CN102573475A

CN102573475A - 神经激肽-1拮抗剂的静脉内制剂

Info

Publication number: CN102573475A
Application number: CN2010800469052A
Authority: CN
Inventors: J·万; P·古普塔; D·蒙泰思; S·巴塔查亚
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp; Opko Health Inc
Priority date: 2009-08-14
Filing date: 2010-08-12
Publication date: 2012-07-11
Anticipated expiration: 2030-08-12
Also published as: CA2770403A1; MX2012001872A; EP2464230A4; CA2770403C; JP2016041734A; SG10201407538WA; RU2642234C2; US20110038925A1; EP2464230B1; MX336071B; AU2010282483B2; TWI498329B; JP6308991B2; KR101834577B1; JP5860399B2; EP2464230A1; SG178403A1; WO2011019911A1; JP2013501806A; IL217942A0

Abstract

本文描述了用于静脉内给药的药用组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药。本文还描述了制备该药用组合物的方法和用该药用组合物治疗恶心和/或呕吐的方法。

Description

神经激肽-1拮抗剂的静脉内制剂

发明领域

本发明涉及用于静脉内给药的神经激肽-1拮抗剂及其前药的药用组合物、该药用组合物的制备及其用途。

发明背景

(5S，8S)-8-[{(1R)-1-(3，5-双-(三氟甲基)苯基)-乙氧基}-甲基]-8-苯基-1，7-二氮杂螺[4.5]癸-2-酮(式I化合物；在本文也称为化合物1)及其盐已描述于美国专利号7,049,320(′320专利)，2006年5月23日发行。化合物1的合成方法具体举例于′320专利的实施例72a(参见′320专利43栏55行至45栏20行；75栏55行至80栏21行；90栏35至63行；和98栏1行至99栏24行，其通过引用结合到本文中。还参见WO2008/11833，实施例1-6，其通过引用结合到本文中)。WO2005/063243公开了包含NK-1拮抗剂的某些药用组合物。其中描述的制剂需要其中通过至少一个丁基醚间隔基将大约1-7个磺酸钠基团与亲脂空穴分隔的聚阴离子β-环糊精衍生物，即Captisol

。其中没有提到将溶血减到最少的静脉内注射(iv)制剂。此外，式I化合物的各种盐形式已描述于例如美国专利公开2007/0244142，其也通过引用结合。

将式I化合物分类为速激肽化合物，是神经肽神经激肽-1(NK-1)受体的拮抗剂。式I化合物可采用游离碱形式或药学上可接受的盐形式。游离碱或盐可采用非晶态形式或者本文所用药学上可接受的盐可采用结晶形式或者结晶水合物或溶剂合物形式。在溶液中且根据此类溶液的pH，式I化合物可采用混合游离胺/盐形式。式I化合物的前药也可用于适合胃肠外给药的制剂。适合用于本文的是其中式I化合物游离胺(或两个胺)的氢已被选自-Y的基团置换的前药及其盐，其中Y选自-P(O)(OH)₂、-S(O)_n1R¹、-C(O)(C_1-6烷基)X、-C(O)(C_1-6烷基)(芳基)、-C(O)OR⁴；X选自-NR²R³、-P(O)(OH)₂或-S(O)_n1R¹；R¹是H或C_1-6烷基；R²是H或C_1-6烷基；R³是H或C_1-6烷基；R⁴是H或C_1-6烷基；n1是0-4。前药离子化形式的合适阳离子或双阳离子包括金属盐或包括葡甲胺盐等(N-甲基D-葡糖胺)的有机胺阳离子。此类前药可用于合适的液体制剂(包括或不包括所述胃肠外递药载体)中治疗需要其治疗的患者。在胃肠外给予患者后，此类前药转化为药物(或其盐)的非前药形式。此类前药可采用非晶态形式或采用结晶和/或结晶溶剂合物/水合物形式。

NK-1受体拮抗剂已显示是有用的治疗剂，例如治疗疼痛、炎症、偏头痛、恶心、呕吐(emesis，vomiting)和伤害感受。

发明概述

本发明广泛涉及适合静脉内给予需要其治疗的患者的制剂，其中所述制剂包含式I化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物和载体，所述载体选自水溶性有机溶剂、非离子表面活性剂、水不溶性脂质、有机脂质/半固体和磷脂。水溶性有机溶剂可选自例如聚乙二醇300、聚乙二醇400、乙醇、丙二醇、甘油、N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺和二甲基亚砜。非离子表面活性剂可选自CremophorEL、Cremophor RH 40、Cremophor RH 60、d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯、聚山梨醇酯80、Solutol HS 15、单油酸脱水山梨醇酯、泊洛沙姆407、Labrifil M-1944CS、Labrafil M-2125CS、Labrasol、Gellucire44/14、Softigen 767，和PEG 300、400或1750的单-和二-脂肪酸酯。水不溶性脂质选自蓖麻油、玉米油、棉籽油、橄榄油、花生油、薄荷油、红花油、芝麻油、大豆油、氢化植物油、氢化大豆油，和椰子油和棕榈籽油的中链甘油三酯。

有机液体和半固体可选自蜂蜡、d-α-生育酚、油酸和中链甘油单酯和甘油二酯。磷脂选自卵磷脂、氢化大豆磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、L-α-二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和L-α-二肉豆蔻酰磷脂酰甘油等，如本文公开。制备制剂以提供足够的溶解度和化学稳定性，将化学稳定性定义为在特定贮存条件下经过1年(优选2年)降解＜5-10％，这根据具体制剂、位置等变化。

优选制剂可用作静脉内制剂。按照需要或处方，还可将制剂广泛用作适合通过本领域已知的方式包括静脉内(IV)、肌内(IM)或皮下(SC)递药的胃肠外制剂。使用的前药可采用口服形式或包含水性/盐水递药系统的胃肠外制剂，其包括或不包括上文提到的任选的递药载体。

本发明描述并特别根据权利要求用于治疗恶心和/或呕吐的化合物1及其药学上可接受的盐的药用组合物和制剂。用于配制本文提到的包括静脉注射制剂在内的组合物的优选化合物1形式是作为结晶一水合物盐酸盐。研发要求的制剂需要如下文和实施例中描述的实质性实验和努力，以克服低药物溶解度的问题，特别是溶血(红细胞改变、溶出或破坏，导致血液在尿中渗漏)的问题，这据信是由通过推注途径静脉内给予实验哺乳动物时某种化合物1形式的暂时性、局部游离浓度引起。在给予常规口服剂型化合物1后不发生溶血。在大多数情况下，某些制剂当口服或非常缓慢给予哺乳动物时也不发生溶血，但在缓慢输注和/或推注给药期间发生。

在研发用于静脉内给药的化合物1制剂中最初遇到的困难是化合物1在7.4的生理pH具有低溶解度(＜4mcg/ml)，因此需要提高溶解度以在体内达到治疗血浆浓度水平和在100mg预期剂量。此外，期望增加药物浓度和制剂中的剂量，因为这将起到允许减少给予患者的输注体积的作用。

为了解决化合物1在生理pH溶解度低的问题，进行研究以查明何种溶剂系统将提高化合物1的溶解度。Captisol

(β-环糊精衍生物，在本文也称为Captisol)和含有丙二醇和乙醇的共溶剂基制剂明显提高化合物1的溶解度。但是，共溶剂制剂在静脉内给药后意外地引起溶血。通过改变Captisol的浓度、体积、给药速率或者加入缓冲剂，或者利用乙醇、丙二醇和聚乙二醇400的各种组合，以减少或最小化观察到静脉内给予化合物1的Captisol制剂后的溶血发生率其它尝试有时是成功的。例如，将Captisol制剂以10mg/kg和5mg/kg剂量和10ml/kg剂量体积(剂量浓度分别为1mg/mL和0.5mg/mL)用15分钟输注给予大鼠得到低溶血发生率(1/5)。此外，将Captisol制剂以10mg/kg剂量和5ml/kg剂量体积(剂量浓度2mg/ml)推注给药引起2/5大鼠中溶血。以较低(如与1mg/ml和0.5mg/ml输注浓度可相比的)浓度推注给予Captisol可导致甚至更少溶血。假设在注射部位化合物1暂时性局部高游离浓度可能是溶血的主要原因。

为了测试以上假设，通过静脉内给予(缓慢手动推注1-2分钟)含有聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(macrogol 15-hydroxystearate，SolutolHS15，本文也称为Solutol)(10mg/mL药物，22％Solutol HS15，20mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0)的胶束制剂，以各种时间间隔和以不同剂量(10mg/kg；20mg/kg；和30mg/kg)给药后测试溶血发生率，在大鼠中进行研究。观察到与15分钟给药期间相比给药后30-60分钟大鼠溶血的发生率明显下降。该结果结合化合物1具备高口服利用度的事实，得出结论为化合物1的局部高游离浓度是静脉内给药后前30分钟内发生暂时性溶血的原因。

为了最小化/减少化合物1伴随的溶血，探索一种策略，该策略基于缓慢给药速率将导致较低溶血发生率的假设。这包括通过15分钟缓慢输注以及通过推注给药方式将化合物1的胶束(7.5％Solutol，25mg/kg；5ml/kg；5mg/ml))溶液给予大鼠的实验。当将胶束制剂通过推注给药方式给药时观察到大鼠的高溶血发生率(5/5)，但经输注途径给药时没有观察到溶血(0/10)。

因此，将Solutol在化合物1胶束制剂中的浓度从22％降低至例如7.5％，和将制剂通过缓慢输注给予大鼠降低溶血发生率。但是，推注途径给予7.5％Solutol制剂(如低浓度的Solutol)时，观察到如上文提到的溶血。因此本文提到的一些要求的制剂适合缓慢输注但不适合推注给药。如下文进一步描述的其它制剂既适合缓慢输注也适合推注给药。

对Solutol制剂进行进一步实验以评价加入各种类型的油、掺入油的百分数和Solutol制剂的pH范围对大鼠发生溶血的影响。据信将油加入胶束溶液以形成微乳液，即载油胶束，将另外起到延缓化合物1从疏水核心释放和防止化合物1迅速分配/转移至红细胞的作用。

本发明涉及胃肠外制剂，其包含a)式I化合物或其药学上可接受的盐，

和b)药学上可接受的载体。

术语“药学上可接受的载体”指提高式I化合物或其药学上可接受的盐的溶解度以便于将治疗浓度的此类化合物或盐胃肠外递送至靶NK-1受体部位的任何合适组分。载体选自克列莫佛(cremophor)、乳液、微乳液、胶束、带负电荷胶束、载油胶束、英脱利匹特(intralipid)、HSA、脂质体和带负电荷和带正电荷氨基酸等，如本文另外描述。药学上可接受的载体不包括β-环糊精制剂。在脂质体、乳液、胶束和载油胶束的情况下，据信此类载体将使药物保持在亲脂核心内以增强药物保留，同时还将药物屏蔽在核心内。人血清白蛋白基制剂涉及HSA与化合物1的强力结合，其使游离药物进入红细胞内的分配减到最少。此类制剂可与Solutol、Myglyol和维生素E共配制。带负电荷氨基酸将与保留正电荷的化合物1的部分络合和中和，因此防止化合物1分配进入红细胞内。带正电荷氨基酸将与化合物1带负电荷的部分络合并将其中和，减少化合物对红细胞的暴露。带负电荷胶束将排斥带负电荷红细胞，防止化合物1与红细胞接触。

