CN102271517A - 氧化的脂质化合物和其用途 - Google Patents

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Abstract

本文提供了新的氧化的脂质以及制备其的方法、其在治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症和相关病症中的用途。

Description

氧化的脂质化合物和其用途
本发明的领域和背景
本发明在其一些实施方案中涉及新的氧化的脂质和使用氧化的脂质来治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症的方法。本实施方案的方法可以用于治疗或预防炎症相关的疾病和病症，例如，动脉粥样硬化和相关病症，自身免疫疾病或病症，和增殖性疾病或病症。
过去已经描述了氧化磷脂可以用于治疗医学病症，例如，心血管疾病、脑血管疾病和炎症性疾病和病症。
本受让人的国际专利申请PCT/IL2004/000453(公开号WO 04/106486)描述了氧化的脂质用于预防和治疗与内源性氧化的脂质相关的炎症。描述了示范性的这种化合物，并且被称为CI-201(本领域还指的是VB-201)。
本受让人的国际专利申请PCT/IL01/01080(公开号WO 02/41827)描述了氧化的脂质用于预防和治疗动脉粥样硬化和相关疾病。
本受让人的国际专利申请PCT/IL05/000735(公开号WO 06/006161)描述了适合于工业制备治疗有利的氧化磷脂的合成路线(不使用柱色谱)。
其它的背景技术包括国际专利申请PCT/IL02/00005(公开号WO 02/053092)和PCT/IL08/000013(公开号WO 08/084472)，两者也都属于本受让人。
本文结合上述所有引用的公开作为参考(如同完全列出一样)。
上述所有列举的公开描述了醚化的氧化的脂质，其包括碳主链，该碳主链与烷基链、被氧化部分取代的烷基链和包含磷酸酯基的基团（phosphate-containing group）相连接。优选，被氧化部分取代的烷基链通过醚键与碳主链连接(由此化合物被称为“醚化的氧化的脂质”)，这种键赋予化合物所需要的药理学性能(上述公开进行了详细描述)。
本发明概述
本发明人现在已经设计和成功地制备并且试验了新的氧化磷脂。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了具有下式的化合物：
Figure 937451DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 792274DEST_PATH_IMAGE002
,
其中X是C1-25链，Y选自：
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
Figure 967221DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 968543DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 791006DEST_PATH_IMAGE003
,
Figure 995722DEST_PATH_IMAGE006
, 和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iii) R2选自(4-甲基羧基)丁基，(3-羧基)丙基，(6-羧基)己基，(2-羧基)乙基，5,6-二羟基己基，5,5-二乙氧基戊基和5,5-二甲氧基戊基；和
(iv) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基（phosphate)，胆碱磷酸(phosphocholine)，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了具有下式的化合物：
Figure 863501DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1和R2各自独立地选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 545281DEST_PATH_IMAGE002
,
条件是，R1和R2中的至少一个是
Figure 299610DEST_PATH_IMAGE002
，
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 36622DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
Figure 497690DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 927534DEST_PATH_IMAGE008
, ,
Figure 631234DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 274705DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iii) R3选自H，磷酸基（phosphate)，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸和磷酸丝氨酸。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了具有下式的化合物：
Figure 547555DEST_PATH_IMAGE009
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1选自十二烷基，十八烷基，辛基，二十烷基，顺式-9-十六碳烯基，(2-辛基)十二烷基和(15-羧基)十五烷基；
(iii) R2选自长度为2-28个碳的烷基链，和
条件是，如果R1不是(15-羧基)十五烷基，则R2是
Figure 34917DEST_PATH_IMAGE002
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 532895DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
,
Figure 192863DEST_PATH_IMAGE008
,
Figure 75368DEST_PATH_IMAGE003
,
Figure 427852DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 557351DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iv) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基（phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了具有下式的化合物：
Figure 995286DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1是S，A2和A3各自是O；
(ii) R1和R2各自独立地选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 353586DEST_PATH_IMAGE002
,
条件是，R1和R2中的至少一个是 ,
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 939605DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
Figure 553251DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 777559DEST_PATH_IMAGE010
, ,
Figure 61090DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 473617DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iii) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基（phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了选自下列的化合物：
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯(CI-201-PA)；
1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺；
1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-208)；
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-202)；
1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-206)；
1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-205)；
1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-203)；
1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-209)；
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸(CI-210)；
1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-213)；
1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-214)；
1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-215)；
1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-216)；
1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-217)；
1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(1-S-CI-201)；
1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(1-S-CI-202)；
1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(二-OH)；
1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸；
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油；
1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(diEtAc)；
1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(diMeAc)；
1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-207)；
1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺；
1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-219)；
1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-220)；
1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(VB-221)；
1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(VB-222)；和
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸丝氨酸(VB-223)。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了药物组合物，其包含作为活性组分的本文化合物和可药用载体。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症的方法，该方法包括：给予需要其的患者治疗有效量的本文所描述的化合物，由此在患者中治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了降低患者的细胞因子水平的方法，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23，该方法包括：给予患者有效量的本文所描述的化合物。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了治疗疾病或病症的方法，在这种疾病或病症中，降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平是有利的，该方法包括：给予需要其的患者有效量的本文所描述的化合物。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了本文所描述化合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了本文所描述化合物在制备药物中的用途，该药物用于降低患者的选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平。
按照本发明一些实施方案的一个方面，提供了本文所描述化合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗疾病或病症，在这种疾病或病症中，降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平是有利的。
按照本发明的一些实施方案，R1是长度为2-28个碳的烷基链。
按照本发明的一些实施方案，鉴定本文所描述的化合物，用于治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症的方法。
按照本发明的一些实施方案，鉴定本文所描述的化合物，用于降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平的方法。
按照本发明的一些实施方案，确定本文所描述的化合物，用于治疗疾病或病症的方法，在这种疾病或病症中，降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平是有利的。
按照本发明的一些实施方案，将药物组合物包装在包装材料中，并以印刷的形式在包装材料中或在包装材料上做出标记，用于治疗或预防与内源性的氧化的脂质相关的炎症。
按照本发明的一些实施方案，将药物组合物包装在包装材料中，并以印刷的形式在包装材料中或在包装材料上做出标记，用于降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平。
按照本发明的一些实施方案，将药物组合物包装在包装材料中，并以印刷的形式在包装材料中或在包装材料上做出标记，用于治疗疾病或病症，在这种疾病或病症中，降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平是有利的。
按照本发明的一些实施方案，炎症与选自下列的疾病或病症有关：特发性的炎性疾病或病症，慢性炎性疾病或病症，急性炎性疾病或病症，自身免疫性疾病或病症，感染性疾病或病症，炎症性的恶性疾病或病症，炎症性的移植相关的疾病或病症，炎症性的变性疾病或病症，与超敏反应相关的疾病或病症，炎症性的心血管疾病或病症，炎症性的脑血管疾病或病症，周围性血管疾病或病症，炎症性的腺疾病或病症，炎症性的胃肠疾病或病症，炎症性的皮肤疾病或病症，炎症性的肝病或病症，炎症性的神经系统疾病或病症，炎症性的肌骨骼疾病或病症，炎症性的肾病或病症，炎症性的生殖疾病或病症，炎症性的系统疾病或病症，炎症性结缔组织疾病或病症，炎症性的肿瘤，坏疽，炎症性的植入物相关的疾病或病症，炎症性的老化过程，免疫缺陷疾病或病症和炎症性的肺疾病或病症。
除非另外定义，否则，本文使用的所有技术和/或科学词语具有与本发明所涉及领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。虽然可以在本发明实施方案的实践或试验中使用与本文所描述的那些相似或等效的方法和物质，但示范性的方法和/或物质描述如下。在出现矛盾的情况下，以本专利说明书（包括定义）为准。另外，这些物质、方法和实施例只是说明性的，并不一定是限制性的。
附图的简要说明
本文中通过参考附图仅举例描述了本发明的一些实施方案。现通过详细地具体参考附图，强调了显示的具体特例是通过实施例的方式，且目的在于说明性地讨论本发明实施方案。在这方面，通过结合附图进行说明使得本领域技术人员可以清楚地知道如何可以实施本发明的实施方案。
在附图中：
图1是表示在用各种剂量CI-202处理的细胞中生成的IL12/23 p40的曲线(每个条代表3个样品)；与对照物(0μg/ml)相比较，每个剂量的P<0.004；
图2是表示在用CI-201、CI-202和磷脂酰胆碱(PC)处理后2、3和4小时后的细胞中IL12/23 p40 mRNA表达的曲线；
图3提供了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(18.5或37μM)CI-202、 10或 20μg/ml(17或34μM)CI-201、磷脂酰胆碱(PC)和PBS/1%乙醇(sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示为蛋白加载的对照物；
图4A和4B各自是表示测试各种剂量CI-202毒性的独立实验结果的曲线；
图5是表示MOG引起的实验性自身免疫脑脊髓炎的发展曲线(在用PBS或4 mg/kg CI-202处理的小鼠中)；
图6是表示胶原引起的关节炎的发展的曲线(在用CI-202(CI-201的乙醇胺类似物)处理的小鼠中和在对照小鼠中)；
图7是表示在用各种剂量CI-203处理的细胞中IL12/23 p40的生成的曲线(每个条代表6个样品)和P值(与对照物(0μg/ml)相比较)；
图8展现了Western印迹的照像，显示了在用1或20μg/ml(1.6或33μM)(R)-CI-203(R-CI-203)和外消旋CI-203(rac-CI-203)、1或 20μg/ml(1.7或 34μM)(R)-CI-201(R-CI-201)和(S)-CI-201(S-CI-201)和1或20μg/ml(1.3或26μM)磷脂酰胆碱(Ph.Ch.)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图9A和9B各自是表示测试各种剂量CI-203毒性的独立实验结果的曲线；
