CN115453004B - 一种依折麦布阿托伐他汀钙片中有关物质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种运用高效液相色谱检测依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的方法。考虑依折麦布、阿托伐他汀钙及其有关物质的理化性质，采用菲罗门Chiral MD（2）RH（250mm×4.6mm，3μm）反相色谱柱，分别选择水‑乙腈、含酸的乙腈为流动相，设置合适的流速、柱温、检测波长及进样体积，梯度洗脱。结果表明该方法可有效分离依折麦布阿托伐他汀钙片中7种依折麦布异构体杂质，各异构体杂质峰与两主峰之间的分离度大于1.5，主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。该方法流动相配制简单、专属性强、分离度高、灵敏度高、准确度好，提高了分离检测的效率，为依折麦布阿托伐他汀钙片异构体研究提供了可靠的方法参考，对于依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测具有实际应用价值。

Description

一种依折麦布阿托伐他汀钙片中有关物质的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种运用高效液相色谱检测依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体有关物质的方法。
背景技术
依折麦布是一种口服、强效的降脂药物，其作用机制与其它降脂药物不同，本品附着于小肠绒毛刷状缘，抑制胆固醇的吸收，从而降低小肠中的胆固醇向肝脏中转运，使得肝脏胆固醇贮量降低从而增加血液中胆固醇的清除，其结构如下所示：
阿托伐他汀钙是一种高选择性3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂，可以使血胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B和甘油三酯的水平降低，其结构如下所示：
阿托伐他汀钙与依折麦布联合应用，可以降低他汀类药引起的转氨酶升高、肌肉痛、血糖升高等不良反应的风险，且降血脂的效果远超阿托伐他汀钙和依折麦布单独使用效果，同时能提高患者对单一他汀类药物的耐受性，阿托伐他汀钙与依折麦布联合是一种安全有效的选择。
从结构上看依折麦布共含有3个手性中心，共有7个异构体，部分异构体理化性质相似，难以通过一般的液相色谱法进行分离鉴定。依折麦布的光学异构体杂质，在药物的生产和储存过程当中须进行质量控制。依折麦布异构体杂质化学式结构如下：
表1 依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体杂质列表
暂未检索到依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体杂质的检测方法，目前可查找的方法主要集中在单个依折麦布原料中异构体杂质的检测，主要涉及以下四种方法：一种分离测定依折麦布中异构体的方法，陈静（文件1）；USP43药典中依折麦布原料异构体的检测方法（文件2）；一种依折麦布光学异构体的检测方法及其应用，郝英魁（文件3）；一种分离依折麦布及其光学异构体的液相色谱方法，曾玉玲（文件4）。
文件1和文件2杂质研究较为全面，均为7个异构体，文件1采用正相色谱条件；文件2采用两根色谱柱串联的反相色谱条件，需要控制柱温至5℃，液相条件相对严苛；文件3和文件4研究的异构体数量分别为5个和2个，异构体杂质分离数量较少，均使用正相色谱条件。在检测依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体杂质中除考虑依折麦布异构体与依折麦布主峰及各异构体间的分离度应符合要求外，还要考虑依折麦布异构体与阿托伐他汀钙及其有关物质的分离，目前还没有针对依折麦布阿托伐他汀钙复方制剂中依折麦布异构体分离报道。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术对依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体有关物质分离较难的问题，提供一种简单易操作可分离出依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体分析方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明公开了一种依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测方法，根据本发明的实施方式，运用高效液相色谱法，采用反相色谱柱，以水相和有机相混合物为A流动相，有机相为B流动相，设置流速、柱温、检测波长及进样体积，以体积比计，按照以下梯度程序洗涤：
以流动相A 100%，流动相B 0%开始洗脱，持续洗脱至80min；逐渐减少流动相A比例，增加流动相B比例，至80.1min将流动相A比例调整至10%，流动相B比例调整至90%；持续洗脱至90min，至90.1min，流动相A调整至100%，流动相B调整至0%；保持该流动相比例继续洗脱至100min；该检测方法能同时检测依折麦布阿托伐他汀钙片中7种依折麦布异构体。
发明人在实验过程中发现采用正相体系时，主要以正己烷、乙醇、正庚烷、异丙醇等为流动相，试剂粘度较大、成本高且毒性大，一般均只能以等度洗脱的方式进行洗脱，方法开发过程中流动相配制操作麻烦，而本发明除考虑依折麦布异构体与依折麦布主峰及各异构体间的分离度应符合要求外，还要考虑依折麦布异构体与阿托伐他汀钙及其有关物质的分离，仅用等度洗脱较难达到分离效果。
发明人研究了不同的反相色谱柱串联：菲罗门 chiral MD(2)-RH 5U(250mm×4.6mm,5μm)与chiral MD(2)-RH 5U(250mm×4.6mm,5μm)串联、菲罗门 chiral MJ(2)-RH5U(250mm×4.6mm,5μm)与菲罗门 chiral MD(2)-RH 5U(250mm×4.6mm,5μm)串联、菲罗门chiral MX(2)-RH 5U(250mm×4.6mm,5μm)与菲罗门chiral MD(2)-RH 5U(250mm×4.6mm,5μm)串联，综合考虑分离效果最好的为菲罗门 chiral MD(2)-RH 5U(250mm×4.6mm,5μm)相同色谱柱串联，并在该基础上考察单根色谱柱与串联色谱柱的区别，单根色谱柱可以使杂质全部分离，但运行时间过长且柱效低，两根串联可明显提高杂质和主峰的理论板数，但异构体G易与异构体D和依折麦布主峰重叠。
