CN102580063A - 一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，海参用胃或胰蛋白酶脱除重金属等，再用纯净水反复煮沸脱除盐渍和农药，溶解海参多糖和海参皂苷，得到软化海参，然后软化海参用盐酸和NaOH溶液去除可溶性蛋白等杂质，得到胶原海参，胶原海参用高温，高压均质，得到海参胶原蛋白液。该方法制备简单，生产方便，生产成本较低，海参胶原蛋白液杂质较少，海参胶原蛋白纯度高，得到的海参胶原蛋白液具有抑制黄嘌呤氧化酶的作用，降低血液中尿酸，可以预防和治疗痛风、心脑血管疾病、糖尿病、高血压、肾病等症。

Description

一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法

技术领域

本发明涉及酶抑制剂的生产，具体涉及一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法。

背景技术

嘌呤核苷酸经过代谢，转化为黄嘌呤，最终经过黄嘌呤氧化酶的氧化，转化为尿酸。黄嘌呤氧化酶作为人体内产生尿酸过程中的关键酶，它活性的增强直接导致血尿酸水平的升高，同时它也是治疗高尿酸血症的药物作用的靶点。不少专家学者对9-苯基鸟嘌呤、羟基胡椒酚等的相关抑制XOD的作用进行了研究。可以说抑制黄嘌呤氧化酶的活性是降低尿酸，预防嘌呤代谢异常的关键所在。目前公开的黄嘌呤氧化酶抑制剂多种多样，如花生四烯酸可以作为黄嘌呤氧化酶抑制剂（CN102133214），节杆菌可以生产黄嘌呤氧化酶抑制剂（CN101402922），中药组方提取物作为黄嘌呤氧化酶抑制剂（CN102205083），通过烘干、粉碎、超声提取、过滤、浓缩、干燥得到蔬菜提取物也可以用作黄嘌呤氧化酶抑制剂（CN102106516）。海参含有丰富的胶原蛋白、皂甙和粘多糖，具有提高免疫力，抗肿瘤，降血脂，抗凝血，延缓皮肤衰老，降低高血尿酸的作用。如公布号为CN102138938，名称为一种用于制备高尿酸症的产品组合物的发明申请，就公开了由海参皂苷和/或海参多糖药材的制剂，海参皂苷是通过海参粉碎、乙醇抽提、饱和正丁醇和水萃取获得；海参多糖是通过海参粉碎，加入乙酸钠缓冲液、EDTA、半胱氨酸和木瓜蛋白酶反应，上清用乙醇和三氯乙酸去杂提纯，最后透析得到；海参皂苷和海参多糖都可以降低血液中尿酸，达到预防和治疗高尿酸血症目的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，本方法得到纯度较高，杂质少的海参胶原蛋白液，具有抑制黄嘌呤氧化酶的作用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，由下述步骤组成：

A、将去杂、去内脏后的海参放入重量百分浓度为0.05～0.15%的胃蛋白酶或胰蛋白酶溶液，在温度为45～60℃，pH值6～8条件下浸泡30～60min，浸泡完毕立即用水冲洗干净；胃蛋白酶或胰蛋白酶可以脱除海参中的重金属以及农药，酶解可溶性蛋白，胃蛋白酶或胰蛋白酶的活性都为10-20万国际单位/g 酶蛋白；

B、将上述步骤a后的海参放入盛有纯净水的锅中煮沸后，倒掉沸水，再加入纯净水煮沸后，再倒掉沸水，共反复换纯净水煮沸4～5次，得到软化海参；这样可以更充分除去盐渍和农药，溶解海参多糖和海参皂苷，并海参软化效果好，有利于粉碎； 

C、将上述步骤b后的软化海参先浸入重量百分浓度为1～5%的盐酸，浸泡2～5分钟，取出冲洗干净，再浸入重量百分浓度为1～5%的NaOH溶液，浸泡2～5分钟，取出冲洗干净，得到胶原海参；盐酸和NaOH可以去除可溶性蛋白等杂质，胶原蛋白较纯；

D、将上述步骤c后的胶原海参粉碎成直径为1～2mm的海参颗粒，按重量比1：3～6的比例在海参颗粒加入水，放入均质机，用均质压力0.05～0.1Pa、温度60～120℃条件下，均质30～60min，得到海参胶原蛋白液。