图10是表示在用各种剂量CI-209处理的细胞中IL12/23 p40生成的曲线(每个条代表5个样品)和P值(10和20μg/ml的剂量的P<0.008，1、2.5和5μg/ml的剂量的P<0.016)(与对照物(0μg/ml)比较)；
图11展现了Western印迹的照像，显示了在用20μg/ml(38μM)CI-209、 CI-201或磷脂酰胆碱(PC)或用PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图12A和12B各自是表示测试各种剂量CI-209毒性的独立实验结果的曲线；
图13是表示在用各种剂量CI-210处理的细胞中IL12/23 p40生成的曲线(每个条代表4个样品)和P值(10和20μg/ml的剂量的P<0.029，2.5和5μg/ml的剂量的P<0.057)(与对照物(0μg/ml)比较)；
图14展现了Western印迹的照像，显示了在用20μg/ml(38μM)CI-210、 CI-201或磷脂酰胆碱(PC)或用PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图15A和15B各自是表示测试各种剂量CI-210毒性的独立实验结果的曲线；
图16是表示在用各种剂量CI-216处理的细胞中IL12/23 p40生成的曲线(每个条代表4个样品)和P值(与对照物(0μg/ml)相比较)；
图17展现了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(17或34μM)CI-215或用磷脂酰胆碱(PC)或用PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图18展现了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(15或30μM)CI-216、 10或20μg/ml(17或34μM)CI-201、磷脂酰胆碱(PC)或PBS/1%乙醇(sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图19展现了Western印迹的照像，显示了在用20μg/ml(38μM)CI-206或磷脂酰胆碱(PC)或用PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图20展现了Western印迹的照像，显示了在用20μg/ml(35μM)CI-205、 CI-201或磷脂酰胆碱(PC)或用PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图21A和21B各自是表示测试各种剂量CI-206毒性的独立实验结果的曲线；
图22A和22B各自是表示测试各种剂量CI-205毒性的独立实验结果的曲线；
图23展现了Western印迹的照像，显示了在用20μg/ml(34μM)CI-208、 CI-201或磷脂酰胆碱(PC)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)； α-微管蛋白(α-Tub)表示蛋白加载的对照物；
图24A和24B各自是表示测试各种剂量CI-208毒性的独立实验结果的曲线；
图25A和25B各自是表示测试各种剂量CI-213毒性的独立实验结果的曲线；
图26A和26B各自是表示测试各种剂量CI-214毒性的独立实验结果的曲线；
图27展现了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(18或36μM)CI-217、 10或20μg/ml(17或34μM)CI-201、磷脂酰胆碱(PC)和PBS/1%乙醇(sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图28展现了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(31μM)CI-219和20μg/ml(34μM)CI-201或磷脂酰胆碱(PC)或用PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图29展现了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(34μM)CI-220和20μg/ml(34μM)CI-201或磷脂酰胆碱(PC)或用PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图30A和30B各自是表示测试各种剂量CI-201-PA毒性的独立实验结果的曲线；
图31展现了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(17或34μM)1-S-CI-201(CI-S-201)、10或20μg/ml(17或34μM)CI-201、磷脂酰胆碱(PC)和PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图32展现了Western印迹的照像，显示了在用10或20μg/ml(18或36μM)1-S-CI- 202(CI-S-202)、 10或20μg/ml( 18.5或 37μM)CI-202、 10或20μg/ml(17或 34μM)CI-201、磷脂酰胆碱(PC)和PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图33A和33B各自是表示测试各种剂量di-OH毒性的独立实验结果的曲线；
图34是表示动脉粥样硬化病变面积的曲线(在用di-OH处理的小鼠中和对照小鼠中)；
图35是表示动脉粥样硬化病变面积的曲线(在用diMeAc处理的小鼠中和对照小鼠中)；
图36A和36B各自是表示测试各种剂量diEtAc毒性的独立实验结果的曲线；
图37展现了Western印迹的照像，显示了在用1、5、10或20μg/ml(1.7、8.3、16.7或33.3μM)VB-223或PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
图38展现了Western印迹的照像，显示了在用1、5、10或20μg/ml(1.6、8、16或32μM)VB-221或PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；和
图39展现了Western印迹的照像，显示了在用1、5、10或20μg/ml(1.7、8.4、16.8或33.6μM)VB-222或PBS/1%乙醇(Sol)处理的样品中的磷酸酪氨酸(p-酪氨酸)；ERK1/2表示蛋白加载的对照物；
本发明具体实施方案的说明
本发明在其一些实施方案中涉及新的氧化的脂质和涉及使用氧化的脂质来治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症的方法。本文所描述的氧化的脂质可以用于治疗或预防炎症相关的疾病和病症，例如，动脉粥样硬化和相关病症，自身免疫疾病或病症，和增殖疾病或病症。
参考附图和附有的说明书，可以更好地理解本发明的原理与操作。
在详细解释本发明的至少一个实施方案之前，应该理解，本发明在其应用中不受下面说明书所列出的或实施例所举例说明的细节所限制。本发明能够是其它实施方案或以多种方式实践或进行。此外，还应该理解，本文使用的短语和术语是为了说明的目的，并且不应该认为是限制性的。
实验和临床证据表明了氧化LDL(ox LDL)和LDL组分在动脉粥样硬化的过度炎症性响应的病源学中的成因作用。已经证明了细胞和体液两者对斑块相关的氧化LDL的免疫反应性，说明了在动脉粥样化形成过程中是重要的抗氧化LDL自身免疫组分。由此，LDL、氧化LDL和其组分是用于预防和治疗心脏病、脑血管病和周围性血管疾病的许多治疗的靶向。
本受让人的国际专利申请例如PCT/IL2004/000453(公开号WO 04/106486)和美国专利申请11/528,657(公开号2007-0099868)公开了氧化的磷脂在治疗炎症中的作用，将两个文献按照本文完全列出的那样结合到本文中作为参考。
CI-201(本文和本领域还指的是VB-201)是目前在治疗炎症病症(例如动脉粥样硬化)的高等临床试验中充满希望的氧化磷脂。
在提高与氧化的脂质相关的炎症和疾病和病症的治疗的尝试中，本发明人制备了新的氧化磷脂和结构上相关的化合物，设计它们显示出提高的抗炎症效果和/或提高的药理学性能。
提高的抗炎症效果可以容易地通过已知的炎性过程的体外和体内模型来测定，并且可以显示出对所治疗疾病提高的治疗效果，如下文进一步所详述。提高的药理学性能包括：提高的生物稳定性、生物利用率、降低的毒性和进一步的在生产、配制和/或储存中的提高的稳定性。这些特征还可以通过本领域技术人员容易认识的实验来测定，并且在下文进一步详述。
正如在随后的实施例部分中所说明的那样，尽管减少了本发明的实践，但实际上确定了本文所描述的新设计的氧化的脂质可以调节与对内源性氧化LDL的免疫和/或炎症性响应相关的细胞因子生成，由此显示出在炎症性疾病(例如但不局限于：动脉粥样硬化和类风湿性关节炎)中降低炎症性响应的能力。
正如在随后的实施例部分中所进一步说明的那样，本文所描述的新设计的氧化的脂质可以调节酪氨酸磷酸化作用，其与CI-201类似，由此表明这些新设计的氧化的脂质拥有先前由CI-201所显示出的生物学效果(例如，抗炎症效果)。
正如在随后的实施例部分中所进一步说明的那样，本文所描述化合物显示出微小的毒性，并且在化合物基本上无毒的剂量下显示出生物学效果。
图1和2显示了示范性化合物CI-202对前炎症性细胞因子白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的p40亚型生成的抑制作用。图3显示了CI-202对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。图4A和4B显示了CI-202的毒性特性。图5显示CI-202在小鼠自身免疫脑脊髓炎模型(人多发性硬化和急性播散性脑脊髓炎的实验模型)中的治疗有效性。图6显示了CI-202在小鼠关节炎模型中的治疗有效性。
图7显示了示范性化合物CI-203对前炎症性细胞因子白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的p40亚型生成的抑制作用。图8显示了CI-203对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。图9A和9B显示了CI-203的毒性特性。
图10显示了示范性化合物CI-209对前炎症性细胞因子白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的p40亚型生成的抑制作用。图11显示了CI-209对酪氨酸磷酸化作用的调节作用。图12A和12B显示了CI-209的毒性特性。
图13显示了示范性化合物CI-210对前炎症性细胞因子白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的p40亚型生成的抑制作用。图14显示了CI-210对酪氨酸磷酸化作用的调节作用。图15A和15B显示了CI-210的毒性特性。
图16显示了示范性化合物CI-216对前炎症性细胞因子白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的p40亚型生成的抑制作用。图18显示了CI-216对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。
图17显示了CI-215对酪氨酸磷酸化作用的调节作用。
图19显示了示范性化合物CI-206对酪氨酸磷酸化作用的调节作用。图21A和21B显示了CI-206的毒性特性。
图20显示了示范性化合物CI-205对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。图22A和22B显示了CI-205的毒性特性。
图23显示了示范性化合物CI-208对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。图24A和24B显示了CI-208的毒性特性。
图25A和25B以及26A和26B分别显示了示范性化合物CI-213和CI-214的毒性特性。
图27显示了示范性化合物CI-217对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。
图28显示了示范性化合物CI-219对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。
图29显示了示范性化合物CI-220对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。
图30A和30B显示了示范性化合物CI-201-PA的毒性特性。
图31显示了示范性化合物1-S-CI-201对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。
图32显示了示范性化合物1-S-CI-202对酪氨酸磷酸化作用的调节作用，其与CI-201所显示的调节相似。
图34显示了示范性化合物di-OH在小鼠动脉粥样硬化模型中的治疗有效性。图33A和33B显示了di-OH的毒性特性。
图35显示了示范性化合物diMeAc在小鼠动脉粥样硬化模型中的治疗有效性。图36A和36B显示了diEtAc的毒性特性，其是与diMeAc紧密相关的化合物。
图37-39分别显示了示范性化合物VB-223、VB-221和VB-222对酪氨酸磷酸化作用的调节作用。
由此，已经通过体外试验证明本文所描述的示范性化合物的生物学活性，并且已经确定一些化合物具有体内治疗有效性。还没有进行体内测试的氧化的脂质的性能可以在合适的动物模型中进一步测试，例如，在下文的实施例部分中、在国际专利申请PCT/IL2004/000453(公开号WO 04/106486)和美国专利申请11/528,657(公开号2007-0099868)中所描述的动物模型和例如Singh等人(Clinical Chemistry 51:12, 2252-2256(2005))所设计的模型，将该文献按照本文完全列出的那样结合到本文中作为参考。
本文所描述的氧化的脂质的生物稳定性提高，这是由于存在醚和/或硫醚键来代替存在于大部分脂质中的酯键。生物稳定性典型地提高化合物的治疗有效性。可以测定氧化的脂质的生物稳定性，例如，通过使用ELISA或吸光度测量法，来试验它的由磷脂酶-C造成的酶催降解。
因此，根据提高的治疗和/或药物动力学参数，可以有利地认识到本文所描述的氧化的脂质在治疗或预防与内源性氧化的脂质有关的炎症方面显示出提高的效果。
由此，按照本发明实施方案的一个方面，提供了本文所描述的新的氧化的脂质(例如，氧化磷脂)。
按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯(本文还称为“CI-201-PA”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-208”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(本文还称为“CI-202”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(本文还称为“CI-206”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-205”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-203”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-209”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸(本文还称为“CI-210”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-213”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(本文还称为“CI-214”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-215”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(本文还称为“CI-216”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-217”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“1-S-CI-201”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(本文还称为“1-S-CI-202”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“di-OH”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“diEtAc”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“diMeAc”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-207”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“CI-219”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(本文还称为“CI-220”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(本文还称为“VB-221”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(本文还称为“VB-222”)。按照一个示范性的实施方案，氧化的脂质是1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸丝氨酸(本文还称为“VB-223”)。
本文使用的前缀“1-S-”是指其中在甘油主链1位(sn-1)的氧原子被硫原子取代的化合物，这样就可以使该化合物是1-硫代甘油的衍生物(而不是甘油的衍生物)。
本文使用的前缀“CI-”和“VB-”可互换使用。
根据取代基，本文所描述的每个化合物中的一些碳原子可以是手性或非手性碳原子。由此，在上文所描述的示范性化合物中，甘油主链的2位的碳原子是手性碳原子。存在于本文所描述化合物中的任何手性碳原子可以是R-构型、S-构型或外消旋体形式。由此，本发明实施方案包括手性和外消旋碳原子的任何组合，包括所有可能的立体异构体、旋光异构体和对映体。
正如在随后的实施例部分中所说明的那样，可以合成本发明实施方案的化合物，同时保持起始原料的构型。可以按照被氧化基团的立体化学进一步选择性地合成本发明实施方案的化合物。由此，通过选择合适的起始原料和合适的合成条件，可以测定光学纯度(例如，所包含的手性和/或外消旋碳)和所得到的所产生化合物的立体异构体。如果得到外消旋混合物，可用已知的技术分离光学或立体异构体。这种技术描述在例如“Organic chemistry，第四版，Paula Yurkanis Bruice，180-185页和214页，Prentice Hall，Upper Sadde River，NJ 07458”中。