术语“胶束制剂”指胶束形式的制剂，其由在药学上可接受的递药系统比如水、盐水、葡萄糖水等中形成或可形成胶束的任何组分衍生或制备。

术语“乳液制剂”指制剂采用乳液形式，其用当存在于和/或结合于药学上可接受的递药系统比如水、盐水、葡萄糖水等时形成或可形成乳液的任何组分衍生或制备。避免在推注或缓慢输注给药后任何溶血效应的优选乳液制剂具有约10％或更小的含油量。药物浓度可从约1mg/mL-约30mg/mL变化，静脉内递药优选较小体积和较高浓度。可制备药用组合物以增加或提高NK-1拮抗剂的溶解度，还可明显稀释以避免任何可能的溶血结果，但一些稀释体积对于给予需要其治疗的患者而言可能不实用。

本发明的乳液制剂或胶束制剂另外包含选自式I或Ia化合物和/或其药学上可接受的盐、水合物、多晶型或物理形式的活性药用成分。此类药物负载乳液或胶束制剂可另外含有便于递药和/或可用于防止或减轻因素比如溶血的赋形剂。此类另外的赋形剂因此可包括例如油或其它提高或进一步提高溶解度同时减轻任何潜在溶血效应的组分。

此类乳液制剂或胶束制剂可进一步加工以形成更稳定的物理形式或溶液，并可进一步加工以例如提供无菌的胃肠外溶液。

本发明还涉及包含采用纳米微粒形式的式I化合物或其药学上可接受的盐的胃肠外制剂。可将式I化合物或其盐的纳米微粒掺入溶液中以通过静脉内方式递送此类纳米微粒。化合物1及其药学上可接受的盐的纳米微粒可进一步包括药学上可接受的载体。据信此类纳米微粒(约200nm)的缓慢溶出将导致较少溶血，因为在增溶部分中溶解的药物较少。

本发明还涉及将式I化合物及其药学上可接受的盐递送至患者的方法，其包含(a)将式I化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体组合以形成静脉内制剂(b)将胃肠外制剂递送至需要其治疗的患者。

在发明人为了解决上述与含Solutol制剂有关的问题进行大量试验和努力之后，已发现将中链和长链油二者以特定比率加入Solutol中得到增溶、稳定的(化学上和物理上)的化合物1微乳液制剂，当将该制剂静脉内给予实验哺乳动物时产生极少溶血。

一方面，本发明涉及适合胃肠外给药的药用组合物，其包含：

a)式I化合物或其药学上可接受的盐

b)选自载油胶束或微乳液的增溶剂。

本发明优选实施方案包含药用静脉内制剂，其包含：

a)式I化合物或其药学上可接受的盐

和

b)乳化剂。

本发明还包含：包含式I化合物或其药学上可接受的盐和人血清白蛋白(HSA)的静脉内制剂。

本发明还包含：包含式I化合物或其药学上可接受的盐的静脉内制剂，其中化合物或其盐采用纳米微粒形式。

本发明另外包含：包含式I化合物或其药学上可接受的盐和选自克列莫佛的递药载体的静脉内制剂。

本发明进一步包含：包含式I化合物或其药学上可接受的盐和选自胶束的递药载体的静脉内制剂。

本发明进一步包含，包含式I化合物或其药学上可接受的盐和选自脂质体的递药载体的静脉内制剂。

本发明优选涉及适合推注和输注给药二者的静脉内乳液制剂。

本发明优选实施方案包含：包含式I化合物或其药学上可接受的盐和至少一种乳化剂的静脉内制剂，其中形成乳液并进行微流化以形成具有小于500nm的中位直径和/或约600nm或更小的D₉₀的液滴。

本发明进一步涉及：包含式I化合物或其药学上可接受的盐和带负电荷或带正电荷氨基酸的静脉内制剂。

本发明进一步包含：包含式I化合物或其药学上可接受的盐的静脉内制剂，其为冻干的。

本发明进一步包含：包含式I化合物或其药学上可接受的盐的静脉内制剂，其采用粉末形式。将粉末复原或加入液体中以形成包含式I化合物或其盐的液体静脉内制剂，将其给予需要其治疗的患者。可将乳化剂比如聚山梨醇酯80(吐温80)等以及其它无活性成分比如pH调节剂、防腐剂(EDTA)等加入该制剂内。

在上述各实施方案中，加入制剂内的式I化合物或其盐的优选形式是作为固体结晶一水合物盐酸盐。

在上述各实施方案中，式I化合物或其盐的备选形式选自式I化合物的前药。此类前药可通过任何递药方式给药，包括经口途径或通过静脉内给药。

此类前药可选自式Ia化合物及其药学上可接受的盐：

其中Z和Y独立选自H、-PO(OH)O^-M⁺、-PO(O^-)₂2M⁺、-PO(O^-)₂D²⁺、-[C(R¹)(R²)]_n-PO(OH)O^-M⁺、-[C(R¹)(R²)]_n-PO(O^-)₂2M⁺、-[C(R¹)(R²)]_n-PO(O^-)₂D²⁺、-C(O)[C(R¹)(R²)]_m-OPO(O^-)₂2M⁺、-C(O)[C(R¹)(R²)]_oNR¹R²、-C(O)[C(R¹)(R²)]_PCO_2-M⁺、-SO_3-M⁺、-[C(R¹)(R²)]_qSO_3-M⁺和-[C(R¹)(R²)]_rOC(O)OR³，其中R³选自

前提是Z和Y不能都是H；M⁺选自单价阳离子；D⁺选自二价阳离子；R¹和R²独立选自H或C_1-6烷基；n是1-4；m、o和p独立选自0-4；R选自C_1-6烷基。

在前药的优选实施方案中，Z选自H且Y选自上文显示关于Z和Y的除H外的任何基团。在更优选的实施方案中，此类前药选自：

优选的M⁺盐选自例如铵盐，碱金属盐比如钠，碱土金属盐比如钙和镁，与有机碱比如N-甲基-D-葡糖胺或二环己胺的盐，氨基酸盐比如精氨酸、赖氨酸等。

制备前药是通过使胺或适当保护的胺与活化基团Z-X或Y-X反应，或者通过任何常规方式，以形成式I化合物的前药变体。

本发明的前药具备超过母药的提高的溶解度，因此可用于和适合于静脉内给药。

本发明优选实施方案是药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

b)为总组合物重量约0.50％-约10.0％的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；

c)为总组合物重量约0.10％-约2.5％的中链甘油三酯；

d)为总组合物重量约0.10％-约1.5％的长链甘油三酯；和

e)至少一种缓冲剂，其中在组合物中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯∶中链甘油三酯∶长链甘油三酯的重量比为约5-100∶1-5∶1，其中组合物的pH为约6.5-约8.0。

以上制剂可采用载油胶束或微乳液形式。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含为总组合物重量约0.50％-约7.5％的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；为总组合物重量约0.15％-约1.5％的中链甘油三酯；和为总组合物重量约0.10％-约1.2％的长链甘油三酯。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含约0.88％-约4.84％总组合物重量的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；约0.20％-约1.20％总组合物重量的中链甘油三酯；和约0.10％-约0.75％总组合物重量的长链甘油三酯。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

(a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

(b)约4.4％总组合物重量的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；

(c)约1.1％总组合物重量的至少一种中链甘油三酯；

(d)约0.66％总组合物重量的精炼大豆油；和

(e)磷酸盐缓冲剂，其中组合物的pH为约7.5。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

(a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

(b)约0.88％总组合物重量的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；

(c)约0.22％总组合物重量的至少一种中链甘油三酯；

(d)约0.12％总组合物重量的精炼大豆油；和

(e)磷酸盐缓冲剂，其中组合物的pH为约7.5。

另一方面，本发明提供制备药用组合物的方法，其包含：

a)加热(i)熔化的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯、(ii)中链甘油三酯和(iii)长链甘油三酯以形成组合物；

b)将水加入组合物内以形成微乳液组合物；

c)将式I化合物

或其药学上可接受的盐加入微乳液组合物内；和

d)加入至少一种缓冲剂并将pH调节为约6.5-约8.0以形成药用组合物，其中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯的含量占总药用组合物重量约0.50％-约10.0％，中链甘油三酯的含量占总药用组合物重量约0.10％-约2.5％，长链甘油三酯的含量占总药用组合物重量约0.10％-约1.5％，其中在药用组合物中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯∶中链甘油三酯∶长链甘油三酯的重量比为约5-100∶1-5∶1。

另一方面，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)约0.88％-约5.0％总组合物重量的聚乙二醇化羟基硬脂酸酯，其中聚乙二醇化羟基硬脂酸酯基本不含游离聚乙二醇，且其中组合物的pH为约6.5-约8。

另一方面，本发明提供在需要治疗的患者中治疗恶心和/或呕吐的方法，其包含通过输注静脉内给予患者有效量的本发明药用组合物，其中将患者的溶血减到最少。

另一方面，本发明提供在静脉内给予式I化合物或其药学上可接受的盐后将患者的溶血减到最少的方法，

方法包含通过输注静脉内给予患者有效量的本发明药用组合物。

在另一个实施方案中，所述静脉内制剂可与其它止吐药和止恶心药、抗炎剂或类固醇剂(如地塞米松)组合和与化疗剂组合使用。可根据医生提供的处方和方案将所述静脉内制剂给予患者。此类其它药物包括昂丹司琼及其它已知的5HT₃拮抗剂。因此，注射用式I化合物及其盐可与其它止吐剂一起用于预防高度致吐性癌症化疗(包括例如用顺铂治疗)的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐。注射用式I化合物及其盐还可与其它止吐剂一起用于预防中度致吐性癌症化疗的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐。除了用顺铂治疗以外，在这种组合给药方案中给予的其它抗癌剂包括依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、长春瑞滨、紫杉醇、环磷酰胺、多柔比星、多西紫杉醇，还可包括替莫唑胺。用式I化合物治疗应当在此类治疗第1天在化疗治疗前30分钟开始。静脉内注射(i.v.)制剂可通过用15分钟缓慢输注或者推注注射给药，取决于制剂。

在另一个实施方案中，式I化合物及其药学上可接受的盐的静脉内注射制剂可单独或与其它剂组合给药，用于治疗和/或预防术后恶心和呕吐。此类组合剂包括其它止吐治疗剂比如昂丹司琼及其它5HT₃拮抗剂。

附图简述

图1.化合物1静脉内微乳液制剂的制备(概略流程图)。

图2.化合物1在20％Solutol制剂(菱形)和16％Captisol制剂(方形)中作为pH函数的平衡溶解度。

图3.化合物1乳液制剂制备方法的概略图。

图4.未加工制剂BOL15SO和用H30Z相互作用室以2000psi经过3次通行(pass)的加工制剂的粒度分布。

图5.未加工制剂INFWSO和用H30Z相互作用室以2000psi和用H20Y相互作用室以4,100psi经过3次通行的加工制剂的粒度分布。

图6.未加工制剂BOL10WS和包括用H30Z相互作用室以2000psi和4,100psi经过2次和3次通行的加工制剂的粒度分布。

图7.在微流化期间制剂BOL15SO和INFWSO的光学显微镜图像。

图8.在微流化期间制剂BOL10WSO的光学显微镜图像。

图9.在微流化期间制剂INFSO的光学显微镜图像。

图10.在微流化期间制剂BOL10SO的光学显微镜图像。

图11.灭菌后INFWSO的PSD曲线。

图12.灭菌后BOL10WSO的PSD曲线。

图13.以各种剂量通过静脉内给药给予的化合物1的ng/ml血液水平。

发明详述

如用于本文，除非另外指出，应理解以下术语具有以下含义：

术语“胶束”或“胶束的”用于本文指两亲分子(表面活性剂)的胶态凝聚物，其以称为临界胶束浓度的明确定义浓度或高于该浓度存在。聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(Solutol

