CN115141112A - 一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途 - Google Patents
一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115141112A CN115141112A CN202210727523.0A CN202210727523A CN115141112A CN 115141112 A CN115141112 A CN 115141112A CN 202210727523 A CN202210727523 A CN 202210727523A CN 115141112 A CN115141112 A CN 115141112A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- carnitine
- acetyl
- impurity
- target
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000012535 impurity Substances 0.000 title claims abstract description 84
- RDHQFKQIGNGIED-MRVPVSSYSA-N O-acetyl-L-carnitine Chemical compound CC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C RDHQFKQIGNGIED-MRVPVSSYSA-N 0.000 title claims abstract description 61
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 46
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 30
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims abstract description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 6
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 44
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 claims description 30
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 20
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- JATPLOXBFFRHDN-DDWIOCJRSA-N [(2r)-2-acetyloxy-3-carboxypropyl]-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(=O)O[C@H](CC(O)=O)C[N+](C)(C)C JATPLOXBFFRHDN-DDWIOCJRSA-N 0.000 claims description 16
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 15
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 15
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 15
- GUYHPGUANSLONG-SNAWJCMRSA-N (E)-4-(trimethylammonio)but-2-enoate Chemical compound C[N+](C)(C)C\C=C\C([O-])=O GUYHPGUANSLONG-SNAWJCMRSA-N 0.000 claims description 14
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 14
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 14
- REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M sodium;heptane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCS([O-])(=O)=O REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 12
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 10
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 10
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 9
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 8
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- -1 L-carnitine compound Chemical class 0.000 claims description 6
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 claims description 6
- UFAHZIUFPNSHSL-MRVPVSSYSA-N O-propanoyl-L-carnitine Chemical compound CCC(=O)O[C@H](CC([O-])=O)C[N+](C)(C)C UFAHZIUFPNSHSL-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001518 levocarnitine Drugs 0.000 claims description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 3