可以按照上述化合物的某些新的结构单元来对其表征。
由此，一些上面氧化的脂质包括甘油主链，该主链在其2位与被氧化侧链相连接，其中被氧化侧链选自(4-甲基羧基)丁基，(3-羧基)丙基，(6-羧基)己基，(2-羧基)乙基，5,6-二羟基己基，5,5-二乙氧基戊基和5,5-二甲氧基戊基。
由此，按照本发明的一些实施方案，提供了由下式共同代表的化合物：
Figure 688566DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 870149DEST_PATH_IMAGE002
,
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 59822DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
,
Figure 463439DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 765107DEST_PATH_IMAGE003
,
Figure 811167DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 198286DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iii) R2选自(4-甲基羧基)丁基，(3-羧基)丙基，(6-羧基)己基，(2-羧基)乙基，5,6-二羟基己基，5,5-二乙氧基戊基和5,5-二甲氧基戊基；和
(iv) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基（phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
按照一些实施方案，R1是长度为2-28个碳的烷基链。
上文所描述的一些被氧化的脂质的特征在于：它们在其3位包括选自下列的磷酰基部分：磷酸基（phosphate)，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸和磷酸丝氨酸，或在3位是非磷酸化和非取代形式(即，有氢原子存在于3位)。
由此，按照本发明的一些实施方案，提供了由下式共同代表的化合物：
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1和R2各自独立地选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 396366DEST_PATH_IMAGE002
,
条件是，R1和R2中的至少一个是
Figure 193421DEST_PATH_IMAGE002
,
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 989207DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
Figure 162700DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 173381DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 79020DEST_PATH_IMAGE003
,
Figure 175152DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 886756DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iii) R3选自H，磷酸基（phosphate)，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸和磷酸丝氨酸。
按照一些实施方案，R1是长度为2-28个碳的烷基链。应该理解，在这种实施方案中，R2是 。
上文所描述的一些氧化的脂质的特征在于：它们在其1位包括选自下列的侧链：十二烷基，十八烷基，辛基，二十烷基，顺式-9-十六碳烯基，(2-辛基)十二烷基和(15-羧基)十五烷基。
由此，按照本发明的一些实施方案，提供了由下式共同代表的化合物：
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1选自十二烷基，十八烷基，辛基，二十烷基，顺式-9-十六碳烯基，(2-辛基)十二烷基和(15-羧基)十五烷基；
(iii) R2选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 162645DEST_PATH_IMAGE002
；
条件是，如果R1不是(15-羧基)十五烷基，则R2是
Figure 350044DEST_PATH_IMAGE002
；
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 335317DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
Figure 645076DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 902751DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 956157DEST_PATH_IMAGE003
,
Figure 795937DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 214280DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iv) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基（phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
可以理解，本文所描述的(15-羧基)十五烷基相当于本文所描述的 部分，其中X是13个碳的烷基链，Y是氢，Z是-C(=O)OH。
类似地，(4-甲基羧基)丁基、(3-羧基)丙基、(6-羧基)己基、(2-羧基)乙基、5,6-二羟基己基、5,5-二乙氧基戊基和5,5-二甲氧基戊基，相当于
Figure 363819DEST_PATH_IMAGE002
部分，其中Z是-C(=O)OH(对于(3-羧基)丙基、(6-羧基)己基和(2-羧基)乙基)，其中Z是-CH(OR')2(对于5,5-二乙氧基戊基和5,5-二甲氧基戊基)，或其中Z是-OH(对于5,6-二羟基己基)。
上文所描述的一些氧化的脂质的特征在于；它们在其1位包括硫原子且在其2和3位包括氧原子。
由此，按照本发明的一些实施方案，提供了由下式代表的化合物：
Figure 749451DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1是S，A2和A3各自是O；
(ii) R1和R2各自独立地选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 401012DEST_PATH_IMAGE002
,
条件是，R1和R2中的至少一个是
Figure 446328DEST_PATH_IMAGE002
，
其中X是C1-25链，Y选自：
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
Figure 328014DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 416056DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 870040DEST_PATH_IMAGE003
,
Figure 68940DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 472239DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iii) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基（phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
按照一些实施方案，R1是长度为2-28个碳的烷基链。
按照本发明的一些实施方案，上文所描述的变量Z选自：
Figure 668865DEST_PATH_IMAGE005
, ,
Figure 160207DEST_PATH_IMAGE007
和-OH。
按照本发明的任选的实施方案，变量Y选自H和-OH。在一些实施方案中，当Z是-OH和/或-O-C(=O)H时，Y是-OH。在一些实施方案中，当Z是-C(=O)H、-CH(OR')2、-C(=O)OH和/或-C(=O)OR'时，Y是H。
按照示范性的实施方案，R'是饱和的非取代的C1-4烷基。任选，R'选自乙基和甲基。
按照任选的实施方案，本文所描述的长度为2-28个碳的烷基链是饱和的，除非另外具体表明。任选，烷基链是非取代的，除非另外具体表明。
按照任选的实施方案，本文所描述的变量X是长度为1至25个碳原子的饱和烷基链，除非另外具体表明。任选，烷基链是非取代的，除非另外具体表明。
贯穿本文使用的术语“烷基”是指饱和或不饱和脂肪烃，包括直链和支链基团。优选，烷基具有1至20个碳原子。不论什么时候，本文陈述的一个数值范围，例如“1-20”，其意思是该基团（在此处的情况下为烷基）可以包含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子，等等，至多并且包括20个碳原子。更优选，烷基是具有1至10个碳原子的中等大小的烷基。除非另有陈述，否则最优选，烷基是具有1至4个碳原子的低级烷基。烷基可以是取代或非取代的烷基。当取代时，取代基团可以是，例如，环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环，卤素，羟基，烷氧基，芳氧基，巯基，硫代烷氧基，硫代芳氧基，氰基，硝基，叠氮化物，磺酰基，亚磺酰基，磺酰胺，膦酰基，氧膦基（phosphinyl)，氧代，羰基，硫代羰基，脲，硫脲，O-氨基甲酰基，N-氨基甲酰基，O-硫代氨基甲酰基，N-硫代氨基甲酰基，C-酰胺基，N-酰胺基，C-羧基，O-羧基和氨基，这些术语如本文所定义。在一些实施方案中，烷基是非取代的烷基。
“环烷基”是指所有的碳单环或稠环(即，共享相邻碳原子对的环)基团，其中多个环中的一个不具有完全共轭的π电子系统。环烷基的例子是(但不限于)环丙烷，环丁烷，环戊烷，环戊烯，环己烷，环已二烯，环庚烷，环庚三烯和金刚烷。环烷基可以是取代或未取代的环烷基。当取代时，取代基团可以是，例如，烷基，芳基，杂芳基，杂脂环，卤素，羟基，烷氧基，芳氧基，巯基，硫代烷氧基，硫代芳氧基，氰基，硝基，叠氮化物，磺酰基，亚磺酰基，磺酰胺，膦酰基，氧膦基（phosphinyl)，氧代，羰基，硫代羰基，脲，硫脲，O-氨基甲酰基，N-氨基甲酰基基，O-硫代氨基甲酰基，N-硫代氨基甲酰基，C-酰胺基，N-酰胺基，C-羧基，O-羧基和氨基，这些术语如本文所定义。
“芳基”本文还称为“芳香官能团”，是指具有完全共轭的π电子系统的全碳单环或稠合的多环(即，共享相邻碳原子对的环)基团。芳基的例子是(但不限于)苯基、萘基和蒽基。芳基可以是取代或未取代的芳基。当取代时，取代基团可以是，例如，烷基，环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环，卤素，羟基，烷氧基，芳氧基，巯基，硫代烷氧基，硫代芳氧基，氰基，硝基，叠氮化物，磺酰基，亚磺酰基，磺酰胺，膦酰基，氧膦基（phosphinyl)，氧代，羰基，硫代羰基，脲，硫脲，O-氨基甲酰基，N-氨基甲酰基，O-硫代氨基甲酰基，N-硫代氨基甲酰基，C-酰胺基，N-酰胺基，C-羧基，O-羧基和氨基，这些术语如本文所定义。
“杂芳基”是指环中具有一个或多个原子(例如，氮、氧和硫原子)、另外具有完全共轭π电子系统的单环或稠环(即，共享相邻原子对的环)基团。杂芳基的例子(但不限于)包括吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，
Figure 372007DEST_PATH_IMAGE011
唑，噻唑，吡唑，吡啶，嘧啶，喹啉，异喹啉和嘌呤。杂芳基可以是取代或未取代的杂芳基。当取代时，取代基团可以是，例如，烷基，环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环，卤素，羟基，烷氧基，芳氧基，巯基，硫代烷氧基，硫代芳氧基，氰基，硝基，叠氮化物，磺酰基，亚磺酰基，磺酰胺，膦酰基，氧膦基（phosphinyl)，氧代，羰基，硫代羰基，脲，硫脲，O-氨基甲酰基，N-氨基甲酰基，O-硫代氨基甲酰基，N-硫代氨基甲酰基，C-酰胺基，N-酰胺基，C-羧基，O-羧基和氨基，这些术语如本文所定义。
“杂脂环”基团是指环中具有一个或多个原子(例如氮、氧和硫原子)的单环或稠环基团。环还可以具有一个或多个双键。然而，环不具有完全共轭的π电子系统。杂脂环可以是取代或未取代的杂脂环。当取代时，取代基团可以是，例如，孤对电子，烷基，环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环，卤素，羟基，烷氧基，芳氧基，巯基，硫代烷氧基，硫代芳氧基，氰基，硝基，叠氮化物，磺酰基，亚磺酰基，磺酰胺，膦酰基，氧膦基（phosphinyl)，氧代，羰基，硫代羰基，脲，硫脲，O-氨基甲酰基，N-氨基甲酰基，O-硫代氨基甲酰基，N-硫代氨基甲酰基，C-酰胺基，N-酰胺基，C-羧基，O-羧基，和氨基，这些术语如本文所定义。代表性的例子是哌啶，哌嗪，四氢呋喃，四氢吡喃，吗啉等等。
“羟基”是指-OH基团。
“叠氮化物”基团是指-N=N基团。
“烷氧基”是指本文所定义的-O-烷基和-O-环烷基。
“芳氧基”是指本文所定义的-O-芳基和-O-杂芳基。
“巯基”是指-SH基团。
“硫代烷氧基”是指本文所定义的-S-烷基和-S-环烷基。
“硫代芳氧基”是指本文所定义的-S-芳基和-S-杂芳基。
“羰基”或“酰基”是指-C(=O)-R基团，其中R是本文所定义的氢，烷基，烯基，环烷基，芳基，杂芳基(通过环碳键合)或杂脂环(通过环碳键合)。
“醛”基团是指其中R是氢的羰基。
“硫代羰基”是指-C(=S)-R基团，其中R如本文所定义。
“C-羧基”是指-C(=O)-O-R基团，其中R如本文所定义。
“O-羧基”是指RC(=O)-O-基团，其中R如本文所定义。
“乙酰氧基”是指CH3C(=O)-O-。
“氧代”基团是指=O基团。
“羧酸”基团是指C-羧基，其中R是氢。
“卤素”或“卤代”基团是指氟、氯、溴或碘。
“亚磺酰”基团是指-S(=O)-R基团，其中R如本文所定义。
“磺酰基”是指-S(=O)2-R基团，其中R如本文所定义。
“磺酰胺”基团是指-S(=O)2-NR2基团或RS(=O)2-NR-基团，其中每个R如本文所定义。
“O-氨基甲酰基”是指-OC(=O)-NR2基团，其中每个R如本文所定义。
“N-氨基甲酰基”是指ROC(=O)-NR-基团，其中每个R如本文所定义。
“O-硫代氨基甲酰基”基团是指-OC(=S)-NR2基团，其中每个R如本文所定义。
“N-硫代氨基甲酰基”基团是指ROC(=S)NR-基团，其中每个R如本文所定义。
“氨基”是指-NR2基团，其中每个R如本文所定义。
“C-酰胺基”是指-C(=O)-NR2基团，其中每个R如本文所定义。
“N-酰胺基”是指RC(=O)-NR-基团，其中每个R如本文所定义。
“脲”基团是指-NRC(=O)-NR2基团，其中每个R如本文所定义。
“硝基”是指-NO2基团。
“氰基”是指-C≡N基团。
术语“膦酰基”或“膦酸酯”描述了-P(=O)(OR)2基团，其中R如上文所定义。
术语“phosphinyl(氧磷基)”描述了-PR2基团，其中每个R如上文所定义。
术语“硫脲”描述了-NR-C(=S)-NR-基团，其中每个R如上文所定义。
本发明实施方案进一步包括上文所描述化合物的任何可药用盐、前体药物、水合物和溶剂化物。
术语“前体药物”是指体内转变为活性化合物(活性母体药物)的药剂。前体药物典型地可用于促进母体药物的给予。它们可以例如通过口服而可被生物利用，而母体药物不能。与母体药物相比，前体药物在药物组合物中还具有高溶解性。前体药物还常常用于获得活性化合物在体内的持续释放。前体药物的例子(但不限于)具有一个或多个羧酸部分的本文所描述的化合物，其以酯形式(“前体药物”)给予。这种前体药物是体内被水解，由此提供游离化合物(母体药物)。选择的酯可以影响该药物的溶解特性和水解速度。
短语“可药用盐”是指母体化合物的带电荷物种和它的反离子，其典型地用于改变母体化合物的溶解特性和/或减轻母体化合物对有机体的任何显著的刺激，同时不会消除所给予化合物的生物活性和性能。可药用盐的例子(但不限于)是羧酸根阴离子和阳离子，例如但不局限于铵、钠、钾等等。
术语“溶剂化物”是指可变化学计量(例如，二-、三-、四-、五-、六-等等)的复合物，其由溶质(本实施方案的化合物)和溶剂形成，使得溶剂不妨碍溶质的生物活性。合适溶剂包括，例如，乙醇，乙酸，等等。
术语“水合物”是指上文所定义的溶剂化物，其中溶剂是水。
正如下文所详述的那样，本发明实施方案新设计的化合物产生高度有利的免疫调节活性，并因此可以用于各种治疗应用中。在治疗应用中使用这些化合物包括：给予其本身，或作为药物组合物的一部分给予，在药物组合物中，这些化合物与合适载体或赋形剂混合。
由此，按照本发明实施方案的另一个方面，提供了药物组合物，其包含本文所描述的任何化合物作为活性组分和可药用载体。
本文使用的“药物组合物”是指一种或多种本文所描述的活性组分与其它化学组分(例如，生理学合适的载体和赋形剂)的制剂。药物组合物的目的是便于将化合物给予有机体。
本文中，术语“活性组分”是指具有生物效应的上文所描述的化合物(氧化的脂质)。
在下文中，可以互换使用的短语“生理学可接受的载体”和“可药用载体”指的是不会对有机体产生显著刺激、并且不会消除所给予化合物的生物活性和性能的载体或稀释剂。助剂包括在这些短语项下。
本文中，术语“赋形剂”是指加入到药物组合物中的惰性物质，以便进一步便于给予活性组分。赋形剂的例子包括(但不限于)碳酸钙，磷酸钙，各种糖和淀粉类型，纤维素衍生物，凝胶，植物油和聚乙二醇。
在“Remington's Pharmaceutical Sciences”(Mack Publishing Co., Easton, PA)最近版本中可以得到配制和给予药物的技术，将其结合到本文中作为参考。
合适的给药途径可以例如包括下列给药途径：口服，直肠，透粘膜，特别是经鼻、肠或肠胃外递送，包括肌内、皮下和髓内注射以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。
或者，可以以局部而不是系统方式给予药物组合物，例如，将药物组合物直接注射到患者的组织区域中。
在本发明的一个任选实施方案中，将药物组合物设计成通过粘膜给药可以调节免疫和/或炎症性响应的形式。