发明人首先考虑使用小粒径单根色谱柱，一方面手性色谱柱价格昂贵，采用单根色谱柱可以节约经费；另一方面小粒径色谱柱可提高理论板数改善柱效；拟采用菲罗门chiral MD(2)-RH 3U(250mm×4.6mm，3μm)色谱柱，同时提高供试品浓度（1mg/ml）以期提高依折麦布主峰与前杂的分离度及理论板数。经研究可知异构体G与异构体D完全重叠，流动相比例为60:40(0.1%三氟乙酸水:0.1%三氟乙酸乙腈)时异构体G与主峰的分离度最好。异构体D与异构体G重叠后，依折麦布主峰出峰提前，因此，需重点考虑将异构体杂质D与异构体杂质G两者合并控制。
根据本发明的实施方式，发明人采用反相色谱法梯度洗脱对依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体进行分离，本发明所用流动相体系简单，仅需要一根色谱柱即可达到分离效果，本发明采用的高效液相色谱法中的反相色谱柱优选自菲罗门Chiral MD（2）-RH，规格为250mm×4.6mm，3μm。
根据本发明的实施方式，阿托伐他汀钙有关物质相关杂质干扰了依折麦布异构体杂质的检测，阿托伐他汀钙及其杂质对流动相的pH较为敏感，而流动相pH值对依折麦布及其异构体杂质影响较小，为减少阿托伐他汀钙有关物质杂质对依折麦布异构体杂质的干扰，确定流动相A为水与有机相的混合物，优选水-乙腈体系（让阿托伐他汀钙及其杂质在依折麦布异构体之后出峰）。
根据本发明的实施方式，流动相B为有机相，选自乙腈，优选地，乙腈中含有酸溶液（保证阿托伐他汀钙可以出峰），其中，酸溶液选自磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一种或几种，优选三氟乙酸，乙腈与三氟乙酸的体积比为100:0.1。
经对流动相组成、梯度及柱温的优化及筛选，确定本发明的分析方法。根据本发明的实施方式，本发明公开的高效液相色谱法中，当流速选自0.58~0.62mL/min，柱温选自8~12℃，检测波长选自248nm，进样体积选自20μL时，能够有效的分离依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体，阿托伐他汀钙有关物质相关杂质不干扰依折麦布异构体杂质的检测，从而确保了依折麦布阿托伐他汀钙片的质量可控。优选地，流速选自0.6mL/min，柱温选自10℃。
根据本发明的实施方式，按中国药典2020年版四部通则<0512>（高效液相色谱法）及通则<9101>（药品质量标准分析方法验证指导原则）的定义和验证方法，进行专属性验证，结果表明该方法可有效分离依折麦布阿托伐他汀钙片中所有依折麦布异构体杂质，并且通过加校正因子的主成分外标法有效控制各已知异构体杂质含量，各异构体杂质峰与两主峰之间的分离度大于1.5，主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。结果见表2。
表2 依折麦布阿托伐他汀钙片与各异构体色谱分离参数结果
本发明的有益效果是：本发明首次对依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体进行分离，本发明公开的检测方法可以同时分离7个依折麦布异构体杂质，该方法流动相配制简单、专属性强、分离度高、灵敏度高、准确度好，提高了分离检测的效率。为依折麦布阿托伐他汀钙片异构体研究提供了可靠的方法参考，对于依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测具有实际应用价值。
附图说明
图1所示为实施例1空白溶剂的高效液相色谱图；
图2所示为实施例1依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体系统适用性的高效液相色谱图；
图3所示为实施例1依折麦布阿托伐他汀钙片对照品的高效液相色谱图；
图4所示为实施例1依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体的高效液相色谱图；
图5所示为实施例2依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体柱温8℃系统适用性的高效液相色谱图；
图6所示为实施例3依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体柱温12℃系统适用性的高效液相色谱图；
图7所示为实施例4 依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体流速0.58mL/min系统适用性的高效液相色谱图；
图8所示为实施例5依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体流速0.62mL/min系统适用性的高效液相色谱图；
图9所示为实施例6依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体色谱柱MD（RH）+MD(RH)串联系统适用性的高效液相色谱图；
图10所示为实施例7依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体色谱柱MJ（RH）+MD(RH)串联系统适用性的高效液相色谱图；
图11所示为实施例8依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体色谱柱MX（RH）+MD(RH)串联系统适用性的高效液相色谱图；
图12所示为实施例9依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体色谱柱MD(RH)单根系统适用性的高效液相色谱图；
图13所示为实施例10依折麦布阿托伐他汀钙片依折麦布异构体色谱柱MD(RH)+MD(RH)串联系统适用性的高效液相色谱图；
备注：附图杂质标签的“E-”表示依折麦布异构体相关杂质。
具体实施方式
本发明公开了一种依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别指出的是，所有类似的替代和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述检测方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
实施例1