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 abstract description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 abstract 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000005311 nuclear magnetism Effects 0.000 description 2
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241001251200 Agelas Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
- C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
- C07C229/22—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated the carbon skeleton being further substituted by oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C227/14—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from compounds containing already amino and carboxyl groups or derivatives thereof
- C07C227/16—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from compounds containing already amino and carboxyl groups or derivatives thereof by reactions not involving the amino or carboxyl groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C227/14—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from compounds containing already amino and carboxyl groups or derivatives thereof
- C07C227/18—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from compounds containing already amino and carboxyl groups or derivatives thereof by reactions involving amino or carboxyl groups, e.g. hydrolysis of esters or amides, by formation of halides, salts or esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C227/38—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C227/40—Separation; Purification
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于医药化合物技术领域，涉及一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途，其通过化学合成和半制备液相分离的方法制备该杂质，通过十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱和磷酸二氢钾溶液‑甲醇作为流动相的高效液相方法对其进行测定：该制备方法得到的产物纯度可达98％以上，该高效液相方法检测快捷。
Description
技术领域
本发明属于医药化合物技术领域，具体说的是一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途。
背景技术
乙酰左旋肉碱盐酸盐是一种有机酰类衍生物，可用作食品营养强化剂，用于食品添加剂和辅助治疗剂；可用作药品，用于缓解糖尿病周围神经病变引起的感觉异常等。
由于其在食品和药品中的广泛应用，因此，研究和控制乙酰左旋肉碱中的杂质，从而控制提高产品质量，减少不良反应的情况发生，是目前亟待解决的新课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种乙酰左旋肉碱杂质，所述杂质(简称杂质I)的结构如式I所示，
一种乙酰左旋肉碱杂质的制备方法，所述方法包括如下步骤：
色谱条件：仪器：半制备型高效液相色谱仪；半制备色谱柱：C18；流动相：水；
纯化制备过程：
将含有乙酰左旋肉碱杂质的盐酸乙酰左旋肉碱粗品，分次上样于所述半制备型高效液相色谱仪进行纯化制备，每次上样后，收集目标色谱峰的目标流份段；合并每次上样后收集的流份，回收得乙酰左旋肉碱杂质粗品。
还包括对所述乙酰左旋肉碱杂质粗品进行纯化的步骤：将所述乙酰左旋肉碱杂质粗品分次上样于所述半制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，每次上样后，收集目标色谱峰的目标流份段；合并每次上样后收集的流份，减压回收得乙酰左旋肉碱杂质纯品；所述水选自纯化水；所述回收选自减压回收。
所述半制备型高效液相色谱仪选自LC3000；所述半制备色谱柱选自：Venusil MPC18，所述半制备色谱柱的规格为30*250mm；所述色谱条件还包括，流速：20-60ml/min，优选的流速：40ml/min；检测波长：205nm。
在制备所述乙酰左旋肉碱杂质粗品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达800-1200mv开始收集，连续收集0.25-0.35min后停止收集；优选的，在制备所述乙酰左旋肉碱杂质粗品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达1000mv开始收集，连续收集0.3min后停止收集。
在制备所述乙酰左旋肉碱杂质纯品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达100-300mv开始收集，当目标色谱峰吸收值从顶峰降至800-1200mv时停止收集；优选的，在制备所述乙酰左旋肉碱杂质纯品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达200mv开始收集，当目标色谱峰吸收值从顶峰降至1000mv时停止收集。
