CN105717204B - 一种依折麦布光学异构体的检测方法及其应用 - Google Patents
一种依折麦布光学异构体的检测方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种依折麦布光学异构体的检测方法及其应用，其色谱条件如下：色谱柱：硅胶柱、氨基柱、氰基柱、手性柱；流动相：正庚烷(A)——乙醇(B)；其配比为95:5～50:50；流动相流速：0.2‑2.0mL/min；检测波长：200～400nm；柱温：25～40℃；进样量：1‑40μL；检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。本发明提供的检测方法具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，分离度符合标准，可快速准确的检测出依折麦布的5种光学异构体，这对于胆固醇吸收抑制剂依折麦布的质量控制具有十分重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种依折麦布光学异构体的检测方法及其应用。
背景技术
依折麦布(英文名：Ezetimibe)，分子式为C24H21F2NO3，分子量为409.43，CAS登录号：163222-33-1。依折麦布纯品为白色固体，其熔点为162.0～167.0℃。其结构式如式I所示：
依折麦布是一类全新的降胆固醇药物，治疗原发性高胆固醇血症。相对于他汀类药物抑制肝脏中胆固醇的合成，依折麦布则是通过选择性地抑制胆固醇在肠道中的吸收而发挥作用。另外，依折麦布与他汀类药物联用可以达到更为优越的降低低密度脂蛋白胆固醇的疗效。目前，国内临床应用依折麦布主要为进口制剂，如依折麦布片剂(益适纯)、依折麦布\辛伐他汀复方片剂(葆至能)等。
依折麦布的结构有三个手性中心，理论上存在8种构型。依折麦布为RSS构型，其它构型是其光学异构体。其中，RRR与SSS构型异构体作为有关物质检查对象列入进口注册标准，但是其余5个构型的异构体(如下所示)目前没有标准控制方法。因此建立一种针对依折麦布5种光学异构体的检测方法，对提高依折麦布原料药及制剂的质量标准具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种依折麦布5种光学异构体的检测方法。
本发明的再一个目的是提供一种依折麦布5种光学异构体检测方法的应用。
该检测方法采用正相高效液相色谱法，可以采用相同或不同的色谱柱检测RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体
其色谱条件如下：
RRS、SSR异构体选用色谱柱：Zorbax NH2柱(4.6×250mm,5μm)、SpherisorbSilica柱(4.6×150mm,5μm)、Spherisorb CN柱(4.6×150mm,5μm)、Chiralpak AD-H柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak OJ-H柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak IA柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak IC柱(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-1(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-2(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-3(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-4(4.6×250mm,5μm)，最优选为Chiralpak IA柱(4.6×250mm,5μm)。
SRR、SRS、RSR异构体选用色谱柱：Zorbax NH2柱(4.6×250mm,5μm)、SpherisorbSilica柱(4.6×150mm,5μm)、Spherisorb CN柱(4.6×150mm,5μm)、Chiralpak AD-H柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak OJ-H柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak IA柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak IC柱(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-1(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-2(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-3(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-4(4.6×250mm,5μm)，最优选为Lux Cellulose-2(4.6×250mm,5μm)。
流动相组成：正己烷(A)—异丙醇(B)、正己烷(A)—乙醇(B)、正庚烷(A)—异丙醇(B)、正庚烷(A)—乙醇(B)、正已烷(A)—四氢呋喃(B)、正庚烷(A)—四氢呋喃(B)；优选组成：正庚烷(A)—乙醇(B)；
流动相配比(A:B)：95:5～50:50；
流动相流速：0.2-2.0mL/min；优选1.0-2.0mL/min；更优选1.0mL/min；
检测波长：200～400nm；优选200～300nm；更优选232nm；
柱温：25～40℃；优选40℃；
检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。
溶解供试品的溶剂为乙醇、异丙醇、乙腈、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)，优选为乙醇。
供试品溶液的浓度为0.1-10mg/mL，优选为1.0mg/mL。
进样量为1-40μL，优选为20μL。
根据本发明提供的检测方法，其中，所述色谱柱选自Zorbax NH2柱(4.6×250mm,5μm)、Spherisorb Silica柱(4.6×150mm,5μm)、Spherisorb CN柱(4.6×150mm,5μm)、Chiralpak AD-H柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak OJ-H柱(4.6×250mm,5μm)、ChiralpakIA柱(4.6×250mm,5μm)、Chiralpak IC柱(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-1(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-2(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-3(4.6×250mm,5μm)、Lux Cellulose-4(4.6×250mm,5μm)、最优选为Chiralpak IA柱(4.6×250mm,5μm)与LuxCellulose-2(4.6×250mm,5μm)。
本发明提供的一种依折麦布光学异构体的检测方法，实现了依折麦布与5个光学异构体的分离，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，达到主成分与异构体杂质、异构体杂质之间的分离度均大于1.5，可用于依折麦布的质量控制，具有实用价值。
附图说明
图1是实施例3中系统适用性溶液1的液相色谱图；
图2是实施例4中系统适用性溶液1的液相色谱图；
图3是实施例5中系统适用性溶液1的液相色谱图；
图4是实施例6中系统适用性溶液1的液相色谱图；
图5是实施例7中系统适用性溶液1的液相色谱图；
图6是实施例8中系统适用性溶液1的液相色谱图；
图7是实施例9中系统适用性溶液2的液相色谱图；
图8是实施例10中系统适用性溶液3的液相色谱图；
M代表依折麦布信号峰。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例1
