CN105985351B - 高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法 - Google Patents
高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105985351B CN105985351B CN201510079590.6A CN201510079590A CN105985351B CN 105985351 B CN105985351 B CN 105985351B CN 201510079590 A CN201510079590 A CN 201510079590A CN 105985351 B CN105985351 B CN 105985351B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- component
- monomer
- preparation
- sesamolin
- sesamin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000000178 monomer Substances 0.000 title claims abstract description 38
- PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N (+)-sesamin Chemical compound C1=C2OCOC2=CC([C@H]2OC[C@H]3[C@@H]2CO[C@@H]3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- ZZMNWJVJUKMZJY-AFHBHXEDSA-N Sesamolin Chemical compound C1=C2OCOC2=CC([C@H]2OC[C@H]3[C@@H]2CO[C@@H]3OC2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 ZZMNWJVJUKMZJY-AFHBHXEDSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- ZZMNWJVJUKMZJY-UHFFFAOYSA-N Sesamolin Natural products C1=C2OCOC2=CC(C2OCC3C2COC3OC2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 ZZMNWJVJUKMZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N epiasarinin Natural products C1=C2OCOC2=CC(C2OCC3C2COC3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- VRMHCMWQHAXTOR-CMOCDZPBSA-N sesamin Natural products C1=C2OCOC2=CC([C@@H]2OC[C@@]3(C)[C@H](C=4C=C5OCOC5=CC=4)OC[C@]32C)=C1 VRMHCMWQHAXTOR-CMOCDZPBSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 241000207961 Sesamum Species 0.000 claims abstract description 24
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000007670 refining Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 claims abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 11
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 11
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 9
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 6
- -1 filters Substances 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- YKYONYBAUNKHLG-UHFFFAOYSA-N n-Propyl acetate Natural products CCCOC(C)=O YKYONYBAUNKHLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940090181 propyl acetate Drugs 0.000 claims description 5
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 238000013517 stratification Methods 0.000 claims description 3
