CN103837615B - 一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法 - Google Patents
一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103837615B CN103837615B CN201410057026.XA CN201410057026A CN103837615B CN 103837615 B CN103837615 B CN 103837615B CN 201410057026 A CN201410057026 A CN 201410057026A CN 103837615 B CN103837615 B CN 103837615B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- methyl alcohol
- ecdysterone
- hydroxyl
- standard solution
- phytoecdysone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Abstract
本发明公开了一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法，其步骤包括：a、采用YMC250×4.6mm，S-5μm色谱柱；b、采用甲醇-水的流动相进行梯度洗脱；c、流速：1.0mL／min，进样量：20μL，柱温：38℃；d、波长：260nm，扫描波长：200-600nm。本发明操作简便，分离快速，灵敏度高，无需更换色谱柱，而且结果稳定性好、重复性高。
Description
技术领域
本发明属于于分析化学领域。涉及一种色谱检测的方法，具体涉及一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的检测方法。
背景技术
蜕皮激素是一类非常重要的植物次生代谢产物，具有昆虫蜕皮活性的天然甾体化合物，在植物抵抗植食性昆虫侵害中扮演着十分重要的角色。因此，阐明植物蜕皮激素的生物合成途径，不仅在基础研究上具有理论意义的突破，而且在生产上为农业害虫防治提供新技术。
在植物蜕皮激素生物合成的途径中，20-羟基蜕皮甾酮是其终产物，7-脱氢胆固醇、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和α-蜕皮甾酮为中间产物，上述化合物均具有7-烯-6-酮结构，可吸收一定波长的紫外线，故多采用高效液相色谱紫外法检测其含量。此法不仅操作简便、分析速度快，灵敏度高，而且结果稳定性好、重复性高。
然而，国内外现有的检测方法均不能在同一色谱条件下同时检测上述多种蜕皮激素类物质。目前，尚未见应用高效液相色谱紫外法同时检测蜕皮激素合成的中间产物和终产物含量的报道，只有对某一种蜕皮激素类物质检测的研究。因此，建立一种应用高效液相色谱紫外法同时检测蜕皮激素合成的中间产物和终产物含量的方法，对于研究蜕皮激素的生物合成途径具有重要的应用价值。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法，本发明可以同时测定植物蜕皮激素类物质。分别选择强极性以20-羟基蜕皮甾酮为代表、中极性以α-蜕皮甾酮和2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮为代表、和弱极性以7-脱氢胆固醇为代表的蜕皮激素类物质。其具体技术方案为：
一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法，包括以下步骤：
(1)分别制备20-羟基蜕皮甾酮(20E；20-Hydroxyecdysone)、α-蜕皮甾酮(E；Ecdysone)、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮(2D-20H，2-deoxy-20-Hydroxyecdysone)和7-脱氢胆固醇(7-DHC，7-Dehydrocholesterol)的标准溶液和混合标准溶液；
(2)取上述制备的标准液母液，按照倍比稀释(梯度浓度)的方法，配成5种浓度，稀释溶剂为甲醇，经0.45μM微孔滤膜过滤后，各取20μL进样分析；
(3)进行高效液相色谱分析。
实验仪器：美国沃特世液相色谱仪的系统：四元输液泵P4000、在线真空脱气机、全自动进样器AS1000、二极管阵列检测器(DAD)UV6000LP；
色谱条件：采用YMC250×4.6mm，S-5μm色谱柱；采用甲醇-水的流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为0-30min，甲醇30％→95％；30-40min，甲醇95％→100％；40-60min，甲醇100％；60-65min，甲醇100％→30％；65-70min，甲醇30％；流速：1.0mL／min，进样量：20μL，柱温：38℃；波长：260nm，扫描波长：200-600nm；
(4)定性定量分析
将上述5种倍比浓度的20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇的混合标准溶液进样检测，每个浓度进样3次，进行相关性回归分析。
进一步优选，所述蜕皮激素为20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇。
进一步优选，步骤b中采用甲醇-水的流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为0-30min，甲醇30％→95％；30-40min，甲醇95％→100％；40-60min，甲醇100％；60-65min，甲醇100％→30％；65-70min，甲醇30％。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1、本发明首次应用高效液相色谱紫外检测法，同时测定混合标准品中的20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇的含量；
2、本发明操作简便，分离快速，灵敏度高，且无需更换色谱柱；
3、本发明经过长期、大量的试验，摸索出应用高效液相色谱紫外法同时测定混合标准品中的20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇含量的色谱条件：流动相组分和梯度洗脱程序、流速、进样量、柱温和检测波长等；
4、在一定检测范围内，四种物质标准曲线线性方程的R2值均大于0.99，表明线性关系较好。
附图说明
图1混合标准品的色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例进一步说明本发明的技术方案。
一种高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的检测方法，包括以下步骤：
1.采用YMC250×4.6mm，S-5μm色谱柱；
2.采用甲醇-水的流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为0-30min，甲醇30％→95％；30-40min，甲醇95％→100％；40-60min，甲醇100％；60-65min，甲醇100％→30％；65-70min，甲醇30％；
3.流速：1.0mL／min，进样量：20μL，柱温：38℃；
4.检测波长：260nm，扫描波长：200-600nm；
5.分别制备20-羟基蜕皮甾酮(20E；20-Hydroxyecdysone)、α-蜕皮甾酮(E；Ecdysone)、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮(2D-20H，2-deoxy-20-Hydroxyecdysone)和7-脱氢胆固醇(7-DHC，7-Dehydrocholesterol)的标准溶液和混合标准溶液；
6.混合标准品的检测：
20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇标准品溶液的配置采用色谱级甲醇溶解和稀释，并采用超纯水配置成混合标准溶液。
7.进行高效液相色谱分析。
实验仪器：Waters Vaccum degasser，P4000pump，AS1000auto sampler，UV6000LP PhotoDiode Array detector；
色谱条件：采用YMC250×4.6mm，S-5μm色谱柱；采用甲醇-水的流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为0-30min，甲醇30％→95％；30-40min，甲醇95％→100％；40-60min，甲醇100％；60-65min，甲醇100％→30％；65-70min，甲醇30％；流速：1.0mL／min，进样量：20μL，柱温：38℃；波长：260nm，扫描波长：200-600nm。
试剂：20-羟基蜕皮甾酮、α--蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇标准品均购自Sigma公司；甲醇色谱级，购自德国Merck公司。
一、混合标准溶液的配制
首先配置标准混合溶液母液，其浓度分别为20-羟基蜕皮甾酮100mg/L、α-蜕皮甾酮100mg／L、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮100mg/L和7-脱氢胆固醇200mg／L，溶剂为甲醇，分装后置于-20℃冰箱中备用。
取上述制备的标准液母液，按照倍比稀释(梯度浓度)的方法，配成5种浓度，稀释溶剂为甲醇，经0.45μM微孔滤膜过滤后，各取20μL进样分析。
二、定性定量分析
将上述5种倍比浓度的20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇的混合标准溶液进样检测，每个浓度进样3次，进行相关性回归分析。得出：20-羟基蜕皮甾酮的线性范围是6.25-100.00mg／L，回归方程为：y=62.196x-57.386，相关系数R2=0.9998；α-蜕皮甾酮的线性范围是6.25-100.00mg／L，回归方程为：y=13.77x+79.4，相关系数R2=0.9973；2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮的线性范围是6.25-100.00mg/L，回归方程为：y=16.368x+316.93，相关系数R2=0.9911；7-脱氢胆固醇的线性范围是12.50-200.00mg/L，回归方程为：y=0.0122x+0.0136，相关系数R2=0.9926。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (1)
1.一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法，其特征在于，包括
以下步骤：
(1)分别制备20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇的标准溶液母液和混合标准溶液母液；
(2)取上述制备的混合标准溶液母液，按照倍比稀释的方法，配成5种浓度，稀释溶剂为甲醇，经0.45μM微孔滤膜过滤后，各取20μL进样分析；
(3)进行高效液相色谱分析：
实验仪器：美国沃特世液相色谱仪的系统：四元输液泵P4000、在线真空脱气机、全自动进样器AS1000、二极管阵列检测器UV6000LP；
色谱条件：采用YMC 250×4.6mm，S-5μm色谱柱；采用甲醇-水的流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为0-30min，甲醇30％→95％；30-40min，甲醇95％→100％；40-60min，甲醇100％；60-65min，甲醇100％→30％；65-70min，甲醇30％；流速：1.0mL/min，进样量：20μL，柱温：38℃；波长：260nm，扫描波长：200-600nm；
(4)定性定量分析
将上述5种倍比浓度的20-羟基蜕皮甾酮、α-蜕皮甾酮、2-脱氧-20-羟基蜕皮甾酮和7-脱氢胆固醇的混合标准溶液进样检测，每个浓度进样3次，进行相关性回归分析。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410057026.XA CN103837615B (zh) | 2014-02-15 | 2014-02-15 | 一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410057026.XA CN103837615B (zh) | 2014-02-15 | 2014-02-15 | 一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103837615A CN103837615A (zh) | 2014-06-04 |
| CN103837615B true CN103837615B (zh) | 2015-05-20 |
Family
ID=50801329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410057026.XA Expired - Fee Related CN103837615B (zh) | 2014-02-15 | 2014-02-15 | 一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103837615B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110045027B (zh) * | 2019-03-22 | 2022-03-11 | 桂林医学院 | 一种菠菜果实的质量控制方法 |
| CN112394121A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-02-23 | 成都普思生物科技股份有限公司 | 一种测定牛膝中水龙骨素b含量的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101504396A (zh) * | 2009-03-05 | 2009-08-12 | 湖南时代阳光制药有限公司 | 用于检测药物组合物中蜕皮甾酮的方法 |
| CN102231986A (zh) * | 2007-11-30 | 2011-11-02 | 比奥菲蒂斯研究所简单股份有限公司 | 植物蜕皮激素在制备对代谢综合征有效的组合物中的用途 |
| EP1014953B1 (en) * | 1997-03-05 | 2012-04-25 | Sugen, Inc. | Formulations for hydrophobic pharmaceutical agents |
-
2014
- 2014-02-15 CN CN201410057026.XA patent/CN103837615B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1014953B1 (en) * | 1997-03-05 | 2012-04-25 | Sugen, Inc. | Formulations for hydrophobic pharmaceutical agents |
| CN102231986A (zh) * | 2007-11-30 | 2011-11-02 | 比奥菲蒂斯研究所简单股份有限公司 | 植物蜕皮激素在制备对代谢综合征有效的组合物中的用途 |
| CN101504396A (zh) * | 2009-03-05 | 2009-08-12 | 湖南时代阳光制药有限公司 | 用于检测药物组合物中蜕皮甾酮的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HPLC method for the determination of ecdysterone in extractive solution from Pfaffia glomerata;Aline R. Zimmer 等;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20060213;第40卷(第2期);第450-453页 * |