所述含有乙酰左旋肉碱杂质的盐酸乙酰左旋肉碱粗品由如下方法制备：
左旋肉碱和乙酰氯在冰醋酸存在下反应，总体反应温度0-110℃，浓缩，析晶得含有乙酰左旋肉碱杂质的盐酸乙酰左旋肉碱粗品，优选的，总体反应温度10-105℃。
所述左旋肉碱和乙酰氯在冰醋酸存在下反应共分两个阶段，第一阶段反应的温度为0-40℃，第一阶段反应的时间为1-2小时，优选的第一阶段反应的温度为15-35℃，第一阶段反应的时间为1.4-1.6小时；第二阶段反应的温度为60-110℃，第二阶段反应的时间为5-7小时，优选的第二阶段反应的温度为65-105℃，第二阶段反应的时间为5.5-6.5小时；所述浓缩选自减压浓缩；所述析晶的溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或几种；所述左旋肉碱的质量与冰醋酸的体积比为15：30-60，所述质量的单位为g，所述体积的单位为ml；所述左旋肉碱的质量与析晶的溶剂的体积比为15:75-125，所述质量的单位为g，所述体积的单位为ml；所述析晶的温度为10-40℃，优选的析晶的温度为20-30℃；所述析晶的时间为0.5-2小时，优选的析晶的时间为1小时。
一种检测所述乙酰左旋肉碱杂质的高效液相方法，所述方法的色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇，含庚烷基磺酸钠。
所述方法的色谱条件如下：所述色谱柱选自Inertsil ODS-3，所述色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm；所述磷酸二氢钾溶液选自0.01-0.5mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至2.8-4，优选的，所述磷酸二氢钾溶液选自0.02-0.15mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至3-3.5；所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为75-95:25-5，优选的，所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为80-92:20-8；所述流动相中，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.1-1mg/ml，优选的，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.2-0.7mg/ml；所述色谱条件还包括：流速：0.5-1.5ml/min，优选的，流速：0.7-1.2ml/min；紫外检测器检测波长：205nm，进样量：5-30μl；所述方法检测的样品中还包含左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、巴豆甜菜碱中的一种或几种。
所述方法还包括供试品溶液的制备，系统适用性溶液的制备，测定方法的步骤；所述供试品溶液的制备方法为取样品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释；所述系统适用性溶液的制备方法为：精密称取对照品和所述乙酰左旋肉碱杂质各适量，置同一量瓶中，加水溶解并定量稀释，所述对照品选自巴豆甜菜碱、左旋肉碱、乙酰左旋肉碱中的一种或几种；所述测定方法包括取系统适用性溶液注入液相色谱仪，各峰间的分离度应符合要求，再精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
一种所述的乙酰左旋肉碱杂质在化合物质量控制中作为对照品或标准品的应用。所述化合物选自左旋肉碱类化合物，所述左旋肉碱类化合物选自左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、丙酰左旋肉碱中的一种或几种。
一种检测左旋肉碱类化合物的高效液相方法，所述方法的色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇，含庚烷基磺酸钠；
所述左旋肉碱类化合物选自左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、丙酰左旋肉碱、式I所示的化合物中的一种或几种，
所述方法的色谱条件如下：所述色谱柱选自Inertsil ODS-3，所述色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm；所述磷酸二氢钾溶液选自0.01-0.5mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至2.8-4，优选的，所述磷酸二氢钾溶液选自0.02-0.15mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至3-3.5；所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为75-95:25-5，优选的，所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为80-92:20-8；所述流动相中，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.1-1mg/ml，优选的，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.2-0.7mg/ml；所述色谱条件还包括：流速：0.5-1.5ml/min，优选的，流速：0.7-1.2ml/min；紫外检测器检测波长：205nm，进样量：5-30μl。
所述方法还包括供试品溶液的制备，系统适用性溶液的制备，测定方法的步骤；所述供试品溶液的制备方法为取样品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释；所述系统适用性溶液的制备方法为：精密称取对照品各适量，置同一量瓶中，加水溶解并定量稀释，所述对照品选自巴豆甜菜碱、左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、式I所示的化合物中的一种或几种；所述测定方法包括取系统适用性溶液注入液相色谱仪，各峰间的分离度应符合要求，再精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途与现有技术相比，提供了一种可控制乙酰左旋肉碱等化合物(包括左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、丙酰左旋肉碱等)质量的新杂质，并给出了可制备该杂质的可行的制备方法，产物纯度可达98％以上，同时提供了检测该杂质和/或其它相关物质(包括左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、巴豆甜菜碱)的高效液相方法及其作为标准品或对照品的用途。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。
