜炎最常见的症状包括口腔发红、干燥或肿胀、进食或饮水时灼热或不适、口腔和咽喉中出现开放性溃疡、腹部绞痛，和压痛或直肠红肿或溃疡。实质上粘膜炎涉及口腔和消化道内层炎症，且常发生在癌症患者经过化疗和放射治疗之后。脸颊、牙龈、软板、口咽、舌顶部和两侧和口底，以及食管和直肠区可能会受到影响。伴有发红和肿胀，患者通常经历强烈的灼痛。
尽管存在增加粘膜炎的可能性和严重性的因子，但没有可靠的方法预测谁会受影响。粘膜炎在老年患者中不仅更常见，而且其崩溃程度更具有削弱性。如果患者不常做口腔卫生保健或其营养状况受损，粘膜炎将有加重的趋势。先前存在的粘膜感染或刺激可能也会导致更严重的粘膜炎情况。
用于治疗癌症的药物的种类及其被施给的方案可能会影响得粘膜炎的风险。例如，阿霉素和甲氨蝶呤常常会引起粘膜炎。当通过连续静脉(IV)输注施用小剂量的化疗剂氟尿嘧啶时，其通常不严重影响粘膜。如果方案调整，以在更短的时间内(通常经过5天)施用更高剂量的氟尿嘧啶时，其会导致非常严重的疼痛的剂量限制的粘膜炎病状。经受高剂量化学疗法和骨髓解救治疗的患者经常会得粘膜炎。
另外，当对口腔施用放疗，或当5天内每天剂量超出180cGy时粘膜炎易于发展。组合疗法(不论是对口腔施用多种化疗剂还是化学疗法和放疗)会增加粘膜炎的发病率。
目前没有真正的粘膜炎治愈方法，治疗的目标在于预防和处理症状。粘膜炎通常在治疗几周后随着细胞重生而消退，且只是偶尔需要停止治疗。在某些情况下，将会改变药物疗法以施给较少的毒性药剂。
有风险患粘膜炎的患者应谨慎注意他们的口腔卫生，经常用柔软的牙刷刷牙并仔细用未上蜡的牙线洁牙。如果出现牙龈出血，患者应用软的海绵棒或纱布代替牙刷。假牙也应定期清理。患者应保持体内水分充足，经常饮用液体并每日漱口数次。应避免使用含有酒精或双氧水的漱口剂，因为它们可使口腔干燥和增加疼痛。嘴唇也应该保持湿润。应避免对口的物理刺激。如果时间允许，牙齿问题，如蛀牙或假牙不适，应该在开始癌症治疗之前寻求牙医解决。患者一般更适合食用温和的、中等温度的食物。辛辣、酸性、极热或极冷的食物会刺激粘膜。烟草和酒精也应避免。
医院职员和患者自己要经常检查口腔以寻找粘膜炎的迹象和症状。粘膜炎的迹象(炎症、白色或黄色的光泽粘膜发展成红色、阴冷的疼痛的膜)可能早在施用化学疗法四天后出现。有时使用碳酸氢钠漱口剂来降低口腔菌群的数量并促进舒适，虽然没有科学证据表明这是有益的。通常，患者会每隔几个小时用一杯水中含1/2茶匙(tsp)盐和1/2(tsp)茶匙小苏打的溶液漱口。
粘膜炎患者需要经常缓解疼痛。在某些情况下，用抗酸药(maalox)、赛罗卡因(xylocaine)和盐酸苯海拉明的混合物冲洗可以缓解疼痛。然而，由于赛罗卡因的麻木作用，味觉可能会被改变。更糟的是，它可能会降低人体的自然咽反射，可能造成吞咽困难。涂层剂如白陶土和果胶制剂(kaopectate)和氢氧化铝凝胶剂也可以缓解症状。用苄达明冲洗，不仅在控制疼痛，而且在阻止粘膜炎的发展中也有不错的前景。更严重的疼痛可能需要含有可待因的液体泰诺，甚至静脉内阿片类药物。严重疼痛患者可能无法进食，可能还需要静脉(静脉注射管)注射营养补充剂。
一种叫做冷冻疗法的治疗方法对正在接受氟尿嘧啶(按照上述5天、高剂量方案施用)治疗的患者显示出不错的前景。患者在30分钟的药物输注期间，不断在口腔中移动冰屑，引起血管收缩，从而降低药物影响口腔粘膜的能力。
过去曾尝试使用洋甘菊(chamomile)和别嘌呤醇漱口剂来控制粘膜炎，但研究发现它们无效。目前正在评价生物反应调节剂，以确定它们在控制粘膜炎中可能发挥的作用。最近的使用局部抗菌含片的研究已显示出好的前景，但需要更多的研究。
因此，本领域急需治疗和预防粘膜炎(包括口腔粘膜炎和胃肠道粘膜炎)的改进方法，因为这种情况会损害化学疗法或放疗癌症治疗的功效，而且这种情况引起极端的疼痛和不适，对癌症患者的生活质量产生不利影响。
在文献(Rossi等,Bone Marrow Transplantation 36:771-779(2005))中已报道接受化学疗法(地塞米松和美法仑)和自体干细胞移植(ASCT)并施用抗IL-6抗体(BE8)的多发性骨髓瘤患者CPR水平降低，发热显著减少，并且粘膜炎的发病和严重性降低。具体地说，相比于没有接受抗IL-6抗体的患者，治疗患者的粘膜炎毒性低不需要输注吗啡。此外，如营养的口服摄取和日常活动变得更好所证明，胃肠道粘膜炎症状如腹泻减轻且生活质量得到改善。
如本申请中讨论，本发明的抗IL-6抗体和抗体片段有效地降低治疗患者的CPR水平、恶病质和发热并提高血清白蛋白水平、改善凝血状况和降低血栓形成的趋向。这些抗体引起这些活动是源于它们对IL-6(一种引发许多生物效应的炎症性细胞因子)的抑制作用。另外，基于这些发现，本发明的抗IL-6抗体可用于防止癌症治疗期间可能出现的贫血或骨髓抑制，并可对包括骨髓或干细胞移植的治疗有益。
再者，由于本发明抗体的抗炎作用和其对骨髓抑制和贫血(其另外可能出现在放疗和化学疗法中)的有益影响，进一步预计本发明的抗体可以用于治疗或预防口腔和胃肠道粘膜炎，尤其是由于化学疗法或放疗疗程而出现的粘膜炎。
在本发明的该实施方案中，抗IL-6抗体或抗体片段将会预防性地施用给(例如)因为将要遭受化学疗法和放疗疗程而有很大风险患有口腔或胃肠道粘膜炎的患者，和/或施用给已经表现出如上所述的粘膜炎症状的患者。由于其对血细胞和炎症的改善作用，本发明的抗体会促进正常化或恢复在粘膜炎期间出现的口腔和胃肠道粘膜的组织损伤。
由于粘膜炎是某些癌症的放疗或化疗(其中治疗可能会影响粘膜)期间的显著问题，所述癌症如头颈癌、食管癌、咽喉癌、肺癌、胃肠道癌症如胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌，以及血液肿瘤如多发性骨髓瘤，本发明具体包括通过施用本发明的抗IL-6抗体预防或治疗这些病状中可能出现的粘膜炎的方法。另外，本发明还涵盖对接受化学疗法或放疗和自体干细胞移植或骨髓移植(如多发性骨髓瘤，和白血病或淋巴瘤)患者的粘膜炎的预防和治疗方法。众所周知，粘膜炎是这些患者的重大忧虑。
在另一个实施方案中，本发明涉及预防或治疗高凝状态的患者血栓形成的方法，其包括给患者施用抗IL-6抗体，如Ab1或其片段或变体，藉此患者的凝血状况得到改善或恢复至正常状态，和任选地监测患者以评估凝血状况。
在另一个实施方案中，本发明涉及本发明的抗IL-6抗体(如Ab1或其人源化形式)用于治疗或预防有需要受试者的类风湿性关节炎的用途。在本申请中，我们为皮下和静脉施用衍生于Ab1的优选人源化抗体(又叫做ALD-518)，提供显示安全性、药代动力学和药效动力学的临床数据，所述人源化抗体含有包含在SEQ ID NO:19和20(也在下面显示)中的可变重链和轻链。该临床数据还证明这一抗体改善了已皮下或静脉施用ALD-518的类风湿性关节炎患者的疾病活动度。
SEQ ID NO:19
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL
SEQ_ID_NO_20
IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNA
本发明提供数据确立当以单一的SC剂量施用时，抗IL-6抗体ALD518耐受性良好、注射部位一般反应轻微。SC ALD518的生物利用度是IV ALD518的约60%，且半衰期为约30天。观察到CPR(C反应蛋白)快速而显著地降低，其在评估中持续24周。
当皮下施用(约30天)时，ALD518的半衰期与先前通过IV施用观察到的半衰期相似。另外，皮下施用ALD518引起血清CPR快速而较大的降低，且在研究的前12周期间观察到的CPR的降低在评估中持续24周。这些结果也和通过IV施用观察到的结果相似。总之，这些结果支持ALD518用于治疗RA，以及预防或治疗本文所述的其它IL-6相关病状的用途。这些治疗方案可和其它的RA治疗药物，包括甲氨蝶呤或其它本文所述的和本领域普遍已知的RA药物联合使用。
在另一方面，本发明提供通过皮下或静脉施用本发明的抗IL-6抗体或抗体片段(如人源化Ab1抗体)来治疗类风湿性关节炎的具体给药方案和剂型。
在另一方面，本发明提供新药物组合物及其在新组合疗法中的用途，其包括施用抗IL-6抗体如Ab1或其片段或变体，和至少一种其它的治疗化合物如他汀类药物、抗凝血剂、止呕剂、抗恶心剂、抗恶病质剂、化疗剂、抗细胞因子剂等等。
消瘦、疲劳和肌肉无力，是晚期癌症患者非常常见的症状，这些症状可随着癌症的不断发展而恶化。疲劳、消瘦和肌肉无力会对晚期癌症患者的恢复造成显著的负面影响，例如通过打乱生活方式和人际关系和影响患者继续癌症治疗的意愿和能力。已知的解决疲劳、消瘦和肌肉无力的方法包括定期健身和运动、保存患者精力的方法以及解决贫血诱导性疲劳和肌肉无力的治疗。然而，本领域仍需要改善癌症患者疲劳、消瘦和肌肉无力的方法和/或治疗。
血栓形成是导致癌症患者死亡的重要原因。Bick,N Engl J Med349:109-111(2003)。例如，严重的威胁生命的血栓形成事件发生在约6%的肺癌患者中。Alguire等,J Clin Oncol 2004第22卷(7月15日增补)第14S期:8082。癌症患者经常表现出血液高凝状态，其中凝血系统凝血倾向增加。Rickles和Edwards,Blood 62:14-31(1983)。血液高凝的标志物与至少某些癌症的患者预后不佳有关。Bick,SeminThromb Hemostat 18:353-372(1992)；Buccheri等,癌症97:3044-3052(2003)；Wojtukiewicz,Blood Coagul Fibrinolysis 3:429-437(1992)。血液高凝的原因包括癌症本身和癌症治疗(如，化学疗法)。血液高凝导致血栓形成事件的风险增加，当患者长期卧床时这种风险会进一步加重。如果没有禁忌，抗凝治疗可赋予某些癌症存活的效益。Lebeau等,癌症74:38-45(1994)；Chahinian等,J Clin Oncol 7:993-1002(1989)。然而，治疗选择往往是有限的，因为许多癌症患者大出血的风险升高，排除了抗凝血剂的施用，否则其可以预防性施给以降低血栓形成的风险。总之，可用的用于预防癌症患者血栓形成的方法不能令人满意，所以需要新的疗法。这样的疗法将会促进癌症患者存活并提高生活质量。
血栓形成还是导致其它患者群中不良事件和死亡的重要原因，所述患者包括有慢性疾病或慢性炎症的患者、外科手术患者、长期卧床的个体，以及骨科患者。当没有其它禁忌时，预防性方法包括小腿加压(calf compression)和抗凝血剂(如，低分子量肝素)。这些预防性方法可以降低但不能消除血栓形成的风险。由于这些预防性方法并非总是有效且对某些患者禁止使用，并由于抗凝血剂可以引起潜在的致命副作用如大出血，所以需要预防这些患者血栓形成的另外方法。这些方法应改善患者预后。
白介素-6(下文称为“IL-6”)(还称为干扰素-β2；B细胞分化因子；B细胞刺激因子-2；肝细胞刺激因子；杂交瘤生长因子；和浆细胞瘤生长因子)是参与许多生物过程的多功能细胞因子，所述生物过程例如调节急性炎症反应、调节特异性免疫应答(包括B细胞和T细胞分化)、骨代谢、血小板生成、表皮细胞增殖、月经、神经细胞分化、神经保护、衰老、癌症和阿尔茨海默病中出现的炎症反应。参见A.Papassotiropoulos等,Neurobiology of Aging,22:863-871(2001)。
IL-6是通过受体复合物促进细胞应答的细胞因子家族成员，所述受体复合物由信号转导糖蛋白gp130的至少一个亚基和IL-6受体(“IL-6R”)(还称为gp80)组成。IL-6R还可以可溶形式(“sIL-6R”)存在。IL-6结合IL-6R，然后二聚化信号转导受体gp130。参见Jones,SA,J.Immunology,175:3463-3468(2005)。
人类中，编码IL-6的基因组织形式为五个外显子和四个内含子，并定位于染色体7的短臂7p21。IL-6 RNA的翻译和翻译后加工导致具有184个氨基酸的21至28kDa蛋白以其天然形式形成。参见A.Papassotiropoulos,等,Neurobiology of Aging,22:863-871(2001)。
如本文更详细说明的，据信IL-6在多种疾病和病症的发展中起作用，所述疾病和病症包括但不限于疲劳、恶病质、自身免疫疾病、骨骼系统疾病、癌症、心脏病、肥胖、糖尿病、哮喘、阿尔茨海默病和多发性硬化。由于意识到IL-6参与多种疾病和病症，本领域依然需要用于预防或治疗与IL-6相关的疾病的组合物和方法，以及鉴定具有与IL-6相关的疾病或病症的患者的筛选方法。特别优选的抗IL-6组合物是当施用至患者时具有最小不良反应或使不良反应降至最少的那些组合物。减少或抑制与IL-6相关的疾病或病症的组合物或方法有益于有相应需要的患者。
IL-6的功能不限于免疫应答，因为它在血细胞生成、血小板生成、破骨细胞形成、肝脏急性期应答的引发中起作用，导致C反应蛋白(CRP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)的升高。已知它是表皮角质形成细胞、肾系膜细胞、骨髓瘤和浆细胞瘤细胞的生长因子(Grossman等.,1989 Prot Natl Acad Sci.,86,(16)6367-6371；Horii等.,1989,J Immunol,143,12,3949-3955；Kawano等.,1988,Nature 332,6159,83-85)。IL-6由多种细胞类型产生，包括单核细胞/巨噬细胞、成纤维细胞、表皮角质形成细胞、血管内皮细胞、肾系膜细胞、胶质细胞、软骨细胞、T和B细胞和一些肿瘤细胞(Akira等,1990,FASEB J.,4,11,2860-2867)。除了组成型产生IL-6的肿瘤细胞外，正常细胞不表达IL-6，除非适当刺激。
在许多癌类型中发现了升高的IL-6水平，包括乳腺癌、白血病、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、淋巴瘤、肺癌、肾细胞癌、结肠直肠癌和多发性骨髓瘤(例如Chopra等.,2004,MJAFI 60:45-49；Songur等.,2004,Tumori 90:196-200;Blay等.,1992,Cancer Research52:3317-3322；Nikiteas等.,2005,World J.Gasterenterol.11:1639-1643；综述于Heikkila等.,2008,Eur J Cancer,44:937-945)。如上所述，已知或怀疑IL-6在促进至少一些类型的癌症的增殖或存活中起作用。而且，这些研究的一些已经证明IL-6水平与患者预后之间的相关性。总结起来，这些结果表明了抑制IL-6可能是治疗上有益的可能性。实际上，临床研究(综述于Trikha等.,2003,Clinical Cancer Research9:4653-4665)已经显示了归因于施用各种抗IL-6抗体的患者预后的一些改善，特别是在IL-6直接促进癌细胞增殖或存活的那些癌症中。
如上所述，IL-6刺激了肝急性期应答，导致增加的CRP生成和升高的血清CRP水平。为此，C反应蛋白(CRP)已经被报道为构成IL-6活性的替代标志物。因此，升高的IL-6活性可以通过测量血清CRP来检测。相反，例如通过施用中和抗IL-6抗体导致的IL-6活性的有效抑制可以通过所得到的血清CRP水平降低来检测。
最近的临床试验证明，罗舒伐他汀施用给具有升高的CRP(大于2.0mg/l)的表面上健康的个体使其CRP水平降低37%，并极大地降低了心肌梗死、中风、动脉血管再形成、不稳定型心绞痛住院或心血管原因死亡的发生率。Ridker等.,N Engl J Med.2008 Nov 9[印刷前电子出版]。
除了其在一些癌症和其它疾病中的发病中的直接作用，长期升高的IL-6水平似乎还不利地影响患者健康和生活质量。例如，已经报道，升高的IL-6水平与恶病质和发热以及降低的血清白蛋白有关。Gauldie等.,1987,PNAS 84:7251-7253；Heinric等.,1990,265:621-636；Zamir等.,1993,Metabolism 42:204-208；Zamir等.,1992,Arch Surg,127:170-174。已经报道中和抗体对IL-6的抑制缓解癌症患者中的发热和恶病质，尽管还没有报道这些患者血清白蛋白水平的提高(Emille等.,1994,Blood,84:2472-2479；Blay等.,1992,Cancer Research52:3317-3322；Bataille等.,1995,Blood,86:685-691)。
许多研究已经表明，CRP是癌症患者中有价值的预后因素，升高的CRP水平预测差的结果。参见例如Hefler等,Clin Cancer Res,2008Feb 1;14(3):710-4；Nagaoka等,Liver Int,2007 Oct;27(8):1091-7；等,J Epidemiol Community Health,2007 Sep;61(9):824-33,Review；Hara等,Anticancer Res,2007 Jul-Aug;27(4C):3001-4；Polterauer等,Gynecol Oncol,2007 Oct;107(1):114-7,Epub 2007 Jul 6；Tingstedt等,Scand J Gastroenterol,2007 Jun;42(6):754-9；Suh等,Support Care Cancer，2007 Jun;15(6):613-20,Epub 2007 Jan 18；Gerhardt等,World J Gastroenterol,2006 Sep 14;12(34):5495-500；McArdle等,Urol Int,2006;77(2):127-9；Guillem等,Dis Esophagus,2005;18(3):146-50；Brown等,Cancer,2005 Jan 15;103(2):377-82。减少的血清白蛋白(低白蛋白血症)也与许多危重病(包括癌症)的增加的发病率和死亡率有关(例如,Vigano等.,Arch Intern Med,2000 Mar27;160(6):861-8；Hauser等.,Support Care Cancer，2006Oct;14(10):999-1011；Seve等.,Cancer，2006 Dec 1;107(11):2698-705)。低白蛋白血症与患者预后不佳之间的明显联系可能暗示，通过直接白蛋白输注来恢复白蛋白水平可以促进患者存活，然而，单独的白蛋白输注并没有改善晚期癌症患者(Demirkazik等.,Proc Am Soc ClinOncol 21:2002(摘要2892))或其它危重病患者群体(综述于Wilkes等.,Ann Intern Med,2001 Aug 7;135(3):149-64)的存活。
Glasgow预后分数(GPS)是基于炎症的预后分数，它组合了白蛋白水平(<35mg/L=1分)和CRP水平(>10mg/L=1分)(Forrest等.,BrJ Cancer,2004 May 4;90(9):1704-6)。自从其在2004年被引入，Glasgow预后分数已经显示具有作为许多癌症死亡率预测器的预后价值，所述癌症包括胃-食管癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、支气管癌和转移性肾癌(Forrest等.,Br J Cancer，2004 May4;90(9):1704-6；Sharma等.,Clin Colorectal Cancer,2008Sep;7(5):331-7；Sharma等.,Eur J Cancer,2008 Jan;44(2):251-6；McMillan等.,Nutr Cancer，2001;41(1-2):64-9；McMillan,Proc Nutr Soc,2008 Aug;67(3):257-62；Ramsey等.,Cancer，2007 Jan15;109(2):205-12)。
美国专利申请公布第20080081041号(涉及使用抗IL-6抗体的癌症治疗)公开，因为IL-6与疾病活性有关并且CRP是IL-6活性的替代标志物，IL-6被其抗IL-6抗体(CNTO 328,Zaki等.,Int J Cancer,2004 Sep 10;111(4):592-5)中和引起的对CRP的持久抑制可以被假定是实现生物活性所必要的。同一专利申请显示，良性和恶性前列腺疾病患者的IL-6和CRP之间的关系之前由McArdle检验(McArdle等.2004 Br J Cancer 91(10):1755-1757)。McArdle报道发现，与前列腺癌患者相比，良性疾病患者的IL-6和CRP浓度之间无显著差异，在癌症患者中，随着肿瘤等级的增加，IL-6和CRP浓度显著增加。86例前列腺癌受试者的中值血清CRP值是1.8mg/L。基于以上，在该专利申请的发明人假定推荐剂量和时间表，其中6mg/kg抗IL-6抗体(CNTO 328)每2周施用一次，并宣称，这可能实现转移性HRPC受试者中CRP的持久抑制。
IL-6信号传导由胞质酪氨酸激酶Jak-Tyk家族介导，包括JAK1、JAK2和JAK3(综述于Murray J Immunol.2007 Mar 1;178(5):2623-9)。Sivash等报道IL-6介导的JAK信号传导被口腔鳞状癌细胞中的环戊烯酮前列腺素15d-PGJ2消除。British Journal of Cancer(2004)91,1074-1080。这些结果表明，JAK1、JAK2或JAK3的抑制剂可以被用作IL-6拮抗剂。
Ulanova等报道了非受体蛋白酪氨酸激酶Syk(使用siRNA)的抑制降低了上皮细胞的IL-6生成。Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.2005 Mar;288(3):L497-507。这些结果表明，Syk抑制剂可以用作IL-6拮抗剂。
Kedar等报道了用沙利度胺治疗显著降低大部分肾细胞癌患者的CRP和IL-6的血清水平至正常或接近正常的水平。Int J Cancer.2004Jun 10;110(2):260-5。这些结果表明沙利度胺，还有可能其衍生物例如来那度胺，可能是有用的IL-6拮抗剂。
此外，另一个公布的专利申请US 20070292420教导了使用抗IL-6(cCLB-8)抗体治疗晚期多发性骨髓瘤难治患者的I期剂量递增研究(N=12)，并且表明该研究证明了一些患者的疾病得到稳定。该申请还报道在治疗中断后，M蛋白水平升高加速，表明在撤回治疗后疾病反弹。抗IL-6 cCLB-8抗体抑制了游离的循环IL-6。
本申请还表明，该抗体试验结果没有观察到毒性(除了两例经过高强度预治疗的患者中的暂时性血小板减少症)或过敏反应，并且所有患者中C反应蛋白(CRP)降低至检测水平以下。它们的抗体(cCLB-8抗体)据报道具有17.8天的循环半衰期，并且没有观察到人抗嵌合抗体(HACA)免疫应答(van Zaanen等.1998)。他们宣称，CNTO 328的施用没有引起血压、脉搏率、体温、血红蛋白、肝功能和肾功能的变化。除了两例经过高强度预治疗的患者中的暂时性血小板减少症外，据称没有观察到毒性或过敏反应，并且没有观察到人抗嵌合抗体(HACA)免疫应答。据报道，它们的研究中三例患者在治疗期间发生了感染相关的并发症，然而，发明人断定与抗IL-6cCLB-8抗体的可能关联是不可能的，因为在末期多发性骨髓瘤中常报道感染并发症，并且是死亡的主要原因。他们根据他们的结果得出结论：该抗IL-6cCLB-8抗体在多发性骨髓瘤患者中是安全的。
本文公开的某些抗IL-6抗体还公开于以下公布的和未公布的专利申请(其归本申请的受让人共同所有)：U.S.2009/0028784、WO2008/144763、2009年2月24日提交的美国专利第12/391,717号(代理人案号67858.702201)和2009年2月5日提交的美国专利第12/366,567号(代理人案号67858.702101)。
其它的抗IL-6抗体已公开在以下的美国专利和公布的专利申请中：7,482,436、7,291,721、6,121,423、2008/0075726、2007/0178098、2007/0154481、2006/0257407和2006/0188502。
如上所述，升高的IL-6与恶病质、虚弱、疲劳和发热的发病机理有关。与疲劳相关的疾病和病症包括但不限于：全身疲劳、压力相关疲劳、运动性疲劳、癌症相关疲劳、炎性疾病相关疲劳和慢性疲劳综合征。例如，参见Esper DH,等,The cancer cachexia syndrome:areview of metabolic and clinical manifestations,Nutr Clin Pract.,2005年8月;20(4):369-76；Vgontzas AN,等,IL-6and its circadian secretion inhumans,Neuroimmunomodulation,2005;12(3):131-40；Robson-Ansley,PJ,等,Acute interleukin-6 administration impairs athletic performance inhealthy,trained male runners,Can J Appl Physiol.,2004年8月;29(4):411-8；Shephard RJ.,Cytokine responses to physical activity.with particular reference to IL-6:sources,actions,and clinicalimplications,Crit Rev Immunol.,2002;22(3):165-82；Arnold,MC,等,Using an interleukin-6 challenge to evaluate neuropsychologicalperformance in chronic fatigue syndrome,Psychol Med.,2002年8月;32(6):1075-89；Kurzrock R.,The role of cytokines in cancer-relatedfatigue,Cancer，2001年9月15日;92(6增刊):1684-8；Nishimoto N,等,Improvement in Castleman’s disease by humanized anti-interleukin-6receptor antibody therapy,Blood,2000年1月1日;95(1):56-61；Vgontzas AN,等,Circadian interleukin-6 secretion and quantity anddepth of sleep,J Clin Endocrinol Metab.,1999年8月;84(8):2603-7；和Spath-Schwalbe E，等,Acute effects of recombinant human interleukin 6on endocrine and central nervous sleep functions in healthy men,J ClinEndocrinol Metab.,1998年5月;83(5):1573-9；所述公开内容均以引用的方式整体并入本文。
与恶病质相关的疾病和病症包括但不限于：癌症相关性恶病质、心脏相关性恶病质、呼吸相关性恶病质、肾相关性恶病质和年龄相关性恶病质。例如，参见Barton,BE.,Interleukin-6 and new strategies forthe treatment of cancer,hyperproliferative diseases and paraneoplasticsyndromes,Expert Opin Ther Targets,2005年8月;9(4):737-52；Zaki MH,等,CNTO 328,a monoclonal antibody to IL-6,inhibits humantumor-induced cachexia in nude mice,Int J Cancer,2004年9月10日;111(4):592-5；Trikha M,等,Targeted anti-interleukin-6 monoclonalantibody therapy for cancer:a review of the rationale and clinicalevidence,Clin Cancer Res.,2003年10月15日;9(13):4653-65；Lelli G，等,Treatment of the cancer anorexia-cachexia syndrome:a criticalreappraisal,J Chemother.,2003年6月;15(3):220-5；Argiles JM,等,Cytokines in the pathogenesis of cancer cachexia,Curr Opin Clin NutrMetab Care,2003年7月;6(4):401-6；Barton BE.,IL-6-like cytokinesand cancer cachexia:consequences of chronic inflammation,ImmunolRes.,2001;23(1):41-58；Yamashita JI,等,Medroxyprogesterone acetateand cancer cachexia:interleukin-6 involvement,Breast Cancer,2000;7(2):130-5；Yeh SS,等,Geriatric cachexia:the role of cytokines,Am J Clin Nutr.,1999年8月;70(2):183-97；Strassmann G，等,Inhibitionof experimental cancer cachexia by anti-cytokine andanti-cytokine-receptor therapy,Cytokines Mol Ther.,1995年6月;1(2):107-13；Fujita J,等,Anti-interleukin-6 receptor antibody preventsmuscle atrophy in colon-26 adenocarcinoma-bearing mice withmodulation of lysosomal and ATP-ubiquitin-dependent proteolyticpathways,Int J Cancer,1996年11月27日;68(5):637-43；Tsujinaka T，等,Interleukin 6 receptor antibody inhibits muscle atrophy and modulatesproteolytic systems in interleukin 6 transgenic mice,J Clin Invest.,1996年1月1日;97(l):244-9；Emilie D,等,Administration of ananti-interleukin-6 monoclonal antibody to patients with acquiredimmunodeficiency syndrome and lymphoma:effect on lymphoma growthand on B clinical Symptoms,Blood,1994年10月15日;84(8):2472-9；和Strassmann G,等,Evidence for the involvement of interleukin 6 inexperimental cancer cachexia,J Clin Invest.,1992年5月;89(5):1681-4；所述公开内容均以引用的方式整体并入本文。
另一种恶病质相关性疾病是发育停滞，也叫做生长迟缓，其中儿童显现出的增重率低于预期。发育停滞通常定义为体重低于第三百分位或在短期内2个主要生长参数的百分位等级下降。发育停滞源于异构医疗和心理原因，且所述原因有时逃避诊断。一项最近的研究(共34例患者)报道了发育停滞确诊患者的IL-6水平的统计显著升高。Shaoul等.J Pediatr Gastroenterol Nutr.,2003年10月;37(4):487-91。
发明概述
本发明是申请人的在先发明的延伸，其涉及对IL-6具有结合特异性的特异性抗体、人源化或嵌合或单链抗体及其片段和变体、特别是具有特定表位特异性和/或功能性的特定抗体，以及使用这些和其它抗IL-6抗体的新疗法。本发明的一个实施方案包括能够结合IL-6和/或IL-6/IL-6R复合物的特定人源化抗体及其片段和变体。这些抗体可以结合可溶性IL-6或细胞表面表达的IL-6。而且，这些抗体可以抑制IL-6、IL-6/IL-6R复合物、IL-6/IL-6R/gp130复合物和/或IL-6/IL-6R/gp130多聚体的一种或多种的形成或生物效应。本发明涉及使用抗IL-6抗体、优选本文描述的那些抗体的新疗法和治疗方案。特别地，本发明涉及治疗或预防有需要患者的血栓形成的方法，所述患者例如在治疗之前表现出升高的D-二聚体和/或和CRP水平的患者，所述方法包括给患者施用IL-6拮抗剂，例如下文指出的那些，例如抗IL-6抗体(如Ab1)或其片段或变体，藉此患者的凝血状况改善或恢复至正常状态。在一些实施方案中，这些方法还可以包括能进一步帮助(协同)IL-6拮抗剂如Ab1并从而更有效治疗或预防血栓形成的其它活性剂如他汀类药物的施用。
本发明还涉及提高有需要患者的生命力或生活质量的方法，所述患者例如表现出升高的CRP水平和/或降低的白蛋白水平的患者，所述方法包括给患者施用IL-6拮抗剂，例如下文指出的那些，例如抗IL-6抗体(如，Ab1)或其抗体片段或变体，从而降低患者的C反应蛋白(“CRP”)水平和/或升高患者的白蛋白水平。在一些实施方案中，这些方法还可以包括能进一步帮助(协同)IL-6拮抗剂如Ab1并从而更有效治疗患者的其它活性剂如他汀类药物的施用。
本发明的另一个实施方案涉及Ab1，包括其兔和人源化形式，以及其重链、轻链、片段、变体、和CDR。在所提供的人临床试验数据中，施用Ab1的人源化形式。
在一个优选实施方案中，这通过本文描述的抗体(包含本文描述的VH、VL和CDR多肽的序列)，或其含有示例性抗IL-6抗体序列和编码它们的多核苷酸的CDR的一个或多个的人源化或嵌合或单链形式的施用来实现。优选地，这些抗体是非糖基化的。在本发明更具体的实施方案中，这些抗体将阻断gp130激活和/或具有小于50皮摩尔浓度的结合亲和力(Kd)和/或小于或等于10-4S-1的Koff值。
在本发明的另一个实施方案中，这些抗体和人源化形式将衍生自兔免疫细胞(B淋巴细胞)，并且可以基于其与人种系序列的同源性(序列同一性)来选择。这些抗体可能需要极小的序列修饰或不需要序列修饰，从而有利于人源化后功能性的保留。在示例性实施方案中，这些人源化抗体将包含与下文所述亲本(例如兔)抗体的构架高度同源(具有高水平的序列同一性)的人构架。
在本发明另一个实施方案中，本抗体可以基于其在功能测定中的活性来选择，所述功能测定例如IL-6驱动的T1165增殖测定、IL-6刺激的HepG2触珠蛋白生成测定以及类似测定。本发明另一个实施方案涉及来自包括VH、VL和CDR多肽或其变体或片段(例如源于兔免疫细胞)的抗IL-6抗体的片段和编码它们的多核苷酸，以及这些抗体片段和编码它们的多核苷酸在产生能够识别IL-6和/或IL-6/IL-6R复合物或IL-6/IL-6R/gp130复合物和/或其多聚体的新抗体和多肽组合物中的用途。
本发明还包括施用抗IL-6抗体和其人源化、嵌合或单链形式和其它结合片段及变体与一种或多种功能性或可检测部分缀合的缀合物。本发明还包括制备所述人源化抗IL-6或抗IL-6/IL-6R复合抗体及其结合片段和变体的方法。在一个实施方案中，结合片段包括但不限于Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和scFv片段。
本发明的实施方案涉及抗IL-6抗体诊断、评估和治疗与IL-6或其异常表达相关的疾病和病症的用途。本发明还涉及抗IL-6抗体片段或变体诊断、评估和治疗与IL-6或其异常表达相关的疾病和病症的用途。本发明抗体、特别是人源化、嵌合和单链抗体的优选用途是治疗和预防与癌症相关疲劳、和/或恶病质和类风湿性关节炎。
本发明的其它实施方案涉及在重组宿主细胞、优选二倍体酵母例如二倍体毕赤酵母和其它酵母菌株中产生抗IL-6抗体。
在另一个实施方案中本发明还涉及本发明的抗IL-6抗体和抗体片段用于预防或减轻接受移植细胞、组织或器官的受试者移植物抗宿主疾病(GVHD)的发作或白血病复发的用途，所述受试者如接受造血干细胞移植(HCTs)、骨髓移植(BMTs)和其它移植细胞、组织或器官、尤其是其中移植物可能含有树突状细胞、尤其是BDCAA4+浆细胞样树突状细胞的移植细胞、组织或器官的受试者。
文献(Perez-Martinez等,“Blood dendritic cells suppress NK cellfunction and increase the risk of leukemia relapse after hematopoietic celltransplantation”,Biology of Blood and Marrow Transplantation,2010年10月25日在线提供)已经报道了接受含有较大量BDCAA4+浆细胞样树突状细胞(以及BDCA1+髓系树突状细胞)的移植HCTs的白血病受试者表现出较高的白血病复发倾向性和较低的存活性。这些移植受试者通常表现出以大量的病原体相关分子模式(PAMPS)为特征的炎性环境，所述病原体相关分子模式衍生于内源性病原体和宿主组织，是高剂量化学疗法和放疗(这是因为疾病治疗，如需要移植之前的癌症)造成的组织损伤的结果。
特别地，作者解释到虽然NK细胞正常诱导DC成熟且DCs反过来增加NK细胞中的活化标志物的表达，但自相矛盾的是当TLR配体被用来模仿异基因HCT中的病原相关性炎性环境时，BDCAA4+浆细胞样树突状细胞和BDCA1+髓系树突状细胞都抑制体外测定和体内小鼠模型中的NK细胞的功能。他们推断这种现象可以解释为什么接受含有较大量这些细胞的HCTS的患者白血病复发的风险较高。他们还示教到详细的机理发现表明这些树突状细胞通过IL-10和IL-6引发对NK细胞毒性细胞的这种抑制作用(因为利用这些细胞因子孵育NK细胞对NK细胞的细胞毒性具有剂量依赖性抑制作用)。
基于这些发现，以及本发明的抗体抑制体外和体内IL-6产生的有效性，本发明提供通过使用本发明的抗IL-6抗体或抗体片段作为其中使用移植细胞、组织和有机体的疗法的附属物来预防白血病复发或移植物抗宿主疾病的方法和组合物。更确切地说，本发明提供降低或预防患者GVHD、或白血病复发的方法，所述患者接受骨髓移植、造血干细胞移植、胰腺或肝移植，以及其它的细胞、组织和有机体移植，其中移植物可能包含树突状细胞，尤其是BDCAA4+浆细胞样树突状细胞和/或BDCA1+髓系树突状细胞。
本发明特别适用于治疗已经有趋向具有炎性环境的移植患者，如已经经历或正在经历化学疗法和/或放疗的受试者。实质上，本发明的抗IL-6抗体和抗体片段将发挥作用以抑制这些移植受者体内已经很高的IL-6水平，从而帮助减轻这类树突状细胞对NK细胞的不良影响。这在临床上是有益的，因为NK细胞在造血干细胞移植以及与树突状细胞之间的对话(cross talk)以诱导对感染的初次应答方面有重要的作用。而且，已经证明供体NK细胞可以促进植入，防止GVHD、控制感染和降低白血病复发的风险。
所以，基于先前所述，本发明提供促进接受移植细胞、组织或器官的受试者的移植物植入、控制或降低感染风险，和/或减少或防止GVHD和/或白血病复发的方法，所述方法通过在移植之前、同时或之后施用至少一种本发明的抗IL-6抗体或抗体片段来进行。在优选实施方案中这些受试者将包含患有癌症的个体，和/或已经接受治疗方案或具有引起内源性炎性环境的潜在病状的受试者，如在移植之前已经接受化学疗法或放疗的受试者。
本发明的疗法通常在移植之前或同时施用抗体(如从移植前约一个月、几周或一周的数量级上)，从而在完成移植时降低IL-6抗体的循环水平。然而，或者可以在移植细胞、组织或器官同时或不久之后，如优选在移植几小时或几天内施用本发明的抗IL-6抗体或抗体片段。如果同时施用这些部分，那么IL-6抗体或抗体片段可以和移植细胞、组织或器官结合，或者它们可以在单独的药物组合物中施用。
在某些实例中，例如，在造血干细胞或骨髓移植的情况下可能希望使用本发明的抗IL-6抗体或抗体片段在移植之前接触所述细胞、组织或器官，以在移植之前抑制其中所含的任何树突状细胞产生IL-6。
另外，还可能希望使用IL-10拮抗剂，如抗IL-10抗体或抗体片段，对患者进一步施用或在移植之前预处理细胞、组织或器官。
本发明因此还提供含有与待移植的细胞、组织或器官联合的至少一种本发明的抗IL-6抗体或抗体片段且还任选地包括至少一种IL-10拮抗剂的组合物。
本发明还提供降低接受移植细胞、组织或器官，尤其是那些可能含有树突状细胞的细胞、组织或器官的受试者感染风险的方法，所述方法通过在移植之前、同时或之后施用足以防止或降低所述感染风险的量的至少一种本发明的抗IL-6抗体或抗体片段来进行。
本发明还提供降低接受移植细胞、组织或器官，尤其是那些可能含有树突状细胞的细胞、组织或器官的受试者患GVHD的风险的方法，所述方法通过在移植(如，BMT或HCT)之前、同时或之后施用足以防止或降低患GVHD风险的量的至少一种本发明的抗IL-6抗体或抗体片段来进行。在某些实施方案中，这些受试者已经接受了化学疗法和/或放疗或该化学疗法和/或放疗可能正在进行。
本发明还提供降低接受移植细胞、组织或器官，尤其是那些可能含有树突状细胞的细胞、组织或器官的白血病受试者白血病复发的风险的方法，所述方法通过在移植之前、同时或之后施用足以防止或降低白血病复发风险的量的至少一种本发明的抗IL-6抗体或抗体片段来进行。这类白血病的实例包括慢性白血病、急性白血病如骨髓性白血病，其是起源于髓细胞的疾病，可以是慢性或急性，称为慢性骨髓性白血病(CML)，或急性骨髓性白血病；淋巴细胞白血病，其起源于血液骨髓中叫做成淋巴细胞或淋巴细胞的细胞，该疾病同样可以为急性或慢性，称为慢性淋巴细胞白血病(CLL)或急性淋巴细胞白血病(ALL)；毛细胞白血病；T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)，其是非常罕见和具有侵略性的影响成人的白血病；大颗粒淋巴细胞白血病，该疾病可能涉及T细胞或NK细胞，并像毛细胞白血病那样单独涉及B细胞，是一种罕见的无痛的(非侵略性)白血病。
本发明还提供降低接受移植胰或肝细胞、组织或器官，尤其是那些可能含有树突状细胞的细胞、组织或器官的受试者患GVHD的风险的方法，所述方法通过在移植之前、同时或之后施用足以防止或降低患GVHD风险的量的至少一种本发明的抗IL-6抗体或抗体片段来进行。
本发明还涉及本发明的抗IL-6抗体和抗体片段与化疗药物(优选EGFR抑制剂)和/或放疗联合用于治疗特定癌症的用途，其中该组合使用某一给药方案来施用，藉此抗IL-6抗体或抗IL-6抗体片段使癌细胞对化疗药物或放疗的作用更敏感。这些方法具体包括对任何癌症的治疗，尤其是其中EGFR抑制剂对其治疗有效的癌症。其非限制性实例包括晚期和非晚期癌症，其包括转移的癌如转移性和非转移性肺癌、乳癌、头颈癌、(HNSCC)、胰腺癌、咽癌、结肠直肠癌、肛癌、多形性成胶质细胞瘤、上皮癌、肾细胞癌、急性或慢性骨髓性白血病和其它白血病。
关于本发明的此实施方案，在文献中已经报道IL-6的上调有助于一些癌症对化疗药物如EGFR抑制剂产生耐药性且该耐药性牵涉癌症部位处的IL-6升高。例如，Yao等,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,PNAS 2010年8月31日,第107卷,第35期15535-15540示教了IL-6在厄洛替尼耐药性肺癌细胞中高水平表达并且是这些细胞存活所需要的。
而且，Otero等,J Immunol.177:6593-7(2006)报道了IL-6可在B细胞对放疗诱导性凋亡的获得耐药性中起作用。再者，Sriuranpong等,cancer Research 63:2948-2956(2003)公开了头颈癌中STAT3的EGFR依赖性组成性活化涉及IL-6/gp130信号传导，且该活化可赋予这些癌症细胞增殖和存活的潜能。还有，Chen等,Int.J.Rad.Oncol.Biol.Phys.76(4):1214-1224(2010)报道了IL-6信号传导在咽癌对辐射和对EGFR抑制剂产生耐药性中的重要性。
另外，在更早的研究Gao等(2007)“Mutations in the EGFR kinasedomain mediate STAT3 activation via IL-6 production in human lungadenocarcinomas”,J Clin Invest 117:384638569)中，作者表明表达突变EGFR的NSCLC细胞的长期增殖和存活依赖于IL-6轴。
更具体地，Yao等(Id)表明通过siRNA降低IL-6水平以及通过IL-6中和抗体或JAK1/2抑制剂抑制IL-6轴不仅会明显降低IL-6介导的信号传导，还会影响细胞活力，并揭露IL-6足以改变癌细胞对EGFR抑制剂厄洛替尼的敏感性。他们通过测定IL-6对表达突变EGFR的多个NSCLC细胞系(HCC827、PC9和HCC4006)的活力的作用证实此结论。他们发现可能由于不同的遗传和表观遗传异常的积累，这些细胞系，尽管拥有体细胞激活EGFR突变，仍显示出不同的厄洛替尼敏感性：IC50s值从在H1650时的5μM到在HCC827时的0.001μM不等。尽管存在这些差异，但在所有情况下，培养基中IL-6的存在足以降低各种细胞系对厄洛替尼的敏感性。他们还发现IL-6治疗没有实质上影响细胞增殖率，反而是降低了它们的细胞死亡应答，且IL-6的这种作用源于gp130-STAT3轴的活化，而不是厄洛替尼生物利用度的降低。基于这些结果他们假设了一种肿瘤模型，其中TGF-β轴的旁分泌和自分泌刺激(以及IL-6产量的增加)足以获得间充质细胞样形态、运动和侵袭能力提高、和厄洛替尼耐药性增强。
其他人也报道了IL-6水平的提高对肿瘤的EGFR抑制剂耐药性的影响。例如，Nishioka等,in Leukemia(2009)23:2304-2308示教了AML细胞系获得对受体酪氨酸激酶例如舒尼替尼和伊马替尼的耐药性，显然是因为炎性细胞因子如IL-6的异常分泌，且进一步表明使用IL-6处理这些细胞会减弱这些化合物对这些癌细胞系的功效。另外他们公开了针对IL-6受体的人源化抗体托珠单抗或AG490可阻断JAK2/STAT5信号传导并恢复细胞对舒尼替尼的敏感性。
因此，基于本发明的抗IL-6抗体和抗体片段的有力的IL-6抑制性质，在另一个实施方案中，本发明涉及使用化疗药物和/或放疗的治疗方案，其中针对化疗药物和/或放疗的耐药性可能涉及肿瘤部位的IL-6产量增加，并且其中通过联合本发明的抗IL-6抗体或抗体片段施用化疗药物和/或放疗来阻断或抑制该耐药性。具体地说，这样的化疗药物包括EGFR抑制剂，因为曾经报道在肿瘤部位的IL-6水平提高的基础上，癌症可能会变得对这些药物具有耐药性，这可能是因为长期的化疗和/或放疗引发了炎症反应。
可以和本发明的抗IL-6抗体或抗体片段一起用在治疗方案中的EGFR抑制剂的实例包括例如：可获得于ImClone公司的西妥昔单抗(Erbitux)；可获得于OSI制药公司的厄洛替尼(Tarceva)；可获得于AstraZeneca公司的吉非替尼(Iressa)；可获得于Glaxo公司的拉帕替尼(Tykerb)；可获得于Amgen公司的帕尼单抗(Vectibox)；Pfizer公司销售的舒尼替尼或索坦(Sutent)(N-(2-二乙氨乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺)；AstraZeneca公司销售的吉非替尼N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉-4-基丙氧基)喹唑啉-4-胺；Genmab公司在临床开发的扎鲁木单抗，以及其它药物。
根据本发明的此实施方案，本发明的抗IL-6抗体或抗体片段将在施用化疗药物(如EGFR抑制剂)或放疗之前、同时或之后施用。在一个优选实施方案中，抗IL-6抗体或抗体片段施用于个体，其中他们的癌症，例如，白血病如AML、咽癌或肺癌如非小细胞肺癌(NSCLC)，已经发展出对所述药物的耐药性，例如这是因为癌症周围的炎性环境导致IL-6水平提高。另外，在其中肿瘤耐药性同样涉及与升高的促细胞因子，尤其是升高的IL-6相关的炎性肿瘤环境的实例中，本发明的IL-6抗体可用于加强放疗对放疗耐药性肿瘤的功效。
在一个优选实施方案中，本发明将会施用本发明的抗IL-6抗体或抗体片段以加强EGFR抑制剂的功效，尤其是在由于涉及IL-6水平提高的炎症反应，所治疗的癌症已经发展出对药物的耐药性或敏感性减弱的患者体内的功效。可与本发明的抗体联合使用的具体的EGFR抑制剂如上文所认定。另外，FDA批准的EGFR抑制剂以及适应症和给药方案的具体实例在下表中提供。
预计当这些药物与本发明的抗IL-6抗体或抗体片段联合使用时，可以使用相同的化疗药物给药方案，但基于IL-6抗体对治疗的癌细胞的敏化作用(这是因为抗体对癌症或肿瘤部位的IL-6水平的抑制作用，所述IL-6水平升高时“保护”癌症免于药物的作用)，对癌细胞产生更大的细胞毒性。
表1.FDA批准的EGFR抑制剂
Figure BDA00001909859700261
TKI＝酪氨酸激酶抑制剂；mAb＝单克隆抗体；NSCLC＝非小细胞肺癌；HNSCC＝头颈部鳞状细胞癌
在一个优选实施方案中，所治疗癌症是肺癌如非小细胞肺癌，例如鳞状细胞癌、大细胞癌或腺癌或小细胞肺癌如小细胞癌(燕麦细胞癌)或复合性小细胞癌。在一个特别优选的实施方案中，所治疗的肺癌将包括鳞状细胞癌且所治疗的患者是接受厄洛替尼或舒尼替尼的患者。这些患者将包括在经历一轮或多轮的化疗之后其肿瘤已发展出对这些药物的耐药性的个体。
然而，如上所述，其中这些EGFR抑制性药物可能有用的任何癌症都涵盖在内，如结肠直肠癌、胰腺癌、乳癌、头颈癌、食管癌、肺癌、卵巢癌、子宫颈癌、肾癌、前列腺癌、睾丸癌、脑癌和其它癌症的晚期或非晚期、非转移性和转移性形式。
在本发明的该实施方案中，本发明的抗IL-6抗体或抗体片段将以能够有效使所治疗肿瘤对药物和/或放疗作用更敏感的剂量施用，如剂量从约25-500mg之间不等，更通常剂量为约120、160、240或320mg。抗体将在施用化学疗法之前、同时或之后施用，如从化疗之前或之后约一个月、几周或一周。优选地，抗体应在化疗或放疗之前施用以使癌症对药物或放疗作用更敏感。
已显示相对于非耐药性癌细胞，耐药性癌细胞侵袭或转移能力更高且细胞凋亡减少，所以本发明将进一步降低癌细胞侵袭或向其它部位转移的风险和/或潜在地逆转或阻止转移。而且，本发明将使耐药性癌细胞的凋亡增加。
在某些实例中可以共同施用抗IL-6抗体或抗体片段，如在EGFR抑制剂还是生物制剂如抗体的实例中。然而，在大多数实例中，抗体和EGFR抑制剂(其可能是生物制剂或小分子)在单独的组合物中施用，在这些部分的施用是同时实行的实例中甚至也如此。本发明的另一个实施方案涉及提高癌症确诊患者的生命力或生活质量的方法，其包括给患者施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体，从而使患者的血清C反应蛋白(“CRP”)水平稳定并优选地减少，和监测患者以评估患者血清CRP水平的减少，其中抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以与包括以下的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其抗体片段或变体上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其抗体片段或变体上相同的线性或构象性表位：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。
本发明另一个实施方案涉及提高癌症确诊患者的肌强度的方法，其包括给患者施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体，藉此提高患者肌强度，和监测患者以评估肌强度，其中抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以与包括以下的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。在此类方法中，优选地，患者的肌强度在施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体大约4周内通过手握力测试(Hand GripStrength test)被提高至少约15％，且更优选地在施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体大约4周内通过手握力测试被提高至少约20%。
本发明另一个实施方案涉及增加有相应需要的患者的血清白蛋白的方法，其包括给患者施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体，藉此提高患者的血清白蛋白水平，和监测患者以评估血清白蛋白水平，其中抗IL-6抗体或其抗体片段和变体可以与包括以下的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。优选地，这些方法在施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体大约6周内患者生命力被提高的条件下和/或血清白蛋白水平被提高约5-10g/L、优选7-8g/L的条件下予以实施。这些患者将包括但不限于被诊断患有类风湿性关节炎、癌症、晚期癌症、肝病、肾病、炎性肠病、腹部疾病、外伤、烧伤、与降低的血清白蛋白相关的其它疾病或其任意组合的那些患者。
在本发明的一个实施方案中，患者可能已经被诊断患有类风湿性关节炎、少年类风湿性关节炎、银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、天疱疮、皮肌炎、多肌炎、风湿性多肌炎、巨细胞动脉炎、血管炎、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、川畸病、孤立性中枢神经系统血管炎、邱-斯二氏动脉炎、显微镜下多动脉炎、显微镜下多血管炎、亨-舍二氏紫癜、原发性冷球蛋白血症性血管炎、类风湿性血管炎、冷球蛋白血症、复发性多发软骨炎、贝西氏病、高安氏动脉炎、缺血性心脏病、中风、多发性硬化、败血症、继发于病毒感染(例如、乙型肝炎、丙型肝炎、HIV、巨细胞病毒、EB病毒、Parvo B19病毒等)的血管炎、伯格氏病、癌症、晚期癌症、骨关节炎、全身性硬化、CREST综合征、赖特氏病、骨佩吉特病、Sjogran综合征、1型糖尿病、2型糖尿病、家族性地中海热、自身免疫性血小板减少症、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺疾病、恶性贫血病、肉碱、斑秃、原发性胆汁性肝硬变、自身免疫性慢性活动性肝炎、酒精性肝硬变、包括乙型肝炎和丙型肝炎在内的病毒性肝炎、其它器官特异性自身免疫疾病、烧伤、特发性肺纤维变性、慢性阻塞性肺病、过敏性哮喘、其它过敏性病状或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，患者可能在治疗之前具有升高的C反应蛋白(CPR)水平。
本发明另一个实施方案涉及提高有相应需要的患者的生命力或生活质量的方法，其包括给患者施用IL-6拮抗剂如Ab1，藉此降低患者的血清C反应蛋白(“CRP”)水平，和监测患者以评估患者血清CRP水平的降低。
本发明另一个实施方案涉及提高有相应需要的患者生命力或生活质量的方法，其包括给患者施用IL-6拮抗剂如Ab1，藉此提高患者的血清白蛋白水平，和监测患者以评估患者血清白蛋白水平的提高。
本发明另一个实施方案涉及提高有相应需要的患者生命力或生活质量的方法，其包括给患者施用IL-6拮抗剂如Ab1，藉此降低患者的血清CRP水平并提高患者的血清白蛋白水平，和监测患者以评估患者血清CRP水平的降低和患者血清白蛋白水平的提高。
本发明的另一个实施方案涉及预防或治疗处于血液高凝状态的患者血栓形成的方法，所述方法包括给患者施用IL-6拮抗剂，如抗IL-6抗体(如，Ab1)和其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的，藉此使患者的凝血状况改善或恢复至正常状态，和监测患者以评估其凝血状况。如下文所述，在一个优选示例性实施方案中，抗IL-6抗体包含含有Ab1的CDRs的人源化抗体，且更优选包含分别在SEQ IDNO:657和SEQ ID NO:709中的可变重链和轻链和分别在SEQ IDNO:588和586中的恒定区或其变体，其中一个或多个氨基酸被取代或缺失修饰，但没有实质性地破坏IL-6结合亲和力。
在这些方法中，如果IL-6拮抗剂是抗IL-6抗体或其抗体片段或变体，优选该抗体可以与包括Ab1和其片段和变体的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位。在本发明的预防或治疗血栓形成的方法中，通过测量患者的D-二聚体、因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纤维蛋白降解产物、凝血酶-抗凝血酶III复合物、纤维蛋白原、凝血酶原、纤溶酶原和温韦伯氏因子的一种或多种的血清水平来评估患者的凝血状况，且优选使用方法包括在施用抗IL-6抗体之前测量患者的血清D-二聚体水平，如果患者的血清D-二聚体水平升高则施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体。另外，也可在治疗之前评估患者的C反应蛋白水平，如果患者的C反应蛋白水平升高，则其可作为患者血栓形成风险增大的进一步指示。
本发明的一个实施方案涉及治疗患有与血液高凝相关的疾病或病状的患者的方法，所述方法包括给患者施用IL-6拮抗剂如Ab1，藉此使患者的凝血状况改善或恢复至正常状态，和监测患者以评估其凝血状况。
在本发明的一个实施方案中，患者在治疗之前可能具有升高的血清D二聚体水平。
在本发明的一个实施方案中，患者在治疗之前可能具有降低的血清白蛋白水平。
在本发明的一个实施方案中，患者的Glasgow预后分数(GPS)可以在治疗后被提高。
在本发明的一个实施方案中，患者在治疗之前可能具有升高的血清CPR水平。
在本发明的一个实施方案中，所述方法还可包括施用至少一种他汀类药物。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以靶向IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以包括抗体、抗体片段、肽、配糖生物碱、反义核酸、核酶、类视黄醇、avemir、小分子或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以包括抗IL-6R、抗gp130、抗p38MAP激酶、抗JAK1、抗JAK2、抗JAK3或抗SYK抗体或抗体片段。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以包括小分子，包括沙利度胺、来那度胺或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，拮抗剂可以包括抗IL-6抗体(如Ab1)或其抗体片段或变体。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以与包括以下的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体可以与Ab1结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以与包括以下的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以与Ab1特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以特异性结合完整IL-6多肽或其片段上被Ab1特异性结合的相同的线性或构象性表位，并且其中通过使用跨天然人IL-6多肽全长的重叠线性肽片段的表位定位确定所述表位包括选自那些分别包括氨基酸残基37-51、氨基酸残基70-84、氨基酸残基169-183、氨基酸残基31-45和/或氨基酸残基58-72的IL-6片段中包含的一个或多个残基。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体在每个可变轻链区和可变重链区中包含至少2个与包括以下的抗IL-6抗体中含有的互补决定区(CDRs)相同的互补决定区(CDRs)：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个)，其优选是非糖基化的。在某些实施方案中，在本文公开的人源化方法的基础上，可以使用适当的人构架构建含有这些CDRs的抗体。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体在每个可变轻链区和可变重链区中包含至少2个与Ab1中含有的互补决定区(CDR)相同的互补决定区(CDR)。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体中所有的CDR可以与包括以下的抗IL-6抗体中含有的CDR相同：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体中所有的CDR可以与Ab1中含有的CDR的一个或多个相同。
在一个优选的示例性实施方案中，抗IL-6抗体将包含Ab1中的所有CDR。在一个更优选实施方案中，抗IL-6抗体将包含SEQ ID NO:657和SEQ ID NO:709(人源化Ab1)中的可变重链和轻链序列，或其变体。
在一个优选实施方案中，人源化抗IL-6抗体将包含分别在SEQID NO:657和SEQ ID NO:709中含有的可变重链和可变轻链序列，并且优选进一步包含分别在SEQ ID NO:588和SEQ ID NO:586中含有的重链和轻链恒定区，以及包含不实质性地影响IL-6结合和/或所需效应子功能的一个或多个氨基酸取代或缺失的其变体。该实施方案还涵盖包含或者可选地由以下组成的多核苷酸：编码可变重链(SEQ IDNO:700)和可变轻链(SEQ ID NO:723)序列和恒定区重链(SEQ ID NO:589)和恒定区轻链(SEQ ID NO:587)序列的核酸的一个或多个。该实施方案还涵盖编码变体的核酸，所述变体包含不实质性地影响IL-6结合和/或所需效应子功能的分别包含在SEQ ID NO:657和SEQ IDNO:709中的可变重链和可变轻链序列以及分别包含在SEQ IDNO:588和SEQ ID NO:586中的重链和轻链恒定区的一个或多个氨基酸取代或缺失。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以是非糖基化的。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以含有经过修饰而改变效应子功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fc区。优选地，Fc区被修饰以消除糖基化。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以是人、人源化、单链或嵌合抗体。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以是衍生自兔(亲本)抗IL-6抗体的人源化抗体。
在本发明的一个实施方案中，分别在所述抗IL-6抗体或其抗体片段或变体的可变轻链区和可变重链区中的骨架区(FR)可以是未经修饰或已经通过用亲本兔抗体的相应FR残基取代可变轻链或重链区中的至多2或3个人FR残基而被修饰的人FR，并且所述人FR可以衍生自选自人种系抗体序列文库的人可变重链和轻链抗体序列，选择是基于所述人可变重链和轻链抗体序列相对于文库中含有的其它人种系抗体序列与相应的兔可变重链或轻链区的高同源性水平。如下文详细公开的，在一个优选实施方案中，抗体将包含人FR，这些人FR基于其与人源化亲本抗体的FR的高同源性水平(序列同一性的程度)来选择。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以大约4周、大约8周、大约12周、大约16周、大约20周或大约24周的时段至多一次的频率施用至患者。
在本发明的一个实施方案中，患者的凝血状况在相邻的两次抗IL-6抗体施用之间的整个时段保持改善。
在本发明的一个实施方案中，在相邻的两次抗IL-6抗体施用之间的整个时段，患者的血清CRP水平可以保持降低和/或血清白蛋白水平可以保持升高。
在本发明的一个实施方案中，在相邻的两次抗IL-6抗体施用之间的整个时段，患者的恶病质、虚弱、疲劳和/或发热可以保持改善。
在本发明的一个实施方案中，患者可以已经被诊断患有选自以下的癌症：棘皮瘤、腺泡细胞癌、听神经瘤、肢端黑色素瘤、肢端汗腺瘤、急性嗜酸性粒细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性成巨核细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、急性成髓细胞白血病伴成熟、急性髓系树突状细胞白血病、急性髓系白血病、急性前骨髓性白血病、成釉细胞瘤、腺癌、腺样囊性癌、腺瘤、牙源性腺样瘤、肾上腺皮质癌、成人T细胞性白血病、侵袭性NK细胞白血病、AIDS相关癌症、AIDS相关淋巴瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞纤维瘤、肛门癌、间变性大细胞淋巴瘤、间变性甲状腺癌、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管肌脂瘤、血管肉瘤、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型性畸胎样/横纹肌样肿瘤、基底细胞癌、基底细胞样癌、B细胞白血病、B细胞淋巴瘤、Bellini导管癌、胆道癌、膀胱癌、胚细胞瘤、骨癌、骨肿瘤、脑干胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、布伦纳瘤、支气管肿瘤、细支气管肺泡癌、棕色瘤、伯基特淋巴瘤、原发部位不明的癌症、类癌瘤、瘤、原位癌、阴茎癌、原发部位不明癌、癌肉瘤、卡斯特莱曼病、中枢神经系统胚胎肿瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、子宫颈癌、胆管癌、软骨瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、绒毛膜癌、脉络丛乳头状瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性单核细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增生性病症、慢性中性粒细胞性白血病、透明细胞瘤、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、德戈斯病、隆凸性皮肤纤维肉瘤、皮样囊肿、促纤维增生性小圆细胞瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、胚胎性癌、内胚层窦瘤、子宫内膜癌、子宫内膜子宫癌、内膜样瘤、与肠病相关的T-细胞淋巴瘤、成室管膜细胞瘤、室管膜瘤、上皮样肉瘤、红白血病、食管癌、成感觉神经细胞瘤、尤文氏家族肿瘤、尤文氏家族肉瘤、尤文氏肉瘤、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、乳腺外佩吉特病、输卵管癌、胎中胎、纤维瘤、纤维肉瘤、滤泡性淋巴瘤、滤泡性甲状腺癌、胆囊癌、胆囊癌、神经节神经胶质瘤、神经节瘤、胃癌、胃淋巴瘤、胃肠癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤、胃肠道间质瘤、生殖细胞瘤、胚组织瘤、妊娠性绒毛膜癌、妊娠性滋养层细胞瘤、骨巨细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、大脑神经胶质瘤病、血管球瘤、胰高血糖素瘤、性腺胚细胞瘤、粒层细胞瘤、毛细胞性白血病、毛细胞性白血病、头颈癌、头颈癌、心脏癌、成血管细胞瘤、血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、血液系统恶性肿瘤、肝细胞癌、肝脾T细胞淋巴瘤、遗传性乳腺-卵巢癌综合征、霍奇金淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、下丘脑胶质瘤、炎性乳腺癌、眼内黑素瘤、胰岛细胞癌、胰岛细胞瘤、幼年型粒-单核细胞白血病、卡波西肉瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、肝门胆管癌、库肯勃瘤、喉癌、喉癌、恶性雀斑样痣黑素瘤、白血病、白血病、唇及口腔癌、脂肉瘤、肺癌、黄体瘤、淋巴管瘤、淋巴管肉瘤、淋巴上皮瘤、淋巴系白血病、淋巴瘤、巨球蛋白血症、恶性纤维组织细胞瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、恶性胶质瘤、恶性间皮瘤、恶性外周神经鞘瘤、恶性横纹肌样瘤、恶性蝾螈瘤、MALT淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、肥大细胞白血病、纵膈生殖细胞瘤、纵膈肿瘤、甲状腺髓样癌、成神经管细胞瘤、成神经管细胞瘤、髓上皮瘤、黑素瘤、黑素瘤、脑膜瘤、麦克尔细胞癌、间皮瘤、间皮瘤、原发灶不明的颈部转移性鳞癌、转移性膀胱上皮癌、苗勒氏混合瘤、单核细胞白血病、口腔癌、粘液性瘤、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常疾病、骨髓增生异常综合征、髓系白血病、髓系肉瘤、骨髓增生性疾病、粘液瘤、鼻腔癌、鼻咽癌、鼻咽癌、赘生瘤、神经细胞瘤、成神经细胞瘤、成神经细胞瘤、神经纤维瘤、神经瘤、结节性黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、眼肿瘤、少突星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、嗜酸细胞瘤、视神经鞘脑膜瘤、口腔癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、卵巢低度潜在恶性肿瘤、乳房佩吉特病、肺上沟瘤、胰腺癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、乳头状瘤病、神经节细胞瘤、鼻窦癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、血管周围上皮样细胞瘤、鼻咽癌、嗜铬细胞瘤、中分化松果体实质肿瘤、成松果体细胞瘤、垂体细胞瘤、垂体腺瘤、垂体肿瘤、浆细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、多胚瘤、前驱T-淋巴母细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、原发性肝细胞癌、原发性肝癌、原发性腹膜癌、原始神经外胚层瘤、前列腺癌、腹膜假性粘液瘤、直肠癌、肾细胞癌、涉及染色体15上的NUT基因的呼吸道癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、里希特转化、骶尾部畸胎瘤、唾液腺癌、肉瘤、雪旺氏细胞瘤、皮脂腺癌、继发性瘤、精原细胞瘤、浆液瘤、塞-莱二氏细胞瘤、性索-间质肿瘤、塞泽里综合征、印戒细胞癌、皮肤癌、蓝色小圆形细胞瘤、小细胞癌、小细胞肺癌、小细胞淋巴瘤、小肠癌、软组织肉瘤、生长抑素瘤、煤烟疣、脊髓瘤、脊髓肿瘤、脾边缘区淋巴瘤、鳞状细胞癌、胃癌、浅表扩展性黑素瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、表面上皮-间质瘤、滑膜肉瘤、T细胞急性成淋巴细胞性白血病、T细胞大颗粒淋巴细胞白血病、T细胞白血病、T细胞淋巴瘤、T细胞幼淋巴细胞白血病、畸胎瘤、末期淋巴癌、睾丸癌、泡膜细胞瘤、喉癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、移行细胞癌、脐尿管癌、尿道癌、泌尿生殖系统肿瘤、子宫肉瘤、葡萄膜黑素瘤、阴道癌、凡-莫二氏综合征、疣状癌、视路胶质瘤、外阴癌、华氏巨球蛋白血症、沃辛瘤、维尔姆斯肿瘤或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，患者可以被诊断患有选自以下的癌症：结肠直肠癌、非小细胞肺癌、胆管癌、间皮瘤、卡斯特莱曼病、肾细胞癌或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以包含重链多肽序列，其包含：SEQ ID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665或708；并且可以还包含VL多肽序列，其包含：SEQ ID NO:2、20、647、651、660、666、699、702、706、或709，或其变体，其中所述VH或VL多肽的构架残基(FR残基)的一个或多个已经被另一氨基酸残基取代，得到特异性结合人IL-6的抗IL-6抗体或其抗体片段或变体，或者可以包含其中的CDRs被并入与所述序列同源的人构架中的多肽。优选地，可变重链和轻链序列包含SEQ ID NO:657和709中的那些(人源化Ab1)。
在本发明的一个实施方案中，所述FR残基的一个或多个可以被供衍生所述VH或VL多肽中含有的互补决定区(CDR)的亲本兔抗IL-6抗体中相应位置存在的氨基酸取代或经保守氨基酸取代。
在本发明的一个实施方案中，所述抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以是人源化的。
在本发明的一个实施方案中，所述抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以是嵌合的。
在本发明的一个实施方案中，所述抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以还含人Fc，例如包含SEQ ID NO:704和702中含有的可变重链和轻链恒定区的Fc区。
在本发明的一个实施方案中，所述人Fc可以衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以包含与以下多肽序列的一个或多个具有至少90%序列同源性的多肽：SEQ ID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704、708、2、20、647、651、660、666、699、702、706和709。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以具有至少约22天、至少约25天或至少约30天的清除半衰期。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂如Ab1可以与化疗剂共同施用。在本发明的一个实施方案中，所述化疗剂包括但不限于：VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇类、依立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、甲酰四氢叶酸、类固醇、环磷酰胺、美法仑、长春花生物碱(例如，长春花碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨)、氮芥类、酪氨酸激酶抑制剂、放疗、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素(例如，IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗剂、与毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠单抗、抗CD20抗体、Rituxan
Figure BDA00001909859700391
奥瑞珠单抗、奥法木单抗、DXL625、Herceptin
Figure BDA00001909859700392
或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述另一种治疗化合物可以是他汀类药物。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以直接或间接连接至可检测标记或治疗剂。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或其抗体片段或变体可以是Ab1或包含Ab1的CDR的全部或大部分的其人源化、嵌合、单链或片段。