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 18
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 8
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 5
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 5
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 5
- 241000605372 Fritillaria Species 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000010262 high-speed countercurrent chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- KYELXPJVGNZIGC-UHFFFAOYSA-N Ebeiensine Natural products C1C(=O)C2CC(O)CCC2(C)C(CC2=C3C)C1C2CCC13OC2CC(C)CNC2C1C KYELXPJVGNZIGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KYELXPJVGNZIGC-GKFGJCLESA-N Peimisine Chemical compound C([C@@H]1C(=O)C2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H](CC1=C3C)[C@@H]2[C@@H]1CC[C@@]13O[C@@H]2C[C@H](C)CN[C@H]2[C@H]1C KYELXPJVGNZIGC-GKFGJCLESA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229930013686 lignan Natural products 0.000 description 2
- 235000009408 lignans Nutrition 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 2
- 125000006237 oxymethylenoxy group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- VNTLKSDVRKGNNM-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-benzodioxol-5-yl)-1-(4-hydroxy-6,7-dimethoxy-1-benzofuran-5-yl)propan-1-one Chemical compound C1=C2OCOC2=CC(CCC(=O)C2=C(O)C=3C=COC=3C(OC)=C2OC)=C1 VNTLKSDVRKGNNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000526900 Camellia oleifera Species 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 1
- VXSIXFKKSNGRRO-MXOVTSAMSA-N [(1s)-2-methyl-4-oxo-3-[(2z)-penta-2,4-dienyl]cyclopent-2-en-1-yl] (1r,3r)-2,2-dimethyl-3-(2-methylprop-1-enyl)cyclopropane-1-carboxylate;[(1s)-2-methyl-4-oxo-3-[(2z)-penta-2,4-dienyl]cyclopent-2-en-1-yl] (1r,3r)-3-[(e)-3-methoxy-2-methyl-3-oxoprop-1-enyl Chemical class CC1(C)[C@H](C=C(C)C)[C@H]1C(=O)O[C@@H]1C(C)=C(C\C=C/C=C)C(=O)C1.CC1(C)[C@H](/C=C(\C)C(=O)OC)[C@H]1C(=O)O[C@@H]1C(C)=C(C\C=C/C=C)C(=O)C1 VXSIXFKKSNGRRO-MXOVTSAMSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- QGBSISYHAICWAH-UHFFFAOYSA-N dicyandiamide Chemical compound NC(N)=NC#N QGBSISYHAICWAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002194 fatty esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 150000005692 lignans Chemical class 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- HYJYGLGUBUDSLJ-UHFFFAOYSA-N pyrethrin Natural products CCC(=O)OC1CC(=C)C2CC3OC3(C)C2C2OC(=O)C(=C)C12 HYJYGLGUBUDSLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940070846 pyrethrins Drugs 0.000 description 1