图1是本申请带序号的杂质I的结构式图。
图2是推测的本申请乙酰左旋肉碱杂质I的制备原理流程图。
图3是杂质I的1H-NMR图。
图4是杂质I的13C-NMR图。
图5是杂质I的DEPT-135图。
图6是杂质I的1H-1H COSY图。
图7是杂质I的HSQC图。
图8是杂质I的HMBC图。
图9是杂质I的液质谱图。
图10是本申请实施例三杂质I纯品的HPLC典型色谱图。
图11是本申请实施例一含杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品的HPLC典型色谱图。
图12是本申请实施例三第一次纯化制备过程的半制备液相单次色谱图。
图13是本申请实施例三第二次纯化制备过程的半制备液相单次色谱图。
图14是本申请实施例三第二次纯化制备过程的半制备液相多次连续色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例有助于更好地理解本发明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。
实施例一
含有杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品的制备
向500mL四口瓶中加入15.0g左旋肉碱和45mL冰醋酸，20～30℃搅拌溶解，控制反应液温度20～30℃滴加11.0g乙酰氯，滴加完毕，维持体系20～30℃第一阶段反应1.5小时，升温至85～95℃，第二阶段反应6h。反应完毕，减压浓缩除去溶剂。剩余物加入100mL乙醇，维持20～30℃搅拌析晶1小时，抽滤，40～50℃真空干燥4小时，得含有杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品20.1g(杂质I的HPLC纯度26.83％，参见附图11，图谱数据参见表1)。
表1
表1中，保留时间5.543分钟为巴豆甜菜碱峰，保留时间6.142分钟为左旋肉碱峰，保留时间9.571分钟为乙酰左旋肉碱峰，保留时间15.701分钟为杂质I峰。
实施例二
含有杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品的制备(反应温度筛选)
向500mL四口瓶中加入15.0g左旋肉碱和45mL冰醋酸，20～30℃搅拌溶解，控制反应液温度20～30℃滴加11.0g乙酰氯，滴加完毕，维持体系20～30℃第一阶段反应1.5小时，升温至一定温度(具体温度的选择情况见表2)，第二阶段反应6h。反应完毕，减压浓缩除去溶剂。剩余物加入100mL乙醇，维持20～30℃搅拌析晶1小时，抽滤，40～50℃真空干燥4小时，得含有杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品，产物量及其杂质I纯度见表2。
表2反应温度对含有杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品产物量及纯度的影响
实施例三
杂质I的纯化制备：
纯化制备条件：
色谱条件：仪器：半制备型高效液相色谱仪LC3000(北京创新通恒)；半制备色谱柱：Venusil MP C18(Agela，艾杰尔)，30*250mm；流动相：纯化水；流速：40ml/min；检测波长：205nm。
纯化制备过程：
第一次纯化：将本申请实施例一制备得到的含有杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品20.00g，分68次上样于半制备液相进行纯化制备，每次上样后，目标色谱峰吸收值到达1000mv开始收集，连续收集0.3min后停止收集。合并每次上样后收集的流份，减压回收得杂质I粗品500mg。
第二次纯化：将上述500mg杂质I粗品分21次上样于半制备液相进行分离纯化，每次上样后目标色谱峰吸收值到达200mv开始收集，当目标色谱峰吸收值从顶峰降至1000mv时停止收集。合并每次上样后收集的流份，减压回收得杂质I纯品200mg(HPLC纯度98.11％，面积归一，参见附图10，出峰归属情况见表3)。
表3HPLC色谱峰归属及峰面积
实施例四
杂质I的结构确证：杂质I质谱：Waters Acquity UPLC-Xevo TQ超高效液相色谱—质谱联用仪；ESI+；m/z 287.2的峰为杂质I的[M+H]+峰，m/z 144.3的峰为杂质I的[(M+2H)/2]+峰，确定杂质I的分子量为286。
杂质I的核磁数据：仪器：BRUKER AV-600型NMR仪；溶剂：D2O；测定数据(带序号的杂质I的结构式图见附图1)，解析见下表4、5：
表4氢谱解析表
表5碳谱解析表
综合分析核磁所有图谱数据及质谱的裂分情况，推得杂质I的化学名为：4-((1-羧基-3-(三甲基氨)丙烷-2-基)氧基)-N,N,N-三甲基-4-氧代-2-烯-1-丁铵，结构式见附图1。
实施例五
HPLC检测方法
1.色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3(十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂)，4.6×250mm，5μm，流速：1.0ml/min，检测波长：205nm，进样量：20μl。
2.溶液的制备
2.1流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(以磷酸调节PH值至3.2)-甲醇(83：17)；每1ml流动相中含庚烷基磺酸钠0.5mg。
2.2供试品溶液：取实施例一制备的含有杂质I的盐酸乙酰左旋肉碱粗品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5mg的溶液。
2.3系统适用性溶液：精密称取盐酸乙酰左旋肉碱对照品、左旋肉碱对照品及巴豆甜菜碱对照品、杂质Ⅰ各适量，置同一量瓶中，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含乙酰左旋肉碱5mg、左旋肉碱50μg、巴豆甜菜碱5μg和杂质Ⅰ50μg的混合溶液，作为系统适应性溶液。