HS 15，购自BASFLudvigshafen，Germany)是具有0.005％-0.02％范围内的临界胶束浓度的表面活性剂具体实例。

术语“微乳液”用于本文指油、水和表面活性剂的澄清、稳定和各向同性液体混合物。该术语还指载油胶束。

术语“溶血”用于本文指红细胞的破坏，其导致血红蛋白从红细胞内释放入血浆内。溶血可通过本领域熟知的方法测量，如检测尿中血的Hemastix

试剂条(Bayer Corp.，Elkhart，IN)。根据尿中发现的血红蛋白量，Hemastix

试剂条从黄色变为墨绿色。Hemastix

评分如下：0＝阴性，1＝无溶血痕量，3＝溶血痕量，4＝小量+，5＝中量++，和6＝大量+++。

短语“最少溶血”和“将溶血减到最少(最小化)”用于本文指在给予实验哺乳动物化合物1制剂后，在实验哺乳动物中观察不到溶血，或者在10个实验哺乳动物中不超过2个实验哺乳动物表现痕量水平的溶血，如测量Hemastix

评分为3或小于3。

术语“稳定的”用于本文指化学和物理稳定性二者。

物理稳定性指粒度/液滴大小无显著差异且不显示任何相分离的胶束和微乳液。

化学稳定性用于本文指化合物1的活性效能维持在可允许的范围内(大于90％标记强度)。

术语“有效量”用于本文指在患者(如哺乳动物，比如人或非人灵长类或者伴侣动物比如狗或猫)中预防、改善或减轻恶心和/或呕吐的化合物1或其药学上可接受的盐的量。

术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”用于本文指预防或改善或减轻恶心和/或呕吐。

术语“约”用于本文将由本领域技术人员理解为指具体界限加或减至多10％。

本发明涉及：用于静脉内给药的微乳液形式药用组合物，其包含式I化合物(在本文也称为化合物1)，

制备药用组合物的方法和利用药用组合物治疗恶心和/或呕吐的方法。

与在实验哺乳动物中测试引起溶血的化合物1共溶剂制剂相反，通过本发明的药用组合物成功地解决实验哺乳动物中因静脉内给予化合物1引起的溶血问题，所述药用组合物包含约0.50％-约10.0％Solutol、约0.10％-约2.5％中链甘油三酯和约0.10％-约1.5％长链甘油三酯，其中在组合物中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯∶中链甘油三酯∶长链甘油三酯的重量比为约5-100∶1-5∶1。尽管不受溶剂系统任何特定作用机制的约束，认为药用组合物的静脉内给药是通过降低化合物1从胶束核心至红细胞的转移速率来显著减少溶血。优选浓度为1-15mg/mL。

因静脉内给予化合物1引起的溶血问题，还用单独包含特定浓度范围的聚乙二醇化羟基硬脂酸酯的制剂解决，其中聚乙二醇化羟基硬脂酸酯基本不含游离聚乙二醇。

一方面，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

b)约0.50％-约10.0％总组合物重量的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(Solutol

HS 15)；

c)约0.1％-约2.5％总组合物重量的中链甘油三酯；

d)约0.10％-约1.5％总组合物重量的长链甘油三酯；和

(e)至少一种缓冲剂，其中在组合物中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯∶中链甘油三酯∶长链甘油三酯的重量比为约5-100∶1-5∶1，其中组合物的pH为约6.5-约8.0。

当通过输注静脉内给予患者时，令人惊奇地是本发明的组合物伴随最少溶血。

式I化合物可与有机和无机酸形成药学上可接受的盐。适合形成盐的酸实例是盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸及其它本领域技术人员熟知的矿物酸和羧酸。在一些实施方案中，式I化合物作为盐酸盐存在。制备盐可通过使游离碱形式与足量期望的酸接触，以常规方式制备盐。

在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐在药用组合物中的浓度为1mg/ml-15mg/ml、2.0mg/ml-10mg/ml或2.0mg/ml总组合物。

聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(Solutol

HS 15，购自BASFLudvigshafen，Germany)是具有0.005％-0.02％范围内的临界胶束浓度的表面活性剂。

尽管不打算受任何特定作用机制的限制，发明人相信高于其临界胶束浓度的浓度导致胶束的形成，胶束提供疏水环境以包裹化合物1和减少化合物1暴露于红细胞。Solutol

HS 15在药用组合物中的量为总组合物重量的约0.50％-约10.0％。

合适的中链甘油三酯包括但不限于辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯，和作为丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯-MIGLYOL

812或MIGLYOL

810由SASOL North America销售的辛酸/癸酸甘油三酯；由AbitechCorp作为CAPTEX 300/CAPTEX 850

销售的来自椰子油的甘油三酯；由Abitech Corp作为CAPTEX 355

销售的辛酸/辛酸甘油三酯；由Abitech Corp作为CAPTEX 350

销售的辛酸/辛酸/月桂酸甘油三酯；由Abitech Corp作为CAPTEX 810

销售的辛酸/辛酸/亚油酸甘油三酯；由Abitech Corp作为CAPTEX SBE

销售的辛酸/辛酸/硬脂酸甘油三酯及其两种或多种的组合。中链甘油三酯在药用组合物中的量为总组合物重量的约0.1％-约2.5％。

合适的长链甘油三酯和/或长链脂肪酸包括但不限于，由Croda作为SUPER-REFINED SOYBEAN OIL USP

销售的大豆油；由Croda作为SUPER-REFINED CORN OIL NF

销售的玉米油；由Croda作为SUPER-REFINED COTTONSEED OIL NF

销售的棉籽油；由Croda作为SUPER-REFINED OLIVE OIL NF

销售的橄榄油；由Croda作为SUPER-REFINED PEANUT OIL BF

销售的花生油；由Croda作为SUPER-REFINED SAFFLOWER USP

销售的红花油；由Croda作为SUPER-REFINED SESAME NF

销售的芝麻油；由Croda作为SUPER-REFINED SHARK LIVER销售的鲨鱼肝油；由Croda作为Crodamol EO

销售的油酸乙酯，蓖麻油，由Croda作为Oleic acid销售的单不饱和ω-9脂肪酸及其两种或多种的组合。长链甘油三酯或长链脂肪酸或两者在药用组合物中的量为总组合物重量的约0.10％-约1.5％。

在一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含约0.50％-约7.5％总组合物重量的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；约0.15％-约1.5％总组合物重量的中链甘油三酯；和约0.10％-约1.2％总组合物重量的长链甘油三酯。

在另一个实施方案中，中链甘油三酯是由SASOL North America(Houston，Texas)作为丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯-MIGLYOL

810或MIGLYOL

812销售的辛酸/癸酸甘油三酯，长链甘油三酯是超精炼形式的大豆油。

药用组合物还包含至少一种缓冲剂。可包括在药用组合物中的合适缓冲剂的非限制性实例包括5-20mM的以下缓冲剂：磷酸盐缓冲剂(pH 7-8)比如磷酸钠、磷酸钾和磷酸钙缓冲剂，琥珀酸盐缓冲剂(pH4-6)，柠檬酸盐缓冲剂(pH 2-6)，TRIS(pH 7-8)及其混合物。

缓冲剂在药用组合物中的量可取决于缓冲剂的类型和浓度。例如，假定10-20mM磷酸盐缓冲剂用于调节pH 6.5-8.0，可将占总组合物的0.01％-0.5％重量；或约0.05％-0.02％重量或0.4％-0.2％重量的磷酸盐加入组合物内。例如，当利用磷酸钠二碱无水/一碱脱水物系统时，将约0.2％重量的磷酸二氢钠和约0.284％重量的磷酸氢二钠(无水)加入组合物内。

如果需要，可通过碱比如氢氧化钠将本发明组合物的pH调节至约6.5-约8.0的pH。在一些实施方案中，组合物的pH为约7.0-约8.0、约pH 7.5的pH或者7.5的pH。

如果期望，本发明的药用组合物可进一步包含其它赋形剂，如抗氧化剂(防腐剂)、抗微生物剂、螯合剂、白蛋白、张力调节剂、增量剂等。例如，抗微生物剂是BAC(0.1％-0.025％)、苯甲酸(0.1-0.2％)、苄醇(0.0001-1.5％)；抗氧化剂是BHT、BHA(0.0001-0.001％)、组氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、亚硫酸钠/亚硫酸氢钠(0.01-0.2％)和抗坏血酸(0.02-0.2％)；螯合剂是EDTA(0.01-1.0％)、DTPA(二乙烯三胺五乙酸)；白蛋白(0.05-1.2％)；张力调节剂(NaCl，甘露醇(1-10％)，甘油(0.2-2.5％)；增量剂是甘露醇(1-10％)、蔗糖、甘氨酸(0.1％-2.5％)、海藻糖和乳糖(0.1-3.0％)。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

(a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

(b)约4.4％或4.4％总组合物重量的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(SolutolHS 15)；

(c)约1.1％或1.1％总组合物重量的至少一种中链甘油三酯；

(d)约0.66％或0.66％总组合物重量的精炼大豆油；和

(e)磷酸盐缓冲剂，其中组合物的pH为约7.5。

在又一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

(a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

(b)约0.88％或0.88％总组合物重量的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(Solutol

HS 15)；

(c)约0.22％或0.22％总组合物重量的至少一种中链甘油三酯；

(d)约0.12％或0.12％总组合物重量的精炼大豆油；和

(e)磷酸盐缓冲剂，其中组合物的pH为约7.5。

中链甘油三酯的实例如上文描述。

可通过几种消毒技术中的任一种，包括过滤消毒和高压灭菌消毒，将本发明药用组合物消毒。在一个实施方案中，通过过滤法消毒药用组合物，如利用孔径为0.01-约0.45μm.的滤器，如0.22μm.滤器。

适当地，本发明的药用组合物在5℃-40℃温度/75％RH(相对湿度)在化学和物理上稳定1-6个月，通常3个月。

另一方面，本发明提供制备药用组合物的方法，其包含步骤：

a)混合和加热(i)熔化的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，(ii)中链甘油三酯和(iii)长链甘油三酯以形成组合物；

b)将水加入组合物中以形成微乳液组合物；

c)将式I化合物

或其药学上可接受的盐加入微乳液组合物内；和

d)加入至少一种缓冲剂并将pH调节至约6.5-约8以形成药用组合物，其中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯的量占总药用组合物重量的约0.50％-约10.0％，中链甘油三酯的量占总药用组合物重量的约0.10％-约2.5％，和长链甘油三酯的量占总药用组合物重量的约0.10％-约1.5％，其中在药用组合物中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯∶中链甘油三酯∶长链甘油三酯的重量比为约5-100∶1-5∶1。