在本发明的一个实施方案中，疾病或病状可能选自急性静脉血栓形成、肺栓塞、孕期血栓形成、出血性皮肤坏死、急性或慢性弥漫性血管内凝血(DIC)、术后血块形成、长期卧床、长期不活动、静脉血栓形成、暴发性脑膜炎、急性血栓性中风、急性冠状动脉闭塞、急性外周动脉闭塞、大块肺栓塞、腋静脉血栓形成、大块髂股静脉血栓形成、动脉导管闭塞、静脉导管闭塞、心肌病、肝静脉闭塞性疾病、低血压、心输出量减少、血管阻力减小、肺动脉高压、肺顺应性减少、白细胞减少症、血小板减少症、肝素诱导性血小板减少症(HIT)、肝素诱导性血小板减少症和血栓形成(HITT)、心房颤动、人工心脏瓣膜的移植、血栓形成的遗传易感性、莱登第五因子、凝血酶原基因突变、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)多态性、血小板受体多态性、外伤、骨折、烧伤或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，疾病或病状可能选自癌症、类风湿性关节炎、AIDS、心脏病、脱水、营养不良、铅暴露、疟疾、呼吸系统疾病、老年、甲状腺功能减退、结核病、垂体功能减退、神经衰弱、高钠血症、低钠血症、肾病、脾肿(splenica)、强直性脊柱炎、发育停滞(生长迟缓)或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括施用恶病质相关性因子、虚弱相关性因子、疲劳相关性因子和/或发热相关性因子的拮抗剂。恶病质相关性因子、虚弱相关性因子、疲劳相关性因子和/或发热相关性因子可能选自肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白介素1α、白介素1β、白介素6、蛋白水解诱导因子、白血病抑制因子或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括施用抗恶病质剂，所述抗恶病质剂选自大麻、屈大麻酚(MarinolTM)、大麻隆(Cesamet)、大麻二酚、大麻环萜酚、四氢大麻酚、沙替菲克、醋酸甲地孕酮或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括施用抗恶心或止吐剂，所述抗恶心或止吐剂选自5-HT3受体拮抗剂、阿魏、阿立必利、抗胆碱能剂、抗组胺剂、阿瑞匹坦、苯二氮卓类、大麻环萜酚、大麻二酚、大麻素类、大麻、卡索匹坦、氯丙嗪、苯甲嗪、地塞米松、地塞米松、乘晕宁(GravolTM)、苯海拉明、多拉司琼、多潘立酮、多巴胺拮抗剂、多西拉敏、屈大麻酚(MarinolTM)、氟哌利多、愈吐宁、姜、康泉、氟哌丁苯、羟嗪、东莨菪碱、劳拉西泮、氯苯甲嗪、甲氧氯普胺、咪达唑他、蝇蕈醇、大麻隆(Cesamet)、nk1受体拮抗剂、昂丹司琼、帕洛诺司琼、薄荷、非那根、丙氯拉嗪、Promacot、异丙嗪、五嗪、丙泊酚、沙替菲克、四氢大麻酚、三甲氧苯酰胺、托烷司琼、诺龙、己烯雌酚、沙利度胺、来那度胺、饥饿素激动剂、肌抑素拮抗剂、抗肌抑素抗体、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、血管紧张素AII拮抗剂、β2肾上腺素受体激动剂、β3肾上腺素受体激动剂或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括施用抗恶心或止吐剂，所述抗恶心或止吐剂选自5-HT3受体拮抗剂、阿魏、阿立必利、抗胆碱能剂、抗组胺剂、阿瑞匹坦、苯二氮卓类、大麻环萜酚、大麻二酚、大麻素类、大麻、卡索匹坦、氯丙嗪、苯甲嗪、地塞米松、地塞米松、乘晕宁(GravolTM)、苯海拉明、多拉司琼、多潘立酮、多巴胺拮抗剂、多西拉敏、屈大麻酚(MarinolTM)、氟哌利多、愈吐宁、姜、康泉、氟哌丁苯、羟嗪、东莨菪碱、劳拉西泮、氯苯甲嗪、甲氧氯普胺、咪达唑他、蝇蕈醇、大麻隆(Cesamet)、nk1受体拮抗剂、昂丹司琼、帕洛诺司琼、薄荷、非那根、丙氯拉嗪、Promacot、异丙嗪、五嗪、丙泊酚、沙替菲克、四氢大麻酚、三甲氧苯酰胺、托烷司琼、诺龙、己烯雌酚、沙利度胺、来那度胺、饥饿素激动剂、肌抑素拮抗剂、抗肌抑素抗体、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、血管紧张素AII拮抗剂、β2肾上腺素受体激动剂、β3肾上腺素受体激动剂或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，患者发热可以通过测量患者的体温来评估。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用抗IL-6抗体之前测量患者体温，如果患者体温高于约38℃则施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用抗IL-6抗体之前的24小时之内测量患者体温，如果患者的体温测量显示其已发烧则施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体。
在本发明的一个实施方案中，所述方法还可以包括在施用抗IL-6抗体之前测量患者体重，如果患者体重在约30天内下降大于约5%或者患者的瘦体重指数小于约17kg/m2(男性患者)或小于约14kg/m2(女性患者)，则施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用抗IL-6抗体之前测量患者肌强度，如果患者肌强度在约30天内下降大于约20%则施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以导致患者恶病质、虚弱、疲劳和/或发烧长期改善。
在本发明的一个实施方案中，患者体重可以在施用抗IL-6抗体或其抗体片段或变体约4周内增加约1千克。
在本发明的一个实施方案中，患者的恶病质可以在施用抗IL-6抗体约4周内得到可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的恶病质可以通过测量患者的总体重、瘦体重、瘦体重指数和/或四肢瘦体重来评估。
在本发明的一个实施方案中，患者的体重测量可能扣除(减去)患者的肿瘤和/或血管外积液的估计重量。
在本发明的一个实施方案中，患者的恶病质可以在施用抗IL-6抗体约8周后保持可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的虚弱可以在施用抗IL-6抗体约4周内得到可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的虚弱可以通过手握力测试来测定。
在本发明的一个实施方案中，患者的手握力可以提高至少约15%，或至少约20%。
在本发明的一个实施方案中，患者的虚弱可以在施用抗IL-6抗体约8周后保持可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的疲劳可以在施用抗IL-6抗体约1周内得到可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的疲劳可以通过FACIT-F FS测试来测定。
在本发明的一个实施方案中，患者的FACIT-F FS分数可以提高至少约10分。
在本发明的一个实施方案中，患者的疲劳可以在施用抗IL-6抗体约8周后保持可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的发热可以在施用抗IL-6抗体约1周内得到可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的发热可以在施用抗IL-6抗体约8周后保持可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的生活质量可以提高。
在本发明的一个实施方案中，可以包括施用一种或多种抗凝血剂或他汀类药物。
在本发明的一个实施方案中，所述一种或多种抗凝血剂可以选自阿昔单抗(ReoProTM)、心得隆、抗凝血酶III、阿加曲班、阿司匹林、比伐卢定(AngiomaxTM)、氯吡格雷、达比加群、达比加群酯(PradaxaTM/PradaxTM)、地西卢定(RevascTM/IprivaskTM)、双嘧达莫、埃替非巴肽(IntegrilinTM)、磺达肝素、肝素、水蛭素、艾卓肝素、来匹卢定(RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群、苯茚二酮、苯丙香豆素、噻氯匹定、替罗非班(AggrastatTM)、华法林、希美加群、希美加群(ExantaTM/ExartaTM)或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述一种或多种他汀类药物可以选自阿伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、斯伐他汀或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，患者的凝血状况可以通过测量患者的D-二聚体、因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纤维蛋白降解产物、凝血酶-抗凝血酶III复合物、纤维蛋白原、凝血酶原、纤溶酶原和温韦伯氏因子的一种或多种的血清水平来评估。
在本发明的一个实施方案中，患者的凝血状况可以通过凝固能力的功能性测量来评估。
在本发明的一个实施方案中，凝固能力的功能性测量可以选自凝血酶原时间(PT)、凝血酶原比率(PR)、国际标准化比率(INR)或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用IL-6拮抗剂之前测量患者的国际标准化比率(INR)，如果患者的INR小于约0.9则对患者施用IL-6拮抗剂如Ab1。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用IL-6拮抗剂之前测量患者的国际标准化比率(INR)，如果患者的INR小于约0.5则对患者施用IL-6拮抗剂如Ab1。
在本发明的一个实施方案中，患者的INR在对患者施用IL-6拮抗剂4周内提高到大于约0.9。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用IL-6拮抗剂之前测量患者的血清D-二聚体水平，如果患者的血清D-二聚体水平高于正常参考范围则施用IL-6拮抗剂如Ab1。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清D-二聚体水平可以在对患者施用IL-6拮抗剂4周内降低到小于正常参考范围的上限。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以导致患者的凝血状况长期改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的凝血状况可以在施用IL-6拮抗剂约2周内得到可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的凝血状况可以在施用IL-6拮抗剂约12周后保持可测量的改善。
在本发明的一个实施方案中，患者的生命力可以提高。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以是反义核酸。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以是反义核酸，例如包含编码IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3或SYK的序列的至少约10个核苷酸。
在本发明的一个实施方案中，反义核酸可以包括DNA、RNA、肽核酸、锁核酸、吗啉代(磷二酰胺吗啉代寡核苷酸)、甘油核酸、苏糖核酸或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以包括ActemraTM(托珠单抗)、Remicade
Figure BDA00001909859700461
ZenapaxTM(达利珠单抗)或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以包含具有包括IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK或其任意组合的片段的序列的多肽，例如长度为至少40个氨基酸的片段或全长多肽。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以包括可溶性IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，IL-6拮抗剂可以与增加半衰期的部分偶联。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用所述抗IL-6抗体之前测量患者的血清CRP水平，如果患者的血清CRP水平为至少约5mg/L，则施用所述抗IL-6抗体或其抗体片段或变体。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清CRP水平可以在施用IL-6拮抗剂1周内下降至低于约5mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清CRP水平可以在施用IL-拮抗剂1周内下降至低于1mg/L。
在本发明的一个实施方案中，治疗可以导致患者血清CRP水平的长期下降。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用约1周内下降至低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用后14天保持低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用后21天保持低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用后28天保持低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用后35天保持低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用后42天保持低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用后49天保持低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者血清CRP水平可以在IL-6拮抗剂施用后56天保持低于10mg/L。
在本发明的一个实施方案中，患者的生命力被提高。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以包括在施用所述IL-6拮抗剂之前测量患者的血清白蛋白水平，如果患者的血清白蛋白水平低于约35g/L，则施用所述IL-6拮抗剂。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清白蛋白水平可以在施用IL-6拮抗剂约5周内被提高至超过约35g/L。
在本发明的一个实施方案中，治疗可以导致患者血清白蛋白水平的长期提高。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清白蛋白水平可以在IL-6拮抗剂施用之后42天保持高于35g/L。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清白蛋白水平可以在IL-6拮抗剂施用之后49天保持高于35g/L。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清白蛋白水平可以在IL-6拮抗剂施用之后56天保持高于35g/L。
在本发明的一个实施方案中，患者的血清白蛋白水平可以在施用IL-6拮抗剂约5周内被提高约5g/L。
在本发明的一个实施方案中，患者可以已经被诊断患有类风湿性关节炎、癌症、晚期癌症、肝病、肾病、炎性肠病、腹部疾病、外伤、烧伤、与降低的血清白蛋白相关的其它疾病或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，所述方法可以还包括给患者施用一种或多种他汀类药物，包括但不限于阿伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、斯伐他汀或其任意组合。
本发明的另一个实施例涉及含有如Ab1的IL-6拮抗剂和抗凝血剂的组合物。在本发明的一个实施例中，所述一种或多种抗凝血剂可选自阿昔单抗(ReoProTM)、心得隆、抗凝血酶III、阿加曲班、阿司匹林、比伐卢定(AngiomaxTM)、氯吡格雷、达比加群、达比加群酯(PradaxaTM/PradaxTM)、地西卢定(RevascTM/IprivaskTM)、双嘧达莫、埃替非巴肽(IntegrilinTM)、磺达肝素、肝素、水蛭素、艾卓肝素、来匹卢定(RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群、苯茚二酮、苯丙香豆素、噻氯匹定、替罗非班(AggrastatTM)、华法林、希美加群、希美加群(ExantaTM/ExartaTM)或其任意组合。
本发明的另一个实施例涉及含有如Ab1的IL-6拮抗剂和化疗剂的组合物。在本发明的一个实施例中，所述化疗剂可选自VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇类、依立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、甲酰四氢叶酸、类固醇、环磷酰胺、美法仑、长春花生物碱(如长春花碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨)、氮芥类、酪氨酸激酶抑制剂、放疗、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素(如IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗剂、与毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠单抗、抗-CD20抗体、Rituxan
Figure BDA00001909859700491
、奥瑞珠单抗、奥法木单抗、DXL625、Herceptin
Figure BDA00001909859700492
或其任意组合。
附图简述
图1示出许多独特表位通过由抗体选择方案制备的抗IL-6抗体的集合来识别。表位变异性通过抗体-IL-6结合竞争研究(ForteBioOctet)来确认。
图2示出兔抗体可变轻链和可变重链序列与同源的人序列和人源化序列之间可变轻链和可变重链序列的比对。骨架区被标示为FR1-FR4。互补决定区被标示为CDR1-CDR3。氨基酸残基如所示编号。原始兔序列的可变轻链序列和可变重链序列分别称为RbtVL和RbtVH。从构架1至构架3末端的三个最相似的人种系抗体序列比对在兔序列下面。被认为与兔序列最相似的人序列被首先显示。在该实施例中，那些最相似的序列是轻链L12A和重链3-64-04。人CDR3序列未显示。最接近的人构架4序列比对在兔构架4序列下面。垂直的短线指示其中兔残基与相同位置的人残基的一个或多个相同的残基。加粗的残基指示在该位置的人残基与相同位置的兔残基相同。最后的人源化序列的可变轻链序列和可变重链序列分别被称为VLh和VHh。加下划线的残基指示该残基与该位置的兔残基相同，但是不同于三个被比对的人序列中该位置的人残基。
图3说明示例性IL-6方案产生的IgG与抗原特异性之间高度相关。11个孔中有9个显示与抗原识别的特异性IgG相关性。
图4提供了在剂量100μg/kg s.c.施用人IL-6后1小时以不同剂量静脉内施用的抗体Ab1的α-2-巨球蛋白(A2M)剂量反应曲线。
图5提供了抗体Ab1递进组与对照组的存活数据。
图6提供了抗体Ab1递归组与对照组的额外存活数据。
图7提供了每三天10mg/kg i.v.的多克隆人IgG(270-320mg肿瘤尺寸)与每三天10mg/kg i.v.的抗体Ab1(270-320mg肿瘤尺寸)的存活数据。
图8提供每三天10mg/kg i.v.的多克隆人IgG(400-527mg肿瘤尺寸)与每三天10mg/kg i.v.的抗体Ab1(400-527mg肿瘤尺寸)的存活数据。
图9提供了抗体Ab1在食蟹猴中的药代动力学曲线。抗体Ab1的血浆水平通过抗原捕获ELISA来定量。该蛋白表现出12至17天的半衰期，与其它全长人源化抗体一致。
图10(A-D)分别提供了抗体Ab4、Ab3、Ab8和Ab2的结合数据。图10E提供了抗体Ab1、Ab6和Ab7的结合数据。
图11以表格形式总结了图10(A-E)的结合数据。
图12展示了实施例14的肽定位实验中使用的15氨基酸肽的序列。
图13展示了实施例14中制备的印迹结果。
图14展示了实施例14中制备的印迹结果。
图15A示出Ab1对各个物种的IL-6的亲和力和结合动力学。
图15B说明在T1165细胞增殖测定中Ab1对IL-6的抑制。
图16示出以几个剂量组给健康雄性受试者单次施用Ab1得到的Ab1平均血浆浓度。
图17示出图16所示剂量组的平均的血浆Ab1浓度时间曲线下面积(AUC)。
图18示出图16所示剂量组的平均峰值血浆Ab1浓度(Cmax)。
图19总结了图16所示剂量组的Ab1药代动力学测量结果。
图20示出给晚期癌症患者单次施用Ab1得到的Ab1的平均血浆浓度。
图21示出与其它抗IL-6抗体相比空前的Ab1清除半衰期。
图22示出在给晚期癌症患者施用Ab1之后增加的血红蛋白浓度。
图23示出在给晚期癌症患者施用Ab1之后的平均血浆脂质浓度。
图24显示在给晚期癌症患者施用Ab1之后的平均中性粒细胞计数。
图25说明健康个体中血清CRP水平的抑制。
图26(A-B)说明晚期癌症患者中血清CRP水平的抑制。
图27示出Ab1在小鼠癌症恶病质模型中预防体重减轻。
图28示出代表性Ab1治疗的小鼠和对照小鼠在癌症恶病质模型中的外观。
图29说明Ab1在晚期癌症患者中促进体重增加。
图30说明Ab1在晚期癌症患者中减少疲劳。
图31说明Ab1在晚期癌症患者中促进手握力。
图32说明Ab1在小鼠中抑制急性期蛋白(血清淀粉样蛋白A)。
图33说明Ab1在晚期癌症患者中增加血浆白蛋白浓度。
图34和35示出兔抗体轻链和可变重链序列与同源的人序列和人源化序列之间的比对。骨架区被标示为FR1-FR4。互补决定区被标示为CDR1-CDR3。
图36A-B和37A-B分别示出不同形式的Ab1的轻链和可变重链序列之间的比对。骨架区被标示为FR1-FR4。互补决定区被标示为CDR1-CDR3。CDR区域内的序列差异被突出显示。
图38示出Ab1单克隆抗体的每个剂量浓度(安慰剂、80mg、160mg和320mg)的平均CRP值。
图39示出对应于图38的每个剂量浓度组的CRP中值的变化。
图40示出在以80、160或320mg剂量给药12周后各种癌症患者中血清CRP水平的减少。
图41示出在以80、160和320mg剂量给药12周后类风湿性关节炎患者群体中血清CRP水平的减少。
图42说明80、160和320mg的Ab1在给药12周后增加平均血红蛋白。
图43说明图42中展示的数据从基线血红蛋白的平均变化。
图44说明160和320mg的Ab1在具有低于11g/l的基线血红蛋白的患者中给药12周后增加平均血红蛋白。
图45说明80、160和320mg的Ab1在给药16周后增加平均血红蛋白。
图46说明80、160和320mg的Ab1在给药12周后增加平均白蛋白浓度。
图47说明对应于图46的每个剂量浓度组的平均白蛋白浓度的基线变化。
图48说明160和320mg的Ab1在具有低于35g/l的基线白蛋白的患者中给药12周后提供持续增加的平均白蛋白浓度。
图49说明Ab1单克隆抗体的每个剂量浓度组(安慰剂、80mg、160mg和320mg)在12周内的平均体重变化数据。
图50说明对应于图49的每个剂量浓度组的体重的平均百分比变化。
图51说明对应于图49的剂量浓度组的平均瘦体重数据的变化。
图52说明在以80mg、160mg和320mg剂量给药8周后，患者群体中一些剂量浓度组的平均Facit-F FS子量表分数的增加。
图53说明对应于图52的基线Facit-F FS子量表分数的变化。
图54说明Ab1在以80、160和320mg的剂量给药16周后降低D-二聚体水平优于安慰剂。
图55说明对应于图54的每个剂量浓度组的D-二聚体浓度的基线百分比变化。
图56说明基于ACR度量，对类风湿性关节炎患者的治疗产生显著改善优于安慰剂。
图57说明在以80、160和320mg的剂量给药16周后患者实现ACR20优于安慰剂。
图58说明在以80、160和320mg的剂量给药16周后患者实现ACR50优于安慰剂。
图59说明在以80、160和320mg的剂量给药16周后患者实现ACR70优于安慰剂。
图60说明安慰剂、80、160和320mg的剂量浓度组的ACR度量的组成部分的基线变化。
图61说明安慰剂、80、160和320mg剂量浓度组的HAQ-DI分数的变化。
图62说明安慰剂、80、160和320mg剂量浓度组DAS28分数的变化。
图63说明安慰剂、80、160和320mg剂量浓度组的实现EULAR良好或中等应答的患者的百分比变化。
图64示意性示出与使用人源化Ab1来治疗类风湿性关节炎有关的临床研究。
图65示出皮下(SC)或静脉(iv)给药后人源化Ab1在类风湿性关节炎患者中的血浆浓度。
图66示出皮下或静脉给药人源化Ab1后血浆CRP水平浓度。
图67含有列举施用人源化Ab1的患者第24周的不良事件的表。
图68含有列举抗体施用后第12周对人源化Ab1的注射部位反应的表。
图69列表示出皮下或静脉施用人源化Ab1和对照的患者在人源化Ab1施用后第12周的临床实验室评价(ALT、AST、胆红素、中性粒细胞计数和血小板计数)。
图70列表示出皮下或静脉施用人源化Ab1后第24周患者的血浆药动学参数。
图71示出50或100mg的抗体给药后第12周皮下和静脉ALD518施用的效果。
详述
定义
要理解，本发明不限于所描述的特定方法、方案、细胞系、动物种或属以及试剂，因而这些可以变化。还要理解，本文使用的术语仅是为了描述特定实施方案，而不是要限制本发明的范围，本发明范围仅由所附权利要求来限定。
术语“变体”(如用于包括Ab1的抗体)包括单链抗体、二聚体、多聚体、序列变体、结构域取代变体等。单链抗体，如SMIPs、鲨鱼抗体、纳米抗体(如Camelidiae抗体)。序列变体可通过同一性(或相似性)百分比规定，如99%、95%、90%、85%、80%、70%、60%等，或通过允许的保守或非保守取代的数目规定。结构域取代变体包括用相关蛋白质的类似结构域替代某蛋白质的结构域。类似结构域可通过序列、结构(实际或预测)或功能的相似性来识别。例如，结构域取代变体包括一个或多个CDR和/或骨架区的取代。
除非上下文另外清楚说明，否则本文使用的单数形式″一种″、″一个″和″该″包括多个指代物。因此，例如，对“一个细胞”的提及包括多个此类细胞，对“该蛋白”的提及包括一种或多种蛋白以及本领域技术人员已知的其等同物，依此类推。除非另外清楚说明，本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。
白介素-6(IL-6)：本文使用的白介素-6(IL-6)不仅包括可获得为GenBank蛋白登记号NP_000591的下述212氨基酸序列：MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERODKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM(SEQ ID NO:1)，而且还包括该IL-6氨基酸序列的任何前原-、原-和成熟形式，以及该序列的突变体和变体，包括等位基因变体。
IL-6拮抗剂：本文使用的术语“IL-6拮抗剂”及其语法变体包括预防、抑制或减轻IL-6信号传导作用的任何组合物。一般，此类拮抗剂可以降低IL-6、IL-6受体α、gp130或参与IL-6信号转导的分子的水平或活性，或者可以降低前述之间复合物的水平或活性(例如，降低IL-6/IL-6受体复合物的活性)。拮抗剂包括反义核酸，包括DNA、RNA或核酸类似物，诸如肽核酸、锁核酸、吗啉代(磷二酰胺吗啉代寡核苷酸)、甘油核酸或苏糖核酸。参见Heasman,Dev Biol.2002 Mar15;243(2):209-14；Hannon和Rossi,Nature.2004 Sep16;431(7006):371-8；Paul等.,Nat Biotechnol.2002 May;20(5):505-8；Zhang等.,J Am Chem Soc.2005 Mar 30;127(12):4174-5；Wahlestedt等.,Proc Natl Acad Sci USA.2000 May 9;97(10):5633-8；Hanvey等.,1992 Nov 27;258(5087):1481-5；Braasch等.,Biochemistry.2002 Apr9;41(14):4503-10；Schoning等,Science.2000 Nov17;290(5495):1347-51。此外，IL-6拮抗剂特别包括阻断IL-6信号传导的肽，例如美国专利第6,599,875号；第6,172,042号；第6,838,433号；第6,841,533号；第5,210,075号等中任何一个中描述的那些。而且，根据本发明的IL-6拮抗剂可以包括p38MAP激酶抑制剂，例如US20070010529等中报导的那些，考虑到该激酶在细胞因子生成且特别是IL-6生成中的作用。此外，根据本发明的IL-6拮抗剂包括US20050090453中报导的配糖生物碱化合物以及可使用其中报导的IL-6拮抗剂筛选测定分离的其它IL-6拮抗剂化合物。其它IL-6拮抗剂包括抗体，例如抗IL-6抗体、抗IL-6受体α抗体、抗gp130抗体和抗p38MAP激酶抗体，包括(但不限于)本文公开的抗IL-6抗体、ActemraTM(托珠单抗)、Remicade
Figure BDA00001909859700561
ZenapaxTM(达利珠单抗)或其任意组合。其它IL-6拮抗剂包括参与IL-6信号传导的分子的部分或片段，所述分子例如IL-6、IL-6受体α和gp130，其可以是天然的、突变的或变体序列，并且可以任选地与其它部分(例如，增加半衰期的部分，例如Fc结构域)偶联。例如，IL-6拮抗剂可以是可溶性IL-6受体或片段、可溶性IL-6受体:Fc融合蛋白、IL-6的小分子抑制剂、抗IL-6受体抗体或其抗体片段或变体、反义核酸等。其它IL-6拮抗剂包括avemirs例如C326(Silverman等.,Nat Biotechnol.2005Dec;23(12):1556-61)和小分子例如合成的类视黄醇AM80(他米巴罗汀)(Takeda等.,Arterioscler Thromb Vasc Biol.2006May;26(5):1177-83)。此类IL-6拮抗剂可以通过本领域已知的任何方式施用，包括使受试者与编码前述任何多肽或反义序列或者引起前述任何多肽或反义序列表达的核酸接触。
血栓形成：如本文使用，血栓形成指血管内的血栓(血凝块)。该术语包括但不限于，动脉血栓形成和静脉血栓形成(其包括深静脉血栓形成、门静脉血栓形成、颈静脉血栓形成、肾静脉血栓形成)、中风、心肌梗塞、布-加综合征、Paget-Schroetter病和大脑静脉窦血栓形成。与血栓形成有关的以及有风险发生血栓形成或高凝状态的疾病和病状包括但不限于，急性静脉血栓形成、肺动脉栓塞、孕期血栓形成、出血性皮肤坏死、急性或慢性弥散性血管内凝血(DIC)、术后血块形成、长期卧床、长期不活动、排除或限制运动的病状如局部或完全瘫痪、病态肥胖、阻碍氧的摄取和吸收的病症如肺病症包括肺癌、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺气肿、药物相关纤维化、囊性纤维病、静脉血栓形成、暴发性脑膜炎球菌败血症、急性血栓性中风、急性冠状动脉闭塞、急性外周动脉闭塞、大块肺栓塞、腋静脉血栓形成、大规模的髂股静脉血栓形成、动脉导管闭塞、静脉导管闭塞、心肌病、肝内静脉闭塞症、低血压、心输出量减少、血管阻力减小、肺动脉高血压、肺顺应性减少、白细胞减少症和血小板减少症。
D-二聚体：如本文使用，D-二聚体指血液凝块分解过程中由纤溶酶产生的纤维蛋白降解产物。对D-二聚体有特异性反应的单克隆抗体很容易得到，如DD-3B6/22(Elms等,1986,Am J Clin Pathol.85:360-4)。D-二聚体水平的临床测量按常规进行，如使用红细胞凝集试验，ELISA等(综述于Dempfle，Semin Vasc Med，2005Nov;5(4):315-20)。D-二聚体的测量结果可根据测量方法和测试实验室变化；尽管如此，针对任何特定的方法和测试实验室的正常的“参考范围”可以很容易建立，例如从健康个体进行测量。相应地，本领域的技术人员了解升高的D-二聚体水平指针对特定的方法和测试实验室，D-二聚体水平高于参考范围。
凝血状况：如本文使用，凝血状况通常指凝血系统的机能。组织因子(外部的)和接触激活(内在的)的凝固途径都是凝血状况的组成部分。正常的凝血状况指正常的健康个体中的凝血机能，即，使控制出血的能力和过度凝固的倾向性(血栓形成倾向)之间保持平衡。异常的凝血状况可能是凝血倾向的减少或增加。一种特别异常的凝血状况是高凝状态，其指过度凝块形成的风险大大增加，导致血栓形成的高风险。凝血状况可通过本领域所熟知的各种测试和测定评估，如：活化部分凝血激酶时间(aPTT)测试；凝血酶原时间(PT)测试(典型的参考范围为12至15秒)；源自PT测试的测量，如凝血酶原比率(PR)和国际标准化比率(INR)(典型的参考范围为0.8至1.2)；纤维蛋白原检测(如克劳斯方法(Clauss A，“Rapid Physiological Coagulation Method for theDetermination of Fibrinogen[German](用于测定纤维蛋白原的快速生理凝固方法[德国])，”Acta Haematol，1957，17:237-46)或埃利斯方法(Ellis BC和Stransky A，“A Quick and Accurate Method for theDetermination of Fibrinogen in Plasma(用于血浆中纤维蛋白原测定的快速准确的方法)，“J Lab Clin Med，1961，58:477-88)；用于活化蛋白质C耐药性、蛋白质C、蛋白质S和抗凝血酶的测定；用于抗磷脂抗体(狼疮抗凝物和抗心磷脂抗体)的测定；升高的同型半胱氨酸；用于纤溶酶原、血纤维蛋白原异常、肝素辅因子Ⅱ或血小板高聚集功能的测定。其它对评估凝血状况有用的测定包括如下的凝固因子和/或凝固指标的测量：如D-二聚体的血清水平、因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纤维蛋白降解产物、凝血酶-抗凝血酶III复合物、血小板增多、纤维蛋白原、纤溶酶原、凝血酶原和温韦伯氏因子。凝血状况的恶化指凝血指标(例如，上述任意测定)的可测量的变化，其反映正常凝血倾向的恶化，以致于测量值变得异常或远比以前偏离正常范围。凝血状况的改善指凝血指标(例如，上述任意测定)的可测量的变化，其反映正常凝血倾向的部分或完全恢复，即，在治疗干预后，如施用抗IL-6抗体后，所述测量值在正常范围内或比在所述治疗干预前接近正常范围。
疾病或病状：本文使用的“疾病或病状”指患者已经被诊断患有或怀疑患有的疾病或病状，特别是与升高的IL-6相关的疾病或病状。疾病或病状包括但不限于药物或治疗(例如放疗)的副作用，以及特征为包括升高的IL-6的症状的特发性病状。
恶病质：本文使用的恶病质还称为消耗性疾病，指特别标志为进行性消瘦、虚弱、一般健康欠佳、营养不良、体重减轻、肌肉量减少或慢性炎症反应情境中骨骼肌加速减少的任何疾病(综述于Kotler,Ann Intern Med.2000 Oct 17;133(8):622-34)。其中经常观察到恶病质的疾病和病状包括癌症、类风湿性关节炎、AIDS、心脏病、脱水、营养不良、铅暴露、疟疾、呼吸系统疾病、老年、甲状腺功能减退、结核病、垂体功能减退、神经衰弱、高钠血症、低钠血症、肾病、脾肿(splenica)、强直性脊柱炎、发育停滞(生长迟缓)和其它疾病，特别是慢性疾病。恶病质还可以是特发性的(源于不确定的原因)。患者体重评估被理解为排除生长或积液，例如肿瘤重量、血管外积液等。恶病质可以通过测量患者总体重(排除生长或积液)、总的瘦(无脂肪)体重、胳膊和腿的瘦体重(四肢瘦体重，例如使用双能X线吸收测量法或生物电阻抗光谱法来测量)和/或瘦体重指数(瘦体重除以患者身高的平方)来评估。参见Kotler,Ann Intern Med.2000 Oct17;133(8):622-34；Marcora等.,Rheumatology(Oxford).2006Nov;45(11):1385-8。
虚弱：本文使用的虚弱指身体疲劳，通常表现为肌强度和/或耐力下降。虚弱可以是中枢的(影响身体的大部分或全部肌肉)或外周的(影响小部分肌肉)。虚弱包括其中患者肌肉在峰值和/或持续力量输出的某些测量中下降的“真实虚弱”和其中即使客观测量的强度依然接近相同但患者感觉需要更大的努力来进行任务的“感觉虚弱”，并且可以由患者客观测量或自我报告。例如，虚弱可以使用手握力测试(用于评价肌强度的医学上认可的测试)来客观测量，通常采用手握测力计。
疲劳：本文使用的疲劳指精神疲劳(对于身体疲劳参见“虚弱”)。疲劳包括困倦(瞌睡)和/或注意力下降。疲劳可以使用本领域已知的多种测试测量，例如FACIT-F(功能性评估慢性疾病疗法-疲劳)测试。参见例如,Cella,D.,Lai,J.S.,Chang,C.H.,Peterman,A.,& Slavin,M.(2002).Fatigue in cancer patients compared with fatigue in the generalpopulation.Cancer,94(2),528-538；Cella,D.,Eton,D.T.,Lai,F J-S.,Peterman,A.H & Merkel,D.E.(2002).Combining anchor anddistribution based methods to derive minimal clinically importantdifferences on the Functional Assessment of Cancer Therapy anemia andfatigue scales.Journal of Pain & Symptom Management,24(6)547-561.
发热：本文使用的“发热”指升高至少1至2摄氏度的体温设定点。发热通常伴随主观上感觉低温，表现为冷觉、颤栗、增加的心率和呼吸率，藉此个体身体达到提高的设定点。如医学领域公知的，正常体温通常随活动水平和一天的时间而变化，在下午和傍晚观察到最高的温度，而在睡眠周期的后半段观察到最低的温度，并且温度测量结果可以受到外部因素的影响，所述外部因素例如经口呼吸、食物或饮料的消耗、吸烟或环境温度(取决于测量类型)。而且，个体的正常温度设定点可以变化达约0.5摄氏度，因此，医疗人员可以鉴于这些因素来解释个体的温度，以诊断是否存在发热。一般而言，发热通常被诊断为核心体温高于38摄氏度，口腔温度高于37.5摄氏度，或者腋下温度高于37.2摄氏度。
改善：本文提供的“改善的”、“改善”和其它语法变体包括治疗产生的任何有益变化。有益变化是其中患者状况好于在没有治疗时的状况的任何方式。“改善的”包括预防不希望的病状，减缓病状恶化的速率，延迟不希望病状的发展，和恢复到基本正常的状态。例如，恶病质的改善涵盖患者体重的任何增加，例如总体重(排除在恶病质评估期间正常排除的重量，例如肿瘤重量、血管外积液，等)、瘦体重和/四肢瘦体重，以及体重损失速率的任何延迟或减缓，或者预防或减缓与患者已经被诊断的疾病或病状相关的重量损失。对于另一实例，虚弱的改善涵盖患者强度的任何增加，以及强度损失速率的任何延迟或减缓，或预防或减缓与患者已经被诊断的疾病或病状相关的强度损失。对于再一实例，疲劳的改善涵盖患者疲劳的任何减少，以及疲劳增加速率的任何延迟或减缓，或者预防或减缓与患者已经被诊断的疾病或病状相关的疲劳增加。对于又一实例，发热的改善涵盖患者发热的任何减少，以及发热增加速率的任何延迟或减缓，或者预防或减缓与患者已经被诊断的疾病或病状相关的发热增加。
C 反应蛋白(CRP)：本文使用的C反应蛋白(CRP)不仅涵盖可获得为GenBank蛋白登记号NP_000558的下述224氨基酸序列：
MEKLLCFLVLTSLSHAFGQTDMSRKAFVFPKESDTSYVSLKAPLTKPLKAFTVCLHFYTELSSTRGYSIFSYATKRQDNEILIFWSKDIGYSFTVGGSEILFEVPEVTVAPVHICTSWESASGIVEFWVDGKPRVRKSLKKGYTVGAEASIILGQEQDSFGGNFEGSQSLVGDIGNVNMWDFVLSPDEINTIYLGGPFSPNVLNWRALKYEVQGEVFTKPQLWP(SEQ ID NO:726)，而且还涵盖该CRP氨基酸序列的任何前原-、原-和成熟形式，以及该序列的突变体和变体，包括等位基因变体。例如在血清、肝、肿瘤或身体其它地方的CDP水平可以使用常规方法和商业途径可获得的试剂容易地测量，例如ELISA、抗体试纸条、免疫比浊法、快速免疫扩散、视觉凝集、蛋白质印迹、RNA印迹、等。如上所述，另外还可以测量患有或有风险患上本发明所述的血栓形成的患者的CPR水平。
白介素-6受体(IL-6R)；还称为IL-6受体α(IL-6RA)：本文使用的“白介素-6受体”(“IL-6R”；又称“IL-6受体α”或“IL-6RA”)不仅涵盖可获得为Swiss-Prot蛋白登记号P08887的下述468氨基酸序列：
MLAVGCALLAALLAAPGAALAPRRCPAQEVARGVLTSLPGDSVTLTCPGVEPEDNATVHWVLRKPAAGSHPSTWAGMGRRLLLRSVQLHDSGNYSCYRAGRPAGTVHLLVDVPPEEPQLSCFRKSPLSNVVCEWGPRSTPSLTTKAVLLVRKFQNSPAEDFQEPCQYSQESQKFSCQLAVPEGDSSFYIVSMCVASSVGSKFSKTQTFQGCGILQPDPPANITVTAVARNPRWLSVTWQDPHSWNSSFYRLRFELRYRAERSKTFTTWMVKDLQHHCVIHDAWSGLRHVVQLRAQEEGFQGEWSEWSPEAMGTPWTESRSPPAENEVSTPMQALTTNKDDNIFLFRDSANATSLPVQDSSSVPLPTFLVAGGSLAFGTLLCIAIVLRFKKTWKLRALKEGKTSMHPPYSLGQLVPERPEPTPVLVPLISPPVSPSSLGSDNTSSHNRPDARDPRSPYDISNTDYFFPR(SEQ ID NO:727)，而且还涵盖该氨基酸序列的任何前原-、原-和成熟形式，以及该序列的突变体和变体，包括等位基因变体。
gp130：本文使用的gp130(还称为白介素-6受体亚基β)不仅涵盖可获得为Swiss-Prot蛋白登记号P40189的下述918前体氨基酸序列：
MLYLQTWVVQALFIFLTTESTGELLDPCGYISPESPVVQLHSNFTAVCVLKEKCMDYFHVNANYIVWKTNHFTIPKEQYTIINRTASSVTFTDIASLNIQLTCNILTFGQLEQNVYGITIISGLPPEKPKNLSCIVNEGKKMRCEWDGGRETHLETNFTLKSEWATHKFADCKAKRDTPTSCTVDYSTVYFVNIEVWVEAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNLSVINSEELSSILKLTWTNPSIKSVIILKYNIQYRTKDASTWSQIPPEDTASTRSSFTVQDLKPFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSDWSEEASGITYEDRPSKAPSFWYKIDPSHTQGYRTVQLVWKTLPPFEANGKILDYEVTLTRWKSHLQNYTVNATKLTVNLTNDRYLATLTVRNLVGKSDAAVLTIPACDFQATHPVMDLKAFPKDNMLWVEWTTPRESVKKYILEWCVLSDKAPCITDWQQEDGTVHRTYLRGNLAWSKCYLITVTPVYADGPGSPESIKAYLKQAPPSKGPPSKGPTVRTKKVGKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRIIGNETAVNVDSSHTEYTLSSLTSDTLYMVRMAAYTDEGGKDGPEFTFTTPKFAQGEIEAIVVPVC;AFLLTTLLGVLFCFNKRDLIKKHIWPNVPDPSHKSHIAQWSPHTPPRHNFNSKDQMYSDGNFTDVSVVEIEANDKKPPEDLKSLDLFKKEKINTEGHSSGIGGSCMSSRPSISSSDENESSQNTSSTVQYSTVVHSGYRHQVPSVQVFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQYFKQNCSQHESSPDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAADAFGPGTEGQVERFETVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGGYMPQ(SEQ ID NO:728)，而且还涵盖该氨基酸序列的任何前原-、原-和成熟形式(例如由所示序列的氨基酸23至918编码的成熟形式)，以及该序列的突变体和变体，包括等位基因变体。
Glasgow预后分数(GPS)：本文使用的Glasgow预后分数(GPS)指基于炎症的预后分数，对于小于<35mg/L的血清白蛋白水平授予1分，对于高于10mg/L的CRP水平授予1分。因此，0的GPS指示正常的白蛋白和CRP，1的GPS指示降低的白蛋白或升高的CRP，而2的GPS指示降低的白蛋白和升高的CRP。
有效量：本文使用的“有效量”、“有效……的量”、“有效……的X量”以及类似术语指当化合物被施用时，在某种程度上有效减轻或减少需要治疗的疾病的一个或多个症状或阻碍需要预防的疾病的临床标志或症状的开始的活性成分的量。因此，有效量指表现出诸如以下的效应的活性成分的量：(i)反转疾病进展速率；(ii)一定程度上抑制疾病的进一步发展；和/或，(iii)一定程度上减轻(或优选消除)与疾病相关的一个或多个症状。有效量可以通过在需要治疗的疾病的已知体内和体外模型系统中进行相关化合物的实验来凭经验确定。使用短语“有效量”的上下文可以指示特定的期望效应。例如，“有效预防或治疗血液高凝状态的抗IL-6抗体的量”和类似短语指当施用给受试者时会引起有风险受试者的凝血状况可测量的改善或者预防、减缓、延迟或停止其凝血状况恶化的抗IL-6抗体的量。类似地，“有效降低血清CRP水平的抗IL-6抗体的量”和类似短语指当施用给受试者时会引起有风险受试者的血清CRP水平可测量的下降或者预防、减缓、延迟或停止其血清CRP水平增加的抗IL-6抗体的量。类似地，“有效提高血清白蛋白水平的抗IL-6抗体的量”和类似短语指当施用给受试者时会引起有风险受试者的血清白蛋白水平可测量的提高或者预防、减缓、延迟或停止血清白蛋白水平下降的抗IL-6抗体的量。类似地，“有效降低虚弱的抗IL-6抗体的量”和类似短语指当施用给受试者时会引起经手握力测试测定的虚弱可测量的降低的抗IL-6抗体的量。类似地，“有效增加体重的抗IL-6抗体的量”和类似短语指当施用给受试者时会引起患者体重可测量的增加的抗IL-6抗体的量。有效量将根据个体的体重、性别、年龄和医疗史以及患者病状的严重程度、疾病类型、施用方式和类似因素而变化。有效量可以使用常规实验例如通过滴定(施用递增剂量直至发现有效剂量)和/或参考对之前患者有效的量来容易地确定。一般，本发明的抗IL-6抗体将以约0.1mg/kg患者体重至约20mg/kg患者体重的剂量施用。
凝血状况的长期改善：如本文使用，“凝血状况的长期改善”和类似短语指受试者的凝血状况相对于初始凝血状况(即在治疗开始前某一时间的凝血状况)的可测量的改善，其在治疗开始(例如施用如Ab1的IL-6拮抗剂)约1周内是可检测的，并且长时间保持改善，例如，从治疗开始时起至少约14天、至少约21天、至少约28天、至少约35天、至少约40天、至少约50天、至少约60天、至少约70天、至少约11周或至少约12周。
血清CRP的长期减少：本文使用的“血清CRP的长期减少”和类似短语指血清CRP水平相对于初始血清CRP水平(即，在治疗开始之前某一时间的血清CRP水平)的可测量的下降，其在治疗开始(例如施用抗IL-6抗体)约一周内是可检测的，并且保持低于初始血清CRP水平，持续长期，例如从治疗开始起至少约14天、至少约21天、至少约28天、至少约35天、至少约40天、至少约50天、至少约60天、至少约70天、至少约11周或至少约12周。
血清白蛋白的长期增加：本文使用的“血清白蛋白的长期增加”和类似短语指血清白蛋白水平相对于初始血清白蛋白水平(即，在治疗开始之前某一时间的血清白蛋白水平)的可测量的增加，其在治疗开始(例如施用抗IL-6抗体)约一周内是可检测的，并且保持高于初始血清白蛋白水平，持续长期，例如从治疗开始起至少约14天、至少约21天、至少约28天、至少约35天、至少约40天、至少约50天、至少约60天、至少约70天、至少约11周或至少约12周。
恶病质的长期改善：本文使用的“恶病质的长期改善”指患者体重、瘦体重、四肢瘦体重和/或瘦体重指数相对于初始水平(即，在治疗开始之前某一时间的水平)的可测量的改善，其在约4周内是可检测的，并且保持改善，持续长期，例如从治疗开始起至少约35天、至少约40天、至少约50天、至少约60天、至少约70天、至少约11周或至少约12周。
虚弱的长期改善：本文使用的“虚弱的长期改善”指肌强度相对于初始水平(即，在治疗开始之前某一时间的水平)的可测量的改善，其在约2周内是可检测的，并且保持改善，持续长期，例如从治疗开始起至少约21天、至少约28天、至少约35天、至少约40天、至少约50天、至少约60天、至少约70天、至少约11周或至少约12周。
疲劳的长期改善：本文使用的“疲劳的长期改善”指疲劳相对于初始水平(即，在治疗开始之前某一时间的水平)的可测量的改善，其在约1周内是可检测的，并且保持改善，持续长期，例如从治疗开始起至少约14天、至少约21天、至少约28天、至少约35天、至少约40天、至少约50天、至少约60天、至少约70天、至少约11周或至少约12周。
发热的长期改善：本文使用的“发热的长期改善”指发热(例如峰值温度或温度被升高的时间量)相对于初始水平(即，在治疗开始之前某一时间的水平)的可测量的降低，其在约1周内是可检测的，并且保持改善，持续长期，例如从治疗开始起至少约14天、至少约21天、至少约28天、至少约35天、至少约40天、至少约50天、至少约60天、至少约70天、至少约11周或至少约12周。
交配活性酵母种(Mating competent yeast species)：在本发明中这预期广泛包括可以培养生长的任何二倍体或四倍体酵母。此类酵母种可以单倍体、二倍体或四倍体形式存在。给定倍性的细胞可以该形式在适当条件下增殖不确定的代数。二倍体细胞还可以形成孢子以形成单倍体细胞。连续交配可以经由二倍体菌株进一步交配或融合而产生四倍体菌株。在本发明中，二倍体或多倍体酵母细胞优选通过交配或原生质体融合而产生。
在本发明的一个实施方案中，交配活性酵母是酵母菌(Saccharomycetaceae)科的成员，其包括如下的属：Arxiozyma；Ascobotryozyma；固囊酵母属(Citeromyces)；德巴利酵母属(Debaryomyces)；德克酵母属(Dekkera)；假囊酵母属(Eremothecium)；伊萨酵母属(Issatchenkia)；Kazachstania；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)；Kodamaea；娄德罗菌属(Lodderomyces)；Pachysolen；毕赤酵母属(Pichia)；酵母菌属(Saccharomyces)；Saturnispora；Tetrapisispora；有孢圆酵母属(Torulaspora)；拟威尔酵母属(Williopsis)；和接合酵母属(Zygosaccharomyces)。可能用于本发明的其它类型的酵母包括耶氏酵母菌(Yarrowia)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、假丝酵母(Candida)、汉森酵母属(Hansenula)、Filobasium、Filobasidellla、锁掷酵母属(Sporidiobolus)、布勒掷孢酵母属(Bullera)、白冬孢酵母属(Leucosporidium)和Filobasidella。
在本发明的一个优选实施方案中，交配活性酵母是毕赤酵母属的成员。在本发明进一步优选的实施方案中，毕赤酵母属的交配活性酵母是下属种之一：巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)和多形汉森酵母(Hansenula polymorpha)(安格斯毕赤酵母(Pichia angusta))。在本发明一个特别优选的实施方案中，毕赤酵母属的交配活性酵母是巴斯德毕赤酵母种。
单倍体酵母细胞：具有其正常基因组(染色体)组型的每个基因的单个拷贝的细胞。
多倍体酵母细胞：具有其正常基因组(染色体)组型的超过一个拷贝的细胞。
二倍体酵母细胞：具有其正常基因组组型的基本上每个基因的两个拷贝(等位基因)的细胞，通常由两个单倍体细胞的融合过程(交配)形成。
四倍体酵母细胞：具有其正常基因组组型的基本上每个基因的四个拷贝(等位基因)的细胞，通常由两个单倍体细胞的融合过程(交配)形成。四倍体可以带有两个、三个、四个或更多个不同的表达盒。此类四倍体可以通过在酿酒酵母(S.cerevisiae)中选择性交配异种纯合a/a和α/α二倍体以及在毕赤酵母中连续交配单倍体以获得营养缺陷型二倍体来获得。例如，[met his]单倍体可以与[ade his]单倍体交配以获得二倍体[his]；并且[met arg]单倍体可以与[ade arg]单倍体交配以获得二倍体[arg]；然而二倍体[his]x二倍体[arg]以获得四倍体原养型。本领域技术人员会理解，对二倍体细胞的益处和用途的提及也可以适用于四倍体细胞。
酵母交配：两个单倍体酵母细胞自然融合形成一个二倍体酵母细胞的过程。
减数分裂：二倍体酵母细胞经过减数分裂形成四个单倍体孢子产物的过程。然后每个孢子可以发芽并形成单倍体无性生长细胞系。
选择标记：选择标记是赋予细胞生长表型(物理生长特征)的基因或因片段，所述细胞例如通过转化事件接受了所述基因。选择标记允许该细胞在其中未接受所述选择标记基因的细胞不能生长的条件下在选择性生长培养基中存活并生长。选择标记基因一般分为几个类型，包括阳性选择标记基因，例如赋予细胞对抗生素或其它药物的耐药性的基因，当两个ts突变体被杂交或者一个ts突变体被转化时对温度抗性的基因；阴性选择标记，例如赋予细胞在没有特定营养物的培养基中生长的能力的生物合成基因，没有该生物合成基因的所有细胞需要所述营养物，或者赋予细胞不能生长的诱变的生物合成基因，没有野生型基因的细胞；以及类似物。适合的标记包括但不限于：ZEO；G418；LYS3；MET1；MET3a；ADE1；ADE3；URA3；及类似物。
表达载体：这些DNA载体含有促进外来蛋白在靶宿主细胞中表达的操纵的元件。适宜地，用于转化的序列操纵和DNA生成首先在细菌宿主例如大肠杆菌中进行，并且通常载体会包括促进此类操纵的序列，包括细菌复制起点和适当的细菌选择标记。选择标记编码在选择性培养基中生长的转化的宿主细胞的存活或生长所必需的蛋白。未经含有选择基因的载体转化的宿主细胞将不会在培养基中存活。典型的选择标记编码如下所述的蛋白：(a)赋予对抗生素或其它毒素的耐药性，(b)补充营养缺陷型缺陷，或(c)提供不能从复合培养基中获得的关键营养物。示例性的载体和酵母转化方法描述于例如Burke,D.,Dawson,D.,& Stearns,T.(2000).Methods in yeast genetics:a ColdSpring Harbor Laboratory course manual.Plainview，N.Y.:Cold SpringHarbor Laboratory Press。
用于本发明方法的表达载体将进一步包括酵母特异性序列，包括用于鉴定转化的酵母菌株的选择性营养缺陷标记或药物标记。药物标记可以进一步用于在酵母宿主细胞中扩增载体的拷贝数。
目标多肽编码序列可操作连接于转录和翻译调控序列，转录和翻译调控序列提供在酵母细胞中的多肽的表达。这些载体组分可以包括但不限于下述一个或多个：增强子元件、启动子和转录终止序列。还可以包括用于多肽分泌的序列，例如信号序列及类似物。酵母复制起点是任选的，因为表达载体通常被整合入酵母基因组。
在本发明的一个实施方案中，目标多肽可操作连接或融合至提供多肽从酵母二倍体细胞的优化分泌的序列。
当被置于与另一核酸序列的功能关系时，核酸是“可操作连接的”。例如，如果信号序列的DNA被表达为参与多肽分泌的前蛋白，则信号序列的DNA可操作连接于多肽的DNA；如果启动子或增强子影响序列的转录，则启动子或增强子可操作连接于编码序列。一般，“可操作连接”意指被连接的DNA序列是连续的，并且在分泌型前导序列情形下是连续且在阅读框内的。然而，增强子不必是连续的。连接通过在方便的限制位点连接或者可选地通过本领域技术人员熟悉的PCR/重组方法(GatewayR技术；加利福尼亚州Carlsbad的Invitrogen)来完成。如果此类位点不存在，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸适体或连接体。
启动子是位于结构基因起始密码子上游(5′)(一般在约100至1000bp内)的未翻译的序列，其控制与其可操作连接的特定核酸序列的转录和翻译。此类启动子分成几类：诱导型、组成型和抑制型启动子(其应答阻遏物的缺少而增加转录水平)。诱导型启动子可以引起在其控制下的DNA应答培养条件的一些变化而提高转录水平，所述变化例如营养物的存在或缺少或者温度变化。
酵母启动子片段还可以用作用于表达载体同源重组和整合入酵母基因组相同位点的位点；可选地，选择标记用作同源重组位点。毕赤酵母转化描述于Cregg等.(1985)Mol.Cell.Biol.5:3376-3385。
来自毕赤酵母的适合启动子的实例包括AOX1和启动子(Cregg等.(1989)Mol.Cell.Biol.9:1316-1323)；ICL1启动子(Menendez等.(2003)Yeast 20(13):1097-108)；甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(GAP)(Waterham等.(1997)Gene 186(1):37-44)；和FLD1启动子(Shen等.(1998)Gene 216(1):93-102)。GAP启动子是强的组成型启动子，并且AOX和FLD1启动子是诱导型的。
其它酵母启动子包括ADH1、乙醇脱氢酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk和从其衍生的嵌合启动子。此外，非酵母启动子可以用于本发明，例如哺乳动物、昆虫、植物、爬行动物、两栖动物、病毒和禽类启动子。最普遍地，启动子将包括哺乳动物启动子(可能对于所表达的基因是内源性的)或将包括提供在酵母系统中有效转录的酵母或病毒启动子。
目标多肽可以重组生成，不仅直接地，而且作为与异源多肽的融合多肽，所述异源多肽例如信号序列或在成熟蛋白或多肽的N端具有特定切割位点的其它多肽。一般，信号序列可以是载体的组分，或者其可以是被插入载体的多肽编码序列的一部分。选择的异源信号序列优选是通过宿主细胞内可用的标准途径之一被识别并加工的序列。酿酒酵母α因子前原信号已经证明在多种重组蛋白从巴斯德毕赤酵母的分泌中有效。其它酵母信号序列包括α交配因子信号序列、转化酶信号序列和衍生自其它分泌的酵母多肽的信号序列。此外，这些信号肽序列可以被改造为提供在二倍体酵母表达系统中增强的分泌。其它目标分泌信号还包括哺乳动物信号序列，其可以是与被分泌的蛋白异源的，或者可以是被分泌蛋白的天然序列。信号序列包括前肽序列，并且在一些情况下可以包括原肽序列。许多此类信号序列是本领域已知的，包括免疫球蛋白链上存在的信号序列，例如K28前原毒素序列、PHA-E、FACE、人MCP-1、人血清白蛋白信号序列、人Ig重链、人Ig轻链及类似物。例如，参见Hashimoto等.Protein Eng 11(2)75(1998)；和Kobayashi等.Therapeutic Apheresis 2(4)257(1998)。
转录可以通过将转录激活序列插入载体而增加。这些激活子是DNA的顺式作用元件，通常约10至300bp，其作用于启动子以增加其转录。转录增强子相对来说是与方向和位置无关的，已经被发现于转录单位的5′和3′、内含子中以及编码序列本身中。增强子可以在编码序列的位置5′或3′被剪接入表达载体，但是优选位于启动子的5′位。
用于真核宿主细胞的表达载体还可以含有终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可获自转录终止密码子的3′，在真核或病毒DNA或cDNA的未翻译区中。这些区含有被转录为mRNA的未翻译部分中多聚腺苷酸化的片段的核苷酸区段。
含有上列组分的一个或多个的适合载体的构建采用标准连接技术或PCR/重组方法。分离的质粒或DNA片段被切割、剪裁和再连接成预期产生所需质粒的形式或者通过重组方法。对于证实构建质粒中正确序列的分析，使用连接混合物转化宿主细胞，适当时通过抗生素耐药性(例如氨苄西林或ZeocinTM(腐草霉素))选择成功的转化子。来自转化子的质粒被制备并通过限制内切酶消化分析和/或测序。
作为限制酶切和片段连接的替代方法，基于att位点和重组酶的重组方法可用于将DNA序列插入载体。此类方法描述于例如Landy(1989)Ann.Rev.Biochem.58:913-949；并且是本领域技术人员已知的。此类方法利用由lambda和大肠杆菌混合物介导的分子间DNA重组—编码的重组蛋白。重组发生在相互作用的DNA分子上的特定连接(att)位点之间。对于att位点的描述，参见Weisberg和Landy(1983)Site-Specific Recombination in Phage Lambda,in Lambda II,Weisberg编辑(Cold Spring Harbor,NY:Cold Spring Harbor Press),第211-250页。在重组位点侧翼的DNA区段被转换，使得在重组后，att位点是由各个亲本载体提供的序列组成的杂交序列。重组可以发生在任何拓扑学的DNA之间。
Att位点可以被引入目标序列：通过将目标序列连接入适当的载体；通过使用特定引物产生含有att B位点的PCR产物；产生克隆入含有att位点的适当载体的cDNA文库；等等。
本文使用的折叠指多肽和蛋白的三维结构，其中氨基酸残基之间的相互作用用于稳定该结构。当非共价相互作用在确定结构时是重要的时，通常目标蛋白将具有由两个半胱氨酸残基形成的分子内或分子间的共价二硫键。对于天然存在的蛋白质和多肽或衍生物及其变体而言，正确折叠通常是产生最佳生物活性的排列，并且可以方便地通过活性测定来监测，所述活性例如配体结合、酶促活性等。
在一些情况下，例如，当期望产物具有合成起点时，基于生物活性测定的意义不大。此类分子的正确折叠可以基于物理性质、能量考虑、建模研究等等来确定。
表达宿主可以进一步通过引入编码增强折叠和二硫键形成的一种或多种酶(即，折叠酶、伴侣蛋白等)的序列而被修饰。此类序列可以在酵母宿主细胞中组成型或诱导型地表达，使用本领域已知的载体、标记等。优选地，包括足以满足期望的表达模式的转录调节元件在内的序列通过靶向方法稳定整合在酵母基因组中。
例如，真核PDI不仅是蛋白质半胱氨酸氧化和二硫键异构化作用的有效催化剂，还表现出伴侣活性。PDI的共表达可以促进具有多个二硫键的活性蛋白的产生。还目标是BIP(免疫球蛋白重链结合蛋白)、亲环蛋白及类似物的表达。在本发明的一个实施方案中，蛋白体亲本菌株各自表达不同的折叠酶，例如一个菌株可以表达BIP，而另一个菌株可以表达PDI或其组合。
术语“期望蛋白”或“靶蛋白”可互换使用并一般指本文所述的人源化抗体或其结合部分。术语“抗体”预期包括任何含有多肽链的分子结构，具有适应并识别表位的特定形状，其中一种或多种非共价结合相互作用稳定分子结构和表位之间的复合。原型抗体分子是免疫球蛋白，并且来自所有来源例如人、啮齿类、兔、奶牛、绵羊、猪、狗、其它哺乳动物、鸡、其它禽类等的所有类型的免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等被认为是“抗体”。产生用作根据本发明的起始原料的抗体的优选来源是兔。已经描述了许多抗体编码序列；并且其它抗体编码序列可以通过本领域公知的方法产生。其实例包括嵌合抗体、人抗体和其它非人哺乳动物抗体、人源化抗体、单链抗体例如scFv、骆驼抗体(camelbodies)、纳米抗体、IgNAR(源于鲨鱼单链抗体)、小分子免疫药物(SMIP)和抗体片段例如Fab、Fab′、F(ab′)2及类似物。参见Streltsov VA,等.,Structure of a shark IgNAR antibody variabledomain and modeling of an early-developmental isotype,Protein Sci.2005Nov;14(11):2901-9.Epub 2005 Sep 30；Greenberg AS,等.,A newantigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensivesomatic diversification in sharks,Nature.1995 Mar 9;374(6518):168-73；Nuttall SD,等.,Isolation of the new antigen receptor from wobbegongsharks,and use as a scaffold for the display of protein loop libraries,MolImmunol.2001 Aug;38(4):313-26；Hamers-Casterman C,等.,Naturallyoccurring antibodies devoid of light chains,Nature.1993 Jun3;363(6428):446-8；Gill DS,等.,Biopharmaceutical drug discovery usingnovel protein scaffolds,Curr Opin Biotechnol.2006 Dec;17(6):653-8.Epub 2006 Oct 19。
例如，抗体或抗原结合片段或变体可以通过基因工程被引入。在该技术中，与其它方法一样，产生抗体的细胞针对期望抗原或免疫原被敏化。从产生抗体的细胞分离的信使RNA被用作使用PCR扩增制备cDNA的模板。各自含有一个重链基因和一个轻链基因的保持最初抗原特异性的载体的文库通过将扩增的免疫球蛋白cDNA的适当部分插入表达载体来产生。组合文库通过将重链基因文库与轻链基因文库组合而构建。这产生共表达重链和轻链的克隆(类似于抗体分子的Fab片段或抗原结合片段)文库。带有这些基因的载体被共转染进入宿主细胞。当抗体基因合成在转染的宿主中被诱导时，重链和轻链蛋白自组装以产生可通过抗原或免疫原筛选来检测的活性抗体。
目标抗体编码序列包括天然序列编码的那些，以及借助遗传密码子简并性而在序列上不与公开的核酸相同的核酸，及其变体。变体多肽可以包括氨基酸(aa)取代、添加或缺失。氨基酸取代可以是保守的氨基酸取代以消除非必需氨基酸，例如以改变糖基化位点，或者通过取代或缺失对于功能不必要的一个或多个半胱氨酸残基而最小化错折叠。变体可以被设计为保留或具有特定蛋白区域(例如功能结构域、催化氨基酸残基、等)的增强的生物活性。变体还包括本文公开的多肽的片段，特别是生物活性片段和/或对应于功能结构域的片段。克隆的基因的体内诱变技术是已知的。本发明还包括已经使用普通分子生物学技术修饰的多肽，以提高其对蛋白降解的抗性或优化溶解性或使它们更适合作为治疗剂。
通过将获自一个物种的抗体生成细胞的可变轻链和重链区(VL和VH)与来自另一物种的恒定轻链和重链区组合，可以通过重组方式制成嵌合抗体。通常，嵌合抗体利用啮齿类或兔的可变区和人恒定区，以产生具有主要是人结构域的抗体。此类嵌合抗体的产生是本领域公知的，并且可以通过标准方式获得(例如在美国专利第5,624,659号中所述，其在此通过引用整体并入)。还涵盖的是，本发明嵌合抗体的人恒定区可以选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恒定区。
人源化抗体被构建为含有甚至更多的人样免疫球蛋白结构域，并且仅加入动物来源抗体的互补决定区。这通过小心检查单克隆抗体的可变区的超变环序列并使它们适应人抗体链的结构来实现。尽管表面复杂，但该过程在实践中是直接的。参见例如美国专利第6,187,287号，在此通过引用全部并入。在一个实施方案中，人源化可以如下文更详细公开的来实现。该方案使CDR植入与是人源化的亲本抗体FR高度同源的人FR。
除了完整免疫球蛋白(或其重组对应物)，包含表位结合位点的免疫球蛋白片段(例如Fab’、F(ab’)2或其它片段)可以被合成。“片段”或最小的免疫球蛋白可以利用重组免疫球蛋白技术来设计。例如，用于本发明的“Fv”免疫球蛋白可以通过合成融合的可变轻链区和可变重链区来产生。抗体组合也是目标，例如包括两个不同Fv特异性的双抗体。在本发明另一个实施方案中，SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体和IgNAR被免疫球蛋白片段所涵盖。
免疫球蛋白及其片段可以在翻译后修饰，例如增加效应部分例如化学连接体、可检测部分例如荧光染料、酶、毒素、底物、生物发光物质、放射性物质、化学发光部分及类似物、或特异性结合部分例如链霉亲和素、亲和素或生物素、及类似物可以用于本发明方法和组合物。其它效应部分的实例在下文提供。
术语“稳定表达或长时间表达期望的分泌异源多肽的多倍体酵母”指持续至少几天至一周、更优选至少一个月、更优选至少1-6个月和甚至更优选超过一年以阈值表达水平、通常至少10-25mg/升且更优选明显更高地分泌所述多肽的酵母培养物。
术语“分泌预期量的重组多肽的多倍体酵母培养物”指稳定或长期分泌至少10-25mg/升异源多肽、更优选至少50-500mg/升和最优选500-1000mg/升或更多的培养物。
如果多核苷酸序列根据基因编码翻译产生多肽序列(即，多核苷酸序列″编码″多肽序列)，则所述多核苷酸序列″对应于″所述多肽序列，如果两个多核苷酸序列编码同一个多肽序列，则一个多核苷酸序列″对应于″另一个多核苷酸序列。
DNA构建体的“异源”区或结构域是较大DNA分子内可识别的DNA区段，发现其不与较大分子天然结合。因此，当异源区编码哺乳动物基因时，该基因侧翼通常是在来源生物体基因组中不在哺乳动物基因组DNA侧翼的DNA。异源区的另一个实例是其中编码序列本身不是天然存在的构建体(例如，其中基因组编码序列含有内含子的cDNA或具有不同于天然基因的密码子的合成序列)。等位基因变异或天然存在的突变事件不产生本文定义的DNA异源区。
″编码序列”是对应于或编码蛋白或肽序列的框内密码子序列(就遗传密码而言)。如果两个编码序列或其互补序列编码相同的氨基酸序列，则这两个编码序列彼此对应。与适当的调控序列结合的编码序列可以被转录并翻译成多肽。多腺苷酸化信号和转录终止序列通常位于编码序列的3′。″启动子序列″是能够结合细胞中的RNA聚合酶并启动下游(3′方向)编码序列转录的DNA调节区。启动子序列通常含有用于结合影响编码序列转录的调节分子(例如转录因子)的其它位点。当RNA聚合酶结合细胞中的启动子序列并将编码序列转录入mRNA时，编码序列在启动子序列的“控制下”或者“可操作连接”至启动子，所述mRNA然后被翻译成编码序列编码的蛋白。
载体用于将外源物质(例如DNA、RNA或蛋白)引入生物体或宿主细胞。典型的载体包括重组病毒(对于多核苷酸)和脂质体或其它脂质聚集体(对于多肽和/或多核苷酸)。″DNA载体″是复制子，例如质粒、噬菌体或黏粒，另一多核苷酸区段可以与其连接以实现所连接区段的复制。″表达载体″是含有调控序列的DNA载体，所述调控序列将指导适当宿主细胞的肽合成。这通常指结合RNA聚合酶并启动mRNA转录的启动子，以及指导mRNA翻译成多肽的核糖体结合位点和起始信号。多核苷酸序列在适当位置和正确的阅读框内加入表达载体，随后载体转化适当的宿主细胞，能够产生所述多核苷酸序列编码的多肽。示例性表达载体及其使用的技术描述于下述出版物：Old等.,Principles of Gene Manipulation:An Introduction to GeneticEngineering,Blackwell Scientific Publications,第4版,1989；Sambrook等.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版,Cold SpringHarbor Laboratory Press,1989；Sambrook等.,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,第3版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001；Gorman,″High Efficiency Gene Transfer into Mammalian Cells,″DNA Cloning,第II卷,Glover,D.M.,编,IRL Press,Washington,D.C.,pp.143 190(1985)。
例如，脂质体或其它脂质聚集物可以包括脂质，例如磷脂酰胆碱(卵磷脂)(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷酸酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、鞘磷脂、心磷脂、磷脂酸(PA)、脂肪酸、神经节苷酯、糖脂(glucolipid)、糖脂(glycolipid)、单-、二或三酸甘油酯、神经酰胺、脑苷脂及其组合；阳离子脂质(或其它阳离子两亲化合物)，例如1,2-二油烯基氧基-3-(三甲基氨基)丙烷(DOTAP)；N-胆固醇基氧基西维因-3,7,12-三氮杂十五烷-1,15-二胺(CTAP)；N-[1-(2,3,-双十四烷氧基)丙基]-N,N-二甲基-N-羟基乙基溴化铵(DMRIE)；N-[1-(2,3,-二油烯基氧基)丙基]-N,N-二甲基-N-羟基乙基溴化铵(DORIE)；N-[1-(2,3-二油烯基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)；3β[N-(N′,N′-二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]胆固醇(DC-Choi)；和二甲基双十八烷基铵(DDAB)；二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、含有胆固醇的DOPC；及其组合；和/或亲水性聚合物，例如聚乙烯比咯烷酮、聚乙烯甲基醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羟基丙基噁唑啉、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚羟基丙基甲基丙烯酸酯、聚羟基乙基丙烯酸酯、羟基甲基纤维素、羟基乙基纤维素、聚乙烯二醇、聚天冬酰胺及其组合。其它适合的阳离子脂质描述于Miller,Angew.Chem.Int.Ed.37:1768 1785(1998),和Cooper等.,Chem.Eur.J.4(1):137 151(1998)。脂质体可以交联、部分交联或不交联。交联的脂质体可以包括交联以及非交联的组分。适合的阳离子脂质体或细胞转染剂可商业途径获得，并且也可以如下所述制备：Sipkins等.,NatureMedicine,1998,4(5):(1998),623 626或Miller,同上。示例性的脂质体包括可聚合的两性离子或中性脂质、可聚合的整联蛋白靶向脂质和可聚合的阳离子脂质，适合结合核酸。脂质体可以任选地包括提供增加的效力的肽，例如美国专利第7,297,759号中所述。其它示例性脂质体和其它脂质聚集物描述于美国专利第7,166,298号。
多核苷酸序列的″扩增″是体外产生特定核酸序列的多个拷贝。扩增的序列通常是DNA形式。进行此类扩增的多种技术描述于VanBrunt的综述文章(1990,Bio/Technol.,8(4):291-294)。聚合酶链式反应或PCR是核酸扩增的典型，本文PCR的使用应该被认为是其它适合的扩增技术的示例。
脊椎动物中抗体的一般结构目前是公知的(Edelman,G.M.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,190:5(1971))。抗体由分子量约23,000道尔顿的两个相同轻的多肽链(“轻链”)和分子量约53,000-70,000的两个相同重的链(“重链”)组成。四条链通过二硫键结合成“Y”构型，其中轻链在“Y”构型口处开始在重链外侧。“Y”构型的“分支”部分被指定为Fab区；“Y”构型的干部分被指定为Fc区。氨基酸方向从“Y”构型顶部N末端到每条链的底部C末端。N末端具有对引发其的抗原特异性的可变区，并且长度约100个氨基酸，轻链和重链之间以及抗体与抗体之间存在微小差异。
可变区在每条链中连接至恒定区，恒定区延伸链的剩余长度并且在特定类别的抗体中不改变抗体特异性(即，引发其的抗原)。存在五种已知的主要的恒定区类别，决定免疫球蛋白分子类别(IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，对应于γ、μ、α、δ和ε(γ、mu、alpha、delta或epsilon)重链恒定区)。恒定区或类别决定抗体随后的效应子功能，包括补体激活(Kabat,E.A.,Structural Concepts in Immunology andImmunochemistry,第2版,p.413-436,Holt,Rinehart,Winston(1976))和其它细胞应答(Andrews,D.W.,等.,Clinical Immunobiology,pp 1-18,W.B.Sanders(1980)；Kohl,S.,等.,Immunology,48:187(1983))；而可变区决定与之反应的抗原。轻链被分类为κ(kappa)或λ(lambda)。每个重链类别可以与κ或λ轻链配对。当免疫球蛋白由杂交瘤或B细胞产生时，轻链和重链彼此共价键合，并且两条重链的“尾”部分通过二硫键彼此键合。
措辞“可变区”或“VR”指抗体中每对轻链和重链内直接参与抗体与抗原结合的结构域。每条重链在一端具有可变结构域(VH)，随后是许多恒定结构域。每条轻链在一端具有可变结构域(VL)并且在另一端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链可变结构域对齐。