3.测定方法
取系统适用性溶液20μl注入液相色谱仪，巴豆甜菜碱、左旋肉碱、乙酰左旋肉碱和杂质Ⅰ依次流出。巴豆甜菜碱峰与左旋肉碱峰及各峰间的分离度应符合要求。再精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见图11、表1。
该方法的检测限及定量限情况如下：
巴豆甜菜碱定量限50ng/ml
左旋肉碱定量限3.2μg/ml
乙酰左旋肉碱定量限3.5μg/ml
巴豆甜菜碱检测限：15ng/ml
左旋肉碱检测限1μg/ml
乙酰左旋肉碱检测限1μg/ml
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换、而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
Claims (16)
1.一种乙酰左旋肉碱杂质，其特征在于，所述杂质的结构如式I所示，
2.一种如权利要求1所述的乙酰左旋肉碱杂质的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
色谱条件：仪器：半制备型高效液相色谱仪；半制备色谱柱：C18；流动相：水；
纯化制备过程：
将含有乙酰左旋肉碱杂质的盐酸乙酰左旋肉碱粗品，分次上样于所述半制备型高效液相色谱仪进行纯化制备，每次上样后，收集目标色谱峰的目标流份段；合并每次上样后收集的流份，回收得乙酰左旋肉碱杂质粗品。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括对所述乙酰左旋肉碱杂质粗品进行纯化的步骤：将所述乙酰左旋肉碱杂质粗品分次上样于所述半制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，每次上样后，收集目标色谱峰的目标流份段；合并每次上样后收集的流份，减压回收得乙酰左旋肉碱杂质纯品；所述水选自纯化水；所述回收选自减压回收。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述半制备型高效液相色谱仪选自LC3000；所述半制备色谱柱选自：Venusil MP C18，所述半制备色谱柱的规格为30*250mm；所述色谱条件还包括，流速：20-60ml/min，优选的流速：40ml/min；检测波长：205nm。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在制备所述乙酰左旋肉碱杂质粗品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达800-1200mv开始收集，连续收集0.25-0.35min后停止收集；优选的，在制备所述乙酰左旋肉碱杂质粗品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达1000mv开始收集，连续收集0.3min后停止收集。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在制备所述乙酰左旋肉碱杂质纯品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达100-300mv开始收集，当目标色谱峰吸收值从顶峰降至800-1200mv时停止收集；优选的，在制备所述乙酰左旋肉碱杂质纯品的过程中，所述收集目标色谱峰的目标流份段为目标色谱峰吸收值到达200mv开始收集，当目标色谱峰吸收值从顶峰降至1000mv时停止收集。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述含有乙酰左旋肉碱杂质的盐酸乙酰左旋肉碱粗品由如下方法制备：
左旋肉碱和乙酰氯在冰醋酸存在下反应，总体反应温度0-110℃，浓缩，析晶得含有乙酰左旋肉碱杂质的盐酸乙酰左旋肉碱粗品，优选的，总体反应温度10-105℃。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述左旋肉碱和乙酰氯在冰醋酸存在下反应共分两个阶段，第一阶段反应的温度为0-40℃，第一阶段反应的时间为1-2小时，优选的第一阶段反应的温度为15-35℃，第一阶段反应的时间为1.4-1.6小时；第二阶段反应的温度为60-110℃，第二阶段反应的时间为5-7小时，优选的第二阶段反应的温度为65-105℃，第二阶段反应的时间为5.5-6.5小时；所述浓缩选自减压浓缩；所述析晶的溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或几种；所述左旋肉碱的质量与冰醋酸的体积比为15：30-60，所述质量的单位为g，所述体积的单位为ml；所述左旋肉碱的质量与析晶的溶剂的体积比为15:75-125，所述质量的单位为g，所述体积的单位为ml；所述析晶的温度为10-40℃，优选的析晶的温度为20-30℃；所述析晶的时间为0.5-2小时，优选的析晶的时间为1小时。
9.一种检测如权利要求1所述乙酰左旋肉碱杂质的高效液相方法，其特征在于，所述方法的色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇，含庚烷基磺酸钠。
10.根据权利要求9所述的高效液相方法，其特征在于，所述方法的色谱条件如下：所述色谱柱选自Inertsil ODS-3，所述色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm；所述磷酸二氢钾溶液选自0.01-0.5mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至2.8-4，优选的，所述磷酸二氢钾溶液选自0.02-0.15mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至3-3.5；所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为75-95:25-5，优选的，所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为80-92:20-8；所述流动相中，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.1-1mg/ml，优选的，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.2-0.7mg/ml；所述色谱条件还包括：流速：0.5-1.5ml/min，优选的，流速：0.7-1.2ml/min；紫外检测器检测波长：205nm，进样量：5-30μl；所述方法检测的样品中还包含左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、巴豆甜菜碱中的一种或几种。