在本发明的另一个实施方案中，将药物组合物设计成通过口服给药可以调节免疫和/或炎症性响应的形式。
任选，将本发明实施方案的药物组合物设计成鼻部或腹膜内给药的形式，如下文所详述。
可以利用本领域众所周知的方法来制备本发明实施方案的药物组合物，例如，利用常规混合、溶解、制粒、糖锭制备、研磨、乳化、形成胶囊、包埋或冷冻干燥方法。
由此，可以用常规方式配制按照本发明实施方案使用的药物组合物，使用一种或多种生理学可接受的载体，包括赋形剂和助剂，便于将活性组分加工为制剂，可以使用药学赋形剂和助剂。合适制剂取决于所选择的给药途径。
对于注射，可以将药物组合物的活性组分配制在水溶液中，例如，配制在生理学相容的缓冲液中，例如Hank's溶液、Ringer's溶液或生理盐缓冲液。对于透粘膜给予，在制剂中使用适合于渗入屏障的渗透剂。这种渗透剂在本领域通常是已知的。
对于口服给药，可以容易地通过活性化合物与本领域众所周知的可药用载体混合来配制药物组合物。这种载体能够使药物组合物配制为片剂，丸剂，糖锭，胶囊剂，液剂，凝胶剂，糖浆剂，膏剂，混悬剂，等等，用于患者口服摄入。口服使用的药理学制剂可以使用固体赋形剂制备，任选将得到的混合物研磨，并将颗粒的混合物加工(如果需要的话，在加入合适的助剂之后)，得到片剂或糖锭核。尤其合适的赋形剂是填料，例如糖，包括乳糖，蔗糖，甘露糖醇，或山梨糖醇；纤维素制剂，例如，例如，玉米淀粉，麦淀粉，米淀粉，马铃薯淀粉，凝胶，黄蓍树胶，甲基纤维素，羟基丙基甲基-纤维素，羧甲基纤维素钠；和/或生理学可接受的聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要的话，可以加入崩解剂，例如，交联的聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。
糖锭母核拥有合适的包衣。为了这种目的，可以使用浓缩糖液，其可以任选含有阿拉伯树胶，滑石粉，聚乙烯吡咯烷酮，卡波姆凝胶，聚乙二醇，二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或色素加入到片剂或糖锭包衣中，用于鉴别或表征活性化合物剂量的不同组合物。
可以口服使用的药物组合物包括推入配合的明胶制成的胶囊剂，以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的软的密封胶囊剂。推入配合的胶囊剂可以含有活性组分与填料(例如乳糖)、粘合剂(例如淀粉)、润滑剂(例如滑石粉或硬脂酸镁)和任选的稳定剂的混合物。在软胶囊中，活性组分可以溶解或悬浮在合适液体中，例如脂肪族的油，液体石蜡，或液体聚乙二醇。另外，可以加入稳定剂。所有的口服制剂应该具有适合于所选择的给药途径的剂量。
对于口腔含化给药，组合物可以采取常规方式配制的片剂或锭剂。
对于鼻吸入给药，按照本发明实施方案使用的活性组分可以方便地以气溶胶喷射给予的形式递送，用加压包装或雾化器，借助于合适的发射剂，例如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷或二氧化碳。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供阀门来确定剂量单位，以便递送可计量的数量。可以配制用于分配器的例如明胶的胶囊和筒，使其含有化合物与合适粉末基料例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
可以将本文所描述的药物组合物配制为肠胃外给药形式，例如通过快速浓注或连续输液。注射用制剂可以被呈现于单位剂型中，例如小瓶或多剂量容器(任选加入防腐剂)。组合物可以是在油或含水赋形剂中的悬浮液、溶液或乳液形式，并且可以包含调配试剂，例如悬浮、稳定和/或分散剂。
肠胃外给药的药物组合物包括水溶性形式的活性制剂的水溶液。另外，可以制备活性组分的混悬液作为合适的油或水基注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或赋形剂包括脂肪族的油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯、甘油三酯或脂质体。水性注射悬浮液可以含有能够提高悬浮液粘度的物质，例如，羧甲基纤维素钠，山梨糖醇或葡聚糖。任选，混悬剂也可以含有合适的稳定剂或能够提高活性组分溶解性的试剂，以便制备高浓度溶液。
或者，活性组分可以以粉末形式存在，在使用之前，与合适赋形剂例如无菌的无热原的水基溶液进行组合。
还可以将本发明实施方案的药物组合物配制为直肠用组合物的形式，例如栓剂或保留灌肠剂，使用例如常规栓剂基料，例如可可脂和/或其它甘油酯。
适合用于本发明实施方案的背景的药物组合物包括这样的组合物：其中包含的活性组分数量可有效获得预定目的。更具体地说，治疗有效量是指可有效预防、减轻或改善病症(例如，动脉粥样硬化)的症状或延长所治疗患者的存活的活性组分的量。
治疗有效量的确定在本领域技术人员能力范围之内，特别是根据本文所提供的详细公开内容来看。
对于在本发明实施方案的方法中使用的任何制剂，可以用体外和细胞培养试验来初始估算治疗有效量或剂量。例如，可以用动物模型配制剂量，以便获得所需要的浓度或滴度。这种信息可用于更准确地确定人使用的剂量。
本文所描述的活性组分的毒性和治疗效能可以利用标准体外药学方法、在细胞培养物中或在实验动物中(例如，在下文的实施例部分中所举例说明的那些)来测定。可以在配制用于人类的剂量范围中使用由这些体外和细胞培养试验和动物研究所获得的数据。根据所使用的剂型和所使用的给药途径，剂量可以变化。可以由独立的医生根据病人情况来选择确切的制剂、给药途径和剂量。(参见，例如，Fingl等人1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p.1)。
可以独立地调节剂量数量和间隔，以便提供足够诱导（induce）或抑制炎症(例如，血管生成)的活性组分的血浆或脑水平(最小有效浓度，MEC)。每个制剂的MEC是变化的，但可以用体外数据估算。获得MEC所必需的剂量取决于个体特性和给药途径。检测试验可用于测定血浆浓度。
根据所治疗病症的严重程度和响应性，剂量可以是单一或多次给药，疗程持续几天至几个星期，或直到有效治愈或疾病状态得到减轻为止。
当然，给予的组合物的数量取决于所治疗的患者、疾病的严重程度、给药方式、处方医生的判断，等等。
如果需要的话，本发明实施方案的组合物可以存在于包装或分配器装置中，例如FDA批准的试剂盒，其可以包含一个或多个含有活性组分的单位剂型。包装可以，例如，包括金属或塑料薄膜包装，例如泡罩包装。包装或分配装置可以带着给药说明书。包装或分配器还可以带有与容器有关的注意事项，按照政府机构规定形式来生产、使用或销售药物，该注意事项反映了机构批准了该组合物形式可用于人或兽用给药。这种注意事项，例如，可以是美国食品与药物管理局批准的处方药物的标签或批准产品的插页。还可以制备包含本文所描述制剂的组合物(用相容的药学载体配制)，放入合适容器中，并标明所治疗的指明的病症，如下文进一步详述。
由此，在本发明的任选实施方案中，将药物组合物包装在包装材料中，并以印刷的形式在包装材料中或在包装材料上做出标记，用于治疗或预防与内源性的氧化的脂质相关的炎症。与这种炎症有关的疾病和病症的代表性例子的列表提供于下文中。
或者或另外，将药物组合物包装在包装材料中，并以印刷的形式在包装材料中或在包装材料上做出标记，用于降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平，和/或用于治疗疾病或病症，在这种疾病或病症中，降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平是有利的。
正如下文进一步详细描述的那样，本发明实施方案的药物组合物可以进一步包含可有效用于治疗或预防本文所描述炎症的其它化合物。
正如在随后的实施例部分中所详细描述的那样，已经发现，本发明实施方案的新设计化合物的代表性例子可有效调节与免疫应答和与炎症有关的细胞因子的水平。这些结果表明，这些化合物可有效抑制与内源性氧化的脂质有关的免疫应答和炎症。
由此，按照本发明实施方案的另一个方面，提供了治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症的方法。通过给予需要的患者治疗有效量的一种或多种本文所描述的氧化的脂质，可以实施按照本发明实施方案的该方面的方法。
本文使用的短语“内源性的氧化的脂质”是指由于炎症及其它细胞或体液所介导的过程而在体内存在或形成的一种或多种氧化的脂质。
术语“方法”是指完成所给定任务的方式、手段、技术和措施，包括但不限于：化学、药理学、生物学、生物化学和医学领域的工作人员所已知的、或容易用已知的方式、手段、技术和措施由他们来开发的那些方式、手段、技术和措施。
本文使用的短语“治疗或预防”包括消除、基本上抑制、减缓或逆转疾病的发展、基本上改善疾病的临床症状或基本上预防疾病的临床症状的出现。
适合于这种治疗的患者的例子包括患有与下文所详述的炎症有关的疾病或病症的患者。按照本发明实施方案的合适的个体患者包括哺乳动物，例如犬科动物，猫科动物，羊科动物，猪科动物，马科动物和牛科动物。任选，按照本发明实施方案的个体患者是人。
本文使用的短语“与内源性的氧化的脂质有关的炎症”描述的是与体内形成或存在的一种或多种氧化的脂质(例如，氧化LDL，氧化膜脂，等等)有关的炎症。
炎症是身体对伤害的保护性响应。在介导炎症反应的过程中，一些细胞因子起到关键作用，其中有白细胞间介素12和23(IL-12和IL-23)。过度的炎症时常是有害的，涉及或导致很多疾病和病症。正如上文所详细说明的那样，过度的炎症性响应典型地与氧化的脂质表位有关。
由此，按照任选的本发明的实施方案，提供了降低患者中选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平的方法。
按照本发明的其它任选的实施方案，提供了治疗疾病或病症的方法，在这种疾病或病症中，降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平是有利的。
通过给予需要的患者治疗有效量的一种或多种本文所描述的氧化的脂质，可以实施上述方法。
按照本发明实施方案的另一个方面，提供了至少一种本文所描述的氧化的脂质在制备药物中的用途。本文描述了药物的任选的制剂。
在一些实施方案中，该药物用于治疗或预防与内源性的氧化的脂质有关的炎症，如本文进一步所详述。
在一些实施方案中，该药物用于降低患者中选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平。
在一些实施方案中，该药物用于治疗疾病或病症，在这种疾病或病症中，降低选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23的细胞因子的水平是有利的。
本文所描述的氧化的脂质的抗炎症效果可以用于治疗或预防炎症有关的疾病或病症，在这种疾病或病症中，涉及内源性氧化LDL或任何其它内源性氧化的脂质。这种疾病和病症包括，例如，与噬斑形成有关的疾病或病症，包括但不局限于：动脉粥样硬化，动脉粥样硬化性心血管疾病，脑血管疾病，周围性血管疾病，狭窄，再狭窄和支架内狭窄，以及自身免疫疾病或病症，神经变性疾病或病症，增殖疾病或病症和老化过程。
由此，与炎症有关的疾病或病症代表性的例子(其因而也与内源性的氧化的脂质有关，并因此能用本发明实施方案的方法治疗)包括，例如，特发性的炎症性疾病或病症，慢性炎症性疾病或病症，急性炎症性疾病或病症，自身免疫疾病或病症，感染性疾病或病症，炎症性的恶性病或病症，炎症性的移植相关的疾病或病症，炎症性的退行性疾病或病症，与超敏反应有关的疾病或病症，炎症性的心血管疾病或病症，炎症性的脑血管疾病或病症，外周血管疾病或病症，炎症性的腺疾病或病症，炎症性的胃肠疾病或病症，炎症性的皮肤疾病或病症，炎症性的肝病或病症，炎症性的神经系统疾病或病症，炎症性的肌骨骼疾病或病症，炎症性的肾病或病症，炎症性的生殖疾病或病症，炎症性的系统疾病或病症，炎症性的结缔组织疾病或病症，炎症性的肿瘤，坏疽，炎症性的植入物相关的疾病或病症，炎症性的老化过程，免疫缺陷疾病或病症，增殖疾病和病症和炎症性的肺疾病或病症，如下文所详述。
超敏反应的非限制性例子包括I型超敏反应，II型超敏反应，III型超敏反应，IV型超敏反应，速发型超敏反应，抗体介导的超敏反应，免疫复合物介导的超敏反应，T淋巴细胞介导的超敏反应，延迟型超敏反应，辅助病毒（helper）T淋巴细胞介导的超敏反应，细胞毒性T淋巴细胞介导的超敏反应，TH1淋巴细胞介导的超敏反应和TH2淋巴细胞介导的超敏反应。
炎症性的心血管疾病或病症的非限制性例子包括：闭塞性疾病或病症，动脉粥样硬化，心脏辨膜疾病，狭窄，再狭窄，支架内狭窄，心肌梗塞，冠状动脉的动脉疾病，急性冠状动脉综合症，充血性心力衰竭，心绞痛，心肌缺血，血栓，韦格纳肉芽肿，高安氏动脉炎，川崎症，抗凝血因子VIII自身免疫性疾病或病症，引起坏死的小血管血管炎，显微镜下多血管炎，Churg和Strauss综合症，免疫缺乏局灶性引起坏死的肾小球肾炎，新月体性肾小球肾炎，抗磷脂综合症，抗体引起的心力衰竭，血小板减少性紫癜，自身免疫性溶血性贫血，心脏自身免疫，查加斯氏疾病或病症，和抗辅助性T淋巴细胞自身免疫。
狭窄是血管系统的闭塞性疾病，通常由粥样斑块和血小板活性增加所引起，极强地影响冠脉血管。
再狭窄是渐进性的再堵塞，常常在狭窄血管系统中的堵塞降低之后发生。在血管系统的不闭合要求支架的机械性支撑的病例中，可能出现支架内狭窄，使所治疗的血管再封闭。
脑血管疾病或病症的限制性例子包括中风，脑血管炎症，脑出血和椎动脉机能不全。
外周血管疾病或病症的非限制性例子包括坏疽，糖尿病性血管病变，缺血性肠疾病，血栓，糖尿病性视网膜病和糖尿病性肾病。
自身免疫疾病或病症的非限制性例子包括由免疫应答(例如，自身抗体或细胞介导的对自身抗原的免疫应答，等等)所引起的所有疾病。代表性的实例是慢性类风湿性关节炎，幼年型类风湿关节炎，系统性红斑狼疮，硬皮病，混合结缔组织病，结节性动脉周围炎，多肌炎/皮肤肌炎，Sjogren's综合症，Bechet's疾病，多发性硬化，自身免疫糖尿病，桥本氏病，牛皮癣，原发性粘液性水肿，恶性贫血，重症肌无力，慢性活动型肝炎，自身免疫性溶血性贫血，特发性血小板减少性紫癜，葡萄膜炎，系统性血管炎和肝素引起的血小板减少症。
炎症性腺疾病或病症的非限制性例子包括胰腺疾病或病症，I型糖尿病，甲状腺病或病症，Graves’疾病，甲状腺炎，自发性自身免疫甲状腺炎，桥本甲状腺炎，特发性粘液性水肿，卵巢自身免疫，自身免疫性抗精子不育症，自身免疫性前列腺炎和I型自身免疫性多腺综合症。
炎症性胃肠疾病或病症的非限制性例子包括大肠炎，回肠炎，克罗恩病，慢性炎症性肠道病，炎症性肠综合症，慢性炎症性肠病，乳糜泻，溃疡性结肠炎，溃疡，皮肤溃疡，褥疮性溃疡，胃溃疡，消化性溃疡，口腔溃疡，鼻咽溃疡，食管溃疡，十二指肠溃疡和胃肠溃疡。
炎症性皮肤疾病或病症的非限制性例子包括痤疮，自身免疫性大疱皮肤病，寻常天疱疮，大疱类天疱疮，落叶状天疱疮，接触性皮炎和药疹。
炎症性肝脏疾病或病症的非限制性例子包括自身免疫性肝炎、肝硬化和胆汁性肝硬变。
炎症性神经疾病或病症的非限制性例子包括：多发性硬化，阿尔海默氏疾病，帕金森氏症，重症肌无力，运动原神经病，急性感染性多发性神经炎，自身免疫性神经病，Lambert-Eaton无力综合征，副肿瘤神经疾病或病症，副肿瘤小脑萎缩，非副肿瘤僵人综合症，渐进性的小脑萎缩，Rasmussen's脑炎，肌萎缩性侧索硬化，Sydeham舞蹈病，抽动-秽语综合症，自身免疫性内分泌病变，免疫介导性神经病，获得性神经性肌强直，多发性关节硬化症，亨丁顿舞蹈症，AIDS相关的痴呆，肌萎缩性侧索硬化(AML)，多发性硬化，中风，炎症性的视网膜疾病或病症，炎症性的眼睛疾病或病症，视神经炎，海绵状脑，偏头痛，头痛，集束性头痛和全身肌强直综合征。
炎症性的结缔组织疾病或病症的非限制性例子包括自身免疫性肌炎，原发性Sjogren's综合症，平滑肌自身免疫性疾病或病症，肌炎，腱炎，韧带炎症，软骨炎，关节炎症，滑液炎症，腕管综合征，关节炎，类风湿性关节炎，骨关节炎，强直性脊柱炎，骨架炎症，自身免疫性耳朵疾病或病症和内耳的自身免疫性疾病或病症。
炎症性的肾疾病或病症的非限制性例子包括自身免疫性间质性肾炎和/或肾癌。
炎症性的生殖疾病或病症的非限制性例子包括重复性流产，卵巢囊肿或月经相关的疾病或病症。
炎症性系统疾病或病症的非限制性例子包括系统性红斑狼疮，系统性硬化，脓毒性休克，中毒性休克综合症和恶病体质。
感染性疾病或病症的非限制性例子包括慢性感染性疾病或病症，亚急性感染性疾病或病症，急性感染性疾病或病症，病毒性疾病或病症，细菌性疾病或病症，原生动物性疾病或病症，寄生性疾病或病症，霉菌性疾病或病症，支原体疾病或病症，坏疽，败血症，朊病毒疾病或病症，流感，肺结核，疟疾，获得性免疫缺乏综合症和严重的急性呼吸性综合症。
炎症性的移植相关的疾病或病症的非限制性例子包括移植排斥，慢性移植排斥，亚急性移植排斥，急性移植排斥，高急性移植排斥和移植物抗宿主疾病或病症。示范性的植入物包括假体植入物，乳房填充物，硅氧烷植入物，牙齿植入物，阴茎植入物，心脏植入物，人造关节，骨折修复装置，骨替代植入物，给药植入物，导管，起搏器，人造心脏，人造心脏阀门，药物释放植入物，电极和呼吸管。
炎症性的肿瘤的非限制性例子包括恶性肿瘤，良性肿瘤，实质固态瘤，转移性肿瘤和非实质固态瘤。
炎症性肺疾病或病症的非限制性例子包括哮喘，变应性哮喘，肺气肿，慢性阻塞性肺病或病症，结节病和支气管炎。
增殖疾病或病症的例子是癌。
已经报道了磷脂和磷脂代谢物涉及治疗或预防疾病和综合症，例如，衰老的氧化应激疾病(Onorato JM等人Annal N Y Acad Sci 1998 Nov 20;854:277-90)，类风湿性关节炎(RA)(Paimela L等人Ann Rheum Dis 1996 Aug; 55(8):558-9)，幼年型类风湿关节炎(Savolainen A等人1995; 24(4):209-11)，炎症性肠病(IBD)(Sawai T等人Pediatr Surg Int 2001 May; 17(4): 269-74)和肾癌(Noguchi S等人Biochem Biophys Res Commun 1992 Jan 31; 182(2):544-50)，并由此进一步支持氧化磷脂的氧化的脂质类似物在治疗或预防这些疾病或病症中的有益作用。
按照本发明的实施方案的方法，可以通过各种途径给予患者氧化的脂质，包括，例如，口服，直肠，透粘膜、尤其是经鼻、肠或肠胃外递送，包括肌内、皮下和髓内注射以及鞘内注射，直接心室内注射，静脉内，腹膜内，鼻内或眼内途径。然而，正如贯穿本文所详细描述并且在随后的实施例部分中进一步说明的那样，优选的给药途径包括口服、粘膜、鼻、真皮内(皮下)和腹膜内途径。
由此，在一个实施方案中，以长期或交替性给药方案，一至三次，每周，腹膜内给予0.1-100 mg/kg本文所描述的氧化的脂质，其在合适载体中，例如但不局限于PBS或甘油。
在另一个实施方案中，以长期或交替性给药方案，一至三次，每周，经鼻给予0.1-100 mg/kg本文所描述的氧化的脂质，其在合适载体中，例如但不局限于PBS或甘油。
在又另一个实施方案中，以长期或交替性给药方案，一至三次，每周，皮下地给予0.1-100 mg/kg本文所描述的氧化的脂质，其在合适载体中，例如但不局限于PBS或甘油。
在又一个实施方案中，以长期或交替性给药方案，一至三次，每周，口服给予0.1-100 mg/kg本文所描述的氧化的脂质，其在合适载体中，例如但不局限于PBS或甘油。