措辞“互补决定区”、“超变区”或“CDR”指抗体轻链或重链可变区中存在的超变或互补决定区(CDR)的一个或多个(参见Kabat,E.A.等.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institutesof Health,Bethesda,Md.,(1987))。这些词语包括Kabat等定义的超变区(“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”Kabat E.,等.,USDept.of Health and Human Services,1983)或抗体三维结构中的超变环(Chothia和Lesk,J Mol.Biol.196901-917(1987))。每条链中的CDR通过骨架区保持紧密靠近并与其它链的CDR一起促进抗原结合位点的形成。在CDR中存在已经被描述为选择决定区(SDR)的选择氨基酸，其代表抗体-抗原相互作用中CDR使用的关键接触残基(Kashmiri,S.,Methods,36:25-34(2005))。示例性抗IL-6抗体的CDR在本文提供。
措辞“骨架区”或“FR”指抗体轻链和重链可变区内的骨架区的一个或多个(参见Kabat,E.A.等.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,(1987))。这些词语包括抗体轻链和重链可变区内CDR之间的氨基酸序列。如优选实施方案中提到的，FR将包含与亲本抗体(例如兔抗体)高度同源的人FR。
Ab1 抗IL-6抗体及其结合片段
本发明包括对IL-6具有结合特异性并具有包括以下所列序列的可变轻链序列的抗体：
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN(SEQ ID NO:2)或AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:709)和其人源化形式和变体，包括图2和34-37所列的那些以及表1所列的那些。
本发明还包括对IL-6具有结合特异性并具有包括以下所列序列的可变重链序列的抗体：
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK(SEQ ID NO:3)或EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:657)和其人源化形式和变体，包括图2和34-37所列的那些以及表1所列的那些。
本发明还包括对IL-6具有结合特异性并具有SEQ ID NO:3修饰形式的可变重链序列的抗体，其中所述CDR2中的色氨酸残基被改变成丝氨酸，如下所述：
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATSAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK(SEQ ID NO:658)和其人源化的形式和变体，包括图2和34-37中所列的那些和表1中所列的那些。
本发明还涵盖包含以下的抗体：对应于SEQ ID NO:2的可变轻链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的多肽序列的一个或多个，和/或对应于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:19的可变重链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或120和SEQ ID NO:9的多肽序列的一个或多个，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明抗体包括上文所列CDR和可变重链和轻链序列的组合。
在另一个实施方案中，本发明涵盖包含以下的其它抗体例如嵌合抗体：对应于SEQ ID NO:2的可变轻链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的多肽序列的一个或多个，和/或对应于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:19的可变重链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或120和SEQ ID NO:9的多肽序列的一个或多个，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明抗体包括上文所列CDR和可变重链和轻链序列的人源化形式的组合。
本发明还涵盖对IL-6具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明抗体片段包含以下或者可选地由以下组成：SEQ ID NO:2、20、647、651、660、666、699、702、706或709的多肽序列的人源化形式。在本发明的另一个实施方案中，本发明抗体片段包含以下或者可选地由以下组成：SEQ ID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704或708的多肽序列的人源化形式。
在本发明的进一步实施方案中，对IL-6具有结合特异性的抗体片段包含以下或者可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:2或709的可变轻链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:4、SEQID NO:5和SEQ ID NO:6的多肽序列的一个或多个。
在本发明的进一步实施方案中，对IL-6具有结合特异性的抗体片段包含以下或者可选地由以下组成：对应于SEQ ID NO:3和SEQID NO:657或19的可变重链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或120和SEQ ID NO:9的多肽序列的一个或多个。
本发明还涵盖包括本文所述抗体片段的一个或多个的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对IL-6具有结合特异性的抗体片段包含下述抗体片段的一个、两个、三个或更多个(包括全部)或者可选地由下述抗体片段的一个、两个、三个或更多个(包括全部)组成：SEQ IDNO:2的可变轻链区；SEQ ID NO:3的可变重链区；SEQ ID NO:2的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5；和SEQ IDNO:6)；和SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:657或19的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:120；和SEQID NO:9)。
本发明还涵盖其中如下所述的变体：SEQ ID NO:18或SEQ IDNO:19的重链多肽序列的任一个取代SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:657的重链多肽序列；SEQ ID NO:20的轻链多肽序列取代SEQID NO:2或SEQ ID NO:709的轻链多肽序列；和SEQ ID NO:120的重链CDR序列取代SEQ ID NO:8的重链CDR序列。
在本发明一个优选实施方案中，抗IL-6抗体是包含SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的Ab1，或者更具体是包含SEQ ID NO:657和SEQID NO:709(其分别由SEQ ID NO:700和SEQ ID NO:723中的核酸序列编码)的抗体，或者包含前段所列可选SEQ ID NO并且具有至少一种本文所述生物活性的抗体。在一个优选实施方案中，抗IL-6抗体将包含图34-37所示的人源化序列。
表2显示了本发明抗IL-6抗体的序列。显示了Ab1至Ab7的重链和轻链的示例性序列变体其它可选形式。本发明抗体涵盖其它序列变体，包括保守取代、一个或多个CDR序列和/或FR序列取代、等等。
示例性Ab1实施方案包括含有轻链和/或重链的变体的抗体。Ab1的轻链的示例性变体包括所示Ab1轻链的任何一个(即，SEQ ID NO:2、20、647、651、660、666、699、702、706或709的任何一个)的序列，其中整个CDR1序列被替代或者其中CDR1序列的一个或多个残基被所列其它轻链CDR1序列的任何一个(即，SEQ ID NO:23、39、55、71、87、103、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364、380、396、412、428、444、460、476、492、508、524、540、556或572的任何一个)的相应位置的残基所替代；和/或其中整个CDR2序列被替代或者其中CDR2序列的一个或多个残基被所列其它轻链CDR2序列的任何一个(即，SEQID NO:24、40、56、72、88、104、125、141、157、173、189、205、221、237、253、269、285、301、317、333、349、365、381、397、413、429、445、461、477、493、509、525、541、557或573的任何一个)的相应位置的残基所替代；和/或其中整个CDR3序列被替代或者其中CDR3序列的一个或多个残基被所列其它轻链CDR3序列的任何一个(即，SEQ ID NO:25、41、57、73、89、105、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366、382、398、414、430、446、462、478、494、510、526、542、558或574的任何一个)的相应位置的残基所替代。
Ab1的重链的示例性变体包括所示Ab1重链的任何一个(即，SEQID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704或708的任何一个)的序列，其中整个CDR1序列被替代或者其中CDR1序列的一个或多个残基被所列其它重链CDR1序列的任何一个(即，SEQ ID NO:26、42、58、74、90、106、127、143、159、175、191、207、223、239、255、271、287、303、319、335、351、367、383、399、415、431、447、463、479、495、511、527、543、559或575的任何一个)的相应位置的残基所替代；和/或其中整个CDR2序列被替代或者其中CDR2序列的一个或多个残基被Ab1重链CDR2序列例如表1所列那些(即，SEQ ID NO:8或120的任何一个)或所列其它重链CDR2序列的任何一个(即，SEQ ID NO:27、43、59、75、91、107、121、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368、384、400、416、432、448、464、480、496、512、528、544、560或576的任何一个)的相应位置的残基所替代；和/或其中整个CDR3序列被替代或者其中CDR3序列的一个或多个残基被所列其它重链CDR3序列的任何一个(即，SEQ IDNO:28、44、60、76、92、108、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369、385、401、417、433、449、465、481、497、513、529、545、561或577的任何一个)的相应位置的残基所替代。
在另一个实施方案中，本发明涵盖包含以下的其它抗体例如嵌合或人源化抗体：对应于SEQ ID NO:2的可变轻链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的多肽序列的一个或多个，和/或对应于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:19的可变重链序列的互补决定区(CDR或超变区)的SEQ ID NO:7(CDR1)、SEQ ID NO:8(CDR2)、SEQ ID NO:120(CDR2)和SEQ IDNO:9(CDR3)的多肽序列的一个或多个，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明抗体包括上列CDR和可变重链和轻链序列的组合，包括图2和34-37所列的那些以及表1所列那些。
在另一个实施方案中，本发明抗IL-6抗体是包含以下至少一个的抗IL-6抗体：SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:694中的序列编码的CDR1轻链；SEQ ID NO:13中的序列编码的轻链CDR2；SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:695中的序列编码的轻链CDR3；SEQ ID NO:15中的序列编码的重链CDR1，SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:696编码的重链CDR2，和SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:697编码的重链CDR3。此外，本发明涵盖此类核酸序列及其变体。
在另一个实施方案中，本发明涉及对应于所述抗IL-6抗体的CDR的氨基酸序列，选自SEQ ID NO:4(CDR1)、SEQ ID NO:5(CDR2)、SEQ ID NO:6(CDR3)、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:9。
在另一个实施方案中，本发明抗IL-6抗体包含SEQ ID NO:10、662、698、701、705、720、721、722或723的轻链核酸序列；和/或SEQ ID NO:11、663、700、703、707、724或725的重链核酸序列。此外，本发明涉及前述核酸序列任何一个及其组合编码的相应多肽。
在本发明一个具体实施方案中，抗IL-6抗体或其部分由选自SEQID NO:10、12、13、14、662、694、695、698、701、705、720、721、722、723、11、15、16、17、663、696、697、700、703、707、724和725中包含的那些核酸序列编码。例如，轻链的CDR1可以由SEQID NO:12或694编码，轻链的CDR2可以由SEQ ID NO:13编码，轻链的CDR3可以由SEQ ID NO:14或695编码；重链的CDR1可以由SEQ ID NO:15编码，重链的CDR2可以由SEQ ID NO:16或696编码，重链的CDR3可以由SEQ ID NO:17或697编码。含有这些CDR的下文讨论的抗体可以使用适当的人构架来构建，基于本文讨论的人源化方法。
在本发明另一个具体实施方案中，可变轻链由SEQ ID NO:10、662、698、701、705、720、721、722或723编码，并且抗IL-6抗体的可变重链由SEQ ID NO:11、663、700、703、707、724或725编码。
在另一个更具体的实施方案中，抗IL-6抗体的可变轻链和可变重链分别由以下编码：SEQ ID NO:10和11、或SEQ ID NO:698和SEQ ID NO:700、或SEQ ID NO:701和SEQ ID NO:703、或SEQ IDNO:705和SEQ ID NO:707。
在另一个具体实施方案中，本发明涵盖含有前述核酸任何一个及其组合的核酸构建体，以及含有这些核酸序列和构建体的重组细胞，其中这些核酸序列和构建体可以在染色体外或者整合入宿主细胞基因组。
在另一个具体实施方案中，本发明涵盖：含有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:120、SEQ ID NO:9中所述CDR的任何一个或其组合的多肽，或包括SEQ ID NO:2、20、647、651、660、666、699、702、706或709中含有的可变轻链多肽和/或SEQ ID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704或708中含有的可变重链多肽的任何一个的多肽。这些多肽任选可以直接或间接与其它免疫球蛋白多肽或效应部分例如治疗或可检测实体连接。
在另一个实施方案中，抗IL-6抗体是包含以下至少一个的抗IL-6抗体：SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:698或SEQ ID NO:701或SEQID NO:705中序列编码的可变轻链，以及SEQ ID NO:11或SEQ IDNO:700或SEQ ID NO:703或SEQ ID NO:707中序列编码的可变轻链。
在另一个实施方案中，抗IL-6抗体是前述序列的变体，包括构架和/或CDR序列中的一个或多个取代，并且在体外和/或在体内施用时具有Ab1性质的一种或多种。
这些体外和体内性质更详细描述于下述实施例，并且包括：与Ab1竞争结合IL-6和/或其肽；具有小于约50皮摩尔的对IL-6的结合亲和力(Kd)，和/或小于或等于10-4S-1的与IL-6的解离速率(Koff)；在健康人受试者中具有至少约22天的体内半衰期；预防或治疗低白蛋白血症的能力；预防或治疗升高的CRP的能力；预防或治疗异常凝血的能力；和/或在患有伴随增加的血栓风险的疾病或病症的个体中减少血栓风险的能力。抗IL-6活性的其它非限制性实例在本文列出，例如在标题“抗IL-6活性”下。
在另一个实施方案中，抗IL-6抗体包含Ab1轻链和/或重链CDR序列(参见表1)或其变体的一个或多个，其在体外和/或在体内施用时具有Ab1性质的一种或多种(此类性质的实例在前一段落讨论)。本领域技术人员将理解如何组合这些CDR序列以形成抗原结合表面，例如通过与一个或多个支架的连接，所述支架包括人或其它哺乳动物构架序列或其源于SMIP、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR或其它免疫球蛋白或其它工程抗体的功能性直向同源物。例如，实施方案可以特异性结合人IL-6并且包括下述CDR序列或其变体的1个、2个、3个、4个、5个、6个或多个：
与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少72.7%(即，11个氨基酸中8个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少81.8%(即，11个氨基酸中9个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少90.9%(即，11个氨基酸中10个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少100%(即，11个氨基酸中11个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少85.7%(即，7个氨基酸中6个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少100%(即，7个氨基酸中7个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少50%(即，12个氨基酸中6个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少58.3%(即，12个氨基酸中7个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少80%(即，5个氨基酸中4个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少100%(即，5个氨基酸中5个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少50%(即，16个氨基酸中8个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少56.2%(即，16个氨基酸中9个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少62.5%(即，16个氨基酸中10个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少68.7%(即，16个氨基酸中11个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少75%(即，16个氨基酸中12个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少81.5%(即，16个氨基酸中13个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少87.5%(即，16个氨基酸中14个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少93.7%(即，16个氨基酸中15个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少100%(即，16个氨基酸中16个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少33.3%(即，12个氨基酸中4个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少41.6%(即，12个氨基酸中5个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少50%(即，12个氨基酸中6个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少58.3%(即，12个氨基酸中7个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)同一性的多肽；
与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少90.9%(即，11个氨基酸中10个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少100%(即，11个氨基酸中11个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少85.7%(即，7个氨基酸中6个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少100%(即，7个氨基酸中7个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少80%(即，5个氨基酸中4个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少100%(即，5个氨基酸中5个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少56.2%(即，16个氨基酸中9个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少62.5%(即，16个氨基酸中10个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少68.7%(即，16个氨基酸中11个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少75%(即，16个氨基酸中12个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少81.2%(即，16个氨基酸中13个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少87.5%(即，16个氨基酸中14个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少93.7%(即，16个氨基酸中15个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少100%(即，16个氨基酸中16个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少50%(即，12个氨基酸中6个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少58.3%(即，12个氨基酸中7个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)相似性的多肽；
与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)相似性的多肽。
其它示例性实施方案包括编码前述任何的一个或多个多核苷酸，例如编码特异性结合人IL-6的多肽并且包括下述CDR或其变体的1个、2个、3个、4个、5个、6个或更多个的多核苷酸：
编码与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少72.7%(即，11个氨基酸中8个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少81.8%(即，11个氨基酸中9个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少90.9%(即，11个氨基酸中10个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少100%(即，11个氨基酸中11个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少85.7%(即，7个氨基酸中6个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少100%(即，7个氨基酸中7个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少50%(即，12个氨基酸中6个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少58.3%(即，12个氨基酸中7个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少80%(即，5个氨基酸中4个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少100%(即，5个氨基酸中5个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少50%(即，16个氨基酸中8个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少56.2%(即，16个氨基酸中9个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少62.5%(即，16个氨基酸中10个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少68.7%(即，16个氨基酸中11个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少75%(即，16个氨基酸中12个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少81.2%(即，16个氨基酸中13个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少87.5%(即，16个氨基酸中14个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少93.7%(即，16个氨基酸中15个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少100%(即，16个氨基酸中16个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少33.3%(即，12个氨基酸中4个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少41.6%(即，12个氨基酸中5个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少50%(即，12个氨基酸中6个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少58.3%(即，12个氨基酸中7个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)同一性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少90.9%(即，11个氨基酸中10个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:4的轻链CDR1具有至少100%(即，11个氨基酸中11个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少85.7%(即，7个氨基酸中6个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:5的轻链CDR2具有至少100%(即，7个氨基酸中7个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:6的轻链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少80%(即，5个氨基酸中4个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:7的重链CDR1具有至少100%(即，5个氨基酸中5个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少56.2%(即，16个氨基酸中9个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少62.5%(即，16个氨基酸中10个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少68.7%(即，16个氨基酸中11个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少75%(即，16个氨基酸中12个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少81.2%(即，16个氨基酸中13个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少87.5%(即，16个氨基酸中14个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少93.7%(即，16个氨基酸中15个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:120的重链CDR2具有至少100%(即，16个氨基酸中16个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少50%(即，12个氨基酸中6个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少58.3%(即，12个氨基酸中7个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少66.6%(即，12个氨基酸中8个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少75%(即，12个氨基酸中9个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少83.3%(即，12个氨基酸中10个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少91.6%(即，12个氨基酸中11个)相似性的多肽的多核苷酸；
编码与SEQ ID NO:9的重链CDR3具有至少100%(即，12个氨基酸中12个)相似性的多肽的多核苷酸。
表2.示例性抗IL-6抗体的序列
Figure BDA00001909859700971
Figure BDA00001909859700991
Figure BDA00001909859701001
Figure BDA00001909859701011
*重链和轻链的示例性序列变体形式隔行显示
PRT.：多肽序列
Nuc.：示例性编码序列
供参考，表3概括除表2中包括的那些以外的序列标识符。
表3.本申请中的序列标识符概括
Figure BDA00001909859701012
Figure BDA00001909859701021
此类抗体片段或其变体可以下述非限制性形式的一种或多种存在：Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和单链Fv抗体形式。在一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体还包含κ恒定轻链序列，其包含下列序列：
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:586).
在另一个优选实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体还包含γ-1恒定重链多肽序列，其包含下列序列之一：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:588)
和
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:719)。
本文描述的抗体的实施方案可以包括前导序列，例如兔Ig前导序列、白蛋白前肽、酵母交配因子前原分泌前导序列(例如巴斯德毕赤酵母或酿酒酵母或α因子)或人HAS前导序列。示例性前导序列显示于图36A和37A所示多肽的N端FR1旁，如下：SEQ ID NO:2和660(MD...)和SEQ ID NO:3和661(M E...)中的兔Ig前导序列；以及在SEQ ID NO:706和708中的白蛋白多肽，其促进分泌。本领域已知赋予期望性质(例如分泌、提高的稳定性或半衰期等)的其它前导序列还可以单独或与重链和/或轻链上另一前导序列组合使用，其可以任选地在施用给受试者之前被切割。例如，多肽可以在细胞或无细胞的表达系统中表达，所述表达系统还表达或包括(或被修饰以表达或包括)蛋白酶，例如膜结合信号肽酶，其切割前导序列。
在另一个实施方案中，本发明涵盖分离的抗IL-6抗体，其包含VH多肽序列，包括：SEQ ID NO:3、18、19、22、38、54、70、86、102、117、118、123、139、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379、395、411、427、443、459、475、491、507、523、539、555、571、652、656、657、658、661、664、665、668、672、676、680、684、688、691、692、704或708；还包含VL多肽序列，包括：SEQ ID NO:2、20、21、37、53、69、85、101、119、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、394、410、426、442、458、474、490、506、522、538、554、570、647、651、660、666、667、671、675、679、683、687、693、699、702、706或709或其变体，其中所述VH或VL多肽中构架残基(FR残基)或CDR残基的一个或多个已经被另一个氨基酸残基取代，产生特异性结合IL-6的抗IL-6抗体。本发明涵盖这些抗体的人源化和嵌合形式，其中优选地，FR将包含与亲本抗体高度同源的人FR。嵌合抗体可以包括源于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恒定区和特别是SEQ ID NO:588和SEQ ID NO:586中含有的可变重链和轻链恒定区的Fc。
在本发明的一个实施方案中，抗体或VH或VL多肽源自或选自一种或多种开始本文所述人源化过程之前的兔B细胞群。
在本发明的另一个实施方案中，抗IL-6抗体及其片段和变体对人IL-6蛋白的灵长类同系物具有结合特异性。人IL-6蛋白的灵长类同系物的非限制性实例是获自长尾猕猴(Macaca fascicularis)(还称为食蟹猴)和恒河猴的IL-6。在本发明的另一个实施方案中，抗IL-6抗体及其片段和变体抑制IL-6与IL-6R的结合、和/或IL-6/IL-6R/gp130复合物的产生和/或IL-6/IL-6R/gp130多聚物的产生，和/或拮抗前述一种或多种的生物效应。
如上所述，抗体及其片段和变体可以被翻译后修饰以增加效应部分(例如化学连接体)、可检测部分(例如荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质和化学发光部分)或功能部分(例如链霉亲和素、亲和素、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂和放射性物质)。
关于可检测部分，其它示例性酶包括但不限于辣根过氧化物酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和荧光酶。其它示例性荧光物质包括但不限于若丹明、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞形花内酯、二氯三嗪基胺、藻红蛋白和丹磺酰氯。其它示例性化学发光部分包括但不限于鲁米诺。其它示例性生物发光物质包括但不限于虫荧光素和水母素。其它示例性放射性物质包括但不限于碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)和磷32(32P)。
关于功能部分，示例性细胞毒性剂包括但不限于甲氨蝶呤、氨基蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺；烷化剂，例如氮芥、塞替哌、苯丁酸氮芥、美法仑、亚硝脲氮芥(BSNU)、丝裂霉素C、环己亚硝脲(CCNU)、1-甲基亚硝基脲、环磷酰胺、氮芥、白消安、二溴甘露糖醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C、顺式-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂和碳铂(铂尔定)；蒽环类包括柔红霉素(前称道诺霉素)、阿霉素(亚德里亚霉素)、地托比星、洋红霉素、去甲氧正定霉素、表柔比星、米托蒽醌和比生群；抗生素包括更生霉素(放线菌素D)、博来霉素、加利车霉素、光神霉素和氯茴霉素(AMC)；和抗裂剂，例如长春花生物碱、长春新碱和长春花碱。其它细胞毒性剂包括紫杉醇(泰素)、蓖麻毒、假单胞菌外毒素、吉西他滨、松胞菌素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、依托泊苷、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙素、二羟基炭疽菌素二酮、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普内洛尔、嘌呤霉素、甲基苄肼、羟基脲、天冬酰胺酶、皮质类固醇类、米托坦(O,P′-(DDD))、干扰素以及这些细胞毒性剂的混合物。
其它细胞毒性剂包括但不限于化疗剂，例如碳铂、顺铂、紫杉醇、吉西他滨、加利车霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱、博来霉素、VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇类、依立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、甲酰四氢叶酸、类固醇、环磷酰胺、美法仑、长春花生物碱(例如、长春花碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨)、氮芥类、酪氨酸激酶抑制剂、放疗、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素(例如IL-12or IL-2)、IL-12R拮抗剂、与毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠单抗、抗CD20抗体、Rituxan
Figure BDA00001909859701061
奥瑞珠单抗、奥法木单抗、DXL625、Herceptin
Figure BDA00001909859701062
或其任意组合。来自植物和细菌的毒性酶例如蓖麻素、白喉毒素和假单胞菌毒素可以与人源化抗体或其结合片段结合以产生细胞型特异性杀伤试剂(Youle,等.,Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 77:5483(1980)；Gilliland,等.,Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 77:4539(1980)；Krolick,等.,Proc.Nat′lAcad.Sci.USA 77:5419(1980))。
其它细胞毒性剂包括Goldenberg在美国专利第6,653,104号中描述的细胞毒性核糖核酸酶。本发明实施方案还涉及放射性免疫结合物，其中发射α或β粒子的放射性核素与抗体或其结合片段稳定结合，使用或不使用复合物形成剂。此类放射性核素包括β-发射体和α-发射体，β-发射体例如磷-32(32P)、钪-47(47Sc)、铜-67(67Cu)、镓-67(67Ga)、钇-88(88Y)、钇-90(90Y)、碘-125(125I)、碘-131(131I)、钐-153(153Sm)、镥-177(177Lu)、铼-186(186Re)或铼-188(188Re)，α-发射体例如砹-211(211At)、铅-212(212Pb)、铋-212(212Bi)或-213(213Bi)或锕-225(225Ac)。
本领域已知用于将抗体或其结合片段结合至可检测部分和类似物的方法，例如Hunter等,Nature 144:945(1962)；David等,Biochemistry 13:1014(1974)；Pain等,J.Immunol.Meth.40:219(1981)；和Nygren,J.,Histochem.与Cytochem.30:407(1982)描述的那些方法。
本文描述的实施方案还包括基本上与本文提出的抗体、抗体片段、双抗体、SMIP、骆驼抗体、纳米抗体IgNAR、多肽、可变区和CDR同源的变体和等同物。这些可以含有例如保守取代突变(即，一个或多个氨基酸被类似氨基酸取代)。例如，保守取代指一种氨基酸被同一大类中的另一种氨基酸取代，例如一种酸性氨基酸被另一种酸性氨基酸取代，一种碱性氨基酸被另一种碱性氨基酸取代，或者一种中性氨基酸被另一种中性氨基酸取代。保守氨基酸取代所预期的是本领域公知的。
在另一个实施方案中，本发明涵盖与本文所述抗体片段、可变区和CDR的多肽序列的任何一个或多个具有至少90%或更大序列同源性的多肽序列。更优选地，本发明涵盖与本文所述抗体片段、可变区和CDR的多肽序列的任何一个或多个具有至少95%或更大序列同源性、更优选至少98%或更大序列同源性和更优选至少99%或更大序列同源性的多肽序列。用于测定核酸与氨基酸序列之间同源性的方法是本领域普通技术人员公知的。
在另一个实施方案中，本发明还涵盖具有抗IL-6活性的本文所述的抗体片段、可变区和CDR的上述多肽同系物。抗IL-6活性的非限制性实例在例如下文标题“抗IL-6活性”下列出。
在另一个实施方案中，本发明还涵盖结合前述序列任何一个的抗独特型抗体的产生和使用。在一个示例性实施方案中，此类抗独特型抗体可以被施用至已经接受抗IL-6抗体的受试者以调节、降低或中和抗IL-6抗体的效应。此类抗独特型抗体还可用于治疗特征为抗IL-6抗体的存在的自身免疫疾病。此类抗独特型抗体的另一个示例性用途是检测本发明的抗IL-6抗体以监测受试者血液或其它体液中存在的抗IL-6抗体的水平。
本发明还涵盖包含本文所述任何多肽或多核苷酸序列取代本文所述其它多核苷酸序列的抗IL-6抗体。例如但不限于，本发明涵盖包含本文所述可变轻链和可变重链序列任何一个的组合的抗体，并且还涵盖本文所述任何CDR序列取代本文所述任何其它CDR序列而产生的抗体。如所述，优选抗IL-6抗体或其片段或变体可以含有图34或35所示的可变重链和/或轻链序列，如SEQ ID NO:651、657、709或其变体，其中一个或多个CDR或FR残基被修饰，但不对抗体结合IL-6或其它所需的功能活性产生不利影响。
编码抗IL-6抗体多肽的多核苷酸
本发明还涉及编码对IL-6具有结合特异性的抗体的多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明多核苷酸包括编码SEQ IDNO:2的可变轻链多肽序列的下述多核苷酸序列或者可选地由编码SEQ ID NO:2的可变轻链多肽序列的下述多核苷酸序列组成：
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT(SEQ ID NO:10)或SEQ ID NO:662、698、701或705的多核苷酸序列。
在本发明的另一个实施方案中，本发明多核苷酸包括编码SEQID NO:3的可变重链多肽序列的下述多核苷酸序列或者可选地由编码SEQ ID NO:3的可变重链多肽序列的下述多核苷酸序列组成：
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG(SEQ ID NO:11)或SEQ ID NO:663、700、703或707的多核苷酸序列。
在本发明的进一步实施方案中，编码对IL-6具有结合特异性的抗体片段或变体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:2的轻链可变序列的互补决定区(CDR或超变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:12或694、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14或695的多核苷酸序列的一个或多个。
在本发明的进一步实施方案中，编码对IL-6具有结合特异性的抗体片段或变体的多核苷酸包含以下或可选地由以下组成：对应于编码SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:661或SEQ ID NO:657或图34或35所示的其它序列的重链可变序列的互补决定区(CDR或超变区)的多核苷酸的SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或696和SEQ ID NO:17或697的多核苷酸序列的一个或多个。
本发明还涵盖包括编码本文所述抗体片段或变体的多核苷酸序列的一个或多个的多核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，编码对IL-6具有结合特异性的抗体片段或变体的多核苷酸包含下述编码抗体片段的多核苷酸的一个、两个、三个或更多个(包括全部)或者可选地由下述编码抗体片段的多核苷酸的一个、两个、三个或更多个(包括全部)组成：编码SEQ ID NO:2的轻链可变区的多核苷酸SEQ IDNO:10；编码SEQ ID NO:3的重链可变区的多核苷酸SEQ ID NO:11；编码SEQ ID NO:20的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:720；编码SEQ ID NO:647的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:721；编码SEQID NO:660的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:662；编码SEQ ID NO:666的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:722；编码SEQ ID NO:699的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:698；编码SEQ ID NO:702的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:701；编码SEQ ID NO:706的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:705；编码SEQ ID NO:709的轻链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:723；编码SEQ ID NO:19的重链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:724；编码SEQ ID NO:652的重链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:725；编码SEQ ID NO:657的重链多肽的多核苷酸SEQID NO:700；编码SEQ ID NO:661的重链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:663；编码SEQ ID NO:704的重链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:703；编码SEQ ID NO:708的重链多肽的多核苷酸SEQ ID NO:707；编码前述轻链多肽的互补决定区的多核苷酸SEQ ID NO:12、13、14、694和695；以及编码前述重链多肽的互补决定区的多核苷酸SEQ ID NO:15、16、17、696和697；和分别编码SEQ ID NO:657和SEQ ID NO:709中的可变重链和轻链序列的多核苷酸，例如SEQ ID NO:700和SEQID NO:723中的核酸序列，及其片段或变体，例如基于密码子简并性。这些编码可变重链和可变轻链的核酸序列可以单独表达或组合表达，并且这些序列优选与适合的可变恒定序列例如SEQ ID NO:589和SEQ ID NO:587中的那些融合。
编码本发明的抗IL-6抗体的示例性核苷酸序列如以上表1所示。所示多核苷酸序列应理解为例证性的而不是限制性的。本领域的技术人员应能容易地确定会编码所给定多肽的多核苷酸，能容易地生成适用于所给定表达系统中的表达的编码序列，如通过改编提供的多核苷酸序列和/或通过重新生成它们，并能容易地产生密码子优化表达序列，例如，如公布的美国专利申请第2008/0120732号所述，或使用本领域已知的其它方法。
在本发明的另一个实施方案中，本发明多核苷酸还包含下述编码SEQ ID NO:586的κ恒定轻链的多核苷酸序列：
GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT(SEQ ID NO:587)。
在本发明的另一个实施方案中，本发明多核苷酸还包含下述编码SEQ ID NO:588的γ-1恒定重链多肽序列的多核苷酸序列：
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA(SEQ ID NO:589)。
在一个实施方案中，本发明涉及包含编码选自SEQ ID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704和708的抗IL-6VH抗体氨基酸序列或编码其变体的多核苷酸的分离多核苷酸，其中至少一个构架残基(FR残基)被兔抗IL-6抗体VH多肽相应位置上的氨基酸或保守的氨基酸取代基取代。另外，本发明特别涵盖人源化抗IL-6抗体或其人源化抗体结合片段或变体和编码包含图2或34-37中含有的或表1所示的序列中的人源化可变重链和/或轻链多肽的上述者的核酸序列或其变体，其中一个或多个构架或CDR残基可被修饰。优选地，如果引入任何修饰，其不会对所得的抗IL-6抗体或其片段或变体的结合亲和力产生不利影响。
在另一个实施方案中，本发明涉及包含编码选自SEQ ID NO:2、20、647、651、660、666、699、702、706和709的抗IL-6VL抗体氨基酸序列或编码其变体的多核苷酸的分离多核苷酸，其中至少一个构架残基(FR残基)被兔抗IL-6抗体VH多肽相应位置上的氨基酸或保守的氨基酸取代基取代。
在再一个实施方案中，本发明涉及包含编码在SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:19；SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:3；SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:18；或SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:19中含有的多肽的序列的一个或多个异源多核苷酸。
在另一个实施方案中，本发明涉及表达含有至少一个衍生于抗IL-6抗体的CDR多肽的多肽的分离多核苷酸，其中所述表达的多肽单独特异性结合IL-6或当与其它表达含有至少一个衍生于抗IL-6抗体的CDR多肽的多肽的多核苷酸序列结合表达时，特异性结合IL-6，其中所述至少一个CDR选自包含在SEQ ID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704、708、2、20、647、651、660、666、699、702、706或709中含有的VL或VH多肽中的那些。
还涵盖包含所述多核苷酸的宿主细胞和载体。
在另一个具体实施方案中，本发明涵盖含有前述核酸序列的任一个及其组合的核酸构建体，以及含有这些核酸序列和构建体的重组细胞，其中这些核酸序列或构建体可以在染色体外或整合入宿主细胞基因组。
本发明还涵盖包含编码可变重链和轻链多肽序列以及本文所列的个体互补决定区(CDR或超变区)的多核苷酸序列的载体，以及包含所述序列的宿主细胞。在本发明的一个实施方案中，宿主细胞是酵母细胞。在本发明的另一个实施方案中，酵母宿主细胞属于毕赤酵母属。
在一些情况下，提供了超过一个的编码给定多肽序列的示例性多核苷酸，总结于表4。
表4.编码特定多肽的多个示例性多核苷酸
  多肽SEQ ID NO   示例性编码SEQ ID NO
  4   12,111,694
  5   13,112,389,501
  6   14,113,695
  9   17,116,697
  39   47,260
  40   48,261
  60   68,265
  72   80,325,565,581
  89   97,134,166
  103   12,111,694
  104   13,112,389,501
  105   14,113,695
  108   17,116,697
  126   97,134,166
  158   97,134,166
  190   198,214
  191   199,215
  205   213,469,485
  206   198,214
  207   199,215
  252   47,260
  253   48,261
  257   68,265
  317   80,325,565,581
  333   341,533
  381   13,112,389,501
  415   423,439
  431   423,439
  461   213,469,485
  475   483,499
  476   484,500
  477   213,469,485
  478   486,502
  479   487,503
  480   488,504
  481   489,505
  491   483,499
  492   484,500
  493   13,112,389,501
  494   486,502
  495   487,503
  496   488,504
  497   489,505
  525   341,533
  545   553,585
  554   562,578
  556   564,580
  557   80,325,565,581
  558   566,582
  570   562,578
  572   564,580
  573   80,325,565,581
  574   566,582
  577   553,585
在一些情况下，多个序列标识符指相同的多肽或多核苷酸序列，总结于表4。要理解，对这些序列标识符的提及是可相互替换的，除了当上下文另有说明时。
表5.重复序列。每个单元格列出序列表中包括的一组重复序列。
  重复序列的SEQ ID NO
  4,103
  5,104,381,493
  6,105
  9,108
  12,111
  13,112
  14,113
  17,116
  39,252
  40,253
  48,261
  60,257
  68,265
  72,317,557,573
  80,325,565,581
  89,126,158
  97,134,166
  120,659
  190,206
  191,207
  198,214
  199,215
  205,461,477
  213,469
  333,525
  415,431
  423,439
  475,491
  476,492
  478,494
  479,495
  480,496
  481,497
  483,499
  484,500
  486,502
  487,503
  488,504
  489,505
  545,577
  554,570
  556,572
  558,574
  562,578
  564,580
  566,582
某些示例性实施方案包括在中等或高度严格杂交条件下与具有表1所述示例性编码序列之一的多核苷酸杂交的多核苷酸，并且还包括在中等或高度严格杂交条件下与编码与具有表1所述示例性编码序列之一的多核苷酸相同的多肽或由前述多核苷酸任何一个编码的多肽的多核苷酸杂交的多核苷酸。
短语“高严格度杂交条件”指探针将与通常在核酸混合物中的其目标子序列杂交但不与其它序列杂交的条件。高严格度条件是序列依赖性的并且在不同情况下有所不同。较长的序列以较高的温度特异性杂交。有关核酸杂交的深入指南见于Tijssen,Techniques inBiochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes,″Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acidassays″(1993)。一般，高严格度条件被选择为比特定序列在确定离子强度pH下的热熔点(Tm)低约5-10℃。Tm是在平衡时与靶标互补的探针的50%与靶标序列杂交(靶标序列过量存在，在Tm时，在平衡时50%的探针被占据)的温度(在确定的离子强度、pH和核酸浓度下)。高严格度条件将是其中如下所述的那些：在pH 7.0至8.3时的盐浓度低于约1.0M钠离子、通常约0.01至1.0M钠离子浓度(或其它盐)，并且温度对于短探针(例如10至50个核苷酸)而言是至少约30℃，而对于长探针(例如，大于50个核苷酸)而言是至少约60℃。高严格度条件还可以通过添加去稳定剂例如甲酰胺来实现。对于选择性或特异性杂交，阳性信号至少两倍于背景，任选地10倍于背景杂交。示例性的高严格度杂交条件可以如下：50%甲酰胺、5×SSC和1%SDS，在42℃孵育，或者5×SSC、1%SDS，在65℃孵育，其中在0.2×SSC和0.1%SDS中65℃下洗涤。此类杂交和洗涤步骤可以进行例如1、2、5、10、15、30、60或更多分钟。
在高严格度条件下不相互杂交的核酸编码的多肽是实质上相关的，则所述核酸依然是实质上相关的。这发生在例如使用遗传密码允许的最大密码子简并产生核酸拷贝时。在此类情况下，核酸通常在中等严格度杂交条件下杂交。示例性“中等严格度杂交条件”包括在37℃下40%甲酰胺、1M NaCl、1%SDS的缓冲液中杂交，并在45℃下1×SSC中洗涤。此类杂交和洗涤步骤可以进行例如1、2、5、10、15、30、60或更多分钟。阳性杂交是至少两倍于背景。普通技术人员将容易理解，替代杂交和洗涤条件可以用于提供相似严格度的条件。
本发明其它示例性实施方案
在另一个实施方案中，本发明涵盖可以与包括以下的抗IL6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位的一个或多个抗IL-6抗体或其片段或变体：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。在一个优选的实施方案中，抗IL-6抗体或其片段或变体可以与Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)(其优选是非糖基化的)特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位。
在本发明的另一个实施方案中，可以特异性结合完整IL-6多肽或其片段上被Ab1特异性结合的相同的线性或构象性表位的抗IL-6抗体可以结合通过使用跨天然人IL-6多肽全长的重叠线性肽片段的表位定位确定的IL-6表位。在本发明的一个实施方案中，IL-6表位包含以下或可选地由以下组成：选自那些分别包括氨基酸残基37-51、氨基酸残基70-84、氨基酸残基169-183、氨基酸残基31-45和/或氨基酸残基58-72的IL-6片段中包含的一个或多个残基。
本发明还涉及与本文公开的抗体或抗体片段结合相同的IL-6表位和/或与抗IL-6抗体竞争结合IL-6的抗IL-6抗体，包括但不限于选自以下的抗IL-6抗体：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。
在另一个实施方案中，本发明还涉及包含以下的分离的抗IL-6抗体或其片段或变体：包括SEQ ID NO:3、18、19、22、38、54、70、86、102、117、118、123、139、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379、395、411、427、443、459、475、491、507、523、539、555、571、652、656、657、658、661、664、665、668、672、676、680、684、688、691、692、704或708的VH多肽序列中含有的CDR的一个或多个，和/或由2、20、21、37、53、69、85、101、119、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、394、410、426、442、458、474、490、506、522、538、554、570、647、651、660、666、667、671、675、679、683、687、693、699、702、706或709组成的VL多肽序列中含有的CDR的一个或多个，以及本申请图34-37中包含的抗体比对中描述的VH和VL序列。
在本发明的一个实施方案中，前两段讨论的抗IL-6抗体在每个可变轻链区和可变重链区中包含至少2个与包括以下的抗IL-6抗体中含有的互补决定区(CDR)相同的互补决定区(CDR)：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。
在一个优选的实施方案中，上文讨论的抗IL-6抗体在每个可变轻链区和可变重链区中包含至少2个与Ab1中含有的互补决定区(CDR)相同的互补决定区(CDR)。在另一个实施方案中，上文讨论的抗IL-6抗体的所有的CDR与包括以下的抗IL-6抗体中含有的CDR相同：Ab1及其特异性结合IL-6的嵌合、人源化、单链抗体和片段(含有前述抗体的一个或多个CDR)，其优选是非糖基化的。在本发明的一个优选实施方案中，上文讨论的抗IL-6抗体的所有的CDR与Ab1中含有的CDR相同，所述Ab1例如为包含分别在SEQ ID NO:657和SEQ ID NO:709中含有的VH和VL序列的抗体。
本发明还涵盖上文讨论的一种或多种抗IL-6抗体是非糖基化的；含有经过修饰而改变效应子功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fc区；是人、人源化、单链或嵌合的；以及是衍生自兔(亲本)抗IL-6抗体的人源化抗体。提供在毕赤酵母中产生非糖基化抗体的示例性恒定区包含在SEQ ID NO:588和SEQ ID NO:586中，SEQ ID NO:588和SEQ ID NO:586分别由SEQ ID NO:589和SEQ ID NO:587中的核酸序列编码。
本发明还涵盖其中如下所述的一种或多种抗IL-6抗体：其中分别在所述抗体的可变轻链区和可变重链区中的骨架区(FR)是未经修饰或已经通过用亲本兔抗体的相应FR残基取代可变轻链或重链区中的至多2或3个人FR残基而被修饰的人FR，并且其中所述人FR衍生自选自人种系抗体序列文库的人可变重链和轻链抗体序列，选择是基于所述人可变重链和轻链抗体序列相对于文库中含有的其它人种系抗体序列与相应的兔可变重链或轻链区的高同源性水平。
在本发明的一个实施方案中，抗IL-6抗体或片段可以在体内特异性结合表达IL-6的人细胞和/或循环可溶性IL-6分子，包括患有与表达IL-6的细胞相关的疾病的患者中的人细胞表达的IL-6。
在另一个实施方案中，疾病选自全身疲劳、运动性疲劳、癌症相关疲劳、炎症疾病相关疲劳、慢性疲劳综合征、纤维肌痛、癌症相关恶病质、心脏相关恶病质、呼吸相关恶病质、肾相关恶病质、年龄相关恶病质、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、全身性幼年特发型关节炎、银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、炎性肠病(IBD)、风湿性多肌炎、巨细胞动脉炎、自身免疫血管炎、移植物抗宿主疾病(GVHD)、Sjogren综合征、成人Still疾病、类风湿性关节炎、全身性幼年特发型关节炎、骨关节炎、骨质疏松、骨的佩吉特疾病、骨关节炎、多发性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、前列腺癌、白血病、肾细胞癌、多发性卡斯特莱曼病、卵巢癌、癌症化疗中的耐药性、癌症化疗毒性、缺血性心脏病、粥样硬化、肥胖、糖尿病、哮喘、多发性硬化、阿尔茨海默病、脑血管疾病、发热、急性期应答、过敏、贫血症、炎症贫血症(慢性疾病的贫血症)、高血压、抑郁、与慢性疾病相关的抑郁、血栓形成、血小板增多症、急性心力衰竭、代谢综合征、流产、肥胖、慢性前列腺炎、血管球性肾炎、盆腔炎症性疾病、再灌注损伤、移植排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、禽流感、天花、流行性感冒、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、重症急性呼吸系统综合征(SARS)、败血症和全身炎症反应综合征(SIRS)。在一个实施方案中，疾病选自癌症、炎性病症、病毒性病症或自身免疫病症。在一个特别优选的实施方案中，疾病是关节炎、恶病质和消耗综合征。
本发明还涵盖直接或间接连接至可检测标记或治疗剂的抗IL-6抗体或其片段或变体。
本发明还涵盖导致如上所述抗IL-6抗体或其抗体片段或变体表达的一种或多种核酸序列，包括包含酵母或人偏爱密码子或可选地由酵母或人偏爱密码子组成的那些。本发明还涵盖包含所述核酸序列的载体(包括质粒或重组病毒载体)。本发明还涵盖表达至少一种上述抗体的宿主细胞或重组宿主细胞，包括哺乳动物、酵母、细菌和昆虫细胞。在一个优选实施方案中，宿主细胞是酵母细胞。在一个进一步优选实施方案中，酵母细胞是二倍体酵母细胞。在一个更优选实施方案中，酵母细胞是毕赤酵母。
本发明还涵盖一种治疗方法，其包括给患有与表达IL-6的细胞相关的疾病或病状的患者施用治疗有效量的至少一种抗IL-6抗体或其片段或变体。可以被治疗的疾病在上述非限制性列表中提出。在一个优选实施方案中，疾病选自癌症、自身免疫疾病或炎症。在一个特别优选的实施方案中，疾病是癌症或病毒感染。在另一个实施方案中，治疗还包括施用另一种治疗剂或方案，选自化疗、放疗、细胞因子施用或基因疗法。
本发明还涵盖检测表达IL-6的细胞的存在的体内成像方法，其包括施用诊断有效量的至少一种抗IL-6抗体。在一个实施方案中，所述施用还包括施用促进抗体在表达IL-6的疾病部位的检测的放射性核素或荧光团。在本发明的另一个实施方案中，体内成像方法被用来检测表达IL-6的肿瘤或转移瘤，或者用来检测与表达IL-6的细胞相关的自身免疫病症部位的存在。在一个进一步实施方案中，所述体内成像方法的结果被用来帮助设计适当的治疗方案，包括多个治疗方案，包括放疗、化疗或其组合。
抗IL-6活性
如前所述，IL-6是通过受体复合物促进细胞应答的细胞因子家族成员，所述受体复合物由信号转导糖蛋白gp130的至少一个亚基和IL-6受体(IL-6R)组成。IL-6R还可以可溶形式(sIL-6R)存在。IL-6结合IL-6R，然后二聚化信号转导受体gp130。
据信，本发明的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体通过表达抗IL-6而作用。在本发明的一个非限制性实施方案中，本发明的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体通过结合IL-6而表现出抗IL-6活性，所述IL-6可以是可溶性IL-6或细胞表面表达的IL-6和/或可以预防或抑制IL-6与IL-6R的结合和/或gp130信号转导糖蛋白的活化(二聚化)和IL-6/IL-6R/gp130多聚体的形成以及前述任何一个的生物效应。本发明抗IL-6抗体可以具有不同的拮抗活性，基于特定抗体在哪里(即表位)结合IL-6和/或其如何影响前述IL-6复合物和/或多聚体的形成及其生物效应。因此，不同的根据本发明的抗IL-6抗体例如可以更好地适合预防或治疗涉及基本上可溶的IL-6的形成和累积的病症，例如类风湿性关节炎，而其它抗体可能在其中预防IL-6/IL-6R/gp130或IL-6/IL-6R/gp130多聚体是期望的治疗结果的治疗中是有利的。这可以在结合分析和其它分析中确定。
本发明抗IL-6抗体及其对IL-6具有结合特异性的片段和变体的抗IL-6活性还可以通过其对IL-6的结合强度或亲和力来描述。这也可以影响其治疗性质。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗IL-6抗体及其对IL-6具有结合特异性的片段以小于或等于5x10-7、10-7、5x10-8、10-8、5x10-9、10-9、5x10-10、10-10、5x10-11、10-11、5x10-12、10-12、5x10-13、10-13、5x10-14、10-14、5x10-15或10-15的解离常数(KD)与IL-6结合。优选地，抗IL-6抗体及其片段和变体以小于或等于5x10-10的解离常数结合IL-6。
在本发明的另一个实施方案中，本发明抗IL-6抗体及其对IL-6具有结合特异性的片段和变体的抗IL-6活性以小于或等于10-4S-1、5x10-5S-1、10-5S-1、5x10-6S-1、10-6S-1、5x10-7S-1或10-7S-1的解离速率与IL-6结合。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗IL-6抗体及其对IL-6具有结合特异性的片段和变体结合线性或构象性的IL-6表位。
在本发明的进一步实施方案中，本发明抗IL-6抗体及其对IL-6具有结合特异性的片段和变体的抗IL-6活性通过减轻或减少与IL-6相关的疾病和病症的症状或者可选地治疗或预防与IL-6相关的疾病和病症而表现出抗IL-6活性。与IL-6相关的疾病和病症的非限制性实例如下所述。所述癌症相关的疲劳、恶病质和类风湿性关节炎是本发明抗IL-6抗体的优选适应症。
在本发明的另一个实施方案中，本文所述抗IL-6抗体或其IL-6结合片段和变体不具有对IL-6R或gp-130信号转导糖蛋白的结合特异性。
B细胞筛选与分离
在一个实施方案中，本发明提供分离抗原特异性B细胞的克隆群体的方法，可用于分离至少一种抗原特异性细胞。如下文描述和示例说明的，这些方法包括一系列培养和筛选步骤，这些步骤可以单独、组合、顺序、重复或周期性地使用。优选地，这些方法用于分离至少一种抗原特异性细胞，其可用于产生对预期抗原特异性的单克隆抗体或对应于此类抗体的核酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了包括如下步骤的方法：
a.制备包含至少一种抗原特异性B细胞的细胞群；
b.例如通过色谱法富集所述细胞群，以形成包含至少一种抗原特异性B细胞的富集的细胞群；
c.从所富集的B细胞群分离单一B细胞；和
d.确定所述单个B细胞是否产生对所述抗原特异性的抗体。
在另一个实施方案中，本发明提供了对分离单个抗体生成B细胞的方法的改进，所述改进包括富集从宿主获得的B细胞群，所述宿主已经被免疫或天然暴露于抗原，其中所述富集步骤在任何筛选步骤之前，包括至少一个培养步骤，并产生生成对所述抗原特异性的单一单克隆抗体的B细胞克隆群。
贯穿本申请，“B细胞克隆群”指仅分泌对预期抗原特异性的单一抗体的B细胞群。也就是说，这些细胞仅产生一种类型的对预期抗原特异性的单克隆抗体。
在本申请中，“富集”细胞群细胞意思是增加混合细胞群中含有的预期细胞、通常是抗原特异性细胞的频率，所述混合细胞群例如从经过预期抗原免疫的宿主衍生的含B细胞的分离物。因此，富集的细胞群涵盖由于富集步骤而具有较高的抗原特异性细胞频率的细胞群，但是该细胞群可以含有并产生不同的抗体。
一般性术语“细胞群”涵盖富集前和富集后的细胞群，注意，当进行多个富集步骤时，细胞群可以是富集前和富集后的。例如，在一个实施方案中，本发明提供了一种方法：
a.从经免疫的宿主收集细胞群以获得收集的细胞群；
b.从收集的细胞群产生至少一种单细胞悬液；
c.富集至少一种单细胞悬液以形成第一富集细胞群；
d.富集所述第一富集细胞群以形成第二富集细胞群；
e.富集所述第二富集细胞群以形成第三富集细胞群；和
f.选择由所述第三富集细胞群的抗原特异性细胞产生的抗体。
每个细胞群可直接用于下一步骤，或者其可以部分或完全地冷冻以长期或短期贮存或用于以后的步骤。而且，来自细胞群的细胞可以单独悬浮以产生单细胞悬液。单细胞悬液可以被富集，使得单细胞悬液用作富集前的细胞群。然后，一个或多个抗原特异性的单细胞悬液一起形成富集的细胞群；抗原特异性单细胞悬液可以组合在一起，例如重新铺板以进一步分析和/或抗体生成。
在一个实施方案中，本发明提供了富集细胞群以产生具有约50%至约100%或其中增量的抗原特异性细胞频率的富集的细胞群。优选地，富集的细胞群具有大于或等于约50%、60%、70%、75%、80%、90%、95%、99%或100%的抗原特异性细胞频率。
在另一个实施方案中，本发明提供了富集细胞群的方法，藉此抗原特异性细胞频率增加到至少约2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或其中增量。
贯穿本申请，术语“增量”用于定义各种精确度的数值，例如接近10、1、0.1、0.01等。增量可以四舍五入至任何可测量的精确度，并且在一个范围的两端增量不需要被四舍五入至相同的精确度。例如，范围1至100或其中增量包括诸如20至80、5至50和0.4至98的范围。当范围是开放末端时，例如，小于100的范围，其中增量意思是在100与可测量限值之间的增量。例如，小于100或其中增量意思是0至100或其中增量，除非诸如温度的特征不受限于0。
抗原特异性可以根据任何抗原来测量。抗原可以是抗体可以结合的任何物质，包括但不限于肽、蛋白或其片段；碳水化合物；有机分子和无机分子；动物细胞产生的受体、细菌细胞和病毒；酶；生物途径的激动剂和拮抗剂；激素；和细胞因子。示例性动物包括但不限于IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝细胞生长因子(HGF)和Hepcidin。优选的抗原包括IL-6、IL-13、TNF-α、VEGF-α、肝细胞生长因子(HGF)和Hepcidin。在利用超过一种富集步骤的方法中，每个富集步骤中使用的抗原可以与另一种抗原相同或不同。使用相同抗原的多个富集步骤可以产生大的和/或多样的抗原特异性细胞群体；使用不同抗原的富集步骤可以产生对不同抗原具有交叉特异性的富集的细胞群体。
富集细胞群体可以通过本领域用于分离抗原特异性细胞的任何细胞筛选方式进行。例如，细胞群体可以通过色谱技术例如Miltenyi珠或磁性珠技术来富集。珠子可以直接或间接连接至目标抗原。在一个实施方案中，富集细胞群体的方法包括至少一个色谱富集步骤。
细胞群还可以通过本领域已知的任何抗原特异性分析技术来进行，例如ELISA测定或晕圈测定。ELISA测定包括但不限于选择性抗原固定化(例如，通过链霉亲和素、亲和素或neutravidin涂布板的生物素酰化抗原捕获)、非特异性抗原板涂布和通过抗原积聚策略(例如，选择性抗原捕获，随后添加结合配偶体以产生异聚体蛋白-抗原复合物)。抗原可以直接或间接连接至固体基质或支持体，例如柱。晕圈测定包括使细胞与抗原加载珠和标记的对用于收集B细胞的宿主特异性的抗宿主抗体接触。标记可以是例如荧光团。在一个实施方案中，对至少一种单细胞悬液进行至少一个分析富集步骤。在另一个实施方案中，富集细胞群的方法包括至少一个色谱富集步骤和至少一个分析富集步骤。
通过尺寸或密度“富集”细胞群的方法是本领域已知的。参见例如美国专利5,627,052。这些步骤可以用于本方法，除了通过抗原特异性富集细胞群。