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，3μm）
（7）流动相A：水-乙腈（60:40），流动相B：乙腈-三氟乙酸 (100:0.1）按以下梯度洗脱：
以流动相A 100%开始洗脱，持续洗脱至80min；至0.1min后，流动相A调整至10%，流动相B调整至90%，保持该流动相比例继续洗脱至90min；至0.1min后，流动相A调整至100%，保持该流动相比例继续洗脱至100min；
（8）流速为每分钟0.6ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为10℃；
（11）进样体积20μl；
（12）图1空白溶剂不干扰异构体检测，图2中系统适用性溶液，保留时间为66.007min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体的色谱峰，由图可以看出，依折麦布与各异构体杂质能够达到基线分离，符合中国药典的要求，图3、图4对照品溶液和供试品溶液，可以检测出样品中的各异构体含量。
实施例2
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，3μm）
（7）流动相A：水-乙腈（60:40），流动相B：乙腈-三氟乙酸(100:0.1）按以下梯度洗脱：
以流动相A 100%开始洗脱，持续洗脱至80min；至0.1min后，流动相A调整至10%，流动相B调整至90%，保持该流动相比例继续洗脱至90min；至0.1min后，流动相A调整至100%，保持该流动相比例继续洗脱至100min；
（8）流速为每分钟0.6ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为8℃；
（11）进样体积20μl；
（12）图5中保留时间为68.023min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，依折麦布与各异构体杂质能够达到基线分离，符合中国药典的要求。
实施例3
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：waters ARC
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，3μm）
（7）流动相A：水-乙腈（60:40），流动相B：乙腈-三氟乙酸(100:0.1）按以下梯度洗脱：
以流动相A 100%开始洗脱，持续洗脱至80min；至0.1min后，流动相A调整至10%，流动相B调整至90%，保持该流动相比例继续洗脱至90min；至0.1min后，流动相A调整至100%，保持该流动相比例继续洗脱至100min；
（8）流速为每分钟0.6ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为12℃；
（11）进样体积20μl；
（12）图6中保留时间为62.721min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，依折麦布与各异构体杂质能够达到基线分离，符合中国药典的要求。
实施例4
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，3μm）
（7）流动相A：水-乙腈（60:40），流动相B：乙腈-三氟乙酸 (100:0.1）按以下梯度洗脱：
以流动相A 100%开始洗脱，持续洗脱至80min；至0.1min后，流动相A调整至10%，流动相B调整至90%，保持该流动相比例继续洗脱至90min；至0.1min后，流动相A调整至100%，保持该流动相比例继续洗脱至100min；
（8）流速为每分钟0.58ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为10℃；
（11）进样体积20μl；
（12）图7中保留时间为68.383 min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，依折麦布与各异构体杂质能够达到基线分离，符合中国药典的要求。
实施例5
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，3μm）
（7）流动相A：水-乙腈（60:40），流动相B：乙腈-三氟乙酸 (100:0.1）按以下梯度洗脱：
以流动相A 100%开始洗脱，持续洗脱至80min；至0.1min后，流动相A调整至10%，流动相B调整至90%，保持该流动相比例继续洗脱至90min；至0.1min后，流动相A调整至100%，保持该流动相比例继续洗脱至100min；
（8）流速为每分钟0.62ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为10℃；
（11）进样体积20μl；
（12）图8中保留时间为64.030 min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，依折麦布与各异构体杂质能够达到基线分离，符合中国药典的要求。
实施例6
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）和菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）串联
（7）流动相A：水，流动相B：乙腈；按以下梯度洗脱：
以流动相A 60%，流动相B 40%开始洗脱，逐渐减少流动相A比例，增加流动相B比例，至60min将流动相A比例调整至45%，流动相B比例调整至55%，持续洗脱至90min，至0.1min后，流动相A调整至60%，流动相B调整至40%，保持该流动相比例继续洗脱至105min；
（8）流速为每分钟1.0ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为40℃；
（11）进样体积10μl；
（12）图9中保留时间为69.193min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，依折麦布与异构体G与主峰重叠。
实施例7
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MJ（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）和菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）串联
