CN102507771B - 一种新的亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法，步骤如下：称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试样品各适量，分别加水制成一定浓度的溶液；吸取样品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，流动相A相：磷酸二氢钾溶液；B相：甲醇，峰面积归一化法计算含量。

Description

一种新的亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量测定检测方法。具体的讲是一种新的采用HPLC仪器的方法检测亚硫酸氢钠穿心莲内酯含量的方法。
背景技术：
亚硫酸氢钠穿心莲内酯为一种抗菌消炎药物，已有产品上市销售。现有亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量测定方法采用紫外分光光度法，此法对样品配制操作要求很高，温度、时间的细微差异都对测定结果有很大的影响，同一个样品，不同的测定人员测定，结果都有很大差异，而且此法专属性很差，亚硫酸氢钠穿心莲内酯有关杂质亦有紫外吸收，因此准确度很差。
文献有报道用HPLC检测亚硫酸氢钠穿心莲内酯含量的方法，若采用该方法检测并使用DAD检测器进行全波长扫描，可发现其主峰的峰纯度不高，显示有杂质峰包含在主峰内，因此，含量测定结果亦不理想。
本发明经过筛选，找到一种灵敏度高，杂质和主成分亚硫酸氢钠穿心莲内酯的分离度高的高效液相色谱检测法，和现有技术相比，操作简单，重现性好，峰纯度高，准确性好，为亚硫酸氢钠穿心莲内酯后续的一些研究工作开展创造有利条件。
发明内容：
本发明提供一种灵敏度高，杂质和主成分亚硫酸氢钠穿心莲内酯的分离度高的亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量测定方法，该方法包括以下步骤：
步骤1，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液；
步骤2，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液；
步骤3，将上述溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；
步骤4，根据色谱图计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
其中步骤1所述的对照品溶液的配制方法如下：
精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品，加水制成0.01-2mg/ml的溶液；优选的，配制成0.1-1mg/ml的溶液，更优选的是0.1-0.5mg/ml的溶液，最优选的是0.2mg/ml的溶液。
其中步骤1所述的供试品溶液的配制方法如下：
精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品，加水制成0.01-2mg/ml的溶液；优选的，配制成0.1-1mg/ml的溶液，更优选的是0.1-0.5mg/ml的溶液，最优选的是0.2mg/ml的溶液。
其中步骤3，吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，进样量：10μl，其中的色谱条件为：
色谱柱：安捷伦ZORBAXXDBC18柱，4.6mm*150mm，柱温20℃-40℃，流动相A相：0.001-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液；B相：甲醇，两者体积比例为A相55-95∶B相45-5，优选A相60-70∶B相40-30，最优选A相65∶B相35，梯度方式为恒流，检测波长200-240nm，优选220nm。流速1ml/min；
本发明优选的色谱条件为：柱温30℃，流动相A相：0.01-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液；两者体积比例为A相60-70∶B相40-30，
本发明更优选的色谱条件为：柱温30℃，流动相A相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液；两者体积比例为A相65∶B相35，检测波长220nm。
本发明所述亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品可以从市场购买得到，亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品为工业化生产得到的未知含量的亚硫酸氢钠穿心莲内酯产品。
通过以上方法得到对照品和供试品的色谱图，用峰面积归一化法计算可以得到供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
本发明的含量测定方法是经过对色谱条件的充分摸索和筛选得到的，属于最优选的方法。
以下的一些试验可以表明本发明上述的检测方法的可行性、准确性和可靠性。
一：专属性试验
取亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，精密称定，加水溶解制成约0.2mg/ml的供试品溶液，按照上述方法进行测定；取硫酸氢钠穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加水溶解制成约0.2mg/ml的对照品溶液。按照上述方法进行测定。测定图谱如图1、图2。
以上实验图谱检测表明，采用该方法测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量，杂质分离度良好，峰对称性良好，无明显干扰。
二：精密度试验
取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，进样量为10μl，主峰峰面积的RSD值为0.42％，结果见如表1。
表1：精密度试验结果
No. 主峰面积
1 1902222
2 1892623
3 1886666
4 1882847
5 1880228
6 1890166
均值 1889125
RSD(％) 0.416
结论：精密度符合要求
三：线性关系考察：
取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品适量，配制成0.2mg/ml浓度，进样5次，进样量1，2，5，10，20μl，以峰面积的对数值为横坐标，进样量(μg)的对数值为纵坐标，绘制标准曲线，亚硫酸氢钠穿心莲内酯的回归方程为：
y＝0.9901x+5.9614，r2＝0.9999；
标准曲线图如图3。
结论：线性关系符合要求
四：耐用性
取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品适量，加水稀释配制成0.2mg/ml浓度，放置1小时、2小时、4小时、8小时、16小时后，进样检测，计算主峰峰面积的RSD，并换用不同品牌的色谱柱重复上述试验。结果如表2、表3。
表2：安捷伦公司生产的色谱柱检测结果
主峰面积
1小时进样 1926410
2小时进样 1927415
4小时进样 1926942
8小时进样 1926240
16小时进样 1925042
RSD(％) 0.046
表3：岛津公司生产的色谱柱检测结果
主峰面积
1小时进样 1934327
2小时进样 1935678
4小时进样 1934437
8小时进样 1934525
16小时进样 1932919
RSD(％) 0.051
结论：耐用性符合要求
五：准确度(加样回收率)
精密称取在105℃干燥至恒重的亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，配制成每1ml含2mg的溶液。作为溶液A
精密称取在105℃干燥至恒重的亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品，加水制成每1ml含2mg的溶液。作为溶液B
精密量取3ml溶液A和1ml溶液B，置于一50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为样品1
精密量取4ml溶液A和1ml溶液B，置于一50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为样品2
精密量取5ml溶液A和1ml溶液B，置于一50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为样品3
分别精密量取3ml、4ml、5ml的溶液A，分别置于50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为样品4、样品5、样品6
精密量取1ml溶液B，置于一50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为样品7
测定，计算含量，如表4
表4：加样回收率
结论：准确度符合要求
六：样品的含量测定
取10份亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，在105℃真空干燥至恒重，精密称取适量，制成约0.2mg/ml的溶液，进样分析，峰面积归一化法计算含量。含量测定结果如表5。
表5：样品测定结果
样品 含量(％)
样品1 100.03
样品2 100.00
样品3 99.96
样品4 99.52
样品5 99.69
样品6 99.79
样品7 99.64
样品8 99.76
样品9 99.86
样品10 99.91
附图说明：
图1：专属性对照品图谱
图2：专属性样品图谱
图3：标准曲线图
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试品各适量，分别加水制成0.1mg/ml的溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，进样量：10μl。色谱柱：安捷伦ZORBAXXDBC18柱，4.6mm*150mm，柱温25℃，流动相A相：0.01mol/L磷酸二氢钾溶液；B相：甲醇，比例为A相55∶B相45，梯度方式为恒流，检测波长210nm，峰面积归一化法计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量为99.21％。
实施例2
精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试品各适量，分别加水制成0.2mg/ml的溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，进样量：10μl。色谱柱：安捷伦ZORBAXXDBC18柱，4.6mm*150mm，柱温30℃，流动相A相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液；B相：甲醇，比例为A相65∶B相35，梯度方式为恒流，检测波长220nm，峰面积归一化法计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量为99.05％。

Claims (7)

1.一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
步骤1，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液；
步骤2，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液；
步骤3，将上述溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；
步骤4，根据色谱图计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量；
其中步骤3所述吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，色谱仪的色谱条件为：色谱柱：安捷伦ZORBAXXDBC18柱，4.6mm*150mm，柱温30℃，流动相A相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液；B相：甲醇，两者体积比例为A相55-65：B相45-35，梯度方式为恒流，检测波长220nm；流速1ml/min。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤1或2所述的对照品溶液和供试品溶液的配制方法如下：精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品或供试品，加水制成0.01-2mg/ml的溶液。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤1或2所述的对照品溶液和供试品溶液的配制方法如下：精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品或供试品，加水制成0.1-0.5mg/ml的溶液。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤1或2所述的对照品溶液和供试品溶液的配制方法如下：精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品或供试品，加水制成0.2mg/ml的溶液。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤3所述吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，其中的进样量为10μl。
6.一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法，其特征在于，精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试品各适量，分别加水制成0.1mg/ml的溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，进样量：10μl，色谱柱：安捷伦ZORBAXXDBC18柱，4.6mm*150mm，柱温25℃，流动相A相：0.01mol/L磷酸二氢钾溶液；B相：甲醇，比例为A相55：B相45，梯度方式为恒流，检测波长210nm，峰面积归一化法计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
7.一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量检测方法，其特征在于，精密称取亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品和供试品各适量，分别加水制成0.2mg/ml的溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，进样量：10μl，色谱柱：安捷伦ZORBAXXDBC18柱，4.6mm*150mm，柱温30℃，流动相A相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液；B相：甲醇，比例为A相65：B相35，梯度方式为恒流，检测波长220nm，峰面积归一化法计算供试品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量。
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