CN104374840A - 高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏乳膏中马来酸氯苯那敏含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏乳膏中马来酸氯苯那敏含量的方法，该方法的色谱柱：填料为辛烷基硅烷键合硅胶，250mm×4.6mm，5μm；流动相：将乙腈、水和三乙胺按以下体积比混合配制：乙腈：水：三乙胺=130~349：650~850：1~20，用磷酸调pH至3.0；洗脱方式：单通道等度洗脱；流速：0.7ml/min~1.2ml/min；检测波长：210~270nm；柱温：40℃；进样量：10μl；稀释溶剂、供试品溶液及对照品溶液的配制，并精密量取注入高效液相色谱仪，进行高效液相色谱测定分析。该测定方法具有高回收率、快速检测，且专属性强，稳定性高的优点。
Description
技术领域
本发明涉及高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏乳膏中马来酸氯苯那敏含量的方法。
背景技术
马来酸氯苯那敏是一种抗组胺药，为白色结晶性粉末，能选择性地阻断H1受体、拮抗组胺的作用而产生抗组胺效应，抗组胺药是治疗过敏性及瘙痒性皮肤疾病中应用最广的药物。《中华人民共和国药典》2010年版二部中收载有片剂、注射剂和滴丸剂，均采用高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏的含量，但未提供乳膏或凝胶制剂中马来酸氯苯那敏含量检测的方法。
单长青等在《光谱实验室》第28卷第3期发表的“PR-HPLC测定扑尔敏乳膏的含量”公开了一种建立高效液相色谱法测定扑尔敏乳膏的含量的方法。采用XTerra C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，以乙腈—水—三乙胺(15：80 ：1.5)用0.03mol/L pH=1的磷酸溶液调节pH值至3.0为流动相，检测波长为264nm，流速1.0mL/min，柱温30℃，用外标法测定。该测定方法中马来酸氯苯那敏在10~90mg·mL-1范围内呈良好线性，平均回收率为99.95％，RSD为0.46％，但其检测时间长且回收率不高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种回收率高、快速的高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏乳膏中马来酸氯苯那敏含量的方法。
本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏乳膏中马来酸氯苯那敏含量的方法，包括如下步骤：
（1） 色谱条件：
色谱柱：填料为辛烷基硅烷键合硅胶，250mm×4.6mm，5μm；
流动相：将乙腈、水和三乙胺按以下体积比混合配制：乙腈：水：三乙胺=130~349：650~850：1~20，用磷酸调pH至3.0；
洗脱方式：单通道等度洗脱；
流速：0.7ml/min~1.2ml/min；
检测波长：210~270nm；
柱温：40℃；
进样量：10μl；
（2）稀释溶剂的配制：将乙腈、水和三乙胺按以下体积比混合配制：乙腈：水：三乙胺=38~42：46~56：6~12，用磷酸调pH至3.0，为稀释用的溶液A；
（3）供试品溶液的配制：取含马来酸氯苯那敏的样品，加溶液A适量，置80℃水浴加热数分钟，振摇使马来酸氯苯那敏溶解，放冷，用溶液A稀释，摇匀，置冰浴中冷却30 ~50分钟，取出后迅速以0.45μm微孔滤膜过滤，放至室温，取续滤液作为供试品溶液；
（4）对照品溶液的配制：取马来酸氯苯那敏对照品，同法配制成每1ml中约含马来酸氯苯那敏0.5mg的对照品溶液；
（5）取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，进行高效液相色谱测定分析。
进一步地，所述高效液相色谱中检测器为紫外检测器，检测波长为262nm。
本发明具有如下有益效果：
（1）操作分析步骤简单快速，约6~7min，专属性强，马来酸氯苯那敏阴性样品不干扰马来酸氯苯那敏的含量测定，方法专属性良好；
（2）该测定方法平均回收率为101.34%，加样回收率良好，即该方法准确性较高；
（3）重复性高、精密度好，对同一批号马来酸氯苯那敏乳膏制备6份供试品溶液测定，其RSD均小于0.19%，对同一批号马来酸氯苯那敏乳膏连续5次测定，其RSD均小于0.25%。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细的说明，实施例仅是本发明的优选实施方式，不是对本发明的限定。
仪器与试药
仪器：Agilent 1260 Infinity 液相色谱仪，Agilent Cary 8454 UV-Vis检测器，Angilent 1200工作站；瑞士METTLER AE-240电子天平；DELTA320型PH计（梅特勒-托利多上海公司）；HH-601超级恒温水浴锅（江苏省金坛市环宇科学仪器厂）。色谱柱：Angilent C18 4.6×250mm，5μm；
试药：马来酸氯苯那敏乳膏（广东恒健制药有限公司，批号131101、131102、131103）；马来酸氯苯那敏乳膏对照品（中国药品生物制品检定所，批号0010301）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