中链和长链甘油三酯实例和化合物1的浓度如上文描述。

作为本发明制备药用组合物的方法实例，通过将Solutol

HS 15在60℃-65℃温度或者在约65℃温度加热使SolutolHS 15熔化。将熔化的Solutol

HS 15、中链和长链甘油三酯在50℃-65℃或约60℃温度混合约5分钟-约15分钟以形成组合物。然后加入注射用水以形成微乳液组合物，接着加入化合物1以形成药用组合物。然后将磷酸二氢钠/磷酸氢二钠加入药用组合物内。将药用组合物的pH用氢氧化钠调节至例如7.5的pH，将组合物的张力用张力剂氯化钠调节至约290mM。然后加入水至期望的体积，接着用0.22μM滤器过滤消毒组合物(见下文实施例5)。

化合物1的制备方法在′320专利中描述为实施例72a的制备，用市售获得的原料以18个单个步骤进行(见′320专利43栏55行至45栏20行；75栏55行至80栏21行；90栏35行至63行；和98栏1行至99栏24行，其通过引用结合到本文中。还参见WO2008/11833，实施例1-6，其通过引用结合到本文中)。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)约0.88％-约5％总组合物重量的聚乙二醇化羟基硬脂酸酯，其中聚乙二醇化羟基硬脂酸酯基本不含游离聚乙二醇(PEG)，其中组合物的pH为约6.5-约8.0。术语“基本不含”指聚乙二醇化羟基硬脂酸酯的组成含有不超过2％游离PEG。

为了制备基本不含游离PEG的聚乙二醇化羟基硬脂酸酯，可将聚乙二醇化羟基硬脂酸酯如Solutol

HS15中含有的游离PEG通过本领域已知的技术除去，如透析(见下文实施例5，在磷酸盐缓冲盐水中透析的Solutol的制备和表9)。

本发明的药用组合物可用于治疗恶心和/或呕吐。因此，另一方面，本发明提供在需要治疗的患者(如人或非人灵长类比如猴，或者伴侣动物比如狗或猫中)治疗恶心和/或呕吐的方法。方法包含通过输注静脉内给予患者有效量的本发明药用组合物，其中将药用组合物静脉内给药后的溶血减到最少。药用组合物可用于治疗延迟性发作的呕吐比如化疗给药后经历24小时至几天发作的呕吐。见Gonzales等，OncologySpecial Edition，第5卷(2002)，第53-58页。药用组合物还可用于治疗因化疗、放射、运动和酒精(如乙醇)、高剂量口服抗生素、病毒或细菌胃肠炎诱发的急性恶心和/或呕吐。还可将药用组合物共配制以包括至少一种其它止吐剂，如地塞米松或昂丹司琼HCl。这里还可将药用组合物与此类其它止恶心剂和/或止吐剂和/或化疗剂组合提供，如由医生开的处方。

在给药之前可将药用组合物用合适的水性稀释剂比如生理盐水、葡萄糖、葡萄糖过滤水和甘露醇稀释，以获得总组合物重量的约0.88％-约4.4％Solutol

HS 15的任何中间组合物。

用于本发明药用组合物的给药方案根据多种因素考虑选择，包括需要治疗患者的种族、年龄、体重、性别和医疗条件，和患者经历的恶心和/或呕吐的严重度。普通的熟练医生可以很容易确定和开处方化合物1的有效量以预防、改善或减轻恶心和/或呕吐。例如，对于成年人，式I化合物的总日剂量为1mg/kg-9mg/kg患者体重或者1mg/kg-3mg/kg患者体重(假定对于70kg患者的200mg剂量)。

可将药用组合物通过输注15-90分钟、15-60分钟或15-30分钟静脉内给药。在一些制剂中，组合物可通过推注注射给药。

另一方面，本发明提供在静脉内给予式I化合物

或其药学上可接受的盐后，将患者(如哺乳动物，比如人或非人灵长类或者伴侣动物比如狗或猫)的溶血减到最少的方法，包含通过输注静脉内给予患者有效量的本发明药用组合物。

本发明涉及用包含式I化合物或其药学上可接受的盐的静脉内制剂治疗需要其治疗的患者的方法，其中这样的化合物的剂量范围为100-200mg，将制剂作为单次剂量在化疗或放射周期之前给予患者1次或者手术之前或之后给予一次，以治疗CINV(化疗诱发的恶心和呕吐)、PONV(术后恶心和呕吐)或RINV(放射诱发的恶心和呕吐)。

除了上文描述的含Solutol制剂以外，本发明还涉及既适合推注也适合缓慢输注静脉内给药的乳液制剂。可用于此类制剂的化合物包括式I和Ia化合物及其药学上可接受的盐。

配制基于中链和长链甘油三酯并伴随另外的赋形剂比如蛋卵磷脂的胃肠外乳液。当通过推注和输注途径给予哺乳动物(大鼠)时，这些用蛋PC和Lipoid E80S制备的制剂中有些得到清白(clean，即很少或无溶血)的制剂。使优选制剂经历微流化以产生具有较小液滴大小和相对窄粒度分布(低于500nm的中位直径和具有小于约600nm的D₉₀)的乳液。在121℃高压灭菌消毒后此类制剂在物理上也稳定。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)磷脂。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)长链脂肪酸和/或长链甘油三酯。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)中链甘油三酯。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

c)磷脂。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

c)磷脂；和

d)甘油。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

c)磷脂；

d)甘油和

e)乙醇。

在优选实施方案中，基于总组合物重量的油负载(如组分b)的重量百分数为约10％wt/wt。

在另一个实施方案中，本发明提供药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)10％中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

c)1.2％磷脂和

d)2.25％甘油。

在本发明另一个实施方案中，可将有效量的本文所述一种或多种制剂与其它活性成分组合，或者以单独剂量并在给予该另外的活性成分之前或之后(或与其同时)使用，或者以固定组合剂量的与此类其它活性成分组合的NK-1拮抗剂使用。本发明的制剂可与一种或多种选择性血清素再吸收抑制剂(″SSRI″)组合给药以治疗抑郁或焦虑。代表性SSRI包括氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林及其药学上可接受的盐。另一方面，本发明涉及治疗呕吐或延迟性发作的呕吐比如在接受化疗后经历几小时至几天发作的呕吐的方法。本发明iv制剂与另一种止吐剂比如血清素5-HT₃受体拮抗剂、皮质类固醇或取代的苯甲酰胺的组合可用于治疗其它形式的呕吐，包括因化疗、放射、运动和/或酒精(乙醇)诱发的急性呕吐，和术后恶心和呕吐。5-HT₃拮抗剂的实例包括palosetron、多拉司琼、昂丹司琼和格拉司琼或其药学上可接受的盐。合适的皮质类固醇的实例是地塞米松。合适的苯甲酰胺的实例是甲氧氯普胺(metoclopramide)。优选组合包括以上任何两种或者以上任何一种与NK-1 iv制剂(或在制剂中)的组合。

本发明涉及治疗高度致吐性癌症化疗的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，包含组合给予式I化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

本发明涉及治疗中度致吐性癌症化疗的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，包含组合给予式I化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

本发明涉及治疗高度致吐性癌症化疗的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，包含组合给予式Ia化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

本发明涉及治疗中度致吐性癌症化疗的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，包含组合给予式Ia化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

以下列出实施例作为专业人员的指导，并非表示以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1-4描述某些化合物1静脉内制剂的研制或其它关于溶血的研究。实施例5提供本发明化合物1静脉内微乳液(油-负载胶束)制剂的研制的描述。实施例6提供另外的制剂。实施例7描述既适合推注(bolus)也适合缓慢输注iv给药的乳液制剂。实施例8提供前药的实例。

实施例1.化合物1在环糊精-基及其它共溶剂系统中溶解度的评价

通过测定化合物1在这些溶剂系统中的平衡溶解度评价化合物1在16％Captisol

(β-环糊精的磺丁基醚衍生物，购自Cydex Inc.，Overland Park，Kansas)和共溶剂系统丙二醇∶乙醇(PG∶EtOH，40％∶10％)中的溶解度。通过描述于实施例5的高效液相层析(HPLC)法在不同时间点测定化合物1浓度以确定平衡溶解度，其在溶解度随时间推移达到平台(无显著改变)时即达到。用16％Captisol发现化合物1的最佳溶解度(数据未显示)。

实施例2.在大鼠静脉内给予含Captisol

及其它共溶剂系统的NK-1制剂的研究

将16％Captisol

和共溶剂系统PG∶EtOH 40％∶10％静脉内给予大鼠。

用Hemastix试剂条(No.2190，Bayer Corp.，Elkhart IN)评估大鼠尿样品的溶血。用Hemastix

试剂条(No.2190，Bayer Corp.，Elkhart IN.)检测尿中血的存在。Hemastix试剂条检测血红蛋白的过氧化物样活性。根据尿中发现的血红蛋白的量试剂条从黄色变为墨绿色。Hemastix

虽然环糊精和共溶剂制剂成功改善化合物1的溶解度，但在静脉内输注给药后共溶剂制剂意外导致严重溶血(Hemastix

评分为6)。Captisol制剂的15分钟缓慢输注途径导致较低溶血发生率。(表1)。

表1.静脉内给药后Captisol

和共溶剂溶血试验结果

假设在注射部位处暂时性局部高游离浓度的化合物是溶血的主要原因。在大鼠中评价在推注给药期间使用不同浓度、体积、递药速率的Captisol

或加入缓冲剂是否可减少溶血发生率的进一步实验不成功。

实施例3.评价推注给予含22％Solutol的制剂后大鼠溶血发生的研究

然后在雄性和雌性大鼠中进行研究，目的是通过以下方法减少游离化合物1的局部高浓度：1)利用Solutol

HS15(聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，这里也称为Solutol)将化合物1掺入胶束的疏水核，2)经推注途径注射掺在Solutol中的化合物1，和2)以不同时间间隔(15-60分钟)测试溶血的发生(用Hemastix

试剂条)。

结果表明在雄性和雌性大鼠中随时间推移溶血的发生都明显减少(表2)，得出结论是化合物1的局部高游离浓度是静脉内按剂量给药后前几分钟内发生暂时性溶血的原因。

表2.静脉内给药后化合物1所致溶血的暂时性

剂量组	时间点	溶血(雄性大鼠)	溶血(雌性大鼠)
				10mg/kg	15min	3	1
	30min	0	1
					60min	0	0
20mg/kg	15min	3	3
					30min	3	0
	60min	0	0
				30mg/kg	15min	3	3
	30min	0	2
					60min	0	0

使用合适大小的针和注射器单次静脉内1-2分钟缓慢手动推注注入尾静脉内。制剂：10mg/mL药物，22％Solutol

HS 15，20mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0

实施例4.通过改变静脉内给药类型评价大鼠溶血发生的研究

为减少溶血发生率，采用一种策略，其包括测试药物输入速率是否影响溶血的实验。这包括通过输注和推注途径二者将化合物1在胶束溶液(HS Solutol

15)中给予大鼠的实验。当将胶束溶液经推注途径给药时，在大鼠中观察到溶血高发生率，而以相同剂量经15分钟缓慢静脉内输注给药时观察不到溶血(表3)。

表3.化合物1的输注与推注给药对溶血的影响.