本文所描述的药物组合物和方法可以进一步包括给予一种或多种其它化合物，这种化合物能够治疗或预防与上文所描述的内源性氧化的脂质相关的炎症。
按照本发明实施方案的方法可以因此包括：与治疗有效量的一种或多种这种其它化合物共同给予氧化的脂质，或在给予氧化的脂质之前给予，或伴行给予，或在给予氧化的脂质之后给予，同时，除了本文所描述的化合物之外，按照本发明实施方案的药物组合物还可以包括这种其它的化合物。
能够治疗或预防与上文所描述的内源性氧化的脂质相关的炎症、并因此可在本发明该实施方案的背景中使用的其它化合物的代表性例子包括但不限于：HMGCoA还原酶抑制剂(他汀类)，粘膜佐剂，皮质类甾醇，甾体抗炎症药物，非甾体抗炎症药物，镇痛药，生长因子，毒素，胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂，过氧物酶体，增殖活化受体(PPAR)激动剂，抗动脉粥样硬化药物，抗增殖药剂，弹性酶(ezetimide)，烟酸，鲨烯抑制剂，ApoE Milano，HSPs，β-2-糖蛋白-I和其任何衍生物和类似物。
HMGCoA还原酶抑制剂(他汀类)是众所周知的药物，通过抑制能够调节胆固醇生成速度的酶和通过肝使存在于血液中的LDL-胆固醇的廓清率升高，其可有效地降低LDL-胆固醇含量。通常处方的他汀类的非限制性的例子包括阿托伐他汀，氟伐他汀，洛伐他汀，普伐他汀和西伐他汀。
依泽替米贝是第一个新一类的胆固醇吸收抑制剂，其可有效和选择性地抑制饮食和胆的胆固醇在肠上皮细胞的纹缘处的吸收，不影响甘油三酯或脂溶性维生素的吸收。由此，依泽替米贝可降低总胆固醇至肝的输送，其次，引起LDL受体的表达提高，使LDL-C从血浆中的去除增加。
过氧物酶体是存在于几乎所有真核细胞中的单膜细胞器。过氧物酶体的最重要的代谢过程之一是长链和极长链脂肪酸的β-氧化。过氧物酶体还参与胆汁酸合成，胆固醇合成，缩醛磷脂合成，氨基酸代谢和嘌呤代谢。
烟酸是已知可降低总胆固醇、LDL-胆固醇和甘油三酯水平、同时提高HDL-胆固醇含量的药剂。有三种类型的烟酸药物：立即释放、控时释放和延长释放的烟酸药物。当以远远超过维生素需要的剂量给予时，烟酸或烟碱酸(水溶性的B维生素)增加所有的脂蛋白。
鲨烯(结构上与β-胡萝卜素相似的类异戊二烯化合物)是在胆固醇的合成过程中的中间代谢物。在人中，可以吸收大约60%的饮食鲨烯。它在血清中输送，通常与极低密度脂蛋白结合，并且在人组织中普遍存在，在皮肤中的浓度最大，此处它是皮肤表面脂质的主要部分之一。鲨烯抑制剂(例如，单加氧酶和合酶)充当胆固醇生物合成抑制剂。
增殖活化受体(PPAR)激动剂，例如贝特类，是在脂质和葡萄糖代谢中起到重要作用的核受体总科的脂肪酸活化成员，并且与肥胖症相关的新陈代谢病(例如高脂质血症、胰岛素抗性和冠状动脉病)有关。贝特类通常可有效降低升高的血浆甘油三酯和胆固醇，并充当PPAR激动剂。贝特类的最肯定的效果包括降低血浆富含甘油三酯的脂蛋白(TRLs)。在个体中，LDL胆固醇(LDL-C)的水平通常随着基本血浆浓度的升高而降低，并且当基本血浆浓度降低时，HDL胆固醇(HDL-C)水平通常增加。常用处方贝特类的非限制性例子包括苯扎贝特(Benzafibrate)、吉非贝齐(gemfibrozil)和非诺贝特。
通过降低积聚在巨噬细胞和动脉壁内的胆固醇酯，并由此降低泡沫细胞形成和影响胆固醇吸收，胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂在动脉粥样化形成中起到重要作用。目前最有前途的已知的CETP抑制剂是avisimibe。
ApoA-I Milano典型地用作与磷脂的重组体复合物(ETC-216)，并且引起冠状动脉粥样硬化的显著退化。
已经证明，共同给予粘膜佐剂对预防传染剂通过粘膜表面侵入是高度有利的。在粘膜免疫应答诱导的最初阶段，通过独特的抗原取样细胞(M细胞，位于感应位点的卵泡相关的上皮细胞(FAE)中)，可以实现口服或经鼻给予抗原的吸收。在成功吸收之后，抗原立即被处理，并且通过下面的树状细胞(DCs)来呈现。
非甾体抗炎症药物的非限制性例子包括：昔康(Oxicam)，例如吡罗昔康，异
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噻酰胺，替诺昔康，舒多昔康和CP-14,304；水杨酸盐，例如阿司匹林，disalcid，贝诺酯，三柳胆镁(trilisate)，safapryn，solprin，二氟尼柳和芬度柳；乙酸衍生物，例如双氯芬酸，芬氯酸，消炎痛，舒林酸，甲苯酰吡酸，伊索克酸，呋罗芬酸，硫平酸，齐多美辛，阿西美辛(acematacin)，芬替酸，佐美酸，clindanac，奥昔平酸(oxepinac)，联苯乙酸和酮咯酸；芬那酸，例如甲芬那酸(mefenamic)，甲氯芬那酸(meclofenamic)，氟芬那酸(flufenamic)，尼氟灭酸(niflumic)和托灭酸(tolfenamic)；丙酸衍生物，例如布洛芬，萘普生，苯噁洛芬，氟比洛芬，酮洛芬，非诺洛芬，芬布芬，吲哚洛芬，吡咯洛，卡洛芬，奥沙普秦，普拉洛芬，咪洛芬，硫洛芬，舒洛芬，阿明洛芬和泰普菲；吡唑类，例如苯丁唑酮，羟保泰松，非普拉宗，阿扎丙宗和三甲保泰松。
甾体抗炎症药物的非限制性例子包括但不限于：皮质类甾醇，例如氢化可的松，羟基去炎松，α-甲基地塞米松，磷酸地塞米松，二丙酸氯地米松，戊酸氯倍他索，地奈德，去羟米松，醋酸去氧皮质酮，地塞米松，二氯松，双乙酸二氟拉松，戊酸二氟可龙，氟氢缩松，氟氯奈德，氟氢可的松，特戊酸氟地塞米松，醋酸氟轻松，醋酸氟轻松，氟可丁(flucortine butylesters)，氟可龙，醋酸氟泼尼定(氟甲叉龙)，氟氢缩松，哈西缩松，醋酸氢化可的松，丁酸氢化皮质酮，甲基强的松龙，去炎松缩丙酮，可的松，可托多松，氟轻松，氟氢可的松，双醋二氟松(difluorosone diacetate)，fluradrenolone，氟氢可的松，双醋二氟松(diflurosone diacetate)，fluradrenolone acetonide，甲羟孕酮，amcinafel，安西非特，倍他米松和其其余的酯，氯泼尼松，chlorprednisone acetate，clocortelone，clescinolone，二氯松，二氟泼尼酯(diflurprednate)，氟氯奈德，氟尼缩松，氟米龙，氟培龙，氟泼尼龙，戊酸氢化可的松，环戊丙酸氢化可的松，氢可松氨酯，甲泼尼松，泼拉米松，氢化泼尼松，脱氢可的松，二丙酸氯地米松，去炎松，和其混合物。
镇痛药(止痛药)的非限制性例子包括：阿司匹林及其它水杨酸盐(例如胆碱或水杨酸镁)，布洛芬，酮洛芬，萘普生钠和醋氨酚。
生长因子是具有许多功能(包括调节粘着分子生成，改变细胞增生，增加血管形成，增加胶原合成，控制骨代谢和改变细胞迁移到给定区域中)的激素。生长因子的非限制性例子包括胰岛素样生长因子-1(IGF-1)，转化生长因子-β(TGF-β)，骨成型蛋白(BMP)等等。
毒素的非限制性例子包括霍乱菌毒素，其还充当助剂。
抗增殖剂的非限制性例子包括：烷基化剂，例如氮芥，氮丙啶和甲基三聚氰胺，烷基磺酸盐，亚硝基脲和三氮烯；代谢拮抗剂，例如叶酸类似物，嘧啶类似物和嘌呤类似物；天然产物，例如长春花生物碱，表鬼臼脂素，抗生素，酶，紫杉烷(taxane)和生物反应调节物；其它药剂，例如，铂配位络合物，蒽二酮，蒽环霉素，取代的脲，甲基肼衍生物或肾上腺皮质抑制剂；或激素或拮抗剂，例如，肾上腺类固醇，孕酮，雌激素，抗雌激素，雄激素，抗雄激素或促性腺激素释放激素类似物。化疗剂的具体例子包括，例如，氮芥，表鬼臼脂素，抗生素，铂配位络合物，博来霉素，多柔比星，太平洋紫杉醇，依托泊苷，4-OH环磷酰胺和顺铂。
HSP家族由大约25种具有高度保守结构的蛋白组成，这些蛋白通过它们的分子量进行辨别。几乎所有的人都对微生物热休克蛋白60(HSP60)具有细胞和体液免疫反应。因为在微生物(细菌和寄生物)和人HSP60之间存在高度抗原同源性，所以，对微生物免疫的'成本'可能是与人HSP60(通过应激动脉的内皮细胞表达)的交叉反应性的危险。针对改变的自体同源HSP60的真性自身免疫还可以启动这种过程(Wick等人Atherosclerosis as an autoimmune disease: an update. TRENDS in Immunology. 2001; 22(12):665-669)。在一些实验性自身免疫疾病(关节炎，I型糖尿病)中，HSP作为靶向自体抗原已被涉及。已经证明抗HSP65以及抗HSP60抗体与人的动脉粥样化病变有关。在兔子和小鼠中所进行的研究显示，形成HSP65所引起的免疫应答(通过用重组蛋白或用富含HSP65的结核分枝杆菌制剂进行免疫)可以增加动脉粥样化形成。因为自身免疫过程指向HSP65作为合适的抗原候选物，已经使用通过诱导粘膜“免疫耐受作用”形成的无应答状态，以便阻断这些反应，我们的团队报道，与摄食BSA或PBS的小鼠相比较，早期动脉粥样硬化在摄食HSP65的小鼠中得到减弱(Harats等人，Oral tolerance with heat shock protein 65 attenuates mycobacterium tuberculosis induced and high fat diet driven atherosclerosis lesions. J Am Coll Cardiol. 2002;40:1333-1338)，这种现象进一步得到Maron的支持，其证明了用HSP接种鼻子可以降低与动脉粥样硬化有关的炎性过程(Maron等人，Mucosal administration of heat shock protein-65 decreases atherosclerosis and inflammation in aortic arch of low density lipoprotein receptor-deficient mice. Circulation. 2002; 106: 1708-1715)。
β-2-糖蛋白I(β2GPI)是磷脂结合蛋白，显示其可作为促血栓形成抗磷脂抗体的靶向。近来已经证明其可驱动免疫介导的反应，并增加鼠的动脉粥样硬化。对β-2-GPI的β-抗体具有活化单核和内皮细胞的能力，并且可以在有加速动脉粥样硬化倾向的小鼠中引起对β2GPI的免疫应答。当将β2GPI-反应性淋巴结和脾脏细胞转入LDL-受体缺乏的小鼠中时，它们促进脂肪纹的形成，验证了对β2GPI-特异性淋巴细胞的直接硬化（proatherogenic）作用。通过预先口服摄食抗原而引起对β2GPI的免疫耐受性，可以导致动脉粥样硬化病变程度的显著降低。由此，在动脉粥样硬化的斑块中，β2GPI是候选参与者，并且可以用作斑块发展的免疫调节剂。在针对人蛋白免疫的小鼠中，口服摄食β2GPI可以抑制淋巴结细胞对β2GPI的反应性。在β2GPI耐受的小鼠(针对β2GPI免疫)的淋巴结细胞中，一旦用相应的蛋白引发，可以上调IL-4和IL-10的生成。由此，口服β2GPI是抑制小鼠动脉粥样化形成的有效方法(George等人，Suppression of early atherosclerosis in LDL-receptor deficient mice by oral tolerance with beta2-glycoprotein I. Cardiovasc Res. 2004; 62(3): 603-9)。
本文所描述的氧化的脂质可以按照化学领域已知的任何合适方法来制备。例如，本文所描述的磷脂可以按照国际专利申请PCT/IL05/000735(公开号WO 06/006161)或美国专利申请11/650,973(公开号2007-0112211)所描述的方法来制备。
应该理解，本发明的某些特征(为了清楚，在独立实施方案的上下文中对其进行了描述)还可以提供于单一实施方案的组合中。反之，本发明的各种特征(为了简便起见，在单一实施方案的上下文中对其进行了描述)还可以单独提供，或以任何合适的亚组合形式或当合适时在本发明任何其它描述的实施方案中来提供。不认为在各种实施方案的上下文中所描述的某些特征是那些实施方案的基本特征，除非该实施方案在没有那些要素的情况下不能实行。
在下面的实施例中对上文所描述的和下面权利要求部分所要求的本发明的各种实施方案和方面建立了实验支持。
实施例
现在参考下列实施例，其与上述说明书一起，以非限制性方式举例说明本发明的一些实施方案。
材料和方法
材料：
从Bio-Lab得到乙酸(冰的)；
从Sigma得到龙胆紫；
从Bio-Lab得到二硫苏糖醇(DTT)；
从Biological Industries(Israel)得到胎牛血清(热失活)；
从Bio-Lab得到甲醇(绝对)；
从Sigma-Aldrich得到MOG肽35-55；
从Peprotech(Israel)得到小鼠GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子)；
从Biological Industries(Israel)得到青霉素/链霉素溶液；
从Biological Industries(Israel)得到红血细胞溶解缓冲液；和
从Biological Industries(Israel)得到含有L-谷酰胺的RPMI-1640介质。
从Corning得到COSTAR®无菌24孔组织培养物处理的平皿。
如下制备磷酸盐缓冲盐水(PBS)：用重蒸馏的水将不含钙或镁的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐水10x浓缩液(Biological Industries，Israel)进行稀释。
将细胞在37℃、在具有5% CO2的氛围中培养。
使用Tecan SUNRISE读盘机和Magellan Version 6.3数据采集软件进行光谱测定。使用Tecan SpectraFluor 595 nm带通滤波器，测定595 nm的吸收。
对于体外试验，将被试验化合物溶解在乙醇中，达到100 mg/ml的浓度，而后在PBS中稀释至1 mg/ml的浓度。
酪氨酸磷酸化试验：
在小鼠的巨噬细胞或骨髓获得的细胞(BMDCs)中试验酪氨酸磷酸化作用。
在巯基醋酸盐刺激之后，从7-8周大的C57BL/6雌性小鼠的腹膜中分离小鼠初级巨噬细胞。在RPMI-1640介质中，用0.5%胎牛血清(FBS)使细胞预先饥饿过夜。使用冷的RPMI-1640，通过从雌性SJL小鼠的股骨和胫骨当中冲洗骨髓，分离小鼠初级骨髓获得的细胞。制备细胞悬液，使用红细胞溶解缓冲液除去红细胞，并在含有磷酸盐缓冲盐水(PBS)和0.5%牛血清白蛋白(BSA)的缓冲液中、在4℃用小鼠B220和CD90微粒(Miltenyi Biotech)培养15分钟。然后洗涤细胞，再悬浮在相同的缓冲液中，并在Midi-Macs分离装置上、通过LD或LS柱(Miltenyi Biotech)消耗B和T细胞。计数消耗的(dpleted)骨髓细胞，洗涤并以106个细胞/ml的浓度播种在RPMI-1640介质中，该介质中含有L-谷酰胺，β-巯基乙醇，10%胎牛血清，抗生素(青霉素/链霉素)和2 ng/ml小鼠粒细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)。每隔一天替换介质。在培养后的第5-6天，收集细胞，计数并播种(106个细胞/ml)在介质中24小时，而后在RPMI-1640介质中用0.5%胎牛血清(FBS)饥饿过夜。
然后，在含有1%乙醇的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，用1、10或20μg/ml的试验化合物处理巨噬细胞或BMDCs 10分钟。用1或20μg/ml磷脂酰胆碱或溶剂(含有1%乙醇的PBS)处理用作阴性对照。用1、10或20μg/ml CI-201(1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸)处理用作阳性对照。
然后，使用单克隆抗磷酸酪氨酸抗体，通过Western印迹观察含有磷酸化酪氨酸的蛋白。进行ERK1/2或α-微管蛋白的 Western印迹，作为蛋白加载的对照物。
体外毒性试验：
将巯基醋酸盐诱出的小鼠腹膜巨噬细胞洗涤、计数并一式三份地播种(2x105至3x105个细胞/孔，在24孔平皿中)在含有RPMI-1640、L-谷酰胺、10% FBS和抗生素(青霉素/链霉素)的介质中。恢复24小时之后，将试验化合物(或对照物)加入到细胞介质中，剂量为2、10、20、50、100或150μg/ml，通过用溶剂补充体积，使所有处理中所加入的体积保持相等。
在加入化合物之后，额外培养细胞24小时，而后洗涤细胞，并用10%甲醇/10%乙酸溶液固定，用龙胆紫(0.4%，在20%乙醇中)染色。通过在595 nm测定吸光度，测定细胞数量。用赋形剂(含有1%乙醇的PBS)培养的细胞用作对照物，将处理样品中的细胞数量对其进行归一化。
数据以平均值±标准偏差的形式提供。使用student's t-检验，计算相对于赋形剂处理的细胞的统计显著性，认为p值小于0.05是统计显著性的。
体外 IL12/23p40 生成试验：
从雌性C57BL小鼠的股骨和胫骨得到骨髓产生细胞(BMDCs)，培养，并在培养5-6天后以106个细胞/ml的浓度播种(如上文酪氨酸磷酸化试验中所描述的方法)。
然后以1、2.5、5、10或20μg/ml的浓度将试验化合物加入到细胞中，保持1小时。通过用10μg/ml肽聚糖(PGN)培养24小时，使细胞活化，用于IL12/23p40生成。利用ELISA测定上清液中的细胞因子生成。不含试验化合物的活化细胞用作对照物。
体外 IL12/23 p40 mRNA 表达试验：
如上文所描述，制备由骨髓获得细胞的培养物。在培养后的5-6天，用小鼠CD11c微粒，在MS或LS柱(Miltenyi Biotech)上使细胞培养物中的CD11c+树状细胞富集(>90%)。用单独的10μg/ml肽聚糖或在20μg/ml试验化合物(活化之前1小时加入)存在下刺激CD11c+树状细胞1、2和3小时。使用RNeasy微型试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)，从细胞中提取RNA。对于cDNA制备，在70℃，将1μg的RNA与Oligo dT混合10分钟，第一链缓冲液。在42℃，加入二硫苏糖醇和dNTP和super-script逆转录酶(SS-II)(Invitrogen，Carlsbad，CA)，保持50分钟，并通过在70℃额外培养15分钟来结束反应。使用LightCycler Taqman master(Roche Diagnostics，Mannheim，Germany)进行所有实时PCR反应，并在LightCycler设备(Roche)上运行。将准备好的带有引物的探针组用于IL12/23 p40和GAPDH试验(Applied Biosystems，分别为试验#Mm01288992_m1和Mm99999915_g1)，后面的试验用来归一化RNA水平。20μg/ml CI-201和磷脂酰胆碱(PC)分别用作阳性和阴性对照。
体内髓鞘质少突神经胶质细胞糖蛋白 (MOG) 引发的实验性自身免疫脑脊髓炎 (EAE) 试验：
在免疫之前5天，开始连续5天口服给予C57BL/6小鼠标明数量的试验化合物(最终体积200μl)。
为了EAE诱导，皮下用含有1.5 mg/ml MOG肽35-55(MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)和2.5 mg/ml CFA(完全Freund's助剂)的乳剂使小鼠免疫(100μl乳剂注射到每个侧腹中)。免疫之后立即和48小时腹膜内给予百日咳毒素(500 ng，在500μl PBS中)。
通过平均临床评分来评价EAE的发作。