11.根据权利要求9所述的高效液相方法，其特征在于，所述方法还包括供试品溶液的制备，系统适用性溶液的制备，测定方法的步骤；所述供试品溶液的制备方法为取样品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释；所述系统适用性溶液的制备方法为：精密称取对照品和所述乙酰左旋肉碱杂质各适量，置同一量瓶中，加水溶解并定量稀释，所述对照品选自巴豆甜菜碱、左旋肉碱、乙酰左旋肉碱中的一种或几种；所述测定方法包括取系统适用性溶液注入液相色谱仪，各峰间的分离度应符合要求，再精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
12.一种如权利要求1所述的乙酰左旋肉碱杂质在化合物质量控制中作为对照品或标准品的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述化合物选自左旋肉碱类化合物，所述左旋肉碱类化合物选自左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、丙酰左旋肉碱中的一种或几种。
14.一种检测左旋肉碱类化合物的高效液相方法，其特征在于，所述方法的色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：磷酸二氢钾溶液-甲醇，含庚烷基磺酸钠；
所述左旋肉碱类化合物选自左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、丙酰左旋肉碱、式I所示的化合物中的一种或几种，
15.根据权利要求14所述的高效液相方法，其特征在于，所述方法的色谱条件如下：所述色谱柱选自Inertsil ODS-3，所述色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm；所述磷酸二氢钾溶液选自0.01-0.5mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至2.8-4，优选的，所述磷酸二氢钾溶液选自0.02-0.15mol/L磷酸二氢钾溶液且以磷酸调节PH值至3-3.5；所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为75-95:25-5，优选的，所述磷酸二氢钾溶液与所述甲醇的体积比为80-92:20-8；所述流动相中，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.1-1mg/ml，优选的，所述庚烷基磺酸钠的含量为0.2-0.7mg/ml；所述色谱条件还包括：流速：0.5-1.5ml/min，优选的，流速：0.7-1.2ml/min；紫外检测器检测波长：205nm，进样量：5-30μl。
16.根据权利要求14所述的高效液相方法，其特征在于，所述方法还包括供试品溶液的制备，系统适用性溶液的制备，测定方法的步骤；所述供试品溶液的制备方法为取样品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释；所述系统适用性溶液的制备方法为：精密称取对照品各适量，置同一量瓶中，加水溶解并定量稀释，所述对照品选自巴豆甜菜碱、左旋肉碱、乙酰左旋肉碱、式I所示的化合物中的一种或几种；所述测定方法包括取系统适用性溶液注入液相色谱仪，各峰间的分离度应符合要求，再精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210727523.0A CN115141112A (zh) | 2022-06-25 | 2022-06-25 | 一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210727523.0A CN115141112A (zh) | 2022-06-25 | 2022-06-25 | 一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115141112A true CN115141112A (zh) | 2022-10-04 |
Family
ID=83407942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210727523.0A Pending CN115141112A (zh) | 2022-06-25 | 2022-06-25 | 一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115141112A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116359401A (zh) * | 2023-05-31 | 2023-06-30 | 山东齐都药业有限公司 | 高效液相色谱法同时测定左卡尼汀中五种杂质的方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5625085A (en) * | 1993-07-14 | 1997-04-29 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. | Esters of acyl L-carnitines and pharmaceutical compositons containing same for treating endotoxic shock |
| JP2008291382A (ja) * | 2007-05-24 | 2008-12-04 | Kao Corp | 繊維製品処理剤組成物 |
| JP2010143857A (ja) * | 2008-12-18 | 2010-07-01 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | カルニチンの精製方法 |
| JP2011098934A (ja) * | 2009-11-09 | 2011-05-19 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | Ｌ−カルニチンに含まれる不純物の除去方法 |
| CN104177271A (zh) * | 2014-06-23 | 2014-12-03 | 海南好康舒药业有限公司 | 一种氯化乙酰左卡尼汀的制备方法 |