本发明的细胞群含有至少一种能够识别抗原的细胞。抗原识别细胞包括但不限于B细胞、血浆细胞及其后代。在一个实施方案中，本发明提供含有单一类型的抗原特异性B细胞的克隆细胞群，即，产生对预期抗原特异性的单一单克隆抗体的细胞群。
在此类实施方案中，据信，克隆的抗原特异性B细胞群主要由抗原特异性抗体分泌细胞组成，其通过本文提供的新的培养和选择方案获得。相应地，本发明还提供了获得含有至少一种抗原特异性抗体分泌细胞的富集的细胞群的方法。在一个实施方案中，本发明提供了含有约50%至约100%或其中增量、或大于或等于约60%、70%、80%、90%或100%抗原特异性抗体分泌细胞的富集细胞群。
在一个实施方案中，本发明提供了通过在任何筛选步骤之前富集从宿主获得的细胞群来分离单一B细胞的方法，所述筛选步骤例如从细胞群筛选特定B细胞和/或筛选由特定细胞产生的抗体。富集步骤可以作为一个、两个、三个或更多个步骤进行。在一个实施方案中，单一B细胞在证实单一B细胞是否分泌具有抗原特异性和/或预期性质的抗体之前从富集的细胞群分离。
在一个实施方案中，富集细胞群的方法在用于抗体产生和/或分泌的方法中使用。因此，本发明提供了一种包括在筛选抗体之前富集细胞群的方法。该方法可以包括如下步骤：制备包括至少一种抗原特异性细胞的细胞群，通过分离至少一种抗原特异性细胞来富集细胞群以形成富集的细胞群，和诱导从至少一种抗原特异性细胞产生抗体。在一个实施方案中，富集的细胞群含有超过一种抗原特异性细胞。在一个实施方案中，富集的细胞群的每个抗原特异性细胞在从中分离抗体生成细胞和/或使用所述B细胞产生抗体或对应于此类抗体的核酸序列之前在产生克隆抗原特异性B细胞群的条件下培养。与现有技术不同，当抗体从具有低频率的抗原特异性细胞的细胞群产生时，本发明允许抗体从高频率的抗原特异性细胞中筛选。因为富集步骤在抗体筛选之前使用，用于抗体生成的细胞的大部分，优选实际上所有细胞，是抗原特异性的。通过从具有增加的抗原特异性频率的细胞群产生抗体，增加了抗体的数量和种类。
在本发明的抗体筛选方法中，抗体优选地在富集步骤和培养步骤之后选择，富集步骤和培养步骤产生抗原特异性B细胞的克隆群体。所述方法还可以包括测序从一种或多种分离的抗原特异性细胞筛选的抗体或其部分的步骤。本领域已知的用于测序的任何方法可以被采用并且可以包括测序重链、轻链、可变区和/或互补决定区(CDR)。
除了富集步骤，用于抗体筛选的方法还可以包括根据抗原识别和/或抗体功能性而筛选细胞群的一个或多个步骤。例如，预期抗体可以具有特定的结构特征，例如与特定结构的特定表位或拟态结合；拮抗剂或激动剂活性；或中和活性，例如抑制抗原与配体之间的结合。在一个实施方案中，抗体功能性筛选是配体依赖性的。抗体功能性的筛选包括但不限于体外蛋白-蛋白相互作用分析，其再现了抗原配体与重组受体蛋白的天然相互作用；和基于细胞的应答，其是配体依赖性的且易于监测(例如，增殖应答)。在一个实施方案中，抗体筛选方法包括根据抗体功能性筛选细胞群的步骤，通过测量抑制浓度(IC50)。在一个实施方案中，至少一种分离的抗原特异性细胞产生具有低于约100、50、30、25、10μg/mL或其中增量的IC50的抗体。
除了富集步骤以外，用于抗体筛选的方法还可以包括根据抗体结合强度筛选细胞群的一个或多个步骤。抗体结合强度可以通过本领域已知的任何方法(例如,BiacoreTM)测量。在一个实施方案中，至少一种分离的抗原特异性细胞产生具有高抗原亲和力的抗体，例如解离常数(Kd)小于约5x10-10M-1、优选约1x10-13至5x10-10、1x10-12至1x10-10、1x10-12至7.5x10-11、1x10-11至2x10-11、约1.5x10-11或更小、或其中增量。在该实施方案中，抗体被称为亲和力成熟的。在一个实施方案中，抗体的亲和力相当于或高于下述任何一个的亲和力：Panorex
Figure BDA00001909859701281
(依决洛单抗)、Rituxan(利妥昔单抗)、Herceptin
Figure BDA00001909859701283
(曲司珠单抗)、Mylotarg(吉妥珠单抗)、Campath
Figure BDA00001909859701285
(阿伦单抗)、ZevalinTM(替伊莫单抗)、ErbituxTM(西妥昔单抗)、AvastinTM(贝伐单抗)、RaptivaTM(依法珠单抗)、Remicade
Figure BDA00001909859701286
(英夫利西单抗)、HumiraTM(阿达木单抗)和XolairTM(奥马珠单抗)。优选地，抗体亲和力相当于或大于HumiraTM的亲和力。抗体亲和力还可以通过已知的亲和力成熟技术来提高。在一个实施方案中，至少一个细胞群根据抗体功能性和抗体结合强度之一、优选两者来筛选。
除了富集步骤，抗体筛选方法还可以包括根据序列同源性、特别是人同源性来筛选细胞群的一个或多个步骤。在一个实施方案中，至少一种分离的抗原特异性细胞产生与人抗体具有约50%至约100%或其中增量的同源性或大于约60%、70%、80%、85%、90%或95%同源性的抗体。抗体可以通过本领域已知技术被人源化以增加与人序列的同源性，所述技术例如CDR移植或选择性决定残基移植(SDR)。
在另一个实施方案中，本发明还提供就IC50、Kd和/或同源性而描述的上述实施方案任何一个的抗体本身。
本文公开的B细胞选择方案相对于用于获得抗体分泌B细胞和对预期靶抗原具有特异性的单克隆抗体的其它方法具有许多内在优点。这些优点包括但不限于以下：
首先，已经发现，当这些选择程序用于预期抗原例如IL-6或TNF-α时，所述方法可重复产生能够生成似乎是抗体的基本上全面互补体(即结合各种不同抗原表位的抗体)的抗体的抗原特异性B细胞。不限于理论，假设全面互补体归因于在初始B细胞回收之前进行的抗原富集步骤。而且，该优点允许分离和筛选具有不同性质的抗体，因为这些性质可以根据特定抗体的表位特异性而变化。
其次，已经发现，B细胞选择方案可重复产生含有单一B细胞或其后代的克隆B细胞培养物，分泌一般以相对高的结合亲和力(即皮摩尔或更好的抗原结合亲和力)结合预期抗原的单一单克隆抗体。相反，之前的抗体筛选方法趋于产生相对少的高亲和力抗体，因此需要深入的筛选程序来分离具有治疗潜力的抗体。不受理论束缚，假设方案导致宿主的体内B细胞免疫(初次免疫)，随后又一次体外B细胞刺激(第二次抗原引发步骤)，其可以增强回收的克隆B细胞分泌拮抗原靶特异性的单一高亲和力单克隆抗体的能力和倾向。
第三，已经观察到(如本文对IL-6特异性B细胞所示)，B细胞选择方案可重复产生生成IgG的富集的B细胞，其平均来说是对预期靶高度选择性的(抗原特异性的)。通过这些方法回收的抗原富集的B细胞被认为含有能够产生如上所示表位特异性的预期完全互补体的B细胞。
第四，已经观察到，B细胞选择方案即使用于小抗原(即，100个氨基酸或更小(例如5-50个氨基酸长)的肽时，可重复地产生分泌针对小抗原例如肽的单一高度亲和力抗体的克隆B细胞培养物。这是非常令人惊讶的，因为这一般是非常困难、耗费人力的，并且有时即使可行也不会产生针对小肽的高亲和力的抗体。相应地，本发明可用于产生针对预期肽靶(例如，病毒、细菌或自身抗原肽)的治疗性抗体，从而允许产生具有非常不同的结合性质的单克隆抗体，或者甚至产生针对不同肽靶(例如，不同病毒株)的单克隆抗体的混合物。该优点可以特别用于产生具有预期价位的治疗性或预防性疫苗的情况，例如诱导对不同HPV株的保护性免疫性的HPV疫苗。
第五，B细胞选择方案，特别是用于源于兔的B细胞时，趋于可重复地产生与内源性人免疫球蛋白非常相似(在氨基酸水平上约90%相似)且含有长度非常类似于人免疫球蛋白的CDR病因此需要很少或不需要序列修饰(通常至多仅几个CDR残基可能在亲本抗体序列中被修饰并且没有引入构架外源残基)以消除潜在的免疫原性问题的抗原特异性抗体序列。特别地，优选地，重组抗体将仅含有抗原识别和完整CDR3所需的宿主(兔)CDR1和CDR2残基。从而，根据B细胞核抗体选择方案产生的回收的抗体序列的高抗原结合亲和力保持完整或基本上完整，即使人源化。
总之，这些方法可用于产生对多种不同表位表现出较高结合亲和力的抗体，通过使用比之前已知的方案更有效的方案。
在一个具体实施方案中，本发明提供了用于鉴定分泌对预期抗原特异性并且任选地具有至少一种预期功能性(例如亲和性、亲合性、细胞毒性及类似性质)的抗体的单一B细胞的方法，通过包括下述步骤的过程：
a.用一种抗原免疫宿主；
b.从所述宿主收集B细胞；
c.富集所收集的B细胞以增加抗原特异性细胞频率；
d.产生至少一种单细胞悬液；
e.在有利于每个培养孔单一抗原特异性B细胞存活的条件下培养来自单细胞悬液的亚群；
f.从所述亚群分离B细胞；和
g.确定单一B细胞是否产生拮抗原特异性的抗体。
通常，这些方法将进一步包括分离和全部或部分测序多肽和编码预期抗体的核酸序列的其它步骤。这些序列或其修饰形式或部分可以在预期宿主细胞中表达以产生对预期抗原的重组抗体。
如前所述，认为B细胞的克隆群主要包括产生针对预期抗原的抗体的抗体分泌B细胞。基于使用集中抗原和不同B细胞群获得的实验结果，还认为克隆产生的B细胞和根据本发明产生的从其衍生的分离的抗原特异性B细胞分泌单克隆抗体，与从培养的抗原特异性B细胞衍生单克隆抗体的其它方法相比，所述单克隆抗体通常具有相对高的亲和力，并且能够有效且可重复地产生更大表位差异性的单克隆抗体筛选。在一个示例性实施方案中，用于此类B细胞筛选方法的免疫细胞群将来自兔。然而，产生抗体的其它宿主，包括非人和人宿主，可以可选地用作免疫B细胞来源。认为，使用兔作为B细胞来源可以增强可以通过所述方法衍生的单克隆抗体的多样性。而且，根据本发明源于兔的抗体序列通常具有与人抗体序列具有高度序列同一性的序列，使它们利于用于人，因为它们应该具有很小的抗原性。在人源化过程中，最终的人源化抗体含有低得多的外来/宿主残基含量，通常限于宿主CDR残基亚组，由于其性质而显著不同于移植中使用的人靶序列。这增强了人源化抗体蛋白中的完全活性回收的可能性。
使用本文公开的富集步骤的抗体筛选方法包括从免疫的宿主获得含有免疫细胞的细胞群的步骤。从免疫的宿主获得含有免疫细胞的细胞群的方法是本领域已知的，并且一般包括在宿主中有道免疫应答并从宿主收集细胞以获得一种或多种细胞群。应答可以通过用预期抗原免疫宿主来引发。可选地，用作此类免疫细胞来源的宿主可以天然暴露于预期抗原，例如乙腈感染了特定病原体例如细菌或病毒的个体或者可选地已经产生针对个体罹患的癌症的特异性抗体应答的个体。
宿主动物是本领域公知的并且包括但不限于荷兰猪、兔、小鼠、大鼠、非人灵长类、人以及其它哺乳动物和啮齿类动物、鸡、奶牛、猪、山羊和绵羊。优选地，宿主是哺乳动物，更优选是兔、小鼠、大鼠或人。当暴露于抗原时，宿主产生抗体作为拮抗原的天然免疫应答的一部分。如所述的，免疫应答可以由于疾病而天然发生，或者其可以通过用抗原免疫而被引发。免疫可以通过本领域已知的任何方法进行，例如通过一次或多次注射抗原，使用或不使用免疫应答增强剂，例如完全或不完全的弗氏佐剂。在另一个实施方案中，本发明还涵盖脾内免疫。作为体内免疫宿主动物的可选方案，本方法可以包括在体外免疫宿主细胞培养物。
在经过免疫应答的时间后(例如，通过血清抗体检测来测量)，收集宿主动物细胞以获得一种或多种细胞群体。在一个实施方案中，根据抗体结合强度和/或抗体功能性来筛选收集的细胞群体。收集的细胞群体优选来自脾、淋巴结、骨髓和/或外周血液单核细胞(PBMC)中的至少一个。细胞可以从超过一种来源和血液收集。某些来源可能对于某些抗原是优选的。例如，脾、淋巴结核PBMC对于IL-6是优选的；并且淋巴结对于TNF是优选的。在免疫后约20至约90天或其中增量、优选约50至约60天收集细胞群。收集的细胞群和/或来自其的单细胞悬液可以被富集、筛选和/或培养用于抗体筛选。收集的细胞群中的抗原特异性细胞的频率通常为约1%至约5%或其中增量。
在一个实施方案中，来自收集的细胞群的单细胞悬液被富集，优选通过使用Miltenyi珠。从具有约1%至约5%的抗原特异性细胞的频率的收集的细胞群，衍生了具有大约100%的抗原特异性细胞频率的富集的细胞群。
使用富集步骤的抗体筛选方法包括从来自富集的细胞群的至少一种抗原特异性细胞产生抗体的步骤。体外产生抗体的方法是本领域公知的，并且可以采用任何适合的方法。在一个实施方案中，富集的细胞群，例如来自收集的细胞群的抗原特异性单细胞悬液以各种细胞密度铺板，例如每孔50、100、250、500或1至1000个细胞之间的其它增量。优选地，亚群包括不超过约10,000个抗原特异性抗体分泌细胞，更优选约50-10,000、约50-5,000、约50-1,000、约50-500、约50-250抗原特异性抗体分泌细胞或其中增量。然后，这些亚群与用适当的培养基(例如活化T细胞条件培养基，特别是1-5%活化兔T细胞条件培养基)在滋养层上培养，优选地在有利于每个培养孔的单一增殖性抗体分泌细胞的存活的条件下。滋养层一般包括受辐射的细胞物质，例如EL4B细胞，不构成细胞群的部分。细胞在适当的培养基中培养持续足够抗体产生的时间，例如约1天至约2周、约1天至约10天、至少约3天、约3至约5天、约5天至约7天、至少约7天或其中的其它增量。在一个实施方案中，超过一个亚群被同时培养。优选地，单一抗体生成细胞及其后代在每个孔中存活，从而在每个孔中提供了抗原特异性B细胞的克隆群。在此阶段，克隆群产生的免疫球蛋白G(IgG)与抗原特异性高度相关。在一个实施方案中，IgG表现出具有大于约50%、更优选大于70%、85%、90%、95%、99%或其中增量的抗原特异性的相关性。参见图3，图3说明了IL-6的示例性相关性。该相关性通过在限制性条件下建立B细胞培养物以建立每孔的单一抗原特异性抗体产物而得到证明。比较了抗原特异性与一般性IgG合成。观察到三个群体：识别单一形式抗原(生物素酰化的和直接涂布)的IgG，可检测IgG和抗原识别而不论固定化，和单独的IgG生成。IgG生成与抗原特异性高度相关。
任选地收集含有抗体的上清液，其可以被富集、筛选和.或培养以根据本文所述步骤进行抗体筛选。在一个实施方案中，根据抗体功能性富集(优选通过抗原特异性分析，特别是ELISA测定)和/或筛选。
在另一个实施方案中，从中任选收集上述上清液以监测预期分泌单克隆抗体存在的富集的、优选克隆的抗原特异性B细胞群被用于分离几种B细胞，优选单一B细胞，其然后在适当的分析中测试以确认克隆的B细胞群中单一抗体生成B细胞的存在。在一个实施方案中，约1至约20个细胞从克隆B细胞群中分离，优选少于约15、12、10、5或3个细胞或其中增量，最优选是单细胞。筛选优选通过抗原特异性分析、特别是晕圈测定来实现。晕圈测定可以使用全长蛋白或其片段来进行。还可以根据下述至少一个来筛选含有抗体的上清液：抗原结合亲和力；抗原配体结合的激动或拮抗，特定靶细胞类型的增殖的诱导或抑制；靶细胞裂解的诱导或抑制，和涉及抗原的生物途径的诱导或抑制。
鉴定的抗原特异性细胞可用于衍生编码预期单克隆抗体的相应的核酸序列。(AluI消化可证实在每个孔中仅生成单一单克隆抗体类型)。如上所述，这些序列可以被突变，例如通过人源化，以使它们适用于人类药物。
如所述的，用于过程的富集的B细胞群还可以被进一步富集、筛选和/或培养以根据上述步骤进行抗体筛选，所述步骤可以不同顺序重复或进行。在一个实施方案中，富集的、优选克隆的抗原特异性细胞群的至少一个被分离、培养并用于抗体筛选。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括：
a.从免疫的宿主收集细胞群以获得收集的细胞群；
b.从所收集的细胞群产生至少一种单细胞悬液；
c.优选通过色谱富集至少一种单细胞悬液，以形成第一富集的细胞群；
d.优选通过ELISA测定富集所述第一富集的细胞群，以形成第二富集的细胞群，其优选是克隆的，即，其仅含有单一类型的抗原特异性B细胞；
e.优选通过晕圈测定富集所述第二富集的细胞群，以形成含有单一或少数B细胞的第三富集的细胞群，所述B细胞产生特异性针对预期抗原的抗体；和
f.筛选从所述第三富集的细胞群分离的抗原特异性细胞产生的抗体。
所述方法可以进一步包括根据抗体结合强度(亲和力、亲合力)和/或抗体功能性筛选收集的细胞群的一个或多个步骤。适合的筛选步骤包括但不限于检测以下的分析方法：鉴定的抗原特异性B细胞产生的抗体是否产生具有最小抗原结合亲和力的抗体，抗体是否激动或拮抗预期抗原与配体的结合；抗体是否诱导或抑制特定细胞类型的增殖；抗体是否诱导或引发针对靶细胞的细胞溶解反应；抗体是否结合特定表位；以及抗体是否调节(抑制或激动)特定生物途径或涉及抗原的途径。
类似地，方法可以包括根据抗体结合强度和/或抗体功能性筛选第二富集细胞群的一个或多个步骤。
方法还可以包括测序多肽序列和所选抗体的相应核酸序列的步骤。方法还可以包括使用序列、其片段或所选抗体的遗传修饰形式产生重组抗体的步骤。用于诱变抗体序列以保留预期性质的方法是本领域技术人员公知，并且包括单链抗体的人源化、嵌合、产生；这些突变方法可以产生具有预期效应子功能、免疫原性、稳定性、去除或添加糖基化及类似性质的重组抗体。重组抗体可以通过任何适合重组细胞产生，包括但不限于哺乳动物细胞，例如CHO、COS、BHK、HEK-293、细菌细胞、酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞和两栖动物细胞。在一个实施方案中，抗体在多倍体酵母细胞、即二倍体酵母细胞、特别是毕赤酵母中表达。
在一个实施方案中，所述方法包括：
a.用抗原免疫宿主以产生宿主抗体；
b.根据抗原特异性和中和筛选宿主抗体；
c.从宿主收集B细胞；
d.富集所收集的B细胞以产生具有增加的抗原特异性细胞频率的富集的细胞群；
e.在有利于在至少一个培养孔中产生克隆群的单一B细胞存活的条件下培养来自富集细胞的一个或多个亚群；
f.确定克隆群是否产生拮抗原特异性的抗体；
g.分离单一B细胞；和
h.测序由单一B细胞产生的抗体的核酸序列。
人源化抗体的方法
在本发明的另一个实施方案中，提供了人源化抗体和轻链的方法。在该实施方案中，下述方法允许重链和轻链的人源化：
轻链
1.鉴定信号肽序列后面第一个氨基酸。其是构架1的起始。信号肽在第一起始甲硫氨酸处开始，并且对于兔轻链蛋白序列而言长度通常但不必须是22个氨基酸。成熟多肽的起始还可以通过N端蛋白测序实验测定，或者可以使用预测算法来预测。这也是本领域人员经典定义的构架1的起始。
实例：图2中的RbtVL氨基酸残基1，起始‘AYDM…’
2.鉴定构架3的末端。这通常是构架1起始之后95-100氨基酸，并且通常具有最后序列‘…CAR’(尽管丙氨酸也可以是缬氨酸)。这是本领域人员经典定义的构架3的末端。
实例：图2中的RbtVL氨基酸残基88，结束为‘TYYC’
3.使用从构架1始端开始到如上定义的构架3末端的多肽的兔轻链序列并进行序列同源性检索以寻求最相似的人抗体蛋白序列。这通常是在抗体成熟之前针对人种系序列的检索，以减少免疫原性的可能性，然而可以使用任何人序列。通常，可以使用如BLAST的程序来检索序列数据库以寻求最大同源性。人抗体序列的数据库可以来自各种来源，例如NCBI(National Center for Biotechnology Information)。
实例：图2中编号1至88的残基的RbtVL氨基酸序列针对人抗体种系数据库被BLAST。前三个独特的返回序列显示于图2，为L12A、V1和Vx02。
4.一般，最同源的人种系可变轻链序列则被用作人源化的基础。然而，本领域技术人员可以决定使用不是同源性算法所确定的最高同源性的另一种序列，基于包括序列空位和构架相似性在内的其它因素。
实例：图2中，L12A是最同源的人种系可变轻链序列，并且用作RbtVL人源化的基础。
5.确定被用于轻链人源化的人同系物的构架和CDR排列(FR1,FR2,FR3,CDR1 & CDR2)。这使用本领域描述的传统布局。比对兔可变轻链序列与人同系物，同时保持构架和CDR区的布局。
实例：图2中，RbtVL序列与人同源序列L12A比对，构架和CDR结构域被标明。
6.用兔序列的CDR1和CDR2序列取代人同源轻链序列CDR1和CDR2区。如果兔和人CDR序列之间存在长度差异，则使用完整的兔CDR序列及其长度。如果进行更小或更大的序列交换，或者如果特定残基被改变，得到的人源化抗体的特异性、亲和力和/或免疫原性可能未被改变，不管怎样，所述交换已经被成功使用，但是不排除可以允许其它交换的可能性。
实例：图2中，人同源可变轻链L12A的CDR1和CDR2氨基酸残基被来自RbtVL兔抗体轻链序列的CDR1和CDR2氨基酸序列取代。人L12A构架1、2和3未被改变。得到的人源化序列如下显示为编号1至88残基的VLh。注意，仅不同于L12A人序列的残基被加下划线，并且因此是兔来源的氨基酸残基。在该实例中，88个残基中仅8个不同于人序列。
7.在步骤6中产生的新杂合序列的构架3之后，连接兔轻链抗体序列的完整CDR3。CDR3序列可以具有各种长度，但是长度通常为9至15个氨基酸残基。CDR3区和之后构架4的始端被本领域技术人员经典定义并且可由本领域技术人员鉴定。通常构架4的始端到CDR3的末端由序列‘FGGG…’组成，然而这些残基中可以存在一些变化。
实例：图2中，RbtVL的CDR3(氨基酸残基编号89-100)被添加在VLh所示人源化序列中构架3的末端之后。
8.兔轻链构架4通常是可变轻链的最后11个氨基酸残基并如上步骤7所示开始并通常以氨基酸序列‘…VVKR’结束，被通常来自种系序列的最接近的人轻链构架4同系物取代。通常，该人轻链构架4具有序列‘FGGGTKVEIKR’。不是最同源或以其它方式不同的其它人轻链构架4序列可以被使用而不影响得到的人源化抗体的特异性、亲和力和/或免疫原性。该人轻链构架4序列被添加至可变轻链人源化序列末端，紧接着上述步骤7的CDR3序列。这是目前可变轻链人源化氨基酸序列的末端。
实例：图2中，RbtVL兔轻链序列的构架4(FR4)显示在同源人FR4序列之上。人FR4序列被添加至人源化可变轻链序列(VLh)，就在上述步骤7中添加的CD3区末端之后。
此外，图34和35描述了自根据本发明Ab1中可变重链和轻链区人源化的优选人源化抗IL-6可变重链和轻链序列。这些人源化轻链和重链区分别包含在SEQ ID NO:647或651及SEQ ID NO:652、656、657或658中含有的多肽中。SEQ ID NO:657(CDR2中含有丝氨酸取代)中人源化可变重链区的CDR2包含在SEQ ID NO:658。展示轻链和重链的变体的比对分别如图36和37所示，CDR区内的序列差异被突出显示。上文表1总结了CDR序列和示例性编码序列的序列标示符。
重链
1.鉴定信号肽序列后面第一个氨基酸。其是构架1的起始。信号肽在第一起始甲硫氨酸处开始，并且对于兔重链蛋白序列而言长度通常是19个氨基酸。通常但不必总是，兔重链信号肽的最后3个氨基酸残基是‘…VQC’，随后是构架1的起始。成熟多肽的起始还可以通过N端蛋白测序实验测定，或者可以使用预测算法来预测。这也是本领域人员经典定义的构架1的起始。
实例：图2中的RbtVH氨基酸残基1，起始‘QEQL…’
2.鉴定构架3的末端。这通常是构架1起始之后86-90氨基酸，并且通常是半胱氨酸残基，之前有两个酪氨酸残基。这是本领域人员经典定义的构架3的末端。
实例：图2中的RbtVH氨基酸残基98，结束为‘…FCVR’
3.使用从构架1始端开始到如上定义的构架3末端的多肽的兔重链序列并进行序列同源性检索以寻求最相似的人抗体蛋白序列。这通常是在抗体成熟之前针对人种系序列的检索，以减少免疫原性的可能性，然而可以使用任何人序列。通常，可以使用如BLAST的程序来检索序列数据库以寻求最大同源性。人抗体序列的数据库可以来自各种来源，例如NCBI(National Center for Biotechnology Information)。
实例：图2中编号1至98的残基的RbtVH氨基酸序列针对人抗体种系数据库被BLAST。前三个独特的返回序列显示于图2，为3-64-04、3-66-04和3-53-02。
4.一般，最同源的人种系可变重链序列则被用作人源化的基础。然而，本领域技术人员可以决定使用不是同源性算法所确定的最高同源性的另一种序列，基于包括序列空位和构架相似性在内的其它因素。
实例：图2中，3-64-04是最同源的人种系可变重链序列，并且用作RbtVH人源化的基础。
5.确定被用于重链人源化的人同系物的构架和CDR排列(FR1,FR2,FR3,CDR1 & CDR2)。这使用本领域描述的传统布局。比对兔可变重链序列与人同系物，同时保持构架和CDR区的布局。
实例：图2中，RbtVH序列与人同源序列3-64-04比对，构架和CDR结构域被标明。
6.用兔序列的CDR1和CDR2序列取代人同源重链序列CDR1和CDR2区。如果兔和人CDR序列之间存在长度差异，则使用完整的兔CDR序列及其长度。此外，可能有必要用兔重链构架1的最后三个氨基酸取代人重链构架1区的最后三个氨基酸。通常但不总是，在兔重链构架1中，这三个残基在甘氨酸之后，之前是丝氨酸残基。此外，可能有必要用兔重链构架2的最后氨基酸取代人重链构架2区的最后氨基酸。通常但不总是，在兔重链构架2中，在甘氨酸残基之前是异亮氨酸残基。如果进行更小或更大的序列交换，或者如果特定残基被改变，得到的人源化抗体的特异性、亲和力和/或免疫原性可能未被改变，不管怎样，所述交换已经被成功使用，但是不排除可以允许其它交换的可能性。例如，色氨酸残基通常在兔重链CDR2区末端之前存在四个残基，而在人重链CDR2中，该残基通常是丝氨酸残基。将该兔色氨酸残基改变为该位置的人丝氨酸残基已经被证明对人源化抗体的特异性或亲和力具有最小影响或无影响，并因此进一步减少人源化序列中兔序列来源的氨基酸残基的含量。
实例：图2中，人同源可变重链的CDR1和CDR2氨基酸残基被来自RbtVH兔抗体轻链序列的CDR1和CDR2氨基酸序列取代，除了盒残基，其在兔序列中是色氨酸(位置编号63)而在人序列中相同位置是丝氨酸，并且保持为人丝氨酸残基。除了CDR1和CDR2改变，构架1的最后三个氨基酸(位置28-30)以及构架2的最后残基(位置49)被保留为兔氨基酸残基而不是人的。得到的人源化序列如下显示为编号1至98残基的VHh。注意，仅不同于3-64-04人序列的残基被加下划线，并且因此是兔来源的氨基酸残基。在该实例中，98个残基中仅15个不同于人序列。
7.在步骤6中产生的新杂合序列的构架3之后，连接兔重链抗体序列的完整CDR3。CDR3序列可以具有各种长度，但是长度通常为5至19个氨基酸残基。CDR3区和之后构架4的始端被本领域技术人员经典定义并且可由本领域技术人员鉴定。通常构架4的始端到CDR3的末端由序列WGXG…(其中X通常是Q或P)组成，然而这些残基中可以存在一些变化。
实例：RbtVH的CDR3(氨基酸残基编号99-110)被添加在VHh所示人源化序列中构架3的末端之后。
8.兔重链构架4通常是可变重链的最后11个氨基酸残基并如上步骤7所示开始并通常以氨基酸序列‘…TVSS’结束，被通常来自种系序列的最接近的人重链构架4同系物取代。通常，该人重链构架4具有序列‘WGQGTLVTVSS’。不是最同源或以其它方式不同的其它人重链构架4序列可能被使用而不影响得到的人源化抗体的特异性、亲和力和/或免疫原性。该人重链构架4序列被添加至可变重链人源化序列末端，紧接着上述步骤7的CDR3序列。这是目前可变重链人源化氨基酸序列的末端。
实例：图2中，RbtVH兔重链序列的构架4(FR4)显示在同源人重链FR4序列之上。人FR4序列被添加至人源化可变重链序列(VHh)，就在上述步骤7中添加的CD3区末端之后。
产生抗体及其片段的方法
本发明还涉及产生本文所述抗体或其片段。对应于本文所述抗体或其片段的重组多肽从交配活性酵母的多倍体、优选二倍体或四倍体株分泌。在一个示例性实施方案中，本发明涉及用于使用包括多倍体酵母的培养物长期产生分泌形式的这些重组多肽的方法，即，至少几天至一周、更优选至少一个月或几个月和甚至更优选至少6个月至一年或更长。这些多倍体酵母培养物将表达至少10-25mg/升的多肽、更优选至少50-250mg/升、更优选至少500-1000mg/升和最优选1克/升或更多的重组多肽。
在本发明的一个实施方案中，一对遗传标记的酵母单倍体细胞用包含所需异多聚体蛋白亚基的表达载体转化。一个单倍体细胞包括第一表达载体，第二单倍体细胞包括第二表达载体。在另一个实施方案中，二倍体酵母细胞用一个或多个表达载体转化，所述表达载体提供一种或多种重组多肽的表达盒分泌。在另一个实施方案中，单个单倍体细胞可以用一种或多种载体转化并用于通过融合或交配策略产生多倍体酵母。在另一个实施方案中，二倍体酵母培养物可以用一种或多种载体转化，提供所需多肽的表达和分泌。这些载体可以包括随机整合入酵母细胞基因组的载体，例如线性质粒或其它线性DNA产物，通过同源重组或使用诸如Cre/Lox或Flp/Frt的重组酶。任选地，其它表达载体可以被引入单倍体或二倍体细胞；或第一或第二表达载体可以包括其它编码序列；用于异三聚体；异四聚体等等的合成。不相同多肽的表达水平可以被单独校准，并且通过适当筛选、载体拷贝数、启动子强度和/或诱导及类似物来调节。转化的单倍体细胞基因杂交或融合的。得到的二倍体或四倍体株被用于产生和分泌完全组装和生物功能蛋白、本文所述的人源化抗体或其片段。
使用二倍体或四倍体细胞产生抗体提供了意想不到的益处。细胞可以为生产目的(即，放大)在可能对蛋白体细胞生长有害的条件下生长延长的时段，所述条件可以包括高细胞密度；基本培养基中生长；低温下生长；缺乏选择性压力下稳定生长；并且可以提供异源基因序列完整性的保持和高水平表达随时间的保持。不希望受束缚，本发明推理这些益处可以至少部分源于从两个不同的亲本单倍体株产生二倍体株。此类单倍体株可以包括许多次要的自养型突变，所述突变在二倍体或四倍体中互补，使得能够在高选择性条件下生长和提高的生产。
转化的交配活性单倍体酵母细胞提供了能够实现所需蛋白亚基配对的遗传方法。单倍体酵母株被两个表达载体的每一个所转化，第一载体指导一个多肽链的合成，而第二载体指导第二个不相同的多肽链的合成。两个单倍体株被交配以提供其中可以获得优化的靶蛋白生产的二倍体宿主。
任选地，提供了其它不相同的编码序列。此类序列可以存在于其它表达载体上或第一或第二表达载体中。如本领域已知的，多个编码序列可以从个体启动子独立表达；或者可以通过加入“内核糖体进入位点”或“IRES”而协同表达，“内核糖体进入位点”或“IRES”是促进直接内核糖体进入顺反子(蛋白编码区)的起始密码子例如ATG的元件，从而导致基因的帽独立性翻译。酵母中功能性的IRES元件描述于Thompson等.(2001)P.N.A.S.98:12866-12868。
在本发明的一个实施方案中，抗体序列与分泌型J链组合产生，提供了增强的IgA稳定性(参见美国专利第5,959,177号；和第5,202,422号)。
在一个优选实施方案中，两个单倍体酵母株各自是营养缺陷型的，并且需要补充单倍体细胞生长培养基。成对的营养缺陷体是互补的，使得二倍体产物将在单倍体细胞所必需的补充物缺乏下生长。许多此类遗传标记是酵母中已知的，包括对氨基酸(例如met,lys,his,arg等)、核苷(例如ura3,ade1,等)及类似物的需求。氨基酸标记可以是本发明方法所优选的。可选地，含有所需载体的二倍体细胞可以通过其它方式筛选，例如通过使用其它标记，例如绿色荧光蛋白、抗生素抗性基因、各种显性选择标记及类似物。
两个转化的单倍体细胞可以基因杂交，从该交配时间产生的二倍体株通过其杂交营养要求和/或抗生素抗性谱来筛选。可选地，两个转化的单倍体株的群体被原生质体化并融合，再生并筛选二倍体后代。通过任一方法，二倍体株可以被鉴定并选择性生长，基于其在不同于其亲本的培养基中生长的能力。例如，二倍体细胞可以在可以包括抗生素的基本培养基中生长。二倍体合成策略具有某些优势。通过对可以影响重组蛋白的产生和/或分泌的潜在突变的更宽泛的互补，二倍体株具有产生提高水平的异源蛋白的潜力。而且，已经获得了一个稳定株，用于筛选那些株的任何抗生素不必组成型地存在于生长培养基中。
如上所述，在一些实施方案中，单倍体酵母可以用单个或多个载体转化并与未转化的细胞交配或融合以产生含有所述载体的二倍体细胞。在其它实施方案中，二倍体酵母细胞可以用一个或多个载体转化，提供所需异源多肽被二倍体酵母细胞表达和分泌。
在本发明的一个实施方案中，两个单倍体株用多肽文库转化，例如抗体重链或轻链文库。合成多肽的转化的单倍体细胞与互补的单倍体细胞交配。根据功能蛋白筛选得到的二倍体细胞。二倍体细胞提供了快速、方便且便宜地联合大量多肽组合进行功能测试的方式。该技术特别适用于产生异二聚体蛋白产物，其中优化的亚基合成水平对于功能性蛋白表达和分泌是关键的。
在本发明的另一个实施方案中，两个亚基的表达水平比被调节以最大化产物生成。之前已经显示异二聚体亚基蛋白水平影响最终的产物生成(Simmons LC,J Immunol Methods.2002 May1;263(1-2):133-47)。调节可以在交配步骤之前通过筛选表达载体上存在的标记来实现。通过稳定增加载体的拷贝数，表达水平可以被增加。在一些情况下，可能希望增加一条链相对于另一条链的水平，以达到多肽亚基之间的平衡比例。抗生素抗性标记用于该目的，例如ZeocinTM(腐草霉素)抗性标记、G418抗性等，并且提供含有一个株中多个整合拷贝的表达载体的株的富集，通过筛选对较高水平的ZeocinTM(腐草霉素)或G418的抗性的转化子。亚基基因的适当的比例例如1:1、1:2等可能对于有效蛋白生成是重要的。即使当使用相同启动子描述两个亚基时，许多其它因素影响表达蛋白的最终水平，因此，增加一个编码基因相对于另一个编码基因的拷贝数可能是有用的。可选地，相对于单一拷贝载体株产生较高水平多肽的二倍体株通过交配两个单倍体株产生，两者具有多个拷贝的表达载体。
宿主细胞用上述表达载体转化，交配以形成二倍体株，并在被调节为适合诱导启动子、筛选转化子或扩增编码所需序列的基因的常规营养培养基中培养。适合酵母生长的许多基本培养基是本领域已知的。这些培养基的任何一个可以补充必需的盐(例如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲液(例如磷酸盐、HEPES)、核苷(例如腺苷和胸苷)、抗生素、痕量元素和葡萄糖或等同的能量源。任何其它必需补充物可以本领域技术人员已知的适当浓度被包括。培养条件例如温度、pH及类似条件是之前用于筛选表达的宿主细胞的那些，并且对于普通技术人员而言是明显的。
分泌的蛋白从培养基中回收。蛋白酶抑制剂例如苯甲基磺酰氯(PMSF)可用于抑制纯化过程中的蛋白降解，并且抗生素可以被包括以防止偶发污染物的生长。组合物可以被浓缩、过滤、透析等，使用本领域已知的方法。
本发明的二倍体细胞为生产目的被培养。此类生产目的预期包括在基本培养基中生长，所述培养基缺乏预先形成的氨基酸和其它复合生物分子，例如含有氨作为氮源并含有葡萄糖作为能量和碳源并含有盐作为磷酸盐、钙等的来源的培养基。优选地，此类生产培养基缺乏选择剂，例如抗生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。二倍体细胞可以生长至高细胞密度，例如至少约50g/L；更通常至少约100g/L；并且可以是至少约300、约400、约500g/L或更多。
在本发明的一个实施方案中，用于生产目的本细胞的生长在低温下进行，所述温度可以在对数期、稳定器或两者期间降低。术语“低温”指至少约15℃、更通常至少约17℃的温度，并且可以是约20℃，并且通常不超过约25℃、更通常不超过约22℃。在本发明的另一个实施方案中，低温通常不超过约28℃。生长温度可以影响全长分泌蛋白在生产培养基中的生产，并且降低培养物生长温度可以强力提高完整产物的产量。降低的温度似乎帮助经由宿主产生靶产物使用的折叠和翻译后加工途径的细胞内运输以及减少细胞蛋白酶降解。
本发明方法提供了分泌的活性蛋白、优选哺乳动物蛋白的表达。在一个实施方案中，本文使用的分泌的“活性抗体”指至少两个适当配对链的正确折叠的多聚体，其正确结合其同源抗原。活性蛋白的表达水平通常为至少约10-50mg/升培养物、更通常至少约100mg/升、优选至少约500mg/升，并且可以是1000mg/升或更多。
本发明方法可以提供在生产过程中增加的宿主和异源编码序列的稳定性。稳定性通过例如保持高水平的表达水平来证明，其中起始表达水平经约20倍增、50倍增、100倍增或更多倍增时降低不超过约20%、通常不超过10%并且可以降低不超过约5%。
株稳定性还提供异源基因序列完整性随时间的保持，其中活性编码序列和必需的转录调控元件的序列在经约20倍增、50倍增、100倍增或更多倍增时保持在至少约99%二倍体细胞、通常至少约99.9%二倍体细胞和优选至少约99.99%二倍体细胞中。优选地，基本上所有的二倍体细胞保持活性编码序列和必需的转录调节元件的序列。
产生抗体的其它方法是本领域普通技术人员公知的。例如，产生嵌合抗体的方法目前是本领域公知的(参见例如美国专利第4,816,567号，Cabilly等.；Morrison等.,P.N.A.S.USA,81:8651-55(1984)；Neuberger,M.S.等.,Nature,314:268-270(1985)；Boulianne,G.L.等.,Nature,312:643-46(1984)，其每一个的公开内容在此通过引用整体并入)。
类似地，产生人源化抗体的其它方法目前是本领域公知的(参见例如美国专利第5,530,101号、第5,585,089号、第5,693,762号和第6,180,370号，Queen等；美国专利第5,225,539号和第6,548,640号，Winter；美国专利第6,054,297号、第6,407,213号和第6,639,055号，Carter等；美国专利第6,632,927号，Adair；Jones,P.T.等,Nature,321:522-525(1986)；Reichmann,L.,等,Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen,M,等,Science,239:1534-36(1988)，其每一个的公开内容在此通过引用整体并入)。
具有IL-6结合特异性的本发明抗体多肽还可以通过使用本领域普通技术人员公知的常规技术构建含有操作子和编码抗体重链的DNA序列的表达载体来产生，其中编码抗体特异性所需的CDR的DNA序列源于非人细胞来源，优选地兔B细胞来源，而编码抗体链剩余部分的DNA序列源于人细胞来源。
第二表达载体使用本领域普通技术人员公知的相同的常规方式、含有操作子和编码抗体轻链的DNA序列的所述表达载体产生，其中编码抗体特异性所需的CDR的DNA序列源于非人细胞来源，优选地兔B细胞来源，而编码抗体链剩余部分的DNA序列源于人细胞来源。
表达载体通过本领域普通技术人员公知的常规技术被转染进入宿主细胞，以产生转染的宿主细胞，所述转染的宿主细胞通过本领域普通技术人员公知的常规技术培养以产生所述抗体多肽。
宿主细胞可以用上述两种表达载体共转染，含有编码操作子和轻链衍生多肽的DNA的第一表达载体和含有编码操作子和重链衍生多肽的DNA的第二载体。两种载体含有不同的选择标记，但是优选地实现基本上相等的重链和轻链多肽的表达。可选地，单一载体可以被使用，包括编码重链和轻链多肽两者的DNA的载体。重链和轻链的编码序列可以包括cDNA。
用于表达抗体多肽的宿主细胞可以是细菌细胞例如大肠杆菌或真核细胞。在本发明一个特别优选的实施方案中，用于该目的的确定类型的哺乳动物细胞例如骨髓瘤细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系可以被使用。
载体可以被构建的一般方法、产生宿主细胞所需的转染方法以及从所述宿主细胞产生抗体多肽所需的培养方法都包括常规技术。尽管优选地，用于产生抗体的细胞系是哺乳动物细胞系，但是任何其它适合的细胞系例如细菌细胞系例如大肠杆菌衍生的细菌株或酵母细胞系可以替代地使用。
类似地，一旦产生，抗体多肽可以根据本领域标准程序纯化，例如交叉流过滤、硫酸铵沉淀、亲和柱层析和类似程序。
本文描述的抗体多肽还可用于将用于与本发明抗体多肽相同的治疗应用的肽或非肽模拟物的设计和合成。参见例如Saragobi等,Science,253:792-795(1991),其内容在此通过引用整体并入。
重链和轻链多肽和多核苷酸的示例性实施方案
这部分引用了重链和轻链多肽的示例性实施方案，以及编码此类多肽的示例性多核苷酸。这些示例性多核苷酸适合在公开的毕赤酵母表达系统中表达。
在某些实施方案中，本发明涵盖与本申请所述多核苷酸具有至少70%例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同一性的多核苷酸或者编码本申请所述多肽的多核苷酸，或者在低严格度、中严格度或高严格度条件下与所述多核苷酸杂交的多核苷酸，优选编码具有至少一种本文所述生物活性的多肽(例如免疫球蛋白重链和轻链、单链抗体、抗体片段等)的那些，所述生物活性包括但不限于特异性结合IL-6多肽。在另一方面，本发明涵盖包括此类多核苷酸和/或由此类多核苷酸编码的多肽的组合物。在另一方面，本发明涵盖治疗与IL-6相关的疾病或病症或可以用IL-6拮抗剂例如Ab1预防、治疗或缓解的疾病或病症(例如，恶病质、癌症疲劳、关节炎等)的方法，其包括施用包含此类多核苷酸和/或多肽的组合物。
在某些优选实施方案中，重链多肽将包括本文所述重链和/或轻链多肽的CDR序列(包括本文所述重链和轻链多肽中含有的那些)的一个或多个以及本文所述骨架区多肽(包括图2和34-37或表1中所述的以及本文所述重链和轻链多肽序列中含有的那些)的一个或多个。在某些优选实施方案中，重链多肽将包括图2和34-37或表1中所述的或本文所述重链或轻链多肽中含有的一个或多个构架4区序列。
在某些优选实施方案中，轻链多肽将包括本文所述重链和/或轻链多肽的CDR序列(包括本文所述重链和轻链多肽中含有的那些)的一个或多个以及本文所述骨架区多肽(包括图2和34-37或表1中所述的以及本文所述重链和轻链多肽序列中含有的那些)的一个或多个。在某些优选实施方案中，轻链多肽将包括图2和34-37或表1中所述的或本文所述重链或轻链多肽中含有的一个或多个构架4区序列。
在本文所述实施方案任何一个中，除非上下文另有说明，否则某些所述序列可以相互取代。当做出特定序列可以相互取代的说明时，要理解此类说明是示例性而非限制性的，并且还要理解此类取代在即使没有说明示例性的取代实例时也被涵盖，例如，无论在哪里提到Ab1轻链多肽的一个或多个，例如SEQ ID NO:2、20、647、651、660、666、699、702、706或709的任何一个，则另一个Ab1轻链多肽可以取代，除非上下文另有说明。类似地，无论在哪里提到Ab1重链多肽之一，例如，SEQ ID NO:3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704或708的任何一个，则另一个Ab1重链多肽可以取代，除非上下文另有说明。类似地，无论在哪里提到Ab1轻链多核苷酸之一，例如SEQ ID NO:10、662、698、701或705的任何一个，则另一个Ab1轻链多核苷酸可以取代，除非上下文另有说明。类似地，无论在哪里提到Ab1重链多核苷酸之一，例如，SEQ ID NO:11、663、700、703或707的任何一个，则另一个Ab1重链多核苷酸可以取代，除非上下文另有说明。此外，任何下组的任何成员被理解为涵盖被下组的任何其它成员取代：Ab2轻链多肽(SEQ ID NO:21和667)；Ab2轻链多核苷酸(SEQ ID NO:29和669)；Ab2重链多肽(SEQ ID NO:22和668)；Ab2重链多核苷酸(SEQ ID NO:30和670)；Ab3轻链多肽(SEQ ID NO:37和671)；Ab3轻链多核苷酸(SEQ ID NO:45和673)；Ab3重链多肽(SEQ ID NO:38和672)；Ab3重链多核苷酸(SEQID NO:46和674)；Ab4轻链多肽(SEQ ID NO:53和675)；Ab4轻链多核苷酸(SEQ ID NO:61和677)；Ab4重链多肽(SEQ ID NO:54和676)；Ab4重链多核苷酸(SEQ ID NO:62和678)；Ab5轻链多肽(SEQ ID NO:69和679)；Ab5轻链多核苷酸(SEQ ID NO:77和681)；Ab5重链多肽(SEQ ID NO:70和680)；Ab5重链多核苷酸(SEQ IDNO:78和682)；Ab6轻链多肽(SEQ ID NO:85和683)；Ab6轻链多核苷酸(SEQ ID NO:93和685)；Ab6重链多肽(SEQ ID NO:86和684)；Ab6重链多核苷酸(SEQ ID NO:94和686)；Ab7轻链多肽(SEQID NO:101、119、687、693)；Ab7轻链多核苷酸(SEQ ID NO:109和689)；Ab7重链多肽(SEQ ID NO:102、117、118、688、691和692)；Ab7重链多核苷酸(SEQ ID NO:110和690)；Ab1轻链CDR1多核苷酸(SEQ ID NO:12和694)；Ab1轻链CDR3多核苷酸(SEQ IDNO:14和695)；Ab1重链CDR2多核苷酸(SEQ ID NO:16和696)和Ab1重链CDR3多核苷酸(SEQ ID NO:17和697)。
示例性Ab1编码多核苷酸序列如下所述：
SEQIDNO:662:
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT
SEQIDNO:663:
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG
SEQIDNO:698:
GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACG
SEQIDNO:700:
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC
SEQIDNO:701:
GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQIDNO:703:
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQIDNO:705:
ATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCCTTCTGTTTCTCTTTAGCAGCGCTTATTCCGCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQIDNO:707:
ATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCCTTCTGTTTCTCTTTAGCAGCGCTTATTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQIDNO:720:
ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCT
SEQIDNO:721:
GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT
SEQIDNO:722:
ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQIDNO:723:
GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGT
SEQIDNO:724:
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTG
SEQIDNO:725:
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC
筛选分析
本发明还包括被设计来辅助鉴定表现出IL-6相关疾病或病症的症状的患者中与IL-6相关的疾病和病症的筛选分析。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体被用来检测从表现出IL-6相关疾病或病症的症状的患者获得的生物样品中IL-6的存在。IL-6的存在或其与相当的生物样品中IL-6的疾病前水平相比升高的水平可能有益于诊断与IL-6相关的疾病或病症。
本发明的另一个实施方案提供了帮助诊断表现出本文鉴定的IL-6相关疾病或病症的症状的患者中表现出IL-6相关疾病或病症的诊断或筛选分析，包括使用翻译后修饰的抗IL-6抗体或其结合片段或变体分析所述患者生物样品中的IL-6表达水平。抗IL-6抗体或其结合片段或变体可以被翻译后修饰为包括诸如本公开之前提出的可检测部分。
生物样品中的IL-6水平使用本文提出的修饰的抗IL-6抗体或其结合片段或变体来测定，并且将生物样品中的IL-6水平与标准的IL-6水平(例如，正常生物样品中的水平)比较。熟练的临床医生将理解，正常生物样品之间可以存在一些差异，在评估结果时要加以考虑。
上述分析还可用于检测疾病或病症，其中据信具有IL-6相关疾病或病症的患者的生物样品中获得的IL-6水平与之前从相同患者获得的生物样品中的IL-6水平相比较，以确认所述患者的IL-6水平是否被例如治疗方案所改变。
本发明还涉及体内成像方法，其检测表达IL-6的细胞存在，包括施用诊断有效量的诊断组合物。所述体内成像用于检测和成像例如IL-6表达肿瘤或转移和IL-6表达炎症部位，并且可以用作有效的癌症或关节炎治疗方案设计的规划方案的部分。治疗方案可以包括例如一种或多种放疗、化疗、细胞因子疗法、基因疗法和抗体疗法以及抗IL-6抗体或其片段。
熟练临床医生将理解，生物样品包括但不限于血清、血浆、尿、唾液、粘液、胸膜液、滑液和髓液。
减轻或减少与IL-6相关疾病和病症的症状、或治疗或预防与IL-6相关疾病和病症的方法
在本发明的一个实施方案中，本文所述IL-6拮抗剂如Ab1用于减轻或减少与IL-6相关疾病和病症的症状、或治疗或预防与IL-6相关疾病和病症。本文描述的IL-6拮抗剂(如Ab1)还可以治疗有效量施用给需要治疗与IL-6相关疾病和病症的患者，形式为下文更详细描述的药物组合物。
在本发明的一个实施方案中，本文描述的IL-6拮抗剂(如Ab1)用于减轻或减少与升高的C反应蛋白(CRP)相关的疾病和病症的症状、或治疗或预防与升高的C反应蛋白(CRP)相关的疾病和病症。此类疾病包括表现出慢性炎症的任何疾病，例如类风湿性关节炎、少年类风湿性关节炎、银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、天疱疮、皮肌炎、多肌炎、风湿性多肌炎、巨细胞动脉炎、血管炎、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、川畸病、孤立性中枢神经系统血管炎、邱-斯二氏动脉炎、显微镜下多动脉炎、显微镜下多血管炎、亨-舍二氏紫癜、原发性冷球蛋白血症性血管炎、类风湿性血管炎、冷球蛋白血症、复发性多发软骨炎、贝西氏病、高安氏动脉炎、缺血性心脏病、中风、多发性硬化、败血症、继发于病毒感染的血管炎(例如、乙型肝炎、丙型肝炎、HIV、巨细胞病毒、EB病毒、Parvo B19病毒、等)、伯格氏病、癌症、晚期癌症、骨关节炎、全身性硬化、CREST综合征、赖特氏病、骨的佩吉特病、Sjogran综合征、1型糖尿病、2型糖尿病、家族性地中海热、自身免疫性血小板减少症、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺疾病、恶性贫血病、肉碱、斑秃、原发性胆汁性肝硬变、自身免疫性慢性活动性肝炎、酒精性肝硬变、包括乙型肝炎和丙型肝炎在内的病毒性肝炎、其它器官特异性自身免疫疾病、烧伤、特发性肺纤维变性、慢性阻塞性肺病、过敏性哮喘、其它过敏性病症或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，本文描述的IL-6拮抗剂如抗IL-6抗体(如Ab1)、其变体或其片段有用于减轻或减少与减少的血清白蛋白相关的疾病和病症的症状、或治疗或预防与减少的血清白蛋白相关的疾病和病症，所述减少的血清白蛋白相关的疾病和病症例如类风湿性关节炎、癌症、晚期癌症、肝病、肾病、炎性肠病、腹部疾病、外伤、烧伤、与减少的血清白蛋白相关的其它疾病或其任意组合。
在本发明的另一个实施方案中，本文描述的IL-6拮抗剂与另一种活性剂组合施用给患者。例如，IL-6拮抗剂如Ab1可以与一种或多种化疗剂共施用，所述化疗剂例如VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇类、依立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、甲酰四氢叶酸、类固醇、环磷酰胺、美法仑、长春花生物碱(例如、长春花碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨)、氮芥类、酪氨酸激酶抑制剂、放疗、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素(例如IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗剂、与毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠单抗、抗CD20抗体、Rituxan
Figure BDA00001909859701601
奥瑞珠单抗、奥法木单抗、DXL625、Herceptin或其任意组合。
在本发明的一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少与疲劳相关的疾病和病症的症状、或治疗或预防与疲劳相关的疾病和病症。与疲劳相关的疾病和病症包括但不限于：全身疲劳、运动性疲劳、癌症相关疲劳、纤维肌痛、炎性疾病相关疲劳和慢性疲劳综合征。参见例如Esper DH,等,The cancer cachexiasyndrome:a review of metabolic and clinical manifestations,Nutr ClinPract.,2005 Aug;20(4):369-76；Vgontzas AN,等,IL-6 and its circadiansecretion in humans,Neuroimmunomodulation,2005;12(3):131-40；Robson-Ansley,PJ,等,Acute interleukin-6 administration impairsathletic performance in healthy,trained male runners,Can J ApplPhysiol.,2004 Aug;29(4):411-8；Shephard RJ.,Cytokine responses tophysical activity,with particular reference to IL-6:sources,actions,andclinical implications,Crit Rev Immunol.,2002;22(3):165-82；Arnold,MC,等,Using an interleukin-6 challenge to evaluate neuropsychologicalperformance in chronic fatigue syndrome,Psychol Med.,2002Aug;32(6):1075-89；Kurzrock R.,The role of cytokines in cancer-relatedfatigue,Cancer,2001 Sep 15;92(6Suppl):1684-8；Nishimoto N,等,Improvement in Castleman’s disease by humanized anti-interleukin-6receptor antibody therapy,Blood,2000 Jan 1;95(1):56-61；Vgontzas AN,等,Circadian interleukin-6 secretion and quantity and depth of sleep,JClin Endocrinol Metab.,1999 Aug;84(8):2603-7；和Spath-Schwalbe E,等,Acute effects of recombinant human interleukin 6 on endocrine andcentral nervous sleep functions in healthy men,J Clin Endocrinol Metab.,1998 May;83(5):1573-9；每一个的公开内容在此通过引用整体并入。
在本发明的一个优选实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少恶病质的症状、或治疗或预防恶病质。与恶病质相关的疾病和病症包括但不限于癌症相关恶病质、心脏相关恶病质、呼吸相关恶病质、肾相关恶病质和年龄相关恶病质。参见例如,Barton,BE.,Interleukin-6 and new strategies for the treatment ofcancer,hyperproliferative diseases and paraneoplastic syndromes,ExpertOpin Ther Targets,2005 Aug;9(4):737-52；Zaki MH,等,CNTO 328,amonoclonal antibody to IL-6,inhibits human tumor-induced cachexia innude mice,Int J Cancer,2004 Sep 10;111(4):592-5；Trikha M,等,Targeted anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for cancer:areview of the rationale and clinical evidence,Clin Cancer Res.,2003 Oct15;9(13):4653-65；Lelli G,等,Treatment of the cancer anorexia-cachexiasyndrome:a critical reappraisal,J Chemothe r.,2003 Jun;15(3):220-5；Argiles JM,等,Cytokines in the pathogenesis of cancer cachexia,CurrOpin Clin Nutr Metab Care,2003 Jul;6(4):401-6；Barton BE.,IL-6-likecytokines and cancer cachexia:consequences of chronic inflammation,Immunol Res.,2001;23(1):41-58；Yamashita JI,等,Medroxyprogesteroneacetate and cancer cachexia:interleukin-6 involvement,Breast Cancer,2000;7(2):130-5；Yeh SS,等,Geriatric cachexia:the role of cytokines,Am J Clin Nutr.,1999 Aug;70(2):183-97；Strassmann G,等,Inhibition ofexperimental cancer cachexia by anti-cytokine and anti-cytokine-receptortherapy,Cytokines Mol Ther.,1995 Jun;1(2):107-13；Fujita J,等,Anti-interleukin-6 receptor antibody prevents muscle atrophy in colon-26adenocarcinoma-bearing mice with modulation of lysosomal andATP-ubiquitin-dependent proteolytic pathways,Int J Cancer，1996 Nov27;68(5):637-43；Tsujinaka T,等,Interleukin 6 receptor antibody inhibitsmuscle atrophy and modulates proteolytic systems in interleukin 6transgenic mice,J Clin Invest.,1996 Jan l;97(l):244-9；Emilie D,等,Administration of an anti-interleukin-6 monoclonal antibody to patientswith acquired immunodeficiency syndrome and lymphoma:effect onlymphoma growth and on B clinical Symptoms,Blood,1994 Oct 15;84(8):2472-9；和Strassmann G,等,Evidence for the involvement ofinterleukin 6 in experimental cancer cachexia,J Clin Invest.,1992May;89(5):1681-4；每一个的公开内容在此通过引用整体并入本文。
在本发明的另一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少自身免疫疾病和病症的症状、或治疗或预防自身免疫疾病。与自身免疫相关的疾病和病症包括但不限于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、全身性幼年特发型关节炎、银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、炎性肠病(IBD)、风湿性多肌炎、巨细胞动脉炎、自身免疫血管炎、移植物抗宿主疾病(GVHD)、Sjogren综合征、成人Still疾病。在本发明的一个优选实施方案中，本文描述的人源化抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少类风湿性关节炎和全身性幼年特发型关节炎的症状或治疗或预防类风湿性关节炎和全身性幼年特发型关节炎。参见例如,Nishimoto N.,Clinical studies in patients with Castleman’s disease,Crohn’s disease,andrheumatoid arthritis in Japan,Clin Rev Allergy Immunol.,2005Jun;28(3):221-30；Nishimoto N,等,Treatment of rheumatoid arthritiswith humanized anti-interleukin-6 receptor antibody:a multicenter,double-blind,placebo-controlled trial,Arthritis Rheum.,2004Jun;50(6):1761-9；Choy E.,Interleukin 6 receptor as a target for thetreatment of rheumatoid arthritis,Ann Rheum Dis.,2003 Nov;62 Suppl2:ii68-9；Nishimoto N,等,Toxicity,pharmacokinetics,and dose-findingstudy of repetitive treatment with the humanized anti-interleukin 6receptor antibody MRA in rheumatoid arthritis.Phase I/II clinical study,JRheumatol.,2003 Jul;30(7):1426-35；Mihara M,等,Humanized antibodyto human interleukin-6 receptor inhibits the development of collagenarthritis in cynomolgus monkeys,Clin Immunol.,2001Mar;98(3):319-26；Nishimoto N,等,Anti-interleukin 6 receptor antibodytreatment in rheumatic disease,Ann Rheum Dis.,2000 Nov;59 Suppl1:i21-7；Tackey E,等,Rationale for interleukin-6 blockade in systemiclupus erythematosus,Lupus,2004;13(5):339-43；Finck BK,等,Interleukin 6 promotes murine lupus in NZB/NZW Fl mice,J Clin Invest.,1994 Aug;94(2):585-91；Kitani A,等,Autostimulatory effects of IL-6 onexcessive B cell differentiation in patients with systemic lupuserythematosus:analysis of IL-6 production and IL-6R expression,ClinExp Immunol.,1992 Apr;88(1):75-83；Stuart RA,等,Elevated seruminterleukin-6 levels associated with active disease in systemic connectivetissue disorders,Clin Exp Rheumatol.,1995 Jan-Feb;l3(1):17-22；MiharaM,等,IL-6 receptor blockage inhibits the onset of autoimmune kidneydisease in NZB/W Fl mice,Clin Exp Immunol.,1998 Jun;12(3):397-402；Woo P，等,Open label phase II trial of single,ascending doses of MRA inCaucasian children with severe systemic juvenile idiopathic arthritis:proof of principle of the efficacy of IL-6 receptor blockade in this type ofarthritis and demonstration of prolonged clinical improvement,ArthritisRes Ther.,2005;7(6):RI281-8.Epub 2005 Sep 15；Yokota S,等,Clinicalstudy of tocilizumab in children with systemic-onset juvenile idiopathicarthritis,Clin Rev Allergy Immunol.,2005 Jun;28(3):231-8；Yokota S,等,Therapeutic efficacy of humanized recombinant anti-interleukin-6receptor antibody in children with systemic-onset juvenile idiopathicarthritis,Arthritis Rheum.,2005 Mar;52(3):818-25；de Benedetti F,等,Targeting the interleukin-6 receptor:a new treatment for systemicjuvenile idiopathic arthritis?,Arthritis Rheum.,2005 Mar;52(3):687-93；De Benedetti F,等,Is systemic juvenile rheumatoid arthritis an interleukin6 mediated disease?,J Rheumatol.,1998Feb;25(2):203-7；Ishihara K,等,IL-6 in autoimmune disease and chronic inflammatory proliferativedisease,Cytokine Growth Factor Rev.,2002 Aug-Oct;13(4-5):357-68；Gilhar A,等,In vivo effects of cytokines on psoriatic skin grafted on nudemice:involvement of the tumor necrosis factor(TNF)receptor，Clin ExpImmunol.,1996 Oct;106(1):134-42；Spadaro A,等,Interleukin-6 andsoluble interleukin-2 receptor in psoriatic arthritis:correlations withclinical and laboratory parameters,Clin Exp Rheumatol.,1996Jul-Aug;14(4):413-6；Ameglio F,等,Interleukin-6 and tumor necrosisfactor levels decrease in the suction blister fluids of psoriatic patientsduring effective therapy,Dermatology,1994;189(4):359-63；Wendling D,等,Combination therapy of anti-CD4 and anti-IL-6 monoclonalantibodies in a case of severe spondylarthropathy,Br J Rheumatol.,1996Dec;35(12):1330；Gratacos J,等,Serum cytokines(IL-6,TNF-alpha,IL-1beta and IFN-gamma)in ankylosing spondylitis:a close correlationbetween serum IL-6 and disease activity and severity,Br J Rheumatol.,1994 Oct;33(10):927-31；Ito H.,Treatment of Crohn’s disease withanti-IL-6 receptor antibody,J Gastroenterol.,2005 Mar;40 Suppl16:32-4；Ito H,等,A pilot randomized trial of a human anti-interleukin-6receptor monoclonal antibody in active Crohn’s disease,Gastroenterology，2004 Apr;126(4):989-96;discussion 947；Ito H.,IL-6 and Crohn’s disease,Curr Drug Targets Inflamm Allergy,2003 Jun;2(2):12530；Ito H,等,Anti-IL-6 receptor monoclonal antibody inhibits leukocyte recruitmentand promotes T-cell apoptosis in a murine model of Crohn’s disease,JGastroenterol.,2002 Nov;37 Suppl 14:56-61；Ito H.,Anti-interleukin-6therapy for Crohn’s disease,Curr Pharm Des.,2003;9(4):295-305；Salvarani C,等,Acute-phase reactants and the risk of relapse/recurrencein polymyalgia rheumatica:a prospective follow-up study,ArthritisRheum.,2005 Feb 15;53(1):33-8；Roche NE,等,Correlation ofinterleukin-6 production and disease activity in polymyalgia rheumaticaand giant cell arteritis,Arthritis Rheum.,1993 Sep;36(9):1286-94；GuptaM,等,Cytokine modulation with immuneγ-glo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在本发明的另一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少与骨骼系统相关的疾病和病症的症状、或治疗或预防与骨骼系统相关的疾病和病症。与骨骼系统相关的疾病和病症包括但不限于骨关节炎、骨质疏松和骨的佩吉特疾病。在本发明的一个优选实施方案中，本文描述的人源化抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少骨关节炎的症状、或治疗或预防骨关节炎。参见例如,Malemud CJ.,Cytokines as therapeutic targets for osteoarthritis,BioDrugs,2004;18(1):23-35；Westacott CI,等,Cytokines in osteoarthritis:mediators or markers of joint destruction?,Semin Arthritis Rheum.,1996Feb;25(4):254-72；Sugiyama T.,Involvement of interleukin-6 andprostaglandin E2 in particular osteoporosis of postmenopausal womenwith rheumatoid arthritis,J Bone Miner Metab.,2001;19(2):89-96；Abrahamsen B,等,Cytokines and bone loss in a 5-year longitudinal study-hormone replacement therapy suppresses serum soluble interleukin-6receptor and increases interleukin-1-receptor antagonist:the DanishOsteoporosis Prevention Study,J Bone Miner  Res.,2000Aug;15(8):1545-54；Straub RH,等,Hormone replacement therapy andinterrelation between serum interleukin-6 and body mass index inpostmenopausal women:a population-based study,J Clin EndocrinolMetab.,2000 Mar;85(3):1340-4；Manolagas SC,The role of IL-6 typecytokines and their receptors in bone,Ann N Y Acad Sci.,1998 May1;840:194-204；Ershler WB,等,Immunologic aspects of osteoporosis,Dev Comp Immunol.,1997 Nov-Dec;21(6):487-99；Jilka RL,等,Increased osteoclast development after estrogen loss:mediation byinterleukin-6,Science,1992 Jul 3;257(5066):88-91；Kallen KJ,等,Newdevelopments in IL-6 dependent biology and therapy:where do we standand what are the options?,Expert Opin Investig Drugs,1999Sep;8(9):1327-49；Neale SD,等,The influence of serum cytokines andgrowth factors on osteoclast formation in Paget’s disease,QJM,2002Apr;95(4):233-40；Roodman GD,Osteoclast function In Paget’s diseaseand multiple myeloma,Bone,1995 Aug;17(2Suppl):57S-61S；HoylandJA,等,Interleukin-6,IL-6 receptor,and IL-6 nuclear factor geneexpression in Paget’s disease,J Bone Miner Res.,1994 Jan;9(1):75-80；和Roodman GD,等,Interleukin 6.A potential autocrine/paracrine factor inPaget’s disease of bone,J Clin Invest.,1992 Jan;89(1):46-52；每一个的公开内容在此通过引用整体并入。
