CN102367464A - 一种猪皮胶原蛋白肽的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种猪皮胶原蛋白肽的提取方法，该方法采用新鲜猪皮为主要原料，经过清洗、切丁、绞碎、配水、蛋白酶酶解、灭酶、风味蛋白酶酶解、灭酶、脱脂、脱色、膜分离，将得到的滤液经干燥后即得到猪皮胶原蛋白肽。本发明方法生产周期短、成本低、反应条件温和、对环境无污染，而且所得产品安全性高，可广泛应用于保健品、化妆品和药品等领域。

Description

一种猪皮胶原蛋白肽的提取方法
技术领域
本发明方法涉及猪皮的深加工技术领域，具体涉及一种猪皮胶原蛋白肽的提取方法，是一种以新鲜猪皮为原料，利用纯生物手段获取猪皮胶原蛋白肽的方法。
背景技术
猪皮是生猪分割过程中的一种副产品，而其中蛋白质的含量高达33%以上，其中胶原蛋白含量为88%左右，其营养价值十分可观。胶原蛋白由于特殊复杂的空间结构，其分子量高达300KD，很难被人体吸收，因此，通过生物手段把胶原蛋白水解为小分子的多肽物质，开发出对人体有益的产品具有广阔的前景。
目前，有关猪皮胶原蛋白肽的提取方法，一般采用是化学手段进行两次脱脂（如中国专利申请200810061250.0），操作繁琐而且高浓度的碱还不可避免地导致氨基酸等物质结构的破坏。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，提供一种利用生物酶解手段及离心脱脂技术提取出猪皮胶原蛋白肽的方法。
为了为解决上述技术问题，本发明采取如下技术方案：
1、称取新鲜猪皮作为原料，用35℃-45℃水洗净后，用切丁机切成1-2.5cm的长条，再用绞肉机绞碎，再按原料重量的6-9倍加纯化水水搅拌均匀；
2、然后升温至50-55℃，调节pH 至7-8.5，加入原料猪皮重量1-2%的22U/mg的蛋白酶，温度保持在50-55℃，反应4-6h，反应过程中保持体系pH值稳定，酶解完后将得到的酶解液升温至90-95℃，保持10-15min灭酶；
3、再加入原料猪皮重量0.5-1%的28U/mg的风味蛋白酶，搅拌酶解3-4h，酶解过程中保持pH值6.5-8，酶解完后将得到的酶解液升温至90-95℃，保持10-15min灭酶；
4、将酶解液用离心机离心脱去脂肪，即为蛋白液；
5、将蛋白液中加入原料猪皮重量1.8-2.2%的粉末状活性炭脱色，然后滤除活性炭，得滤液；
6、滤液经纳滤分离系统进行分离，脱盐并浓缩；
7、浓缩液经干燥后即得猪皮胶原蛋白肽干品。
所述的离心机为管式离心液液分离机。
所述的风味蛋白酶为外切蛋白酶，它是一种端肽酶，它由筛选的经基因改造的米曲霉菌株经深层发酵生产的一种肽酶。
所述的干燥为喷雾干燥。
与现有技术相比，本发明方法的优点和有益效果如下：
1、有效避开了化学手段所带来的环境污染，以及对产品的结构的破坏；
2、本发明的纳滤分离系统为膜分离技术，对液态物料进行分分子量分离、浓缩和脱盐，均在常温下操作、无相态变化、高效节能，并且生产过程中不产生污染；
3、本发明方法生产出来的猪皮胶原蛋白肽产品的纯度高，其总蛋白质中分子量300-2000道尔顿的肽含量达到98%以上，分子量≥2000道尔顿的在2%以内；
4、本发明方法生产出来的猪皮胶原蛋白肽的分子量小，人体容易吸收，吸收率达100%；
5、本发明采用了管式离心机进行机械脱脂，对液态物料无任何污染且不改变产品氨基酸的原始组成；
6、本发明方法的生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质，安全，无毒副作用，其产品中脯氨酸和羟脯氨酸的含量可分别高达14.01%和13.92%，可广泛应用于化妆品、食品、药品等领域。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明方法作进一步的详细说明。
实施例1：
称取新鲜猪皮1kg作为原料，用35℃水洗净后，用切丁机切成1cm的长条，再用绞肉机绞碎，加入6kg纯化水搅拌均匀；然后升温至55℃，用食品级无水氢氧化钠调节pH 值至8.5，加入20g的22U/mg的蛋白酶，温度保持在55℃，反应6h，反应过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值稳定，酶解完后将得到的酶解液升温至95℃，保持10min灭酶；再加入10g的28U/mg的风味蛋白酶，搅拌酶解3h，酶解过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值8，酶解完后将得到的酶解液升温至95℃，保持15min灭酶；将酶解液离心脱去脂肪，即为蛋白液；将蛋白液中加入18g的粉末状活性炭脱色，然后滤除活性炭，得滤液；滤液用滤膜为1nm的纳滤分离系统进行分离、脱盐、浓缩；浓缩液经喷雾干燥后即得猪皮胶原蛋白肽干品。