- 239000002728 pyrethroid Substances 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
本发明涉及植物有效成分的分离纯化方法，特别涉及高纯度芝麻素和芝麻林素单体的制备方法，其包括(1)对芝麻回流提取；(2)用溶剂二次提取；(3)将A组分、B组分、C组分、D组分按体积比为1：0.2～1：0.5～3：0.2～1配成精制溶剂体系，得固定相和流动相；(4)利用高速逆流色谱仪和所述的固定相和流动相分离样品，根据所得的色谱图收集目标组分，分别得到高纯度的芝麻素单体和芝麻林素单体。本发明的制备方法的优点是：重现性和分离效果好、效率高、芝麻素和芝麻林素单体产品的纯度达到98％以上。
Description
技术领域
本发明涉及植物有效成分的分离纯化方法，特别涉及高纯度芝麻素和芝麻林素单体的制备方法。
背景技术
芝麻素和芝麻林素为存在于芝麻中的一类木脂素化合物，为芝麻的主要活性成分。芝麻素C20H18O6，熔点121-122℃，其含量约占芝麻的0.2％-0.5％，大量研究表明芝麻素可以抑制流感病毒、仙台病毒和结核杆菌等病毒，同时具有降低胆固醇、促进脂肪氧化、抑制脂肪的合成、治疗气管炎、抗高血压、抗癌等功效。农业上用作除虫菊酯的增剂。芝麻林素也是芝麻中的主要木脂素类成分之一，分子式C20H18O7，熔点93-94℃，药理研究结果表明芝麻林素具有抗氧化、清除自由基、降低胆固醇、抗血压、抗血栓，并有促进酒精代谢、保肝解毒等功效，应用前景广阔。
目前国内尚未有对芝麻素和芝麻林素单体进行分离的专利，现有关于高纯度芝麻素和芝麻林素单体分离制备的文献方法主要采用反复硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20柱色谱等方法，其局限性是费时费力、污染环境、样品纯度低，而且反复柱层析对样品有不可逆性吸附作用，分离得到高纯度芝麻素和芝麻林素单体制备效率低、成本较高，难以发展成为制备量大的分离技术。
高速逆流色谱(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题，使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，HSCCC保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。
经检索发现，公开号为CN102093461A的发明专利申请公开了一种高速逆流色谱纯化茶皂素的方法，其包括：1)茶皂素粗品的制备；2)溶剂的配置；3)样品制备；4)分离纯化。上述的高速逆流色谱纯化茶皂素的方法，设计合理，本发明对油茶饼粕进行预处理，并选择了正确的溶剂系统乙酸乙酯、正丁醇和水，使茶皂素在溶液系统中的分配系数K在0.5～2，最后通过对高速逆流色谱仪的控制调节，使得分离的茶皂素纯度可达95％以上。
公开号为CN103772472A的发明专利申请公开了一种利用高速逆流色谱法从贝母中分离纯化贝母辛的方法，包括：1)取干燥贝母鳞茎，制备贝母总生物碱；2)采用高速逆流色谱分离纯化贝母辛；以正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为2～4:5:2～3:5配成的混合溶液作为固定相(上层)和流动相(下层)；取贝母总生物碱粉末溶于等量的流动相和固定相，由进样阀进样，观察色谱图，待目标峰出现时收集馏分，挥干溶剂，得贝母辛。
公开号为CN101602768的发明专利申请公开了一种芝麻素和芝麻林素的提纯方法，先从芝麻油中分离得到不含脂肪类成分的木脂素类化合物，之后加入乙醚析出芝麻素；过滤，所得滤液减压浓缩后用氯仿溶解，然后加入石油醚至有白色浑浊出现，加热溶解后静置析出芝麻林素。
发明内容
本发明的目的是提供一种高纯度芝麻素和芝麻林素单体的制备方法。
为达到上述目的，具体采用如下的技术方案：
一种高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法，包括以下步骤：
(1)采用有机溶剂对芝麻进行回流提取，抽滤、将滤液浓缩成油状，得总提取物；
(2)将总提取物用溶剂二次提取，取上清液蒸干，得芝麻粗提物；
(3)将A组分、B组分、C组分、D组分按体积比为1：0.2～1：0.5～3：0.2～1配成精制溶剂体系，置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，上层为固定相，下层为流动相，所述A组分为醚或烷烃，B组分为脂肪酯，C组分为脂肪醇，D组分为水；
(4)取芝麻粗提物溶于等量的流动相和固定相(流动相和固定相等量)中，得待分离样品；利用高速逆流色谱仪和所述的固定相和流动相分离待分离样品，根据检测器紫外光谱图接收馏分，分别得到高纯度的芝麻素单体和芝麻林素单体。
在本发明的技术方案中，具体的，所述步骤(1)中有机溶剂为石油醚或/和正己烷，芝麻与有机溶剂的料液比为1:5～1:20g/mL。步骤(1)中浓缩的方法可以采用真空旋转蒸发的方式。