在本发明的另一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少与癌症相关的疾病和病症的症状、或治疗或预防与癌症相关的疾病和病症。与癌症相关的疾病和病症包括但不限于棘皮瘤、腺泡细胞癌、听神经瘤、肢端黑色素瘤、肢端汗腺瘤、急性嗜酸性粒细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性成巨核细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、急性成髓细胞白血病伴成熟、急性髓系树突状细胞白血病、急性髓系白血病、急性前骨髓性白血病、成釉细胞瘤、腺癌、腺样囊性癌、腺瘤、牙源性腺样瘤、肾上腺皮质癌、成人T细胞性白血病、侵袭性NK细胞白血病、AIDS相关癌症、AIDS相关淋巴瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞纤维瘤、肛门癌、间变性大细胞淋巴瘤、间变性甲状腺癌、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管肌脂瘤、血管肉瘤、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型性畸胎样/横纹肌样肿瘤、基底细胞癌、基底细胞样癌、B细胞白血病、B细胞淋巴瘤、Bellini导管癌、胆道癌、膀胱癌、胚细胞瘤、骨癌、骨肿瘤、脑干胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、布伦纳瘤、支气管肿瘤、细支气管肺泡癌、棕色瘤、伯基特淋巴瘤、原发部位不明的癌症、类癌瘤、癌、原位癌、阴茎癌、原发部位不明癌、癌肉瘤、卡斯特莱曼病、中枢神经系统胚胎肿瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、子宫颈癌、胆管癌、软骨瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、绒毛膜癌、脉络丛乳头状瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性单核细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增生性病症、慢性中性粒细胞性白血病、透明细胞瘤、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、德戈斯病、隆凸性皮肤纤维肉瘤、皮样囊肿、促纤维增生性小圆细胞瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、胚胎性癌、内胚层窦瘤、子宫内膜癌、子宫内膜子宫癌、内膜样瘤、与肠病相关的T-细胞淋巴瘤、成室管膜细胞瘤、室管膜瘤、上皮样肉瘤、红白血病、食管癌、成感觉神经细胞瘤、尤文氏家族肿瘤、尤文氏家族肉瘤、尤文氏肉瘤、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、乳腺外佩吉特病、输卵管癌、胎中胎、纤维瘤、纤维肉瘤、滤泡性淋巴瘤、滤泡性甲状腺癌、胆囊癌、胆囊癌、神经节神经胶质瘤、神经节瘤、胃癌、胃淋巴瘤、胃肠癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤、胃肠道间质瘤、生殖细胞瘤、胚组织瘤、妊娠性绒毛膜癌、妊娠性滋养层细胞瘤、骨巨细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、大脑神经胶质瘤病、血管球瘤、胰高血糖素瘤、性腺胚细胞瘤、粒层细胞瘤、毛细胞性白血病、毛细胞性白血病、头颈癌、头颈癌、心脏癌、成血管细胞瘤、血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、血液系统恶性肿瘤、肝细胞癌、肝脾T细胞淋巴瘤、遗传性乳腺-卵巢癌综合征、霍奇金淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、下丘脑胶质瘤、炎性乳腺癌、眼内黑素瘤、胰岛细胞癌、胰岛细胞瘤、幼年型粒-单核细胞白血病、卡波西肉瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、肝门胆管癌、库肯勃瘤、喉癌、喉癌、恶性雀斑样痣黑素瘤、白血病、白血病、唇及口腔癌、脂肉瘤、肺癌、黄体瘤、淋巴管瘤、淋巴管肉瘤、淋巴上皮瘤、淋巴系白血病、淋巴瘤、巨球蛋白血症、恶性纤维组织细胞瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、恶性胶质瘤、恶性间皮瘤、恶性外周神经鞘瘤、恶性横纹肌样瘤、恶性蝾螈瘤、MALT淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、肥大细胞白血病、纵膈生殖细胞瘤、纵膈肿瘤、甲状腺髓样癌、成神经管细胞瘤、成神经管细胞瘤、髓上皮瘤、黑素瘤、黑素瘤、脑膜瘤、麦克尔细胞癌、间皮瘤、间皮瘤、原发灶不明的颈部转移性鳞癌、转移性膀胱上皮癌、苗勒氏混合瘤、单核细胞白血病、口腔癌、粘液性瘤、多中心性卡斯特莱曼病、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常疾病、骨髓增生异常综合征、髓系白血病、髓系肉瘤、骨髓增生性疾病、粘液瘤、鼻腔癌、鼻咽癌、鼻咽癌、赘生瘤、神经细胞瘤、成神经细胞瘤、成神经细胞瘤、神经纤维瘤、神经瘤、结节性黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、眼肿瘤、少突星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、嗜酸细胞瘤、视神经鞘脑膜瘤、口腔癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、卵巢低度潜在恶性肿瘤、乳房佩吉特病、肺上沟瘤、胰腺癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、乳头状瘤病、神经节细胞瘤、鼻窦癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、血管周围上皮样细胞瘤、鼻咽癌、嗜铬细胞瘤、中分化松果体实质肿瘤、成松果体细胞瘤、垂体细胞瘤、垂体腺瘤、垂体肿瘤、浆细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、多胚瘤、前驱T-淋巴母细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、原发性肝细胞癌、原发性肝癌、原发性腹膜癌、原始神经外胚层瘤、前列腺癌、腹膜假性粘液瘤、直肠癌、肾细胞癌、涉及染色体15上的NUT基因的呼吸道癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、里希特转化、骶尾部畸胎瘤、唾液腺癌、肉瘤、雪旺氏细胞瘤、皮脂腺癌、继发性瘤、精原细胞瘤、浆液瘤、塞-莱二氏细胞瘤、性索-间质肿瘤、塞泽里综合征、印戒细胞癌、皮肤癌、蓝色小圆形细胞瘤、小细胞癌、小细胞肺癌、小细胞淋巴瘤、小肠癌、软组织肉瘤、生长抑素瘤、煤烟疣、脊髓瘤、脊髓肿瘤、脾边缘区淋巴瘤、鳞状细胞癌、胃癌、浅表扩展性黑素瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、表面上皮-间质瘤、滑膜肉瘤、T细胞急性成淋巴细胞性白血病、T细胞大颗粒淋巴细胞白血病、T细胞白血病、T细胞淋巴瘤、T细胞幼淋巴细胞白血病、畸胎瘤、末期淋巴癌、睾丸癌、泡膜细胞瘤、喉癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、移行细胞癌、脐尿管癌、尿道癌、泌尿生殖系统肿瘤、子宫肉瘤、葡萄膜黑素瘤、阴道癌、凡-莫二氏综合征、疣状癌、视路胶质瘤、外阴癌、华氏巨球蛋白血症、沃辛瘤、维尔姆斯肿瘤或其任意组合以及癌症化疗中的耐药性和癌症化疗毒性。参见例如,Hirata T,等,Humanizedanti-interleukin-6 receptor monoclonal antibody induced apoptosis offresh and cloned human myeloma cells in vitro,Leuk Res.,2003Apr;27(4):343-9,Bataille R,等,Biologic effects of anti-interleukin-6murine monoclonal antibody in advanced multiple myeloma,Blood,1995Jul 15;86(2):685-91；Goto H,等,Mouse anti-human interleukin-6receptor monoclonal antibody inhibits proliferation of fresh humanmyeloma cells in vitro,Jpn J Cancer Res.,1994 Sep;85(9):958-65；KleinB,等,Murine anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for a patientwith plasma cell leukemia,Blood,1991 Sep 1;78(5):1198-204；Mauray S,等,Epstein-Barr virus-dependent lymphoproliferative disease:criticalrole of IL-6,Eur J Immunol.,2000 Jul;30(7):2065-73；Tsunenari T,等,New xenograft model of multiple myeloma and efficacy of a humanizedantibody against human interleukin-6 receptor,Blood,1997 Sep15;90(6):2437-44；Emilie D,等,Interleukin-6 production in high-grade Blymphomas:correlation with the presence of malignant immunoblasts inacquired immunodeficiency syndrome and in human immunodeficiencyvirus-seronegative patients,Blood,1992 Jul 15;80(2):498-504；Emilie D,等,Administration of an anti-interleukin-6 monoclonal antibody topatients with acquired immunodeficiency syndrome and lymphoma:effect on lymphoma growth and on B clinical Symptoms,Blood,1994Oct 15；84(8):2472-9；Smith PC,等,Anti-interleukin-6 monoclonalantibody induces regression of human prostate cancer xenografts in nudemice,Prostate,2001 Jun 15;48(1):47-53；Smith PC,等,Interleukin-6 andprostate cancer progression,Cytokine Growth Factor Rev.,2001Mar;12(1):33-40；Chung TD,等,Characterization of the role of IL-6 inthe progression of prostate cancer,Prostate,1999 Feb 15;38(3):199-207；Okamoto M,等,Interleukin-6 as a paracrine and autocrine growth factorin human prostatic carcinoma cells in vitro,Cancer Res.,1997 Jan1;57(1):141-6；Reittie JE,等,Interleukin-6 inhibits apoptosis and tumornecrosis factor induced proliferation of B-chronic lymphocytic leukemia,Leuk Lymphoma,1996 Jun;22(1-2):83-90,follow 186,color plate VI；Sugiyama H,等,The expression of IL-6 and its related genes in acuteleukemia,Leuk Lymphoma,1996 Mar;21(1-2):49-52；Bataille R,等,Effects of an anti-interleukin-6(IL-6)murine monoclonal antibody in apatient with acute monoblastic leukemia,Med Oncol TumorPharmacother.,1993;10(4):185-8；Kedar I,等,Thalidomide reducesserum C-reactive protein and interleukin-6 and induces response to IL-2in a fraction of metastatic renal cell cancer patients who failed IL-2-basedtherapy,Int J Cancer，2004 Jun 10;110(2):260-5；Angelo LS,Talpaz M,Kurzrock R,Aut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在本发明的另一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少缺血性心脏病、粥样硬化、肥胖、糖尿病、哮喘、多发性硬化、阿尔茨海默病、脑血管疾病、发热、急性期应答、过敏、贫血症、炎症贫血症(慢性疾病贫血症)、高血压、抑郁、与慢性疾病相关的抑郁、血栓形成、血小板增多症、急性心力衰竭、代谢综合征、流产、肥胖、慢性前列腺炎、血管球性肾炎、盆腔炎症性疾病、再灌注损伤和移植排斥的症状，或治疗或预防缺血性心脏病、粥样硬化、肥胖、糖尿病、哮喘、多发性硬化、阿尔茨海默病、脑血管疾病、发热、急性期应答、过敏、贫血症、炎症贫血症(慢性疾病贫血症)、高血压、抑郁、与慢性疾病相关的抑郁、血栓形成、血小板增多症、急性心力衰竭、代谢综合征、流产、肥胖、慢性前列腺炎、血管球性肾炎、盆腔炎症性疾病、再灌注损伤和移植排斥。参见例如Tzoulaki I,等,C-reactive protein,interleukin-6,and soluble adhesionmolecules as predictors of progressive peripheral atherosclerosis in thegeneral population:Edinburgh Artery Study,Circulation,2005 Aug16;l12(7):976-83,Epub 2005 Aug 8；Rattazzi M,等,C-reactive proteinand interleukin-6 in vascular disease:culprits or passive bystanders?,JHypertens.,2003 Oct;21(10):1787-803；Ito T，等,HMG-CoA reductaseinhibitors reduce interleukin-6 synthesis in human vascular smoothmuscle cells,Cardiovasc Drugs Ther.,2002 Mar;16(2):121-6；StenvinkelP，等,Mortality,malnutrition,and atherosclerosis in ESRD:what is therole of interleukin-6?,Kidney Int Suppl.,2002 May;(80):103-8；YudkinJS,等,Inflammation,obesity,stress and coronary heart disease:isinterleukin-6 the link?,Atherosclerosis,2000 Feb;148(2):209-14；HuberSA,等,Interleukin-6 exacerbates early atherosclerosis in mice,Arterioscler Thromb Vasc Biol.,1999 Oct;19(10):2364-7；Kado S,等,Circulating levels  of interleukin-6,its soluble receptor andinterleukin-6/interleukin-6 receptor complexes in patients with type 2diabetes mellitus,Acta Diabetol.,1999 Jun;36(1-2):67-72；Sukovich DA,等,Expression of interleukin-6 in atherosclerotic lesions of maleApoE-knockout mice:inhibition by 17beta-estradiol,Arterioscler ThrombVasc Biol.,1998 Sept;8(9):1498-505；Klover PJ,等,Interleukin-6depletion selectively improves hepatic insulin action in obesity.Endocrinology,2005 Aug;146(8):3417-27,Epub 2005 Apr 21；Lee YH,等,The evolving role of inflammation in obesity and the metabolicsyndrome,Curr Diab Rep.,2005 Feb;5(1):70-5；Diamant M,等,Theassociation between abdominal visceral fat and carotid stiffness ismediated by circulating inflammatory markers in uncomplicated type 2diabetes,J Clin Endocrinol Metab.,2005 Mar;90(3):1495-501,Epub2004 Dec 21；Bray GA,Medical consequences of obesity,J ClinEndocrinol Metab.,2004 Jun;89(6):2583 9；Klover PJ,等,Chronicexposure to interleukin-6 causes hepatic insulin resistance in mice,Diabetes,2003 Nov;52(11):2784-9；Yudkin JS,等,Inflammation,obesity,stress and coronary heart disease:is interleukin-6 the link?,Atherosclerosis,2000 Feb;148(2):209-14；Doganci A,等,Pathologicalrole of IL-6 in the experimental allergic bronchial asthma in mice,ClinRev Allergy Immunol.,2005 Jun;28(3):257-70；Doganci A,等,The IL-6Ralpha chain controls lung CD4+CD25+ Treg development and functionduring allergic airway inflammation in vivo,J Clin Invest.,2005Feb;l15(2):313 25,(Erratum in:J Clin Invest.,2005 May;l15(5):1388,Lehr,Hans A[added])；Stelmasiak Z,等,IL 6 and sIL-6R concentration inthe cerebrospinal fluid and serum of MS patients,Med Sci Monit.,2001Sep-Oct;7(5):914-8；Tilgner J,等,Continuous interleukin-6 application invivo via macroencapsulation of interleukin-6-expressing COS-7 cellsinduces massive gliosis,Glia,2001 Sep;35(3):234-45,Brunello AG,等,Astrocytic alterations in interleukin-6 Soluble interleukin-6 receptoralpha double-transgenic mice,Am J Pathol.,2000 Nov;157(5):1485-93；Hampel H,等,Pattern of interleukin-6 receptor compleximmunoreactivity between cortical regions of rapid autopsy normal andAlzheimer’s disease brain,Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci.,2005Aug;255(4):269-78,Epub 2004 Nov 26；Cacquevel M,等,Cytokines inneuroinflammation and Alzheimer’s disease,Curr Drug Targets,2004Aug;5(6):529-34；Quintanilla RA,等,Interleukin 6 inducesAlzheimer-type phosphorylation of tau protein by deregulating thecdk5/p35 pathway,Exp Cell Res.,2004 Apr 15；295(1):245-57；GadientRA,等,Interleukin-6(IL-6)--a molecule with both beneficial anddestructive potentials,Prog Neurobiol.,1997 Aug;52(5):379-90；Hull M,等,Occurrence of interleukin-6 in cortical plaques of Alzheimer’s diseasepatients may precede transformation of diffuse into neuritic plaques,AnnN Y Acad Sci.,1996 Jan 17;777:205-12；Rallidis LS,等,Inflammatorymarkers and in-hospital mortality in acute ischaemic stroke,Atherosclerosis,2005 Dec 30；Emsley HC,等,Interleukin-6 and acuteischaemic stroke,Acta Neurol Scand.,2005 Oct;112(4):273-4；Smith CJ,等,Peak plasma interleukin-6 and other peripheral markers ofinflammation in the first week of ischaemic stroke correlate with braininfarct volume,stroke severity and long-term outcome,BMC Neurol.,2004 Jan 15;4:2；Vila N,等,Proinflammatory cytokines and earlyneurological worsening in ischemic stroke,Stroke,2000Oct;31(10):2325-9；和Tarkowski E,等,Early intrathecal production ofinterleukin-6 predicts the size of brain lesion in stroke,Stroke,1995Aug;26(8):1393-8；每一个的公开内容在此通过引用整体并入。
在本发明的另一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体有用于减轻或减少与细胞因子风暴相关的疾病和病症的症状、或治疗或预防与细胞因子风暴相关的疾病和病症。与细胞因子风暴相关的疾病和病症包括但不限于移植物抗宿主疾病(GVHD)、禽流感、天花、流行性感冒、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、重症急性呼吸系统综合征(SARS)、败血症和全身炎症反应综合征(SIRS)。参见例如Cecil,R.L.,Goldman,L.,& Bennett,J.C.(2000).Cecil textbook ofmedicine.Philadelphia:W.B.Saunders；Ferrara JL,等.,Cytokine storm ofgraft-versus-host disease :a critical effector role for interleukin-1,Transplant Proc.1993 Feb;25(1Pt 2):1216-7；Osterholm MT,Preparingfor the Next Pandemic,N Engl J Med.2005 May 5;352(18):1839-42；Huang KJ,等.,An interferon-gamma-related cytokine storm in SARSpatients,J Med Virol.2005 Feb;75(2):185-94；和Cheung CY,等.,Induction of proinflammatory cytokines in human macrophages byinfluenza A(H5N 1)viruses:a mechanism for the unusual severity ofhuman disease?Lancet.2002 Dec 7;360(9348):1831-7。
在本发明的另一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其片段或变体用作觉醒辅助。
施用
在本发明的一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体以及所述抗体片段或变体的组合以约0.1至20mg/kg、例如约0.4mg/kg、约0.8mg/kg、约1.6mg/kg或约4mg/kg受试者体重的浓度施用给受试者。在本发明的一个优选实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体以及所述抗体片段或变体的组合以约0.4mg/kg受试者体重的浓度施用给受试者。在本发明的一个优选实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体以及所述抗体片段或变体的组合以每26周一次或更少、例如每16周一次或更少、每8周一次或更少、或每4周一次或更少的频率施用给受试者。在本发明另一优选实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体以及其组合以大约1周的时段最多一次、例如大约2周的时段最多一次、例如大约4周的时段最多一次、例如大约8周的时段最多一次、例如大约12周的时段最多一次、例如大约16周的时段最多一次、例如大约24小时的时段最多一次的频率施用给受试者。
要理解，有效剂量可取决于受试者性质，例如年龄、性别、怀孕状态、体重指数、瘦体重、组合物针对的病症、可以影响组合物代谢或耐受的受试者的其它健康状况、受试者中IL-6的水平以及对组合物的抗性(例如，源于对组合物产生抗体的患者)。本领域技术人员将能够通过常规实验确定有效剂量和施用频率，例如通过本文公开和以下中的指导：Goodman,L.S.,Gilman,A.,Brunton,L.L.,Lazo,J.S.,&Parker,K.L.(2006).Goodman & Gilman′s the pharmacological basis oftherapeutics.New York:McGraw-Hill;Howland,R.D.,Mycek,M.J.,Harvey,R.A.,Champe,P.C.,& Mycek,M.J.(2006).Pharmacology.Lippincott′s illustrated reviews.Philadelphia:Lippincott Williams &Wilkins;and Golan,D.E.(2008).Principles of pharmacology:thepathophysiologic basis of drug therapy.Philadelphia,Pa.,[etc.]:Lippincott Williams & Wilkins。
在本发明的另一个实施方案中，本文所述抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体以及所述抗体片段或变体的组合以药物制剂施用给受试者。
“药物组合物”指适合施用给哺乳动物的化学或生物组合物。此类组合物可以被特别配制用于经许多途径的一种或多种施用，所述途径包括但不限于口腔、表皮、硬膜外、吸入、动脉内、心脏内、脑室内、真皮内、肌肉内、鼻内、眼内、腹膜内、脊柱内、鞘内、静脉内、口内、胃肠外、通过灌肠法或栓剂经直肠、表皮下、真皮下、舍下、经皮和经粘膜。此外，施用可以通过注射、粉末、液体、凝胶、滴剂或其它施用方式进行。
在本发明的一个实施方案中，本文描述的抗IL-6抗体或其IL-6结合片段或变体以及所述抗体片段或变体的组合可以任选地与一种或多种活性剂组合。此类活性剂包括止痛剂、解热剂、抗炎剂、抗生素、抗病毒剂和抗细胞因子剂。活性剂包括TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝细胞生长因子(HGF)、Hepcidin的激动剂、拮抗剂和调节剂，包括对前述任何一个有反应性的抗体和对其受体的任何一个有反应性的抗体。活性剂还包括2-芳基丙酸、醋氯芬酸、阿西美辛、乙酰水杨酸(阿司匹林)、阿氯芬酸、阿明洛芬、Amoxiprin、氨基安替比林、芳基链烷酸、阿扎丙酮、扑炎痛/贝诺酯/贝诺酯、苯噁洛芬、溴芬酸、卡布洛芬、塞来昔布、三水杨酸胆碱镁、氯非宗、COX-2抑制剂、右布洛芬、右酮洛芬、双氯芬酸、二氟尼柳、屈噁昔康、乙水杨胺、依托度酸、依他昔布、Faislamine、芬那酸、芬布芬、非诺洛芬、氟芬那酸、氟诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、异丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、氯诺昔康、洛索洛芬、罗美昔布、水杨酸镁、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、水杨酸甲酯、莫非布宗、萘丁美酮、甲氧萘丙酸、N-芳基氨茴酸、奥沙美辛、奥沙普秦、昔康类、羟基保泰松、帕瑞昔布、非那宗、保泰松、保泰松、吡罗昔康、吡洛芬、普鲁芬、丙谷美辛、吡唑烷衍生物、罗非昔布、水杨酸水杨酸酯、水杨酰胺、水杨酸盐、苯磺唑酮、舒林酸、舒洛芬、替诺昔康、噻洛芬酸、托芬那酸、托美汀和伐地昔布。抗生素包括阿米卡星、氨基糖苷类、阿莫西林、氨苄西林、安沙霉素类、胂凡纳明、阿奇霉素、阿洛西林、氨曲南、杆菌肽、碳头孢烯、碳青霉烯类、羧苄青霉素、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢噻吩、头孢噻吩、头孢孟多、头孢唑啉、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢吡普、头孢曲松、头孢呋辛、头孢菌素类、氯霉素、西司他丁、环丙沙星、克拉霉素、克林霉素、氯唑西林、粘杆菌素、复方新诺明、达福普汀、地美环素、双氯青霉素、地红霉素、多利培南、多西环素、依诺沙星、厄他培南、红霉素、乙胺丁醇、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、夫西地酸、加替沙星、格尔德霉素、庆大霉毒、糖肽类、除莠霉素、亚胺培南、异烟肼、卡那霉素、左氧氟沙星、林可霉素、利奈唑胺、洛美沙星、氯碳头孢、大环内酯类、磺胺米隆、美罗培南、甲氧西林、灭滴灵、美洛西林、米诺环素、单环内酰胺类、莫西沙星、莫匹罗星、萘夫西林、新霉素、奈替米星、呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、苯唑西林、土霉素、巴龙霉素、青霉素、青霉素类、哌拉西林、平板霉素、多粘菌素B、多肽、百浪多息、吡嗪酰胺、喹诺酮类、奎奴普丁、利福平、利福平、罗红霉素、壮观霉素、链霉素、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、Sulfanilimide、硫氮磺胺吡啶、磺胺异噁唑、磺酰胺类、替考拉宁、泰利霉素、四环素、四环素类、替卡西林、替硝唑、托普霉素、甲氧苄氨嘧啶、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲噁唑、醋竹桃霉素、曲伐沙星和万古霉素。活性剂还包括醛固酮、倍氯米松、倍他米松、皮质类固醇类、皮质醇、醋酸可的松、醋酸脱氧皮质酮、地塞米松、醋酸氟氢可的松、糖皮质激素、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、强的松、类固醇和曲安西龙。抗病毒剂包括阿巴卡韦、阿昔洛韦、无环鸟苷、阿德福韦、金刚烷胺、安泼那韦、固定剂量复方抗逆转录病毒剂、协同增强抗逆转录病毒剂、阿比朵尔、阿扎那韦、立普妥/阿托伐他汀钙、溴夫定、西多福韦、双汰芝、地瑞那韦、地拉夫定、去羟肌苷、二十二烷醇、依度尿苷、依法韦仑、恩曲他滨、恩夫韦肽、恩替卡韦、进入抑制剂、泛昔洛韦、福米韦生、膦沙那韦、膦甲酸、膦乙酸、融合抑制剂、更昔洛韦、加德西、伊巴他滨、碘苷、咪喹莫特、异丙肌苷、茚地那韦、肌苷、整合酶抑制剂、干扰素、I型干扰素、II型干扰素、III型干扰素、拉米夫定、洛匹那韦、洛韦胺、马拉维若、MK-0518、吗啉胍、奈非那韦、奈韦拉平、nexavir、核苷类似物、奥司他韦、喷昔洛韦、帕拉米韦、普可那利、鬼臼毒素、蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、利巴韦林、金刚乙胺、利托那韦、沙奎那韦、司他夫定、替诺福韦、替诺福韦二吡呋酯、替拉那韦、三氟尿苷、三协唯、曲金刚胺、特鲁瓦达、伐昔洛韦、缬更昔洛韦、维利维罗、阿糖腺苷、韦拉米啶、扎西他滨、扎那米韦和齐多夫定。还涵盖这些活性剂的任何适合组合。
“药物赋形剂”或“药学可接受的赋形剂”是供在其中配制活性剂的载体，通常是液体。在本发明的一个实施方案中，活性治疗剂是本文描述的人源化抗体或其一个或多个片段或变体。赋形剂一般不给制剂提供任何药理学活性，尽管其可以提供化学和/或生物稳定性和释放特征。示例性制剂可见于Remington’s Pharmaceutical Sciences,19thEd.,Grennaro,A.,Ed.,1995，其通过引用并入。
本文使用的“药学可接受载体”或“赋形剂”包括任何和所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂。在一个实施方案中，载体适合胃肠外施用。可选地，载体可以适合静脉内、腹膜内、肌肉内或舌下施用。药学可接受的载体包括无菌水溶液或分散液和用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。药学活性物质的此类介质和剂的用途是本领域公知的。除非任何常规介质或剂与活性化合物不相容，其在药物组合物中的用途被涵盖。补充活性化合物还可以被加入组合物。
在可用于静脉内施用本发明抗体(包括Ab1)以治疗癌症的本发明的一个实施方案中，施用制剂包含以下或可选地由以下组成：约10.5mg/mL抗体、25mM组氨酸碱基、磷酸(适量至pH 6)和250mM山梨醇。
在可用于静脉内施用本发明抗体(包括Ab1)以治疗癌症的本发明的另一个实施方案中，施用制剂包含以下或可选地由以下组成：约10.5mg/mL抗体、12.5mM组氨酸碱基、12.5mM盐酸组氨酸(或25mM组氨酸碱基和盐酸适量至pH 6)、250mM山梨醇和0.015%(w/w)聚山梨酯80。
在另一个实施方案中，本发明还涉及联合化疗剂(优选为EGFR抑制剂)和/或放疗使用目标抗IL-6抗体和抗体片段来治疗特定癌症，优选地其中使用一定的给药方案施用该组合，借此所述抗IL-6抗体或抗IL-6抗体片段致使癌细胞对放疗或化疗剂的作用更敏感。在优选实施方案中这些方法将包括使用EGFR抑制剂和根据本发明的抗IL-6抗体如人源化的Ab1或ALD518治疗癌症。可使用该组合治疗的癌症的非限制性实例包括晚期的和非晚期的癌症，包括转移性肺癌、乳腺癌、头颈癌、(HNSCC)、胰腺癌、结肠直肠癌、肛门癌、多形性成胶质细胞瘤、上皮癌、肾细胞癌、慢性骨髓性白血病和其它白血病。
可与根据本发明的抗IL-6抗体或抗体片段一起在治疗方案中施用的EGFR抑制剂的实例包括，例如，可获得于ImClone的西妥昔单抗(Erbitux)、可获得于OSI制药公司的厄洛替尼(Tarceva)、可获得于Glaxo的拉帕替尼(Tykerb)、可获得于Amgen的帕尼单抗(Vectibox)、由Pfizer销售的舒尼替尼或索坦(N-(2-二乙氨乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺)、由AstraZeneca销售的吉非替尼(Iressa)或N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉-4-基丙氧基)喹唑啉-4-胺、由GenMab在临床开发的扎鲁木单抗及其它。
联合化疗剂施用的抗体的量可在约5-1000mg范围内，更通常是从约25-500mg的范围，如50、80、100、150、160、200、240、250、300、320、350、400、480mg的给药方案。所述抗体可通过不同的方式施用，如静脉注射或皮下注射并且可以与化疗剂如EGFR抑制剂一起施用(在相同或不同剂量的组合物中)或分开施用。
在优选实施方案中，所述被治疗的癌症将为肺癌，如非细胞小肺癌，例如，鳞状细胞癌、大细胞癌或腺癌，或小细胞肺癌，如小细胞癌(燕麦细胞癌)或复合性小细胞癌。在优选的实施方案中，所治疗的肺癌将包括鳞状细胞癌。在某些情况下，这些方法将被用于治疗癌症患者，其中所述患者已表现出对所述特定化疗剂的耐受性，所述化疗剂如EGFR抑制剂，例如，厄洛替尼、舒尼替尼或伊马替尼，这可能是由于突变EGFR。如Yao等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA和Nishioka等，Leukemia 23:2304-2308(2009)所公开。某些肿瘤和细胞系(如白血病和肺癌)对化疗剂的耐药性可能涉及炎症反应，其导致IL-6的异常表达，该异常表达可能赋予肿瘤对化疗的耐药性。此外，目标抗IL-6抗体和片段可用于治疗已对放疗产生耐药性的癌症，其是通过在放疗之前、同时或之后施用根据本发明的抗IL-6抗体。
在可用于皮下施用本发明抗体(包括Ab1)用于类风湿性关节炎适应症的本发明的一个优选实施方案中，施用制剂包含以下或可选地由以下组成：约50或100mg/mL抗体、约5mM组氨酸碱基、约5mM盐酸组氨酸以使最终为pH 6、250mM山梨醇和0.015%(w/w)聚山梨酯80。在可用于皮下施用本发明抗体(包括Ab1)用于类风湿性关节炎适应症的本发明的另一个实施方案中，施用制剂包含以下或可选地由以下组成：约20或100mg/mL抗体、约5mM组氨酸碱基、约5mM盐酸组氨酸以使最终为pH 6、250至280mM山梨醇(或与蔗糖组合的山梨醇)和0.015%(w/w)聚山梨酯80，所述制剂在运输瓶中具有氮气顶空。
药物组合物通常在生产和贮存条件下必须是无菌和稳定的。本发明涵盖药物组合物以冻干形式存在。组合物可以被配制为溶液、微乳剂、脂质体或其它适合高药物浓度的有序结构。该载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其适合混合物的溶剂或分散介质。本发明还涵盖在药物组合物中包含稳定剂。
在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨醇或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的物质例如单硬脂酸酯和明胶来制备。而且，碱性多肽可以时间释放制剂配制，例如包括缓慢释放聚合物的组合物。活性化合物可以用防止化合物快速释放的载体制备，例如控制释放制剂，包括植入剂和微囊递送系统。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯类、聚乳酸和聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLG)。用于制备此类制剂的许多方法是本领域技术人员已知的。
对于所示实施方案的每一个，化合物可以通过多种剂型施用。涵盖本领域普通技术人员已知的任何生物学可接受的剂型及其组合。此类剂型的实例包括但不限于可重构的粉末、酏剂、液体、溶液、悬液、乳液、粉末、颗粒体、颗粒、微粒、可分散颗粒体、扁囊、吸入剂、气溶胶吸入剂、贴剂、颗粒吸入剂、植入剂、贮存植入剂、注射剂(包括皮下、肌肉内、静脉内和皮内)、输注剂及其组合。
上文关于本发明各种示例性实施方案的描述不是穷尽性的或者将本发明限制在所公开的精确形式。虽然本文为了示例目的描述了本发明的具体实施方案和实施例，但是相关领域技术人员将理解，各种等同的修改在本发明范围内是可能的。本文提供的本发明的教导可以适用于不同于上述实例的其它目的。
可以根据上述具体描述对本发明做出这些和其它改变。一般，在下述权利要求书中，使用的术语不应该被解释为将本发明限制在说明书和权利要求书中公开的具体实施方案。相应地，本发明不受所公开内容的限制，而是本发明范围将完全由下述权利要求确定。
本发明可以不同于前述说明和实例中具体描述的那些方式实施。根据上述教导可能做出本发明的多种修饰和变化，因此在所附权利要求的范围内。
关于获得抗原特异性B细胞的克隆群的方法的某些教导公开于2006年5月19日提交的美国临时专利申请第60/801,412号，其公开内容在此通过引用整体并入。
有关兔衍生的单克隆抗体的人源化和保持抗原结合亲和力的优选序列修饰的某些教导公开于2008年5月21日提交的题为“NovelRabbit Antibody Humanization Method and Humanized RabbitAntibodies”的国际申请第12/124,723号，相应档案号67858.704001，其公开内容在此通过引用整体并入。
有关使用交配活性酵母和相应方法产生抗体或其片段的某些教导公开于2006年5月8日提交的美国专利申请第11/429,053号(美国专利申请公布第US2006/0270045号)，其公开内容在此通过引用整体并入。
有关抗IL-6抗体、使用交配活性酵母和相应方法产生抗体或其片段的方法的某些教导公开于2007年5月21日提交的美国临时专利申请第60/924,550号，其公开内容在此通过引用整体并入。
有关抗IL-6抗体和使用这些抗体或其片段解决某些疾病和/或病症的方法的某些教导公开于2008年11月25日提交的美国临时专利申请第61/117,839号、第61/117,861号和第61/117,811号，其各自的公开内容在此通过引用整体并入。
某些抗IL-6抗体多核苷酸和多肽公开于本专利申请文件所附的序列表中，所述序列表的公开内容在此通过引用整体并入。
本文中引用的每个文件(包括专利、专利申请、杂志文章、摘要、手册、书籍或其它公开)的全部公开内容在此通过引用整体并入。
下述实施例被提出以为本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开和描述，并且不是要限制被认为是本发明的范围。已经尝试保证所使用的数字(例如量、温度、浓度等)的准确性，但应该允许一些实验误差和偏差。除非另外说明，份是重量份，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，并且压力是大气压或接近大气压。
实施例
在以下实施例中，除非上下文另外指明，否则术语“Ab1”指含有SEQ ID NO:702轻链序列和SEQ ID NO:704重链序列的抗体。
实施例1 富集的抗原特异性B细胞抗体培养物的产生
抗体组通过免疫传统抗体宿主动物以引发对目标靶抗原的天然免疫应答而被衍生。通常，用于免疫的宿主是兔或利用类似的成熟过程产生抗体并为产生抗体的抗原特异性B细胞群提供相当的多样性，例如表位多样性。初始抗原免疫可以使用完全弗氏佐剂(CFA)进行，并且使用不完全佐剂实现随后加强免疫。在免疫后约50-60天，优选在第55天，测试抗体滴度，如果建立适当的滴度，则开始抗体选择(ABS)过程。ABS开始的两个关键标准是有效的抗原识别和多克隆血清中的功能调节活性。
在建立阳性抗体滴度时，处死动物并分离B细胞源。这些源包括：脾、淋巴结、骨髓和外周血单核细胞(PBMC)。产生单细胞悬液，洗涤细胞悬液以使其适合低温长期贮存。然后通常冷冻细胞。
为了开始抗体识别过程，小份冷冻的细胞悬液被融化、洗涤并放入组织培养基。这些悬液然后与用于产生动物免疫应答的生物素化的抗原形式混合，使用Miltenyi磁珠细胞选择方法回收抗原特异性细胞。使用链霉亲和素珠进行特异性富集。富集的群被回收并进入特异性B细胞分离的下一阶段。
实施例2 含有克隆的抗原特异性B细胞的培养物的产生
根据实施例1产生的富集的B细胞然后以各种每孔细胞密度铺板于96孔微量滴定板。通常，这是每孔50、100、250或500细胞，每组10个板。培养基补充了4%活化兔T细胞条件培养基和50K冷冻照射的EL4B饲养细胞。这些培养物被静置5-7天，然后收集含有分泌抗体的上清液并在单独的分析设定下评估靶性质。剩余的上清液保持不动，板在-70℃冷冻。在这些条件下，培养过程通常导致孔含有混合的细胞群，所述细胞群包含抗原特异性B细胞的克隆群，即，单孔将仅含对预期抗原特异性的单一单克隆抗体。
实施例3 预期特异性和/或功能性的单克隆抗体的抗体上清液的筛选
来自含有根据实施例2产生的克隆抗原特异性B细胞群的孔的含有抗体的上清液使用ELISA方法初始筛选抗原识别。这包括选择性抗原固定化(例如，通过链霉亲和素涂覆板的生物素化抗原捕获)、非特异性抗原板涂覆或可选地通过抗原积聚策略(例如，选择性抗原捕获，随后添加结合配偶体以产生异聚体蛋白-抗原复合物)。然后抗原阳性孔悬液任选地在功能调节分析中测试，所述功能调节分析严格依赖于配体。一个这样的实例是体外蛋白-蛋白相互作用分析，所述分析再创造了抗原配体与重组受体蛋白之间的天然相互作用。可选地，利用配体依赖性的且容易监测的基于细胞的应答(例如，增殖应答)。展示显著抗原识别和效价的上清液被认为是阳性孔。源于最初阳性孔的细胞然后被转到抗体回收阶段。
实施例4 期望的抗原特异性的单一抗体生成B细胞的回收
从含有抗原特异性B细胞克隆群(根据实施例2或3产生)的孔分离细胞，其分泌单一抗体序列。分离的细胞然后被分析以分离单一的抗体分泌细胞。Dynal链霉亲和素珠在缓冲介质中被生物素化靶抗原涂覆以制备与细胞存活力相容的含有抗原的微珠。接下来抗原涂覆株、来自阳性孔的抗体生成细胞和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗宿主H&L IgG抗体(如所示，宿主可以是任何哺乳动物宿主，例如兔、小鼠、大鼠等)在37℃一起孵育。该混合物然后以小份再次转移到载玻片上，使得每小份平均具有单一的抗体生成B细胞。然后通过荧光显微术检测抗原特异性抗体分泌细胞。分泌的抗体由于结合的抗原而被局部浓缩至相邻珠并且提供基于强荧光信号的定位信息。抗体分泌细胞通过FITC检测在分泌细胞附近形成的抗体-抗原复合物来识别。然后使用显微操作器回收在该复合物中心发现的单细胞。细胞在eppendorf PCR管中快速冷冻以贮存在-80℃，直到开始抗体序列回收。
实施例5 从抗原特异性B细胞分离抗体序列
抗体序列使用基于组合的RT-PCR的方法从根据实施例4生成的单一分离的B细胞或从根据实施例2获得的克隆B细胞群分离的抗原特异性B细胞回收。引物被设计为在靶免疫球蛋白基因(重链和轻链)例如兔免疫球蛋白序列的保守区和恒定区退火，使用两步嵌套式PCR回收步骤来获得抗体序列。分析来自每个孔的扩增子的回收和尺寸完整性。得到的片段然后用AluI消化以指纹印迹序列克隆性。相同的序列在其电泳分析中展现出共同的片段化模式。显著地，证明细胞克隆性的该共同的片段化模式一般甚至在开始铺板达1000细胞/孔的孔中被观察到。然后最初的重链和轻链扩增片段用HindIII和XhoI或HindIII和BsiWI限制酶消化以制备用于克隆的DNA的各自片段。得到的消化产物然后被连接入表达载体并转化入细菌以进行质粒繁殖和生产。选择克隆进行序列鉴定。
实施例6 预期抗原特异性和/或功能性的单克隆抗体的重组生产
含有单一单克隆抗体的每个孔的正确全长抗体序列被建立，微量制备的DNA使用Qiagen固相方法制备。该DNA然后用于转染哺乳动物细胞以产生重组全长抗体。测试粗抗体产物的抗原识别和功能性以确认最初特征存在于重组抗体蛋白。适当时，完成大规模瞬时哺乳动物转染，抗体通过蛋白A亲和色谱纯化。Kd使用标准方法(例如,BiacoreTM)以及在效价分析中的IC50来评估。
实施例7 结合人IL-6的抗体制备
通过使用本文描述的抗体选择方案，可以产生大范围的抗体组。抗体对IL-6具有高亲和力(1至2位数的pM Kd)并且证明是多细胞筛选系统(T1165和HepG2)中IL-6的有效拮抗剂。而且，抗体集展示了针对IL-6驱动的过程的不同的拮抗模式。
免疫策略
兔用huIL-6(R&R)免疫。免疫由以下组成：第一次皮下(sc)注射100μg于完全弗氏佐剂(CFA)(Sigma)，随后两次加强，间隔两周，每次50μg于不完全弗氏佐剂(IFA)(Sigma)中。动物在第25天取血，通过ELISA(抗原识别)并通过非放射性增殖分析(Promega)测定血清滴度，使用T1165细胞系。
抗体选择滴度评估
通过用在4℃磷酸盐缓冲盐水(PBS,Hyclone)中1μg/mL huIL-6(50μL/孔)涂覆Immulon 4板(Thermo)过夜来测定抗原识别。在分析当天，板用PBS/Tween 20(PBST片,Calbiochem)洗涤3次。然后，板用200μL/孔PBS中0.5%鱼皮明胶(FSG,Sigma)在37℃封闭30分钟。除去封闭溶液，并吸干板。制备血清样品(取血和取血前)，初始稀释1∶100(所有稀释液制备为FSG 50μl/孔)，随后跨板1∶10稀释(12列被留作空白背景对照)。板在37℃孵育30分钟。板用PBS/Tween 20洗涤3次。稀释1:5000的山羊抗兔Fc-HRP(Pierce)被添加至所有孔(50μL/孔)，并且在37℃孵育板30分钟。板如上所述洗涤。50μL/孔的TMB-Stable终止剂(Fitzgerald Industries)被添加至板，允许显色，一般3至5分钟。显色反应用50μL/孔0.5M HCl终止。板在450nm读数。使用Graph Pad Prizm软件绘制光密度(OD)与稀释，测定滴度。
功能滴度评估
样品的功能活性通过T1165增殖分析来测定。T1165细胞常规保持在补充了HEPES、丙酮酸钠、碳酸氢钠、L-谷氨酰胺、高葡萄糖、青霉素/链霉素、10%热灭火胎牛血清(FBS)(所有补充剂来自Hyclone)、2-巯基乙醇(Sigma)和10ng/mL huIL-6(R&D)的修饰RPMI培养基(Hyclone)。在分析当天，通过台盼蓝(Invitrogen)测定细胞存活，并且细胞以20,000细胞/孔的固定密度接种。在接种之前，细胞在无人IL-6的上述培养基中洗涤两次(通过在13000rpm离心5分钟并弃掉上清液)。在最后一次洗涤之后，细胞重悬于相同培养基中，用于在等于50μL/孔的体积中洗涤。细胞在室温静置。
在圆底96孔板(Costar)中，血清样品被添加，开始1:100、随后1∶10稀释跨板(2至10列)，30μL/孔，重复5次(B至F行：在无huIL-6的上述培养基中制备)。11列是仅用于IL-6对照的培养基。30μL/孔的HuIL-6以4x浓度的最终EC50(之前确定的浓度)添加至所有孔(huIL-6被稀释在上述培养基中)。孔在37℃孵育1小时以允许发生抗体结合。1小时后，50μL/孔抗体-抗原(Ab-Ag)复合物被转移至圆底、96孔板(Costar)，根据在圆底板中排列的板图形式。在G行，50μL/孔的培养基被添加至所有孔(2至11列)用作背景对照。静置的50μl/孔的细胞悬液被添加至所有孔(2至11列，B至G行)。在第1和12列和第A和H行，200μL/孔的培养基被添加以预防测试孔蒸发并最大限度降低边缘效应。板在37℃、4%CO2中孵育72小时。在72h，20μL/孔CellTiter96(Promega)试剂被添加至每个生产商方案的所有测试孔，并且板在37℃孵育2小时。在2h，板在定轨摇床上温和混合以分散细胞并允许测试孔中的同质性。板在490nm波长处读数。使用Graph Pad Prizm软件绘制光密度(OD)与稀释，测定功能滴度。阳性分析对照板使用MAB2061(R&D Systems)如上所述进行，起始浓度为1μg/mL(最终浓度)，随后跨板1:3稀释。
组织采集
一旦建立可接受的滴度，处死兔。采集脾、淋巴结核全血并如下加工：
脾和淋巴结被加工成单细胞悬液，随后离解组织并使用20cc注射器柱塞推过70μm无菌丝网(Fisher)。细胞被收集在无huIL-6但含有低葡萄糖的上述修饰的RPMI培养基中。细胞通过离心洗涤两次。在最后一次洗涤之后，细胞密度通过台盼蓝测定。细胞以1500rpm离心10分钟；弃掉上清液。细胞重悬于适当体积的FBS(Hyclone)中10%二甲亚砜(DMSO,Sigma)并以1mL/管形瓶分配。然后将管形瓶在放入液氮(LN2)罐长期贮存之前在-70℃贮存24小时。
外周血单核细胞(PBMC)通过混合全血与等份的不含FBS的上述低葡萄糖培养基混合来分离。35mL全血混合物被小心分层在8mLLympholyte兔(Cedarlane)上45mL圆锥管(Corning)中，并在室温下2500rpm连续离心30分钟。离心后，使用玻璃Pasteur移液管(VWR)小心移出PBMC层，合并，并放入清洁的50mL管形瓶。细胞通过在1500rpm室温离心10分钟用上述修饰培养基洗涤两次，通过台盼蓝染色测定细胞密度。最后一次洗涤之后，细胞重悬于适当体积的10%DMSO/FBS培养基并如上所述冷冻。
B细胞培养
在建立B细胞培养物当天，PBMC、脾细胞或淋巴结管形瓶被解冻待用。从LN2罐取出管形瓶并放入37℃水浴，直至解冻。管形瓶内容物被转移入15mL圆锥形离心管(Corning)，10mL上述修饰的RPMI被缓慢添加至管。细胞在1.5K rpm离心5分钟，弃掉上清液。细胞被重悬于10mL新鲜培养基。通过台盼蓝测定细胞密度和存活。细胞被再次洗涤并以1E07细胞/80μL培养基重悬。生物素化的huIL-6(B huIL-6)以最终浓度被添加至细胞悬液，并在4℃孵育30分钟。未结合的B huIL-6通过两次10mL磷酸盐缓冲的(PBF):无Ca/Mg PBS(Hyclone)、2mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5%牛血清白蛋白(BSA)(Sigma-biotin free)洗涤而被去除。在第二次洗涤之后，细胞以1E07细胞/80μLPBF重悬。20μL MACS链霉亲和素珠(Milteni)/10E7细胞被添加至细胞悬液。细胞在4℃孵育15分钟。细胞用2mL PBF/10E7细胞洗涤一次。洗涤之后，细胞以1E08细胞/500μLPBF重悬并静置。MACS
Figure BDA00001909859701903
MS柱(Milteni)用500ml PBF在磁性台架(Milteni)上预先洗涤。细胞悬液通过预滤器被添加至柱，收集未结合的级分。柱用1.5mL PBF缓冲液洗涤。柱从磁性台架去除并放在清洁的无菌5mL聚丙烯Falcon管上。1mL PBF缓冲液被添加至柱顶端，收集阳性选择的细胞。阳性和阴性细胞级分的产率和存活通过台盼蓝染色测定。阳性选择产生平均1%的起始细胞浓度。
建立试点细胞筛选以提供有关培养接种水平的信息。三个10-板组(共30个板)以50、100和200富集B细胞/孔接种。此外，每个孔含有50K细胞/孔的受辐射的EL-4.B5细胞(5,000Rad)和高葡萄糖修饰的RPMI培养基中适当水平的T细胞上清液(范围从1-5%，取决于制备)，最终体积为250μL/孔。培养物在37℃、4%CO2中孵育5至7天。
选择性抗体分泌B细胞的鉴定
在第5至7天测试培养物的抗原识别和功能活性。
抗原识别筛选
使用的ELISA形式如上所述，除了使用来自B细胞培养物(BCC)孔(所有30个板)的50μL上清液用作抗体源。条件培养基被转移至抗原涂覆板。鉴定阳性孔之后，取出上清液并转移至96孔主板。然后通过取出所有上清液(除了40μL/孔)并添加60μL/孔的FBS中的16%DMSO来冷冻最初的培养板。将板包在纸巾中以缓慢冷冻并放在-70℃。
功能活性筛选
然后在如上所述T1165增殖分析中筛选主板的功能活性，除了B行是仅用于背景对照的培养基，C行是用于阳性增殖对照的培养基+IL-6，D-G行和2-11列是来自BCC的细胞(50μL/孔，单点)。40μLIL-6被添加至所有孔，除了在分析测定的2.5倍EC50浓度时的培养基行。1h孵育之后，Ab/Ag复合物被转移至组织培养物(TC)处理的96孔平底板。20μL无huIL-6的修饰RPMI培养基中的细胞悬液(T1165，20,000细胞/孔)被添加至所有孔(100μL终体积每孔)。减去背景，观察到的OD值被转化成%抑制。
B细胞回收
含有目标孔的板从-70℃取出，每个孔的细胞用5-200μL洗涤培养基/孔回收。洗液收集在1.5mL无菌离心管中，细胞在1500rpm沉淀2分钟。
倒置管，重复旋转，小心除去上清液。细胞重悬于100μL/管培养基。稀释1:100于培养基中的100μL生物素化的IL-6涂覆的链霉亲和素M280 dynabeads(Invitrogen)和16μL山羊抗兔H&L IgG-FITC被添加至细胞悬液。
除去20μL细胞/珠/FITC悬液，Sigmacote(Sigma)处理之前5μL小滴在载玻片(Corning)上制备，35至40小滴/载玻片。不透水的石蜡油层(JT Baker)被添加以浸没小滴，载玻片在37℃,4%CO2黑暗孵育90分钟。
由于抗体分泌、珠结合的生物素化抗原识别和随后通过荧光-IgG检测试剂的检测，产生抗体的特异性B细胞可以通过围绕其的荧光环鉴定。一经鉴定目标细胞，荧光环中心细胞通过显微操作器(Eppendorf)回收。合成和分泌抗体的单细胞被转移入250μL微量离心管并放入干冰中。回收所有目标细胞后，这些被转移至-70℃以长期保存。
实施例8 酵母细胞表达
抗体基因：知道嵌合人源化兔单克隆抗体的合成的基因被克隆和构建。
表达载体：载体含有下述功能组分：1)突变的ColE1复制起点，其促进质粒载体在细菌大肠杆菌细胞中的复制；2)细菌Sh ble基因，其赋予拮抗生素ZeocinTM(腐草霉素)的抗性并用作大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母转化的选择标记；3)表达盒由甘油醛脱氢酶基因(GAP基因)启动子组成，所述启动子与编码酿酒酵母α交配因子前原分泌前导序列的序列融合，随后是编码来自巴斯德毕赤酵母醇氧化酶I基因(AOX1)的巴斯德毕赤酵母转录终止信号的序列。ZeocinTM(腐草霉素)抗性标记基因提供了富集含有菌株中多个整合拷贝的表达载体的菌株的方式，通过选择对高水平ZeocinTM(腐草霉素)抗性的转化子。
巴斯德毕赤酵母菌株：可以使用巴斯德毕赤酵母菌株met1、lys3、ura3和ade1。尽管任何两个补充组的营养缺陷型菌株可以用于构建和维持二倍体菌株，但这两种菌株特别适合该方法，原因有两个。首先，它们比二倍体菌株生长更缓慢，因为它们交配或融合。因此，如果小量单倍体ade1或ura3细胞保持存在于培养物中或者通过减数分裂或其它机制产生，二倍体菌株应该在培养中超过它们。
第二，容易监测这些菌株的性状态，因为从其交配产生的二倍体Ade+菌落是正常白色或奶油色的，而是单倍体ade1突变体的任何菌株的细胞将形成具有独特粉红色的菌落。此外，是单倍体ura3突变体的任何菌株对药物5-氟-乳清酸(FOA)是抗性的，并且可以通过在含有FOA的基本培养基+尿嘧啶平板上涂布培养物样品来灵敏地鉴定。在这些平板上，仅需要尿嘧啶的ura3突变体(推测是单倍体)菌株可以生长并形成菌落。因此，对于用ade1和ura3标记的蛋白体亲本菌株，可以容易地监测得到的抗体生成二倍体菌株的性状态(单倍体与二倍体)。
方法
用于转录轻链和重链抗体基因的pGAPZ-α表达载体的构建。人源化轻链和重链片段通过PCR指导的过程被克隆入pGAPZ表达载体。回收的人源化构建体在标准KOD聚合酶(Novagen)试剂盒条件((1)94℃,2分钟；(2)94℃,30秒(3)55℃,30秒;(4)72℃,30秒-步骤2-4循环35次;(5)72℃ 2分钟)下进行扩增，采用下述引物(1)轻链正向AGCGCT GCTATCCAGATGACCCAGTC-AfeI位点加单条下划线。HAS信号序列的末端加双下划线，随后是成熟可变轻链的序列(未加下划线)；反向CGTACGTTTGATTTCCACCTTG。
可变轻链可逆引物。BsiWI位点加下划线，随后是可变轻链3’末端的逆向互补。用AfeI和BsiWI限制酶消化后，这实现pGAPZ载体的框内插入，使用与用于分泌的人kapp轻链恒定区符合读框的人HAS前导序列。(2)对重链进行类似的策略。采用的正向引物是AGCGCT
Figure BDA00001909859701932
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTC。AfeI位点加单下划线。HAS信号序列末端加双下划线，随后是成熟可变重链的序列(未加下划线)。反向重链引物是CTCGAGACGGTGACGAGGGT。XhoI位点未加下划线，随后是可变重链3’末端的逆向互补。这实现与之前插入pGAPZ的IgG-γ1CH1-CH2-CH3区符合读框的重链的克隆，使用相当的定向克隆策略。
表达载体转化入巴斯德毕赤酵母的单倍体ade1ura3、met1和lys3宿主菌株。用于转化单倍体巴斯德毕赤酵母菌株和遗传操作巴斯德毕赤酵母性循环的所有方法如在Higgins,D.R.,and Cregg,J.M.,Eds.1998.Pichia Protocols.Methods in Molecular Biology.Humana Press,Totowa,NJ.中描述。
在转化之前，每个表达载体在GAP启动子序列中是线性化的，AvrII指导载体插入巴斯德毕赤酵母基因组的GAP启动子基因座。然后，每个载体样品通过电穿孔被单独转化入ade1、ura3、met1和lys3菌株的电感受态培养物，成功的转化子通过它们拮抗生素的抗性在YPD ZeocinTM(腐草霉素)板上划线。选择得到的克隆，在YPDZeocinTM(腐草霉素)板上挑选单菌落，然后通过对从适当目标抗体基因的每个菌株提取的基因组DNA的PCR分析和/或通过每个菌株通过菌落转移/免疫印迹方法合成抗体链的能力检查抗体基因插入物的存在(Wung等.Biotechniques 21 808-812(1996)。表达三个重链构建体之一的单倍体ade1、met1和lys3菌株被收集用于与表达轻链基因的单倍体ura3菌株一起进行二倍体构建。表达重链基因的单倍体与适当的轻链单倍体ura3交配以产生二倍体分泌蛋白。
合成单一抗体链的单倍体菌株的交配和合成四聚体功能抗体的二倍体衍生物的选择。为了交配巴斯德毕赤酵母单倍体菌株，待杂交的每个ade1(或met1或lys3)重链生成菌株在富集YPD板上划线，ura3轻链生成菌株在第二YPD板上划线(～10划线/板)。在30℃孵育1天或2天后，来自含有重链菌株的一个板和含有ura3轻链菌株的一个板的细胞被转移至交叉孵化模式的复制平板培养块上的无菌绒布，使得每个重链菌株含有与每个轻链菌株混合的一批细胞。交叉划线复制平板培养的细胞然后被转移至交配板并在25℃孵育以刺激菌株间交配的开始。2天后，交配板上的细胞再次被转移至复制平板培养块上的无菌绒布，然后转移至基本培养基平板。这些平板在30℃孵育3天以允许原养型二倍体菌株的菌落的选择性生长。产生的菌落被挑取并划线在第二基本培养基平板上以单菌落分离和纯化每个二倍体菌株。然后检查得到的二倍体细胞系的抗体生成。
测试推测的二倍体菌株以证明它们是二倍体并且含有抗体生成的两个表达载体。对于二倍体，菌株样品涂布在交配平板上以刺激它们进行减数分裂并形成孢子。单倍体孢子产物被收集并测试表型。如果得到的孢子产物的显著百分比是单一或双重营养缺陷型，可以得出结论：最初的菌株必须已经是二倍体。通过从每个提取基因组DNA并在对每个基因特异性的PCR反应中利用该DNA，检查二倍体菌株中两个抗体基因的存在。
合成单一抗体链的单倍体菌株的融合和合成四聚体功能抗体的二倍体衍生物的选择。作为上述交配程序的替代，产生单倍体ade1和ura3菌株的单链抗体的单一培养物被原生质体化，它们得到的原生质体使用聚乙二醇/CaCl2融合。然后，融合的单倍体菌株被嵌入含有1M山梨醇和基本培养基的琼脂中以允许二倍体菌株再生其细胞壁并生长成可见的菌落。得到的菌落从琼脂上挑取并划线在基本培养基平板上，平板在30℃孵育两天以产生二倍体细胞系单细胞菌落。然后如上所述检测得到的推测的二倍体细胞系的二倍体性和抗体生成。
抗体的纯化和分析。产生全长抗体的二倍体菌株通过使用上述方法交配met1轻链和lys3重链来衍生。来自二倍体巴斯德毕赤酵母表达菌株的摇瓶和发酵罐培养物的培养基被收集并通过SDS-PAGE和免疫印迹检查抗体蛋白的存在，使用针对人IgG重链和轻链或者特别是针对IgG重链的抗体。
为了纯化酵母分泌的抗体，来自抗体生成培养物的澄清培养基被通过蛋白A柱，用20mM磷酸钠,pH 7.0,结合缓冲液洗涤之后，蛋白A结合蛋白使用0.1M甘氨酸HCl缓冲液,pH 3.0洗脱。含有大多数总蛋白的级分通过Coomasie蓝染色的SDS-PAGE和抗体蛋白免疫印迹来检查。使用上述用于IL-6识别的ELISA鉴定抗体。
抗体活性分析。通过上述IL-6驱动的T1165细胞增殖分析和IL-6刺激的HepG2触珠蛋白分析来评价重组酵母衍生的人源化抗体的功能活性。
实施例9 通过静脉内施用抗IL-6抗体Ab1的急性期应答中和
人IL-6可以激发大鼠的急性期应答，并且在大鼠中被刺激的主要急性期蛋白之一是α-2巨球蛋白(A2M)。设计研究以评估消除针对单次s.c.注射100μg人IL-6的A2M应答所需的抗体Ab1的剂量，100μg人IL-6在作为对照而静脉内施用的不同剂量(0.03、0.1、0.3、1和3mg/kg)抗体Ab1(n=10大鼠/剂量水平)或多克隆人IgG1(n=10大鼠)之后1小时给予。血浆被回收，通过商业夹心ELISA试剂盒(ICL Inc.,Newberg OR;目录号-E-25A2M)定量A2M。终点是在24小时时间点(Ab1后)的A2M血浆浓度差异。结果显示于图4。
抗体Ab1的ID50是0.1mg/kg，在0.3mg/kg时完全抑制A2M应答。这有力说明，人IL-6的体内中和可以由抗体Ab1完成。
实施例10 RXF393恶病质模型研究1
前言
人肾细胞癌细胞系RXF393当移植入无胸腺裸小鼠时产生显著的重量减轻。重量减轻开始于移植后约第15天，所有动物的80%在移植后第18-20天总体重减轻至少30%。RXF393分泌人IL-6，并且这些动物中人IL-6的血浆浓度非常高，约10ng/mL。人IL-6可以结合鼠可溶性IL-6受体并激活小鼠中的IL-6应答。人IL-6在小鼠中激活IL-6应答的效力比鼠IL-6低大约10倍。该研究的目的是确定抗体Ab1对用人肾细胞癌细胞系RXF393移植的无胸腺小鼠的存活、体重、血清淀粉样蛋白A蛋白、血液学参数和肿瘤生长的影响。
方法
80只6周大的雄性无胸腺裸小鼠在右肋腹皮下植入RXF393肿瘤片段(30-40mg)。然后将动物分成八组，每组10只小鼠。三组在移植后第1天、第8天、第15天和第22天每周静脉内给予3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg的抗体Ab1(进展组)。另外三组在移植后第8天、第15天和第22天每周静脉内给予3mg/kg或10mg/kg或30mg/g的抗体Ab1(回归组)。最后，一个对照组被给予多克隆人IgG 30mg/kg，第二对照组被给予磷酸盐缓冲盐水，在移植后第1天、第8天、第15天和第22天每周静脉内给予。
动物在第28天肿瘤达到4,000mm3或者动物变得虚弱(>30%体重减轻)时被安乐死。动物在第1、6天称重，然后在移植后第9至28天每天称重。平均百分比体重(MPBW)被用作研究期间监测体重减轻的主要参数。计算如下：(体重-肿瘤重量)/基线体重x100。在移植后第1、6、9、12、15、18、22、25和28天测量肿瘤重量。在第5和13天从每组5只小鼠麻醉下取血，并且在安乐死时从每组所有10只小鼠取血(在大多数情况下第28天)。分析血液的血液学和血清淀粉样蛋白A蛋白(SAA)浓度。额外组的10只非肿瘤携带6周龄无胸腺雄性裸小鼠被取血样用于血液学和SAA浓度评估以用作基线值组。
结果-存活
在第28天研究结束日之前，在抗体Ab1组的任何一个中没有动物被安乐死或死亡。在两个对照组中，发现15只动物(多克隆人IgG组中7/9，和磷酸盐缓冲盐水组中8/10)死亡，或者因为它们非常虚弱(>30%体重减轻)而被安乐死。两个对照组中的中值存活时间是20天。
两个对照组和抗体Ab1进展(研究第1天给药)组的存活曲线显示于图5。
两个对照组和抗体Ab1进展(研究第8天给药)组的存活曲线显示于图6。
多克隆人IgG(p=0.0038)和磷酸盐缓冲盐水(p=0.0003)对照组的存活曲线与六个抗体Ab1组的存活曲线之间存在统计学上显著的差异。两个对照组之间没有统计学上显著的差异(p=0.97)。
结果-肿瘤尺寸
通过触诊评估存活小鼠的肿瘤尺寸。对于研究的前15天，没有发现任何组的小鼠死亡或被安乐死，因此，这些天组间肿瘤尺寸的比较没有取样偏差。经过第15天，在抗体Ab1进展组或回归组与对照组之间没有观察到肿瘤尺寸差异。在对照中出现死亡(第15天)之后，不进行对照组和治疗组中存活小鼠之间肿瘤尺寸的比较，因为存活对照小鼠肿瘤尺寸被假定为是偏差的，因此，此类比较的结果是没有意义的。
由于施用抗体Ab1促进了存活而对肿瘤尺寸无明显减少，升高的血清IL-6可以促进经由不依赖于肿瘤生长的机制的死亡。这些发现支持了如下假设：抗体Ab1可以促进癌症患者存活而不直接影响肿瘤生长，可能是通过增强患者的总体健康状况。
结果-体重减轻
平均百分比体重(MPBW)(±SEM)与时间显示于图27。与对照相比，施用Ab1的小鼠被防止体重减轻。在第18天，对照小鼠中MPBW是75%，对应于25%的平均体重减轻。相反，在同一天，Ab-1治疗组中的MPBW改变最小(97%至103%)。对照组(接受多克隆人IgG或PBS)与10mg/kg剂量组(p<0.0001)或3mg/g和30mg/g剂量组(p<0.0005)的MPBW曲线之间存在统计学上显著的差异。两个对照组之间无统计学上显著的差异。
对照和Ab1治疗小鼠的代表性照片(图28)描绘了在研究结束时对照小鼠的瘦弱状况，与Ab1治疗小鼠的正常外观相比较(注意，在右肋腹外部可见肿瘤部位)。
这些结果表明，Ab1可用于预防或治疗在人中由升高的IL-6引起的恶病质。
结果-血浆血清淀粉样蛋白A
两个对照组和抗体Ab1进展组(在研究第1天给药)和回归组(在研究第8天给药)的平均(±SEM)血浆血清淀粉样蛋白A浓度与时间显示于表5并且图解于图32。
表5:平均血浆SAA-抗体Ab1，所有组与对照组
Figure BDA00001909859701991
SAA通过刺激hIL-6被上调，该应答与源于植入肿瘤的hIL-6的循环水平正相关。替代标记提供了活性hIL-6的间接读数。因此，在上述两个治疗组中，由于肿瘤衍生hIL-6的中和，SAA水平显著下降。这进一步支持了抗体Ab1展示体内效力的观点。
实施例11 RXF393恶病质模型研究2
前言
第二研究在RXF-393恶病质模型中进行，其中用抗体Ab1治疗开始于较后阶段(移植后第10和13天)，具有更延长的治疗期(移植后超过49天)。抗体Ab1给药间隔从7天缩短至3天，还每天测量食物消耗。还试图在用抗体Ab1开始给药时标准化肿瘤尺寸。
方法
80只6周大的雄性无胸腺裸小鼠在右肋腹皮下植入RXF393肿瘤片段(30-40mg)。肿瘤达到270-320mg大小的20只小鼠被选择并分成两组。从那个时间点(移植后第10天)，一组每三天i.v.接受10mg/kg的抗体Ab1，另一组每三天接受10mg/g的多克隆人IgG 10。肿瘤尺寸达到400-527mg大小的另外20只小鼠被选择并分成两组。从那个时间点(移植后第13天)，一组每三天i.v.接受10mg/kg的抗体Ab1，另一组每三天接受10mg/kg的多克隆人IgG 10。剩余的40只小鼠不进一步参与研究并且在第49天肿瘤达到4,000mm3或者变得非常虚弱时(>30%体重减轻)被安乐死。
从移植后第1天至第49天，每3-4天称重动物。平均百分比体重(MPBW)被用作研究期间监测体重减轻的主要参数。计算如下：(体重-肿瘤重量)/基线体重x100。在移植后第5至49天每3-4天测量肿瘤重量。对于270-320mg肿瘤组从第10天，并且对于400-527mg肿瘤组从第13天，每天测量食物消耗(按重量计，每个治疗组在24小时内消耗的量(g))。
结果-存活
每三天i.v.10mg/kg抗体Ab1的存活曲线(270-320mg肿瘤尺寸)和每三天i.v.10mg/kg多克隆人IgG 10的存活曲线(270-320mg肿瘤尺寸)示于图7。
每三天i.v.10mg/kg抗体Ab1的中值存活(270-320mg肿瘤尺寸)是46天，每三天i.v.10mg/kg多克隆人IgG 10的中值存活(270-320mg肿瘤尺寸)是32.5天(p=0.0071)。
每三天i.v.10mg/kg抗体Ab1的存活曲线(400-527mg肿瘤尺寸)和每三天i.v 10mg/kg多克隆人IgG 10的存活曲线(400-527mg肿瘤尺寸)显示于图8。每三天i.v.10mg/kg抗体Ab1的中值存活(400-527mg肿瘤尺寸)是46.5天，每三天i.v.10mg/kg多克隆人IgG 10的中值存活(400-527mg肿瘤尺寸)是27天(p=0.0481)。
实施例12 非人灵长类中多剂量药代动力学评估抗体Ab1
抗体Ab1在磷酸盐缓冲盐水中以单次浓注施用给单个雄性和单个雌性食蟹猴。以固定的时间间隔取出血浆样品，通过使用抗原捕获ELISA测定定量抗体Ab1水平。生物素化的IL-6(50μl 3μg/mL)被捕获在链霉亲和素涂覆的96孔微量滴定板上。该板经洗涤并用0.5%鱼皮明胶封闭。添加适当稀释的血浆样品并在室温孵育1小时。除去上清液，应用抗hFc-HRP结合的第二抗体并在室温静置。
然后抽吸板并添加TMB以显示抗体的量。然后通过使用标准曲线确定特定水平。在第35天施用第二剂量的抗体Ab1至相同的两个食蟹猴并使用相同的取样方案重复实验。然后将得到的浓度对时间绘图，如图9所示。
该人源化全长非糖基化抗体表达和纯化的巴斯德毕赤酵母展示出与哺乳动物表达的蛋白相当的特征。此外，该产物的多剂量展示出可再现的半衰期，推论该生产平台不产生展示出增强的免疫原性的产物。
实施例13 抗体蛋白的Octet机理表征(Octet MechanisticCharacterization)
IL-6信号传导取决于IL-6和两个受体IL-6R1(CD126)和gp130(IL-6信号转导物)之间的相互作用。为了测定抗体作用机制，使用生物层干涉量度法进行机理研究，使用Octet QK仪器(ForteBio;MenloPark,CA)。以两种不同的配置进行研究。在第一方向，生物素化的IL-6(R&D systems件号206-IL-001MG/CF，使用Pierce EZ-linksulfo-NHS-LC-LC-生物素产品号21338根据生产商方案生物素化)初始被结合至链霉亲和素涂覆的生物传感器(ForteBio件号18-5006)。结合被监测为信号增加。
然后，结合至传感器的IL-6与相关抗体或仅稀释溶液孵育。然后，传感器与可溶性IL-6R1(R&D systems产品号227-SR-025/CF)分子孵育。如果IL-6R1分子未能结合，则认为抗体阻断了IL-6/IL-6R1相互作用。这些复合物与gp130(R&D systems 228-GP-010/CF)在IL-6R1存在下孵育以便稳定。如果gp130未结合，则得出结论：抗体阻断gp130与IL-6的相互作用。
在第二方向，抗体与抗人IgG1 Fc-特异性试剂(ForteBio件号18-5001)涂覆的生物传感器结合。IL-6与固定化抗体结合，传感器与IL-6R1孵育。如果IL-6R1不与IL-6相互作用，则得出结论：IL-6结合抗体阻断IL-6/IL-6R1相互作用。在其中观察到抗体/IL-6/IL-6R1的那些情况下，复合物与gp130在IL-6R1存在下孵育。如果gp130未相互作用，则得出结论：抗体阻断了IL-6/gp130相互作用。所有研究在200μL终体积、30C和1000rpm下进行。对于这些研究，所有蛋白使用ForteBio的样品稀释缓冲液(件号18-5028)稀释。
结果示于图10(A-E)和图11。
实施例14 肽定位
为了确定人IL-6上由Ab1识别的表位，抗体被用于蛋白质印迹分析。该实施例中使用的人IL-6形式具有长度为183氨基酸的序列(下示)。涵盖该序列的重叠的15氨基酸肽的57-成员文库被商业化合成并共价结合至PepSpots硝酸纤维素膜(JPT Peptide technologies,Berlin,Germany)。重叠的15氨基酸肽的序列显示于图12且对应于SEQ IDNOs:590-646。制备印迹并根据生产商推荐进行探测。
简言之，印迹在甲醇用预湿润，PBS中冲洗，并在PBS/0.05%Tween中10%脱脂乳(封闭溶液)中封闭超过2小时。Ab1抗体以1mg/mL最终稀释使用，HRP结合的小鼠抗人-κ第二抗体(SouthernBioTech #9220-05)以1:5000稀释使用。抗体稀释/孵育在封闭溶液中进行。使用Amersham ECL advance试剂(GE#RPN2135)对印迹显色并使用CCD相机(AlphaInnotec)记录化学发光信号。印迹结果显示于图13和图14。
用于产生肽文库的人IL-6形式的序列如下：
VPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM(SEQ ID NO:1).