表1 实施例1所得产品的检测报告
检测项目 国家标准规定 检测结果
形态 粉末状，无结块现象 粉末状，无结块
色泽 黄色或淡黄色 白色
滋味与气味 有产品所具有的滋味与气味 无
杂质 无正常视力可见外来杂质 无杂质
总蛋白质 ≥80.0% 91.8%
总蛋白质中肽（分子量300-2000道尔顿）含量 ≥75.0%  99.8%
pH值（10wt%水溶液） 7.0-8.0 7.2
水分 ≤7.0% 4.55%
灰分 ≤10.0% 4.60%
砷含量（以As元素计） ≤0.5mg/kg 0.20mg/kg
铅含量（以Pb元素计） ≤0.5mg/kg 0.18mg/kg
细菌总数 ≤30000cfu/g 1600cfu/g
大肠菌群 ≤40MPN/100g ＜30MPN/100g
霉菌和酵母 ≤50cfu/g ＜10cfu/g
致病菌 不得检出 未检出
自以上检测报告表可以看到：本工艺该批次产品品相优于一般产品，颜色洁白，无淡黄色，产品纯度高，几乎全为短肽产品，而其他指标，也优于国家标准。
实施例2：
称取新鲜猪皮2kg作为原料，用38℃水洗净后，用切丁机切成1.5cm的长条，再用绞肉机绞碎，加入14kg纯化水搅拌均匀；然后升温至53℃，用食品级无水氢氧化钠调节pH 值至8.2，加入40g的22U/mg的蛋白酶，温度保持在53℃，反应5.5h，反应过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值稳定，酶解完后将得到的酶解液升温至93℃，保持12min灭酶；再加入20g的28U/mg的风味蛋白酶，搅拌酶解3.8h，酶解过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值7.8，酶解完后将得到的酶解液升温至93℃，保持12min灭酶；将酶解液离心脱去脂肪，即为蛋白液；将蛋白液中加入40g的粉末状活性炭脱色，然后滤除活性炭，得滤液；滤液用滤膜为1nm的纳滤分离系统进行分离、脱盐、浓缩；浓缩液经喷雾干燥后即得猪皮胶原蛋白肽干品。
表2实施例2所得产品的检测报告
检测项目 国家标准规定 检测结果
形态 粉末状，无结块现象 粉末状，无结块
色泽 黄色或淡黄色 白色
滋味与气味 有产品所具有的滋味与气味 无
杂质 无正常视力可见外来杂质 无杂质
总蛋白质 ≥80.0% 93.5%
总蛋白质中肽（分子量300-2000道尔顿）含量 ≥75.0%  99.7%
pH值（10wt%水溶液） 7.0-8.0 7.1
水分 ≤7.0% 2.55%
灰分 ≤10.0% 4.10%
砷含量（以As元素计） ≤0.5mg/kg 0.21mg/kg
铅含量（以Pb元素计） ≤0.5mg/kg 0.20mg/kg
细菌总数 ≤30000cfu/g 2000cfu/g
大肠菌群 ≤40MPN/100g ＜20MPN/100g
霉菌和酵母 ≤50cfu/g ＜15cfu/g
致病菌 不得检出 未检出
自以上检测报告表可以看到：本工艺该批次产品品相优于一般产品，颜色洁白，无淡黄色，产品纯度高，几乎全为短肽产品，而其他指标，也优于国家标准。
实施例3：
称取新鲜猪皮10kg作为原料，用40℃水洗净后，用切丁机切成2cm的长条，再用绞肉机绞碎，加入70kg纯化水搅拌均匀；然后升温至52℃，用食品级无水氢氧化钠调节pH 值至8.2，加入200g的22U/mg的蛋白酶，温度保持在52℃，反应5h，反应过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值稳定，酶解完后将得到的酶解液升温至92℃，保持13min灭酶；再加入100g的28U/mg的风味蛋白酶，搅拌酶解3.8h，酶解过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值7.5，酶解完后将得到的酶解液升温至92℃，保持13min灭酶；将酶解液离心脱去脂肪，即为蛋白液；将蛋白液中加入200g的粉末状活性炭脱色，然后滤除活性炭，得滤液；滤液用滤膜为1nm的纳滤分离系统进行分离、脱盐、浓缩；浓缩液经喷雾干燥后即得猪皮胶原蛋白肽干品。
表3 实施例3所得产品的检测报告
检测项目 国家标准规定 检测结果
形态 粉末状，无结块现象 粉末状，无结块
色泽 黄色或淡黄色 白色
滋味与气味 有产品所具有的滋味与气味 无
杂质 无正常视力可见外来杂质 无杂质
总蛋白质 ≥80.0% 92.8%