具体的，所述步骤(2)中的溶剂为乙醇或/和甲醇，所述总提取物与溶剂的料液比为1:1～1:5g/mL。步骤(2)中浓缩的方法可以采用真空旋转蒸发的方式。
优选地，步骤(3)中将A组分、B组分、C组分、D组分按体积比为1：0.4～0.7：0.9～1.1：0.5～0.7配成精制溶剂体系。
步骤(4)的具体过程为：用输液泵快速将固定相注入高速逆流色谱仪的分离柱；开启高速逆流色谱仪，慢速注入溶剂系统的流动相进行平衡，溶剂系统达到流体动力学平衡即溶剂系统的上相(固定相)不流出时，注入由等量的流动相和固定相溶解的芝麻粗提物溶液；用紫外检测器检测流出液，根据所得的色谱图收集目标组分。
在本发明的技术方案中，具体的，所述A组分为石油醚或正己烷，B组分为乙酸乙酯或乙酸丙酯，C组分为甲醇或乙醇，D组分为水。
优选的，所述A组分为石油醚，B组分为乙酸乙酯，C组分为甲醇，D组分为水。
作为本发明最佳的实施方式，所述精制溶剂体系为按体积比，石油醚：乙酸乙酯：甲醇：水＝1：0.4：1：0.5；或按体积比，正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝1：0.5：1：0.5。
在本发明的技术方案中，步骤(4)中高速逆流色谱仪的转速为600-1000rpm，流动相的流速为0.5-3.0mL/min。
作为本发明的优选技术方案，所述高速逆流色谱仪柱体积为230mL，上样量为220mg，转速为800rpm，流动相流速为2.0mL/min，固定相保留率为57％，检测波长254nm。
本发明的制备方法的优点是：重现性和分离效果好、效率高、芝麻素和芝麻林素单体产品的纯度达到98％以上，芝麻素和芝麻林素单体的制备成本远低于现有技术，是一种经济、高效的从芝麻中分离制备高纯度芝麻素和芝麻林素单体的方法。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图；
图2为实施例1的高速逆流色谱图；
图3为实施例2的高速逆流色谱图；
图4为实施例1芝麻粗提物的高效液相色谱图；
图5为实施例1分离得到的芝麻素单体的高效液相色谱图；
图6为实施例1分离得到的芝麻林素单体的高效液相色谱图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中采用北京新技术所研制的半制备型高速逆流色谱仪，它是由柱塞泵、进样阀、紫外检测仪、记录仪和色谱分离柱(由聚四氟乙烯管多层缠绕形成的螺旋管柱，容量为230mL)等组成。
实施例1
如图1所示，本实施例中高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法包括以下步骤：
(1)取芝麻1.1kg粉碎后用10L正己烷回流提取3次，每次2h，抽滤，滤液真空旋转蒸发成油状，得到总提取物489.5g；
(2)将上述总提取物加500mL乙醇超声提取3次，每次2h，取上清液真空旋转蒸发，得芝麻粗提物10.3g(如图4所示)；
(3)按体积比，将石油醚：乙酸乙酯：甲醇：水＝1：0.4：1：0.5配成精制溶剂体系，置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后将上下两相分开上层为固定相，下层为流动相；
(4)取220mg芝麻粗提物溶解于5mL上相(固定相)和5mL下相(流动相)的混合物中待用。利用高速逆流色谱仪，首先使进样阀处于进样状态，将固定相用泵以灌满色谱分离柱，停泵。开启速度控制器，使高速流色谱仪的色谱分离柱正转，转速达800rpm时，设置流动相流速为2.0mL/min，开始泵流动相，达到流体动力学平衡后，将溶解好的样品用注射器注入逆流色谱仪进样阀的贮液管中，旋转进样阀为接柱状态，使样品进入色谱分离柱。然后根据检测器紫外光谱图(如图所示2)接收收目标成分，得芝麻素单体(如图5所示)和芝麻林素单体(如图6所示)62.0mg和5.0mg，HPLC分析纯度为99.5％和98.0％。
利用高效液相色谱分析分离物，液相条件：Agilent C18色谱柱(4.6×250mm，5μ)，紫外检测波长286nm，柱温：25℃，流速：1.0mL/min，进样量：10μL，流动相为甲醇：水＝80：20。
结构鉴定：对分离得到的芝麻素和芝麻林素应用进行Agilent 5973N质谱仪和Varian 600MHz核磁共振波谱仪分别进行MS，1H-NMR和13C-NMR谱的测定，所得数据如下：
芝麻素：白色粉末，ESI-MS(positive mode),m/z 355.1[M+H]+.1H-NMR(600MHz,CDCl3)δppm:3.04(2H,m,H-8′,H-8),3.86(2H,dd,J＝9.0,4.6Hz,H-9′α,H-9α),4.22(2H,dd,J＝9.0,6.6Hz H-9′β,H-9β),4.71(2H,d,J＝3.6Hz,H-7′,H-7),5.94(4H,s,OCH2O),6.77～6.84(3H×2,m,H-2′,H-5′,H-6′,H-2,H-5,H-6).13C-NMR(600MHz,CDCl3)δ:135.2(2C,C-1,C-1′),106.7(2C,C-2,C-2′),148.1(2C,C-3,C-3′),147.3(2C,C-4,C-4′),108.4(2C,C-5,C-5′),119.5(2C,C-6,C-6′),85.9(2C,C-7,C-7′),54.5(2C,C-8,C-8′),71.9(2C,C-9,C-9′),101.3(2OCH2O).