实施例15 Ab1对IL-6具有高亲和力
使用表面等离子共振测量Ab1在25℃对来自大鼠、小鼠、狗、人和食蟹猴的解离速率缔合速率(Ka)、解离速率(Kd)和解离常数(KD)(图15A)。人IL-6的解离常数是4pM，指示非常高的亲和力。如期望的，亲和力一般随与人的进化距离下降。Ab1对食蟹猴、大鼠和小鼠的IL-6的解离常数分别是31pM、1.4nM和0.4nM。Ab1对狗IL-6的亲和力低于实验的定量限。
Ab1对小鼠、大鼠和食蟹猴的高亲和力表明，Ab1可用于抑制这些物种的IL-6。这种假设使用细胞增殖分析测试。简言之，每个物种的IL-6被用于刺激T1165细胞的增殖，测量了Ab1可以抑制50%增殖(IC50)的浓度。抑制与测量的解离常数相一致(图15B)。这些结果说明，Ab1可以抑制这些物种的天然IL-6，并且表明这些生物体用于体外或体内模拟Ab1抑制IL-6的用途。
实施例16 在健康人志愿者中多剂量药代动力学评估抗体Ab1
抗体Ab1在组胺和山梨醇中以单次浓注施用给健康人志愿者。在包括5至6个个体的剂量组中，1mg、3mg、10mg、30mg或100mg剂量被施用给每个个体。以固定的时间间隔取出血浆样品，持续达12周。通过静脉穿刺将血浆收集到含有EDTA的真空收集管中。准备血浆并用于评估Ab1的循环水平，使用如下针对Ab1的单克隆抗体。96孔微量滴定板用针对Ab1的单克隆抗体在1X PBS中4℃涂覆过夜。其余步骤在室温进行。孔被抽气并随后使用在1X PBS中的0.5%鱼皮明胶(FSG)(Sigma)封闭60分钟。然后添加人血浆样品并孵育60分钟，然后抽气，然后向每个孔添加50μL 1μg/mL生物素化的IL-6并孵育60分钟。对孔抽气，并添加在0.5%FSG/PBS中稀释1:5,000的50μL链霉亲和素-HRP(Pharmingen)，并孵育45分钟。使用标准方法进行显色，采用TMB用于检测。然后通过与以相当形式制作的标准曲线比较来测定水平。
每个剂量组的Ab1的平均血浆浓度与时间显示于图16。平均AUC和Cmax随剂量线性增加(分别为图17和图18)。对于30mg及以上剂量，每个剂量组中平均Ab1半衰期在大约25天与30天之间(图19)。
实施例17 晚期癌症患者中Ab1的药代动力学
抗体Ab1在磷酸盐缓冲盐水中以单次浓注施用给五个晚期癌症个体。每个个体接受80mg(n=2)或160mg(n=3)剂量的Ab1。每周抽取血浆样品，如实施例16定量抗体Ab1的水平。
这些个体中Ab1的平均血浆浓度作为时间的函数显示于图20。平均Ab1半衰期为大约31天。
实施例18 Ab1的无先例的半衰期
总之，Ab1的平均半衰期在人中为大约31天(对于10mg及以上剂量)，在食蟹猴中为大约15-21天。当与其它抗IL-6抗体的半衰期比较时，在人和食蟹猴中的Ab1半衰期是无先例的(图21)。如上所述，Ab1源自兔抗体的人源化，并且以非糖基化形式从巴斯德毕赤酵母产生。这些特征导致在人中具有非常低的免疫原性的抗体。而且，糖基化的缺乏防止Ab1与Fc受体或补体相互作用。不想受理论束缚，认为Ab1的无先例的半衰期至少部分归因于人源化和/或糖基化的缺乏。抗原结合表面的特定序列和/或结构也可以归因于Ab1的半衰期。
实施例19 Ab1对晚期癌症患者中血红蛋白浓度、血浆脂质浓度和中性粒细胞计数的影响
抗体Ab1在磷酸盐缓冲盐水中以单次浓注施用给八个晚期癌症(NSCLC、结肠直肠癌、胆管癌或间皮瘤)个体。每个个体接受80mg、160mg或320mg剂量的Ab1。在输注之前和固定时间间隔取血样，持续六周，并测定血红蛋白浓度、血浆脂质浓度和中性粒细胞计数。平均血红蛋白浓度略微升高(图22)，总胆固醇和甘油三酸酯也略微升高(图23)，而平均中性粒细胞计数略微下降(图24)。
这些结果进一步说明给慢性疾病个体施用Ab1的有益效应。因为IL-6是负责慢性疾病贫血症(包括癌症相关贫血症)的主要细胞因子，Ab1对IL-6的中和增加了这些个体中的血红蛋白浓度。类似地，因为IL-6在增加炎症中性粒细胞计数中非常重要，观察到的中性粒细胞计数的略微减少进一步证实Ab1抑制IL-6。最后，IL-6导致这些患者中的厌食症和恶病质；Ab1对IL-6的中和导致食欲恢复和恶病质逆转。血浆脂质浓度的增加反映了患者改善的营养状态。总结起来，这些结果进一步说明Ab1有效逆转这些患者中IL-6的这些负面结果。
实施例20 Ab1抑制健康志愿者和晚期癌症患者的血清CRP
前言
血清CRP浓度已经被鉴定为某些形式癌症患者的有效预后指标。例如，Hashimoto等人对肝细胞癌患者进行了手术前血清CRP浓度的单变量和多变量分析，以鉴定影响存活和疾病复发的因素(Hashimoto,K.,等.,Cancer,103(9):1856-1864(2005))。患者被分成两组，血清CRP水平>1.0mg/dL的那些(“CRP阳性组”)和血清CRP水平<1.0mg/dL的那些(“CRP阴性组”)。作者鉴定了“手术前血清CRP水平和肿瘤尺寸之间的显著相关”，同上。而且，作者发现，“CRP阳性组中总存活率和无复发存活率与CRP阴性组中的总存活率和无复发存活率相比显著降低，同上。作者得出结论：患者的手术前CRP水平是肝细胞癌患者中差预后和早期复发的独立和显著的预测指标。
其他研究者已经鉴定了类似的相关性。例如，Karakiewicz等人确定了血清CRP是肾细胞癌特异性死亡率的独立且信息性指标(Karakiewicz,P.I.,等.,Cancer,110(6):1241-1247(2007))。因此，现有技术需要减少癌症患者、特别是晚期癌症患者的血清C反应蛋白(CRP)浓度的方法和/或治疗。
方法
健康志愿者接受单次1小时静脉内(IV)输注100mg(5患者)、30mg(5患者)、10mg(6患者)、3mg(6患者)或1mg(6患者)的Ab1单克隆抗体，而另外14个健康志愿者接受静脉内安慰剂。比较而言，具有晚期结肠直肠癌的2例患者接受了单次1小时静脉内(IV)输注80mg Ab1单克隆抗体。没有额外剂量的Ab1单克隆抗体被施用给测试群。
在剂量施用之前评价患者，然后每周评价，持续给药后至少5周。在每次评价时，根据血清CRP浓度筛选患者。
结果
健康志愿者
如上所述，血清CRP水平是炎症标志，因此，基线CRP水平在健康个体中通常是低的。低基线CRP水平可以进一步降低CRP水平难以检测。而且，与对照相比，血清CRP浓度的明显降低在接受所有浓度的Ab1单克隆抗体的健康志愿者中是可检测的(图25)。血清CRP水平的降低是快速的，在抗体施用的一周内发生，并且是延长的，持续至进行最后一次测量(抗体施用后8或12周)
癌症患者
具有升高的血清CRP水平的5例晚期癌症患者(结肠直肠癌、胆管癌、或NSCLC)被施用80mg或160mg Ab1。血清CRP水平在这些患者中被大大降低(图26A)。血清CRP水平的降低是快速的，90%降低发生在Ab1施用一周内，并且是延长的，持续至少至进行最后一次测量(达12周)。两个代表性个体的CRP水平显示于图26B。在那些个体中，CRP水平在一周内被降低至低于正常参考范围(低于5-6mg/l)。因此，施用Ab1给晚期癌症患者可以导致血清CRP水平的快速和持续抑制。
实施例21 在晚期癌症患者中提高了肌强度、增加了体重并减少了疲劳
前言
体重减轻和疲劳(和伴随的肌肉无力)是晚期癌症患者常见的症状，并且这些症状可以随着癌症的继续进展而恶化。疲劳、体重减轻和肌肉无力可以对晚期癌症患者的恢复具有显著的负面影响，例如通过扰乱生活方式和关系并影响患者继续癌症治疗的意愿或能力。解决疲劳、体重减轻和肌肉无力的已知方法包括定期例行的适应和锻炼，保存患者能量的方法，和解决贫血症诱导的疲劳和肌肉无力的治疗。然而，本领域需要改善癌症患者中疲劳、体重减轻和肌肉无力的方法和/或治疗。
方法
晚期癌症(结肠直肠癌患者(2),NSCLC(1),胆管癌(1)接受单次1小时静脉内(IV)输注80mg或160mgAb1单克隆抗体。没有额外剂量的Ab1单克隆抗体被施用给测试群。
患者在剂量施用之前和给药后至少6周被评估。每次评估时，根据以下筛选患者：a.)体重的任何改变；b.)疲劳，使用Facit-F疲劳子量表问卷(用于评估疲劳的医学公认测试)测量(参见,例如,Cella,D.,Lai,J.S.,Chang,C.H.,Peterman,A.,& Slavin,M.(2002).Fatigue incancer patients compared with fatigue in the general population.Cancer,94(2),528-538;Cella,D.,Eton,D.T.,Lai,F J-S.,Peterman,A.H &Merkel,D.E.(2002).Combining anchor and distribution based methodsto derive minimal clinically important differences on the FunctionalAssessment of Cancer Therapy anemia and fatigue scales.Journal of Pain& Symptom Management,24(6)547-561.)；和手握力(用于评估肌强度的医学公认测试，通常采用手握肌力计)测量。
结果
体重改变
两种剂量浓度(80mg和160mg)的Ab1单克隆抗体的平均数据说明每个患者在6周时段内约2公斤的体重增加(图29)。
疲劳
两种剂量浓度(80mg和160mg)的Ab1单克隆抗体的平均数据说明患者群体在6周时段内平均Facit-F FS子量表分数增加至少约10分(图30)。
手握力
两种剂量浓度(80mg和160mg)的Ab1单克隆抗体的平均数据说明患者群体在6周时段内平均手握力增加至少约10%(图31)。
实施例22 预防血栓形成的Ab1
此前的研究已经表明施用抗IL-6抗体可引起减少的血小板计数。Emilie,D.等,Blood,84(8):2472-9(1994)；Blay等,Int J Cancer,72(3):424-30(1997)。这些结果显然已被视为潜在危险的指标，因为血小板计数进一步减少可引起并发症，如出血。然而，申请人已觉察到，抑制IL-6可恢复正常的凝血状况，申请人预测该恢复将预防血栓形成。由IL-6的抑制引起的减少的血小板计数不是潜在危险的迹象，反而是反映了正常凝血的有利恢复。
正常凝血得以恢复的机制被认为是由IL-6和急性期应答之间的相互影响导致的。应答于升高的IL-6水平，正如在癌症患者体内，肝脏产生急性期蛋白。这些急性期蛋白包括凝血因子，如因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纤维蛋白降解产物、凝血酶-抗凝血酶III复合物、纤维蛋白原、纤溶酶原、凝血酶原和温韦伯氏因子。凝血因子的这一增加可被直接测量或可从凝固能力的功能性测量推断。IL-6拮抗剂如Ab1抑制急性期蛋白，例如，血清淀粉样蛋白A(参见图32和实施例10)。申请人现在预测，急性期蛋白的这种抑制作用将恢复正常的凝血状况，从而预防血栓形成。所述正常凝血的恢复可能引起血小板计数略有下降，但是患者将仍然保持正常凝血能力，因此出血的风险将不会增加。这种治疗相比于现有的抗凝疗法将代表着巨大的进步，现有抗凝疗法的有用性因不良副作用如大出血的风险而受到限制。
申请人料想不管抑制的方法如何，抑制IL-6将会获得相同有利的效果。抑制IL-6的合适的方法包括单独或在组合中施用抗IL-6抗体、反义治疗、可溶的IL-6受体等。
实施例23 Ab1增加了晚期癌症患者的血浆白蛋白浓度
前言
血清白蛋白浓度被公认为癌症患者存活和/或恢复成功的预测指标。低白蛋白血症与许多癌症形式的差的患者表现强相关。例如，在一个研究中，经历转移性胰腺癌系统化疗并且血清白蛋白水平低于3.5g/dL的患者没有成功应答系统化疗(Fujishiro,M.,等.,Hepatogastroenterology,47(36):1744-46(2000))。作者得出结论：“…低白蛋白血症患者…可能不是系统化疗的适当候选并且可能用其它实验方法或支持性疗法治疗。”同上。
类似地，Senior和Maroni表示“低白蛋白血症是晚期肾病最有效预测的最近评价凸显了确保该患者群体中充分蛋白摄取的重要性。”(J.R.Senior and B.J.Maroni,Am.Soc.Nutr.Sci.,129:313S-314S(1999))。
在至少一个研究中，通过每天静脉内输注20g白蛋白直至达到正常血清白蛋白水平(>3.5g/dL)来矫正27例转移癌患者的低白蛋白血症的尝试收效甚微。作者指出“白蛋白输注在临床实践中对于晚期癌症患者具有有限的价值。PS4和低白蛋白血症患者具有较差的预后。”(Demirkazik,A.,等.,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.,21:Abstr 2892(2002))。
因此，本领域依然需要提高癌症患者血清白蛋白浓度并解决癌症患者、特别是晚期癌症患者低白蛋白血症状态的方法和/或治疗。
方法
四例晚期癌症患者(结肠直肠癌(2),NSCLC(1),胆管癌(1)接受单次1小时静脉内(IV)输注80mg或160mg Ab1单克隆抗体。没有额外剂量的Ab1单克隆抗体被施用给测试群。
患者在剂量施用之前和给药后至少6周被评估。在每次评估时，根据血浆白蛋白浓度筛选患者。
结果
两种剂量浓度(80mg和160mg)的Ab1单克隆抗体的平均数据说明每个患者在6周时段内约5g/L的血浆白蛋白浓度增加(图33)。
实施例24 Ab1抑制晚期癌症患者的血清CRP
前言
血清CRP浓度已经被鉴定为某些癌症形式的患者的强的预后指标。例如，Hashimoto等人进行了肝细胞癌患者中手术前血清CRP浓度的单变量和多变量分析以鉴定影响存活和疾病复发的因素(Hashimoto,K.,等.,Cancer，103(9):1856-1864(2005))。患者被分成两组，血清CRP水平>1.0mg/dL的患者(“CRP阳性组”)和血清CRP水平<1.0mg/dL的患者(“CRP阴性组”)。作者鉴定了“手术前血清CRP水平和肿瘤尺寸之间的显著相关性”同上。而且，作者发现“CRP阳性组中的总存活率和无复发存活率显著低于CRP阴性组。”同上。作者得出结论：患者的手术前CRP水平是肝细胞癌患者差预后和早期复发的独立且显著的预测指标。
其他研究者鉴定了类似相关性。例如，Karakiewicz等人确定，血清CRP是肾细胞癌特异性死亡的独立且信息性指标(Karakiewicz,P.I.,等.,Cancer，110(6):1241-1247(2007))。因此，本领域依然需要降低癌症患者、特别是晚期癌症患者的血清C反应蛋白(CRP)浓度的方法和/或治疗。
方法
非小细胞肺癌(NSCLC)的124例患者被分成四个治疗组。一组患者每8周接受一次1小时静脉内(IV)输注安慰剂(n=31)、80mg(n=29)、160mg(n=32)或320mg(n=32)的Ab1单克隆抗体，持续24周，共3剂。通过C反应蛋白粒子增强的免疫比浊分析来定量CRP浓度，使用乳胶连接的抗CRP抗体(即，Roche CRP Tinaquant
Figure BDA00001909859702121
)。简言之，约1.0mL患者样品血清被收集并贮存在塑料收集管中。将样品放入适当缓冲液，将与乳胶微粒连接的抗CRP抗体添加至样品以起始反应。这些具有结合的乳胶微粒的抗CRP抗体与样品中的抗原反应以形成抗原/抗体复合物。在凝集后，使用Roche/HitachiModular P分析仪比浊测量。
在剂量施用之前、之后第2、4、8和12周评价患者。在每次评价时，根据血清CRP浓度筛选患者。
结果
Ab1单克隆抗体的每个剂量浓度(安慰剂、80mg、160mg和320mg)的平均数据绘于图38。Ab1抗体的所有剂量水平说明在12周时段内CRP浓度相对于安慰剂的立即下降。CRP水平在给药后8周显示突破。CRP水平在第12周下降至5mg/L之下。所有剂量浓度相对于安慰剂而言，CRP的中值表现出快速且持续的下降(图39)。因此，Ab1施用给晚期癌症患者可以导致血清CRP水平的快速且持续抑制。
实施例25 Ab1抑制晚期癌症患者中的血清CRP
前言
已经将血清CRP浓度鉴定为某些癌症形式患者的强的预后指标。例如，Hashimoto等人进行了肝细胞癌患者中手术前血清CRP浓度的单变量和多变量分析以鉴定影响存活和疾病复发的因素(Hashimoto,K.,等.,Cancer，103(9):1856-1864(2005))。患者被分成两组，血清CRP水平>1.0mg/dL的患者(“CRP阳性组”)和血清CRP水平<1.0mg/dL的患者(“CRP阴性组”)。作者鉴定了“手术前血清CRP水平和肿瘤尺寸之间的显著相关性”同上。而且，作者发现“CRP阳性组中的总存活率和无复发存活率显著低于CRP阴性组。”同上。作者得出结论：患者的手术前CRP水平是肝细胞癌患者差预后和早期复发的独立且显著的预测指标。
其他研究者鉴定了类似相关性。例如，Karakiewicz等人确定，血清CRP是肾细胞癌特异性死亡的独立且信息性指标(Karakiewicz,P.I.,等.,Cancer，110(6):1241-1247(2007))。因此，本领域依然需要降低癌症患者、特别是晚期癌症患者的血清C反应蛋白(CRP)浓度的方法和/或治疗。
方法
各种晚期癌症形式的8例患者(结肠直肠癌(3),NSCLC(1),胆管癌(1),和间皮瘤(2))接受单次1小时静脉内输注80mg(2患者)、160mg(3患者)或320mg(3患者)的Ab1单克隆抗体。没有额外剂量的Ab1单克隆抗体被施用给测试群体。
在剂量施用之前评价患者，然后每周评价，持续给药后至少8周。在每次评价时，根据血清CRP浓度筛选患者。通过C反应蛋白粒子增强的免疫比浊分析来定量CRP浓度，使用乳胶连接的抗CRP抗体(即，Roche CRP Tinaquant
Figure BDA00001909859702131
)。简言之，约1.0mL患者样品血清被收集并贮存在塑料收集管中。将样品放入适当缓冲液，将与乳胶微粒连接的抗CRP抗体添加至样品以起始反应。这些具有结合的乳胶微粒的抗CRP抗体与样品中的抗原反应以形成抗原/抗体复合物。在凝集后，使用Roche/Hitachi Modular P分析仪比浊测量。
结果
血清CRP水平在所有被研究的患者中大大降低(图40)。血清CRP水平的降低是快速的，在Ab1施用一周内出现大约90%的减少，并且长期减少的水平持续至少至进行最后一次测量(至12周)。在除了结肠直肠癌患者之外的所有情况下，CRP水平在一周内下降至或低于正常参考范围(小于5-6mg/L)。结肠直肠癌患者在研究的四周内达到类似正常水平。因此，Ab1施用给晚期癌症患者可以导致血清CRP水平的快速且持续抑制。
实施例26 Ab1抑制类风湿性关节炎患者的血清CRP
前言
血清CRP浓度已经被鉴定为类风湿性关节炎患者的强的预后指标。具有高水平CRP的类风湿性关节炎患者表现出几乎普遍的恶化。Amos等.,1 Br.Med.J.195-97(1977)。相反，低CRP水平的患者显示了无疾病进展，表明CRP的持续低水平是有效治疗类风湿性关节炎所必要的。同上。在金、D-青霉胺、氯喹或氨苯砜的类风湿性关节炎治疗方案期间跟踪CRP表明，放射性恶化在治疗的前6个月之后被阻止，期间CRP水平一直受控制。Dawes等.,25 Rheumatology 44-49(1986)。鉴定了CRP生成和放射性进展之间非常显著的相关性。vanLeeuwen等.,32(Supp.3)Rheumatology 9-13(1997)。另一项研究揭示，对于活性类风湿性关节炎患者而言，异常升高的CRP的抑制导致功能测试量度的提高，而持续的CRP升高与相同度量的恶化相关。Devlin等.,24 J.Rheumatol.9-13(1997)。没有观察到进一步的恶化，无CRP再升高，表明CRP抑制为类风湿性关节炎治疗的可行的候选。同上。因此，本领域依然需要减少类风湿性关节炎患者中血清C反应蛋白(CRP)浓度的方法和/或治疗。
方法
活性类风湿性关节炎和CRP≥10mg/L的127例患者被分成四个治疗组。一组患者在16周试验开始时和第8周再次接受一次1小时静脉内(IV)输注安慰剂(n=33)、80mg(n=32)、160mg(n=34)或320mg(n=28)的Ab1单克隆抗体。通过C反应蛋白粒子增强的免疫比浊分析来定量CRP浓度，使用乳胶连接的抗CRP抗体(即，Roche CRPTinaquant
Figure BDA00001909859702141
)。简言之，约1.0mL患者样品血清被收集并贮存在塑料收集管中。将样品放入适当缓冲液，并将与乳胶微粒连接的抗CRP抗体添加至样品以起始反应。这些具有结合的乳胶微粒的抗CRP抗体与样品中的抗原反应以形成抗原/抗体复合物。在凝集后，使用Roche/Hitachi Modular P分析仪比浊测量。前4周每周收集有关CRP浓度的数据，在第4周至第12周每两周收集有关CRP浓度的数据，并且在第16周试验结束时收集有关CRP浓度的数据。
结果
血清CRP水平在所有被研究的患者中大大降低(图41)。血清CRP水平的降低是快速的，在Ab1施用一周内CRP水平相对于安慰剂立即降低，并且长期减少的水平持续至少至进行最后一次测量(至16周)。所有情况下，CRP水平在一周内下降至或低于正常参考范围(小于5-6mg/L)。因此，Ab1施用给类风湿性关节炎患者可以导致血清CRP水平快速且持续的抑制并且提供了有效的治疗方案。
实施例27 Ab1增加了晚期癌症患者的血红蛋白
抗体Ab1以在磷酸盐缓冲盐水中80mg、160mg或320mg的Ab1被施用给93个非小细胞肺癌个体。安慰剂组，仅磷酸盐缓冲盐水被施用给31个非小细胞肺癌个体。在即将给药之前(零周)、2周、4周、8周和12周取血样，并测定血红蛋白浓度。与即将给药之前(零周)的浓度相比，12周后，接受抗体Ab1的个体的平均血红蛋白浓度升高，而接受安慰剂的个体的平均血红蛋白浓度不升高(图42和43)。
研究群体亚组开始低水平血红蛋白的研究，定义为低于11g/l的基线血红蛋白浓度。对于接受160mg和320mg剂量的抗体Ab1的个体，平均血红蛋白浓度在8周后升高至高于11g/l，而接受80mg剂量的抗体Ab1或安慰剂的个体的平均血红蛋白浓度在8周后未升高至高于11g/l(图44)。
这些结果进一步说明施用Ab1给慢性疾病个体的一些有益效果。因为IL-6是负责慢性疾病贫血症(包括癌症相关贫血症)的主要细胞因子，Ab1对IL-6的中和增加了这些个体中的血红蛋白浓度。
实施例28 Ab1增加了类风湿性关节炎患者的血红蛋白
在用Ab1抗体治疗期间，分析了类风湿性关节炎患者中的血红蛋白水平。Ab1抗体以在磷酸盐缓冲盐水中80mg、160mg或320mg施用给94个类风湿性关节炎个体。33个类风湿性关节炎个体的安慰剂组被施用仅磷酸盐缓冲盐水。在在即将给药之前(零周)、1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周和16周取血样，并测定血红蛋白浓度。与即将给药之前(零周)的浓度相比，16周后，接受抗体Ab1的个体的平均血红蛋白浓度升高，而接受安慰剂的个体的平均血红蛋白浓度未明显升高(图45)。
这些结果进一步说明施用Ab1给慢性疾病个体的一些有益效果。因为IL-6是负责慢性疾病贫血症(包括癌症相关贫血症)的主要细胞因子，Ab1对IL-6的中和增加了血红蛋白浓度。
实施例29 Ab1增加了晚期癌症患者的白蛋白
前言
血清白蛋白浓度被公认为癌症患者存活和/或恢复成功的预测指标。低白蛋白血症与许多癌症形式的差的患者表现强相关。例如，在一个研究中，经历转移性胰腺癌系统化疗并且血清白蛋白水平低于3.5g/dL的患者没有成功应答系统化疗(Fujishiro,M.,等.,Hepatogastroenterology,47(36):1744-46(2000))。作者得出结论：“…低白蛋白血症患者…可能不是系统化疗的适当候选并且可能用其它实验方法或支持性疗法治疗。”同上。
类似地，Senior和Maroni表示“低白蛋白血症是晚期肾病最有效预测的最近评价凸显了确保该患者群体中充分蛋白摄取的重要性。”(J.R.Senior and B.J.Maroni,Am.Soc.Nutr.Sci.,129:313S-314S(1999))。
在至少一个研究中，通过每天静脉内输注20g白蛋白直至达到正常血清白蛋白水平s(>3.5g/dL)来矫正27例转移癌患者的低白蛋白血症的尝试收效甚微。作者指出“白蛋白输注在临床实践中对于晚期癌症患者具有有限的价值。PS4和低白蛋白血症患者具有较差的预后。”(Demirkazik,A.,等.,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.,21:Abstr 2892(2002))。
因此，本领域依然需要提高癌症患者血清白蛋白浓度并解决癌症患者、特别是晚期癌症患者低白蛋白血症状态的方法和/或治疗。
方法
抗体Ab1以在磷酸盐缓冲盐水中80mg、160mg或320mg的Ab1被施用给93个非小细胞肺癌个体。每个个体接受剂量的Ab1。安慰剂组，仅磷酸盐缓冲盐水被施用给31个非小细胞肺癌个体。在即将给药之前(零周)、2周、4周、8周和12周取血样，并测定白蛋白浓度。
结果
与即将给药之前(零周)的浓度相比，12周后，接受抗体Ab1的个体的平均白蛋白浓度升高，而接受安慰剂的个体的平均白蛋白浓度未升高(图46)。所有剂量浓度组的基线白蛋白值的改变绘于图47。
研究群体亚组开始低水平白蛋白的研究，定义为低于或等于35g/L的基线白蛋白浓度。所有剂量的抗体Ab1相对于安慰剂而言平均白蛋白浓度最初升高，但是只有接受160mg或320mg的患者表现出在研究的8周期间白蛋白水平持续高于35g/L(图48)。80mg剂量组表现出最初的升高，但是在第2周逐渐下降并且在可获得数据的8周期间从未高于35g/L(Id.)。
实施例30 Ab1在晚期癌症患者中提高了体重并减少了疲劳
前言
体重减轻和疲劳是晚期癌症患者很常见的症状，这些症状可以随着癌症的继续进展而恶化。疲劳和体重减轻可以对晚期癌症患者的恢复具有显著的负面影响，例如通过扰乱生活方式和关系并影响患者继续癌症治疗的意愿或能力。解决疲劳和体重减轻的已知方法包括定期例行的适应和锻炼，保存患者能量的方法，和解决贫血症诱导的疲劳的治疗。然而，本领域依然需要改善癌症患者中疲劳和体重减轻的方法和/或治疗。
方法
非小细胞肺癌(NSCLC)的124例患者被分成四个治疗组。一组患者每8周接受一次1小时静脉内(IV)输注安慰剂(n=31)、80mg(n=29)、160mg(n=32)或320mg(n=32)的Ab1单克隆抗体，持续24周，共3剂。
在剂量施用之前和施用后至少12周评价患者。在每次评价时，根据以下筛选患者：a.)体重的任何改变；和b.)疲劳，使用Facit-F疲劳子量表问卷(用于评估疲劳的医学公认测试)测量(参见,例如,Cella,D.,Lai,J.S.,Chang,C.H.,Peterman,A.,& Slavin,M.(2002).Fatigue incancer patients compared with fatigue in the general population.Cancer,94(2),528-538;Cella,D.,Eton,D.T.,Lai,F J-S.,Peterman,A.H &Merkel,D.E.(2002).Combining anchor and distribution based methodsto derive minimal clinically important differences on the FunctionalAssessment of Cancer Therapy anemia and fatigue scales.Journal of Pain& Symptom Management,24(6)547-561.)。
结果
体重改变
Ab1单克隆抗体的每个剂量浓度组(安慰剂、80mg、160mg和320mg)经12周的平均体重改变数据绘于图49。每个剂量浓度的体重平均百分比改变绘于图50。剂量浓度组的平均瘦体重数据绘于图51。
疲劳
Ab1单克隆抗体的每个剂量浓度组(安慰剂、80mg、160mg和320mg)的平均疲劳说明在患者群体中一些剂量浓度组的平均Facit-FFS子量表分数随8周时段的增加(图52)。从基线Facit-F子量表分数的改变绘于图53。
实施例31 Ab1降低了晚期癌症患者的D-二聚体水平
D-二聚体浓度被公认为是预测患者血栓性事件的风险的有用诊断工具。(Adam等,113 Blood 2878-87(2009))D-二聚体呈阴性的患者血栓形成的概率较低。例如，D-二聚体分析可排除患者中可疑的下肢深静脉血栓形成。(Wells等,349 N.Engl.J.Med.1227-35(2003))联合阴性D-二聚体测试的临床评价可将肺动脉栓塞的例子有效降低至0.5%。(Van Belle等，295 JAMA 172-79(2006)；Kruip等，162 Arch.Intern.Med.1631-35(2002)；Wells等，135 Ann.Intern.Med.98-107(2001))
D-二聚体分析可用于跟踪治疗凝血病症的进展。一种研究显示针对急性静脉血栓栓塞的抗凝治疗导致D-二聚体浓度逐渐下降。Adam等,113 Blood 2878-87(2009))；Schutgens等，Schutgens等,144 J.Lab.Clin.Med.100-07(2004))该发现得出这样的结论，即D-二聚体水平监测可被用来评估治疗应答。(Adam等,113 Blood at 2883)
对于癌症患者，D-二聚体分析可具有另外的意义，因为癌症增加血栓形成的患病率。(Adam等，113血液2878-87(2009))一种关于肿瘤学患者的研究显示D-二聚体浓度在诊断肺动脉栓塞方面具有高阴性预测值和高灵敏度。(King等，247 Radiology 854-61(2008))对于发展深静脉血栓形成的概率低且D-二聚体阴性试验(虽然这样的组合对于肿瘤学患者来说不太可能)的癌症患者，深静脉血栓形成同样可被排除。(Lee等,123 Thromb.Res.177-83(2008))阴性D-二聚体结果的更高的阈值在癌症患者中可能有必要。(Righini等，95 Haemost.715-19(2006))
因此，本领域仍需要针对血栓形成的方法和/或治疗，其可改善癌症患者体内的D-二聚体浓度并且解决癌症患者体内升高的D-二聚体状态，尤其是那些晚期癌症患者。
方法
124例非小细胞肺癌(NSCLC)患者被分成4个治疗组。一组中的患者接受一次1小时静脉内(IV)输注安慰剂(n=31)、80mg(n=29)、160mg(n=32)或320mg(n=32)的Ab1单克隆抗体，每8周一次持续24周，总共3剂。在治疗的前8周收集关于D-二聚体浓度的数据。通过D-二聚体免疫比浊测定来定量D-二聚体数据浓度。简言之，该测定是基于微粒悬浮液中通过光度测定法测量的浊度的变化。约1.5mL患者样品柠檬酸钠血浆被收集并贮存在塑料收集管中。通过共价键结涂布了对D-二聚体具有特异性的单克隆抗体的乳胶微粒的悬浮液与待测定D-二聚体水平的测试血浆混合。引起乳胶微粒的凝集作用的抗原-抗体反应诱导反应介质的浊度增加。这种浊度的增加通过吸光率的增加反映，该吸光率使用STAGO STA分析仪通过光度测定法测量。所述吸光率的增加是测试样品中存在的D-二聚体水平的函数。
结果
Ab1单克隆抗体的每个剂量浓度(安慰剂、80mg、160mg和320mg)的平均数据绘制在图54中。为清楚起见，曲线图中省略了误差线。D-二聚体浓度的基线百分比变化绘制在图55中。Ab1抗体所有的剂量水平说明D-二聚体水平在8周的时间段内超过安慰剂的下降。
实施例32 Ab1在晚期NSCLC患者中的疗效和安全性
本研究的主要目的是确定ALD518或人源化Ab1在晚期NSCLC患者中的疗效和安全性。
方法：对NSCLC、ECOG 0-3、先前3个月体重减轻>5%体重、血红蛋白(Hb)>7g/dL和C反应蛋白(CRP)>10mg/L的124例患者给药。将患者随机分成4个组(n～30/组)。每8周静脉内施用安慰剂或ALD518 80mg、160mg或320mg。随访患者24周。数据包括血液学、临床化学、CRP和不良事件(AE)。
结果：29例患者完成了研究的治疗和评价，38例未能完成每次访问，52人死于进行性疾病，以及5人因为不良事件退出研究。未出现剂量限制性毒性(DLT)或输注反应。84例患者出现严重AE，其中1例被认为可能与ALD518施用有关(直肠出血)。血红蛋白(Hb)、血细胞比容(Hct)、平均红细胞血红蛋白(MCH)和白蛋白的平均值(±SD)如下：
Figure BDA00001909859702211
ap<0.0001 bp=0.0002 cp≤0.001(相比于给药前的配对t检验)
ALD518治疗的38/93患者和施给安慰剂的10/31患者给药前的Hb≤11g/dL。ALD518组这些患者中的24人和安慰剂组这些患者中的7人在第4周还保留在该研究中。ALD518组14/24的患者和安慰剂组0/7的患者的血红蛋白浓度从≤11g/dL提高至≥12g/dL。
结论:ALD518增加了NSCLC患者中的Hb、Hct、MCH和白蛋白并将基线处Hb≤11g/dL的58%的患者的Hb提高至≥12g/dL。这进一步表明ALD518可被施用作非红细胞生成刺激剂来治疗癌症相关贫血症。
实施例33 Ab1在类风湿性关节炎患者中实现了ACR20/50/70。
类风湿性关节炎是主要攻击关节的滑膜的慢性、全身炎症性病症。该疾病引起疼痛的和潜在致残的炎症，通常在40至50岁之间发病。由于多年来制造出的可用的主观和客观的评估工具数量繁多，使类风湿性关节炎中药物疗效的阐释变得困难。美国风湿病学院(“ACR”)发布了一套标准的类风湿性关节炎量度标准来促进临床试验中疾病改善的评价。Felson等.,36 Arthritis & Rheumatism 729-40(1993)。
方法
活性类风湿性关节炎和CRP≥10mg/L的127例患者被分成四个治疗组。一组患者16周试验开始时和第8周再次接受一次1小时静脉内(IV)输注安慰剂(n=33)、80mg(n=32)、160mg(n=34)或320mg(n=28)的Ab1单克隆抗体。前4周每周收集有关CRP浓度的数据，在第4周至第12周每两周收集有关CRP浓度的数据，并且在第16周测试结束时收集有关CRP浓度的数据。
来自美国风湿病学院的标准化方案下的评估被用于确定临床试验期间患者改善的百分比，并由评价类风湿性关节炎的普通领域中经训练的人员实施。所述评价基于活动度量度标准，包括压痛关节计数、肿胀关节计数、患者的疼痛评估、患者和医生的疾病活动度全面评估，以及红细胞沉降率或CRP水平的实验室评估。同上。患者的疼痛评估基于斯坦福健康评估问卷残疾指数(HAQ DI)。临床试验期间类风湿性关节炎的活动度量度标准实现20%增长的患者被归类为实现ACR20。同样地，实现50%和70%改善的患者分别被归类为ACR 50和ACR 70。
结果
在研究过程中，患类风湿性关节炎的很大一部分患者实现了ACR 20或更高(图56)。在研究前4周内患者观察到系统中快速的改善，并且在第16周评价期间观察到持续、稳定的改善(图57、58和59)。在研究期间，接受320mg剂量水平的患者显示的最高结果为43%实现ACR 70状态(图59)。
所述ACR评价的个别组成部分的分析展示在每个组成部分都有增加(图60)。在评价期间，HAQ DI分数展示超过安慰剂的临床上有意义的改变(图61)。在所有被研究的患者中，血清CRP水平大大降低(图61)。血清CRP水平的降低是快速的，相比于安慰剂，在Ab1施用1周内CRP水平立即降低，并持续长期的降低水平至少到最终的测量为止(多达16周)。在所有病例中，CRP水平在1周内降低到或低于正常参考范围(小于5-6mg/L)。因此，Ab1的施用在类风湿性关节炎患者中可引起快速且持续的改善(如临床评价期间ACR分数的显著改善所证明)，并且呈现为一种有效的治疗方案。
实施例34 Ab1在类风湿性关节炎患者中实现改善的DAS28和EULAR分数
前言
类风湿性关节炎是主要攻击关节的滑膜的慢性、全身炎症性病症。该疾病引起疼痛的和潜在致残的炎症，通常在40至50岁之间发病。由于多年来制造出的可用的主观和客观的评估工具数量繁多，使类风湿性关节炎中药物疗效的阐释变得困难。美国风湿病学院(“ACR”)发布了一套标准的类风湿性关节炎量度标准来促进临床试验中疾病改善的评价。Felson等，36 Arthritis & Rheumatism 729-40(1993)。
通过得到验证的应答标准，如疾病活动度分数(DAS)、DAS28和EULAR，使用众多变量来测量与类风湿性关节炎相关的炎症活动度。所述DAS是结合了肿胀关节、压痛关节、急性期应答和全身健康的信息的类风湿性关节炎疾病活动度临床指标。Fransen,J.,等,Clin.Exp.Rheumatol.,23(增刊39):S93-S99(2005)。所述DAS 28是一种类似原始DAS的指标，但是利用28压痛关节计数(范围0-28)、28肿胀关节计数(范围0-28)、ESR(红细胞沉降率)和任选的在视觉类比量表(范围0-100)上的全身健康评估。同上。欧洲风湿病防治联合会(EULAR)应答标准使用DAS的个别变化量将患者分类，所述DAS值(低、中、高)达到下列级别之一：好、中等或无应答者。同上。
方法
活性类风湿性关节炎127例患者被分成4个治疗组。一组患者在16周试验开始时和第8周再次接受一次1小时静脉内(IV)输注安慰剂(n=33)、80mg(n=32)、160mg(n=34)或320mg(n=28)的Ab1单克隆抗体。前4周每周收集有关DAS28和EULAR分数的数据，在第4周至第12周每两周收集有关DAS28和EULAR分数的数据，并且在第16周测试结束时收集有关DAS28和EULAR分数的数据。在标准化DAS28和EULAR方案下的评估被用来确定临床试验中患者各自的分数并由评价类风湿性关节炎的普通领域中经训练的人员实施。
结果
在16周期间内，接受80mg、160mg或320mg的Ab1的患者相比于那些接受安慰剂的患者改善了DAS28分数，如图62展示的从基线DAS28分数的平均变化。此外，在16周期间内，接受80mg、160mg或320mgAb1的很大百分率的患者相对于那些接受安慰剂的患者达到“好”或“中等”的级别。(图63)。
因此，相比于那些接受安慰剂的患者，Ab1的施用可导致类风湿性关节炎患者改善的DAS28和EULAR分数。
实施例35 Ab1在人受试者中的安全性、药物动力学(PK)和药效动力学(PD)
如本文所述，对类风湿性关节炎患者施用人源化抗体，所述人源化抗体衍生自含有SEQ ID NO:19和20中可变重链和轻链序列的Ab1(人源化Ab1或ALD518)。该抗体是一种针对IL-6的人源化、去唾液酸化的IgG1单克隆抗体，其已经在人体中显示具有约30天的半衰期(t1/2)。在RA患者的研究中，静脉内注射(IV)该抗体(人源化Ab1)展示：在16周期间具有快速的美国风湿病学院(ACR)应答的功效、C反应蛋白(CRP)完整且持久的抑制、良好的耐受性和符合IL-6阻断生物学的安全性曲线。该人源化抗体以高亲和力结合IL-6，从而防止经由IL-6R介导的相互作用和信号传导。在RA患者中静脉内(IV)施用人源化Ab1已证实具有快速并显著的治疗应答。在本实施例中，我们研究了在健康受试者中皮下(SC)施用人源化Ab1的安全性、药物动力学和药效动力学。
本研究的目的是为了评估单次皮下注射该人源化抗体在健康男性受试者体内的安全性、药物动力学(PK)和药效动力学(PD)。
方法:
在该I期、双盲、安慰剂对照的研究中，27名受试者以2:1的比例被随机分配到下列组以接受单剂量的人源化Ab1或安慰剂：人源化Ab1 50mg SC、人源化Ab1 100mg SC或人源化Ab1 100mg IV(每组活性剂n=6，安慰剂n=3)。主要目的是为了在12周期间内评估SC人源化Ab1相比于安慰剂的安全性。人源化Ab1的血浆浓度和C反应蛋白(CRP)的血清浓度作为次要目的进行评估。评估在第1周每天进行，然后在第10天、第2周、第4周、第6周和第8周每天进行，然后每月进行直到第12周。该研究在第12周解盲，且对人源化Ab1受试者进行监测直至第24周。
研究设计和人群
该研究包括27名健康男性受试者(年龄在18-65岁)。受试者在三个治疗组中(每组9名受试者)被给药，在第一天随机以2:1的比例来接受单剂量的人源化Ab1或安慰剂(图64)。人源化Ab1治疗每组为：
人源化Ab1 IV 100mg输注，60分钟
人源化Ab1 SC 50mg注射(1mL)
人源化Ab1 100mg注射(1mL)
本研究在第12周解盲，之后安慰剂受试者中断试验并且监测BMS-945429受试者至第24周(图64)。
安全性和免疫原性的评估
本研究的主要目的是为了评估在12周内SC人源化Ab1相比于安慰剂的安全性。对所有的受试者监测其安全性12周。本研究在第12周解盲，并且监测人源化Ab1受试者至第24周。
实验室安全测试如下进行：对于所有受试者在筛选时和第-1天给药前，和在第2天和第7天、第2、4、6、8和12周给药后，以及对于那些随机分配到人源化Ab1组的受试者，在第16、20和24周给药后。通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测量抗人源化Ab1抗体。对于所有的受试者，在第1天(给药前)和在第12周给药后收集血样，以及对于那些随机分配到人源化Ab1组的受试者，在第24周给药后收集血样。
药代动力学及药效动力学评估
血浆人源化Ab1和血清CRP浓度通过ELISA评估。对于所有的受试者，在筛选时、在第1天给药前和在第2和第7天和第2、4、6、8和12周给药后收集样品。对于随机分配到人源化Ab1组的受试者，还要在第16、20和24周给药后收集样品。
统计分析
所有接受1剂的人源化Ab1或安慰剂的受试者都包括在安全性分析中。所有接受1剂的人源化Ab1或安慰剂的受试者都包括在PD和免疫原性的分析中。所有接受1剂的人源化Ab1的受试者都包括PK分析中(n=18)。所有对于安慰剂受试者的PK样品按照以下定量进行确认。
对于基线人口统计数据、安全性数据、血浆人源化Ab1参数和血清CRP浓度生成描述性统计。Wilcoxon秩和检验被用来比较人源化Ab1治疗与安慰剂的CRP浓度。
结果：
概要
在24周内，无死亡或严重不良事件(AE)发生，且没有AE所致的退出。几乎所有的受试者(89%)经历了AE，除了在人源化Ab1 SC 50mg组中发生的一例重度胃肠炎的事件，AE都为轻度或中度。5/12人源化Ab1 SC受试者发生注射部位反应，1/6安慰剂SC受试者发生，以及1/3安慰剂IV受试者发生(人源化Ab1 IV受试者中未有发生的报告)。这些反应是轻度的，除了在人源化Ab1 100mg SC组中发生的一例中度红斑和瘙痒。直接胆红素和中性粒细胞计数低于正常值上限的增长在接受人源化Ab1的受试者中比在接受安慰剂的受试者中更普遍；所有都为CTC 1或2级。人源化Ab1的半衰期在所有组之间相似(平均范围：30.7-33.6天)。相比于IV施用后(大约在输液结束)，在SC施用后(约1周)人源化Ab1的中值Tmax更长。依据在50mg和100mg剂量的AUC和Cmax，SC人源化Ab1的PK是与剂量成比例的。基于人源化Ab1 50mg SC组、100mg SC组和100mg IV组分别为237、452和764的AUC0-∞(天*μg/mL)，SC组相比于IV组的人源化Ab1的生物利用率为约60%。接受人源化Ab1的受试者经历快速并持续的血清CRP降低(图66)。
受试者部署和基线人口统计
总共27名受试者登记并完成该研究(人源化Ab1组n=18和安慰剂组n=9人)。无受试者因任何理由退出。
所有的受试者都是男性；27名受试者中23人为白种人以及4人为亚洲人。平均年龄为29岁(范围：20-59)并且在各组之间类似。平均身高和体重在各组之间大体相当，只是IV安慰剂组略轻。
到第12周人源化Ab1和安慰剂的安全性和免疫原性
安全性总结呈现于图67中。对于SC人源化Ab1组，总共11/12(91%)患者经历了一次不良事件(AE)，相比之下:
IV人源化Ab1组为6/6(100%)；
SC安慰剂组为4/6(66.6%)；和
IV安慰剂组为3/3(100%)。
各组之间：
无死亡或严重的AE被报告并且没有AE所致的退出。
大多数AE是轻度或中度的强度。
在SC人源化Ab1 50mg组中一例受试者的肠胃炎被认为是重度的，但是不严重，且与研究药物无关。
在此时间段期间，未在任何受试者体内检测到抗人源化Ab1抗体。
注射部位反应
26%(7/27)的受试者报告了注射部位反应，并且都发生在第12周之前(图68)。5/12 SC人源化Ab1受试者和1/6SC安慰剂受试者发生注射部位反应。在IV组中，0/6人源化Ab1受试者和1/3安慰剂受试者经历注射部位反应。除了一例在SC人源化Ab1 100mg受试者中的中度注射部位红斑和瘙痒，其它所有的注射部位反应均是轻微的。第12周后，在任何人源化Ab1组中均无注射部位反应发生。0/6接受IV人源化Ab1的受试者和1/3接受IV安慰剂受试者(输注部位瘙痒)报告了注射部位反应。
临床实验室评价
图69显示在人源化Ab1组和安慰剂组中增加的丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的发生率和胆红素水平。根据常见不良事件评价标准(CTCAE)，所有ALT和AST水平均为1级，并且无大于等于正常值上限(ULN)3倍的水平。总计所有的增长和直接胆红素均为CTCAE 1或2级，且无受试者符合药物诱导的肝损伤的标准。仅1例受试者(SC人源化Ab1 100mg组)在第24周的总胆红素超出范围(26μmol/L，范围为0-24μmol/L)。
在人源化Ab1组和安慰剂组中，也观察到中性粒细胞和血小板计数零星的减少(图69)。相比于接受安慰剂的受试者，中性粒细胞计数低于正常值的下限在接受人源化Ab1的受试者中更普遍，但是所有减少都是CTCAE 1级或2级。仅1例受试者(SC人源化Ab1 50mg组)到第24周具有一致的轻度中性粒细胞减少(第24周为1.6x109/L)。血小板计数的减少均为CTCAE 1级(最低水平为134x109/L)并且经过第8周后无受试者具有低血小板计数。
药物动力学
基于平均AUC0-∞，SC人源化Ab1 50和100mg相对于IV人源化Ab1 100mg组的人源化Ab1的生物利用率为60%(图70)。人源化Ab1的半衰期在所有组之间类似(平均范围：30.7-33.6天)(图70)。SC人源化Ab1的峰值血浆浓度(Cmax)相比于IV有所降低(图65)。相比于IV人源化Ab1施用后(约在输注结束)，在SC人源化Ab1施用后(约在一周)，人源化Ab1的达最高血浆浓度(Tmax)的中值时间更长。
药效动力学
所有接受人源化Ab1的受试者不管剂量或施用途径如何，其CRP水平均降低(图66和71)。从第4周至第12周，相比于安慰剂，接受人源化Ab1的受试者的CRP水平显着降低(未调整的p-值<0.05；图66)。在人源化Ab1受试者中，以下比例的受试者的CRP水平降低至<20%的给药前水平:
第1周72%(13/18)的受试者；
第12周73%(11/15)的受试者；和
第24周56%(10/18)的受试者。
结论：
在该I期研究中，当在健康男性受试者中施用单剂的SC时，抗IL-6抗体人源化Ab1总体上耐受性良好。注射部位反应总体上是轻微的。未检测到抗人源化Ab1抗体。肝酶、中性粒细胞和血小板计数的变化是可逆的。SC人源化Ab1的生物利用率约为IV人源化Ab1观察到的60%。不论何种施用途径，人源化Ab1的半衰期约为30天。这些数据与使用IV人源化Ab1的先前数据一致。皮下的人源化Ab1导致血清CRP快速并大量的降低。前12周的研究期间观察到的CRP降低在24周的评估中持续。这些初步数据支持SC人源化Ab1用于治疗RA患者的继续发展和评价。
总之，在该I期研究中，当施用单剂的SC时，抗IL-6抗体人源化Ab1的耐受性良好；注射部位反应总体上是轻微的。SC人源化Ab1的生物利用率约为IV人源化Ab1的60%，且其半衰期约为30天。观察到CRP快速且显著的降低，其在24周的评估中持续。
实施例36 Ab1对于DAS28评估的疾病活动度的影响
如上所述，ALD518*是去唾液酸化的人源化抗IL-6单克隆抗体，具有约30天的半衰期，含有包含于SEQ ID NO:19和20中的人源化可变重链序列和轻链序列。这些人源化重链序列和轻链序列衍生自特异性结合人IL-6的亲本兔抗体，该抗体在所述并入的申请中被称为Ab1。ALD518以高亲和力结合IL-6，从而预防经由可溶的和膜结合的IL-6R介导的相互作用和信号传导。在RA患者中，利用ALD518*展示出快速且显著的ACR应答。在本实施例中，我们报告ALD518在16周内对于DAS28评估的疾病活动度的影响。
方法：在此16周、双盲、安慰剂对照的II期研究中，将活性RA患者和对MTX不充分应答的患者随机以1:1:1:1的比例分配到静脉内注射ALD518* 80mg、160mg或320mg或安慰剂组中。患者接受两次IV ALD518的输注(第1天和第8周)，而同时继续稳定剂量的MTX。主要疗效终点是在第12周实现ACR20的患者的比例；疾病活动度作为次要终点通过基于C反应蛋白(CRP)的疾病活动度分数(DAS28)来评估。实现DAS28定义的缓解(分数<2.6)、低疾病活动状态(LDAS；分数≤3.2)和良好的EULAR应答(当前的DAS28≤3.2且从基线的改善>1.2)的患者的比例针对经过修改的意向治疗人群被评估，并展示了患者的可用的数据(如观察到的)。P值是基于卡方检验。
结果:在随机分配并治疗的127例患者中，116名完成了试验。在基线上，平均年龄为52.3岁且RA持续时间为6.8年。在第4、12和16周，对于所有ALD518*剂量，实现LDAS和缓解的患者的比例大于安慰剂；除了在第4周的ALD518* 80mg(p=0.056)，在其它所有评估中相比于安慰剂存在显著差异(p<0.05)。同样地，在第4、12和16周，所有的ALD518*剂量的EULAR应答显著优于安慰剂(p<0.01)。存在ALD518*剂量越高而应答越大的趋势。
Figure BDA00001909859702321
在2例ALD518患者中报告了SAE(都有肝酶明显增加，并中断了治疗)。总的来说，在17%的ALD518*中发生大于2x ULN的肝酶升高—而安慰剂处理的患者中发生率为0%；在320mg剂量组中的频率是最高的。观察到总胆固醇适度增加(到第16周ALD518*组平均增加为1.1mmol/L，而安慰剂组为0.2mmol/L)。9例ALD518患者具有短暂的II级中性粒细胞减少症以及2例具有短暂的III级中性粒细胞减少症。任何治疗组中均无严重的感染或输注反应，且无明显的免疫原性。
结论:在该II期研究中，在RA患者以及对MTX不充分应答的患者中，新IL-6抑制剂ALD518导致疾病活动度快速并显著的改善，其在16周的评估中持续。ALD518耐受性良好，其安全性曲线符合IL-6阻断的生物学。
实施例37 Ab1的施用
方法：具有活性RA的患者被随机分配进一项16周、双盲、安慰剂对照的试验，其比较多种静脉输注的ALD518(80、160或320mg)。患者每8周接受一次输注并在整个试验中被维持MTX的稳定剂量。评估包括ACR 20/50/70应答和DAS28。对所有患者进行了安全性评价。对于提前退出，连续变量使用LOCF分析而分类变量使用非应答归责法。
结果:132例患者被随机分组；127例被给药。平均病程为6.6年；平均DAS28分数为6.2以及平均HAQ-DI为1.72。11例患者未完成为期16周的试验：320mg-3例、160mg-1例、80mg-3例、安慰剂-4例：4例患者由于不良事件中断给药(80mg-2例、320mg-2例)，发生2例SAE(80mg-1例、320mg-1例)。在17%的ALD518中观察到>2x ULN的肝酶(LFT)升高，而安慰剂为0%。总胆固醇有适度增加(到第16周ALD518平均增加=1.1mmol/L，而安慰剂为0.2mmol/L)。ALD518上的9例患者有短暂的2级中性粒细胞减少症；2例患者有短暂的3级中性粒细胞减少症。在任何治疗组中都无严重感染。ALD518的输注耐受性良好，无输注反应或明显的免疫原性。在第4周和第16周，ACR应答(非应答归责分析)和DAS28分数的改善为：
Figure BDA00001909859702331
*p￡0.04;
Figure BDA00001909859702332
Figure BDA00001909859702333
*p￡0.03
Figure BDA00001909859702342
结论：相对于抗IL-6受体单克隆抗体，ALD518或人源化Ab1是IL-6的第一个单克隆抗体在RA疾病活动度中显示显著、快速并持续的改善。对RA活性患者2次IV输注剂量从80mg至320mg的ALD518，其耐受性良好，在一些患者中观察到LFT和总胆固醇的增加以及短暂的中性粒细胞减少症。不存在与ALD518施用有关的输注反应且无可检测的免疫原性。
序列表
以下提供了本文引用的生物序列：
SEQ ID NO:1
VPPGEDSKDVAAPHRQPLTS SERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM
SEQ ID NO:2
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
SEQ ID NO:3
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
SEQ ID NO:4
QASQSINNELS
SEQ ID NO:5
RASTLAS
SEQ ID NO:6
QQGYSLRNIDNA
SEQ ID NO:7
NYYVT
SEQ ID NO:8
IIYGSDETAYATWAIG
SEQ ID NO:9
DDSSDWDAKFNL
SEQ ID NO:10
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT
SEQ ID NO:11
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG
SEQ ID NO:12
CAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCC
SEQ ID NO:13
AGGGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:14
CAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:15
AACTACTACGTGACC
SEQ ID NO:16
ATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGC
SEQ ID NO:17
GATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG
SEQ ID NO:18
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATWAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL
SEQ ID NO:19
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL
SEQ ID NO:20
IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNA
SEQ ID NO:21
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASETIYSWLSWYQQKPGQPPKLLIYQASDLASGVPSRFSGSGAGTEYTLTISGVQCDDAATYYCQQGYSGSNVDNVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK
SEQ ID NO:22
METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNDHAMGWVRQAPGKGLEYIGFINSGGSARYASWAEGRFTISRTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRGGAVWSIHSFDPWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
SEQ ID NO:23
QASETIYSWLS
SEQ ID NO:24
QASDLAS
SEQ ID NO:25
QQGYSGSNVDNV
SEQ ID NO:26
DHAMG
SEQ ID NO:27
FINSGGSARYASWAEG
SEQ ID NO:28
GGAVWSIHSFDP
SEQ ID NO:29
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGATTCAGCGGCAGTGGGGCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG
SEQ ID NO:30
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTTACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGACCATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAGAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGAGGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTGATCCCTGGGGCCCAGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAG
SEQ ID NO:31
CAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCC
SEQ ID NO:32
CAGGCATCCGATCTGGCATCT
SEQ ID NO:33
CAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTT
SEQ ID NO:34
GACCATGCAATGGGC
SEQ ID NO:35
TTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAGAAGGC
SEQ ID NO:36
GGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTGATCCC
SEQ ID NO:37
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTP SPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLSWFQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFVGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF
SEQ ID NO:38
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSVYYMNWVRQAPGKGLEWIGFITMSDNINYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRGWGTMGRLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
SEQ ID NO:39
QASQSVYDNNYLS
SEQ ID NO:40
GASTLAS
SEQ ID NO:41
AGVYDDDSDNA
SEQ ID NO:42
VYYMN
SEQ ID NO:43
FITMSDNINYASWAKG
SEQ ID NO:44
SRGWGTMGRLDL
SEQ ID NO:45
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCGTGGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATAATGCCTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT
SEQ ID NO:46
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACCCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTGTCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACAATGAGTGATAATATAAATTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTACAATGGGTCGGTTGGATCTCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG
SEQ ID NO:47
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTACTTATCC
SEQ ID NO:48
GGTGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:49
GCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATAATGCC
SEQ ID NO:50
GTCTACTACATGAAC
SEQ ID NO:51
TTCATTACAATGAGTGATAATATAAATTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:52
AGTCGTGGCTGGGGTACAATGGGTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:53
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGAICDPVLTQTPSPVSAPVGGTVSISCQASQSVYENNYLSWFQQKPGQPPKLLIYGASTLDSGVPSRFKGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSDDAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
SEQ ID NO:54
METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGGLVTPGGTLTLTCTASGFSLNAYYMNWVRQAPGKGLEWIGFITLNNNVAYANWAKGRFTFSKTSTTVDLKMTSPTPEDTATYFCARSRGWGAMGRLDLWGHGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
SEQ ID NO:55
QASQSVYENNYLS
SEQ ID NO:56
GASTLDS
SEQ ID NO:57
AGVYDDDSDDA
SEQ ID NO:58
AYYMN
SEQ ID NO:59
FITLNNNVAYANWAKG
SEQ ID NO:60
SRGWGAMGRLDL
SEQ ID NO:61
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCATATGTGACCCTGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTATCTGCACCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGAGAACAACTATTTATCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGATTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATTACAGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATGATGCCTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT
SEQ ID NO:62
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTAACGCCTGGAGGAACCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGCCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAATAATAATGTAGCTTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCTTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACACCCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATCTCTGGGGCCATGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG
SEQ ID NO:63
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGAGAACAACTATTTATCC
SEQ ID NO:64
GGTGCATCCACTCTGGATTCT
SEQ ID NO:65
GCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATGATGCC
SEQ ID NO:66
GCCTACTACATGAAC
SEQ ID NO:67
TTCATTACTCTGAATAATAATGTAGCTTACGCGAACTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:68
AGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:69
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVDDNNWLGWYQQKRGQPPKYLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGGFSGNIFAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF
SEQ ID NO:70
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLS SYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIGGFGTTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARGGPGNGGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKD
SEQ ID NO:71
QASQSVDDNNWLG
SEQ ID NO:72
SASTLAS
SEQ ID NO:73
AGGFSGNIFA
SEQ ID NO:74
SYAMS
SEQ ID NO:75
IIGGFGTTYYATWAKG
SEQ ID NO:76
GGPGNGGDI
SEQ ID NO:77
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCGCCTGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTGATGATAACAACTGGTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACGAGGGCAGCCTCCCAAGTACCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTTTAGTGGTAATATCTTTGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT
SEQ ID NO:78
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGCTTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAATCATTGGTGGTTTTGGTACCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAGAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTGGTCCTGGTAATGGTGGTGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT
SEQ ID NO:79
CAGGCCAGTCAGAGTGTTGATGATAACAACTGGTTAGGC
SEQ ID NO:80
TCTGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:81
GCAGGCGGTTTTAGTGGTAATATCTTTGCT
SEQ ID NO:82
AGCTATGCAATGAGC
SEQ ID NO:83
ATCATTGGTGGTTTTGGTACCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:84
GGTGGTCCTGGTAATGGTGGTGACATC
SEQ ID NO:85
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSVPVGGTVTIKCQSSQSVYNNFLSWYQQKPGQPPKLLIYQASKLASGVPDRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF
SEQ ID NO:86
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSDYAMSWVRQAPGKGLEWIGIIYAGSGSTWYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDGYDDYGDFDRLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD
SEQ ID NO:87
QSSQSVYNNFLS
SEQ ID NO:88
QASKLAS
SEQ ID NO:89
LGGYDDDADNA
SEQ ID NO:90
DYAMS
SEQ ID NO:91
IIYAGSGSTWYASWAKG
SEQ ID NO:92
DGYDDYGDFDRLDL
SEQ ID NO:93
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGTACCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATTTCTTATCGTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCAGATAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC
SEQ ID NO:94
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACGCTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGACTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGCTGGTAGTGGTAGCACATGGTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGGATACGATGACTATGGTGATTTCGATCGATTGGATCTCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT
SEQ ID NO:95
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATTTCTTATCG
SEQ ID NO:96
CAGGCATCCAAACTGGCATCT
SEQ ID NO:97
CTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:98
GACTATGCAATGAGC
SEQ ID NO:99
ATCATTTATGCTGGTAGTGGTAGCACATGGTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:100
GATGGATACGATGACTATGGTGATTTCGATCGATTGGATCTC
SEQ ID NO:101
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKSGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF
SEQ ID NO:102
METGLRWLLLVAVLSGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGLEWIGMIYGSDETAYANWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDS SDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
SEQ ID NO:103
QASQSINNELS
SEQ ID NO:104
RASTLAS
SEQ ID NO:105
QQGYSLRNIDNA
SEQ ID NO:106
NYYMT
SEQ ID NO:107
MIYGSDETAYANWAIG
SEQ ID NO:108
DDSSDWDAKFNL
SEQ ID NO:109
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAATGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAATCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC
SEQ ID NO:110
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCTCAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATGATTTATGGTAGTGATGAAACAGCCTACGCGAACTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG
SEQ ID NO:111
CAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCC
SEQ ID NO:112
AGGGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:113
CAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:114
AACTACTACATGACC
SEQ ID NO:115
ATGATTTATGGTAGTGATGAAACAGCCTACGCGAACTGGGCGATAGGC
SEQ ID NO:116
GATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG
SEQ ID NO:117
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGLEWVGMIYGSDETAYANWAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL
SEQ ID NO:118
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGLEWVGMIYGSDETAYANSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL
SEQ ID NO:119
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNA
SEQ ID NO:120
IIYGSDETAYATSAIG
SEQ ID NO:121
MIYGSDETAYANSAIG
SEQ ID NO:122
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVGNNQDLSWFQQRPGQPPKLLIYEISKLESGVPSRFSGSGSGTHFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADNA
SEQ ID NO:123
METGLRWLLLVAVLKGVQCHSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSRTMSWVRQAPGKGLEWIGYIWSGGSTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARLGDTGGHAYATRLNL
SEQ ID NO:124
QSSQSVGNNQDLS
SEQ ID NO:125
EISKLES
SEQ ID NO:126
LGGYDDDADNA
SEQ ID NO:127
SRTMS
SEQ ID NO:128
YIWSGGSTYYATWAKG
SEQ ID NO:129
LGDTGGHAYATRLNL
SEQ ID NO:130
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCACCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTGGTAATAACCAGGACTTATCCTGGTTTCAGCAGAGACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACGAAATATCCAAACTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACACTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTACAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:131
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCACTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGTCGTACAATGTCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGATTGGGCGATACTGGTGGTCACGCTTATGCTACTCGCTTAAATCTC
SEQ ID NO:132
CAGTCCAGTCAGAGTGTTGGTAATAACCAGGACTTATCC
SEQ ID NO:133
GAAATATCCAAACTGGAATCT
SEQ ID NO:134
CTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:135
AGTCGTACAATGTCC
SEQ ID NO:136
TACATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:137
TTGGGCGATACTGGTGGTCACGCTTATGCTACTCGCTTAAATCTC
SEQ ID NO:138
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSSVSAAVGGTVSISCQSSQSVYSNKYLAWYQQKPGQPPKLLIYWTSKLASGAPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGAYDDDADNA
SEQ ID NO:139
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVKPDETLTLTCTASGFSLEGGYMTWVRQAPGKGLEWIGISYDSGSTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRSLKYPTVTSDDL
SEQ ID NO:140
QS SQSVYSNKYLA
SEQ ID NO:141
WTSKLAS
SEQ ID NO:142
LGAYDDDADNA
SEQ ID NO:143
GGYMT
SEQ ID NO:144
ISYDSGSTYYASWAKG
SEQ ID NO:145
SLKYPTVTSDDL
SEQ ID NO:146
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAGTAATAAGTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACTGGACATCCAAACTGGCATCTGGGGCCCCATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAATTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGCTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:147
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAAGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCAAGCCTGACGAAACCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTGGAGGGCGGCTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCAGTTATGATAGTGGTAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGCGTCAGATCACTAAAATATCCTACTGTTACTTCTGATGACTTG
SEQ ID NO:148
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAGTAATAAGTACCTAGCC
SEQ ID NO:149
TGGACATCCAAACTGGCATCT
SEQ ID NO:150
CTAGGCGCTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:151
GGCGGCTACATGACC
SEQ ID NO:152
ATCAGTTATGATAGTGGTAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:153
TCACTAAAATATCCTACTGTTACTTCTGATGACTTG
SEQ ID NO:154
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVYNNNDLAWYQQKPGQPPKLLIYYASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAAAYYCLGGYDDDADNA
SEQ ID NO:155
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLSLSSNTINWVRQAPGKGLEWIGYIWSGGSTYYASWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGGYASGGYPYATRLDL
SEQ ID NO:156
QSSQSVYNNNDLA
SEQ ID NO:157
YASTLAS
SEQ ID NO:158
LGGYDDDADNA
SEQ ID NO:159
SNTIN
SEQ ID NO:160
YIWSGGSTYYASWVNG
SEQ ID NO:161
GGYASGGYPYATRLDL
SEQ ID NO:162
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCACCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATAACGACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAACTCCTGATCTATTATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:163
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTATCTGGATTATCCCTCAGTAGCAATACAATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGAGTGGTGGTAGTACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGTCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGGTTACGCTAGTGGTGGTTATCCTTATGCCACTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:164
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATAACGACTTAGCC
SEQ ID NO:165
TATGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:166
CTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:167
AGCAATACAATAAAC
SEQ ID NO:168
TACATTTGGAGTGGTGGTAGTACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGT
SEQ ID NO:169
GGGGGTTACGCTAGTGGTGGTTATCCTTATGCCACTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:170
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQSSQSVYNNDYLSWYQQRPGQRPKLLIYGASKLASGVPSRFKGSGSGKQFTLTISGVQCDDAATYYCLGDYDDDADNT
SEQ ID NO:171
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFTLSTNYYLSWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGNTYCAKWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARNYGGDESL
SEQ ID NO:172
QSSQSVYNNDYLS
SEQ ID NO:173
GASKLAS
SEQ ID NO:174
LGDYDDDADNT
SEQ ID NO:175
TNYYLS
SEQ ID NO:176
IIYPSGNTYCAKWAKG
SEQ ID NO:177
NYGGDESL
SEQ ID NO:178
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACGACTACTTATCCTGGTATCAACAGAGGCCAGGGCAACGTCCCAAGCTCCTAATCTATGGTGCTTCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCGTCACGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGAAACAGTTTACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTGGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATACT
SEQ ID NO:179
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACTTGCACAGTCTCTGGATTCACCCTCAGTACCAACTACTACCTGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTAGAATGGATCGGAATCATTTATCCTAGTGGTAACACATATTGCGCGAAGTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACAGCCACGTATTTCTGTGCCAGAAATTATGGTGGTGATGAAAGTTTG
SEQ ID NO:180
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACGACTACTTATCC
SEQ ID NO:181
GGTGCTTCCAAACTGGCATCT
SEQ ID NO:182
CTGGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATACT
SEQ ID NO:183
ACCAACTACTACCTGAGC
SEQ ID NO:184
ATCATTTATCCTAGTGGTAACACATATTGCGCGAAGTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:185
AATTATGGTGGTGATGAAAGTTTG
SEQ ID NO:186
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASETIGNALAWYQQKSGQPPKLLIYKASKLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQWCYFGDSV
SEQ ID NO:187
METGLRWLLLVTVLKGVQCQEQLVESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSGYYMCWVRQAPGKGLEWIACIFTITTNTYYASWAKGRFTISKTS STTVTLQMTSLTAADTATYLCARGIYSDNNYYAL
SEQ ID NO:188
QASETIGNALA
SEQ ID NO:189
KASKLAS
SEQ ID NO:190
QWCYFGDSV
SEQ ID NO:191
SGYYMC
SEQ ID NO:192
CIFTITTNTYYASWAKG
SEQ ID NO:193
GIYSDNNYYAL
SEQ ID NO:194
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGACCATTGGCAATGCATTAGCCTGGTATCAGCAGAAATCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT
SEQ ID NO:195
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCACTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCGGCTACTACATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCGTGTATTTTCACTATTACTACTAACACTTACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATCTCTGTGCGAGAGGGATTTATTCTGATAATAATTATTATGCCTTG
SEQ ID NO:196
CAGGCCAGTGAGACCATTGGCAATGCATTAGCC
SEQ ID NO:197
AAGGCATCCAAACTGGCATCT
SEQ ID NO:198
CAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT
SEQ ID NO:199
AGCGGCTACTACATGTGC
SEQ ID NO:200
TGTATTTTCACTATTACTACTAACACTTACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:201
GGGATTTATTCTGATAATAATTATTATGCCTTG
SEQ ID NO:202
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASESIGNALAWYQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCADAAAYYCQWCYFGDSV
SEQ ID NO:203
METGLRWLLLVAVLKGVQCQQQLVESGGGLVKPGASLTLTCKASGFSFSSGYYMCWVRQAPGKGLESIACIFTITDNTYYANWAKGRFTISKPSSPTVTLQMTSLTAADTATYFCARGIYSTDNYYAL
SEQ ID NO:204
QASESIGNALA
SEQ ID NO:205
KASTLAS
SEQ ID NO:206
QWCYFGDSV
SEQ ID NO:207
SGYYMC
SEQ ID NO:208
CIFTITDNTYYANWAKG
SEQ ID NO:209
GIYSTDNYYAL
SEQ ID NO:210
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGAGCATTGGCAATGCATTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGCCGATGCTGCCGCTTACTACTGTCAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT
SEQ ID NO:211
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGCAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCGGGGGCATCCCTGACACTCACCTGCAAAGCCTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCGGCTACTACATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTCGATCGCATGCATTTTTACTATTACTGATAACACTTACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGCCCTCGTCGCCCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGGGGGATTTATTCTACTGATAATTATTATGCCTTG
SEQ ID NO:212
CAGGCCAGTGAGAGCATTGGCAATGCATTAGCC
SEQ ID NO:213
AAGGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:214
CAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT
SEQ ID NO:215
AGCGGCTACTACATGTGC
SEQ ID NO:216
TGCATTTTTACTATTACTGATAACACTTACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:217
GGGATTTATTCTACTGATAATTATTATGCCTTG
SEQ ID NO:218
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSVSSYLNWYQQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTYGTSSSYGAA
SEQ ID NO:219
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGISLSSNAISWVRQAPGKGLEWIGIISYSGTTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDDPTTVMVMLIPFGAGMDL
SEQ ID NO:220
QASQSVSSYLN
SEQ ID NO:221
RASTLES
SEQ ID NO:222
QCTYGTSSSYGAA
SEQ ID NO:223
SNAIS
SEQ ID NO:224
IISYSGTTYYASWAKG
SEQ ID NO:225
DDPTTVMVMLIPFGAGMDL
SEQ ID NO:226
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCGTTAGTAGCTACTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCACTCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAATGTACTTATGGTACTAGTAGTAGTTATGGTGCTGCT
SEQ ID NO:227
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGTATCTCCCTCAGTAGCAATGCAATAAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTAGTTATAGTGGTACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACTAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTACTTCTGTGCCAGAGATGACCCTACGACAGTTATGGTTATGTTGATACCTTTTGGAGCCGGCATGGACCTC
SEQ ID NO:228
CAGGCCAGTCAGAGCGTTAGTAGCTACTTAAAC
SEQ ID NO:229
AGGGCATCCACTCTGGAATCT
SEQ ID NO:230
CAATGTACTTATGGTACTAGTAGTAGTTATGGTGCTGCT
SEQ ID NO:231
AGCAATGCAATAAGC
SEQ ID NO:232
ATCATTAGTTATAGTGGTACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:233
GATGACCCTACGACAGTTATGGTTATGTTGATACCTTTTGGAGCCGGCATGGACCTC
SEQ ID NO:234
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTASPVSAAVGGTVTINCQASQSVYKNNYLSWYQQKPGQPPKGLIYSASTLDSGVPLRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSSGDCYA
SEQ ID NO:235
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSYWMCWVRQAPGKGLEWIACIVTGNGNTYYANWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCAKAYDL
SEQ ID NO:236
QASQSVYKNNYLS
SEQ ID NO:237
SASTLDS
SEQ ID NO:238
LGSYDCSSGDCYA
SEQ ID NO:239
SYWMC
SEQ ID NO:240
CIVTGNGNTYYANWAKG
SEQ ID NO:241
AYDL
SEQ ID NO:242
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTGCATCGCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAAGGCCTGATCTATTCTGCATCGACTCTAGATTCTGGGGTCCCATTGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTATGCT
SEQ ID NO:243
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCTACTGGATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCATGCATTGTTACTGGTAATGGTAACACTTACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTTTGTGCGAAAGCCTATGACTTG
SEQ ID NO:244
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCC
SEQ ID NO:245
TCTGCATCGACTCTAGATTCT
SEQ ID NO:246
CTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTATGCT
SEQ ID NO:247
AGCTACTGGATGTGC
SEQ ID NO:248
TGCATTGTTACTGGTAATGGTAACACTTACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:249
GCCTATGACTTG
SEQ ID NO:250
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGSTFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGTGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVFNDDSDDA
SEQ ID NO:251
METGLRWLLLVAVPKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTLSGFSLSAYYMSWVRQAPGKGLEWIGFITLSDHISYARWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRGWGAMGRLDL
SEQ ID NO:252
QASQSVYDNNYLS
SEQ ID NO:253
GASTLAS
SEQ ID NO:254
AGVFNDDSDDA
SEQ ID NO:255
AYYMS
SEQ ID NO:256
FITLSDHISYARWAKG
SEQ ID NO:257
SRGWGAMGRLDL
SEQ ID NO:258
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTTCCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTATTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCACGGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTTTAATGATGATAGTGATGATGCC
SEQ ID NO:259
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCCCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACACTCTCTGGATTCTCCCTCAGTGCATACTATATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAGTGATCATATATCTTACGCGAGGTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:260
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTATTTATCC
SEQ ID NO:261
GGTGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:262
GCAGGCGTTTTTAATGATGATAGTGATGATGCC
SEQ ID NO:263
GCATACTATATGAGC
SEQ ID NO:264
TTCATTACTCTGAGTGATCATATATCTTACGCGAGGTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:265
AGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:266
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQASQSVYNNKNLAWYQQKSGQPPKLLIYWASTLASGVSSRFSGSGSGTQFTLTVSGVQCDDAATYYCLGVFDDDADNA
SEQ ID NO:267
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYSMTWVRQAPGKGLEYIGVIGTSGSTYYATWAKGRFTISRTSTTVALKITSPTTEDTATYFCVRSLSSITFL
SEQ ID NO:268
QASQSVYNNKNLA
SEQ ID NO:269
WASTLAS
SEQ ID NO:270
LGVFDDDADNA
SEQ ID NO:271
SYSMT
SEQ ID NO:272
VIGTSGSTYYATWAKG
SEQ ID NO:273
SLSSITFL
SEQ ID NO:274
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTCGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGCGGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAACAACAAAAATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAATCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACTGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCGTCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGTTTTTGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:275