总蛋白质中肽（分子量500-3000道尔顿）含量 ≥75.0%  99.9%
pH值（10wt%水溶液） 7.0-8.0 7.5
水分 ≤7.0% 2.9%
灰分 ≤10.0% 4.0%
砷含量（以As元素计） ≤0.5mg/kg 0.20mg/kg
铅含量（以Pb元素计） ≤0.5mg/kg 0.12mg/kg
细菌总数 ≤30000cfu/g 1400cfu/g
大肠菌群 ≤40MPN/100g ＜20MPN/100g
霉菌和酵母 ≤50cfu/g ＜10cfu/g
致病菌 不得检出 未检出
自以上检测报告表可以看到：本工艺该批次产品品相优于一般产品，颜色洁白，无淡黄色，产品纯度高，几乎全为短肽产品，而其他指标，也优于国家标准。
实施例4：
称取新鲜猪皮100kg作为原料，用45℃水洗净后，用切丁机切成2cm的长条，再用绞肉机绞碎，加入800kg纯化水搅拌均匀；然后升温至50℃，用食品级无水氢氧化钠调节pH 值至7.5，加入1.5kg的22U/mg的蛋白酶，温度保持在50℃，反应5h，反应过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值稳定，酶解完后将得到的酶解液升温至90℃，保持15min灭酶；再加入500g的28U/mg的风味蛋白酶，搅拌酶解3.5h，酶解过程中用食品级无水片状氢氧化钠溶液保持体系pH值8，酶解完后将得到的酶解液升温至90℃，保持15min灭酶；将酶解液离心脱去脂肪，即为蛋白液；将蛋白液中加入2kg的粉末状活性炭脱色，然后滤除活性炭，得滤液；滤液用滤膜为1nm的纳滤分离系统进行分离、脱盐、浓缩；浓缩液经喷雾干燥后即得猪皮胶原蛋白肽干品。
表4 实施例4所得产品的检测报告
检测项目 国家标准规定 检测结果
形态 粉末状，无结块现象 粉末状，无结块
色泽 黄色或淡黄色 白色
滋味与气味 有产品所具有的滋味与气味 无
杂质 无正常视力可见外来杂质 无杂质
总蛋白质 ≥80.0% 92.9%
总蛋白质中肽（分子量300-2000道尔顿）含量 ≥75.0%  99.7%
pH值（10wt%水溶液） 7.0-8.0 7.3
水分 ≤7.0% 3.1%
灰分 ≤10.0% 2.9%
砷含量（以As元素计） ≤0.5mg/kg 0.13mg/kg
铅含量（以Pb元素计） ≤0.5mg/kg 0.11mg/kg
细菌总数 ≤30000cfu/g 1200cfu/g
大肠菌群 ≤40MPN/100g ＜20MPN/100g
霉菌和酵母 ≤50cfu/g ＜10cfu/g
致病菌 不得检出 未检出
自以上检测报告表可以看到：本工艺该批次产品品相优于一般产品，颜色洁白，无淡黄色，产品纯度高，几乎全为短肽产品，而其他指标，也优于国家标准。
本发明中将酶解液离心脱去脂肪，是将酶解液用离心机离心脱去脂肪，该离心机为管式离心液液分离机。风味蛋白酶为外切蛋白酶，它是一种端肽酶，它由筛选的经基因改造的米曲霉菌株经深层发酵生产的一种肽酶。本发明方法生产出来的猪皮胶原蛋白肽产品的纯度高，其总蛋白质中分子量300-2000道尔顿的肽含量达到98%以上，分子量≥2000道尔顿的在2%以内。

Claims (4)

1.一种猪皮胶原蛋白肽的提取方法，其特征是包括如下步骤：
1）称取新鲜猪皮作为原料，用35℃-45℃水洗净后，用切丁机切成1-3cm的长条，再用绞肉机绞碎，再按原料重量的6-9倍加纯化水搅拌均匀；
2）然后升温至50-55℃，调节pH 值至7-8.5，加入原料猪皮重量1-2%的22U/mg的蛋白酶，温度保持在50-55℃，反应4-6h，反应过程中保持体系pH值稳定，酶解完后将得到的酶解液升温至90-95℃，保持10-15min灭酶；
3）再加入原料猪皮重量0.5-1%的28U/mg的风味蛋白酶，搅拌酶解3-4h，酶解过程中保持pH值6.5-8，酶解完后将得到的酶解液升温至90-95℃，保持10-15min灭酶；
4）将酶解液用离心机离心脱去脂肪，即为蛋白液；
5）将蛋白液中加入原料猪皮重量1.8-2.2%的粉末状活性炭脱色，然后滤除活性炭，得滤液；
6）滤液再经纳滤分离系统进行分离，脱盐并浓缩；
7）浓缩液经干燥后即得猪皮胶原蛋白肽干品。
2.如权利要求1所述的猪皮胶原蛋白肽的提取方法，其特征是所述的离心机为管式离心液液分离机。
3.如权利要求1所述的猪皮胶原蛋白肽的提取方法，其特征是所述的风味蛋白酶为外切蛋白酶，它是一种端肽酶，它由筛选的经基因改造的米曲霉菌株经深层发酵生产的一种肽酶。
4.如权利要求1所述的猪皮胶原蛋白肽的提取方法，其特征是所述的干燥为喷雾干燥。
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