实施例1马来酸氯苯那敏含量测定方法
（1）色谱条件
色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶为填料，Angilent C18 4.6×250mm，5μm；
检测器为紫外检测器，检测波长为262nm；流速1.0ml/min；洗脱方式为单通道等度洗脱；
柱温40℃；
流动相：将乙腈、水和三乙胺按以下体积比混合配制：乙腈：水：三乙胺=130~349：650~850：1~20，用磷酸调pH至3.0；
（2）溶液A（稀释溶剂）的配制：将乙腈、水和三乙胺按以下体积比混合配制：乙腈：水：三乙胺=38~42：46~56：6~12，用磷酸调pH至3.0；
（3）取马来酸氯苯那敏乳膏适量，约相当于马来酸氯苯那敏25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加溶液A适量，置80℃水浴加热数分钟，振摇使马来酸氯苯那敏溶解，放冷，用溶液A稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却40分钟，取出后迅速以0.45μm微孔滤膜过滤，放至室温，取续滤液作为供试品溶液；
（4）另取马来酸氯苯那敏对照品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含马来酸氯苯那敏0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
（5）精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，进行液相色谱测定分析，按外标法以峰面积计算。
取批号131101等3批进行了马来酸氯苯那敏的含量测定，结果见表1。
表1 马来酸氯苯那敏乳膏含量测结果
| 批号 | 131101 | 131102 | 131103 |
| 样品重量（g）（g） | 0.8753 | 0.8456 | 0.8611 |
| 含量（%） | 102.4 | 103.8 | 103.0 |
131101批马来酸氯苯那敏乳膏马来酸氯苯那敏高效液相图谱数据如下：
| 序号 | 保留时间/min | 峰高/uAU | 峰面积/ uAU*s | 理论塔板数/块 | 分离度 |
| 1 | 2.531 | 9555 | 57155 | 6256 | 0.000 |
| 2 | 6.895 | 89840 | 1399120 | 13706 | 32.075 |
131102批马来酸氯苯那敏乳膏马来酸氯苯那敏高效液相图谱数据如下：
| 序号 | 保留时间/min | 峰高/uAU | 峰面积/ uAU*s | 理论塔板数/块 | 分离度 |
| 1 | 3.030 | 24637 | 124553 | 9470 | 0.000 |
| 2 | 6.675 | 83792 | 1304090 | 13819 | 32.077 |
131103批马来酸氯苯那敏乳膏马来酸氯苯那敏高效液相图谱数据如下：
| 序号 | 保留时间/min | 峰高/uAU | 峰面积/ uAU*s | 理论塔板数/块 | 分离度 |
| 1 | 2.538 | 9415 | 55421 | 6379 | 0.000 |
| 2 | 7.085 | 88406 | 1370984 | 13776 | 32.064 |
从以上结果可知：三批中试样品中马来酸氯苯那敏的含量为102.4%~103.8%，且其检测时间较短，约6~7min。
实施例2 专属性试验
取马来酸氯苯那敏乳膏样品及按上述配置方法的缺马来酸氯苯那敏的阴性样品各约0.8406g，置50ml量瓶中，照含量测定项下的方法分别制成供试品溶液和阴性样品溶液，分别精密吸取马来酸氯苯那敏对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪中测定分析。从测定结果可见，供试品溶液和对照品溶液中氯苯那敏峰保留时间一致，而阴性样品溶液色谱中，在与对照品溶液中氯苯那敏峰相应位置处未出现明显的色谱峰，表明阴性样品不干扰马来酸氯苯那敏的含量测定，方法专属性良好。
实施例3 线性关系考察试验
精密称取马来酸氯苯那敏对照品28.21mg（纯度为99.7%），置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得马来酸氯苯那敏对照品储备液（浓度为1.1250mg/ml）。精密量取储备液1.0ml、2.0ml、4.0ml、7.0ml、9.0ml，分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密量取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，进行测定分析。以马来酸氯苯那敏对照品进样浓度x（mg/ml）为横坐标，氯苯那敏峰面积y为纵坐标进行线性回归，测定结果见表2。
表2马来酸氯苯那敏含量测定线性关系考察试验结果（n=5）
由上述试验结果可知：马来酸氯苯那敏进样浓度在0.1125~1.0125mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
实施例4 精密度试验
取马来酸氯苯那敏对照品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液10μl，重复进样测定6次，结果见表3，试验结果表明，该测定方法精密度良好。