体内胶原引发的关节炎 (CIA) 试验：
通过在尾根部(第0天)注射含有完全Freund's助剂(CFA)的胶原，使DBA/1雄性小鼠免疫，引发关节炎，并在侧腹加强接种(第21天)。跟踪小鼠的关节炎发展，直到第36天为止。在第22天开始通过填喂法给予试验化合物和对照物质，并以每天为基础进行(每周6次)。
通过关节炎临床评分来评价关节炎的发作。
体内动脉粥样硬化病变试验：
口服给予12-16周大的LDL-RD雄性小鼠0.2 ml的PBS或含有标明数量试验化合物的PBS，一天一次，隔日给予，进行5次处理。用西餐刺激小鼠5周，而后杀死。
或者，口服给予14-16周大的ApoE KO小鼠0.2 ml的PBS或含有标明数量试验化合物的PBS，一天一次，隔日给予，进行5次处理，到8周结束的时候杀死。
按照先前所描述方法[Paigen等人，Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice. Atherosclerosis 1987；68:231-240]，进行少许改变，通过计算主动脉窦中的病变大小，将动脉粥样硬化病变进行定量。简要地说，从动物中取出心脏和主动脉，并小心地清除外周油脂。将心脏包埋在最佳切削温度(OCT)的凝胶中，并冷冻。沿着主动脉窦(400μm)，用3-8个油红O-染色的连续切片(10μm厚)测定主动脉窦病变。使用电脑分析方法(Image Pro Plus software[version 4.5.1.29]，Medical Cybernetics Corporation)，计算病变面积。
实施例 1
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-202) 和 1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺
按照下文所描述方法，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料，合成(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。使用相同的方法，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料，合成(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
(S)-1- 十六烷基 - 甘油的合成： 将11克(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、20克粉末氢氧化钾和27.96克十六烷基溴在150 ml甲苯中回流搅拌6小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐减少到大约40 ml。将反应混合物冷却至室温，加入100 ml水，用75 ml二氯甲烷将反应混合物提取三次。用50 ml水洗涤合并的有机相，减压除去溶剂。将残余物溶解在200 ml的90:10:5(体积/体积)甲醇：水：浓盐酸的混合物中，并将得到的溶液回流2小时。冷却至室温后，加入100 ml水。用100 ml二氯甲烷提取产物三次，连续用100 ml水、100 ml饱和碳酸钠水溶液洗涤，再次用100 ml水洗涤。然后减压除去溶剂，用己烷(200 ml)将产物结晶，得到21.69克纯(S)-1-十六烷基-甘油，将其在干燥器中减压干燥。产率是82%。
(R)-1- 十六烷基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将20克(S)-1-十六烷基-甘油和21.29克三苯基氯甲烷溶解在369 ml干燥四氢呋喃(THF)和93 ml干燥乙腈中。加入17.75 ml三乙胺，并将反应混合物回流17小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(100克)上，转入分液漏斗中，并用甲基叔丁基醚提取。用200 ml水、200 ml稀(1.5%)硫酸(两次)、200 ml水、200 ml饱和碳酸氢钠水溶液和用200 ml水(再次)连续地洗涤有机相。用无水硫酸钠干燥有机相，减压除去溶剂，得到36.86克粗品残余物。将该残余物溶解在热己烷(200 ml)中，并在4℃将得到的溶液冷却过夜。将沉淀的产物过滤，得到30.71克(R)-1-十六烷基-3-三苯甲基-甘油。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将19.94克1-十六烷基-3-三苯甲基-甘油、6.98克6-溴-1-己烯和15克粉末氢氧化钾在350 ml己烷中搅拌，并回流8小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将反应混合物冷却至室温，转入分液漏斗中，用200 ml水洗涤两次，然后减压除去溶剂。将残余物溶解在150 ml己烷中，并用200 ml水再洗涤两次。将有机溶液在4℃保持过夜，在此期间，出现副产物的沉淀。过滤，减压除去溶剂，得到19.86克(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油。产率是86.6%。
(S)-1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 在配备温度计和滴液漏斗的三颈圆底烧瓶中，将150.16克(702 mmol)高碘酸钠悬浮在500 ml水中。加入7.21克(85.8 mmol)碳酸氢钠和2.47克(15.6 mmol)高锰酸钾，并将该悬浮液加热至40℃的温度。将50克(78 mmol)(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油溶解在500 ml叔丁醇中，并在1小时期间内将该溶液加入到高碘酸钠和高锰酸钾的混合物中。将(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油加入到高碘酸钠和高锰酸钾中之后，将该反应混合物在40℃的温度下加热3小时。1.5小时之后，加入额外0.62克(3.9 mmol)高锰酸钾，以便使该反应混合物保持粉红色。在3小时期间的最后，将反应混合物冷却至室温，转入分液漏斗中，用200 ml己烷提取。用15克Na2S2O5的100 ml水溶液洗涤有机相。将稀盐酸(0.65 ml浓HCl在13 ml水中)加入到有机相中，并减压蒸馏200 ml溶剂。将残余的澄清溶液加热至80℃的温度，保持6小时，蒸馏出250 ml额外体积的溶剂。用100 ml水和10 ml 30% NaOH溶液处理残余物，得到12的pH值。过滤沉淀的三苯基甲醇，并用10 ml水洗涤4次。用50 ml己烷和50 ml乙酸乙酯的混合物提取滤液，除去残余的三苯基甲醇及其它杂质。在水相中，用8.45 ml(101.4 mmol)浓盐酸将1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油的钠盐质子化。将得到的游离羧酸用100 ml己烷提取。蒸干，并与100 ml己烷共同蒸发，得到27.00克粗品(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油。通过将粗品溶解在7 ml丙酮和68 ml己烷的混合物中，并冷却至0℃，而使粗品进行结晶。过滤沉淀，用7 mL冷己烷洗涤两次，干燥。得到20.90克(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油类白色固体。产率是64.3%。
(S)-1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将15.0克(36.0 mmol)(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油溶解在100 ml甲醇中，并加入3 ml浓盐酸。将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入三乙胺，直到反应混合物的pH值达到7为止。将溶液转入分液漏斗中，并用200 ml己烷提取两次。用水洗涤有机相。蒸干，并与100 ml己烷共同蒸发，得到14.92克(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油。产率是96.2%。
(R)-1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成：将2.88克(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油和3 ml三乙胺溶解在30 ml THF中。用15分钟的时间将该溶液逐滴加入到冰冷却下的2 ml POCl3的20 ml四氢呋喃溶液中，同时搅拌。继续额外搅拌10分钟，同时冷却，并在室温下额外搅拌45分钟。将反应混合物进行冰冷却，并用20分钟的时间逐滴加入1.21 ml乙醇胺和5.6 ml三乙胺的50 ml THF溶液。继续搅拌10分钟，同时冷却，并在室温下过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在24 ml乙酸和10 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时。用50 ml氯仿提取混合物三次，用50 ml水洗涤有机相两次，减压除去溶剂，得到4.0克(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺黄色蜡。
1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的 NMR 特征：
将1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。然后在300 MHz测定光谱。通过1H和13C NMR光谱两者来测定样品。
结果显示了1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的1H峰的归属如下。
Figure 256284DEST_PATH_IMAGE013
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.28 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
6.905 3 H, br , s D
4.200 2 H, br, s A
3.594 3H, s I
3.336 － 3.562 10 H, m, 5 x CH2 C
3.291 － 3.313 1 H, m B
2.250-2.299 2 H, t, J=7.35 Hz E
1.454-1.620 6 H, m, 3 x CH2 F
1.185 26 H, m, 13 x CH2 G
0.807 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz H
按照1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 899755DEST_PATH_IMAGE014
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.0 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
174.08 G
79.00 D
72.01
70.38
70.13
66.25-66.34 C
62.34-62.43 B
51.61 H
40.42-40.51 A
33.87 F
32.05
29.81
29.65
29.47
26.20
22.77
21.74 J
20.74
14.00 E
1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C27H56NO8P)的计算质量是553.7092。
使用电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)得到的质谱显示了具有m/z=554的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+。由此，质谱与1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的化学结构一致。
(R)-1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-202) 的合成：将3.5克(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在100 ml 8:2(v/v)甲醇：10%氢氧化钠溶液的混合物中。在室温下搅拌混合物5小时。通过加入磷酸二氢钠和甲酸，将反应的pH值调节至4。加入水(100 ml)和氯仿(100 ml)。提取之后，分离各相，从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到3.0克粗品(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。将粗品用硅胶(120克)色谱纯化。用氯仿：甲醇和水的混合物(体积比60:35:5)洗脱产物。从含有期望产物的馏份中减压除去溶剂，将残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到2.11克纯(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺蜡。用五氧化二磷减压干燥该蜡。
CI-202 的 NMR 特征：
将CI-202的样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。然后在300 MHz测定光谱。通过1H和13C NMR光谱两者来测定样品。
结果显示了1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-202)的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的1H峰的归属如下。
Figure 234921DEST_PATH_IMAGE015
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.26 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
8.140 3 H, br , s D
4.144 2 H, br, s A
3.838-4.037 2H, m C
3.612-3.697 2H, m C
3.385－ 3.530 6 H, m, 3 x CH2 C
3.256 1 H, br, s B
2.302-2.348 2H, t, CH2, J=6.9Hz I
1.672-1710 2 H, m E
1.518-1.606 4 H, m, 2 x CH2 F
1.254 26 H, m, 13 x CH2 G
0.879 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz H
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 150793DEST_PATH_IMAGE016
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.004 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
177.16 D
77.868 B
71.776
70.218
69.814
66.161
62.205
40.533 A
33.818
31.916
29.714
29.664
29.549
29.359
29.156
26.080
22.679
21.732
14.109 C
CI-202 的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C26H54NO8P)的计算质量是539.36。
使用电喷雾离子化质谱(ESI--MS)得到的质谱显示了具有m/z=538的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。由此，该质谱与1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-202)的化学结构一致。
体外 IL12/23p40 生成：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-202对IL12/23 p40的体外生成的影响。
如图1所示，CI-202以剂量依存方式抑制由骨髓所获得细胞生成IL12/23 p40。
IL12/23p40 mRNA 表达：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-202对体外IL12/23 p40 mRNA表达的影响。
如图2所示，在整个测试期间(给予CI-202之后2-4小时)，CI-202抑制IL12/23 p40 mRNA表达，并且CI-202所产生的抑制可与CI-201所产生的相比拟。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-202在初级巨噬细胞中对体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图3所示，用10μg/ml(18.5μM)CI-202处理，可以诱导酪氨酸磷酸化作用，而接触20μg/ml(37μM)CI-202，导致磷酸酪氨酸水平降低。这些变化与10μg/ml(17μM)和20μg /ml(34μM)阳性对照CI-201分别引起的效果非常相似。
CI-202 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-202的毒性。
如图4A和4B所示，只在高于50μg/ml的剂量下检测到CI-202的显著毒性，CI-202的LD50位于50和100μg/ml之间。
髓鞘质少突神经胶质细胞糖蛋白 (MOG) 引起的实验性自身免疫脑脊髓炎 (EAE) 的发展：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，在小鼠中，测定CI-202对体内髓鞘质少突神经胶质细胞糖蛋白(MOG)引起的实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)的影响。
如图5所示，给予4 mg/kg的CI-202可以延迟疾病发作，并且降低EAE的临床表现。
胶原引起的关节炎 (CIA) 的发展：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，在小鼠中，测定CI-202对体内胶原引起的关节炎的发展的影响。
如图6所示，在整个研究期间，给予0.4 mg/kg的CI-202显著地降低关节炎严重程度。相对于对照小鼠，峰值关节炎临床评分降低42%。
实施例 2
1- 十六烷基 -2-(6- 羧基 ) 己基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-203)