步骤a中为胃蛋白酶溶液，其重量百分浓度为0.1%，浸泡时间为45min。

步骤c中，软化海参先在重量百分浓度为3%的盐酸浸泡3分钟，再在重量百分浓度为3%的NaOH溶液浸泡3分钟。

步骤d中，均质压力为0.075Pa、温度为90℃，均质时间为45min。

该海参胶原蛋白液浓缩后，添加必要的食物或药学上认可的辅剂，可以加工成保健食品，胶囊、颗粒剂或片剂，稀释后也可以加工成口服液。

与现有技术相比，本发明的优点在于：一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，海参用胃或胰蛋白酶脱除重金属、农药、可溶性蛋白等杂质，再用纯净水反复煮沸进一步脱除盐渍和农药，溶解海参多糖和海参皂苷，得到软化海参，然后软化海参用盐酸和NaOH溶液去除可溶性蛋白等杂质，得到胶原海参，胶原海参用高温，高压均质，得到海参胶原蛋白液。该方法制备简单，生产方便，生产成本较低，海参胶原蛋白液杂质较少，海参胶原蛋白纯度高，得到的海参胶原蛋白液具有抑制黄嘌呤氧化酶的作用，降低血液中尿酸，可以预防和治疗痛风、心脑血管疾病、糖尿病、高血压、肾病等症。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，将去杂去内脏后的鲜海参放入重量百分浓度为0.1%的胃蛋白酶溶液（酶活性为10-20万国际单位/g 酶蛋白），在温度为45～60℃，pH值6～8条件下浸泡45min，浸泡完毕立即用水冲洗干净；冲洗干净的海参再放入盛有纯净水的锅中煮沸后倒掉沸水，再加入纯净水煮沸后倒掉沸水，共反复换纯净水煮沸4～5次，得到软化海参；再将软化海参先浸入重量百分浓度为3%的盐酸，浸泡3分钟，取出冲洗干净，再浸入重量百分浓度为3%的NaOH溶液，浸泡3分钟，取出冲洗干净得到胶原海参；将胶原海参粉碎成直径为1～2mm的海参颗粒，按重量比1：3～6的比例在海参颗粒加入水，放入均质机，用压力0.075Pa、温度90℃条件下，均质45min，得到海参胶原蛋白液。

实施例2

与实施例1基本相同，所不同的只是胃蛋白酶溶液由浓度为0.05%胰蛋白酶溶液替代，浸泡时间为60min；软化海参先用浓度为5%盐酸浸泡软化海参2分钟，再用浓度为1%NaOH溶液浸泡软化海参5分钟；海参颗粒均质时压力为0.1Pa，温度为60℃，均质时间为30min。

实施例3

与实施例1基本相同，所不同的只是胃蛋白酶溶液的浓度为0.15%，浸泡时间为30min；软化海参先用浓度为1%盐酸浸泡软化海参5分钟，再用浓度为5%NaOH溶液浸泡软化海参2分钟；海参颗粒均质时压力为0.05Pa，温度为120℃，均质时间为60min。

试验例

SD大鼠60只，雌雄各半，随机平均分成空白组、模型组、给药G1组和给药G2组，空白组清水服用，模型组、给药G1组和给药G2组每天喂以200 mg·kg^-1·d^-1氧嗪酸钾，给药G1组每天同时用10mL·kg^-1·d^-1实施例1的海参胶原蛋白液灌胃，给药G2组每天同时用6mL·kg^-1·d^-1实施例1的海参胶原蛋白液灌胃，上述实施例1的海参胶原蛋白液浓度配为10mg胶原蛋白/ml，实验4周后，腹主动脉取血，血清3000r/min离心，取上层血清，采用全自动生化分析仪（日本日立仪器公司）测定血清中尿酸含量及黄嘌呤氧化酶活性。得到如表1所示的结果。

表1：海参胶原蛋白液对大鼠大鼠血清生化指标影响（P<0.01）

组别	尿酸(μmol/L)	黄嘌呤氧化酶(U/L)
			空白对照组	63.77±10.69	12.44±1.33
模型组	96.79±10.95	14.59±0.82
			给药G1组	62.75±13.86	13.13±0.63
给药G2组	65.25±15.79	13.78±0.75

从表1中可以看出，本发明得到的海参胶原蛋白液可以抑制黄嘌呤氧化酶的活性，降低血液中尿酸含量，黄嘌呤氧化酶比模型组少，尿酸比模型组低得多，接近正常的空白对照组。从而预防和治疗痛风、心脑血管疾病、糖尿病、高血压、肾病等症。同理，实施例2、3海参胶原蛋白液都有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，降低血液中尿酸含量作用，在此不一一列举。

Claims (4)

1.一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，其特征在于步骤如下：

a、将去杂、去内脏后的海参放入重量百分浓度为0.05～0.15%的胃蛋白酶或胰蛋白酶溶液中，在温度为45～60℃，pH值6～8条件下浸泡30～60min，浸泡完毕立即用水冲洗干净；

b、将上述步骤a后的海参放入盛有纯净水的锅中煮沸后，倒掉沸水，再加入纯净水煮沸后，再倒掉沸水，共反复换纯净水煮沸4～5次，得到软化海参； 

c、将上述步骤b后的软化海参先浸入重量百分浓度为1～5%的盐酸，浸泡2～5分钟，取出冲洗干净，再浸入重量百分浓度为1～5%的NaOH溶液，浸泡2～5分钟，取出冲洗干净，得到胶原海参；

d、将上述步骤c后的胶原海参粉碎成直径为1～2mm的海参颗粒，按重量比1：3～6的比例在海参颗粒加入水，放入均质机，在均质压力0.05～0.1Pa、温度60～120℃条件下，均质30～60min，得到海参胶原蛋白液。

2.如权利要求1所述的一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，其特征在于步骤a中为胃蛋白酶溶液，其重量百分浓度为0.1%，浸泡时间为45min。

3.如权利要求1所述的一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，其特征在于步骤c中，软化海参先在重量百分浓度为3%的盐酸浸泡3分钟，再在重量百分浓度为3%的NaOH溶液浸泡3分钟。

4.如权利要求1所述的一种黄嘌呤氧化酶抑制剂的制备方法，其特征在于步骤d中，均质压力为0.075Pa、温度为90℃，均质时间为45min。