芝麻林素：白色粉末，ESI-MS(positive mode),m/z 371.2[M+H]+.1H-NMR(600MHz,CDCl3)δppm:3.31(H,m,H-8),2.95(H,m,H-8′),3.64(H,d,H-9),3.96(H,d,H-9′),4.13(H,d,J＝4.2Hz,H-9),4.45(H,t,J＝8.4Hz,H-9),5.50(H,s,H-7),4.40(H,d,J＝9.2Hz,H-7′),5.96(2H,s,OCH2O),5.93(2H,s,OCH2O),6.50(H,d,J＝2.4Hz,H-6),6.83(H,s,H-6′),6.71(H,s,H-5),6.79(H,s,H-5′),6.62(H,d,J＝2.4Hz,H-2),6.88(H,s,H-2′).13C-NMR(600MHz,CDCl3)δ:151.8(C-1),100.2(C-2),148.1(C-3),142.7(C-4),108.2(C-5),108.9(C-6),106.9(C-7),53.3(C-8),71.3(C-9),101.2(C-10),134.4(C-1′),106.6(C-2′),147.4(C-3′),148.0(C-4′),108.2(C-5′),119.7(C-6″,87.0(C-7′),52.8(C-8′),69.8(C-9′),101.1(C-10′)。
实施例2
芝麻素单体和芝麻林素单体制备流程图如图1所示。
1.取芝麻1.0kg粉碎后用石油醚回流提取3次，每次2h，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，得到总提取物460.8g。
2.将上述总提取物加500mL甲醇超声提取3次，每次2h，取上清液真空旋转蒸发，得芝麻粗提物9.5g。
3.分离所选溶剂系统为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝1：0.5：1：0.5，其余步骤同实施例1。得到纯度为99.6％和98.3％的芝麻素和芝麻林素单体70mg和6.2mg，高速逆流色谱分离紫外光谱图见图3。
实施例3
分离所选溶剂系统为石油醚：乙酸丙酯：乙醇：水＝1：0.5：1：0.6，其余步骤同实施例1。得到纯度为99.5％和98.2％的芝麻素和芝麻林素单体71mg和6.4mg。
实施例4
分离所选溶剂系统为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝1：0.7：1.1：0.6，其余步骤同实施例1。得到纯度为99.1％和98.1％的芝麻素和芝麻林素单体58mg和5.6mg。
实施例5
分离所选溶剂系统为石油醚：乙酸丙酯：甲醇：水＝1：0.6：0.9：0.5，其余步骤同实施例1。得到纯度为99.4％和98.4％的芝麻素和芝麻林素单体65mg和6.4mg。
实施例6
分离所选溶剂系统为正己烷：乙酸乙酯：乙醇：水＝1：0.5：1.1：0.7，其余步骤同实施例1。得到纯度为99.0％和98.0％的芝麻素和芝麻林素单体66mg和6.7mg。
实施例7
分离所选溶剂系统为正己烷：乙酸丙酯：乙醇：水＝1：0.4：0.9：0.5，其余步骤同实施例1。得到纯度为99.2％和98.4％的芝麻素和芝麻林素单体68mg和7.1mg。
专利申请CN101602768介绍了一种芝麻素和芝麻林素的提纯方法，采用了分步重结晶的方法，获得纯度95％以上的芝麻素和芝麻林素，本申请纯化阶段采用高速逆流色谱法，一次分离得到纯度在98％含量以上的高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体，该方法具有重现性好、分离量大、样品无损失、回收率高等优点。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用有机溶剂对芝麻进行回流提取，抽滤、将滤液浓缩成油状，得总提取物；所述有机溶剂为石油醚或/和正己烷；
(2)将总提取物用溶剂二次提取，取上清液蒸干，得芝麻粗提物；所述溶剂为乙醇或/和甲醇；
(3)将A组分、B组分、C组分、D组分按体积比为1：0.2～1：0.5～3：0.2～1配成精制溶剂体系，置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，上层为固定相，下层为流动相，所述A组分为石油醚或正己烷，B组分为乙酸乙酯或乙酸丙酯，C组分为甲醇或乙醇，D组分为水；
(4)取芝麻粗提物溶于等量的流动相和固定相中，等待分离样品；利用高速逆流色谱仪和所述的固定相和流动相分离待分离样品，用紫外检测器检测流出液，根据所得的色谱图收集目标组分，分别得到高纯度的芝麻素单体和芝麻林素单体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中芝麻与有机溶剂的料液比为1:5～1:20g/mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述总提取物与溶剂的料液比为1:1～1:5g/mL。
4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述A组分为石油醚，B组分为乙酸乙酯，C组分为甲醇，D组分为水。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述精制溶剂体系为按体积比，石油醚：乙酸乙酯：甲醇：水＝1：0.4：1：0.5。
6.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述A组分为正己烷，B组分为乙酸乙酯，C组分为甲醇，D组分为水。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述精制溶剂体系为按体积比，正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水＝1：0.5：1：0.5。