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAATGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATATATCGGAGTCATTGGTACTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGCTCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGGAGTCTTTCTTCTATTACTTTCTTG
SEQ ID NO:276
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAACAACAAAAATTTAGCC
SEQ ID NO:277
TGGGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:278
CTAGGCGTTTTTGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:279
AGCTACTCCATGACC
SEQ ID NO:280
GTCATTGGTACTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:281
AGTCTTTCTTCTATTACTTTCTTG
SEQ ID NO:282
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAFELTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQNIYRYLAWYQQKPGQPPKFLIYLASTLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYSSNSVA
SEQ ID NO:283
METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLVESGGDLVQPEGSLTLTCTASELDFSSGYWICWVRQVPGKGLEWIGCIYTGSSGSTFYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGYSGFGYFKL
SEQ ID NO:284
QASQNIYRYLA
SEQ ID NO:285
LASTLAS
SEQ ID NO:286
QSYYSSNSVA
SEQ ID NO:287
SGYWIC
SEQ ID NO:288
CIYTGSSGSTFYASWAKG
SEQ ID NO:289
GYSGFGYFKL
SEQ ID NO:290
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCATTCGAATTGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAACATTTATAGATACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGTTCCTGATCTATCTGGCATCTACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTTAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGTTATTATAGTAGTAATAGTGTCGCT
SEQ ID NO:291
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCTTCTGAGTTAGACTTCAGTAGCGGCTACTGGATATGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTATACTGGTAGTAGTGGTAGCACTTTTTACGCGAGTTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGAGGTTATAGTGGCTTTGGTTACTTTAAGTTG
SEQ ID NO:292
CAGGCCAGTCAGAACATTTATAGATACTTAGCC
SEQ ID NO:293
CTGGCATCTACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:294
CAAAGTTATTATAGTAGTAATAGTGTCGCT
SEQ ID NO:295
AGCGGCTACTGGATATGC
SEQ ID NO:296
TGCATTTATACTGGTAGTAGTGGTAGCACTTTTTACGCGAGTTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:297
GGTTATAGTGGCTTTGGTTACTTTAAGTTG
SEQ ID NO:298
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASEDIYRLLAWYQQKPGQPPKLLIYDSSDLASGVPSRFKGSGSGTEFTLAISGVQCDDAATYYCQQAWSYSDIDNA
SEQ ID NO:299
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMSWVRQAPGKGLEWIGIITTSGNTFYASWAKGRLTISRTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARTSDIFYYRNL
SEQ ID NO:300
QASEDIYRLLA
SEQ ID NO:301
DSSDLAS
SEQ ID NO:302
QQAWSYSDIDNA
SEQ ID NO:303
SYYMS
SEQ ID NO:304
IITTSGNTFYASWAKG
SEQ ID NO:305
TSDIFYYRNL
SEQ ID NO:306
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTTATAGGTTATTGGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATTCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCGCCATCAGCGGTGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGCTTGGAGTTATAGTGATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:307
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCGGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTACTACTAGTGGTAATACATTTTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGGCTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAACTTCTGATATTTTTTATTATCGTAACTTG
SEQ ID NO:308
CAGGCCAGTGAGGACATTTATAGGTTATTGGCC
SEQ ID NO:309
GATTCATCCGATCTGGCATCT
SEQ ID NO:310
CAACAGGCTTGGAGTTATAGTGATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:311
AGCTACTACATGAGC
SEQ ID NO:312
ATCATTACTACTAGTGGTAATACATTTTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:313
ACTTCTGATATTTTTTATTATCGTAACTTG
SEQ ID NO:314
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTASPVSAAVGATVTINCQSSQSVYNDMDLAWFQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCLGAFDDDADNT
SEQ ID NO:315
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLTRHAITWVRQAPGKGLEWIGCIWSGGSTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARVIGDTAGYAYFTGLDL
SEQ ID NO:316
QSSQSVYNDMDLA
SEQ ID NO:317
SASTLAS
SEQ ID NO:318
LGAFDDDADNT
SEQ ID NO:319
RHAIT
SEQ ID NO:320
CIWSGGSTYYATWAKG
SEQ ID NO:321
VIGDTAGYAYFTGLDL
SEQ ID NO:322
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACGTTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACTGCATCACCCGTGTCTGCCGCTGTGGGAGCCACAGTCACCATCAACTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATGACATGGACTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGCTTTTGATGATGATGCTGATAATACT
SEQ ID NO:323
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCACTAGGCATGCAATAACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATGCATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTCAGAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTACTTCTGTGCCAGAGTCATTGGCGATACTGCTGGTTATGCTTATTTTACGGGGCTTGACTTG
SEQ ID NO:324
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATGACATGGACTTAGCC
SEQ ID NO:325
TCTGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:326
CTAGGCGCTTTTGATGATGATGCTGATAATACT
SEQ ID NO:327
AGGCATGCAATAACC
SEQ ID NO:328
TGCATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:329
GTCATTGGCGATACTGCTGGTTATGCTTATTTTACGGGGCTTGACTTG
SEQ ID NO:330
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSVYNWLSWYQQKPGQPPKLLIYTASSLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVECADAATYYCQQGYTSDVDNV
SEQ ID NO:331
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEEAGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGLEYIGIISSSGSTYYATWAKGRFTISQASSTTVDLKITSPTTEDSATYFCARGGAGSGGVWLLDGFDP
SEQ ID NO:332
QASQSVYNWLS
SEQ ID NO:333
TASSLAS
SEQ ID NO:334
QQGYTSDVDNV
SEQ ID NO:335
SYAMG
SEQ ID NO:336
IISSSGSTYYATWAKG
SEQ ID NO:337
GGAGSGGVWLLDGFDP
SEQ ID NO:338
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGCATCCAGTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATACTAGTGATGTTGATAATGTT
SEQ ID NO:339
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGGCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATTAGTAGTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCACAAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATTACCAGTCCGACAACCGAGGACTCGGCCACATATTTCTGTGCCAGAGGGGGTGCTGGTAGTGGTGGTGTTTGGCTGCTTGATGGTTTTGATCCC
SEQ ID NO:340
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTGGTTATCC
SEQ ID NO:341
ACTGCATCCAGTCTGGCATCT
SEQ ID NO:342
CAACAGGGTTATACTAGTGATGTTGATAATGTT
SEQ ID NO:343
AGCTATGCAATGGGC
SEQ ID NO:344
ATCATTAGTAGTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:345
GGGGGTGCTGGTAGTGGTGGTGTTTGGCTGCTTGATGGTTTTGATCCC
SEQ ID NO:346
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGAKCADVVMTQTPASVSAAVGGTVTINCQASENIYNWLAWYQQKPGQPPKLLIYTVGDLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSSSYVDNV
SEQ ID NO:347
METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNDYAVGWFRQAPGKGLEWIGYIRSSGTTAYATWAKGRFTISATSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGGAGSSGVWILDGFAP
SEQ ID NO:348
QASENIYNWLA
SEQ ID NO:349
TVGDLAS
SEQ ID NO:350
QQGYS S SYVDNV
SEQ ID NO:351
DYAVG
SEQ ID NO:352
YIRSSGTTAYATWAKG
SEQ ID NO:353
GGAGSSGVWILDGFAP
SEQ ID NO:354
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAAATGTGCCGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAATTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGTAGGCGATCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTATTGTCAACAGGGTTATAGTAGTAGTTATGTTGATAATGTT
SEQ ID NO:355
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAATGACTATGCAGTGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATACATTCGTAGTAGTGGTACCACAGCCTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCGCTACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGGTGCTGGTAGTAGTGGTGTGTGGATCCTTGATGGTTTTGCTCCC
SEQ ID NO:356
CAGGCCAGTGAGAACATTTATAATTGGTTAGCC
SEQ ID NO:357
ACTGTAGGCGATCTGGCATCT
SEQ ID NO:358
CAACAGGGTTATAGTAGTAGTTATGTTGATAATGTT
SEQ ID NO:359
GACTATGCAGTGGGC
SEQ ID NO:360
TACATTCGTAGTAGTGGTACCACAGCCTACGCGACCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:361
GGGGGTGCTGGTAGTAGTGGTGTGTGGATCCTTGATGGTTTTGCTCCC
SEQ ID NO:362
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVYQNNYLSWFQQKPGQPPKLLIYGAATLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGAYRDVDS
SEQ ID NO:363
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPGASLTLTCTASGFSFTSTYYIYWVRQAPGKGLEWIACIDAGSSGSTYYATWVNGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCAKWDYGGNVGWGYDL
SEQ ID NO:364
QASQSVYQNNYLS
SEQ ID NO:365
GAATLAS
SEQ ID NO:366
AGAYRDVDS
SEQ ID NO:367
STYYIY
SEQ ID NO:368
CIDAGSSGSTYYATWVNG
SEQ ID NO:369
WDYGGNVGWGYDL
SEQ ID NO:370
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCTCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCAGAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCGGCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGCTTATAGGGATGTGGATTCT
SEQ ID NO:371
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGGGGCATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCTTTACTAGTACCTACTACATCTACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCATGTATTGATGCTGGTAGTAGTGGTAGCACTTACTACGCGACCTGGGTGAATGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAAATGGGATTATGGTGGTAATGTTGGTTGGGGTTATGACTTG
SEQ ID NO:372
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCAGAACAACTACTTATCC
SEQ ID NO:373
GGTGCGGCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:374
GCAGGCGCTTATAGGGATGTGGATTCT
SEQ ID NO:375
AGTACCTACTACATCTAC
SEQ ID NO:376
TGTATTGATGCTGGTAGTAGTGGTAGCACTTACTACGCGACCTGGGTGAATGGC
SEQ ID NO:377
TGGGATTATGGTGGTAATGTTGGTTGGGGTTATGACTTG
SEQ ID NO:378
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAFELTQTPSSVEAAVGGTVTIKCQASQSISSYLAWYQQKPGQPPKFLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYDSVSNP
SEQ ID NO:379
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPEGSLTLTCKASGLDLGTYWFMCWVRQAPGKGLEWIACIYTGSSGSTFYASWVNGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGYSGYGYFKL
SEQ ID NO:380
QASQSISSYLA
SEQ ID NO:381
RASTLAS
SEQ ID NO:382
QSYYDSVSNP
SEQ ID NO:383
TYWFMC
SEQ ID NO:384
CIYTGSSGSTFYASWVNG
SEQ ID NO:385
GYSGYGYFKL
SEQ ID NO:386
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCATTCGAATTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGTTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGTTCCTGATCTACAGGGCGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATTATGATAGTGTTTCAAATCCT
SEQ ID NO:387
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCAAAGCCTCTGGACTCGACCTCGGTACCTACTGGTTCATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCTTGTATTTATACTGGTAGTAGTGGTTCCACTTTCTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACTTATTTTTGTGCGAGAGGTTATAGTGGTTATGGTTATTTTAAGTTG
SEQ ID NO:388
CAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGTTACTTAGCC
SEQ ID NO:389
AGGGCGTCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:390
CAAAGCTATTATGATAGTGTTTCAAATCCT
SEQ ID NO:391
ACCTACTGGTTCATGTGC
SEQ ID NO:392
TGTATTTATACTGGTAGTAGTGGTTCCACTTTCTACGCGAGCTGGGTGAATGGC
SEQ ID NO:393
GGTTATAGTGGTTATGGTTATTTTAAGTTG
SEQ ID NO:394
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGVTFAIEMTQSPFSVSAAVGGTVSISCQASQSVYKNNQLSWYQQKSGQPPKLLIYGASALASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDVQCDDAATYYCAGAITGSIDTDG
SEQ ID NO:395
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPGASLTLTCTTSGFSFSSSYFICWVRQAPGKGLEWIACIYGGDGSTYYASWAKGRFTISKTS STTVTLQMTSLTAADTATYFCAREWAYSQGYFGAFDL
SEQ ID NO:396
QASQSVYKNNQLS
SEQ ID NO:397
GASALAS
SEQ ID NO:398
AGAITGSIDTDG
SEQ ID NO:399
SSYFIC
SEQ ID NO:400
CIYGGDGSTYYASWAKG
SEQ ID NO:401
EWAYSQGYFGAFDL
SEQ ID NO:402
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGTCACATTTGCCATCGAAATGACCCAGAGTCCATTCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACCAATTATCCTGGTATCAGCAGAAATCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCGGCTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGCTATTACTGGTAGTATTGATACGGATGGT
SEQ ID NO:403
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGGGGCATCCCTGACACTCACCTGCACAACTTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCAGCTACTTCATTTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCATGCATTTATGGTGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACGCTGCAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGAGAATGGGCATATAGTCAAGGTTATTTTGGTGCTTTTGATCTC
SEQ ID NO:404
CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACCAATTATCC
SEQ ID NO:405
GGTGCATCGGCTCTGGCATCT
SEQ ID NO:406
GCAGGCGCTATTACTGGTAGTATTGATACGGATGGT
SEQ ID NO:407
AGCAGCTACTTCATTTGC
SEQ ID NO:408
TGCATTTATGGTGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:409
GAATGGGCATATAGTCAAGGTTATTTTGGTGCTTTTGATCTC
SEQ ID NO:410
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASEDISSYLAWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVSSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQCTYGTISISDGNA
SEQ ID NO:411
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYFMTWVRQAPGEGLEYIGFINPGGSAYYASWVKGRFTISKSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVLIVSYGAFTI
SEQ ID NO:412
QASEDISSYLA
SEQ ID NO:413
AASNLES
SEQ ID NO:414
QCTYGTISISDGNA
SEQ ID NO:415
SYFMT
SEQ ID NO:416
FINPGGSAYYASWVKG
SEQ ID NO:417
VLIVSYGAFTI
SEQ ID NO:418
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGATATTAGTAGCTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACCTATTACTGTCAATGTACTTATGGTACTATTTCTATTAGTGATGGTAATGCT
SEQ ID NO:419
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAATGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCTTACTACGCGAGCTGGGTGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGTCCTCGACCACGGTAGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGGTTCTGATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC
SEQ ID NO:420
CAGGCCAGTGAGGATATTAGTAGCTACTTAGCC
SEQ ID NO:421
GCTGCATCCAATCTGGAATCT
SEQ ID NO:422
CAATGTACTTATGGTACTATTTCTATTAGTGATGGTAATGCT
SEQ ID NO:423
AGCTACTTCATGACC
SEQ ID NO:424
TTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCTTACTACGCGAGCTGGGTGAAAGGC
SEQ ID NO:425
GTTCTGATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC
SEQ ID NO:426
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASEDIESYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTYGIISISDGNA
SEQ ID NO:427
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLS SYFMTWVRQAPGEGLEYIGFMNTGDNAYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVLVVAYGAFNI
SEQ ID NO:428
QASEDIESYLA
SEQ ID NO:429
GASNLES
SEQ ID NO:430
QCTYGIISISDGNA
SEQ ID NO:431
SYFMT
SEQ ID NO:432
FMNTGDNAYYASWAKG
SEQ ID NO:433
VLVVAYGAFNI
SEQ ID NO:434
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTGAAAGCTATCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTATTGTCAATGCACTTATGGTATTATTAGTATTAGTGATGGTAATGCT
SEQ ID NO:435
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTGTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATACATCGGATTCATGAATACTGGTGATAACGCATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGGTTCTTGTTGTTGCTTATGGAGCCTTTAACATC
SEQ ID NO:436
CAGGCCAGTGAGGACATTGAAAGCTATCTAGCC
SEQ ID NO:437
GGTGCATCCAATCTGGAATCT
SEQ ID NO:438
CAATGCACTTATGGTATTATTAGTATTAGTGATGGTAATGCT
SEQ ID NO:439
AGCTACTTCATGACC
SEQ ID NO:440
TTCATGAATACTGGTGATAACGCATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:441
GTTCTTGTTGTTGCTTATGGAGCCTTTAACATC
SEQ ID NO:442
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSEPVGGTVSISCQSSKSVMNNNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCQGGYTGYSDHGT
SEQ ID NO:443
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVKPDETLTLTCTVSGIDLSSYPMNWVRQAPGKGLEWIGFINTGGTIVYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARGSYVSSGYAYYFNV
SEQ ID NO:444
QSSKSVMNNNYLA
SEQ ID NO:445
GASNLAS
SEQ ID NO:446
QGGYTGYSDHGT
SEQ ID NO:447
SYPMN
SEQ ID NO:448
FINTGGTIVYASWAKG
SEQ ID NO:449
GSYVSSGYAYYFNV
SEQ ID NO:450
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGAACCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTAAGAGTGTTATGAATAACAACTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGCATCTGGGGTCCCATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCGGTTATACTGGTTATAGTGATCATGGGACT
SEQ ID NO:451
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCAAGCCTGACGAAACCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATCCAATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTAATACTGGTGGTACCATAGTCTACGCGAGCTGGGCAAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCAGTTATGTTTCATCTGGTTATGCCTACTATTTTAATGTC
SEQ ID NO:452
CAGTCCAGTAAGAGTGTTATGAATAACAACTACTTAGCC
SEQ ID NO:453
GGTGCATCCAATCTGGCATCT
SEQ ID NO:454
CAAGGCGGTTATACTGGTTATAGTGATCATGGGACT
SEQ ID NO:455
AGCTATCCAATGAAC
SEQ ID NO:456
TTCATTAATACTGGTGGTACCATAGTCTACGCGAGCTGGGCAAAAGGC
SEQ ID NO:457
GGCAGTTATGTTTCATCTGGTTATGCCTACTATTTTAATGTC
SEQ ID NO:458
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQSVYNNNWLSWFQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDVATYYCAGGYLDSVI
SEQ ID NO:459
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYSINWVRQAPGKGLEWIGIIANSGTTFYANWAKGRFTVSKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARESGMYNEYGKFNI
SEQ ID NO:460
QSSQSVYNNNWLS
SEQ ID NO:461
KASTLAS
SEQ ID NO:462
AGGYLDSVI
SEQ ID NO:463
TYSIN
SEQ ID NO:464
IIANSGTTFYANWAKG
SEQ ID NO:465
ESGMYNEYGKFNI
SEQ ID NO:466
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACTGGTTATCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGTTGCCACTTACTACTGTGCGGGCGGTTATCTTGATAGTGTTATT
SEQ ID NO:467
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTATTCAATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAATGGATCGGAATCATTGCTAATAGTGGTACCACATTCTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGAGTGGAATGTACAATGAATATGGTAAATTTAACATC
SEQ ID NO:468
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACTGGTTATCC
SEQ ID NO:469
AAGGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:470
GCGGGCGGTTATCTTGATAGTGTTATT
SEQ ID NO:471
ACCTATTCAATAAAC
SEQ ID NO:472
ATCATTGCTAATAGTGGTACCACATTCTACGCGAACTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:473
GAGAGTGGAATGTACAATGAATATGGTAAATTTAACATC
SEQ ID NO:474
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCASDMTQTPS SVSAAVGGTVTINCQASENIYSFLAWYQQKPGQPPKLLIFKASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGATVYDIDNN
SEQ ID NO:475
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSAYAMIWVRQAPGEGLEWITIIYPNGITYYANWAKGRFTVSKTSTAMDLKITSPTTEDTATYFCARDAESSKNAYWGYFNV
SEQ ID NO:476
QASENIYSFLA
SEQ ID NO:477
KASTLAS
SEQ ID NO:478
QQGATVYDIDNN
SEQ ID NO:479
AYAMI
SEQ ID NO:480
IIYPNGITYYANWAKG
SEQ ID NO:481
DAESSKNAYWGYFNV
SEQ ID NO:482
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTCTGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTTCAAGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT
SEQ ID NO:483
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTTTCTGGAATCGACCTCAGTGCCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCACAATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCGCGATGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCTACTTTAACGTC
SEQ ID NO:484
CAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCC
SEQ ID NO:485
AAGGCTTCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:486
CAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT
SEQ ID NO:487
GCCTATGCAATGATC
SEQ ID NO:488
ATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:489
GATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCTACTTTAACGTC
SEQ ID NO:490
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCASDMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASENIYSFLAWYQQKPGQPPKLLIFRASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGATVYDIDNN
SEQ ID NO:491
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSAYAMIWVRQAPGEGLEWITIIYPNGITYYANWAKGRFTVSKTSTAMDLKITSPTTEDTATYFCARDAESSKNAYWGYFNV
SEQ ID NO:492
QASENIYSFLA
SEQ ID NO:493
RASTLAS
SEQ ID NO:494
QQGATVYDIDNN
SEQ ID NO:495
AYAMI
SEQ ID NO:496
IIYPNGITYYANWAKG
SEQ ID NO:497
DAESSKNAYWGYFNV
SEQ ID NO:498
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTCTGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTTCAGGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT
SEQ ID NO:499
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTTTCTGGAATCGACCTCAGTGCCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCACAATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCGCGATGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCTACTTTAACGTC
SEQ ID NO:500
CAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCC
SEQ ID NO:501
AGGGCTTCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:502
CAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT
SEQ ID NO:503
GCCTATGCAATGATC
SEQ ID NO:504
ATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:505
GATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCTACTTTAACGTC
SEQ ID NO:506
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAIEMTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASESVFNNMLSWYQQKPGHSPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECDDAATYYCAGYKSDSNDGDNV
SEQ ID NO:507
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNRNSITWVRQAPGEGLEWIGIITGSGRTYYANWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARGHPGLGSGNI
SEQ ID NO:508
QASESVFNNMLS
SEQ ID NO:509
DASDLAS
SEQ ID NO:510
AGYKSDSNDGDNV
SEQ ID NO:511
RNSIT
SEQ ID NO:512
IITGSGRTYYANWAKG
SEQ ID NO:513
GHPGLGSGNI
SEQ ID NO:514
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCATTGAAATGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCCGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTGTTTTTAATAATATGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCACTCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGGTATAAAAGTGATAGTAATGATGGCGATAATGTT
SEQ ID NO:515
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAACAGGAATTCAATAACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTACTGGTAGTGGTAGAACGTACTACGCGAACTGGGCAAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCCATCCTGGTCTTGGTAGTGGTAACATC
SEQ ID NO:516
CAGGCCAGTGAGAGTGTTTTTAATAATATGTTATCC
SEQ ID NO:517
GATGCATCCGATCTGGCATCT
SEQ ID NO:518
GCAGGGTATAAAAGTGATAGTAATGATGGCGATAATGTT
SEQ ID NO:519
AGGAATTCAATAACC
SEQ ID NO:520
ATCATTACTGGTAGTGGTAGAACGTACTACGCGAACTGGGCAAAAGGC
SEQ ID NO:521
GGCCATCCTGGTCTTGGTAGTGGTAACATC
SEQ ID NO:522
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTASSVSAAVGGTVTINCQSSQSVYNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYTASSLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISEVQCDDAATYYCQGYYSGPIIT
SEQ ID NO:523
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNNYYIQWVRQAPGEGLEWIGIIYAGGSAYYATWANGRFTIAKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGTFDGYEL
SEQ ID NO:524
QSSQSVYNNYLS
SEQ ID NO:525
TASSLAS
SEQ ID NO:526
QGYYSGPIIT
SEQ ID NO:527
NYYIQ
SEQ ID NO:528
IIYAGGSAYYATWANG
SEQ ID NO:529
GTFDGYEL
SEQ ID NO:530
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCGCAAGTGCTGACCCAGACTGCATCGTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGCATCCAGCCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGAAGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCTATTATAGTGGTCCTATAATTACT
SEQ ID NO:531
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATAACTACTACATACAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCGGGATCATTTATGCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGACCTGGGCAAACGGCCGATTCACCATCGCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAGATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGACATTTGATGGTTATGAGTTG
SEQ ID NO:532
CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACTACTTATCC
SEQ ID NO:533
ACTGCATCCAGCCTGGCATCT
SEQ ID NO:534
CAAGGCTATTATAGTGGTCCTATAATTACT
SEQ ID NO:535
AACTACTACATACAA
SEQ ID NO:536
ATCATTTATGCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGACCTGGGCAAACGGC
SEQ ID NO:537
GGGACATTTGATGGTTATGAGTTG
SEQ ID NO:538
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSVPVGDTVTISCQSSESVYSNNLLSWYQQKPGQPPKLLIYRASNLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGAQCDDAATYYCQGYYSGVINS
SEQ ID NO:539
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYFMSWVRQAPGEGLEYIGFINPGGSAYYASWASGRLTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARILIVSYGAFTI
SEQ ID NO:540
QSSESVYSNNLLS
SEQ ID NO:541
RASNLAS
SEQ ID NO:542
QGYYSGVINS
SEQ ID NO:543
SYFMS
SEQ ID NO:544
FINPGGSAYYASWASG
SEQ ID NO:545
ILIVSYGAFTI
SEQ ID NO:546
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCTGTGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTGAGAGCGTTTATAGTAATAACCTCTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCAATCTGGCATCTGGTGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGCACAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCTATTATAGTGGTGTCATTAATAGT
SEQ ID NO:547
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTGTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGCGAGTGGCCGACTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTAGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGATTCTTATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC
SEQ ID NO:548
CAGTCCAGTGAGAGCGTTTATAGTAATAACCTCTTATCC
SEQ ID NO:549
AGGGCATCCAATCTGGCATCT
SEQ ID NO:550
CAAGGCTATTATAGTGGTGTCATTAATAGT
SEQ ID NO:551
AGCTACTTCATGAGC
SEQ ID NO:552
TTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGCGAGTGGC
SEQ ID NO:553
ATTCTTATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC
SEQ ID NO:554
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQATESIGNELSWYQQKPGQAPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITGVECDDAATYYCQQGYSSANIDNA
SEQ ID NO:555
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSKYYMSWVRQAPEKGLKYIGYIDSTTVNTYYATWARGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARGSTYFTDGGHRLDL
SEQ ID NO:556
QATESIGNELS
SEQ ID NO:557
SASTLAS
SEQ ID NO:558
QQGYS SANIDNA
SEQ ID NO:559
KYYMS
SEQ ID NO:560
YIDSTTVNTYYATWARG
SEQ ID NO:561
GSTYFTDGGHRLDL
SEQ ID NO:562
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGGCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACCGGCGTGGAGTGTGATGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:563
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAAGTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTGAAATACATCGGATACATTGATAGTACTACTGTTAATACATACTACGCGACCTGGGCGAGAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAGATCACCAGTCCGACAAGTGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGAAGTACTTATTTTACTGATGGAGGCCATCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:564
CAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCC
SEQ ID NO:565
TCTGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:566
CAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:567
AAGTACTACATGAGC
SEQ ID NO:568
TACATTGATAGTACTACTGTTAATACATACTACGCGACCTGGGCGAGAGGC
SEQ ID NO:569
GGAAGTACTTATTTTACTGATGGAGGCCATCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:570
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQATESIGNELSWYQQKPGQAPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITGVECDDAATYYCQQGYSSANIDNA
SEQ ID NO:571
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYNMGWVRQAPGKGLEWIGSITIDGRTYYASWAKGRFTVSKSSTTVDLKMTSLTTGDTATYFCARILIVSYGAFTI
SEQ ID NO:572
QATESIGNELS
SEQ ID NO:573
SASTLAS
SEQ ID NO:574
QQGYSSANIDNA
SEQ ID NO:575
TYNMG
SEQ ID NO:576
SITIDGRTYYASWAKG
SEQ ID NO:577
ILIVSYGAFTI
SEQ ID NO:578
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGGCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACCGGCGTGGAGTGTGATGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:579
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTACAACATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAAGTATTACTATTGATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCGTCTCCAAAAGCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGGGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGATTCTTATTGTTTCTTATGGGGCCTTTACCATC
SEQ ID NO:580
CAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCC
SEQ ID NO:581
TCTGCATCCACTCTGGCATCT
SEQ ID NO:582
CAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:583
ACCTACAACATGGGC
SEQ ID NO:584
AGTATTACTATTGATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC
SEQ ID NO:585
ATTCTTATTGTTTCTTATGGGGCCTTTACCATC
SEQ ID NO:586
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:587
GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO:588
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:589
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO:590
VPPGEDSKDVAAPHR
SEQ ID NO:591
GED SKDVAAPHRQPL
SEQ ID NO:592
SKDVAAPHRQPLTSS
SEQ ID NO:593
VAAPHRQPLTSSERI
SEQ ID NO:594
PHRQPLTSSERIDKQ
SEQ ID NO:595
QPLTSSERIDKQIRY
SEQ ID NO:596
TSSERIDKQIRYILD
SEQ ID NO:597
ERIDKQIRYILDGIS
SEQ ID NO:598
DKQIRYILDGISALR
SEQ ID NO:599
IRYILDGISALRKET
SEQ ID NO:600
ILDGISALRKETCNK
SEQ ID NO:601
GISALRKETCNKSNM
SEQ ID NO:602
ALRKETCNKSNMCES
SEQ ID NO:603
KETCNKSNMCESSKE
SEQ ID NO:604
CNKSNMCESSKEALA
SEQ ID NO:605
SNMCESSKEALAENN
SEQ ID NO:606
CESSKEALAENNLNL
SEQ ID NO:607
SKEALAENNLNLPKM
SEQ ID NO:608
ALAENNLNLPKMAEK
SEQ ID NO:609
ENNLNLPKMAEKDGC
SEQ ID NO:610
LNLPKMAEKDGCFQS
SEQ ID NO:611
PKMAEKDGCFQSGFN
SEQ ID NO:612
AEKDGCFQSGFNEET
SEQ ID NO:613
DGCFQSGFNEETCLV
SEQ ID NO:614
FQSGFNEETCLVKII
SEQ ID NO:615
GFNEETCLVKIITGL
SEQ ID NO:616
EETCLVKIITGLLEF
SEQ ID NO:617
CLVKIITGLLEFEVY
SEQ ID NO:618
KIITGLLEFEVYLEY
SEQ ID NO:619
TGLLEFEVYLEYLQN
SEQ ID NO:620
LEFEVYLEYLQNRFE
SEQ ID NO:621
EVYLEYLQNRFESSE
SEQ ID NO:622
LEYLQNRFESSEEQA
SEQ ID NO:623
LQNRFESSEEQARAV
SEQ ID NO:624
RFESSEEQARAVQMS
SEQ ID NO:625
SSEEQARAVQMSTKV
SEQ ID NO:626
EQARAVQMSTKVLIQ
SEQ ID NO:627
RAVQMSTKVLIQFLQ
SEQ ID NO:628
QMSTKVLIQFLQKKA
SEQ ID NO:629
TKVLIQFLQKKAKNL
SEQ ID NO:630
LIQFLQKKAKNLDAI
SEQ ID NO:631
FLQKKAKNLDAITTP
SEQ ID NO:632
KKAKNLDAITTPDPT
SEQ ID NO:633
KNLDAITTPDPTTNA
SEQ ID NO:634
DAITTPDPTTNASLL
SEQ ID NO:635
TTPDPTTNASLLTKL
SEQ ID NO:636
DPTTNASLLTKLQAQ
SEQ ID NO:637
TNASLLTKLQAQNQW
SEQ ID NO:638
SLLTKLQAQNQWLQD
SEQ ID NO:639
TKLQAQNQWLQDMTT
SEQ ID NO:640
QAQNQWLQDMTTHLI
SEQ ID NO:641
NQWLQDMTTHLILRS
SEQ ID NO:642
LQDMTTHLILRSFKE
SEQ ID NO:643
MTTHLILRSFKEFLQ
SEQ ID NO:644
HLILRSFKEFLQSSL
SEQ ID NO:645
LRSFKEFLQSSLRAL
SEQ ID NO:646
FKEFLQSSLRALRQM
SEQ ID NO:647
AYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTEVVVKR
SEQ ID NO:648
AIQMTQSPS SLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
SEQ ID NO:649
DIQMTQSPS SLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC
SEQ ID NO:650
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC
SEQ ID NO:651
AIQMTQSPS SLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:652
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:653
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
SEQ ID NO:654
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
SEQ ID NO:655
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS SYAMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
SEQ ID NO:656
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATWAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:657
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:658
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATSAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDS SDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
SEQ ID NO:659
IIYGSDETAYATSAIG
SEQ ID NO:660
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNA
SEQ ID NO:661
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SEQ ID NO:662
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT
SEQ ID NO:663
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG
SEQ ID NO:664
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SEQ ID NO:665
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:666
IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:667
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASETIYSWLSWYQQKPGQPPKLLIYQASDLASGVPSRFSGSGAGTEYTLTISGVQCDDAATYYCQQGYSGSNVDNV
SEQ ID NO:668
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SEQ ID NO:669
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGATTCAGCGGCAGTGGGGCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTT
SEQ ID NO:670
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTTACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGACCATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAGAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGAGGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTGATCCC
SEQ ID NO:671
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLSWFQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFVGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSDNA
SEQ ID NO:672
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SEQ ID NO:673
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCGTGGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATAATGCC
SEQ ID NO:674
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACCCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTGTCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACAATGAGTGATAATATAAATTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTACAATGGGTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:675
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGAICDPVLTQTPSPVSAPVGGTVSISCQASQSVYENNYLSWFQQKPGQPPKLLIYGASTLDSGVPSRFKGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSDDA
SEQ ID NO:676
METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGGLVTPGGTLTLTCTASGFSLNAYYMNWVRQAPGKGLEWIGFITLNNNVAYANWAKGRFTFSKTSTTVDLKMTSPTPEDTATYFCARSRGWGAMGRLDL
SEQ ID NO:677
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCATATGTGACCCTGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTATCTGCACCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGAGAACAACTATTTATCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGATTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATTACAGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATGATGCC
SEQ ID NO:678
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTAACGCCTGGAGGAACCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGCCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAATAATAATGTAGCTTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCTTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACACCCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATCTC
SEQ ID NO:679
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVDDNNWLGWYQQKRGQPPKYLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGGFSGNIFA
SEQ ID NO:680
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SEQ ID NO:681
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCGCCTGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTGATGATAACAACTGGTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACGAGGGCAGCCTCCCAAGTACCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTTTAGTGGTAATATCTTTGCT
SEQ ID NO:682
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGCTTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAATCATTGGTGGTTTTGGTACCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAGAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTGGTCCTGGTAATGGTGGTGACATC
SEQ ID NO:683
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSVPVGGTVTIKCQSSQSVYNNFLSWYQQKPGQPPKLLIYQASKLASGVPDRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADNA
SEQ ID NO:684
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SEQ ID NO:685
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGTACCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATTTCTTATCGTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCAGATAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT
SEQ ID NO:686
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACGCTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGACTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGCTGGTAGTGGTAGCACATGGTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGGATACGATGACTATGGTGATTTCGATCGATTGGATCTC
SEQ ID NO:687
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKSGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNA
SEQ ID NO:688
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SEQ ID NO:689
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SEQ ID NO:690
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCTCAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATGATTTATGGTAGTGATGAAACAGCCTACGCGAACTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG
SEQ ID NO:691
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SEQ ID NO:692
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SEQ ID NO:693
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:694
CAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCC
SEQ ID NO:695
CAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCT
SEQ ID NO:696
ATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGC
SEQ ID NO:697
GATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTG
SEQ ID NO:698
GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACG
SEQ ID NO:699
AIQMTQSPS SLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKRT
SEQ ID NO:700
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SEQ ID NO:701
GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO:702
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SEQ ID NO:703
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SEQ ID NO:704
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SEQ ID NO:705
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SEQ ID NO:706
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SEQ ID NO:707
ATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCCTTCTGTTTCTCTTTAGCAGCGCTTATTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO:708
MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDS SDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:709
AIQMTQSPS SLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:710
RASQGIRNDLG
SEQ ID NO:711
RASQGISNYLA
SEQ ID NO:712
RASQSISSWLA
SEQ ID NO:713
AASSLQS
SEQ ID NO:714
AASTLQS
SEQ ID NO:715
KASSLES
SEQ ID NO:716
SNYMS
SEQ ID NO:717
VIYSGGSTYYADSVKG
SEQ ID NO:718
VIYSGGS STYYADSVKG
SEQ ID NO:719
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:720
ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCT
SEQ ID NO:721
GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT
SEQ ID NO:722
ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO:723
GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGT
SEQ ID NO:724
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTG
SEQ ID NO:725
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC
SEQ ID NO:726
MEKLLCFLVLTSLSHAFGQTDMSRKAFVFPKESDTSYVSLKAPLTKPLKAFTVCLHFYTELS STRGYSIFSYATKRQDNEILIFWSKDIGYSFTVGGSEILFEVPEVTVAPVHICTSWESASGIVEFWVDGKPRVRKSLKKGYTVGAEASIILGQEQDSFGGNFEGSQSLVGDIGNVNMWDFVLSPDEINTIYLGGPFSPNVLNWRALKYEVQGEVFTKPQLWP
SEQ ID NO:727
MLAVGCALLAALLAAPGAALAPRRCPAQEVARGVLTSLPGDSVTLTCPGVEPEDNATVHWVLRKPAAGSHP SRWAGMGRRLLLRSVQLHDSGNYSCYRAGRPAGTVHLLVDVPPEEPQLSCFRKSPLSNVVCEWGPRSTPSLTTKAVLLVRKFQNSPAEDFQEPCQYSQESQKFSCQLAVPEGDSSFYIVSMCVASSVGSKFSKTQTFQGCGILQPDPPANITVTAVARNPRWLSVTWQDPHSWNSSFYRLRFELRYRAERSKTFTTWMVKDLQHHCVIHDAWSGLRHVVQLRAQEEFGQGEWSEWSPEAMGTPWTESRSPPAENEVSTPMQALTTNKDDDNILFRDSANATSLPVQDSSSVPLPTFLVAGGSLAFGTLLCIAIVLRFKKTWKLRALKEGKTSMHPPYSLGQLVPERPRPTPVLVPLISPPVSPSSLGSDNTSSHNRPDARDPRSPYDISNTDYFFPR
SEQ ID NO:728
MLTLQTWVVQALFIFLTTESTGELLDPCGYISPESPVVQLHSNFTAVCVLKEKCMDYFHVNANYIVWKTNHFTIPKEQYTIINRTASSVTFTDIASLNIQLTCNILTFGQLEQNVYGITIISGLPPEKPKNLSCIVNEGKKMRCEWDGGRETHLETNFTLKSEWATHKFADCKAKRDTPTSCTVDYSTVYFVNIEVWVEAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNLSVINSEELSSILKLTWTNPSIKSVIILKYNIQYRTKDASTWSQIPPEDTASTRSSFTVQDLKPFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSDWSEEASGITYEDRPSKAPSFWYKIDPSHTQGYRTVQLVWKTLPPFEANGKILDYEVTLTRWKSHLQNYTVNATKLTVNLTNDRYLATLTVRNLVGKSDAAVLTIPACDFQATHPVMDLKAFPKDNMLWVEWTTPRESVKKYILEWCVLSDKAPCITDWQQEDGTVHRTYLRGNLAESKCYLITVTPVYADGPGSPESIKAYLKQAPPSKGPTVRTKKVGKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTIIGNETAVNVDSSHTEYTLSSLTSDTLYMVRMAAYTDEGGKDGPEFTFTTPKFAQGEIEAIVVPVCLAFLLTTLLGVLFCFNKRDLIKKHIWPNVPDPSKSHIAQWSPHTPPRHNFNSKDQMYSDGNFTDVSVVEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEGHSSGIGGSSCMSSSRPSISSSDENESSQNTSSTVQYSTVVHSGYRHQVPSVQVFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQYFKQNCSQHESSPDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAADAFGPGTEGQVERFETVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGGYMPQ
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Claims (271)

1.一种预防、治疗或诊断与IL-6相关的疾病或病状的方法，所述方法包括对有相应需要的受试者施用Ab1抗体或抗体片段，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含：
轻链多肽，其包含：与SEQ ID NO:709具有至少75%同一性的多肽、由与多核苷酸SEQ ID NO:723具有至少75%同一性的多核苷酸编码的多肽、由在中等严格度条件下与具有SEQ ID NO:723反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽、或由在高严格度条件下与具有SEQ ID NO:723反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽；和
重链多肽，其包含：与SEQ ID NO:657具有至少75%同一性的多肽、由与多核苷酸SEQ ID NO:700具有至少75%同一性的多核苷酸编码的多肽、由在中等严格度条件下与具有SEQ ID NO:700反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽、或由在高严格度条件下与具有SEQ ID NO:700反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽；
其中所述Ab1抗体或抗体片段特异性结合IL-6并拮抗与IL-6相关的一种或多种活性。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述轻链多肽包括相对于轻链骨架区序列SEQ ID NO:709，在所述轻链骨架区内的一个或多个取代。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述轻链骨架区内的一个或多个所述取代是以供体序列相应位置的序列的取代，其中所述供体序列包含：SEQ ID NO:2；人、兔或非人灵长类轻链序列；和Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35或Ab36中的任一轻链，
其中所述取代导致一个或多个氨基酸的替换、插入和/或缺失，以及
其中所述相应位置由SEQ ID NO:709骨架区和所述供体序列之间的序列比对确定。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述重链多肽包括相对于重链骨架区序列SEQ ID NO:657，在所述重链骨架区内的一个或多个取代。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述重链骨架区内的一个或多个所述取代是以供体序列相应位置的序列的取代，其中所述供体序列包含：SEQ ID NO:3；人、兔或非人灵长类重链序列；和Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35或Ab36中的任一重链，
其中所述取代导致一个或多个氨基酸的替换、插入和/或缺失，以及
其中所述相应位置由SEQ ID NO:657骨架区和所述供体序列之间的序列比对确定。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述轻链多肽包含一个或多个Ab1轻链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:4具有至少72.7%同一性(与11个残基中至少8个一致)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少85.7%同一性(与7个残基中至少6个一致)的轻链CDR2；
与SEQ ID NO:6具有至少50%同一性(与12个残基中至少6个一致)的轻链CDR3；
与SEQ ID NO:4具有至少90.9%相似性(与11个残基中至少10个相似)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少100%相似性(与7个残基中至少7个相似)的轻链CDR2；或
与SEQ ID NO:6具有至少66.6%相似性(与12个残基中至少8个相似)的轻链CDR3；
以及其中所述重链多肽包含一个或多个Ab1重链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:7具有至少80%同一性(与5个残基中至少4个一致)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少50%同一性(与16个残基中至少8个一致)的重链CDR2；
与SEQ ID NO:9具有至少33.3%同一性(与12个残基中至少4个一致)的重链CDR3；
与SEQ ID NO:7具有至少100%相似性(与5个残基中至少5个相似)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少56.2%相似性(与16个残基中至少9个相似)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少50%相似性(与12个残基中至少6个相似)的重链CDR3。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述轻链多肽包含一个或多个Ab1轻链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:4具有至少81.8%同一性(与11个残基中至少9个一致)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少71.4%同一性(与7个残基中至少5个一致)的轻链CDR2；或
与SEQ ID NO:6具有至少83.3%同一性(与12个残基中至少10个一致)的轻链CDR3；
以及其中所述重链多肽包含一个或多个Ab1重链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:7具有至少60%同一性(与5个残基中至少3个一致)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少87.5%同一性(与16个残基中至少14个一致)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少83.3%同一性(与12个残基中至少10个一致)的重链CDR3。
8.根据权利要求6-7中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含至少两个所述轻链CDR多肽和至少两个所述重链CDR多肽。
9.一种预防或治疗与IL-6相关的疾病或病症的方法，所述方法包括对有相应需要的受试者施用Ab1抗体或抗体片段，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含：
两个或更多个Ab1轻链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:4具有至少72.7%同一性(与11个残基中至少8个一致)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少85.7%同一性(与7个残基中至少6个一致)的轻链CDR2；或
与SEQ ID NO:6具有至少50%同一性(与12个残基中至少6个一致)的轻链CDR3；
和两个或更多个Ab1重链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:7具有至少80%同一性(与5个残基中至少4个一致)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少50%同一性(与16个残基中至少8个一致)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少33.3%同一性(与12个残基中至少4个一致)的重链CDR3；
其中所述Ab1抗体或抗体片段特异性结合IL-6并拮抗与IL-6相关的一种或多种活性。
10.一种预防或治疗与IL-6相关的疾病或病状的方法，所述方法包括对有相应需要的受试者施用Ab1抗体或抗体片段，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含：
两个或更多个Ab1轻链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:4具有至少90.9%相似性(与11个残基中至少10个相似)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少100%相似性(与7个残基中至少7个相似)的轻链CDR2；或
与SEQ ID NO:6具有至少66.6%相似性(与12个残基中至少8个相似)的轻链CDR3；
以及两个或更多个Ab1重链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:7具有至少100%相似性(与5个残基中至少5个相似)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少56.2%相似性(与16个残基中至少9个相似)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少50%相似性(与12个残基中至少6个相似)的重链CDR3；
其中所述Ab1抗体或抗体片段特异性结合IL-6并拮抗与IL-6相关的一种或多种活性。
11.根据权利要求9-10中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含所述轻链CDR1、所述轻链CDR3、所述重链CDR2和所述重链CDR3。
12.根据权利要求9-10中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含所述轻链CDR1、所述轻链CDR2、所述轻链CDR3、所述重链CDR1、所述重链CDR2和所述重链CDR3。
13.根据权利要求9-12中任一项所述的方法，其中所述轻链和重链CDR多肽包含于包含Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、scFv、IgNAR、SMIP、骆驼抗体(camelbody)或纳米抗体(nanobody)的抗体或抗体片段内。
14.根据权利要求9-12中任一项所述的方法，其中分别在所述Ab1抗体或抗体片段的可变轻链和重链区中的骨架区(FR)1、2、3和4是未经修饰或分别通过用亲本兔抗体轻链或重链SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的相应FR残基取代至多2或3个人FR残基而各自被修饰的人FR，
其中所述人轻链FR 1、2和3衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变轻链抗体序列，选择是基于所述人可变轻链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与所述亲本兔抗体轻链SEQ ID NO:2(从FR1开始到FR3结束)的子序列的高同源性水平；和
其中所述人轻链FR4衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变轻链抗体序列，选择是基于所述人可变轻链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与包含于SEQ IDNO:2的所述亲本兔抗体轻链FR4的高同源性水平；和
其中所述人重链FR 1、2和3衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变重链抗体序列，选择是基于所述人可变重链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与所述亲本兔抗体重链SEQ ID NO:3(从FR1开始到FR3结束)的子序列的高同源性水平；和
其中所述人重链FR4衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变重链抗体序列，选择是基于所述人可变重链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与包含于SEQ IDNO:3的所述亲本兔抗体重链FR4的高同源性水平。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段在健康人受试者中具有至少约22天的体内半衰期。
16.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段在健康人受试者中具有至少约25天的体内半衰期。
17.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段在健康人受试者中具有至少约30天的体内半衰期。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段对IL-6具有小于约50皮摩尔浓度的结合亲和力(Kd)或具有小于或等于10-4S-1的与IL-6的解离速率(Koff)。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段与主要由SEQ ID NO:702和SEQ ID NO:704的多肽或SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的多肽组成的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位是通过使用跨天然人IL-6多肽全长的重叠线性肽片段的表位定位确定的，并包括选自那些分别含有SEQ ID NO:1的氨基酸残基37-51、氨基酸残基70-84、氨基酸残基169-183、氨基酸残基31-45和/或氨基酸残基58-72的IL-6片段中包含的一个或多个残基。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段是非糖基化的。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段含有经过修饰而改变效应子功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fc区。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段是人、人源化、单链或嵌合抗体。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或scFv。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段还包含人Fc。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述人Fc衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述与IL-6相关的一种或多种活性是体内活性，其包括：
降低的血清白蛋白、升高的C反应蛋白(“CRP”)、疲劳、发热、厌食症(食欲不振)、体重减轻、恶病质、虚弱、Glasgow预后分数(“GPS”)下降、升高的血清D-二聚体、凝血状况异常或其任意组合。
28.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述一种或多种与IL-6相关的一种或多种活性是体外活性，其包括：
刺激T1165细胞的增殖、IL-6结合至IL-6R、信号转导糖蛋白gp130的活化(二聚化)、IL-6/IL-6R/gp130多聚体的形成、经修饰以表达人IL-6受体的HepG2细胞产生触珠蛋白的刺激或其任意组合。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段从重组细胞中被表达。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述细胞选自哺乳动物、酵母、细菌和昆虫细胞。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述细胞是酵母细胞。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述细胞是二倍体酵母细胞。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述酵母细胞是毕赤酵母。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述与IL-6相关的疾病或病状包括：癌症、与高凝性相关的疾病或病状、与升高的血清CRP相关的疾病或病状、与低白蛋白血症相关的疾病或病状、炎症性病症、病毒性病症、消耗综合征、自身免疫病症或其任意组合。
