CN102539567B - 一种阿戈美拉汀和中间体及各杂质的hplc检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种有效地分离、分析阿戈美拉汀和合成中间体及各杂质的液相色谱方法。阿戈美拉汀(Agomelatine)是一种褪黑素激动剂，具有抗抑郁症状作用，可在不影响白天活动状态的情况下改善夜间睡眠情况。本发明在于提供一种分离分析阿戈美拉汀和中间体及各杂质的方法高效液相色谱法，通过选用十八烷基键合硅胶填料的色谱柱，以缓冲液(pH6～7)与有机溶剂不同比例配制的流动相A(有机相)、流动相B(水相)为流动相，流速为1.0ml/min，按梯度洗脱，从而实现阿戈美拉汀与其中间体及杂质的分离和分析测定。
Description
技术领域：
本发明涉及一种可有效分离、分析阿戈美拉汀和合成中间体及各杂质的高效液相色谱方法。
技术背景：
阿戈美拉汀(Agomelatine)，化学名N-[2-(7-甲氧萘基-1-基)乙基]乙酰胺，是一种褪黑素激动剂，具有抗抑郁症状作用，可在不影响白天活动状态的情况下改善夜间睡眠情况。
本品的合成步骤在专利EP0447285中提及了一种由7-甲氧基-1-四氢萘酮为起始原料反应得到阿戈美拉汀的制备工艺，也是目前常见的阿戈美拉汀制备工艺。
在阿戈美拉汀的化学合成过程中，存在几个关键步骤，所以在最终产品中可能残留相应的中间体，并且在合成过程中，尤其是氰基催化氢化过程中易产生铵盐的多聚物杂质，影响产品的质量，所以建立分离分析方法对其中间体及杂质进行质量控制是非常必要的。
阿戈美拉汀及其中间体及杂质的结构如下：
N-[2-(7-甲氧萘基-1-基)乙基]乙酰胺(阿戈美拉汀)，
2-(7-甲氧基萘-1-基)乙酸(杂质A)
2-(7-甲氧基萘-1-基)乙胺(杂质B)
7-甲氧基-1-萘乙酰胺(杂质C)
7-甲氧基-1-萘满酮(杂质D)
2-(7-甲氧基萘-1-基)乙腈(杂质E)
二级胺(杂质F)
7-甲氧基-1-萘乙酸乙酯(杂质G)
二级胺酰化(杂质H)
无疑，上述化合物采用不同的色谱条件时，均可以单独的分离检测，但选用多个色谱条件分别检测在人力物力上都存在极大的浪费，我们通过考察，寻找了一个适宜的色谱条件，可有效的分离分析以上各化合物。
以上各化合物结构上来考察，部分结构非常相似，从极性角度考虑，又有部分杂质与阿戈美拉汀存在极大的极性差异，同一色谱柱上要想达到各组分的完全有效分离是非常困难的。这使得寻找一种既要求相似结构化合物能有效分离又要兼顾弱极性物质能够有效检出的色谱条件成为必要。
发明内容：
本发明在于提供一种分离分析阿戈美拉汀和中间体及各杂质的方法高效液相色谱法，从而实现阿戈美拉汀与其中间体及杂质的分离和分析测定。
本发明所说的用高效液相色谱法分析分离阿戈美拉汀合成的中间杂质及其最终产品的方法，是选用十八烷基键合硅胶填料的色谱柱，以缓冲液(pH6～7)与有机溶剂不同比例配制的流动相A(有机相)、流动相B(水相)为流动相，流速为1.0ml/min，梯度洗脱。用该方法可以快速有效的分离分析阿戈美拉汀和中间体及各杂质。
本发明的有机溶剂选自下列化合物：甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇。所述的有机溶剂优选为乙腈与甲醇，最终优选的有机溶剂为乙腈。
本发明的缓冲液系指由磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵加三乙胺或磷酸调节pH至6～7的水溶液，浓度为2mmol/L～50mmol/L.