表3 马来酸氯苯那敏含量测定的精密度试验结果（n=6）
实施例5 稳定性试验
取马来酸氯苯那敏乳膏适量（约相当于马来酸氯苯那敏25mg），精密称定，置50ml量瓶中，加[乙腈-1.5%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）（40:60）]适量，置80℃水浴加热数分钟，振摇使马来酸氯苯那敏溶解，放冷，用[乙腈-1.5%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）（40:60）]稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却30分钟，取出后迅速滤过，放至室温，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液10μl，每隔2小时进样测定一次，在8小时内共测定5次，见表4，试验结果表明，供试品溶液在8小时内基本稳定。
表4稳定性试验结果
实施例6 重复性试验
取马来酸氯苯那敏乳适量（约相当于马来酸氯苯那敏25mg），共六份，分别精密称定，置50ml量瓶中，加[乙腈-1.5%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）（40:60）]适量，置80℃水浴加热数分钟，振摇使马来酸氯苯那敏溶解，放冷，用[乙腈-1.5%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）（40:60）]稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却50分钟，取出后迅速滤过，放至室温，取续滤液作为供试品溶液；另取马来酸氯苯那敏对照品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液（0.5011mg/ml）。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定马来酸氯苯那敏的含量，见表5，试验结果表明，本法重复性良好。
表5 重复性试验结果（n=6）
实施例7 回收率试验
精密称取已知含量的马来酸氯苯那敏乳（含量为标示含量的102.6%）适量（约相当马来酸氯苯那敏12.5mg），精密称定，共9份，分别置50ml量瓶中，分别精密加入马来酸氯苯那敏对照品10mg、12.5mg和15mg，各三份，加[乙腈-1.5%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）（40:60）]适量，置80℃水浴加热数分钟，振摇使马来酸氯苯那敏溶解，放冷，用[乙腈-1.5%三乙胺溶液（用磷酸调pH至3.0）（40:60）]稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却45分钟，取出后迅速滤过，放至室温，取续滤液作为供试品溶液；另取马来酸氯苯那敏对照品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，进行测定分析，计算，结果见表6，结果表明：回收率在99.98%～103.5%之间，平均回收率为101.34%，加样回收率良好，即该方法准确性较高。
表6 马来酸氯苯那敏回收率试验结果（n=9）
Claims (2)
1.高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏乳膏中马来酸氯苯那敏含量的方法，包括如下步骤：
（1） 色谱条件：
色谱柱：填料为辛烷基硅烷键合硅胶，250mm×4.6mm，5μm；
流动相：将乙腈、水和三乙胺按以下体积比混合配制：乙腈：水：三乙胺=130~349：650~850：1~20，用磷酸调pH至3.0；
洗脱方式：单通道等度洗脱；
流速：0.7ml/min~1.2ml/min；
检测波长：210~270nm；
柱温：40℃；
进样量：10μl；
（2）稀释溶剂的配制：将乙腈、水和三乙胺按以下体积比混合配制：乙腈：水：三乙胺=38~42：46~56：6~12，用磷酸调pH至3.0，为稀释用的溶液A；
（3）供试品溶液的配制：取含马来酸氯苯那敏的样品，加溶液A适量，置80℃水浴加热数分钟，振摇使马来酸氯苯那敏溶解，放冷，用溶液A稀释，摇匀，置冰浴中冷却30 ~50分钟，取出后迅速以0.45μm微孔滤膜过滤，放至室温，取续滤液作为供试品溶液；
（4）对照品溶液的配制：取马来酸氯苯那敏对照品，同法配制成每1ml中约含马来酸氯苯那敏0.5mg的对照品溶液；
（5）取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，进行高效液相色谱测定分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱中检测器为紫外检测器，检测波长为262nm。
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| CN112540136A (zh) * | 2020-11-18 | 2021-03-23 | 湖北远大天天明制药有限公司 | 萘敏维滴眼液成分的分离与检测方法 |
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