按照下文所描述方法，合成(R)-1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
(R)-1- 十六烷基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 按照实施例1所述，制备(R)-1-十六烷基-3-三苯甲基-甘油，其使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇，首先制备(S)-1-十六烷基-甘油。
(R)-1- 十六烷基 -2-(6- 乙基羧基 ) 己基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将5克(R)-1-十六烷基-3-三苯甲基-甘油和2 mL7-溴-庚酸乙酯溶解在70 ml苯中。加入23克粉末KOH，并将反应混合物回流搅拌14小时，同时通过共沸蒸馏除去反应中形成的水。将反应混合物冷却至室温，用70 ml水洗涤三次，并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，将得到的残余物溶解在25 ml热己烷中，并将溶液冷却至4℃过夜。过滤沉淀的副产物，减压除去溶剂，得到5克(R)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-3-三苯甲基-甘油白色固体。
(S)-1- 十六烷基 -2-(6- 乙基羧基 ) 己基 - 甘油的合成： 将5克(R)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-3-三苯甲基-甘油溶解在90 ml乙醇中。慢慢地加入20 ml浓盐酸，并将混合物搅拌和回流4小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰上，用100 ml二乙醚提取三次。用100 ml水、100 ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤有机相，再次用100 ml水洗涤，用硫酸钠干燥。过滤硫酸钠后，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在热正己烷中，然后将混合物在4℃保持过夜。过滤沉淀后，减压除去溶剂，得到3.1克黄色油。用硅胶柱(140克)色谱纯化残余物。用300 ml的CHCl3：乙酸乙酯(6:4 v/v)洗脱产物。减压除去溶剂，得到1.34克无色油。在减压下用五氧化二磷干燥，得到(S)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-甘油无色固体。
(R)-1- 十六烷基 -2-(6- 乙基羧基 ) 己基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将1.34克(S)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-甘油和1.2 ml三乙胺溶解在15 ml THF中。在15分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的0.8 ml POCl3的10 ml THF溶液中。在冷却下，将该溶液额外搅拌10分钟，并在室温下额外搅拌45分钟。将反应混合物在冰中冷却，并用15分钟的时间逐滴加入0.52 ml乙醇胺和2.4 ml三乙胺的25 ml THF溶液。继续搅拌反应混合物10分钟，同时在冰浴中冷却，而后在室温下过夜。过滤反应混合物，并减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在24 ml乙酸和10 ml水的混合物中，而后加热到70℃的温度，保持1小时。然后用50 mL氯仿提取混合物三次，并用50 ml水洗涤两次。减压除去溶剂，得到1.87克(R)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺黄色油。
(R)-1- 十六烷基 -2-(6- 乙基羧基 ) 己基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成： 将1.87克(R)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在50 ml异丙醇和18 ml二氯甲烷的混合物中。用5分钟的时间逐滴加入2.17克碳酸钾的10 ml水溶液，同时在35-40℃的温度下保持反应。在40℃的温度下，用10分钟时间逐滴加入1.52 ml硫酸二甲酯的10 ml异丙醇溶液。在40℃的温度下保持反应90分钟，而后加入水，并用50 ml氯仿提取该混合物两次。用50 ml水洗涤有机相，减压除去溶剂，得到1.8克(R)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸蜡。
(R)-1- 十六烷基 -2-(6- 羧基 ) 己基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-203) 的合成： 将1.8克(R)-1-十六烷基-2-(6-乙基羧基)己基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸溶解在50 ml甲醇中。加入10%氢氧化钠溶液，并在室温下搅拌反应混合物5小时。通过加入磷酸二氢钠将反应的pH值调节至4-5的范围。加入70 ml水和70 ml氯仿。分离水和有机相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到1.29克白蜡。用硅胶(62克)色谱纯化残余物。用CHCl3：甲醇：水(体积比60:35:5)洗脱产物。减压除去溶剂之后，将残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到1.0克(R)-1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸白蜡。
1- 十六烷基 -2-(6- 羧基 ) 己基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR光谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 229608DEST_PATH_IMAGE017
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.260 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.279 2H, br, s A
3.375-3.539 11 H, m, 5 x CH2+CH C
3.242 9H, s, 3 x CH3 D
2.302 2 H, t, CH2, J=6.15Hz F
1.543-1556 6H, m E
1.256-1374 30 H, m, 15 x CH2 G
0.879 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz H
按照1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.002 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.60 E
78.166 D
71.749
70.368
70.116
65.972
59.777
54.390 C
34.120 B
31.925
29.732
29.597
29.526
29.368
28.412
26.109
25.373
24.665
22.685
14.111 A
1- 十六烷基 -2-(6- 羧基 ) 己基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(C31H64NO8P)的计算质量是609.82。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)得到的质谱显示了具有m/z=609的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。由此，该质谱与1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
体外 IL12/23 p40 生成：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-203对IL12/23 p40的体外生成的影响。
如图7所示，CI-203以剂量依存方式抑制由骨髓所获得细胞生成IL12/23 p40。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-203对在骨髓所获得细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。测试CI-203的R对映体和外消旋CI-203两者。CI-201的R对映体和S对映体两者用作对照物。
如图8所示，用20μg/ml(33μM)(R)-CI-203和外消旋CI-203两者处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，而用1μg/ml(1.7μM)CI-203处理则没有明显的影响。(R)-CI-203和外消旋CI-203的影响与CI-201的R和S对映体两者所引发的影响相似。
CI-203 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-203的毒性。
如图9A和9B所示，只在高于100μg/ml的剂量时观察到CI-202的显著毒性，CI-203的LD50位于50和100μg/ml之间。
实施例 3
1- 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-209)
按照下文所描述的方法，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料，合成(R)-1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。使用相同的方法，合成(S)-1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
(S)-1- 十二烷基 - 甘油的合成： 将11克(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、20.6克粉末氢氧化钾和24.08克十二烷基溴在300 ml苯中搅拌并回流14小时，同时共沸蒸馏除去所形成的水。然后将反应混合物冷却至室温，并加入150 ml水。然后用150 ml甲基叔丁基醚(MTBE)提取反应混合物三次，用100 ml水洗涤合并的有机相，然后减压除去溶剂，得到29.71克浅棕色油。将该残余物溶解在100 ml甲醇中。加入6 ml浓盐酸，并将得到的溶液回流，直到得到澄清溶液为止，而后冷却至室温，加入100 ml水。用150 ml氯仿提取产物，连续地用150 ml水、150 ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用150 ml水洗涤。用无水Na2SO4干燥溶剂，过滤，减压除去，得到23.77克粗品。在4℃用200 ml己烷将粗品再结晶，得到19.83克纯(S)-1-十二烷基-甘油白色晶体。
(R)-1- 十二烷基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将19.83克(S)-1-十二烷基-甘油和21.0克三苯基氯甲烷加入到250 ml干燥四氢呋喃(THF)和60 ml干燥乙腈的混合物中。加入22 ml干燥三乙胺，并在氮气氛围中将反应混合物回流17小时。然后将反应混合物冷却至室温，加入5 ml三乙胺和10克冰。将混合物转入分液漏斗中，并用100 ml MTBE提取。连续地用150 ml水、150 ml稀(1.5%)H2SO4、150 ml水、150 ml浓碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用150 ml水洗涤。然后用无水Na2SO4干燥溶液，减压除去溶剂。将残余物(40.63克棕色油)溶解在200 ml乙酸乙酯中，并冷却至-20℃，保持几天。将混合物在-10℃的温度下离心，并倾倒掉母液。将固体在室温下熔融，并通过硅胶柱(195克)色谱纯化。用氯仿和己烷的混合物、而后9:1(v/v)氯仿：乙酸乙酯的混合物洗脱出18.57克纯(R)-1-十二烷基-3-三苯甲基-甘油。产率是48.5%。
(S)-1- 十二烷基 -2-(5'- 己烯基 )- 甘油的合成： 将18.57克(R)-1-十二烷基-3-三苯甲基-甘油、4 ml的6-溴-1-己烯和22.57克粉末氢氧化钾在100 ml苯中搅拌并回流9小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将反应混合物冷却至室温，加入100 ml水，并将溶液转入分液漏斗中。用50 ml二乙醚提取溶液四次，从合并的有机相中减压除去溶剂，得到19.31克残余物。将残余物溶解在100 ml甲醇中，然后加入6ml浓HCl(37%)。将反应混合物回流4小时，冷却至室温，并在此温度下搅拌96小时。通过减压除去溶剂，将反应混合物浓缩至大约50 ml，并加入50 ml水。将溶液转入分液漏斗中，并用100 ml MTBE提取两次。然后减压除去溶剂。将残余物(18.85克)溶解在己烷中，并将得到的溶液在冰浴中冷却30分钟。过滤沉淀，用冷己烷洗涤，并从滤液中减压除去溶剂。将残余物(15.23克)再次溶解在热己烷中，并冷却至4℃过夜。过滤并从滤液中除去溶剂后，用硅胶(77.34克)色谱纯化滤液。用氯仿和乙酸乙酯的1:1(v/v)混合物进行洗脱，而后用纯氯仿洗脱，然后用含有3%丙酮的氯仿洗脱。得到10.03克纯(S)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-甘油。产率是78.1%。
(R)-1- 十二烷基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将5.75克(S)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油(在干燥器中用P2O5干燥)和3.11 ml三乙胺溶解在50 ml THF中。在30分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的1.7 ml POCl3的20 ml THF溶液中。在冷却下，继续额外搅拌30分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，然后用15分钟的时间逐滴加入1.3 ml乙醇胺和3.3 ml三乙胺的30 ml THF溶液。在冰浴中，继续搅拌30分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，并从滤液中减压除去溶剂。将残余物溶解在36 ml乙酸和15 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时，冷却至室温。用50 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取溶液两次，用稀碳酸氢钠溶液洗涤，减压除去溶剂，得到8.54克粗品。用硅胶(55克)色谱纯化该粗品。用氯仿、而后用氯仿与2.5%-40%甲醇的混合物洗脱出4.99克纯(R)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。产率是63.85%。
(R)-1- 十二烷基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将4.99克(R)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在35 ml甲醇和100 ml二氯甲烷的混合物中。加入10克碳酸钾的20 ml水溶液。然后在1小时期间内逐滴加入2.5 ml硫酸二甲酯，并在室温下将反应搅拌过夜。用薄层色谱测定，在反应混合物中还有一些起始原料。加入额外1 ml的硫酸二甲酯，并将反应混合物加热至40℃，保持5小时。然后将反应混合物冷却至室温，加入100 ml水，而后用100 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取混合物三次。从有机相中减压除去溶剂，得到5.8克粗品(R)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
(R)-1- 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-209) 的合成： 将2.76克碳酸氢钠加入到5.18克(R)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸的100 ml水溶液中。然后加入20.4克高碘酸钠的100 ml水溶液。将270 mg高锰酸钾的82 ml水溶液放在滴液漏斗中，需要逐滴加入，以保持反应混合物的粉红色。在反应期间，总共加入58 ml高锰酸盐溶液。在室温下搅拌反应混合物过夜。通过加入20克磷酸二氢钠、而后3 ml 80%磷酸，将反应的pH值调节至大约4。用50 ml氯仿：甲醇的2:1混合物提取反应混合物三次，并从有机相中减压除去溶剂。将残余物溶解在氯仿中，并用水洗涤。用无水Na2SO4干燥有机溶液，减压除去溶剂，得到4.89克粗品。用硅胶(58.2克)色谱纯化该粗品。用氯仿、而后用氯仿与10%-60%甲醇的混合物洗脱出1.81克纯(R)-1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。产率是33.76%。
合成CI-209的另外的合成途径进行如下：
(R)-1- 十二烷基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 乙酰基 - 甘油的合成：将按照上文所描述方法制备的(R)-1-十二烷基-3-三苯甲基-甘油(67克)、6-溴-1-己烯(26.14克)和粉末KOH(35克)在苯(200 ml)中搅拌并回流9小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约100 ml。将反应混合物冷却至室温，加入水(150 ml)。将溶液转入分液漏斗中，并用二乙醚(3x150 ml)提取。将合并的有机相用水(3x150 ml)洗涤，而后减压除去溶剂。将残余物(78克)溶解在乙酸(200 ml)中，并在冰浴中冷却该溶液。向该冷却溶液中加入40 ml乙酸酐(40 ml)和1 ml 70%高氯酸的混合物。使反应混合物达到室温，而后在室温下搅拌过夜。加入冰，而后加入二乙醚(400 ml)和水(400 ml)。分离有机相，并减压除去溶剂。将残余物溶解在热己烷中，并在4℃的温度下保存该溶液过夜。过滤沉淀的副产物，并从滤液中减压除去溶剂，得到55克油状褐色产物。用硅胶柱(350克)色谱纯化粗品。用氯仿：己烷的1:1(v/v)混合物(1500 ml)、而后氯仿(1500 ml)洗脱出纯(R)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-3-乙酰基-甘油。从含有产物的馏份中除去溶剂，得到52克产物。