实施例5.本发明化合物1静脉内微乳液制剂的研制

材料和方法

用于研制微乳液制剂的材料

用于该研究的材料在表4概述。

^*MCT-中链甘油三酯；^*LCT-长链甘油三酯s

^*作为式I化合物的一水合物盐酸盐

在大鼠中的溶血试验

本研究的方法学是用15分钟用输注泵通过静脉内输注给予(进入大鼠尾静脉)各种制剂，或者在2分钟内用注射器通过推注途径给予。以6小时间隔用汇集尿液收集法测试尿中游离血红蛋白的存在。关于6小时汇集尿液收集，对大鼠按剂量给药并将其置于代谢笼中。按剂量给药后6小时，通过过度吸入二氧化碳使大鼠安乐死，收集尿液样品。对各种制剂测试最少5个受试者，用Hemastix

试剂条分析尿液样品的溶血，如比较实施例2中所指示。

关于15分钟和1小时样品，对大鼠按剂量给药然后放回没有衬层的饲养笼(单独圈养)中。如果大鼠在笼中排出任何尿液，用Hemastix

试剂条分析尿液以确定血红蛋白尿的存在。如果大鼠在笼中没排出，但在安乐死后排出，则分析在安乐死室中的尿液。

制备透析的Solutol在磷酸盐缓冲盐水/蒸馏水中的溶液

Solutol是两亲分子，在分子中具有约30％游离聚乙二醇(PEG)。透析研究的目的是将分子的亲水部分减到最少/清除。为得到不含游离PEG的Solutol，制备50ml安慰剂制剂(包括20％Solutol在磷酸盐缓冲液中)，用0.22μm滤器过滤。将透析袋用pH 7.0磷酸盐缓冲液润湿。记录湿袋的重量。然后将透析袋用50ml以上安慰剂制剂充满，将该袋放在不少于750ml的pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，用搅拌棒搅拌介质。每天更换透析袋外的缓冲液2次，重复该过程总计72小时，72小时内总计交换至少6次。72小时完成后，记录连同袋内安慰剂溶液一起透析袋的重量。还通过HPLC分析安慰剂制剂以证实溶液中的PEG水平。

确定Solutol中游离聚乙二醇(PEG)含量的分析测试方法

用于测试Solutol分子中游离PEG的HPLC条件如下：

柱：Nucleosil CIS Sum 150×4.6mm

流动相A：0.025％磷酸溶液

流动相B：乙腈

柱温：30℃样品温度：20℃注射体积：20μl

流速：1ml/min UV波长：190nm运行时间：60min

样品稀释剂：甲醇

梯度程序：

化合物1微乳液制剂的制备方法

下文是制备化合物1的微乳液组合物的方法。微乳液制剂制备方法的概略流程图在图1中描述。

(i)撕开空的玻璃烧杯。

(ii)将事先在其原来的容器中在65℃熔化大约15分钟的Solutol称重和装入以上玻璃烧杯内。

(iii)将大豆油称重和装入以上烧杯内。

(iv)将Miglyol称重和装入以上烧杯内。

(v)用搅拌棒将以上组分充分混合大约5分钟。

(vi)在以上烧杯称皮重后将注射用水加入以上烧杯内，以形成微乳液，接着加入化合物1并混合。

(vii)用磁搅拌棒将微乳液制剂均匀混合15分钟。

(viii)将磷酸二氢钠和磷酸氢二钠称重和装入以上制剂内。

(ix)测试制剂pH并用1N NaOH调节pH至pH 7.5。

(x)检查溶液的同渗质量摩尔浓度并用饱和盐水(NaCl)调节张力至约290mM±30mM。

(xi)加入适量水至产物的终体积。

(xii)在层流通风橱下用Millipore Durapore-GV滤器通过0.22um滤器过滤溶液。

(xiii)将制剂无菌密封在10或20ml玻璃管瓶中用于最终使用。

分析含有式I化合物样品的分析测试方法

分析化合物1的HPLC条件如下：

柱：Prodigy ODS(3)150×4.6mm 3μm

流动相A：0.1％磷酸溶液

流动相B：乙腈

柱温：30℃ 样品温度：5℃ 注射体积：10μl

流速：1ml/min UV波长：215nm 运行时间：60min

样品稀释剂：甲醇

梯度程序：

A.评价化合物1在Solutol与在Captisol

中的溶解度

将化合物1在20％Solutol中的平衡溶解度曲线作为pH的函数表示。如图2显示，与用16％Captisol的环糊精制剂获得的＜6μg/ml相比，化合物1在20％Solutol pH 7.0中的平衡溶解度显著更高(～50mg/ml)，接近化合物1在pH 7.0的水性溶解度。因此，由Solutol胶束制剂引起的化合物1溶解度提高证据确凿地显著大于Captisol

基制剂。

B.评价静脉内给予含化合物1的Solutol制剂的大鼠溶血的发生

将10mg/ml化合物1的pH 8.0的具有22％Solutol的胶束溶液作为化合物1制剂的起点。选择制剂pH为8.0以保持高于化合物1的pKa 6.9，以便化合物1将不电离，优先位于胶束的疏水核心中。但是，当在大鼠中测试具有22％Solutol的胶束制剂时，获得非常意外的体内结果。由10-30mg/kg化合物1测试的所有剂量范围通过推注输注给予制剂后在大鼠中观察到严重溶血(表5)。

表5.在大鼠中推注给予化合物1的22％Solutol制剂的概述.

将22％Solutol HS 15、10mg/mL药物、20mM磷酸盐缓冲液制剂用合适大小的针和注射器单次静脉内1-2分钟缓慢手动推注给予尾静脉内的溶血结果。以上观察在剂量给药后15-60分钟进行。

假设高水平Solutol可能是以上胶束制剂作为推注注射给药的溶血活性的原因。Solutol是两亲药物分子，具有构成药物分子约70％的亲脂部分(12-羟基硬脂酸)和由30％的游离PEG组成的亲水部分。还假设在Solutol分子中存在游离PEG增加整体亲水性，并促进从亲脂核心至水相的转移，从而增加药物暴露于红细胞。

通过减少制剂中的Solutol含量从而减少分子中的游离PEG含量来测试以上假设。在减少Solutol浓度后，溶血发生率明显下降，从用22％Solutol制剂(输注20mg/kg剂量)测试的高至10只大鼠中6只降至用7.5％Solutol制剂(以25mg/kg的高很多的剂量)测试的10只大鼠中0只。以6％Solutol浓度，在两个单独研究中溶血发生率也明显减少至1/10和2/10溶血发生病例(表6)。在最低Solutol水平观察到的溶血发生率可归因于背景发生率和在大鼠溶血试验期间观察到的变异性。

为进一步证实以上假设，通过透析除去Solutol分子的游离PEG。游离PEG含量从8.5％减少至0％明显减少溶血发生。使用含有2％和0％游离PEG的6和8％Solutol，使在大鼠中的溶血发生率从给予具有8.5％游离PEG的15％Solutol制剂发生的10/10大鼠分别下降至1/10大鼠和2/10大鼠(表7)。

表7.PEG水平对溶血的影响

基于平衡溶解度曲线确定，目前主导制剂22％Solutol可使50mg/ml化合物1溶解，在该制剂5分之一的浓度，可使10mg/ml化合物1增溶。因此，选择10mg/ml化合物1、pH 8.0的4.4％Solutol(为22％Solutol水平的5分之一)胶束制剂作为用于所有进一步测试的制剂。但是，当以20mg/kg剂量在大鼠中测试10mg/ml化合物1的这种制剂时，观察到溶血发生率仍高，导致分为2组、每组10只大鼠测试的20只大鼠中14只发生溶血(表8)。重复测试pH 8.0的4.4％Solutol制剂得到类似结果，8只受试者中7只具有溶血(表8)。

表8.含有10mg/ml化合物1的4.4％Solutol静脉内制剂的溶血结果

^*剂量用15分钟输注.

C.评价静脉内给予化合物1的微乳液制剂的大鼠溶血的发生

由于胶束受其本身的限制以防止在较高浓度发生溶血，所以将油负载在胶束上(形成微乳液)，通过包含甘油三酯增加胶束的整体疏水性，以将药物屏蔽在疏水核心内和延迟化合物1分配至红细胞。假设包含甘油三酯还可起增加胶束寿命的作用，否则胶束是短寿命的高度动态结构。除了胶束本身进行连续分解和再组装以外，伴随在主体与胶束之间进行不断交换的个体表面活性剂分子/单体，胶束处于平衡。

将各种短、中和长链甘油三酯负载在胶束上，包括capryol、玉米油、大豆油和MIGLYOL

812(本文也称为Miglyol)，以得到物理上稳定、高油负载的微乳液制剂。可用中链甘油三酯Miglyol在20％Solutol浓度负载最高量的油。可将多至5％的这种中链甘油三酯负载在20％Solutol溶液上且不削弱制剂的物理稳定性。

因此，通过输注以20mg/kg化合物1剂量在大鼠中以10mg/ml化合物1测试含有20％Solutol、4.4％Miglyol的制剂的溶血。该制剂在测试的8只大鼠中不导致任何溶血发生。以10mg/ml化合物，减少Solutol和MCT浓度为14.4％Solutol和1.1％Miglyol，结果相似，导致测试的8只受试者中溶血发生率仅为1只(表9)。

表9.化合物1的微乳液(Miglyol-Solutol基)制剂的溶血试验.

a-代表受累动物中痕量溶血

^*剂量经15分钟输注.

为证实用油强化制剂获得的阳性结果，将这些制剂在单独的研究中再次测试大鼠任何溶血的发生。令人惊奇的是，20％Solutol、4.4％Miglyol制剂这次导致高溶血发生率，在测试的8只受试者中4例溶血。但是，4.4％Solutol和1.1％Miglyol的结果，与先前的结果可相比，在给予该制剂的7只受试者中只产生1例溶血(表10)。

为减少用上述制剂观察到的溶血发生，将这些制剂进一步修改以包括长链甘油三酯(LCT)，以进一步增加胶束中的油负载和导致更明显的疏水性用于提高药物保留。将大豆油，一种长链甘油三酯，用于提高Solutol、Miglyol制剂中的油负载。可负载在20％Solutol和5％Miglyol上的大豆油的最大量为约3％。大豆油还可用于提高上述制剂的物理稳定性，可能是通过将长烃链包括在中链甘油三酯Miglyol中重排胶束构型，以形成更紧密的结构。

以10mg/ml化合物1的20％Solutol、4.4％Miglyol和3％大豆油与不含大豆油的类似制剂的结果无差异。以上制剂在用该制剂测试的8只大鼠中导致5只溶血。相反，以10mg/ml化合物1的4.4％Solutol、1.1％Miglyol和0.66％大豆油在8名受试者中测试时得到绝对清白的结果(表10)。但是，以10mg/ml化合物1的20％Solutol、4.4％Myglyol和1.5％维生素E以20mg/kg剂量输注在8名受试者中测试时的确产生无溶血的结果(表10)。

从以上研究得到的结论是(a)Solutol％越低、Solutol分子中游离PEG％越低，得到越好的结果(b)油负载提高药物在胶束核心的保留，与单纯胶束溶液相比在减少溶血发生方面得到更好结果和(c)Solutol％越高，即使在油的存在下也得到更多变的结果，如用单独具有Miglyol和具有Miglyol和大豆油组合的20％Solutol，与4.4％Solutol与上述油的组合相比。油添加显然改善一些高百分数Solutol制剂(如具有维生素E的制剂)。

表10.化合物1微乳液制剂的溶血试验.

