CN104458938B - 一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种阿戈美拉汀有关物质的测定方法。本发明采用氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈与磷酸盐缓冲液的混合溶剂作为流动相，用于在同一色谱条件下测定阿戈美拉汀和含有阿戈美拉汀的药物组合物的有关物质，可满足有关物质快速准确测定的要求，可用于阿戈美拉汀和含有阿戈美拉汀的药物组合物的质量控制。

Description

一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法
技术领域
本发明涉及一种高效液相色谱方法，特别是一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，属于药物分析检测技术领域。
背景技术
阿戈美拉汀是一种褪黑激素MT1、MT2受体激动剂，同时也是5-羟色胺受体拮抗剂。阿戈美拉汀通过对MT1、MT2受体的激动作用，调整患者的24h节律，改善患者的睡眠质量，促进抗抑郁症患者整体临床状况的改善；还可直接与神经突触后膜的5-羟色胺受体结合，发挥其抗抑郁作用，且并不增加突触间的5-羟色胺浓度。这使其在迅速发挥疗效的同时又避免了药物的副作用。主要用于治疗抑郁症。其结构式为：
测定阿戈美拉汀有关物质时，主要工艺杂质包括合成过程中引入的中间体7-甲氧基-1-萘基乙胺(杂质A)、起始原料7-甲氧基-1-萘基乙腈(杂质B)和副产物N,N-二-[2-(7-甲氧基-1-萘基)乙基]乙酰胺(杂质C)。因此，阿戈美拉汀有关物质测定时，需同时检出这三种杂质。
杂质C极性弱，与阿戈美拉汀相比极性差别大，CN200610165386.7报道，用C18柱分离阿戈美拉汀与中间体，在该条件下杂质C不能检出；另有CN201110455078.9报道，用梯度洗脱检出杂质C(即专利中的杂质H)，洗脱时间为60min，有洗脱时间长、效率低等缺点。在本发明中，采用以氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，在同一色谱条件下不使用梯度洗脱即能快速检出杂质C，洗脱时间为15min，使阿戈美拉汀与杂质A、杂质B、杂质C及其他未知杂质完全分离，极大缩短了分析时间。同时，在该条件下杂质A、B、C及阿戈美拉汀的检出灵敏度分别为供试品溶液进样浓度的0.002％，0.004％，0.007％，0.004％，表明此法的各杂质检出灵敏度高，可高效测定阿戈美拉汀有关物质，保证了阿戈美拉汀的质量可控，具有现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种在同一色谱条件下测定阿戈美拉汀有关物质的高效液相色谱方法，从而实现对阿戈美拉汀的质量控制。
本发明提供一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，选用氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈与磷酸盐缓冲液的混合溶剂作为流动相。
本发明提供一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，流动相中乙腈与缓冲液的比例为35～50:50～65。
本发明提供一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，所述缓冲盐选自磷酸二氢钾-磷酸、磷酸二氢钠-磷酸中的一种。
本发明提供一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，所述缓冲盐为磷酸二氢钠-磷酸。
本发明提供一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，所述缓冲液中缓冲盐浓度为0.01～0.05mol/L。
本发明提供一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，所述缓冲液pH值为2.0～4.0。
本发明提供一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，可按以下方法实现：
(1)取阿戈美拉汀适量，用流动相溶解，配制成每1mL含阿戈美拉汀0.05mg的样品溶液；
(2)设置流动相流速为1mL/min，检测波长为230nm；选用以氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱温为30℃；
(3)取步骤(1)的样品溶液20μL注入液相色谱仪，完成阿戈美拉汀有关物质的测定。
采用氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，能够完全分离阿戈美拉汀与杂质A、杂质B、杂质C及其他未知杂质，快速高效测定阿戈美拉汀有关物质。本发明克服了弱极性的杂质C由于与阿戈美拉汀极性差别大导致难以洗脱的缺点，解决了在同一色谱条件下不使用梯度洗脱而能测定阿戈美拉汀有关物质的问题，从而确保了阿戈美拉汀和含有阿戈美拉汀的药物组合物的质量可控。
附图说明
附图1阿戈美拉汀及杂质A、B、C的高效液相色谱图。
附图2阿戈美拉汀原料有关物质测定的高效液相色谱图。
附图3阿戈美拉汀及杂质A、B、C系统耐用性的高效液相色谱图。
附图4阿戈美拉汀片空白辅料有关物质测定的高效液相色谱图。
附图5阿戈美拉汀片有关物质测定的高效液相色谱图。
具体实施方式
以下实施例用于更好地理解本发明，但不限于本实施的范围。
实施例1
1.仪器与色谱条件
Agilent1100高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器，自动进样器。
氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)。
流动相为乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用磷酸调节pH3.5)(43:57)。
流动相流速为1mL/min，检测波长为230nm，柱温为30℃。
2.实验步骤
取阿戈美拉汀及杂质A、B、C各适量，加流动相溶解并制成每1mL含阿戈美拉汀0.05mg及杂质A0.1μg，杂质B0.07μg，杂质C0.05μg的混合溶液。精密量取混合溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。
3.结果
图1中保留时间为6.250min的色谱峰为阿戈美拉汀，3.383min的色谱峰为杂质A，9.308min的色谱峰为杂质B，18.599min的色谱峰为杂质C，在上述条件下，阿戈美拉汀可与杂质A、杂质B、杂质C及其他未知杂质完全分离，可满足中国药典的要求。
实施例2
1.仪器与色谱条件
Agilent1100高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器，自动进样器。
氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)。
流动相为乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用磷酸调节pH3.5)(43:57)。
流动相流速为1mL/min，检测波长为230nm，柱温为30℃。
2.实验步骤
取阿戈美拉汀适量，加流动相溶解并制成每1mL含阿戈美拉汀0.05mg的样品溶液。精密量取样品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。
3.结果
图2中保留时间为6.203min的色谱峰为阿戈美拉汀，杂质A、B、C均未检出，其他单个杂质均小于0.1％，总杂质小于1.0％，结果表明，阿戈美拉汀有关物质达到原料药的要求，本法可用于阿戈美拉汀的质量控制。
实施例3
1.仪器与色谱条件
Agilent1100高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器，自动进样器。
氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)。
流动相为乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用磷酸调节pH3.5)(46:54)。
流动相流速为1mL/min，检测波长为230nm，柱温为30℃。
2.实验步骤
取阿戈美拉汀及杂质A、B、C各适量，加流动相溶解并制成每1mL含阿戈美拉汀0.05mg及杂质A0.1μg，杂质B0.07μg，杂质C0.05μg的混合溶液。精密量取混合溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图3。
3.结果
图3中保留时间为5.525min的色谱峰为阿戈美拉汀，3.359min的色谱峰为杂质A，7.793min的色谱峰为杂质B，13.521min的色谱峰为杂质C。在流动相比例微调的条件下，阿戈美拉汀可以和杂质A、杂质B、杂质C及其他未知杂质完全分离，本法可用于阿戈美拉汀的质量控制。
实施例4
1.仪器与色谱条件
Agilent1100高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器，自动进样器。
氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)。
流动相为乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠缓冲液(用磷酸调节pH3.5)(43:57)。
流动相流速为1mL/min，检测波长为230nm，柱温为30℃。
2.实验步骤
取研成细粉的阿戈美拉汀片粉适量，加流动相超声溶解，滤过，取续滤液制成每1mL含阿戈美拉汀0.05mg的样品溶液。精密量取样品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，并同法进行空白辅料试验，结果见图4，图5。
3.结果
由图4可见，空白辅料不干扰测定。图5中保留时间为6.173min的色谱峰为阿戈美拉汀，杂质A、B、C均未检出，其他单个杂质均小于0.2％，总杂质小于1.0％，结果表明，阿戈美拉汀片有关物质达到片剂的要求，本法可用于含有阿戈美拉汀的药物组合物的质量控制。

Claims (3)

1.一种用高效液相色谱法测定阿戈美拉汀有关物质的方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
(1)取阿戈美拉汀适量，用流动相溶解，配制成每1mL含阿戈美拉汀0.05mg的样品溶液；
(2)设置流动相流速为1mL/min，检测波长为230nm；选用以氰基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱温为30℃；
(3)取步骤(1)的样品溶液20μL注入液相色谱仪，完成阿戈美拉汀有关物质的测定；
所述的流动相是乙腈与磷酸盐缓冲液＝35～50:50～65，缓冲液中缓冲盐浓度为0.01～0.05mol/L，pH值为2.0～4.0。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是缓冲液中采用的缓冲盐为磷酸二氢钾-磷酸、磷酸二氢钠-磷酸中的一种。
3.根据权利要求1和2任一所述的方法，其特征是所述缓冲盐为磷酸二氢钠-磷酸。
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