| CN104698101A (zh) * | 2015-03-16 | 2015-06-10 | 东北制药集团股份有限公司 | 一种左卡尼汀及其盐类产品中右卡尼汀含量的高效液相检测方法 |
-
2022
- 2022-06-25 CN CN202210727523.0A patent/CN115141112A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5625085A (en) * | 1993-07-14 | 1997-04-29 | Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. | Esters of acyl L-carnitines and pharmaceutical compositons containing same for treating endotoxic shock |
| JP2008291382A (ja) * | 2007-05-24 | 2008-12-04 | Kao Corp | 繊維製品処理剤組成物 |
| JP2010143857A (ja) * | 2008-12-18 | 2010-07-01 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | カルニチンの精製方法 |
| JP2011098934A (ja) * | 2009-11-09 | 2011-05-19 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | Ｌ−カルニチンに含まれる不純物の除去方法 |
| CN104177271A (zh) * | 2014-06-23 | 2014-12-03 | 海南好康舒药业有限公司 | 一种氯化乙酰左卡尼汀的制备方法 |
| CN104698101A (zh) * | 2015-03-16 | 2015-06-10 | 东北制药集团股份有限公司 | 一种左卡尼汀及其盐类产品中右卡尼汀含量的高效液相检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李玺;李薇;佟爱东;: "注射用乙酰左卡尼汀含量及有关物质的测定", 今日药学, no. 05, pages 24 - 25 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116359401A (zh) * | 2023-05-31 | 2023-06-30 | 山东齐都药业有限公司 | 高效液相色谱法同时测定左卡尼汀中五种杂质的方法 |
| CN116359401B (zh) * | 2023-05-31 | 2023-08-22 | 山东齐都药业有限公司 | 高效液相色谱法同时测定左卡尼汀中五种杂质的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112697912B (zh) | 一种检测枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法 | |
| CN111141850B (zh) | 对乙酰氨基酚原料药有关物质的液相检测分离方法 | |
| CN115141112A (zh) | 一种乙酰左旋肉碱杂质、其制备及检测方法和用途 | |
| CN115184497B (zh) | 一种测定铁皮石斛中2,4-表芸苔素内酯含量的方法 | |
| CA2259339C (en) | Crystals of vitamin d derivatives and process for the preparation thereof | |
| CN112129846A (zh) | 一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相色谱法及其应用 | |
| CN111423361A (zh) | 一种丙烯醛-丙氨酸加合物及其制备方法与应用 | |
| CN113533574B (zh) | 一种用于药物合成的组合物及其中对甲苯磺酰氯的检测方法 | |
| CN111398465B (zh) | 一种pet显像剂前体fcpha及其顺式异构体的测定方法 | |
| CN114249711A (zh) | 一种拆分制备尼古丁的方法 | |
| CN113024357A (zh) | 一种苯烯莫德杂质及其制备方法和用途 | |
| Morin et al. | Rapid microanalysis of cholesterol in bile and serum by gas chromatography | |
| CN116655507A (zh) | 一种艾地骨化醇脱水杂质及其制备方法和应用 | |
| CN114414701B (zh) | 一种诃子肉中诃子酸制备方法及其含量测定方法 | |
| CN102304164B (zh) | 远志皂苷元衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN112666282A (zh) | 一种葡萄糖酸钙锌口服溶液杂质的高效液相检测方法 | |
| CN113759048A (zh) | 一种十八烷二酸单叔丁酯检验方法 | |
| CN114216972A (zh) | 一种二棕榈酰羟脯氨酸的含量测定方法 | |
| CN111579675A (zh) | 饲料中脂溶性维生素的检测方法 | |
| CN111116695A (zh) | 苯并芘dna加合物四种立体异构体的制备及纯化方法 | |
| AU2003265002A1 (en) | Pharmacologically active novel dauer pheromone compound for controlling aging and stress and method for isolating and characterizing the same | |
| CN115947708B (zh) | 一种从红曲中分离高纯度酸式洛伐他汀的方法 | |
| CN113567578B (zh) | 一种同时测定山西老陈醋中两种黄烷醇类物质的spe-des-hplc方法 | |
| CN114910581B (zh) | 液相色谱-高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法 | |
| CN113960192B (zh) | 一种巴洛沙韦中间体有关物质及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |