CN104140391B - 一种从千金子中分离制备千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法 - Google Patents

一种从千金子中分离制备千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种从千金子中分离制备高纯度千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法，采用95%乙醇回流提取，减压回收乙醇并浓缩，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，收集含有千金二萜醇二乙酸烟酸酯的流份，合并，回收溶剂，放置析晶，分离结晶，洗涤，干燥即得。本方法具有操作简单，溶剂消耗少，生产成本低，工艺稳定，能耗小，污染小，所得产品纯度高（99%），可适用于实验室和工业化制备和制备性生产。

Description

一种从千金子中分离制备千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法
技术领域
本发明涉及一种从中药中分离活性成分的方法，具体而言，是一种从千金子中大量地分离制备高纯度千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法。
背景技术
中药千金子为大戟科植物续随子EuphorbialathyrisL.的干燥成熟种子，味辛、性温，有毒，具有泻下逐水，破血消瘸功能，外用可疗癣蚀疣。
千金子含有47%-50%的脂肪油，15%的蛋白质，迄今，国内外学者已从千金子中分离鉴定出近20个二萜类化合物，以及少量的三萜、甾体、脂肪酸酯、香豆素等化合物。这些二萜类化合物占千金子脂肪油总量的3%-5%，根据发现的先后，将部分二萜类化合物命名为千金子素L1-L11（EuphorbiafactorL1-L11）。千金二萜醇二乙酸烟酸酯即为千金子素L8，其母核骨架为续随子烷二萜，具有双重生理活性，既具有泻下、抗肿瘤、抗白血病等药理活性，同时也表现出对皮肤、口腔及胃肠道黏膜强烈的刺激性和致炎、促发致癌等毒性作用。
分子式：C30H37O7N，
化学结构式：
其中，R1=R3=OCCH3，R2=OCC5H4N，R4=H。
目前关于千金二萜醇二乙酸烟酸酯的分离纯化方法文献报道不多，主要是采用有机溶剂（如石油醚、乙醇和石油醚等）浸泡提取，提取液回收有机溶剂，浓缩后用水分散，经萃取，再经反复多次正反相硅胶柱色谱、凝胶色谱和重结晶的方法即得；而且大多停留在对其结构鉴定上，如焦威发表的“千金子化学成分的研究”，再如浙江工业大学硕士论文“半边旗和千金子化学成分研究”、南昌大学硕士论文“千金子毒性成分的研究”、吉林大学“千金子化学成分的研究”，均对千金子中的成分进行了少量分离与结构鉴定，未发现从千金子中大量地分离制备高纯度千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利于大生产操作的从千金子中大量地分离制备高纯度千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法。
本发明的目的是这样实现的：
取粉碎后的千金子原料，5～8倍量95%乙醇回流提取2～4次，每次提取1～3小时，合并提取液，过滤，滤液减压回收提取溶剂，浓缩得油状物，称重，按照2:1～1:2比例加入硅胶（100目～300目）拌样，干法或湿法上样到预处理好的硅胶柱上，径高比为1:5～1:8，用低极性混合溶剂石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每个梯度收集3～6倍量柱体积流份，TLC检测，合并目标流份，于45℃水浴减压旋蒸，回收溶剂，室温放置结晶12～36小时，过滤得结晶粗品，将结晶粗品用石油醚-乙酸乙酯（3:1～1:1）洗涤，干燥即得；上述比例均为重量比。
上述一种分离制备高纯度千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法，所述浓缩得油状物为浓缩至油状物无醇味。
上述一种分离制备高纯度千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法，所述石油醚-乙酸乙酯洗脱梯度为：石油醚-乙酸乙酯（100:0）、石油醚-乙酸乙酯（95:5）、石油醚-乙酸乙酯（90:10）、石油醚-乙酸乙酯（85:15）、石油醚-乙酸乙酯（80:20）、石油醚-乙酸乙酯（75:25）、石油醚-乙酸乙酯（70:30）、石油醚-乙酸乙酯（65:35）。
制备所得千金二萜醇二乙酸烟酸酯采用下列方法检测。
HPLC法测定千金二萜醇二乙酸烟酸酯纯度：
色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合胶硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水(75∶25)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：275nm；柱温：25℃。
测定方法精密称取千金二萜醇二乙酸烟酸酯1.05mg，置于5mL量瓶中，用甲醇溶解，稀释至刻度即得，吸取20μL，注入高效液相色谱仪，采用面积归一化法测定样品纯度。
采用本发明分离制备千金二萜醇二乙酸烟酸酯，与现有技术相比，本发明所述的方法中，浓缩物不经萃取，直接拌样置硅胶层析柱上，具有操作简单，溶剂消耗少，生产成本低，工艺稳定，能耗小，污染小，所得产品纯度高（99%）的优点，可适用于实验室和工业化制备和制备性生产。
具体实施方式
以下通过实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取粉碎后的千金子原料10kg，6倍量95%乙醇回流提取3次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，滤液减压回收提取溶剂，浓缩至无醇味得油状物，称重，按照2:1比例加入硅胶（200目～300目）拌样，干法上样到预处理好的硅胶柱上，径高比为1:5，用低极性混合溶剂按如下梯度石油醚-乙酸乙酯（100:0）、石油醚-乙酸乙酯（95:5）、石油醚-乙酸乙酯（90:10）、石油醚-乙酸乙酯（85:15）、石油醚-乙酸乙酯（80:20）、石油醚-乙酸乙酯（75:25）、石油醚-乙酸乙酯（70:30）、石油醚-乙酸乙酯（65:35）进行洗脱，每个梯度收集5倍量柱体积流份，TLC检测，合并目标流份，于45℃水浴减压旋蒸，回收溶剂至有结晶析出，室温放置结晶24小时，过滤得结晶粗品，将结晶粗品用石油醚-乙酸乙酯（3:1）洗涤，干燥即得千金二萜醇二乙酸烟酸酯0.26g，经HPLC检测，纯度为99.1%。
千金二萜醇二乙酸烟酸酯（EuphorbiafactorL8）无色方晶（乙酸乙酯），
ESI-MSm/z：546[M+Na]+，524[M+H]+，
1H-NMR(600MHz,吡啶）δ：3.60（1H,dd,J=13.2,7.2Hz,H-1)，2.16(1H,m,H-7)，1.74(1H,m,H-8)，6.83(1H,d,J=10.2Hz,H-12)，1.21(3H,d,J=7.2Hz,H-16)，1.31(3H,s,H-17)，1.35(3H,s,H-19)，9.20(1H,t,J=1.2Hz,COC5H4N-3)，7.74(1H,dd,J=7.8Hz,COC5H4N-3)；
13C-NMR(150MHz,吡啶)δ:170.1（s,OAc-5)，21.1(q,OAc-5），170.1（s,OAc-15)，22.0(q,OAc-15)，165.4(s,ONic-3)，151.5(d,ONic-3)，126.6(s,ONic-3)，137.4(d,ONic-3)，123.4(d,ONic-3)，154.2(d,ONic-3)。
实施例2
取粉碎后的千金子原料10kg，7倍量95%乙醇回流提取2次，每次提取3小时，合并提取液，过滤，滤液减压回收提取溶剂，浓缩至无醇味得油状物，称重，按照1:1比例加入硅胶（200目～300目）拌样，湿法上样到预处理好的硅胶柱上，径高比为1:6，用低极性混合溶剂按如下梯度石油醚-乙酸乙酯（100:0）、石油醚-乙酸乙酯（95:5）、石油醚-乙酸乙酯（90:10）、石油醚-乙酸乙酯（85:15）、石油醚-乙酸乙酯（80:20）、石油醚-乙酸乙酯（75:25）、石油醚-乙酸乙酯（70:30）、石油醚-乙酸乙酯（65:35）进行洗脱，每个梯度收集4倍量柱体积流份，TLC检测，合并目标流份，于45℃水浴减压旋蒸，回收溶剂至有结晶析出，室温放置结晶36小时，过滤得结晶粗品，将结晶粗品用石油醚-乙酸乙酯（2:1）洗涤，干燥即得千金二萜醇二乙酸烟酸酯0.25g，经HPLC检测，纯度为99.3%。
实施例3
取粉碎后的千金子原料10kg，8倍量95%乙醇回流提取2次，每次提取1小时，合并提取液，过滤，滤液减压回收提取溶剂，浓缩至无醇味得油状物，称重，按照1:2比例加入硅胶（100目～200目）拌样，湿法上样到预处理好的硅胶柱上，径高比为1:7，用低极性混合溶剂按如下梯度石油醚-乙酸乙酯（100:0）、石油醚-乙酸乙酯（95:5）、石油醚-乙酸乙酯（90:10）、石油醚-乙酸乙酯（85:15）、石油醚-乙酸乙酯（80:20）、石油醚-乙酸乙酯（75:25）、石油醚-乙酸乙酯（70:30）、石油醚-乙酸乙酯（65:35）进行洗脱，每个梯度收集3倍量柱体积流份，TLC检测，合并目标流份，于45℃水浴减压旋蒸，回收溶剂至有结晶析出，室温放置结晶12小时，过滤得结晶粗品，将结晶粗品用石油醚-乙酸乙酯（1:1）洗涤，干燥即得千金二萜醇二乙酸烟酸酯0.22g，经HPLC检测，纯度为99.6%。
实施例4
取粉碎后的千金子原料10kg，5倍量95%乙醇回流提取4次，每次提取1小时，合并提取液，过滤，滤液减压回收提取溶剂，浓缩至无醇味得油状物，称重，按照1:1比例加入硅胶（200目～300目）拌样，干法上样到预处理好的硅胶柱上，径高比为1:8，用低极性混合溶剂按如下梯度石油醚-乙酸乙酯（100:0）、石油醚-乙酸乙酯（95:5）、石油醚-乙酸乙酯（90:10）、石油醚-乙酸乙酯（85:15）、石油醚-乙酸乙酯（80:20）、石油醚-乙酸乙酯（75:25）、石油醚-乙酸乙酯（70:30）、石油醚-乙酸乙酯（65:35）进行洗脱，每个梯度收集6倍量柱体积流份，TLC检测，合并目标流份，于45℃水浴减压旋蒸，回收溶剂至有结晶析出，室温放置结晶24小时，过滤得结晶粗品，将结晶粗品用石油醚-乙酸乙酯（2:1）洗涤，干燥即得千金二萜醇二乙酸烟酸酯0.26g，经HPLC检测，纯度为99.2%。
该项研究受到北京市自然科学基金“基于胃肠水通道蛋白组千金子炮制前后毒-效-物质基础相关性研究”（7122093）、国家自然科学基金“基于毒-效跟踪评价导向的千金子炮制减毒的物质基础及作用机理研究”（81274082）资助。

Claims (2)

1.一种从千金子中分离制备千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法，其特征在于，所述的方法由下列步骤组成：取粉碎后的千金子原料，5～8倍量95%乙醇回流提取2～4次，每次提取1～3小时，合并提取液，过滤，滤液减压回收提取溶剂，浓缩得油状物，称重，按照2:1～1:2比例加入100目～300目的硅胶拌样，干法或湿法上样到预处理好的硅胶柱上，径高比为1:5～1:8，用低极性混合溶剂石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每个梯度收集3～6倍量柱体积流份，TLC检测，合并目标流份，于45℃水浴减压旋蒸，回收溶剂，室温放置结晶12～36小时，过滤得结晶粗品，将结晶粗品用3:1～1:1的石油醚-乙酸乙酯洗涤，干燥即得千金二萜醇二乙酸烟酸酯，上述比例均为重量比，所述石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱的梯度为：100:0的石油醚-乙酸乙酯、95:5的石油醚-乙酸乙酯、90:10的石油醚-乙酸乙酯、85:15的石油醚-乙酸乙酯、80:20的石油醚-乙酸乙酯、75:25的石油醚-乙酸乙酯、70:30的石油醚-乙酸乙酯、65:35的石油醚-乙酸乙酯。
2.根据权利要求1所述从千金子中分离制备千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法，其特征在于，所述浓缩得油状物为浓缩至油状物无醇味。
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