35.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述与IL-6相关的疾病或病状包括：全身疲劳、运动性疲劳、癌症相关疲劳、炎症疾病相关疲劳、慢性疲劳综合征、癌症相关恶病质、心脏相关恶病质、呼吸相关恶病质、肾相关恶病质、年龄相关恶病质、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、全身型幼年特发性关节炎、银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、炎性肠病(IBD)、风湿性多肌病、巨细胞动脉炎、自身免疫性血管炎、移植物抗宿主疾病(GVHD)、干燥综合征、成人斯蒂尔病、类风湿性关节炎、全身型幼年特发性关节炎、骨关节炎、骨质疏松症、骨的佩吉特病、骨关节炎、多发性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、前列腺癌、白血病、肾细胞癌、多中心性卡斯特莱曼病(multicentric Castleman’s disease)、卵巢癌、癌症化疗中的耐药性、癌症化疗毒性、缺血性心脏病、动脉粥样硬化、肥胖、糖尿病、哮喘、多发性硬化、阿尔茨海默病、脑血管疾病、发热、急性期应答、过敏、贫血、炎症贫血(慢性疾病贫血)、高血压、抑郁症、与慢性疾病相关的抑郁症、血栓形成、血小板增多症、急性心力衰竭、代谢综合征、流产、肥胖、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、盆腔炎症性疾病、再灌注损伤、移植排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、细胞因子风暴、禽流感、H1N1流行性感冒、猪流感、H5N1流行性感冒、天花、大流行流感、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、严重急性呼吸系统综合征(SARS)、败血症或全身炎症反应综合征(SIRS)。
36.根据权利要求34所述的方法，其中所述与高凝性相关的疾病或病状包括：癌症、急性静脉血栓形成、肺栓塞、孕期血栓形成、出血性皮肤坏死、急性或慢性弥散性血管内凝血(DIC)、术后血块形成、长期卧床、长期不活动、静脉血栓形成、暴发性脑膜炎球菌败血症、急性血栓性中风、急性冠状动脉闭塞、急性外周动脉闭塞、大块肺栓塞、腋静脉血栓形成、大块髂股静脉血栓形成、动脉导管闭塞、静脉导管闭塞、心肌病、肝的静脉闭塞性疾病、低血压、心输出量减少、血管阻力减小、肺动脉高血压、肺顺应性减少、白细胞减少症、血小板减少症、肝素诱导性血小板减少症(HIT)、肝素诱导性血小板减少症和血栓形成(HITT)、心房颤动、人工心脏瓣膜的移植、血栓形成的遗传易感性、莱登第五因子、凝血酶原基因突变、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)多态性、血小板受体多态性、外伤、骨折、烧伤或其任意组合。
37.根据权利要求34所述，其中所述与升高的血清CRP相关的疾病或病症包括：慢性炎症性疾病、类风湿性关节炎、少年类风湿性关节炎、银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、天疱疮、皮肌炎、多肌炎、风湿性多肌炎、巨细胞动脉炎、血管炎、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、川崎病、孤立性中枢神经系统血管炎、邱-斯二氏动脉炎(Churg-Straussarteritis)、显微镜下多动脉炎、显微镜下多血管炎、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、原发性冷球蛋白血症性血管炎、类风湿性血管炎、冷球蛋白血症、复发性多发软骨炎、贝西氏病、高安氏动脉炎、缺血性心脏病、中风、多发性硬化、败血症、继发于病毒感染的血管炎、伯格氏病、癌症、晚期癌症、骨关节炎、全身性硬化、CREST综合征、赖特氏病、骨的佩吉特病、干燥综合征、1型糖尿病、2型糖尿病、家族性地中海热、自身免疫性血小板减少症、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺疾病、恶性贫血病、白癜风、斑秃、原发性胆汁性肝硬变、自身免疫性慢性活动性肝炎、酒精性肝硬变、病毒性肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、其它器官特异性自身免疫疾病、烧伤、特发性肺纤维变性、慢性阻塞性肺病、过敏性哮喘、其它过敏性病状或其任意组合。
38.根据权利要求34所述的方法，其中所述与低白蛋白血症相关的疾病或病状包括：癌症、晚期癌症、类风湿性关节炎、AIDS、心脏病、肝病、脱水、营养不良、铅暴露、疟疾、呼吸系统疾病、老年、甲状腺功能减退、结核病、垂体功能减退、神经衰弱、高钠血症、低钠血症、肾病、脾肿(splenica)、强直性脊柱炎、发育停滞(生长迟缓)、炎性肠病、乳糜泻、外伤、烧伤或其任意组合。
39.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述癌症包括：棘皮瘤、腺泡细胞癌、听神经瘤、肢端黑色素瘤、肢端汗腺瘤、急性嗜酸性粒细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性成巨核细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、急性成髓细胞白血病伴成熟、急性髓系树突状细胞白血病、急性髓系白血病、急性前骨髓性白血病、成釉细胞瘤、腺癌、腺样囊性癌、腺瘤、牙源性腺样瘤、肾上腺皮质癌、成人T细胞性白血病、侵袭性NK细胞白血病、AIDS相关癌症、AIDS相关淋巴瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞纤维瘤、肛门癌、间变性大细胞淋巴瘤、间变性甲状腺癌、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管肌脂瘤、血管肉瘤、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型性畸胎样/横纹肌样肿瘤、基底细胞癌、基底细胞样癌、B细胞白血病、B细胞淋巴瘤、Bellini导管癌、胆道癌、膀胱癌、胚细胞瘤、骨癌、骨肿瘤、脑干胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、布伦纳瘤、支气管肿瘤、细支气管肺泡癌、棕色瘤、伯基特淋巴瘤、原发部位不明的癌症、类癌瘤、癌、原位癌、阴茎癌、原发部位不明癌、癌肉瘤、卡斯特莱曼病、中枢神经系统胚胎肿瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、子宫颈癌、胆管癌、软骨瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、绒毛膜癌、脉络丛乳头状瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性单核细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增生性病症、慢性中性粒细胞性白血病、透明细胞瘤、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、德戈斯病(Degosdisease)、隆凸性皮肤纤维肉瘤、皮样囊肿、促纤维增生性小圆细胞瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、胚胎性癌、内胚层窦瘤、子宫内膜癌、子宫内膜子宫癌、内膜样瘤、与肠病相关的T-细胞淋巴瘤、成室管膜细胞瘤、室管膜瘤、上皮样肉瘤、红白血病、食管癌、成感觉神经细胞瘤、尤文氏家族肿瘤、尤文氏家族肉瘤、尤文氏肉瘤、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、乳腺外佩吉特病、输卵管癌、胎中胎、纤维瘤、纤维肉瘤、滤泡性淋巴瘤、滤泡性甲状腺癌、胆囊癌、胆囊癌、神经节神经胶质瘤、神经节瘤、胃癌、胃淋巴瘤、胃肠癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤、胃肠道间质瘤、生殖细胞瘤、胚组织瘤、妊娠性绒毛膜癌、妊娠性滋养层细胞瘤、骨巨细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、大脑神经胶质瘤病、血管球瘤、胰高血糖素瘤、性腺胚细胞瘤、粒层细胞瘤、毛细胞性白血病、毛细胞性白血病、头颈癌、头颈癌、心脏癌、成血管细胞瘤、血管外皮细胞瘤、血管肉瘤、血液系统恶性肿瘤、肝细胞癌、肝脾T细胞淋巴瘤、遗传性乳腺-卵巢癌综合征、霍奇金淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、下丘脑胶质瘤、炎性乳腺癌、眼内黑素瘤、胰岛细胞癌、胰岛细胞瘤、幼年型粒-单核细胞白血病、卡波西肉瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、肝门胆管癌(Klatskin tumor)、库肯勃瘤(Krukenberg tumor)、喉癌、喉癌、恶性雀斑样痣黑素瘤、白血病、白血病、唇及口腔癌、脂肉瘤、肺癌、黄体瘤、淋巴管瘤、淋巴管肉瘤、淋巴上皮瘤、淋巴系白血病、淋巴瘤、巨球蛋白血症、恶性纤维组织细胞瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、恶性胶质瘤、恶性间皮瘤、恶性外周神经鞘瘤、恶性横纹肌样瘤、恶性蝾螈瘤、MALT淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、肥大细胞白血病、纵膈生殖细胞瘤、纵膈肿瘤、甲状腺髓样癌、成神经管细胞瘤、成神经管细胞瘤、髓上皮瘤、黑素瘤、黑素瘤、脑膜瘤、麦克尔细胞癌(Merkel CellCarcinoma)、间皮瘤、间皮瘤、原发灶不明的颈部转移性鳞癌、转移性膀胱上皮癌、苗勒氏混合瘤、单核细胞白血病、口腔癌、粘液性瘤、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常疾病、骨髓增生异常综合征、髓系白血病、髓系肉瘤、骨髓增生性疾病、粘液瘤、鼻腔癌、鼻咽癌、鼻咽癌、赘生瘤、神经细胞瘤、成神经细胞瘤、成神经细胞瘤、神经纤维瘤、神经瘤、结节性黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、眼肿瘤、少突星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、嗜酸细胞瘤、视神经鞘脑膜瘤、口腔癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、卵巢低度潜在恶性肿瘤、乳房佩吉特病、肺上沟瘤、胰腺癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、乳头状瘤病、神经节细胞瘤、鼻窦癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、血管周围上皮样细胞瘤、鼻咽癌、嗜铬细胞瘤、中分化松果体实质肿瘤、成松果体细胞瘤、垂体细胞瘤、垂体腺瘤、垂体肿瘤、浆细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、多胚瘤、前驱T-淋巴母细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、原发性肝细胞癌、原发性肝癌、原发性腹膜癌、原始神经外胚层瘤、前列腺癌、腹膜假性粘液瘤、直肠癌、肾细胞癌、涉及染色体15上的NUT基因的呼吸道癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、里希特转化(Richter′stransformation)、骶尾部畸胎瘤、唾液腺癌、肉瘤、雪旺氏细胞瘤、皮脂腺癌、继发性瘤、精原细胞瘤、浆液瘤、塞-莱二氏细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、性索-间质肿瘤、塞泽里综合征(SézarySyndrome)、印戒细胞癌、皮肤癌、蓝色小圆形细胞瘤、小细胞癌、小细胞肺癌、小细胞淋巴瘤、小肠癌、软组织肉瘤、生长抑素瘤、煤烟疣、脊髓瘤、脊髓肿瘤、脾边缘区淋巴瘤、鳞状细胞癌、胃癌、浅表扩展性黑素瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、表面上皮-间质瘤、滑膜肉瘤、T细胞急性成淋巴细胞性白血病、T细胞大颗粒淋巴细胞白血病、T细胞白血病、T细胞淋巴瘤、T细胞幼淋巴细胞白血病、畸胎瘤、末期淋巴癌、睾丸癌、泡膜细胞瘤、喉癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、移行细胞癌、脐尿管癌、尿道癌、泌尿生殖系统肿瘤、子宫肉瘤、葡萄膜黑素瘤、阴道癌、凡-莫二氏综合征、疣状癌、视路胶质瘤、外阴癌、华氏巨球蛋白血症、沃辛瘤(Warthin′s tumor)、维尔姆斯肿瘤(Wilms′tumor)或其任意组合。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌症包括：结肠直肠癌、非小细胞肺癌、胆管癌、间皮瘤、卡斯特莱曼病、肾细胞癌或其任意组合。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其中在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前，所述受试者已表现出或有风险发生一种或多种下列症状：
降低的血清白蛋白、升高的血清C反应蛋白(“CRP”)、疲劳、发热、厌食症(食欲不振)、体重减轻、恶病质、虚弱、Glasgow预后分数(“GPS”)下降、升高的血清D-二聚体、凝血状况异常及其任意组合。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述症状是在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前、同时或之后对所述受试者施用的另一种治疗剂的副作用。
43.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段以治疗有效量施用来预防或治疗一种或多种与升高的IL-6相关的症状。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述治疗有效量在约0.1和20mg/kg接受受试者体重之间。
45.根据权利要求41所述的方法，其还包括在所述Ab1抗体施用之后监测所述受试者以评估所述症状。
46.根据权利要求41所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用前已表现所述症状。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述症状在Ab1抗体施用约1-5周内改善或恢复到正常状态。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述症状之后在介于相邻的两次Ab1抗体施用之间的整个时段保持改善。
49.根据权利要求41所述的方法，其中所述受试者的凝血状况通过测量D-二聚体、因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纤维蛋白降解产物、凝血酶-抗凝血酶III复合物、纤维蛋白原、纤溶酶原、凝血酶原和温韦伯氏因子中的一种或多种的所述受试者血清水平来评估。
50.根据权利要求41所述的方法，其中所述受试者的凝血状况通过凝固能力的功能性测量来评估。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述凝固能力的功能性测量选自凝血酶原时间(PT)、凝血酶原比率(PR)、国际标准化比率(INR)或其任意组合。
52.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的国际标准化比率(INR)，并且如果所述受试者的INR小于约0.9，则对所述受试者施用所述Ab1抗体或抗体片段。
53.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的国际标准化比率(INR)，并且如果所述受试者的INR小于约0.5，则对所述受试者施用所述Ab1抗体或抗体片段。
54.根据权利要求52-53中任一项所述的方法，其中在对所述受试者施用所述Ab1抗体或抗体片段4周内，所述受试者的INR提高到大于约0.9。
55.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的血清D-二聚体水平，并且如果所述受试者的血清D-二聚体水平高于正常参考范围，则施用所述Ab1抗体或抗体片段。
56.根据权利要求55所述的方法，其中在对所述受试者施用所述Ab1抗体或抗体片段4周内，所述受试者的血清D-二聚体水平降低到低于所述正常参考范围的上限。
57.根据权利要求41所述的方法，其导致所述受试者的凝血状况长期改善。
58.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用约2周内，所述受试者的凝血状况得到可测量的改善。
59.根据权利要求58所述的方法，其中在对所述受试者施用所述Ab1抗体或抗体片段后约12周，所述受试者的凝血状况保持可测量的改善。
60.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的体温，并且如果所述受试者的体温高于约38℃，则施用所述Ab1抗体或抗体片段。
61.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的体重，并且如果所述受试者的体重在约30天之内下降了约5%或更多或如果所述受试者的瘦体重指数小于约17kg/m2(男性受试者)或小于约14kg/m2(女性受试者)，则施用所述Ab1抗体或抗体片段。
62.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的肌强度，并且如果所述受试者的肌强度在约30天内下降大于约20%则施用所述Ab1抗体或抗体片段。
63.根据权利要求41所述的方法，其导致所述受试者的恶病质、虚弱、疲劳和/或发热长期改善。
64.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用约4周内，所述受试者的体重提高了约1kg。
65.根据权利要求41所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用约4周内，所述受试者的恶病质得到可测量的改善。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述受试者的恶病质通过测量所述受试者的总体重、瘦体重、瘦体重指数和/或四肢瘦体重来评估。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述受试者体重的测量扣除(减去)所述受试者的肿瘤和/或血管外积液的估计重量。
68.根据权利要求66所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后约8周，所述受试者的恶病质保持可测量的改善。
69.根据权利要求41所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用约2周内，所述受试者的虚弱得到可测量的改善。
70.根据权利要求69所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后约12周，所述受试者的虚弱保持可测量的改善。
71.根据权利要求41所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用约1周内，所述受试者的疲劳得到可测量的改善。
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述受试者的疲劳通过FACIT-F FS试验测量。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述受试者的FACIT-F FS分数提高了至少约10分。
74.根据权利要求71所述的方法，其中在抗IL-6抗体施用后约12周，所述受试者的疲劳保持可测量的改善。
75.根据权利要求41所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用约1周内，所述受试者的发热得到可测量的改善。
76.根据权利要求75所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后约12周，所述受试者的发热保持可测量的改善。
77.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用之前，所述受试者已表现出升高的血清CRP水平。
78.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用之前，所述受试者已表现出降低的血清白蛋白水平。
79.根据权利要求41所述的方法，其中所述受试者的Glasgow预后分数(GPS)得到提高。
80.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的血清CRP水平，并且如果所述受试者的血清CRP水平为至少约5mg/L，则施用所述Ab1抗体或抗体片段。
81.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用1周内，所述受试者的血清CRP水平下降到低于约10mg/L。
82.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用1周内，所述受试者的血清CRP水平下降到低于约5mg/L。
83.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用1周内，所述受试者的血清CRP水平下降到低于约1mg/L。
84.根据权利要求41所述的方法，其导致所述受试者的血清CRP水平长期下降。
85.根据权利要求81所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后14天，所述受试者的血清CRP水平保持低于约10mg/L。
86.根据权利要求81所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后21天，所述受试者的血清CRP水平保持低于约10mg/L。
87.根据权利要求81所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后28天，所述受试者的血清CRP水平保持低于约10mg/L。
88.根据权利要求81所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后35天，所述受试者的血清CRP水平保持低于约10mg/L。
89.根据权利要求81所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后42天，所述受试者的血清CRP水平保持低于约10mg/L。
90.根据权利要求81所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后49天，所述受试者的血清CRP水平保持低于约10mg/L。
91.根据权利要求81所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后56天，所述受试者的血清CRP水平保持低于约10mg/L。
92.根据权利要求41所述的方法，其还包括：在施用所述Ab1抗体或抗体片段之前测量所述受试者的血清白蛋白水平，并且如果所述受试者的血清白蛋白水平低于约35g/L，则施用所述Ab1抗体或抗体片段。
93.根据权利要求92所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用约5周内，所述受试者的血清白蛋白水平升高到高于约35g/L。
94.根据权利要求41所述的方法，其导致所述受试者的血清白蛋白水平长期升高。
95.根据权利要求94所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后42天，所述受试者的血清白蛋白水平保持高于35g/L。
96.根据权利要求94所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后49天，所述受试者的血清白蛋白水平保持高于35g/L。
97.根据权利要求94所述的方法，其中在Ab1抗体或抗体片段施用后56天，所述受试者的血清白蛋白水平保持高于35g/L。
98.根据权利要求41所述的方法，其中在所述Ab1抗体或抗体片段施用约5周内，所述受试者的血清白蛋白水平升高约5g/L。
99.根据权利要求41所述的方法，其还包括监测所述受试者以评估凝血状况。
100.根据权利要求41所述的方法，其中所述受试者在治疗前已表现出升高的血清D-二聚体水平。
101.根据权利要求41所述的方法，其中所述受试者在治疗前已表现出升高的血清C蛋白反应(CRP)水平。
102.根据权利要求1-101中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体或抗体片段以每约4周的时段至多一次的频率施用给所述受试者。
103.根据权利要求102所述的方法，其中所述抗IL-6抗体或抗体片段以每约8周的时段至多一次的频率施用给所述受试者。
104.根据权利要求103所述的方法，其中所述抗IL-6抗体或抗体片段以每约12周的时段至多一次的频率施用给所述受试者。
105.根据权利要求104所述的方法，其中所述抗IL-6抗体或抗体片段以每约16周的时段至多一次的频率施用给所述受试者。
106.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段以用于检测表达IL-6的疾病部位的诊断有效量施用。
107.根据权利要求106所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段直接地或间接地与放射性核素、荧光团或其它有助于检测表达IL-6的疾病部位上的所述抗体的可检测标记偶联。
108.根据权利要求106所述的方法，其用于检测表达IL-6的肿瘤或转移。
109.根据权利要求106所述的方法，其用于检测与表达IL-6的细胞有关的炎症部位的存在。
110.根据权利要求106所述的方法，其中所述结果用于帮助合适的治疗方案的设计。
111.根据权利要求106所述的方法，其中所述治疗方案包括放疗、化疗或其组合。
112.根据权利要求1-101中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段与另一种治疗剂共同施用，所述治疗剂包括：化疗剂、他汀类药物、细胞因子、免疫抑制剂、基因治疗剂、抗凝血剂、抗恶病质剂、抗虚弱剂、抗疲劳剂、抗发热剂、抗恶心剂、止吐剂、IL-6拮抗剂、细胞毒性剂、止痛剂、解热剂、抗炎剂、抗生素、抗病毒剂、抗细胞因子剂、其它治疗剂或其任意组合。
113.根据权利要求112所述的方法，其中所述化疗剂包括：VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇类、依立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、甲酰四氢叶酸、类固醇、环磷酰胺、美法仑、长春花生物碱、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、氮芥类、酪氨酸激酶抑制剂、放疗、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素类、IL-12、IL-2、IL-12R拮抗剂、与毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠单抗、抗CD20抗体、Rituxan
Figure FDA00001909859600221
奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、DXL625、Herceptin
Figure FDA00001909859600222
或其任意组合。
114.根据权利要求112所述的方法，其中所述抗凝血剂包括：阿昔单抗(ReoProTM)、心得隆(acenocumarol)、抗凝血酶III、阿加曲班、阿司匹林、比伐卢定(AngiomaxTM)、氯吡格雷、达比加群、达比加群酯(PradaxaTM/PradaxTM)、地西卢定(RevascTM/IprivaskTM)、双嘧达莫、埃替非巴肽(IntegrilinTM)、磺达肝素、肝素、水蛭素、艾卓肝素、来匹卢定(RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群、苯茚二酮、苯丙香豆素、噻氯匹定、替罗非班(AggrastatTM)、华法林、希美加群、希美加群(ExantaTM/ExartaTM)或其任意组合。
115.根据权利要求112所述的方法，其中所述他汀包括：阿伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、斯伐他汀或其任意组合。
116.根据权利要求112所述的方法，其中所述另一种治疗剂是包括以下的因子的拮抗剂：肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白介素-1α、白介素-1β、白介素6、蛋白水解诱导因子、白血病抑制因子或其任意组合。
117.根据权利要求112所述的方法，其中所述抗恶病质剂包括：大麻、屈大麻酚(MarinolTM)、大麻隆(Cesamet)、大麻二酚、大麻环萜酚、四氢大麻酚、沙替菲克(Sativex)、甲地孕酮或其任意组合。
118.根据权利要求112所述的方法，其中所述抗恶心剂或止吐剂包括：5-HT3受体拮抗剂、阿魏(ajwain)、阿立必利、抗胆碱能剂、抗组胺剂、阿瑞匹坦、苯二氮卓类、大麻环萜酚、大麻二酚、大麻素类、大麻、卡索匹坦、氯丙嗪、苯甲嗪、地塞米松、地塞米松、乘晕宁(GravolTM)、苯海拉明、多拉司琼、多潘立酮、多巴胺拮抗剂、多西拉敏、屈大麻酚(MarinolTM)、氟哌利多、愈吐宁(emetrol)、姜、康泉、氟哌丁苯、羟嗪、东莨菪碱、劳拉西泮、氯苯甲嗪、甲氧氯普胺、咪达唑他、蝇蕈醇、大麻隆(Cesamet)、nk1受体拮抗剂、昂丹司琼、帕洛诺司琼、薄荷、非那根、丙氯拉嗪、Promacot、异丙嗪、五嗪、丙泊酚、沙替菲克、四氢大麻酚、三甲氧苯酰胺、托烷司琼、诺龙、己烯雌酚、沙利度胺、来那度胺、饥饿素激动剂、肌抑素拮抗剂、抗肌抑素抗体、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、血管紧张素AII拮抗剂、β2肾上腺素受体激动剂、β3肾上腺素受体激动剂或其任意组合。
119.根据权利要求112所述的方法，其中所述另一种治疗剂包括：他莫昔芬、BCL-2拮抗剂、雌激素、双磷酸盐类、立特帕肽、雷奈酸锶、阿仑膦酸钠(Fosamax)、利塞膦酸盐(Actonel)、雷诺昔芬、伊班膦酸盐(Boniva)、奥巴克拉(Obatoclax)、ABT-263、棉酚、吉非替尼、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂、厄洛替尼、表皮生长因子受体抑制剂、补骨脂素、三甲沙林、甲氧沙林、佛手柑内酯、类视色素、阿维A酯、阿维A酸、英夫利昔单抗(Remicade
Figure FDA00001909859600241
)、阿达木单抗、英夫利昔单抗、依那西普、ZenapaxTM、环孢素、甲氨蝶呤、粒细胞集落刺激因子、非格司亭、来格司亭、优保津(Neupogen)、纽拉思塔(Neulasta)、2-芳基丙酸、醋氯芬酸、阿西美辛、乙酰水杨酸(阿斯匹林)、阿氯芬酸、阿明洛芬、Amoxiprin、氨基安替比林、芳基链烷酸、阿扎丙酮、扑炎痛/贝诺酯(Benorylate/Benorilate)、苯噁洛芬、溴芬酸、卡洛芬、塞来昔布、三水杨酸胆碱镁、氯非宗、COX-2抑制剂、右布洛芬、右酮洛芬、双氯芬酸、二氟尼柳、屈噁昔康、乙水杨胺、依托度酸、依他昔布、Faislamine、芬那酸、芬布芬、非诺洛芬、氟芬那酸、氟诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、异丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、氯诺昔康、洛索洛芬、罗美昔布、水杨酸镁、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、水杨酸甲酯、莫非布宗、萘丁美酮、甲氧萘丙酸、N-芳基氨茴酸、奥沙美辛、奥沙普泰、昔康类、羟基保泰松、帕瑞昔布、非那宗、保泰松、保泰松、吡罗昔康、吡洛芬、普鲁芬、丙谷美辛、吡唑烷衍生物、罗非昔布、水杨酸水杨酸酯、水杨酰胺、水杨酸盐、苯磺唑酮、舒林酸、舒洛芬、替诺昔康、噻洛芬酸、托芬那酸、托美汀和伐地昔布。抗生素包括阿米卡星、氨基糖苷类、阿莫西林、氨苄西林、安沙霉素类、胂凡纳明、阿奇霉素、阿洛西林、氨曲南、杆菌肽、碳头孢烯、碳青霉烯类、羧苄青霉素、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢噻吩、头孢噻吩、头孢孟多、头孢唑啉、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢吡普、头孢曲松、头孢呋辛、头孢菌素类、氯霉素、西司他丁、环丙沙星、克拉霉素、克林霉素、氯唑西林、粘杆菌素、复方新诺明、达福普汀、地美环素、双氯青霉素、地红霉素、多尼培南、多西环素、依诺沙星、厄他培南、红霉素、乙胺丁醇、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、夫西地酸、加替沙星、格尔德霉素、庆大霉毒、糖肽类、除莠霉素、亚胺培南、异烟肼、卡那霉素、左氧氟沙星、林可霉素、利奈唑胺、洛美沙星、氯碳头孢、大环内酯类、磺胺米隆、美罗培南、甲氧西林、灭滴灵、美洛西林、米诺环素、单环内酰胺类(Monobactams)、莫西沙星、莫匹罗星、萘夫西林、新霉素、奈替米星、呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、苯唑西林、土霉素、巴龙霉素、青霉素、青霉素类、哌拉西林、平板霉素、多粘菌素B、多肽、百浪多息、吡嗪酰胺、喹诺酮类、奎奴普丁、利福平(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、罗红霉素、壮观霉素、链霉素、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、Sulfanilimide、硫氮磺胺吡啶(Sulfasalazine)、磺胺异噁唑(Sulfisoxazole)、磺胺类、替考拉宁、泰利霉素、四环素、四环素类、替卡西林、替硝唑、托普霉素、甲氧苄氨嘧啶(Trimethoprim)、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲噁唑(Trimethoprim-Sulfamethoxazole)、醋竹桃霉素、曲伐沙星和万古霉素。活化剂还包括醛固醇、倍氯米松、倍他米松、皮质类固醇类、皮质醇、醋酸可的松、醋酸脱氧皮质酮、地塞米松、醋酸氟氢可的松、糖皮质激素、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙(Prednisolone)、强的松、类固醇和曲安西龙。抗病毒剂包括阿巴卡韦、阿昔洛韦(aciclovir)、无环鸟苷(acyclovir)、阿德福韦、金刚烷胺、安泼那韦、固定剂量复方抗逆转录病毒剂、协同增强抗逆转录病毒剂、阿比朵尔、阿扎那韦、立普妥/阿托伐他汀钙(atripla)、溴夫定、西多福韦、双汰芝、地瑞那韦、地拉夫定、去羟肌苷、二十二烷醇、依度尿苷、依法韦仑、恩曲他滨、恩夫韦肽、恩替卡韦、进入抑制剂、泛昔洛韦、福米韦生、夫沙那韦、膦甲酸(foscarnet)、膦乙酸(fosfonet)、融合抑制剂、更昔洛韦、加德西、伊巴他滨、碘苷、咪喹莫特、异丙肌苷(imunovir)、茚地那韦、肌苷、整合酶抑制剂、干扰素、I型干扰素、II型干扰素、III型干扰素、拉米夫定、洛匹那韦、洛韦胺、马拉维若、MK-0518、吗啉胍、奈非那韦、奈韦拉平、nexavir、核苷类似物、奥司他韦、喷昔洛韦、帕拉米韦、普可那利、鬼臼毒素、蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、利巴韦林、金刚乙胺、利托那韦、沙奎那韦、司他夫定、替诺福韦、替诺福韦二吡呋酯、替拉那韦、三氟尿苷、三协唯、曲金刚胺、特鲁瓦达、伐昔洛韦、缬更昔洛韦、维利维罗(vicriviroc)、阿糖腺苷、韦拉米啶(viramidine)、扎西他滨、扎那米韦、齐多夫定或其任意组合。
120.根据权利要求112所述的方法，其中所述细胞毒性剂、化疗剂或免疫抑制剂包括：1-去氢睾酮、1-甲基亚硝基脲、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿巴西普、白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)、阿维A酸、阿柔比星、锕-225(225Ac)、放线菌素、阿达木单抗、腺苷脱氨酶抑制剂、阿非莫单抗、阿柏西普、阿夫土珠(Afutuzumab)、阿法赛特、阿利维A酸、烷基磺酸盐、烷化剂、六甲蜜胺、阿伏西地(alvocidib)、氨基乙酰丙酸/氨基乙酰丙酸甲酯、氨基蝶呤、氨基蝶呤、氨柔比星、安吖啶、安吖啶、阿那格雷、阿那白滞素、蒽二酮类、蒽环霉素类、蒽环霉素类、蒽环霉素类、氨茴霉素(AMC)、抗霉菌剂、抗生素、抗-CD20抗体、抗叶酸剂、抗淋巴细胞球蛋白、抗代谢剂、抗胸腺细胞球蛋白、三氧化二砷、阿塞珠单抗、天冬酰胺酶、天冬酰胺酶耗竭剂、砹-211(211At)、阿塔珠单抗(Atlizumab)、阿托木单抗、阿曲生坦、AvastinTM、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、氮卓斯汀、氮杂环丙烷类、巴利昔单抗、BAYX抗体、贝拉西普、贝利单抗、贝洛替康、苯达莫司汀、柏替木单抗、蓓萨罗丁、比生群、铋-213(213Bi)、铋-212(212Bi)、博来霉素、博来霉素、博来霉素、BLyS抗体、硼替佐米、白消安、白消安、钙调神经磷酸酶抑制剂、卡奇霉素、喜树碱、喜树碱类、卡培他滨、卡铂(铂尔定)、卡波醌、洋红霉素、卡莫氟、卡莫司汀、卡莫司汀(BSNU)、CAT抗体、CD11抗体、CD147/Basigin抗体、CD154抗体、CD18抗体、CD20抗体、CD23抗体、CD3抗体、CD4抗体、CD40抗体、CD62L/L-selectin抗体、CD80抗体、CDK抑制剂、西利珠单抗、塞来昔布、聚乙二醇化塞妥珠单抗(Certolizumab pegol)、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥类、环孢素、顺-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂、克拉屈滨、克立昔单抗(Clenoliximab)、克罗拉滨、秋水仙碱、补体成分5抗体、铜-67(67Cu)、皮质类固醇类、CTLA-4抗体、CTLA-4融合蛋白、亲环蛋白抑制剂、环磷酰胺类、环磷酰胺(cyclothosphamide)、阿糖胞苷、阿糖胞苷、细胞松弛素B、细胞毒性核糖核酸酶、达卡巴嗪、达利珠单抗、更生霉素、更生霉素(放线菌素D)、柔红霉素(daunorubicin)、柔红霉素、柔红霉素(前称道诺霉素(daunomycin))、地西他滨、德弗利莫司(Deforolimus)、秋水仙胺、地托比星、二溴甘露醇、乙胺嗪、二氢叶酸还原酶抑制剂、二羟基蒽二酮、白喉毒素、DNA聚合酶抑制剂、多西他赛、阿托度单抗、得利西珠单抗(Dorlixizumab)、阿霉素(亚德里亚霉素)、DXL625、艾库组单抗、依法利珠单抗、乙丙昔罗、EGFR拮抗剂、伊利司莫、依沙芦星、艾西莫单抗、吐根碱、内皮素受体拮抗剂、表鬼臼毒素类、表柔比星、埃坡霉素类、ErbituxTM、厄利珠单抗、雌莫司汀、依那西普、溴化乙锭、依托格鲁、依托泊苷、磷酸依托泊苷、依维莫司、法拉莫单抗、法尼基转移酶抑制剂、FKBP抑制剂、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨、氟尿嘧啶(fluorouracil)、芳妥珠单抗、福莫司汀、加利昔单抗、钙-67(67Ga)、罗氏单抗、加维莫单抗、吉西他滨、糖皮质激素类、戈利木单抗、鲁昔单抗(Gomiliximab)、短杆菌肽D、胍立莫司、Herceptin
Figure FDA00001909859600271
肼类、羟基脲、低甲基化剂(hypomethylating agents)、伊达比星(idarubicin)、伊达比星(Idarubicine)、异环磷酰胺、IL-1拮抗剂、IL-1受体拮抗剂、IL-12、IL-12抗体、IL-12R拮抗剂、IL-13抗体、IL-2、IL-2抑制剂、IL-2受体/CD25抗体、IL-6抗体、甲磺酸伊马替尼、免疫球蛋白E抗体、IMP脱氢酶抑制剂、英夫利西单抗、伊诺莫单抗、整合素抗体、干扰素抗体、干扰素、白介素5抗体、白介素6受体抗体、白介素、碘-125(125I)、碘-131(131I)、伊匹单抗、伊立替康、伊沙匹隆、凯利昔单抗、拉洛他赛(larotaxel)、铅-212(212Pb)、莱布利珠单抗(Lebrilizumab)、来氟米特、来那度胺、乐地单抗(Lerdelimumab)、甲酰四氢叶酸(leucovorine)、LFA-1抗体、利多卡因、脂加氧酶抑制剂、洛莫司汀(CCNU)、氯尼达明、硫蒽酮(lucanthone)、鲁昔单抗(Lumiliximab)、镥-177(177Lu)、大环内酯类、甘露舒凡、马司莫单抗、马索罗酚、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、美法仑、美泊利单抗、巯基嘌呤、美替木单抗、甲氨蝶呤、微管组装抑制剂、微管稳定增强剂、光神毒素、二溴甘露醇(mitobronitol)、米托胍腙、丝裂霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、莫罗木单抗、mTOR抑制剂、莫罗莫那-CD3、氮芥类、霉酚酸、米托坦(mytotane)(O,P′-(DDD))、那他珠单抗、奈达铂、奈瑞莫单抗、尼莫司汀、氮芥、亚硝基脲、去甲二氢愈创木酸、奥利默森、奥瑞珠单抗、奥瑞珠单抗、奥度莫单抗、奥法木单抗、奥拉帕尼、奥马佐单抗、奥他赛、奥昔珠单抗(Otelixizumab)、奥沙利铂、奥沙利铂、紫杉醇(泰素)、帕考珠单抗(Pascolizumab)、PDGF拮抗剂、培门冬酶、培美曲塞、喷司他丁、帕妥珠单抗、培克珠单抗(Pexelizumab)、磷酸二酯酶抑制剂、磷-32(32P)、吡美莫司、阿贝莫司、吡柔比星、匹杉琼、铂类、普卡霉素、聚ADP核糖聚合酶抑制剂、卟吩姆钠、卟啉衍生物、泼尼莫司汀、普鲁卡因、丙卡巴肼、丙卡巴肼、普萘洛尔、蛋白酶体抑制剂、绿脓杆菌外毒素、假单胞菌毒素、嘌呤合成抑制剂、嘌呤霉素、嘧啶合成抑制剂、放射性核素、放疗、雷替曲塞、雷莫司汀、瑞利珠单抗、类视色素X受体激动剂、类视色素、铼-186(186Re)、铼-188(188Re)、核糖核苷酸还原酶抑制剂、蓖麻病毒、列洛西普、Rituxan
Figure FDA00001909859600281
罗维珠单抗、鲁比替康、卢利珠单抗(Ruplizumab)、钐-153(153Sm)、沙铂、钪-47(47Sc)、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、塞利西利(seliciclib)、司莫司汀、性激素拮抗剂、希普利珠单抗、西罗莫司、类固醇芳香酶抑制剂、类固醇、链佐星、链脲佐菌素、他克莫司、他拉泊芬、他利珠单抗、紫杉烷类、紫杉醇类、替加氟、阿替莫单抗、替莫泊芬、替莫唑胺、替西莫司(temsirolimus)、替西莫司、替奈昔单抗(Teneliximab)、替尼泊苷、替利珠单抗(Teplizumab)、特立氟胺、替司他赛(tesetaxel)、睾内酯、丁卡因、沙利度胺、塞替哌(thioepa)、苯丁酸氮芥、硫嘌呤类、硫鸟嘌呤、ThioTEPA、胸苷酸合成酶抑制剂、噻唑呋林、替吡法尼、T-淋巴细胞抗体、TNF拮抗剂、TNF抗体、TNF融合蛋白、TNF受体融合蛋白、TNF-α抑制剂、托珠单抗、拓扑异构酶抑制剂、拓扑替康、托利珠单抗、曲贝替定、曲美木单抗(Tremelimumab)、曲奥舒凡、维甲酸、三氮烯类、三亚胺醌、三亚安三嗪(triethylenemelamine)、四硝酸三铂(triplatin tetranitrate)、曲磷胺、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂、乌拉莫司汀、优特克单抗、戊柔比星(valrubicin)、戊柔比星(Valrubicine)、伐利昔单抗(Vapaliximab)、VEGF拮抗剂、维帕莫单抗、维替泊芬、长春花碱、长春花生物碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨、维西珠单抗(Visilizumab)、伏立诺他、钇-88(88Y)、钇-90(90Y)、扎木单抗(Zanolimumab)、齐留通、齐拉木单抗(Ziralimumab)、阿佐莫单抗、佐柔比星、佐他莫司或其任意组合。
121.根据权利要求112所述的方法，其中所述另一种活化剂是包括以下的因子的一种或多种激动剂、拮抗剂或调节剂：TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝细胞生长因子(HGF)、铁调素或其任意组合。
122.根据权利要求112所述的方法，其中所述IL-6拮抗剂包括：抗IL-6抗体或其片段、反义核酸、多肽、小分子或其任意组合。
123.根据权利要求122所述的方法，其中所述反义核酸包含编码IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3或SYK的序列的至少约10个核苷酸。
124.根据权利要求122所述的方法，其中所述IL-6拮抗剂是抗IL-6抗体。
125.根据权利要求122所述的方法，其中所述反义核酸包括DNA、RNA、肽核酸、锁核酸、吗啉代(磷二酰胺吗啉代寡核苷酸)、甘油核酸、苏糖核酸或其任意组合。根据权利要求112所述的方法，其中所述抗IL-6抗体或其片段包括：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35、Ab36、前述任一者的IL-6结合片段、前述任一者的变体或其任意组合。
126.根据权利要求122所述的方法，其中所述IL-6拮抗剂多肽包含具有选自由IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3和SYK组成的组的序列的多肽的片段。
127.根据权利要求126所述的方法，其中所述片段至少是40个氨基酸的长度。
128.根据权利要求122所述的方法，其中所述IL-6拮抗剂包括可溶的IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK或其任意组合。
129.根据权利要求112所述的方法，其中所述IL-6拮抗剂与增加半衰期的部分偶联。
130.根据权利要求112-129中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段直接地或间接地与一种或多种所述另一种治疗剂偶联。
131.根据权利要求1-101中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体或抗体片段直接地或间接地与可检测标记偶联。
132.根据权利要求131所述的方法，其中所述可检测标记包括：荧光染料、生物发光物质、放射性物质、化学发光部分、链霉亲和素、亲和素、生物素、放射性物质、酶、底物、辣根过氧化物酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β半乳糖苷酶、荧光素酶、若丹明、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞形花内酯、二氯三嗪基胺、藻红蛋白、丹磺酰氯、鲁米诺、虫荧光素、水母素、碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)、磷32(32P)或其任意组合。
133.根据权利要求1-30或权利要求34-128中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体以编码所述Ab1抗体的一种或多种核酸的形式施用给所述受试者。
134.根据权利要求133所述的方法，其中所述一种或多种核酸作为病毒、脂质体、阳离子脂质复合物、阳离子聚合物复合物或纳米粒子复合物被引入所述接受者。
135.根据权利要求133所述的方法，其中所述一种或多种核酸包含酵母或人偏爱密码子。
136.根据权利要求133所述的方法，其中所述一种或多种核酸包含在载体内。
137.根据权利要求136所述的方法，其中所述载体是质粒或重组病毒载体。
138.根据权利要求133所述的方法，其中所述一种或多种核酸包含SEQ ID NO:723和SEQ ID NO:700；SEQ ID NO:701和SEQ IDNO:703；SEQ ID NO:705和SEQ ID NO:707；SEQ ID NO:720和SEQ ID NO:724；及SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的重链和轻链多核苷酸序列。
139.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Ab1抗体包含：
(a)包含如下序列的轻链和重链多肽：SEQ ID NO:709和SEQ IDNO:657；SEQ ID NO:702和SEQ ID NO:704；SEQ ID NO:706和SEQ ID NO:708；SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:19；或SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；
(b)与(a)所述多肽中任一种具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的多肽；
(c)在中等或高度严格的杂交条件下与以下重链和轻链多核苷酸序列中任一种杂交的多核苷酸：SEQ ID NO:723和SEQ ID NO:700；SEQ ID NO:701和SEQ ID NO:703；SEQ ID NO:705和SEQ ID NO:707；SEQ ID NO:720和SEQ ID NO:724；及SEQ ID NO:10和SEQID NO:11；
(d)与以下重链和轻链多核苷酸序列中任一种具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的多核苷酸：SEQID NO:723和SEQ ID NO:700；SEQ ID NO:701和SEQ ID NO:703；SEQ ID NO:705和SEQ ID NO:707；SEQ ID NO:720和SEQID NO:724；及SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；
(e)由(c)或(d)所述多核苷酸中任一种编码的多肽。
140.一种治疗组合物，其包含Ab1抗体和另一种治疗化合物，
其中所述Ab1抗体包含：
轻链多肽，其包含：与SEQ ID NO:709具有至少75%同一性的多肽、由与多核苷酸SEQ ID NO:723具有至少75%同一性的多核苷酸编码的多肽、由在中等严格度条件下与具有SEQ ID NO:723反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽、或由在高严格度条件下与具有SEQ ID NO:723反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽；及
重链多肽，其包含：与SEQ ID NO:657具有至少75%同一性的多肽、由与SEQ ID NO:700的多核苷酸具有至少75%同一性的多核苷酸编码的多肽、由在中等严格度条件下与具有SEQ ID NO:700反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽、或由在高严格度条件下与具有SEQ ID NO:700反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽；
其中所述Ab1抗体或抗体片段特异性结合IL-6且拮抗与IL-6相关的一种或多种活性；
以及其中所述另一种治疗化合物包括：化疗剂、他汀类药物、细胞因子、基因治疗剂、抗凝血剂、抗恶病质剂、抗虚弱剂、抗疲劳剂、抗发热剂、抗恶心剂、止吐剂、IL-6拮抗剂、细胞毒性剂、另一治疗化合物或其任意组合。
141.根据权利要求140所述的组合物，其中所述轻链多肽包括相对于轻链骨架区序列SEQ ID NO:709，在所述轻链骨架区内的一个或多个取代。
142.根据权利要求141所述的组合物，其中所述轻链骨架区内的一个或多个所述取代是以供体序列相应位置的序列的取代，其中所述供体序列包含：SEQ ID NO:2；人、兔或非人灵长类轻链序列；及Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35或Ab36中任一种的轻链，
其中所述取代导致一个或多个氨基酸的替换、插入和/或缺失，及
其中所述相应位置由SEQ ID NO:709骨架区和所述供体序列之间的序列比对确定。
143.根据权利要求142所述的组合物，其中所述重链多肽包括相对于重链骨架区序列SEQ ID NO:657，在所述重链骨架区内的一个或多个取代。
144.根据权利要求143所述的组合物，其中所述重链骨架区内的一个或多个所述取代是以供体序列相应位置的序列的取代，其中所述供体序列包含：SEQ ID NO:3；人、兔或非人灵长类重链序列；及Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35或Ab36中任一种的重链，
其中所述取代导致一个或多个氨基酸的替换、插入和/或缺失，及
其中所述相应位置由SEQ ID NO:657骨架区和所述供体序列之间的序列比对确定。
145.根据权利要求140-144中任一项所述的组合物，其中所述轻链多肽包含一个或多个Ab1轻链CDR多肽，其包含:
与SEQ ID NO:4具有至少72.7%同一性(与11个残基中至少8个一致)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少85.7%同一性(与7个残基中至少6个一致)的轻链CDR2；
与SEQ ID NO:6具有至少50%同一性(与12个残基中至少6个一致)的轻链CDR3；
与SEQ ID NO:4具有至少90.9%相似性(与11个残基中至少10个相似)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少100%相似性(与7个残基中至少7个相似)的轻链CDR2；或
与SEQ ID NO:6具有至少66.6%相似性(与12个残基中至少8个相似)的轻链CDR3；
以及其中所述重链多肽包含一个或多个Ab1重链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:7具有至少80%同一性(与5个残基中至少4个一致)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少50%同一性(与16个残基中至少8个一致)的重链CDR2；
与SEQ ID NO:9具有至少33.3%同一性(与12个残基中至少4个一致)的重链CDR3；
与SEQ ID NO:7具有至少100%相似性(与5个残基中至少5个相似)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少56.2%相似性(与16个残基中至少9个相似)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少50%相似性(与12个残基中至少6个相似)的重链CDR3。
146.根据权利要求140-144中任一项所述的组合物，其中所述轻链多肽包含一个或多个Ab1轻链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:4具有至少81.8%同一性(与11个残基中至少9个一致)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少71.4%同一性(与7个残基中至少5个一致)的轻链CDR2；或
与SEQ ID NO:6具有至少83.3%同一性(与12个残基中至少10个一致)的轻链CDR3；
以及其中所述重链多肽包含一个或多个Ab1重链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:7具有至少60%同一性(与5个残基中至少3个一致)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少87.5%同一性(与16个残基中至少14个一致)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少83.3%同一性(与12个残基中至少10个一致)的重链CDR3。
147.根据权利要求145-146中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含至少两个所述轻链CDR多肽和至少两个所述重链CDR多肽。
148.一种治疗组合物，其包含Ab1抗体和另一种治疗化合物，
其中所述Ab1抗体包含：
两个或更多个Ab1轻链CDR多肽，其包含：
与SEQ ID NO:4具有至少72.7%同一性(与11个残基中至少8个一致)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少85.7%同一性(与7个残基中至少6个一致)的轻链CDR2；或
与SEQ ID NO:6具有至少50%同一性(与12个残基中至少6个一致)的轻链CDR3；
及两个或更多个Ab1重链CDR多肽，其包含:
与SEQ ID NO:7具有至少80%同一性(与5个残基中至少4个一致)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少50%同一性(与16个残基中至少8个一致)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少33.3%同一性(与12个残基中至少4个一致)的重链CDR3；
其中所述Ab1抗体或抗体片段特异性结合IL-6且拮抗与IL-6相关的一种或多种活性；
以及其中所述另一种治疗化合物包括：化疗剂、他汀类药物、细胞因子、基因治疗剂、抗凝血剂、抗恶病质剂、抗虚弱剂、抗疲劳剂、抗发热剂、抗恶心剂、止吐剂、IL-6拮抗剂、细胞毒性剂、另一治疗化合物或其任意组合。
149.一种治疗组合物，其包含Ab1抗体和另一种治疗化合物，
其中所述Ab1抗体包含:
与SEQ ID NO:4具有至少90.9%相似性(与11个残基中至少10个相似)的轻链CDR1；
与SEQ ID NO:5具有至少100%相似性(与7个残基中至少7个相似)的轻链CDR2；和
与SEQ ID NO:6具有至少66.6%相似性(与12个残基中至少8个相似)的轻链CDR3；
及两个或更多个Ab1重链CDR多肽，其包含:
与SEQ ID NO:7具有至少100%相似性(与5残基中至少5个相似)的重链CDR1；
与SEQ ID NO:120具有至少56.2%相似性(与16个残基中至少9个相似)的重链CDR2；或
与SEQ ID NO:9具有至少50%相似性(与12个残基中至少6个相似)的重链CDR3；
其中所述Ab1抗体或抗体片段特异性结合IL-6且拮抗与IL-6相关的一种或多种活性；
以及其中所述另一种治疗化合物包括：化疗剂、他汀类药物、细胞因子、基因治疗剂、抗凝血剂、抗恶病质剂、抗虚弱剂、抗疲劳剂、抗发热剂、抗恶心剂、止吐剂、IL-6拮抗剂、细胞毒性剂、另一治疗化合物或其任意组合。
150.根据权利要求148-149中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含所述轻链CDR1、所述轻链CDR3、所述重链CDR2和所述重链CDR3。
151.根据权利要求148-149中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含所述轻链CDR1、所述轻链CDR2、所述轻链CDR3、所述重链CDR1、所述重链CDR2和所述重链CDR3。
152.根据权利要求144-147中任一项所述的组合物，其中所述轻链和重链CDR多肽包含于包含Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、scFv、IgNAR、SMIP、骆驼抗体或纳米抗体的抗体或抗体片段内。
153.根据权利要求148-151中任一项所述的组合物，其中分别在所述Ab1抗体或抗体片段的可变轻链和重链中的骨架区(FR)1、2、3、4是未经修饰或分别通过用亲本兔抗体轻链或重链SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的相应FR残基取代至多2或3个人FR残基而各自被修饰的人FR，
其中所述人轻链FR 1、2和3衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变轻链抗体序列，选择是基于所述人可变轻链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与所述亲本兔抗体轻链SEQ ID NO:2(从FR1开始到FR3结束)的子序列的高同源性水平；和
其中所述人轻链FR4衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变轻链抗体序列，选择是基于所述人可变轻链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与包含于SEQ IDNO:2的所述亲本兔抗体轻链FR4的高同源性水平；和
其中所述人重链FR 1、2和3衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变重链抗体序列，选择是基于所述人可变重链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与所述亲本兔抗体重链SEQ ID NO:3(从FR1开始到FR3结束)的子序列的高同源性水平；和
其中所述人重链FR4衍生自选自人种系抗体序列文库或数据库的人可变重链抗体序列，选择是基于所述人可变重链抗体序列(相对于所述文库或数据库中含有的其它人种系抗体序列)与包含于SEQ IDNO:3的所述亲本兔抗体重链FR4的高同源性水平。
154.根据权利要求140-153中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段在健康人受试者中具有至少约22天的体内半衰期。
155.根据权利要求140-153中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段在健康人受试者中具有至少约25天的体内半衰期。
156.根据权利要求140-153中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段在健康人受试者中具有至少约30天的体内半衰期。
157.根据权利要求140-156中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段对IL-6具有小于约50皮摩尔浓度的结合亲和力(Kd)或具有小于或等于10-4S-1的与IL-6的解离速率(Koff)。
158.根据权利要求140-157中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段与主要由SEQ ID NO:702和SEQ ID NO:704的多肽或SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的多肽组成的抗IL-6抗体特异性结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位。
159.根据权利要求158所述的组合物，其中所述结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位和/或竞争结合完整人IL-6多肽或其片段上相同的线性或构象性表位是通过使用跨天然人IL-6多肽全长的重叠线性多肽片段的表位定位确定的，并包括选自那些分别含有SEQ ID NO:1的氨基酸残基37-51、氨基酸残基70-84、氨基酸残基169-183、氨基酸残基31-45和/或氨基酸残基58-72的IL-6片段中包含的一个或多个残基。
160.根据权利要求140-159中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段是非糖基化的。
161.根据权利要求140-160中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段含有经过修饰而改变效应子功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fc区。
162.根据权利要求140-161中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段是人、人源化、单链或嵌合抗体。
163.根据权利要求140-162中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段包含Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或scFv。
164.根据权利要求140-163中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段还包含人Fc。
165.根据权利要求164所述的组合物，其中所述人Fc衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19。
166.根据权利要求140-165中任一项所述的组合物，其中所述与IL-6相关的一种或多种活性是体内活性，其包括：
降低的血清白蛋白、升高的C反应蛋白(“CRP”)、疲劳、发热、厌食症(食欲不振)、体重减轻、恶病质、虚弱、Glasgow预后分数(“GPS”)下降、升高的血清D-二聚体、凝血状况异常或其任意组合。
167.根据权利要求140-165中任一项所述的组合物，其中一种或多种所述与IL-6相关的一种或多种活性是体外活性，其包括：
刺激T1165细胞的增殖、IL-6结合至IL-6R、信号转导糖蛋白gp130的活化(二聚化)、IL-6/IL-6R/gp130多聚体的形成、经修饰以表达人IL-6受体的HepG2细胞产生触珠蛋白的刺激或其任意组合。
168.根据权利要求140-167中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段由重组细胞表达。
169.根据权利要求168所述的组合物，其中所述细胞选自哺乳动物、酵母、细菌和昆虫细胞。
170.根据权利要求169所述的组合物，其中所述细胞是酵母细胞。
171.根据权利要求170所述的组合物，其中所述细胞是二倍体酵母细胞。
172.根据权利要求171所述的组合物，其中所述酵母细胞是毕赤酵母。
173.根据权利要求140-172中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段与另一种治疗剂共同施用，所述治疗剂包括：化疗剂、他汀类药物、细胞因子、免疫抑制剂、基因治疗剂、抗凝血剂、抗恶病质剂、抗虚弱剂、抗疲劳剂、抗发热剂、抗恶心剂、止吐剂、IL-6拮抗剂、细胞毒性剂、止痛剂、解热剂、抗炎剂、抗生素、抗病毒剂、抗细胞因子剂、其它治疗剂或其任意组合。
174.根据权利要求173所述的组合物，其中所述化疗剂包括：VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇类、依立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、甲酰四氢叶酸、类固醇、环磷酰胺、美法仑、长春花生物碱、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、氮芥类、酪氨酸激酶抑制剂、放疗、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素类、IL-12、IL-2、IL-12R拮抗剂、与毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠单抗、抗CD20抗体、Rituxan
Figure FDA00001909859600421
奥瑞珠单抗、奥法木单抗、DXL625、Herceptin
Figure FDA00001909859600422
或其任意组合。
175.根据权利要求173所述的组合物，其中所述抗凝血剂包括：阿昔单抗(ReoProTM)、心得隆、抗凝血酶III、阿加曲班、阿司匹林、比伐卢定(AngiomaxTM)、氯吡格雷、达比加群、达比加群酯(PradaxaTM/PradaxTM)、地西卢定(RevascTM/IprivaskTM)、双嘧达莫、埃替非巴肽(IntegrilinTM)、磺达肝素、肝素、水蛭素、艾卓肝素、来匹卢定(RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群、苯茚二酮、苯丙香豆素、噻氯匹定、替罗非班(AggrastatTM)、华法林、希美加群、希美加群(ExantaTM/ExartaTM)或其任意组合。
176.根据权利要求173所述的组合物，其中所述他汀包括：阿伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他汀、斯伐他汀或其任意组合。
177.根据权利要求173所述的组合物，其中所述另一种治疗剂是包括以下的因子的拮抗剂：肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白介素-1α、白介素1β、白介素6、蛋白水解诱导因子、白血病抑制因子或其任意组合。
178.根据权利要求173所述的组合物，其中所述抗恶病质剂包括：大麻、屈大麻酚(MarinolTM)、大麻隆(Cesamet)、大麻二酚、大麻环萜酚、四氢大麻酚、沙替菲克、甲地孕酮或其任意组合。
179.根据权利要求173所述的组合物，其中所述抗恶心剂或止吐剂包括：5-HT3受体拮抗剂、阿魏、阿立必利、抗胆碱能剂、抗组胺剂、阿瑞匹坦、苯二氮卓类、大麻环萜酚、大麻二酚、大麻素类、大麻、卡索匹坦、氯丙嗪、苯甲嗪、地塞米松、地塞米松、乘晕宁(GravolTM)、苯海拉明、多拉司琼、多潘立酮、多巴胺拮抗剂、多西拉敏、屈大麻酚(MarinolTM)、氟哌利多、愈吐宁、姜、康泉、氟哌丁苯、羟嗪、东莨菪碱、劳拉西泮、氯苯甲嗪、甲氧氯普胺、咪达唑他、蝇蕈醇、大麻隆(Cesamet)、nk1受体拮抗剂、昂丹司琼、帕洛诺司琼、薄荷、非那根、丙氯拉嗪、Promacot、异丙嗪、五嗪、丙泊酚、沙替菲克、四氢大麻酚、三甲氧苯酰胺、托烷司琼、诺龙、己烯雌酚、沙利度胺、来那度胺、饥饿素激动剂、肌抑素拮抗剂、抗肌抑素抗体、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、血管紧张素AII拮抗剂、β2肾上腺素受体激动剂、β3肾上腺素受体激动剂或其任意组合。
180.根据权利要求173所述的组合物，其中所述另一种治疗剂包括：他莫昔芬、BCL-2拮抗剂、雌激素、双磷酸盐类、立特帕肽、雷奈酸锶、阿仑膦酸钠(Fosamax)、利塞膦酸盐(Actonel)、雷诺昔芬、伊班膦酸盐(Boniva)、奥巴克拉、ABT-263、棉酚、吉非替尼、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂、厄洛替尼、表皮生长因子受体抑制剂、补骨脂素、三甲沙林、甲氧沙林、佛手柑内酯、类视色素、阿维A酯、阿维A酸、英夫利昔单抗(Remicade
Figure FDA00001909859600431
)、阿达木单抗、英夫利昔单抗、依那西普、ZenapaxTM、环孢素、甲氨蝶呤、粒细胞集落刺激因子、非格司亭、来格司亭、优保津、纽拉思塔、2-芳基丙酸、醋氯芬酸、阿西美辛、乙酰水杨酸(阿司匹林)、阿氯芬酸、阿明洛芬、Amoxiprin、氨基安替比林、芳基链烷酸、阿扎丙酮、扑炎痛/贝诺酯、苯噁洛芬、溴芬酸、卡洛芬、塞来昔布、三水杨酸胆碱镁、氯非宗、COX-2抑制剂、右布洛芬、右酮洛芬、双氯芬酸、二氟尼柳、屈噁昔康、乙水杨胺、依托度酸、依他昔布、Faislamine、芬那酸、芬布芬、非诺洛芬、氟芬那酸、氟诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、异丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、氯诺昔康、洛索洛芬、罗美昔布、水杨酸镁、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、水杨酸甲酯、莫非布宗、萘丁美酮、甲氧萘丙酸、N-芳基氨茴酸、奥沙美辛、奥沙普泰、昔康类、羟基保泰松、帕瑞昔布、非那宗、保泰松、保泰松、吡罗昔康、吡洛芬、普鲁芬、丙谷美辛、吡唑烷衍生物、罗非昔布、水杨酸水杨酸酯、水杨酰胺、水杨酸盐、苯磺唑酮、舒林酸、舒洛芬、替诺昔康、噻洛芬酸、托芬那酸、托美汀和伐地昔布。抗生素包括阿米卡星、氨基糖苷类、阿莫西林、氨苄西林、安沙霉素类、胂凡纳明、阿奇霉素、阿洛西林、氨曲南、杆菌肽、碳头孢烯、碳青霉烯类、羧苄青霉素、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢噻吩、头孢噻吩、头孢孟多、头孢唑啉、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢吡普、头孢曲松、头孢呋辛、头孢菌素类、氯霉素、西司他丁、环丙沙星、克拉霉素、克林霉素、氯唑西林、粘杆菌素、复方新诺明、达福普汀、地美环素、双氯青霉素、地红霉素、多尼培南、多西环素、依诺沙星、厄他培南、红霉素、乙胺丁醇、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、夫西地酸、加替沙星、格尔德霉素、庆大霉毒、糖肽类、除莠霉素、亚胺培南、异烟肼、卡那霉素、左氧氟沙星、林可霉素、利奈唑胺、洛美沙星、氯碳头孢、大环内酯类、磺胺米隆、美罗培南、甲氧西林、灭滴灵、美洛西林、米诺环素、单环内酰胺类、莫西沙星、莫匹罗星、萘夫西林、新霉素、奈替米星、呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、苯唑西林、土霉素、巴龙霉素、青霉素、青霉素类、哌拉西林、平板霉素、多粘菌素B、多肽、百浪多息、吡嗪酰胺、喹诺酮类、奎奴普丁、利福平、利福平、罗红霉素、壮观霉素、链霉素、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、Sulfanilimide、硫氮磺胺吡啶、磺胺异噁唑、磺胺类、替考拉宁、泰利霉素、四环素、四环素类、替卡西林、替硝唑、托普霉素、甲氧苄氨嘧啶、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲基异噁唑、醋竹桃霉素、曲伐沙星和万古霉素。活化剂还包括醛固醇、倍氯米松、倍他米松、皮质类固醇类、皮质醇、醋酸可的松、醋酸脱氧皮质酮、地塞米松、醋酸氟氢可的松、糖皮质激素、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、强的松、类固醇和曲安西龙。抗病毒剂包括阿巴卡韦、阿昔洛韦、无环鸟苷、阿德福韦、金刚烷胺、安泼那韦、固定剂量复方抗逆转录病毒剂、协同增强抗逆转录病毒剂、阿比朵尔、阿扎那韦、立普妥/阿托伐他汀钙、溴夫定、西多福韦、双汰芝、地瑞那韦、地拉夫定、去羟肌苷、二十二烷醇、依度尿苷、依法韦仑、恩曲他滨、恩夫韦肽、恩替卡韦、进入抑制剂、泛昔洛韦、福米韦生、夫沙那韦、膦甲酸、膦乙酸、融合抑制剂、更昔洛韦、加德西、伊巴他滨、碘苷、咪喹莫特、异丙肌苷、茚地那韦、肌苷、整合酶抑制剂、干扰素、I型干扰素、II型干扰素、III型干扰素、拉米夫定、洛匹那韦、洛韦胺、马拉维若、MK-0518、吗啉胍、奈非那韦、奈韦拉平、nexavir、核苷类似物、奥司他韦、喷昔洛韦、帕拉米韦、普可那利、鬼臼毒素、蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、利巴韦林、金刚乙胺、利托那韦、沙奎那韦、司他夫定、替诺福韦、替诺福韦二吡呋酯、替拉那韦、三氟尿苷、三协唯、曲金刚胺、特鲁瓦达、伐昔洛韦、缬更昔洛韦、维利维罗、阿糖腺苷、韦拉米啶、扎西他滨、扎那米韦、齐多夫定或其任意组合。
181.根据权利要求173所述的组合物，其中所述细胞毒性剂、化疗剂或免疫抑制剂包括：1-去氢睾酮、1-甲基亚硝基脲、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿巴西普、白蛋白结合型紫杉醇、阿维A酸、阿柔比星、锕-225(225Ac)、放线菌素、阿达木单抗、腺苷脱氨酶抑制剂、阿非莫单抗、阿柏西普、阿夫土珠、阿法赛特、阿利维A酸、烷基磺酸盐、烷化剂、六甲蜜胺、阿伏西地、氨基乙酰丙酸/氨基乙酰丙酸甲酯、氨基蝶呤、氨基蝶呤、氨柔比星、安吖啶、安吖啶、阿那格雷、阿那白滞素、蒽二酮类、蒽环霉素类、蒽环霉素类、蒽环霉素类、氨茴霉素(AMC)、抗霉菌剂、抗生素、抗-CD20抗体、抗叶酸剂、抗淋巴细胞球蛋白、抗代谢剂、抗胸腺细胞球蛋白、三氧化二砷、阿塞珠单抗、天冬酰胺酶、天冬酰胺酶耗竭剂、砹-211(211At)、阿塔珠单抗、阿托木单抗、阿曲生坦、AvastinTM、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、氮卓斯汀、氮杂环丙烷类、巴利昔单抗、BAYX抗体、贝拉西普、贝利单抗、贝洛替康、苯达莫司汀、柏替木单抗、蓓萨罗丁、比生群、铋-213(213Bi)、铋-212(212Bi)、博来霉素、博来霉素、博来霉素、BLyS抗体、硼替佐米、白消安、白消安、钙调神经磷酸酶抑制剂、卡奇霉素、喜树碱、喜树碱类、卡培他滨、卡铂(铂尔定)、卡波醌、洋红霉素、卡莫氟、卡莫司汀、卡莫司汀(BSNU)、CAT抗体、CD11抗体、CD147/Basigin抗体、CD154抗体、CD18抗体、CD20抗体、CD23抗体、CD3抗体、CD4抗体、CD40抗体、CD62L/L-selectin抗体、CD80抗体、CDK抑制剂、西利珠单抗、塞来昔布、聚乙二醇化塞妥珠单抗、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥类、环孢素、顺-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂、克拉屈滨、克立昔单抗、克罗拉滨、秋水仙碱、补体成分5抗体、铜-67(67Cu)、皮质类固醇类、CTLA-4抗体、CTLA-4融合蛋白、亲环蛋白抑制剂、环磷酰胺类、环磷酰胺(cyclothosphamide)、阿糖胞苷、阿糖胞苷、细胞松弛素B、细胞毒性核糖核酸酶、达卡巴嗪、达利珠单抗、更生霉素、更生霉素(放线菌素D)、柔红霉素、柔红霉素、柔红霉素(前称道诺霉素)、地西他滨、德弗利莫司、秋水仙胺、地托比星、二溴甘露醇、乙胺嗪、二氢叶酸还原酶抑制剂、二羟基蒽二酮、白喉毒素、DNA聚合酶抑制剂、多西他赛、阿托度单抗、得利西珠单抗、阿霉素(亚德里亚霉素)、DXL625、艾库组单抗、依法利珠单抗、乙丙昔罗、EGFR拮抗剂、伊利司莫、依沙芦星、艾西莫单抗、吐根碱、内皮素受体拮抗剂、表鬼臼毒素类、表柔比星、埃坡霉素类、ErbituxTM、厄利珠单抗、雌莫司汀、依那西普、溴化乙锭、依托格鲁、依托泊苷、磷酸依托泊苷、依维莫司、法拉莫单抗、法尼基转移酶抑制剂、FKBP抑制剂、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、芳妥珠单抗、福莫司汀、加利昔单抗、钙-67(67Ga)、罗氏单抗、加维莫单抗、吉西他滨、糖皮质激素类、戈利木单抗、鲁昔单抗、短杆菌肽D、胍立莫司、Herceptin
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肼类、羟基脲、低甲基化剂、伊达比星、伊达比星、异环磷酰胺、IL-1拮抗剂、IL-1受体拮抗剂、IL-12、IL-12抗体、IL-12R拮抗剂、IL-13抗体、IL-2、IL-2抑制剂、IL-2受体/CD25抗体、IL-6抗体、甲磺酸伊马替尼、免疫球蛋白E抗体、IMP脱氢酶抑制剂、英夫利西单抗、伊诺莫单抗、整合素抗体、干扰素抗体、干扰素、白介素5抗体、白介素6受体抗体、白介素、碘-125(125I)、碘-131(131I)、伊匹单抗、伊立替康、伊沙匹隆、凯利昔单抗、拉洛他赛、铅-212(212Pb)、莱布利珠单抗、来氟米特、来那度胺、乐地单抗、甲酰四氢叶酸、LFA-1抗体、利多卡因、脂加氧酶抑制剂、洛莫司汀(CCNU)、氯尼达明、硫蒽酮、鲁昔单抗、镥-177(177Lu)、大环内酯类、甘露舒凡、马司莫单抗、马索罗酚、二氯甲基二乙胺、美法仑、美泊利单抗、巯基嘌呤、美替木单抗、甲氨蝶呤、微管组装抑制剂、微管稳定增强剂、光神毒素、二溴甘露醇、米托胍腙、丝裂霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、莫罗木单抗、mTOR抑制剂、莫罗莫那-CD3、氮芥类、霉酚酸、米托坦(O,P′-(DDD))、那他珠单抗、奈达铂、奈瑞莫单抗、尼莫司汀、氮芥、亚硝基脲、去甲二氢愈创木酸、奥利默森、奥瑞珠单抗、奥瑞珠单抗、奥度莫单抗、奥法木单抗、奥拉帕尼、奥马佐单抗、奥他赛、奥昔珠单抗、奥沙利铂、奥沙利铂、紫杉醇(泰素)、帕考珠单抗、PDGF拮抗剂、培门冬酶、培美曲塞、喷司他丁、帕妥珠单抗、培克珠单抗、磷酸二酯酶抑制剂、磷-32(32P)、吡美莫司、阿贝莫司、吡柔比星、匹杉琼、铂类、普卡霉素、聚ADP核糖聚合酶抑制剂、卟吩姆钠、卟啉衍生物、泼尼莫司汀、普鲁卡因、丙卡巴肼、丙卡巴肼、普萘洛尔、蛋白酶体抑制剂、绿脓杆菌外毒素、假单胞菌毒素、嘌呤合成抑制剂、嘌呤霉素、嘧啶合成抑制剂、放射性核素、放疗、雷替曲塞、雷莫司汀、瑞利珠单抗、类视色素X受体激动剂、类视色素、铼-186(186Re)、铼-188(188Re)、核糖核苷酸还原酶抑制剂、蓖麻病毒、列洛西普、Rituxan罗维珠单抗、鲁比替康、卢利珠单抗、钐-153(153Sm)、沙铂、钪-47(47Sc)、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、塞利西利、司莫司汀、性激素拮抗剂、希普利珠单抗、西罗莫司、类固醇芳香酶抑制剂、类固醇、链佐星、链脲佐菌素、他克莫司、他拉泊芬、他利珠单抗、紫杉烷类、紫杉醇类、替加氟、阿替莫单抗、替莫泊芬、替莫唑胺、替西莫司、替西莫司、替奈昔单抗、替尼泊苷、替利珠单抗、特立氟胺、替司他赛、睾内酯、丁卡因、沙利度胺、塞替哌、苯丁酸氮芥、硫嘌呤类、硫鸟嘌呤、ThioTEPA、胸苷酸合成酶抑制剂、噻唑呋林、替吡法尼、T-淋巴细胞抗体、TNF拮抗剂、TNF抗体、TNF融合蛋白、TNF受体融合蛋白、TNF-α抑制剂、托珠单抗、拓扑异构酶抑制剂、拓扑替康、托利珠单抗、曲贝替定、曲美木单抗、曲奥舒凡、维甲酸、三氮烯类、三亚胺醌、三亚安三嗪、四硝酸三铂、曲磷胺、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂、乌拉莫司汀、优特克单抗、戊柔比星、戊柔比星、伐利昔单抗、VEGF拮抗剂、维帕莫单抗、维替泊芬、长春花碱、长春花生物碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨、维西珠单抗、伏立诺他、钇-88(88Y)、钇-90(90Y)、扎木单抗、齐留通、齐拉木单抗、阿佐莫单抗、佐柔比星、佐他莫司或其任意组合。
182.根据权利要求173所述的组合物，其中所述另一种活化剂是包括以下的因子的一种或多种激动剂、拮抗剂或调节剂：TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝细胞生长因子(HGF)、铁调素或其任意组合。
183.根据权利要求173所述的组合物，其中所述IL-6拮抗剂包括：抗IL-6抗体或其片段、反义核酸、多肽、小分子或其任意组合。
184.根据权利要求183所述的组合物，其中所述反义核酸包含编码IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3或SYK的序列的至少约10个核苷酸。
185.根据权利要求183所述的组合物，其中所述反义核酸包括：DNA、RNA、肽核酸、锁核酸、吗啉代(磷二酰胺吗啉代寡核苷酸)、甘油核酸、酥糖核酸或其任意组合。
186.根据权利要求183所述的组合物，其中所述抗IL-6抗体或其片段包含：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35、Ab36、前述任一者的IL-6结合片段、前述任一者的变体或其任意组合。
187.根据权利要求183所述的组合物，其中所述IL-6拮抗剂多肽包含具有选自由IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3或SYK组成的组的序列的多肽的片段。
188.根据权利要求187所述的组合物，其中所述片段至少是40个氨基酸的长度。
189.根据权利要求183所述的组合物，其中所述IL-6拮抗剂包含可溶的IL-6、IL-6受体α、gp130、p38MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK或其任意组合。
190.根据权利要求173所述的组合物，其中所述IL-6拮抗剂与增加半衰期的部分偶联。
191.根据权利要求170-190中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段直接地或间接地与一种或多种所述另一种治疗剂偶联。
192.根据权利要求140-167中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体或抗体片段直接地或间接地与可检测标记偶联。
193.根据权利要求192所述的组合物，其中所述可检测标记包括：荧光染料、生物发光物质、放射性物质、化学发光部分、链霉亲和素、亲和素、生物素、放射性物质、酶、底物、辣根过氧化物酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β半乳糖苷酶、荧光素酶、若丹明、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞形花内酯、二氯三嗪基胺、藻红蛋白、丹磺酰氯、鲁米诺、虫荧光素、水母素、碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)、磷32(32P)或其任意组合。
194.根据权利要求140-193中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体以编码所述Ab1抗体的一种或多种核酸的形式施用给所述受试者。
195.根据权利要求194所述的组合物，其中所述一种或多种核酸作为病毒、脂质体、阳离子脂质复合物、阳离子聚合物复合物或纳米粒子复合物被引入所述接受者。
196.根据权利要求194所述的组合物，其中所述一种或多种核酸包含酵母或人偏爱密码子。
197.根据权利要求194所述的组合物，其中所述一种或多种核酸包含在载体中。
198.根据权利要求194所述的组合物，其中所述载体是质粒或重组病毒载体。
199.根据权利要求194所述的组合物，其中所述一种或多种核酸包含SEQ ID NO:723和SEQ ID NO:700；SEQ ID NO:701和SEQID NO:703；SEQ ID NO:705和SEQ ID NO:707；SEQ ID NO:720和SEQ ID NO:724；及SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的重链和轻链多核苷酸序列。
200.根据权利要求140-193中任一项所述的组合物，其中所述Ab1抗体包含：
(a)包含如下序列的轻链和重链多肽：SEQ ID NO:709和SEQ IDNO:657；SEQ ID NO:702和SEQ ID NO:704；SEQ ID NO:706和SEQ ID NO:708；SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:19；或SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；
(b)与(a)所述多肽中任一种具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的多肽；
(c)在中等或高度严格的杂交条件下与以下重链和轻链多核苷酸序列中任一种杂交的多核苷酸：SEQ ID NO:723和SEQ ID NO:700；SEQ ID NO:701和SEQ ID NO:703；SEQ ID NO:705和SEQ ID NO:707；SEQ ID NO:720和SEQ ID NO:724；及SEQ ID NO:10和SEQID NO:11；
(d)与以下重链和轻链多核苷酸序列中任一种具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的多核苷酸：SEQID NO:723和SEQ ID NO:700；SEQ ID NO:701和SEQ ID NO:703；SEQ ID NO:705和SEQ ID NO:707；SEQ ID NO:720和SEQID NO:724；及SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；
(e)由(c)或(d)所述多核苷酸中任一种编码的多肽。
201.一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法是通过对有相应需要的患者皮下施用有效剂量的与Ab1具有相同的表位特异性的抗IL-6抗体或与Ab1竞争结合IL-6的抗体。
202.根据权利要求201所述的方法，其中所述抗体或抗体片段包含轻链多肽，其包含：与SEQ ID NO:709具有至少75%同一性的多肽、由与多核苷酸SEQ ID NO:723具有至少75%同一性的多核苷酸编码的多肽、由在中等严格度条件下与具有SEQ ID NO:723反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽、或在高严格度条件下与具有SEQ ID NO:723反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽；及重链多肽，其包含：与SEQ ID NO:657具有至少75%同一性的多肽、由与多核苷酸SEQ ID NO:700具有至少75%同一性的多核苷酸编码的多肽、由在中等严格度条件下与具有SEQ ID NO:700反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽、或由在高严格度条件下与具有SEQ ID NO:700反向互补序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽；其中所述Ab1抗体或抗体片段特异性结合IL-6并拮抗与IL-6相关的一种或多种活性。
203.根据权利要求201所述的方法，其中所述皮下剂量为至少约50或100mg。
204.根据权利要求201所述的方法，其中所述皮下施用的功效通过以下至少一项确定:(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照皮下制剂的患者，CRP减少。
205.根据权利要求201所述的方法，其中所述皮下施用导致疾病的改善，由以下至少一项表现：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照皮下制剂的患者，CRP减少。
206.根据权利要求205所述的方法，其中所述皮下施用导致疾病的长期改善(在抗体施用后至少4、6、8、10、12、14或16周后观察到)，由以下至少一项表现：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照皮下制剂的患者，CRP减少。
207.根据权利要求201-206中任一项所述的方法，其中所述患者先前接受过或仍在接受甲氨蝶呤。
208.根据权利要求201-207中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少90%同一性。
209.根据权利要求201-207中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少95%同一性。
210.根据权利要求201-207中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少98%同一性。
211.根据权利要求201-207中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有包含在SEQ ID NO:19或20中的可变重链和轻链序列。
212.一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法是通过对有相应需要的患者静脉或皮下施用与Ab1具有相同表位特异性的抗IL-6抗体，静脉施用的的剂量为约(+/-20%)80、160或320mg。
213.根据权利要求212所述的方法，其中每8周或2个月对所述患者施用所述剂量。
214.根据权利要求212所述的方法，其中所述剂量至少施用两次。
215.根据权利要求212所述的方法，其中第一次剂量在第一天，第二次剂量在第八周(第0天之后的第八周)。
216.根据权利要求212所述的方法，其改善了以下至少一项：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照静脉制剂的患者，CRP减少。
217.根据权利要求212所述的方法，其中所述静脉施用导致疾病的改善，由以下至少一项表现：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照静脉制剂的患者，CRP减少。
218.根据权利要求217所述的方法，其中所述皮下施用导致疾病的长期改善(在抗体施用后至少4、6、8、10、12、14或16周后观察到)，由以下至少一项表现：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照皮下制剂的患者，CRP减少。
219.根据权利要求212-218中任一项所述的方法，其中所述患者先前接受过或仍在接受甲氨蝶呤。
220.根据权利要求212-218中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少90%同一性。
221.根据权利要求212-218中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与以引用方式并入本文的申请的SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少95%同一性。
222.根据权利要求212-218中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少98%同一性。
223.根据权利要求212-218中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体含有包含在SEQ ID NO:19或20中的可变重链和轻链序列。
224.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗IL-6抗体包含在经配制而用于皮下或静脉注射的组合物中。
225.一种用于治疗的组合物，其包含对于有相应需要的患者，有效皮下剂量的与Ab1具有相同表位特异性的抗IL-6抗体或与Ab1竞争结合IL-6的抗体。
226.根据权利要求225所述的组合物，其中所述皮下剂量为至少约50或100mg。
227.根据权利要求225所述的组合物，其中所述皮下施用的功效通过以下至少一项确定：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照皮下制剂的患者，CRP减少。
228.根据权利要求225所述的组合物，其中皮下施用导致疾病的改善，由以下至少一项表现：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照皮下制剂的患者，CRP减少。
229.根据权利要求225所述的组合物，其中所述皮下施用导致疾病的长期改善(在抗体施用后至少4、6、8、10、12、14或16周后观察到)，由以下至少一项表现：(i)改善的DAS-28分数；(ii)改善的EULAR分数；(iii)改善的LDAS分数；(iv)改善的ACR分数；(v)血清白蛋白的增加；(vi)相对于没有用所述抗体治疗的患者或接受安慰剂或对照皮下制剂的患者，CRP减少。
230.根据权利要求225-229中任一项所述的组合物，其还包含甲氨蝶呤。
231.根据权利要求225-230中任一项所述的组合物，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与以引用方式并入本文的申请的SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少90%同一性。
232.根据权利要求225-230中任一项所述的组合物，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与SEQ ID NO:18或19和SEQID NO:20中含有的可变重链和轻链序列具有至少95%同一性。
233.根据权利要求225-230中任一项所述的组合物，其中所述抗IL-6抗体含有的可变重链和轻链序列与以引用方式并入本文的申请的SEQ ID NO:19或20中含有的可变重链和轻链序列具有至少98%同一性。
234.根据权利要求225-230中任一项所述的组合物，其中所述抗IL-6抗体含有包含在SEQ ID NO:19或20中的可变重链和轻链序列。
235.一种预防或治疗与IL-6相关的疾病或病症或可以通过施用IL-6拮抗剂治疗的疾病或病症的方法，所述方法包括施用根据权利要求225-230中任一项所述的组合物。
236.根据权利要求235所述的方法，其中所述疾病是类风湿性关节炎。
237.根据权利要求235所述的方法，其中所述疾病或病症选自由以下组成的组：发热、恶病质、虚弱、癌症、血栓形成和低白蛋白血症。
238.根据权利要求235所述的方法，其中所述疾病或病症选自由以下组成的组：全身疲劳、运动性疲劳、癌症相关疲劳、炎症疾病相关疲劳、慢性疲劳综合征、癌症相关恶病质、心脏相关恶病质、呼吸相关恶病质、肾相关恶病质、年龄相关恶病质、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、全身性幼年特发型关节炎、银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、炎性肠病(IBD)、风湿性多肌炎、巨细胞动脉炎、自身免疫血管炎、移植物抗宿主疾病(GVHD)、Sjogren综合征、成人Still疾病、类风湿性关节炎、全身性幼年特发型关节炎、骨关节炎、骨质疏松、骨的佩吉特疾病、骨关节炎、多发性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、前列腺癌、白血病、肾细胞癌、多发性卡斯特莱曼病、卵巢癌、癌症化疗中的耐药性、癌症化疗毒性、缺血性心脏病、粥样硬化、肥胖、糖尿病、哮喘、多发性硬化、阿尔茨海默病、脑血管疾病、发热、急性期应答、过敏、贫血症、炎症贫血症(慢性疾病的贫血症)、高血压、抑郁、与慢性疾病相关的抑郁、血栓形成、血小板增多症、急性心力衰竭、代谢综合征、流产、肥胖、慢性前列腺炎、血管球性肾炎、盆腔炎症性疾病、再灌注损伤、移植排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、禽流感、天花、流行性感冒、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、重症急性呼吸系统综合征(SARS)、败血症和全身炎症反应综合征(SIRS)。
239.一种使用根据本发明的抗IL-6抗体或抗体片段用于预防或减轻接受移植细胞、组织或器官的受试者的移植物抗宿主疾病(GVHD)发作或白血病复发的方法。
240.根据权利要求239所述的方法，其中所述受试者已或将要接受造血干细胞移植(HCT)、骨髓移植(BMT)。
241.根据权利要求239所述的方法，其中所述受试者已或将要接受可能含有树突状细胞的移植细胞、组织或器官。
242.根据权利要求239所述的方法，其中所述受试者已或将要接受可能含有BDCAA4+浆细胞样树突状细胞的移植细胞、组织或器官。
243.根据权利要求242所述的方法，其中所述移植细胞、组织或器官包括胰腺、肝脏或皮肤细胞。
244.一种预处理准备用于移植的细胞、组织或器官以便降低GVHD或白血病风险的方法，所述方法包括使所述细胞、组织或器官与IL-6拮抗剂体外接触以便减少IL-6的表达。
245.根据权利要求244所述的方法，其中也使所述细胞、组织或器官与IL-10拮抗剂接触。
246.一种降低已或将要接受移植细胞、组织或器官，尤其是可能含有树突状细胞的移植细胞、组织或器官的白血病受试者的白血病复发风险的方法，所述方法是通过在移植之前、同时或之后施用足以预防或降低白血病复发风险的量的至少一种根据本发明的抗IL-6抗体或抗体片段。
247.根据权利要求246所述的方法，其中所述白血病包括慢性白血病和急性白血病。
248.根据权利要求246所述的方法，其中所述白血病包括慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、毛细胞白血病、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)和大颗粒淋巴细胞白血病。
249.一种包括施用至少一种化疗剂和/或放射的癌症治疗方案，其中所述化疗剂或放射针对所述癌症的功效通过进一步施用选自以下的抗IL-6抗体或抗体片段肿瘤而提高：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35、Ab36和其嵌合或人源化变体及前述任一者的IL-6结合片段。
250.一种治疗或预防由于化疗或放疗导致的有风险患粘膜炎患者的粘膜炎的方法，所述方法是通过施用可有效治疗或预防粘膜炎发作的量的根据本发明的抗IL-6抗体。
251.根据权利要求250所述的方法，其中所述粘膜炎是口腔或胃肠道粘膜炎。
252.根据权利要求250所述的方法，其中所治疗的所述患者具有一个或多个口腔粘膜炎症状。
253.根据权利要求250所述的方法，其中所治疗的所述患者具有一个或多个胃肠道粘膜炎症状。
254.根据权利要求250所述的方法，其中所述患者具有选自以下的癌症：头颈癌、食管癌、喉癌、肺癌、胃肠道癌症如胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌以及血癌如多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。
255.根据权利要求250所述的方法，其中所述患者已或将要接受自体干细胞或骨髓移植。
256.根据权利要求250所述的方法，其中所述患者具有多发性骨髓瘤。
257.一种加强化疗剂或放射针对患者所治疗癌症的作用的方法，所述方法包括施用根据本发明的抗IL-6抗体或抗体片段，其用量可有效提高另外被施用来治疗所述癌症的所述化疗剂或放疗放射的作用。
258.根据权利要求257所述的方法，其中所述抗IL-6抗体或抗体片段在所述化疗剂或放射施用之前、同时或之后施用。
259.根据权利要求257所述的方法，其中所述化疗剂是EGFR抑制剂。
260.根据权利要求259所述的方法，其中所述EGFR抑制剂选自由以下组成的组：可从ImClone获得的西妥昔单抗(Erbitux)、可从OSI制药获得的厄洛替尼(Tarceva)、可从AstraZeneca获得的吉非替尼(Iressa)、可从Glaxo获得的拉帕替尼(Tykerb)、可从Amgen获得的帕尼单抗(Vectibox)、Pfizer销售的舒尼替尼或索坦(Sutent)(N-(2-二乙氨乙基)-5-[(Z)-(5-氟-2-氧代-1H-吲哚-3-亚基)甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺)、AstraZeneca销售的吉非替尼或N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉-4-基丙氧基)喹唑啉-4-胺和GenMab在临床开发的扎鲁木单抗(Zalutumumab)。
261.根据权利要求259所述的方法，其中在至少一轮的化疗剂或放射后，所述患者的癌症已对所述化疗剂或放疗表现耐药性。
262.根据权利要求259所述的方法，所述方法降低或防止所述治疗的癌症侵袭或转移到体内的其它部位。
263.根据权利要求259所述的方法，所述方法导致所述治疗的癌细胞的凋亡增加。
264.根据权利要求259所述的方法，其中所述治疗的癌症选自晚期癌症和非晚期癌症，其包括：转移癌，如转移性和非转移性肺癌、乳腺癌、头颈癌、(HNSCC)、咽喉癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肛门癌、多形性成胶质细胞瘤、上皮癌、肾细胞癌、急性或慢性骨髓性白血病和其它白血病。
265.根据权利要求264所述的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)或急性骨髓性白血病(AML)。
266.根据权利要求264或265所述的方法，其中所述化疗剂是厄洛替尼或舒尼替尼。
267.根据权利要求265所述的方法，其中在施用所述抗IL-6抗体或抗体片段之前，所述受试者的癌症已对所述化疗剂形成耐药性。
268.根据权利要求259所述的方法，其中在抗IL-6抗体治疗之前实施活检，其表明所述治疗的癌症包含高水平表达IL-6的细胞。
269.根据权利要求259所述的方法，其中在所述治疗之前使用抗IL-6抗体或抗体片段实施体内成像，其揭示在所述治疗癌症部位处增加的IL-6水平。
270.根据权利要求257所述的方法，其中所述患者在治疗前经测定表达升高的IL-6水平。
271.一种鉴定对化疗剂或放射的作用可能有耐药性的癌症的方法，所述方法是通过使用根据本发明的抗体测定IL-6来检测在所述治疗癌症的部位是否存在升高的IL-6水平。
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