| RP-HPLC测定有边瓦韦中的蜕皮甾酮;张晓静 等;《光谱实验室》;20120531;第29卷(第3期);第1834-1837页 * |
| 反相高效液相色谱法测定怀牛膝中羟基促蜕皮甾酮的含量;马英 等;《药学学报》;20000430;第35卷(第4期);第313-315页 * |
| 高效液相色谱法测定怀牛膝含药血清中蜕皮激素含量;刘祥兰 等;《黑龙江医药》;20000430;第13卷(第4期);第207-208页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103837615A (zh) | 2014-06-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | Determination of aconitine, hypaconitine and mesaconitine in urine using hollow fiber liquid-phase microextraction combined with high-performance liquid chromatography | |
| CN104713977B (zh) | 葡萄酒中多种吡唑类杀菌剂的固相萃取-液相色谱-串联质谱检测方法 | |
| Boyacı et al. | A study of thin film solid phase microextraction methods for analysis of fluorinated benzoic acids in seawater | |
| Xiao-Wang et al. | Determination of trace bisphenol A in water using three-phase hollow fiber liquid-phase microextraction coupled with high performance liquid chromatography | |
| CN105784894B (zh) | 一种用于中药的农药残留检测方法 | |
| Zhang et al. | Application of dynamic liquid-phase microextraction and injection port derivatization combined with gas chromatography–mass spectrometry to the determination of acidic pharmaceutically active compounds in water samples | |
| CN106645443A (zh) | 一种消费品中短链氯化石蜡和中链氯化石蜡的测定方法 | |
| Jiang et al. | Fast determination of alkylphenol ethoxylates in leafy vegetables using a modified quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe method and ultra-high performance supercritical fluid chromatography–tandem mass spectrometry | |
| CN104330496B (zh) | 食用植物油中9种营养物的检测方法 | |
| CN104155375B (zh) | 同步衍生超声乳化微萃取气相色谱法测定环境水样中苯胺类化合物的方法 | |
| CN103837615B (zh) | 一种应用高效液相色谱法同时测定植物蜕皮激素类物质的方法 | |
| CN103852531B (zh) | 一种利用hplc-elsd测定啤酒中麦芽低聚糖的方法 | |
| Santos et al. | Simulated moving-bed adsorption for separation of racemic mixtures | |
| CN104502477A (zh) | 一种三氯乙醛废硫酸中有机物的分析方法 | |
| CN104198605B (zh) | 一种烟用热熔胶酚类抗氧化剂含量的测定方法 | |
| CN106645477A (zh) | 一种检测氟苯尼考胺残留的方法及应用 | |
| Yu et al. | Optimizations of packed sorbent and inlet temperature for large volume-direct aqueous injection-gas chromatography to determine high boiling volatile organic compounds in water | |
| Fa et al. | Color and alcohol removal for the simultaneous detection of amino acids and sugars in wine by two-dimensional ion chromatography | |
| Qiu et al. | Rapid analysis of 14 ultraviolet absorbents in plastic food contact materials by supercritical fluid chromatography on Sub-2-micron particles | |
| Zhong et al. | Multi-channel purge and trap system coupled with ion chromatography for the determination of alkylamines in cosmetics | |
| Xu et al. | Capillary liquid chromatographic analysis of fat-soluble vitamins and β-carotene in combination with in-tube solid-phase microextraction | |
| Li et al. | Rapid and inexpensive nylon-66-filter solid-phase extraction followed by gas chromatography tandem mass spectrometry for analyzing perfluorinated carboxylic acids in milk | |
| Acevedo et al. | A new SPME thermal desorption interface for HPLC | |
| CN103983711B (zh) | 一种金线莲苷定量分析检测方法 | |
| Liu et al. | Determination of protoberberine alkaloids in Coptis chinensis by microextraction and high performance liquid chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Song Wenwen Inventor after: Duan Fangmeng Inventor after: Huang Jinguang Inventor after: Sun Xiaomei Inventor after: Song Wenwen, Duan Fangmeng, Huang Jinguang, Sun Xiaomei, Shen Changpeng Inventor before: Song Wenwen Inventor before: Song Wenwen Duan Fangmeng |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150520 Termination date: 20160215 |