8.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中高速逆流色谱仪的转速为600-1000rpm，流动相的流速为0.5-3.0mL/min。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)采用有机溶剂对芝麻进行回流提取1～3次，每次1～3小时。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)将总提取物用溶剂二次提取1～3次，每次1～3小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510079590.6A CN105985351B (zh) | 2015-02-13 | 2015-02-13 | 高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510079590.6A CN105985351B (zh) | 2015-02-13 | 2015-02-13 | 高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105985351A CN105985351A (zh) | 2016-10-05 |
| CN105985351B true CN105985351B (zh) | 2018-04-13 |
Family
ID=57041457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510079590.6A Expired - Fee Related CN105985351B (zh) | 2015-02-13 | 2015-02-13 | 高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105985351B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113480514B (zh) * | 2021-08-16 | 2022-07-22 | 内蒙古泓兴生物科技有限公司 | 一种提取芝麻素的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101254187A (zh) * | 2008-02-22 | 2008-09-03 | 朱萧俊 | 一种治疗代谢综合症的组合物 |
| CN101602768A (zh) * | 2009-07-17 | 2009-12-16 | 河南省农科院农副产品加工研究所 | 一种芝麻素和芝麻林素的提纯方法 |
| CN104177370A (zh) * | 2014-09-04 | 2014-12-03 | 陕西源邦生物技术有限公司 | 一种从芝麻粕中制备高含量芝麻素的方法 |
-
2015
- 2015-02-13 CN CN201510079590.6A patent/CN105985351B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101254187A (zh) * | 2008-02-22 | 2008-09-03 | 朱萧俊 | 一种治疗代谢综合症的组合物 |
| CN101602768A (zh) * | 2009-07-17 | 2009-12-16 | 河南省农科院农副产品加工研究所 | 一种芝麻素和芝麻林素的提纯方法 |
| CN104177370A (zh) * | 2014-09-04 | 2014-12-03 | 陕西源邦生物技术有限公司 | 一种从芝麻粕中制备高含量芝麻素的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105985351A (zh) | 2016-10-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106866602B (zh) | 一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法 | |
| CN100497344C (zh) | 一种高纯度银杏内酯的制备方法 | |
| CN101691330A (zh) | 洋蓟中高纯度抗病毒活性组分的分离纯化方法 | |
| CN101864191B (zh) | 高纯度红曲色素组分的制备方法 | |
| CN101343225A (zh) | 高纯度二咖啡酰奎宁酸类化合物的制备方法 | |
| CN104892687A (zh) | 高速逆流色谱分离纯化十大功劳叶中单体化合物的方法 | |
| CN105367531A (zh) | 一种采用循环高速逆流色谱从麦冬须根中分离两种高异黄酮的方法 | |
| CN110437053A (zh) | 一种从紫茎泽兰中提取分离泽兰酮类化合物的方法 | |
| CN106632546A (zh) | 一种同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法 | |
| CN106957310B (zh) | 一种山楂叶中黄酮类单体的高效制备方法 | |
| CN105985351B (zh) | 高纯度芝麻素单体和芝麻林素单体的制备方法 | |
| CN102532147B (zh) | 高纯度白鲜碱单体的制备方法 | |
| CN101323605B (zh) | 异苯并呋喃酮类化合物的制备方法 | |
| CN106589050B (zh) | 一种分离制备乳香单体的方法 | |
| CN103145729B (zh) | 银杏内酯b化合物及其制备方法 | |
| CN106674239B (zh) | 一种天目琼花枝叶木脂素及提取方法和用途 | |
| CN106831892A (zh) | 一种山楂叶中黄酮单体的制备方法 | |
| CN105732611B (zh) | 应用高速逆流色谱分离功劳木中生物碱类化合物的方法 | |
| CN107721857A (zh) | 一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN105085453B (zh) | 一种利用高速逆流色谱法从马蔺子中分离制备低聚芪类化合物的方法 | |
| CN105693714B (zh) | pH‑区带精制逆流色谱分离功劳木中生物碱类化合物的方法 | |
| CN101891782B (zh) | 朝鲜淫羊藿叶中淫羊藿次苷ⅰ单体的分离方法 | |
| CN109369382A (zh) | 一种银杏酸类成分的制备方法 | |
| CN102311327A (zh) | 一种蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丙素的制备方法 | |
| CN103193748A (zh) | 从野菊花中分离制备刺槐素单体的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180413 |