本发明流动相A(有机相溶剂)为含有上述缓冲液0～45％的有机溶液，通常选用含缓冲液/乙腈(20∶80)的溶液。
本发明流动相B(水相溶剂)为含有上述有机溶剂0～45％的缓冲液溶液，通常选用含乙腈/缓冲液(20∶80)的溶液。
本发明的梯度程序可以根据流动相A、流动相B各自所含的缓冲液、有机溶剂比例不同而改变。其改变的最终依据是保证0～15分钟时，两相混合后流动相中的有机相比例为35～45％，在15～35分钟时间段内，逐渐增加有机相比例至75％～85％，保持10分钟，然后在5分钟内将有机相比例降回35～45％。
此梯度程序在流动相A为乙腈∶0.01M磷酸二氢钾水溶液(三乙胺调pH＝6.5)＝80∶20，流动相B为乙腈∶0.01M磷酸二氢钾水溶液(三乙胺调pH＝6.5)＝20∶80时，可表述为下表所示
根据如上梯度程序，取阿戈美拉汀及其各中间体、杂质，采用适宜介质溶解稀释配制成供试样品溶液，设置流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，柱温为室温，取供试样品溶液20ul注入液相色谱仪，可以有效测定其相关杂质。具体如实施例1所示。
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明的范围非仅限于这些实施例的范围。
具体实施方式：
对比实施例
仪器条件
高效液相色谱仪：戴安UltiMate 3000系
色谱柱：C18(250mm×4.6mm)；
流速：1.0ml/min
柱温：室温
进样体积：20ul
流动相：乙腈∶0.01M磷酸二氢钾水溶液(三乙胺调pH＝6.5)＝45∶55
取阿戈美拉汀及其各中间体、杂质，采用流动相溶解稀释配制成供试样品溶液。设置流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，柱温为室温，取供试样品溶液20ul注入液相色谱仪。
该条件下，二级胺杂质(杂质F)及二级胺酰化杂质(杂质H)保留时间过长，无法有效检出，增大有机相比例又会导致萘乙胺(杂质B)及阿戈美拉汀保留时间过小。故该方法无法有效检出阿戈美拉汀杂质。
实施例1
1.仪器条件
高效液相色谱仪：戴安UltiMate 3000系
色谱柱：C18(250mm×4.6mm)；
流速：1.0ml/min
柱温：室温
进样体积：20ul
流动相：流动相A为乙腈∶0.01M磷酸二氢钾水溶液(三乙胺调pH＝6.5)＝80∶20，流动相B为乙腈∶0.01M磷酸二氢钾水溶液(三乙胺调pH＝6.5)＝20∶80
取阿戈美拉汀及其各中间体、杂质，采用适宜介质稀释溶解配制成供试样品溶液。设置流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，柱温为室温，取供试样品溶液20ul注入液相色谱仪，测定结果见表
该条件下，保留时间最长的色谱峰保留时间为57min，该方法可有效检出各杂质。
实施例2
1.仪器条件
高效液相色谱仪：戴安UltiMate 3000系
色谱柱：C18(150mm×4.6mm)；
流速：1.0ml/min
柱温：室温
进样体积：20ul
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.01M磷酸二氢钾水溶液(三乙胺调pH＝6.5)
取阿戈美拉汀及其各中间体、杂质，采用适宜介质稀释溶解配制成供试样品溶液。设置流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，柱温为室温，取供试样品溶液20ul注入液相色谱仪，测定结果见表
该条件下，保留时间最长的色谱峰保留时间为36min，该方法可有效检出各杂质。
Claims (1)
1.一种分析阿戈美拉汀中间杂质及其最终产品的高效液相色谱法，其特征在于采用十八烷基键合硅胶填料的色谱柱；二种特定配比流动相，其中流动相A为三乙胺调节pH至6.5的0.01M磷酸二氢钾缓冲液∶乙腈＝20∶80，流动相B为三乙胺调节pH至6.5的0.01M磷酸二氢钾缓冲液∶乙腈＝80∶20；梯度洗脱程序见表，
按梯度洗脱，分析阿戈美拉汀及其中间杂质。
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