因此，为了确保化合物1的油强化静脉内制剂的非溶血结果具有合理的可信度，制订3个标准以帮助选择主导制剂。

(a)测试/再测试可靠性(制剂必须能够在＞1个研究中测试清白)

(b)各批有一致的性能(制剂必须能够跨＞1批测试清白)

(c)必须稳健(制剂必须能够在至少n＝10名受试者中测试清白)

基于以上指南测试的制剂包括以2mg/ml化合物1的pH为8.0的4.4％Solutol、1.1％Miglyol和0.66％大豆油和0.88％Solutol、0.2％Miglyol和0.12％大豆油。在上述情况下Solutol水平从4.4％至0.88％水平减少至5分之一，以进一步减少溶血发生的机会，和获得可再现的结果，这些结果在较低Solutol水平更一致，如通过先前的数据证实。

表11.用含有4.4％Solutol、1.1％Miglyol和0.66％大豆油、2mg/ml化合物1的pH 8.0的微乳液制剂在不同部位的溶血试验.

通过输注给予2mg/ml化合物1的4.4％Solutol、1.1％Miglyol和0.66％大豆油在用该制剂测试的59只大鼠中只有3例溶血。该研究包括的结果来自(a)在3处不同部位进行的4项单独研究，(b)用至少4个不同批次进行和(c)在大量受试者中进行，如在1项此类研究中多至20只大鼠(n＝20)(表11)。因此，该制剂成功地符合以上标准(a-c)。

在pH 8.0具有2mg/ml化合物1的0.88％Solutol、0.2％Myglyol和0.12％大豆油制剂在接受该制剂的50只大鼠中只导致1例溶血，结果稍好一些。这些结果获得的数据还包括来自(a)3项单独研究，(b)用3个不同批次进行和(c)在2项此类研究中在大量大鼠(n＝20)中进行(表12)。

表12.用pH 8.0含有0.88％Solutol、0.2％Miglyol和0.12％大豆油、2mg/ml化合物1的微乳液制剂在不同部位进行的溶血试验

D.评价静脉内给予化合物1的微乳液制剂的猴中的溶血发生

将具有1.5％、3.5％和5.0％Solutol水平与油(Solutol∶Miglyol∶大豆油为6.67∶1.67∶1)在pH 7.5(选择pH 7.5用于化学稳定性)制剂以及减少离子化化合物1，pKa 6.9，对于红细胞可利用)分数的制剂在3只猴中测试以观察任何溶血发生。1.5％Solutol制剂导致测试的3只猴中1只溶血。根据溶血严重度的6个等级，该测试为溶血阳性的猴评为+1级。类似地，2.5％Solutol在接受该制剂的3只猴中也导致1例溶血(在测试溶血阳性的猴中严重度为+2)(表18)。但是，5.0％Solutol得到清白的结果，在给予该制剂的所有3只猴中无溶血发生率(表13)。

表13.具有1.5％、3.5％和5.0％Solutol和油(Solutol∶Myglyol∶大豆油-6.67∶1.67∶1)、2mg/ml化合物1；pH 7.5以20mg/kg剂量给药的微乳液制剂的溶血试验.

^*所有制剂都具有包括与Solutol相比为以下比率的Miglyol和大豆油的油组分(Solutol∶Miglyol∶大豆油-6.67∶1.67∶1)

实施例6-用另外的制剂研究

除了先前讨论的Solutol、共溶剂和环糊精制剂以外，表14提供了制备并用于测试溶血结果的其它制剂名单。

表14

此外，如下文所示制备和测试多种其它/同样的制剂。在每种情况下，药物化合物1采用HCl一水合物盐形式。

制剂1：

化合物1+环糊精(Captisol)；

递药方法(总日剂量)(剂量体积)(剂量浓度)-溶血结果：

推注(TDD 5mg/kg)(DV 5mL/kg)(DC 1mg/mL)-5/5

缓慢输注(TDD 10mg/kg)(DV 10mL/kg)(1mg/mL)-1/5

制剂2：

化合物1+共溶剂(PEG/EtOH)

B-

SI(TDD 2.5mg/kg)(1.5mL/kg)(1.5mg/mL)-3/5

制剂3：

化合物1+聚乙二醇-660-羟基硬脂酸酯，Solutol

HS 15(22％)，20mM磷酸盐缓冲液；pH 7 Solutol HS 15形成胶束10mg/mL药物；10，20和30mg/kg溶血在雄性中；更常见于缓慢推注输注早期。

制剂4：

关于以下制剂，用15分钟经输注将剂量给予大鼠尾静脉内。表14中一些制剂的数据在下文制剂5-10中重复。将数据显示为剂量(mg/kg)；剂量体积(ml/kg)；剂量浓度(mg/ml)和溶血发生率。

制剂5：10ml英脱利匹特(20％大豆油，1.2％卵磷脂，2.25％甘油)；100ul NK-1/乙醇1mg/mL；80ul 0.1N NaOH，pH 6.07

Intralipid 5 5 1 0/2

(乳液)

制剂6：(类似于英脱利匹特)

乳液 5 5 1 0/4

制剂7：10ml HAS(20％)；100ul NK-1/乙醇溶液(1mg/ml)pH 6.66

HSA 5 5 1 0/2

制剂8：45g solutol 15 HS；15g丙二醇，250mg NK-1；8gr PBS(1×)用2gm NK-1 Solutol溶液稀释，pH 6.5，或50mg/ml药物在Solutol∶PG(3∶1 w/w)中，使用前用盐水稀释至1或5mg/ml药物。

胶束 7.5％Solutol

5 5 1 0/5

25 5 5 0/5

胶束＝直径小于25nm

制剂9：

纳米化

5 5 1 0/5

制剂10

22％Solutol；pH 7；磷酸盐缓冲液10mg/mL，在缓慢手动推注大鼠尾静脉时溶血

制剂11

6％Solutol 20 7 2.86 1/10

20 7 2.86 2/10

制剂12

7.5％Solutol 5 5 1 0/5

25 5 5 0/5

制剂13

15％Solutol 25 2.5 10 1/5

11-13-用15分钟缓慢输注入尾静脉

制剂14

8.5％Solutol；0％PEG(除去)

20 2 10 2/10

制剂15

6％Solutol；2％PEG

20 7 2.86 1/10

制剂16^*

油强化胶束(Solutol HS 15+Miglyol H12N(中链甘油三酯油)/大豆油)

在大豆油甘油三酯中主要的不饱和脂肪酸使7％α-亚麻酸(C-18:3)；51％亚油酸(C-18:2)；和23％油酸(C-18:1)。它还含有饱和脂肪酸4％硬脂酸和10％软脂酸。

4.4％Solutol(1.45％游离PEG)/1.1％Miglyol(pH 8)

20 2 10 1/8

20％Solutol(6.6％游离PEG)/5％Miglyol(pH 8)

20 2 10 0/8

制剂17

4.4％Solutol/1％Miglyol(pH 8)

20 2 10 1/7(1＝痕量)

制剂18

4.4％solutol/1％Miglyol/.66％大豆油(pH 8)

20 2 10 0/8

制剂19

20％Solutol/5％Miglyol(pH 8)

20 2 10 4/8(3+，3+，痕量痕量)

制剂20

20％Solutol/5％Miglyol/3％大豆油(pH 8)

20 2 10 5/8(1+，2+，3+，1+，痕量)

制剂21

20％Solutol/5％Miglyol/1.5％α生育酚(pH 8)

20 2 10 0/8

制剂21A

4.4％Solutol/1％Miglyol/1.5％α生育酚

20 10 2 2/10

制剂21B

4.4％solutol/1％Miglyol/1.5％α-生育酚/.6％大豆油

20 10 2 0/8

制剂22

化合物12mg/mL.88％Solutol/.2％Miglyol/.12％大豆油15分钟输注

20 10 2 0/8

20 10 2 0/2

20 10 2 1/20

10 5 2 0/20

制剂23

化合物1 2mg/mL 4.4％Solutol/1％Miglyol/.6％大豆油Ph 7.5，15分钟输注

制剂24-26：

-Cremophor RH40 1.25％；剂量-20mg/kg；药物浓度：-2mg/ml；溶血：-0/8；15分钟输注

-Cremophor EL 1.25％；剂量-20mg/kg；药物浓度：-2mg/ml；溶血：-1/6；15分钟缓慢输注

Cremophor EL 6％；剂量-20mg/kg；药物浓度：-2mg/ml；溶血：-4/4；推注给药方式

制剂27(混合胶束)：

960μl POPC/乙醇混合物(240mg POPC)

200mg Na-乙醇酸

15mg化合物1(HCl-一水合物)

3ml PBS(1×)

靶浓度：5mg/mL

pH：6.6

在稀释之前充分振荡。用PBS(pH 7.4)将原液稀释至期望浓度。

注射应当在稀释后2小时内完成。

POPC：软脂酸和油酸磷脂酰胆碱

注意-该制剂以5mg/kg、5ml/kg和1mg/mL剂量浓度用15分钟缓慢输注途径得到高溶血发生率。不存在任何附加信息，该制剂不适合作为所用特定给药途径的iv制剂。对于将溶血减到最少，更长期输注可能适合和或是必需的。

制剂28

6.7％Solutol和13.3％Intralipid药物2mg/mL

在优选实施方案中，将化合物1制剂用15-30分钟通过IV输注给药，并将呈现在具有100mg/瓶药物的瓶中，该瓶装有药物浓度为2mg/mL的50mL溶液。可调节剂量和体积以提供另外的靶剂量(如100-200mg靶剂量)。

化合物1的一个特殊优点是其具有180小时半衰期(T_1/2)-这使其特别适合每个治疗周期方案一个剂量用于治疗CINV；在5-200mg范围剂量的T_1/2作为每次以不同剂量便携式泵输注(api)的ng/mL：给药后即时ng/ml为850ng/mL(200mg)、430ng/mL(100mg)、280ng/mL(50mg)，在给药后180小时左右，所有剂量都达到半浓度。

可将IV制剂以2mg/mL预混，或者可以是用于稀释的浓缩物(10mg/mL和20mg/mL强度用于稀释至2mg/mL)。

Intralipid

制剂含有10ml Intralipid

(20％)(20％大豆油、1.2％蛋黄磷脂、2.25％甘油，和注射用水)；100ul化合物1/乙醇溶液(1mg/ml；80ul 0.1N NaOH以形成6.07的pH。Intralipid制剂是乳液。

乳液制剂(制剂6)由软脂酰-油酰-磷脂酰胆碱(POPC)、油酸、甘油和吐温80组成。

胶束粒度通常小于100nm和落在15-100nm范围内，胶束制剂是45g Solutol HS；15g丙二醇；250mg化合物1(作为结晶一水合物盐酸盐)；8g FBS(1×)，用2g化合物1、Solutol 15S和丙二醇溶液；pH 6.5稀释至10mg/mL；在使用前稀释，或者制备为药物在Solutol∶PG(3∶1，w∶w)中的50mg/mL溶液，在使用前用盐水稀释至1或5mg/ml药物。