溶剂的选择及溶液的浓度的选择：
溶解样品的溶剂的选择，我们分别用二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙醇、异丙醇、乙腈溶解样品，对样品都易溶。二甲基亚砜、二甲基甲酰胺在液相色谱柱产生较大溶剂峰，且容易残留在进样针和色谱柱中影响检测，考虑优先选择乙醇或异丙醇。由于流动相选用正庚烷—乙醇体系，最后优选乙醇作为样品溶剂。
我们使用乙醇作为样品的溶剂，分别配成0.2mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、2mg/mL、5mg/mL和10mg/mL，虽然都能进行分离，但是由于0.2mg/mL的响应太小，而10mg/mL的浓度太大不利于样品的分离，我们最终选择1.0mg/mL作为供试品溶液的浓度。
实施例2
流动相种类及流速的选择：
我们选择常用的正相液相色谱流动相体系：正己烷(A)—异丙醇(B)、正己烷(A)—乙醇(B)、正庚烷(A)—异丙醇(B)、正庚烷(A)—乙醇(B)、正已烷(A)—四氢呋喃(B)、正庚烷(A)—四氢呋喃(B)；优选组成：正庚烷(A)—乙醇(B)筛选，结果显示正己烷体系中样品主峰较宽，与杂质的分离度不能达到1.5以上；正庚烷体系中主峰与杂质的分离度都大于1.5，相比样品主峰的理论塔板数，正庚烷—乙醇体系高于正庚烷—异丙醇体系和正庚烷—四氢呋喃体系，故优选正庚烷—乙醇作为流动相体系。
我们对流速进行了考察，0.2-2.0mL/min这个范围都能实现技术方案，但是0.2mL/min的流速太慢，样品出峰时间太长，峰形过宽；2.0mL/min的流速导致样品出峰时间过早，不能与杂质完全分离。选择1.0mL/min的流速可以实现合适的出峰时间，且分离度达到要求。
实施例3
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由安捷伦公司生产的Zorbax NH2手性分析柱(4.6×250mm,5μm)；流动相比例正己烷:乙醇(90:10)；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
我们将RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体1μg的溶液作为系统适用性1溶液。进样20μL，记录色谱图，结果见图1。
实施例4
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由Warers公司生产的Spherisorb Silica柱(4.6×150mm,5μm)；流动相比例正己烷:异丙醇(90:10)；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
我们将RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体1μg的溶液作为系统适用性1溶液。进样20μL，记录色谱图，结果见图2。
实施例5
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛璐公司生产的Chiralpak AD-H柱(4.6×250mm,5μm)；流动相比例正庚烷:四氢呋喃(85:15)；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
我们将RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体1μg的溶液作为系统适用性1溶液。进样20μL，记录色谱图，结果见图3。
实施例6
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由菲罗门公司生产的Lux Cellulose-1(4.6×250mm,5μm)；流动相比例正己烷:四氢呋喃(80:20)；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
我们将RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体1μg的溶液作为系统适用性1溶液。进样20μL，记录色谱图，结果见图4。
实施例7
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛璐公司生产的Chiralpak IA手性分析柱(4.6×250mm,5μm)；流动相比例正庚烷:乙醇(90:10)；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
我们将RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体1μg的溶液作为系统适用性1溶液。进样20μL，记录色谱图，结果见图5。
实施例8
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由菲罗门公司生产的Lux Cellulose-2手性分析柱(4.6×250mm,5μm)；流动相比例正庚烷—乙醇(83:17)；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
我们将RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含RRS、SSR、SRR、SRS、RSR异构体1μg的溶液作为系统适用性1溶液。进样20μL，记录色谱图，结果见图6。
实施例9
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛璐公司生产的Chiralpak IA手性分析柱(4.6×250mm,5μm)；流动相比例正庚烷:乙醇(95:5)；柱温：40℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
我们将RRS、SSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含RRS、SSR异构体1μg的溶液作为系统适用性2溶液。连续进样5针，每针20μL，记录色谱图。图7结果显示，主成分与异构体、异构体之间分离度良好，主成分与异构体峰面积重复性结果如表1。
表1 系统适用性2溶液的精密度试验结果
实施例10
1)仪器与检测条件
美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由菲罗门公司生产的Lux Cellulose-2手性分析柱(4.6×250mm,5μm)；流动相比例正庚烷—乙醇(85:15)；柱温：40℃；流速：1.0mL/min；检测波长：232nm。
2)实验步骤
将SRR、SRS、RSR异构体取适量用乙醇溶解，加入适量依折麦布供试品中，用流动相配制成每ml含依折麦布1mg，含SRR、SRS、RSR异构体1μg的溶液作为系统适用性3溶液。连续进样5针，每针20μL，记录色谱图。图8结果显示，主成分与异构体、异构体之间分离度良好，主成分与异构体峰面积重复性结果如表2。
表2 系统适用性3溶液的精密度试验结果
Claims (6)
1.一种依折麦布光学异构体的检测方法，其特征在于，该检测方法采用正相液相色谱法，可同时检测以下5种依折麦布光学异构体；
其色谱条件如下：
色谱柱：Chiralpak IA柱、规格为4.6×250mm,5μm，或Lux Cellulose-2、规格为4.6×250mm,5μm；
流动相：正庚烷(A)—乙醇(B)，其配比95:5～85:15；
流动相流速：1.0mL/min；
检测波长：232nm；
柱温：40℃；
检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器；
进样量为20μL。
2.根据权利要求1所述的检测方法，溶解供试品的溶剂为乙醇、异丙醇、乙腈、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
3.根据权利要求2所述的检测方法，溶解供试品的溶剂为乙醇。
4.根据权利要求1所述的检测方法，供试品溶液的浓度为0.2-2.0mg/mL。
5.根据权利要求4所述的检测方法，供试品溶液的浓度为1.0mg/mL。
6.根据权利要求1-5任一项所述的检测方法在控制依折麦布原料药及其制剂的质量方面的用途。
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