（7）流动相A：水，流动相B：乙腈；按以下梯度洗脱：
以流动相A 60%，流动相B 40%开始洗脱，逐渐减少流动相A比例，增加流动相B比例，至60min将流动相A比例调整至45%，流动相B比例调整至55%，持续洗脱至90min，至0.1min后，流动相A调整至60%，流动相B调整至40%，保持该流动相比例继续洗脱至105min；
（8）流速为每分钟1.0 ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为40℃；
（11）进样体积10μl；
（12）图10中保留时间为62.333min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，异构体G、依折麦布和异构体E重叠。
实施例8
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MX（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）和菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）串联
（7）流动相A：水，流动相B：乙腈；按以下梯度洗脱：
以流动相A 60%，流动相B 40%开始洗脱，逐渐减少流动相A比例，增加流动相B比例，至60min将流动相A比例调整至45%，流动相B比例调整至55%，持续洗脱至90min，至0.1min后，流动相A调整至60%，流动相B调整至40%，保持该流动相比例继续洗脱至105min；
（8）流速为每分钟1.0ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为40℃；
（11）进样体积10μl；
（12）图11中保留时间为67.350min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，杂质和主峰峰型差，杂质洗脱能力差。
实施例9
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）
（7）流动相A: 0.1%醋酸水溶液，流动相B: 乙腈；按等度洗脱；流动相A-流动相B(67-33)：
（8）流速为每分钟0.8ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为10℃；
（11）进样体积10μl；
（12）图12中保留时间为143.840min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，7个异构体杂质和降解杂质A有分开的趋势，但理论板数太低（主峰理论板数9917），运行时间过长。
实施例10
（1）样品配制：取依折麦布阿托伐他汀钙片5片，置50ml量瓶中，再加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）12ml，超声30min后，冷却至室温，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）定容至刻度，离心5min（10000转），取上清液，用0.45μmPP滤头过滤，弃去1ml续滤液，即得。
（2）对照品溶液：取依折麦布对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水-乙腈-醋酸（40:60:0.1）稀释至刻度，摇匀。
（3）依折麦布异构体系统溶液含7个杂质（E-异构体A～E-异构体G）。
（4）高效液相色谱仪的品牌型号：赛默飞 U3000
（5）检测器：VWD
（6）色谱柱：菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）和菲罗门Chiral MD（2）-RH（250mm×4.6mm，5μm）
（7）流动相A:水，流动相B: 乙腈；按等度洗脱；流动相A-流动相B(57-43)：
（8）流速为每分钟0.6ml；
（9）检测波长为248nm；
（10）柱温为5℃；
（11）进样体积10μl；
（12）图13中保留时间为80.654min的色谱峰为依折麦布的色谱峰，其余色谱峰为依折麦布各异构体杂质的色谱峰，由图可以看出，理论板数高，但异构体G与主峰完全重叠，异构体A与降解杂质A完全重叠 。

Claims (4)

1.一种依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测方法，其特征在于，运用高效液相色谱法，采用反相色谱柱，反相色谱柱选自菲罗门Chiral MD（2）RH，规格为250mm×4.6mm，3μm，以水-乙腈为A流动相，水、乙腈的体积比为60:40，乙腈为B流动相，B流动相乙腈中含有酸，设置流速、柱温、检测波长及进样体积，流速选自0.58~0.62mL/min，柱温选自8~12℃，检测波长选自248nm，梯度洗脱，所述的梯度洗脱为：以流动相A 100%开始洗脱，持续洗脱至80min；至0.1min后，流动相A调整至10%，流动相B调整至90%，保持该流动相比例继续洗脱至90min；至0.1min后，流动相A调整至100%，保持该流动相比例继续洗脱至100min；该检测方法能同时检测依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体杂质A、依折麦布异构体杂质B、依折麦布异构体杂质C、依折麦布异构体杂质D、依折麦布异构体杂质E、依折麦布异构体杂质F或同时检测依折麦布异构体杂质A、依折麦布异构体杂质B、依折麦布异构体杂质C、依折麦布异构体杂质E、依折麦布异构体杂质F、依折麦布异构体杂质G。
2.根据权利要求1所述的一种依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测方法，其特征在于，所述的酸选自磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的一种依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测方法，其特征在于，所述的酸选自三氟乙酸，B流动相中乙腈与三氟乙酸体积比为100:0.1。
4.根据权利要求1所述的一种依折麦布阿托伐他汀钙片中依折麦布异构体的检测方法，其特征在于，所述的高效液相色谱法中进样体积选自20μL。
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