HSA制剂是10ml HSA 20％；100ul化合物1/乙醇溶液(1mg/ml)；pH 6.66。

实施例7-适合推注和缓慢输注给药的乳液制剂

还配制基于中和长链甘油三酯和适当使用乳化剂比如蛋卵磷脂和油酸钠的胃肠外乳液制剂。如下所述的这些制剂中的一些当通过推注途径和通过缓慢输注二者给药时都导致清白的结果。此外，乳液即使在30mg/kg极高剂量也减少溶血。使制剂微流化，其中优化加工条件以产生具有较小液滴尺寸和窄粒度分布(psd)的乳液。所有用H30Z(200微米)相互作用室以2000psi加工的制剂都获得低于500nm的中位直径和小于600nm的D₉₀。通过在121℃高压灭菌20分钟消毒1个周期后测定某些制剂在物理上是稳定的。此类制剂在消毒过程后液滴尺寸无任何明显增加。因此，具有化合物1(当配制时为其结晶一水合物盐酸盐形式)的物理上稳定的制剂适合推注和缓慢输注静脉内给药，且不引起测试动物溶血。

下文描述的乳液制剂具有以下优点：提高药物在疏水核心的保留；与胶束制剂相比增加液滴尺寸，以延迟药物从油滴转移/分配至RBC，和通过利用天然存在的脂质如乳化剂在配方中提供增加的柔韧性，从而消除例如存在于Solutol中的游离聚乙二醇，因此进一步防止药物从疏水环境转移至RBC。胃肠外乳液用于携带水溶性差的药物，通常构成水溶液中的小油滴。优选的乳化剂选自视为安全用于胃肠外给药的乳化剂。在本制剂中，卵磷脂是优选乳化剂。最优选纯化的蛋卵磷脂。可加入另外的稳定剂，包括例如油酸或油酸钠。还可加入中链(Myglyol)和长链(大豆油)甘油三酯。蛋磷脂酰胆碱可用作稳定剂，以及Lipoid E 80(77.7％PC，7.8％PE，2.5％LPC，3.0％SPM)(PC＝磷脂酰胆碱；PE＝磷脂酰乙醇胺；LPC＝溶血-PC；SPM＝鞘磷脂)或Lipoid E80S。甘油可用作张力调节剂，乙醇可用作卵磷脂和药物(式I化合物或其盐-如化合物1)的共溶剂/增溶剂。

用于本实施例的以下材料概括于表15。

表15

材料	组成％	功能
			化合物1^*	0.4-1.5％	药物/活性
蛋PC	3.0％	乳化剂
			Lipoid E 80S	1.2％	乳化剂
Lipoid E80	1.2％	乳化剂
			油酸钠	0.3％	乳化剂
甘油	2.25％	稳定剂/共乳化剂
			乙醇	1.6-4.0％	共溶剂
Myglyol(MCT)	5-10％	增溶剂/疏水组分
			大豆油(LCT)	5-10％	增溶剂/疏水组分

^*化合物1采用固体一水合物盐酸盐形式

MCT＝中链甘油三酯；LCT＝长链甘油三酯/脂肪酸

在动物中的溶血试验

本实施例的方法是：用输注泵通过i.v.输注经15分钟给予各制剂，或者用注射器在2分钟内通过推注注射给予制剂，并将制剂递送至大鼠尾静脉内。以6小时间隔用汇集尿液收集法通过浸渍片(dipstick)测试尿液中游离血红蛋白的存在。每种制剂测试最少4名受试者，在此类动物中观察溶血的频率。

未加工乳液制剂的制备

制备乳液的通用程序如下(图3)：

(1)称出需要量的Myglyol和大豆油放入烧杯内；

(2)将以上预混物匀化5分钟，将两种组分共混和混合；

(3)将需要量的Lipoid E80

/Lipoid E80S加入以上烧杯内；

(4)加入需要量的乙醇，该乙醇含有200-250mcg/ml作为一水合物盐酸盐的化合物1；

(5)在单独的烧杯中称出需要量的无菌水；

(6)将指定量甘油加入水相并将其混合2-3分钟；

(7)将指定量油酸钠加入水相内，如果其存在于配方中；

(8)将油相和水相在约65-70℃单独加热15-20分钟；

(9)将水相加入油相内，用适量灭菌水加至终体积，将该分散体匀化约1-2分钟；

(10)在装入管瓶之前使分散体冷却至室温。

使用微流化制备加工乳液制剂

可将上文描述或本发明范围内的未加工乳液接着通过微流化器，以产生具有窄的液滴尺寸分布的更稳定的乳液。微流化法包括使用微流化器，其设计为将期望的压力以恒定速率供给产物至产物流。结果产物流加速至高速度通过精确设计的固定几何微通道(相互作用室)，在产物流内产生比任何其它常规方法高很多的剪切速率。这引起液滴分解为更小的尺寸，产生具有更均匀和窄的液滴尺寸分布的制剂，用于提高物理稳定性。

用微流化器加工/表征制剂的程序

用F20Y(75微米)相互作用室以4,100-10,000psi压力加工胶态乳液，或者用H30Z(200微米)以2000-5000psi压力加工胶态乳液。通行数为1-3。围绕相互作用室的水浴用于防止微流化步骤期间产物的任何温度增加。分析包括使用光学显微镜和粒度分析器。在加工后捕获收集的各样品的图像。对于未加工样品和在每个微流化周期结束时，测量粒度分析。

蒸汽消毒

将制剂填充和密封在玻璃瓶中，放在高压锅中在121℃终末消毒20分钟1个周期。在消毒加工后用Malvern Zetasizer Nano-ZS测量粒度以观察液滴尺寸分布的改变。仪器基于动态光散射的原理操作。

制剂和结果

用中链和长链甘油三酯的组合和蛋PC配制2种乳液制剂。乳液制剂分别在4和6只大鼠中通过输注和推注给药都产生非溶血结果(表16)。但是，这些具体制剂超过24小时后不稳定，除非震荡赋予剪切力以充分分散。

表16

将用于在大鼠中进一步测试的乳液制剂以20％w/w油负载配制，用Lipoid E80S作为乳化剂使其在物理上稳定。期望高含油量以保留化合物1在疏水核心中。Lipoid E80S具有高磷脂酰乙醇胺(PE)含量，充当阴离子乳化剂。这种产品市售购自Ludwigshafen，Germany的Lipoid KG。在Lipoid E80S中PE含量为约20％，而蛋磷脂酰胆碱构成该物质的约80％。将这些制剂通过推注和输注二者以20mg/kg化合物1的剂量测试。在该油负载时溶血发生率高，如在表17中可见。

表17

将制剂中的油负载从20％减少至10％在推注途径和缓慢输注途径二者中都产生清白的溶血结果(表18)。

表18

优选的乳液制剂因此含有10％油负载。加入油酸钠作为附加成分，但其在所有递药途径都不产生有利的溶血结果(表19)。

表19

Lipoid E80具有10％PE含量，如与Lipoid E80S中的20％相比。

还测试不含油酸钠和具有更高浓度药物负载(30mg/kg)的制剂(表20)。

表20

用微流化技术加工下列5种乳液制剂。加工这些制剂后获得的终粒度(D₁₀、D₅₀和D₉₀)连同涉及的通行数、用于推动液体通过相互作用室的压力和所用相互作用室的类型在表21列出。

表21.

INFWSO为与批号：85266-M/L10％inf相同的制剂组成

INFSO具有与批号：85266-M/L10％SOinf相同的制剂组成

BOL10WSO具有与批号：85266-M/L10％相同的制剂组成

BOL10SO具有与批号：85266-M/L10％SObol相同的制剂组成

BOL15SO具有与批号：85266-M/L10％bol3相同的制剂组成

所有加工制剂都获得更窄和更均匀的粒度分布(psd)。如在图4中可见，与未加工制剂相比，在以2,000psi压力通行3次微流化后BOL15SO的psd曲线明显左移。未加工BOL15SO的D₅₀和D₉₀值分别是4.505um和10.745um，在用H30Z(200微米)相互作用室以2000psi压力使制剂通行3次后，分别位移至410nm和569nm。显微镜图像证实，与以2000psi通行1次相比，使制剂以2000psi通行3次微流化后获得油滴psd的均匀度(图7)。

图7显示微流化期间制剂BOL15SO和INFWSO的光学显微镜图像。光学显微镜结果清楚地显示微流化周期数对制剂BOL15SO(顶部2张图像)和INFWSO(底部4张图像)的影响。观察到右手边的图像没有非常大的脂肪球，具有更均匀和狭窄的粒度分布。

关于INFWSO观察到类似情况。用H30Z相互作用室以2,000psi通行3次，D₅₀和D₉₀值从未加工制剂的2.643um和4.848um变为442nm和578nm。在使制剂用具有75微米微孔通道的F20Y相互作用室以4,100psi压力通行3次后，psd曲线进一步左移，D₅₀和D₉₀值分别记录为318和437nm(图5)。在以2000和4,100psi压力通行1次后加工制剂的显微镜图像显示大的脂肪球和不均匀的psd，使制剂通行多次后其明显变得更均匀(图7)。

BOL10WSO在加工后得到类似结果，在微流化后油滴psd曲线明显左移。与具有D₅₀和D₉₀为3.892um和6.873um的未加工制剂相比，用H30Z相互作用室以2,000psi压力将这些乳液加工3个周期后，记录D₅₀和D₉₀值为422um和595um。使用更高压力5,000psi用相同的相互作用室通行3次，使曲线进一步左移，分别得到341nm和482nm的D₅₀和D₉₀值(图6)。在显微镜图像中清楚地观察到微流化基于周期数的影响和使制剂经受更高压力后获得更小的油滴(图8)。

图8显示微流化期间制剂BOL10WSO的光学显微镜图像。

光学显微镜结果清楚地显示微流化的压力和周期数对制剂BOL10WSO的影响。观察到右手边的图像没有非常大的脂肪球且具有更均匀和狭窄的粒度分布。而且，当将制剂在预期的更高压力下微流化时油滴也更小。

关于制剂INFSO和BOL10SO观察到类似结果(图9和10)。图9显示微流化期间制剂BOL15SO和INFWSO的光学显微镜图像。光学显微镜结果清楚地显示微流化周期数对制剂INFSO的影响。周期数越高导致越均匀的粒度分布。图10显示微流化期间制剂BOL10SO的光学显微镜图像。光学显微镜结果清楚地显示微流化周期数对制剂BOL10SO的影响。周期数越高产生越均匀的粒度分布。

微流化加工因此提供包含式I化合物及其药学上可接受的盐的物理上稳定的乳液制剂。本发明还涉及具有约500nm或更小中位直径和约600或更小D₉₀的液滴的式I及其盐的乳液制剂。当使制剂经受另外的通行和更高压力时获得甚至更小的液滴粒度。然后将制剂高压灭菌以消毒制剂用于静脉内给药。高压灭菌的结果未引起明显的稳定性问题。将INFWSO和BOL10WSO高压灭菌，并在目检后，1个周期后所得平均粒度分别测定为353.4nm和336.7nm(图11和12)。因此，用磷脂基乳液制剂对于推注和缓慢输注给药都可再现地获得非溶血结果。

如上所述，制剂可用于预防和治疗癌症治疗放疗、癌症治疗化疗伴随的恶心和呕吐以及术后伴随的恶心和呕吐。治疗过程包含在开始化疗前第1天单次剂量给予包含式I化合物或其盐的制剂，接着在第2和3天每天给药1次。治疗过程还包含在第1天单次剂量给药。iv溶液可采用2mg/ml溶液形式，必须用50ml将100mg递送至需要其治疗的患者。制剂可以是预备型(ready to go)预混溶液或可在使用前稀释的浓缩物。本文公开的冻干制剂可采用粉剂形式，在使用之前将其与盐水或合适的缓冲液混合。

