CN102304164B - 远志皂苷元衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种远志皂苷元衍生物及其制备方法和应用。远志皂苷元衍生物分子式为C44H53ClO8，中文名称为2，3-二苯甲酰氧基-远志皂苷元。制备方法：反应器中加入远志皂苷元、二氯甲烷、吡啶、苯甲酰氯、4-二甲氨基吡啶，搅拌，冰水浴反应，所得产物经硅胶柱层析、凝胶柱层析，再经半制备型高效液相色谱分离，收集相应色谱峰的洗脱液，减压浓缩至干，得远志皂苷元衍生物纯品，纯度达到98％以上。该纯品作为化学对照品可用于远志皂苷元含量测定，其紫外最大吸收波长为230nm，与远志皂苷元的210nm相比，解决了HPLC-UV检测时存在的专属性和稳定性问题，对于远志药材及远志成方制剂的质量控制具有实用价值。
Description
技术领域
本发明涉及远志皂苷元衍生物，具体属于一种远志皂苷元衍生物及其制备方法，以及远志皂苷元衍生物作为化学对照品在远志皂苷含量测定中的应用。
背景技术
远志(Radix polygalae)是一种常用中药，具有安神益智、祛痰、消肿之功效，《中国药典》2010年版收载其来源为远志科远志属植物Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志Polygala.sibirica L.的干燥根。远志皂苷是远志中主要的化学成分和重要的活性成分，远志皂苷元(senegenin)是远志皂苷的盐酸水解苷元，常作为指标性成分来评价远志药材的质量，其结构式如下：
但是，远志皂苷元的紫外最大吸收波长为210nm，属末端吸收，HPLC-UV检测时存在基线漂移较大，溶剂干扰较大，灵敏度低等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种远志皂苷元衍生物及其制备方法，该远志皂苷元衍生物可作为化学对照品用于远志皂苷元含量测定，HPLC-UV检测时具有基线平稳，溶剂无干扰，灵敏度高的特点。
为实现上述目的，本发明提供的一种远志皂苷元衍生物，其分子式为C44H53ClO8，化学结构式为：
本发明提供的一种远志皂苷元衍生物的制备方法，包括如下步骤：
(1)远志皂苷元衍生物的合成
称取远志皂苷元0.1～0.5g，置于反应器中，分别加入二氯甲烷15～75mL为溶剂，吡啶(PY)5～25mL为助溶剂和缚酸剂，苯甲酰氯4～12mL为衍生试剂，4-二甲氨基吡啶(DMAP)0.003g～0.01g为催化剂，搅拌，冰水浴反应0.5～1h，得到远志皂苷元衍生物粗品；
(2)将远志皂苷元衍生物粗品用硅胶干法拌样，进行硅胶柱层析分离；
(3)取硅胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用体积比1～10∶1的三氯甲烷-甲醇溶液凝胶柱层析分离；
(4)取凝胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，通过半制备高效液相色谱分离得到远志皂苷元衍生物，纯度在98％以上；其色谱分离条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水溶液；检测波长：225～235nm。
所述步骤(4)中的凝胶柱是葡聚糖LH-20凝胶柱；甲醇-水溶液中甲醇和水的体积比为80∶20。
上述远志皂苷元衍生物可作为化学对照品用于远志皂苷元含量测定。
本发明制备的远志皂苷元衍生物具有如下优点和效果：
1.本发明采用多种分离手段，并最终以半制备高效液相色谱为分离手段，获得了纯度在98％以上的远志皂苷元衍生物。
2.本发明制备的远志皂苷元衍生物，可通过柱前衍生化方法利用紫外检测器来检测远志皂苷元，避免了远志皂苷元末端吸收检测缺陷。
3.本发明通过化学手段合成和纯化得到的远志皂苷元衍生物，其可作为化学对照品用于柱前衍生化法测定远志药材及其成方制剂中远志皂苷元的含量。
附图说明
图1为本发明制备的远志皂苷元衍生物的纯度分析HPLC-UV色谱图。
图2为本发明制备的远志皂苷元衍生物的1H NMR图。
图3为本发明制备的远志皂苷元衍生物的紫外光谱图。
具体实施方式：
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明所保护的范围。
实施例1
(1)远志皂苷元衍生物的合成
称取远志皂苷元0.1g，置于烧瓶中，加二氯甲烷15mL，吡啶5mL，苯甲酰氯4mL，4-二甲氨基吡啶0.005g，冰水浴，搅拌0.5h，得远志皂苷元衍生物粗品。
(2)硅胶柱层析分离
取硅胶，准确称定其重量，置于蒸发皿中，将远志皂苷元衍生物粗品溶液慢慢倒入蒸发皿，玻璃棒搅拌，干燥，准确称定重量。另取硅胶(200-300目)适量，用石油醚-丙酮(体积比100∶10)溶胀，装柱。
上样，依次用石油醚-丙酮(体积比分别为100∶10、100∶15、100∶20、100∶25、100∶30、100∶35)各3倍柱体积用量梯度洗脱。收集石油醚-丙酮(体积比100∶35)洗脱部分，合并洗脱液，减压浓缩至干。
(3)葡聚糖LH-20凝胶柱层析分离
取硅胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用体积比1∶1的三氯甲烷-甲醇溶液溶解，上样，用三氯甲烷-甲醇溶液等度洗脱。TLC检测，减压浓缩至干。
(4)半制备高效液相色谱分离
色谱分离条件：色谱柱：Elite Hypersil SinoChrom ODS-BP(10mm×300mm，10μm)；流动相：甲醇-水(80∶20)；流速：2.8mL·min-1；检测波长：230nm；柱温：室温；进样量：500μL。
称取凝胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用少量甲醇溶解，然后用0.45μm有机滤头过滤，按上述半制备高效液相色谱条件进行分离，紫外在线检测，收集远志皂苷元衍生物色谱峰的洗脱液，减压浓缩至干，浓缩温度控制在45℃，得到纯度为98.5％的远志皂苷元衍生物。
实施例2
(1)远志皂苷元衍生物的合成
称取远志皂苷元0.3g，置于烧瓶中，加二氯甲烷45mL，吡啶10mL，苯甲酰氯8mL，4-二甲氨基吡啶0.005g，冰水浴，磁力搅拌器搅拌1h，得远志皂苷元衍生物粗品。
(2)硅胶柱层析分离
称取适量硅胶，准确称定其重量，置于蒸发皿中，将远志皂苷元衍生物粗品溶液慢慢倒入蒸发皿，玻璃棒搅拌，干燥，准确称定重量。取硅胶(200-300目)适量，用石油醚-丙酮(体积比100∶10)溶胀，装柱。
上样，依次用石油醚-丙酮(体积比分别为100∶10、100∶15、100∶20、100∶25、100∶30、100∶35)各3倍柱体积用量梯度洗脱。收集石油醚-丙酮(体积比100∶35)洗脱部分，合并洗脱液，减压浓缩至干。
(3)凝胶柱层析分离
取硅胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用体积比5∶1的三氯甲烷-甲醇溶液溶解，上样，用三氯甲烷-甲醇溶液等度洗脱。TLC检测，减压浓缩至干。
(4)半制备高效液相色谱分离
色谱条件：色谱柱：Elite Hypersil SinoChrom ODS-BP(10mm×300mm，10μm)；流动相：甲醇-水(80∶20)；流速：2.8mL·min-1；检测波长：230nm；柱温：室温；进样量：500μL。
称取凝胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用少量甲醇溶解，然后用0.45μm有机滤头过滤，按上述半制备高效液相色谱条件进行分离，紫外在线检测，收集远志皂苷元衍生物色谱峰的洗脱液，减压浓缩至干，浓缩温度控制在45℃，得到纯度为98.8％的远志皂苷元衍生物。
实施例3
(1)远志皂苷元衍生物的合成
称取远志皂苷元0.5g，置于烧瓶中，加二氯甲烷75mL，吡啶15mL，苯甲酰氯12mL，4-二甲氨基吡啶0.01g，冰水浴，磁力搅拌器搅拌1h，得远志皂苷元衍生物粗品。
(2)硅胶柱层析分离
称取适量硅胶，准确称定其重量，置于蒸发皿中，将远志皂苷元衍生物粗品溶液慢慢倒入蒸发皿，玻璃棒搅拌，干燥，准确称定重量。取硅胶(200-300目)适量，用石油醚-丙酮(体积比100∶10)溶胀，装柱。
上样，依次用石油醚-丙酮(体积比分别为100∶10、100∶15、100∶20、100∶25、100∶30、100∶35)各3倍柱体积用量梯度洗脱。收集石油醚-丙酮(体积比100∶35)洗脱部分，合并洗脱液，减压浓缩至干。
(3)凝胶柱层析分离
取硅胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用体积比10∶1的三氯甲烷-甲醇溶液溶解，上样，用三氯甲烷-甲醇等度洗脱。减压浓缩至干。
(4)半制备型高效液相色谱分离
色谱条件：色谱柱：Elite Hypersil SinoChrom ODS-BP(10mm×300mm，10μm)；流动相：甲醇-水(80∶20)；流速：2.8mL·min-1；检测波长：230nm；柱温：室温；进样量：500μL。
称取凝胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用少量甲醇溶解，然后用0.45μm有机滤头过滤，按上述半制备高效液相色谱条件进行分离，紫外在线检测，收集远志皂苷元衍生物色谱峰的洗脱液，减压浓缩至干，浓缩温度控制在45℃，得到纯度为98.2％的远志皂苷元衍生物。
实施例4远志皂苷元衍生物作为化学对照品用于远志皂苷元含量测定
1.色谱条件：色谱柱：Diamonsil(钻石)C18(200mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.05％磷酸溶液(80∶20)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：230nm；柱温：室温；进样量：20μL。
2.对照品溶液的制备：称取远志皂苷元衍生物适量，精密称定为8.2mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.33mg·mL-1的远志皂苷元对照品溶液，然后用0.45μm有机系滤膜滤过，取续滤液即得。
3.供试品溶液的制备：取远志粗粉约2.0g，精密称定，置锥形瓶中，加石油醚20ml，超声脱脂2h，滤过，取滤渣置于圆底烧瓶中，用10mL70％乙醇，85℃回流提取三次，每次2h，合并提取液，减压回收溶剂，得提取物浸膏，置于圆底烧瓶中，加20mL10％盐酸，80℃回流水解4h，滤过，取滤渣，用水将水解所得沉淀洗至中性，蒸干，置于圆底烧瓶中，加二氯甲烷10mL，吡啶3mL，4-二甲氨基吡啶2mg，苯甲酰氯2mL，冰水浴，磁力搅拌，反应1h，反应完毕后，除去溶剂，干燥，用甲醇溶解，移至10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm有机系滤头滤过，取续滤液，得0.2mg·mL-1的供试品溶液。
4.线性范围考察：精密吸取远志皂苷元衍生物溶液0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0mL，分别置于1mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm有机系滤头滤过，取续滤液，得浓度分别为0.0165、0.033、0.066、0.132、0.198、0.264、0.33mg·mL-1的系列溶液。
分别精密吸取上述系列溶液各20μL，按以上色谱条件测定，以远志皂苷元衍生物溶液浓度为横坐标(X)，远志皂苷元衍生物色谱峰峰面积值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。结果远志皂苷元衍生物的回归方程为：Y＝24310X+2.116(相关系数r＝0.9995)，线性范围：0.0165～0.33mg·mL-1。
5.样品含量测定
按样品制备方法对不同产地的药材备样，测定，样品中远志皂苷元衍生物分离度良好。记录色谱图，按外标法计算远志中远志皂苷元的含量，结果见表1。
衍生物最低检测量为2.3ng，与文献值比，低5倍左右，说明该方法的检测灵敏度得到提高。
表1药材含量测定结果(n＝3)
Claims (3)
1.一种远志皂苷元衍生物，其特征在于分子式为C44H53ClO8，化学结构式为：
2.如权利要求1所述的一种远志皂苷元衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)远志皂苷元衍生物的合成
称取远志皂苷元0.1～0.5g，置于反应器中，分别加入二氯甲烷15～75mL为溶剂，吡啶5～25mL为助溶剂和缚酸剂，苯甲酰氯4～12mL为衍生试剂，4-二甲氨基吡啶0.003g～0.01g为催化剂，搅拌，冰水浴反应0.5～1h，得到远志皂苷元衍生物粗品；
(2)将远志皂苷元衍生物粗品用硅胶干法拌样，进行硅胶柱层析分离；
(3)取硅胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，用体积比1～10∶1的三氯甲烷-甲醇溶液凝胶柱层析分离；
(4)取凝胶柱层析分离后的远志皂苷元衍生物样品，通过半制备高效液相色谱分离得到远志皂苷元衍生物，纯度在98％以上；其色谱分离条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水溶液；检测波长：225～235nm；
所述步骤(3)中所述的凝胶柱是葡聚糖LH-20凝胶柱；所述步骤(4)中的甲醇-水溶液中甲醇和水的体积比为80∶20。
3.根据权利要求1所述的远志皂苷元衍生物作为化学对照品用于远志皂苷元的含量测定。
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