CN104502499A - 一种异构体的高效液相检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及Suvorexant及其异构体的液相分离检测方法，属于分离检测技术领域。所述检测方法包括：采用poroshell 120EC-C18，4.6mm X 100mm，2.7μm的色谱柱，采用pH为2.5的高氯酸盐水溶液、甲醇或乙腈作为流动相，在一定条件下进行等度洗脱，所述方法可以有效的分离检测Suvorexant及其异构体杂质，并且色谱峰峰型良好，出峰时间快，分离度、专属性好。
Description
技术领域
本发明涉及Suvorexant及其异构体杂质的一种HPLC分离检测方法，属于制药技术领域。
背景技术
Suvorexant(商品名Belsomra)，是一种Orexin(食欲素)受体拮抗剂，可影响Orexin通路的信号传导，临床用于治疗失眠等疾病；其结构如下式所示：
在Suvorexant的制备过程中，易生成异构体杂质(01)，对Suvorexant的HPLC检测和质量控制带来困难，需要研究有效的HPLC检测方法，以便对产物进行检测和控制质量。Suvorexant的异构体杂质(01)结构如下：
发明内容
发明概述
本发明提供了一种简便、效率、经济和适用的HPLC检测分离Suvorexant、其异构体杂质(01)及其它杂质的方法，能够有效分离检测各物质。
本发明人通过多次试验尝试，通过筛选色谱柱和配合相适应的流动相、流速、柱温等检测条件以期许获得一种适用于Suvorexant、其异构体杂质(01)及其它杂质的分离检测的方法。最终发现在采用poroshell120EC-C18的4.6mmX100mm，2.7μm的色谱柱，并采用pH2.5的高氯酸盐水溶液与甲醇或乙腈的混合溶液作为流动相进行等度洗脱等条件下可以有效的分离检测。所述方法可使Suvorexant、其异构体杂质(01)及其它杂质得以分离，各物质的色谱峰峰型良好，出峰时间快，分离度高、专属性好。
术语定义
术语“分离度”是指HPLC检测中，相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。
本发明中，浓度是指溶质的质量与溶剂的体积的比值，如高氯酸钠的浓度是指高氯酸钠的质量与水的体积的比值。
本发明中，提及两种组分的比为100:0时是指一种组分为100％，另外一种组分为0，也即只加入一种组分。
发明详述
发明人通过研究，开发了一种分离检测Suvorexant(化合物(1))、其异构体杂质(01)的方法，
包括：在高效液相色谱仪上进行检测，且
色谱柱为poroshell 120EC-C18，4.6mmX100mm，2.7μm；检测波长为254nm；
稀释剂为有机溶剂和水的混合溶剂，有机溶剂和水的体积比为100:0-30:70；
柱温为40℃-50℃；
流速为0.8mL/min-1.2mL/min；
流动相为A相和B相，A相为高氯酸钠和高氯酸的水溶液与有机溶剂的混合液，高氯酸钠和高氯酸的水溶液与有机溶剂体积比为9:1；流动相B相为有机溶剂；A相与B相的体积比为30:70-40:60。
所述有机溶剂为甲醇或乙腈。在一些实施方式中，所述有机溶剂为甲醇。
可以使用的检测器有紫外检测器；检测的样品的进样量是5μL-100μL；检测运行时间可以是7min-10min。
在一些实施例中，所述高氯酸钠和高氯酸的水溶液中高氯酸钠的浓度为14.05g/L。
在一些实施例中，所述有机溶剂为甲醇。
在一些实施例中，所述流动相中A相与B相的体积比为35:65。
在一些实施例中，稀释剂中，有机溶剂和水的体积比为50:50。在一些实施例中，稀释剂中，有机溶剂为甲醇，甲醇和水的体积比为50:50。
在一些实施例中，所述流动相的流速为1.0mL/min。
在一些实施例中，所述柱温为45℃。
在一些实施例中，一种检测Suvorexant、其异构体杂质(01)的方法包括：在高效液相色谱仪上进行，检测器是紫外检测器，检测波长为254nm；
稀释剂为甲醇和水，甲醇和水的体积比为50:50；
色谱柱是poroshell 120EC-C18，4.6X100mm，2.7μm；
流速为1.0mL/min；
进样量为10μL；
柱温为45℃；
运行时间为10min；
流动相为A相和B相，A相为高氯酸钠和高氯酸的水溶液和甲醇的混合溶液，其中高氯酸钠和高氯酸的水溶液与甲醇的体积比为9:1；所述高氯酸钠和高氯酸的水溶液中高氯酸钠的浓度为14.05g/L，高氯酸钠和高氯酸的水溶液的pH为2.5；B相为甲醇；A相和B相体积比为35:65。
所述检测Suvorexant、其异构体杂质(01)的方法能够高效地将两种物质分离，方法简便，可以用于生产中质量控制。
附图说明
图1示实施例1检测结果；
图2示实施例2检测结果；
图3示实施例3检测结果。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。
本发明中，g表示克，mL表示毫升，μL表示微升，mm表示毫米，nm表示纳米，mm表示微米，min表示分钟，。
实施例1
检测条件：
仪器：Agilent高效液相色谱仪，Agilent DAD紫外检测器，检测波长：254nm；
色谱柱：poroshell 120EC-C18，4.6mmX100mm，2.7μm；
稀释剂：甲醇水溶液，甲醇和水体积比为50:50；
流动相：取高氯酸钠14.05g，加1000mL水溶解，用高氯酸调pH至2.5，0.2μm水系滤膜过滤，超声5min脱气，然后与甲醇按照体积比9:1混匀即得A相；流动相B相为甲醇；A相与B相体积比为35:65；
流速：1.0mL/min；
柱温：45℃；
进样体积：10μL；
运行时间：10min；
检测步骤：
称取Suvorexant样品(含有异构体杂质(01))10mg，置于100mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀得到样品溶液。
取样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图1。图1中1号峰为Suvorexant色谱峰，2号峰为异构体杂质(01)色谱峰，二者分离度为2.03。
实施例2
检测条件：
仪器：Agilent高效液相色谱仪，Agilent DAD紫外检测器，检测波长：254nm；
色谱柱：poroshell 120EC-C18，4.6mmX100mm，2.7μm；
稀释剂：甲醇水溶液，甲醇和水体积比为50:50；
流动相：A相：称取高氯酸钠14.05g，加1000mL水溶解，用高氯酸调pH至2.5，0.2μm水系滤膜过滤，超声5min脱气，与甲醇按照体积比9:1混匀即得；流动相B相为甲醇；A相与B相体积比37:63；
流速：1.0mL/min；
柱温：45℃；
进样体积：10μL；
运行时间：10min；
检测步骤：
精密称取Suvorexant样品约10mg，置于100mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀得到样品溶液。
取样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图2。图2中1号峰为Suvorexant色谱峰，2号峰为异构体杂质(01)色谱峰，二者分离度2.21。
实施例3
检测条件：
仪器：Agilent高效液相色谱仪，Agilent DAD紫外检测器，检测波长：254nm；
色谱柱：poroshell 120EC-C18，4.6mmX100mm，2.7μm；
稀释剂：甲醇水溶液，甲醇和水体积比为50:50；
流动相：A相：称取高氯酸钠14.05g，加1000mL水溶解，用高氯酸调pH至2.5，0.2μm水系滤膜过滤，超声5min脱气，与甲醇按照体积比9:1混匀即得；流动相B相为甲醇；A相与B相体积比40:60；
流速：1.0mL/min；
柱温：45℃；
进样体积：10μL；
运行时间：10min；
检测步骤：
精密称取Suvorexant样品约10mg，置于100mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀得到样品溶液。
取样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图3。图3中1号峰为Suvorexant色谱峰，2号峰为异构体杂质(01)色谱峰，二者分离度2.49。
本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。
Claims (8)
1.一种分离检测Suvorexant、其异构体杂质(01)的方法，
包括：在高效液相色谱仪上进行检测，且
色谱柱为poroshell 120 EC-C18，4.6mm X 100mm，2.7μm；检测波长为254nm；
稀释剂为有机溶剂和水的混合溶剂，其中有机溶剂和水的体积比为100:0-30:70；
柱温为40℃-50℃；
流速为0.8mL/min-1.2mL/min；
流动相为A相和B相，A相为高氯酸钠和高氯酸的水溶液与有机溶剂的混合液，高氯酸钠和高氯酸的水溶液pH为2.5，高氯酸钠和高氯酸的水溶液与有机溶剂体积比为9:1；流动相B相为有机溶剂。
2.根据权利要求1所述的方法，A相与B相的体积比为30:70-40:60。
3.根据权利要求1或2所述的方法，所述有机溶剂为甲醇或乙腈。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，所述高氯酸钠和高氯酸的水溶液中，高氯酸钠的浓度为14.05g/L。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，稀释剂中有机溶剂和水体积比为50:50。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，柱温为45℃。
7.根据权利要求1-6任一所述的方法，流速为1.0mL/min。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，A相与B相的体积比为35:65，有机溶剂为甲醇。
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| CN103923068A (zh) * | 2014-02-13 | 2014-07-16 | 武汉珈瑜科技有限公司 | 用于制备suvorexant的化合物及其制备方法 |
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| CN107192766B (zh) * | 2016-03-14 | 2022-03-04 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种用hplc测定苏沃雷生手性异构体的方法 |
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