实施例8-前药

通过使活化羰基化合物与式I化合物反应制备以下显示的两种前药。当在两个不同时间点和在尿液和血浆二者中测量时，以下显示的葡糖胺磷酸盐在不含任何增溶剂的葡萄糖水溶液中得到清白的溶血结果。

前药：

葡糖胺磷酸盐前药在葡萄糖/水中的溶血数据：

20mg/kg剂量 2mL/kg 10mg/mL 0/4尿液；1/4血浆 .25小时时间点

20 2 10 0/3尿液；0/3血浆 1小时时间点

用载体(10％Solutol)产生的胺的数据.25小时3/3溶血

Claims

1.一种适合静脉内给药的药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐，和

b)药学上可接受的载体。

2.权利要求1的组合物，其中药学上可接受的载体选自克列莫佛、乳液、微乳液、胶束、带负电荷胶束、载油胶束、英脱利匹特、HSA、脂质体和带负电荷和带正电荷氨基酸。

3.权利要求1的组合物，其中药学上可接受的载体选自水溶性有机溶剂、非离子表面活性剂、水不溶性脂质、有机脂质/半固体和磷脂。

4.权利要求2的组合物，其中药学上可接受的载体采用载油胶束形式。

5.权利要求4的组合物，其中载油胶束包含与长链和中链甘油三酯组合的Solutol。

6.权利要求2的组合物，其中药学上可接受的载体采用乳液形式。

7.权利要求6的组合物，其中乳液包含长链甘油三酯和短链甘油三酯。

8.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

b)为总组合物重量的约0.50％-约10.0％的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；

c)为总组合物重量的约0.10％-约2.5％的中链甘油三酯；

d)为总组合物重量的约0.10％-约1.5％的长链甘油三酯；和

9.权利要求8的药用组合物，其中中链甘油三酯选自辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、辛酸/癸酸甘油三酯、来自椰子油的甘油三酯、辛酸/辛酸/月桂酸甘油三酯、辛酸/辛酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/辛酸/硬脂酸甘油三酯及其两种或多种的组合。

10.权利要求8的药用组合物，其中长链甘油三酯选自大豆油、玉米油、棉籽油、橄榄油、花生油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、油酸乙酯、蓖麻油、单不饱和ω-9脂肪酸及其两种或多种的组合。

11.权利要求8的药用组合物，其中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯占总组合物重量的约0.5％-约10.0％；中链甘油三酯占总组合物重量的约0.15％-约1.5％；和长链甘油三酯占总组合物重量的约0.10％-约1.2％。

12.权利要求8的药用组合物，其中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯占总组合物重量的约0.88％-约4.84％；中链甘油三酯占总组合物重量的约0.20％-约1.20％；和长链甘油三酯占总组合物重量的约0.10％-约0.75％。

13.权利要求8的药用组合物，其中中链甘油三酯是辛酸/癸酸甘油三酯，长链甘油三酯是精炼大豆油。

14.权利要求8的药用组合物，其中药学上可接受的盐是盐酸盐。

15.权利要求8的药用组合物，其中式I化合物的浓度为1mg/ml-15mg/ml。

16.权利要求15的药用组合物，其中式I化合物的浓度为2mg/ml-10mg/ml。

17.权利要求16的药用组合物，其中式I化合物的浓度为2mg/ml。

18.权利要求8的药用组合物，其中组合物的pH为约7-约8。

19.权利要求18的药用组合物，其中组合物的pH为约7.5。

20.权利要求8的药用组合物，其中组合物进一步包含张力调节剂和/或pH调节剂。

21.权利要求8的药用组合物，其中至少一种缓冲剂是磷酸盐缓冲液。

22.权利要求21的药用组合物，其中磷酸盐缓冲液是磷酸钠缓冲液。

23.一种药用组合物，其包含：

(a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

(b)为总组合物重量的约4.4％的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；

(c)为总组合物重量的约1.1％的至少一种中链甘油三酯；

(d)为总组合物重量的约0.66％的精炼大豆油；和

(e)磷酸盐缓冲剂，其中组合物的pH为约7.5。

24.权利要求23的药用组合物，其中式I化合物的浓度为1mg/ml-15mg/ml。

25.一种药用组合物，其包含：

(a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；

(b)为总组合物重量的约0.88％的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯；

(c)为总组合物重量的约0.22％的至少一种中链甘油三酯；

(d)为总组合物重量的约0.12％的精炼大豆油；和

(e)磷酸盐缓冲剂，其中组合物的pH为约7.5。

26.权利要求25的药用组合物，其中式I化合物的浓度为1mg/ml-15mg/ml。

27.用于制备药用组合物的方法，其包含：

b)将水加入组合物内以形成微乳液组合物；

c)向微乳液组合物内加入式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

d)加入至少一种缓冲剂并将pH调节为约6.5-约8.0以形成药用组合物，其中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯占总药用组合物重量的约0.50％-约10.0％，中链甘油三酯占总药用组合物重量的约0.10％-约2.5％，长链甘油三酯占总药用组合物重量的约0.10％-约1.5％，其中在组合物中聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯∶中链甘油三酯∶长链甘油三酯的重量比为约5-100∶1-5∶1。

28.权利要求27的方法，其中中链甘油三酯选自辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、辛酸/癸酸甘油三酯、来自椰子油的甘油三酯、辛酸/辛酸/月桂酸甘油三酯、辛酸/辛酸/亚油酸甘油三酯、辛酸/辛酸/硬脂酸甘油三酯及其两种或多种的组合。

29.权利要求27的方法，其中长链甘油三酯选自大豆油、玉米油、棉籽油、橄榄油、花生油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、油酸乙酯、蓖麻油、单不饱和ω-9脂肪酸及其两种或多种的组合。

30.权利要求27的方法，其中中链甘油三酯是辛酸/癸酸甘油三酯，长链甘油三酯是大豆油。

31.权利要求27的方法，其中熔化的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯是通过将聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯在60℃-65℃温度加热获得。

32.权利要求27的方法，其中在步骤(b)中将混合物在约60℃温度加热。

33.权利要求27的方法，其中式I化合物在药用组合物中的浓度为1mg/ml-15mg/ml。

34.权利要求27的方法，其中在步骤(c)中将pH调节至约7.5。

35.权利要求27的方法，其进一步包含将张力调节剂加入微乳液组合物中。

36.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)为总组合物重量的约0.88％-约5％的聚乙二醇化羟基硬脂酸酯，其中聚乙二醇化羟基硬脂酸酯基本不含游离聚乙二醇，且其中组合物的pH为约6.5-约8.0。

37.一种在需要治疗的患者中治疗恶心和/或呕吐的方法，所述方法包含将有效量的权利要求1、8、23、25或36的药用组合物通过输注静脉内给予患者，其中将患者的溶血减到最少。

38.权利要求37的方法，其中恶心和/或呕吐由化疗引起或者是术后恶心和/或呕吐。

39.权利要求37的方法，其中患者是灵长类或伴侣动物。

40.权利要求39的方法，其中灵长类是人。

41.权利要求37的方法，其中式I化合物或其药学上可接受的盐的浓度为1mg/ml-15mg/ml。

42.权利要求41的方法，其中组合物是通过输注15-90分钟静脉内给药。

43.权利要求37的方法，其中式I化合物或其药学上可接受的盐的总日剂量为1mg/kg-9mg/kg患者体重。

44.一种将静脉内给予式I化合物或其药学上可接受的盐后的患者溶血减到最少的方法，

所述方法包含将有效量的权利要求1、8、23、25或36的药用组合物通过输注静脉内给予患者。

45.权利要求44的方法，其中患者是灵长类或伴侣动物。

46.权利要求45的方法，其中灵长类是人。

47.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)磷脂。

48.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)长链脂肪酸或长链甘油三酯。

49.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)中链甘油三酯或脂肪酸。

50.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

c)磷脂。

51.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

c)磷脂和

d)甘油。

52.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

a)中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

b)磷脂；

c)甘油和

d)乙醇。

53.权利要求52的组合物，其中基于组合物总重量，组分b)的重量百分数为约10％。

54.一种药用组合物，其包含：

a)式I化合物

或其药学上可接受的盐；和

b)10％中链甘油三酯和/或长链脂肪酸或甘油三酯；和

c)1.2％磷脂和

d)2.25％甘油。

55.一种组合，其包含药学上有效量的权利要求1的制剂和至少一种选自抗抑郁剂、止恶心或止吐药、化疗剂或抗炎剂的另外的活性药用成分。

56.权利要求55的组合，其中抗抑郁剂选自SSRI。

57.权利要求55的组合，其中止恶心/止吐药选自5-HT3受体拮抗剂。

58.一种治疗高度致吐性癌症化疗的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，其包含组合给予式I化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

59.一种治疗中度致吐性癌症化疗的初始和反复过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，其包含组合给予式I化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

60.一种在需要其治疗的患者中治疗呕吐的方法，其包含给予药学上有效量的权利要求53的组合物。

61.权利要求60的方法，其中将组合物作为推注剂量给药。

62.式Ia化合物及其药学上可接受的盐：

其中Z和Y独立选自H、-PO(OH)O^-M⁺、-PO(O^-)₂2M⁺、-PO(O^-)₂D²⁺、-[C(R¹)(R²)]_n-PO(OH)O^-M⁺、-[C(R¹)(R²)]_n-PO(O^-)₂2M⁺、-[C(R¹)(R²)]_n-PO(O^-)₂D²⁺、-C(O)[C(R¹)(R²)]_m-OPO(O^-)₂2M⁺、-C(O)[C(R¹)(R²)]_oNR¹R²、-C(O)[C(R¹)(R²)]_PCO_2-M⁺、-SO₃-M⁺、-[C(R¹)(R²)]_qSO₃-M⁺和-[C(R¹)(R²)]_rOC(O)OR³，其中R³选自

前提是Z和Y不都是H；M⁺选自单价阳离子；D⁺选自二价阳离子；R¹和R²独立选自H或C_1-6烷基；n是1-4；m、o和p独立选自0-4；和R选自C_1-6烷基。

63.权利要求62的化合物，其中Z选自H，且Y选自上文显示的关于Z和Y的除H以外的任一基团。

64.权利要求62的化合物，其中M⁺选自：铵盐，碱金属盐比如钠，碱土金属盐比如钙和镁，与有机碱比如N-甲基-D-葡糖胺或二环己胺的盐，或者氨基酸盐比如精氨酸或赖氨酸。

65.一种治疗高度致吐性癌症的初始和反复化疗过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，其包含组合给予式Ia化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

66.一种治疗中度致吐性癌症的初始和反复化疗过程伴随的急性和延迟性恶心和呕吐的方法，其包含组合给予式Ia化合物静脉内制剂和至少一种另外的止吐剂。

67.权利要求62的化合物，其具有式：

68.一种静脉内制剂，其包含权利要求62的式Ia化合物。

69.一种在需要其治疗的患者中治疗CINV的方法，其包含给予权利要求1的静脉内制剂，其中以每个化疗治疗周期一次剂量给予所述制剂。

70.一种药用静脉内制剂，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐，其中活性成分的T_1/2为约180小时，其中对于约50-约200mg剂量给药，在给药后血液浓度(ng/mL)立即为约280ng/mL-约850ng/mL。

71.一种适合静脉内给药的胶束制剂，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐。

72.一种适合静脉内给药的乳液制剂，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐。

73.一种药用组合物，其包含式I化合物

或其药学上可接受的盐和非离子增溶剂。