(S)-1- 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油的合成：将高碘酸钠(150克)、高锰酸钾(2.5克)和碳酸氢钠(10克)悬浮在水(500 ml)中。用1小时将(R)-1-十二烷基-2-(5'-己烯基)-3-乙酰基-甘油(52克)的叔丁醇(500 ml)溶液加入到该水悬浮液中，然后在室温下搅拌反应混合物过夜。通过硅藻土垫过滤混合物，将其进一步用叔丁醇洗涤。用己烷(3x100 ml)提取该溶液。用亚硫酸氢钠水溶液(15克，在100 ml水中)、而后用水(100 ml)洗涤合并的有机相两次。减压浓缩溶剂，用100 ml水和10ml 30% NaOH处理，达到12的pH值。在室温下搅拌该混合物过夜。用己烷：MTBE的8:2(v/v)混合物(200ml)提取该混合物，以便除去残余杂质。用HCl(6 ml)将该碱性水溶液酸化至pH1，而后用己烷：乙酸乙酯的7:3(v/v)混合物(3 x 100 ml)提取。用硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。用硅胶柱(500克)色谱纯化残余物(30克黄色油)。用氯仿：己烷的1:1(v/v)混合物(1000 ml)、而后用氯仿(1000 ml)、而后用氯仿：乙酸乙酯的混合物(9:1至1:1，v/v)洗脱出纯(S)-1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油。从含有产物的馏份中除去溶剂，得到13.4克产物。
(S)-1- 十二烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成：将(S)-1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油(13.38克)溶解在100 ml甲醇中，并加入2 ml浓盐酸。在室温下搅拌反应混合物5小时。加入水(50 ml)，并将该溶液转入分液漏斗中，用氯仿(3 x 100 ml)提取。将合并的有机相用水(100 mL)、浓碳酸氢钠(100 mL)洗涤，并再次用水(100 ml)洗涤。用无水Na2SO4干燥，减压蒸发溶剂，得到13.9克粗品残余物。用硅胶柱(200克)色谱纯化残余物。用氯仿、而后用氯仿：乙酸乙酯的混合物(9:1至7:3，v/v)洗脱出纯(S)-1-十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油。从含有产物的馏份中除去溶剂，得到10.7克纯产物。
(R)-1- 十二烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将10.7克(S)-1-十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油 (通过与苯共沸蒸馏来进行干燥)和5.2 ml干燥三乙胺溶解在THF(50 ml)中。在90分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的POCl3(3.2 ml)的50 ml THF溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌15分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，然后用60分钟时间逐滴加入乙醇胺(22 ml)和三乙胺(7.2 ml)的50 ml THF溶液，同时搅拌。在冰浴中，继续搅拌30分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，并从滤液中减压除去溶剂。将残余物(14克黄色油)溶解在乙酸(120 ml)和水(50 ml)的混合物中，加热到70℃，保持1小时，并冷却至室温。用氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物(3 x 100 ml)提取溶液，用水(2 x 100 ml)洗涤合并的有机相，减压除去溶剂，得到15克(R)-1-十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺橙色油。将(R)-1-十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(14克)溶解在异丙醇(100 ml)和二氯甲烷(55 ml)的混合物中。逐滴加入碳酸钾(22克)的水(100 ml)溶液，同时保持反应混合物在35-40℃。在40℃，逐滴加入硫酸二甲酯(14 ml)的异丙醇(50 ml)溶液。在40℃搅拌混合物2小时，冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。加入水(80 ml)，并用氯仿(3 x 100 ml)提取混合物。用水(100 ml)洗涤合并的有机相，减压除去溶剂，得到粗品(R)-1-十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(14.6克)橙色蜡。
(R)-1- 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-209) 的合成：将(R)-1-十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(14.6克)溶解在8:2(v/v)甲醇：10% NaOH溶液(100 ml)中，并在室温下搅拌反应混合物5小时。通过加入磷酸二氢钠和甲酸，将反应的pH值调节至5。加入水(150 ml)、氯仿(150 ml)和甲醇(50 ml)。分离水和有机相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到15克蜡。用硅胶(224克)色谱纯化该蜡。用氯仿(600 ml)、而后用氯仿：甲醇的8:2(v/v)混合物(600 ml)、而后用氯仿：甲醇：水的混合物(60:35:5，v/v)洗脱产物。从含有所需要的产物的馏份中减压除去溶剂之后，将残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到10.5克(R)-1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸白蜡。
1- 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇的氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR光谱。
结果显示了1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR
Figure 171336DEST_PATH_IMAGE019
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.282 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.264 2 H, br , s A
3.775 1 H, m B
3.381 － 3.671 10 H, m, 5 x CH2 C
3.251 9 H, s, 3 x CH3 D
2.261 2 H, t, E
1.535 － 1.582 6 H, m 3 x CH2 F
1.258 18 H, m, 9 x CH2 I
0.880 3 H, t, 1 x CH3, J=6.6 Hz J
按照1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR
Figure 387554DEST_PATH_IMAGE020
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=78.020 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
178.51 D
78.446 C
72.200
70.535 － 70.642
66.805 － 66.812
65.997 － 66.070
59.515 － 59.580
54.419 B
35.578 A
32.310
30.015
29.892
29.730
26.449
23.037
22.685
14.224 E
1- 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C25H52NO8P)的计算质量是525.3431。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)得到的质谱显示了具有m/z=524的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。由此，该质谱图与1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
体外 IL12/23 p40 生成：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-209对IL12/23 p40的体外生成的影响。
如图10所示，CI-209以剂量依存方式抑制由骨髓所获得细胞生成IL12/23 p40。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-209对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图11所示，用20μg/ml的CI-209处理，可以导致磷酸酪氨酸水平提高，而用20μg/ml的CI-201处理，导致磷酸酪氨酸水平降低。
CI-209 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-209的毒性。
如图9A和9B所示，在进行的两个实验中，在任何试验剂量下没有观察到CI-209的毒性。由此，CI-209的LD50超过150μg /ml( 286μM)。
实施例 4
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 -N- 戊二酸 (CI-210)
按照下文所描述方法合成(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸，使用(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺作为起始原料。使用相同的方法合成(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸，但用(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺作为起始原料。
在上文实施例1中描述了(R)-和(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的合成。
将1.85克(3.33 mmol)(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在175 ml二氯甲烷中，并加入1.39 ml三乙胺。在15分钟期间内将该溶液逐滴加入到0.42克戊二酐的175 ml二氯甲烷溶液中。加入完成之后，在室温下搅拌反应混合物1小时。加入20克磷酸氢二钠的100ml水溶液，并大力搅拌反应混合物20分钟。将反应混合物转入分液漏斗中，分离各相，并用100 ml氯仿提取水相两次。用无水Na2SO4干燥合并的有机相，减压除去溶剂。得到1.16克粗品，用硅胶(60克)纯化。用200 ml氯仿、而后用氯仿：甲醇的混合物(比例9:1、8:2和7:3(v/v))、而后用200 ml氯仿：甲醇(1:1体积比)从柱中洗脱出产物。从含有产物的馏份中减压除去溶剂，将残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到131.4 mg纯(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸(CI-210)类白色蜡。
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 -N- 戊二酸的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇的氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR光谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.28 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
3.945 2 H, br , s G
3.896 1 H, br , s F
3.585 － 3.608 4 H, m, 2 x CH2
3.385 － 3.431 4 H, m, 2 x CH2
3.058 － 3.130 2 H, m, CH2
2.332 4 H, m, 2 x CH2 E
1.933 2 H, m, CH2 D
1.533 － 1.673 6 H, m, 3 x CH2 C
1.255 26 H, m, 13 x CH2 B
0.879 3 H, t, 1 x CH3, J=6.45 Hz A
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.062 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
177.78
177.37
174.31
78.656 C
71.836
70.343
69.841
65.463 － 65.790
64.541 － 64.861
45.732 B
35.075
33.872
33.213
31.951
30.938
29.748
29.698
29.572
29.391
29.084
26.142
22.710
21.566
20.985
14.128 A
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 -N- 戊二酸的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸(C31H59NO11P)的计算质量是652.7746。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)得到的质谱显示了具有m/z=652的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。由此，该质谱与1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸(CI-210)的化学结构一致。
体外 IL12/23 p40 生成：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-210对IL12/23 p40的体外生成的影响。
如图13所示，CI-210以剂量依存方式抑制由骨髓所获得细胞生成IL12/23 p40。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-210对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图14所示，用20μg/ml的CI-210处理，可以导致磷酸酪氨酸水平提高，而用20μg/ml的CI-201处理，导致磷酸酪氨酸水平降低。
CI-210 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-210的毒性。
如图15A和15B所示，在100μg/ml(156.6μM)的剂量下或更高的剂量下观察到CI- 210的显著毒性，CI-210的LD50是大约150μg/ml(235μM)。
实施例 5
1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-216) 和 1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-215)
按照下文所描述的方法，合成(R)-1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(R)-1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
(S)-1- 十八烷基 - 甘油的合成： 将20 ml(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、27克粉末氢氧化钾和59克1-溴十八烷在250 ml苯中搅拌并回流6小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约200 ml。然后将反应混合物冷却至室温，并在此温度下搅拌过夜。加入200 ml水，用200 ml二乙醚提取反应混合物两次，并用200 ml水洗涤合并的有机相，然后减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在100 ml 90:10:5(v/v)甲醇：水：浓盐酸的混合物中，并将得到的溶液回流1小时，而后冷却至室温，加入200 ml水。用200 ml氯仿提取产物两次，连续地用200 ml水、200 ml饱和碳酸钠水溶液洗涤，并再次用200 ml水洗涤。然后减压除去溶剂，并用500 ml己烷将粗品结晶，得到39.5克纯(S)-1-十八烷基-甘油，在减压下，将其在干燥器中用氧化磷干燥。
(R)-1- 十八烷基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将39克(113 mmol)(S)-1-十八烷基-甘油和40克(137 mmol)三苯基氯甲烷加入到500 ml干燥THF和130 ml干燥乙腈的混合物中。加入32 ml干燥三乙胺，并将反应混合物回流17小时。然后将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(1千克)上，转入分液漏斗中，并用200 ml二乙醚提取两次。连续地用200 ml水、100 ml稀(1.5%)H2SO4(两次)、200 ml水、200 ml浓碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用200 ml水洗涤。然后用无水硫酸钠干燥溶液，减压除去溶剂。将残余物(棕色油)溶解在250 ml乙酸乙酯中，并冷却至-20℃过夜。在-10℃的温度下将混合物离心(每分钟转数3,500转(3500RPM))，然后倾倒掉母液。将残余固体溶解在己烷中，并冷冻(5±3℃)过夜。过滤沉淀，得到50克纯(R)-1-十八烷基-3-三苯甲基-甘油。
(R)-1- 十八烷基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将50克(89.2 mmol)(R)-1-十八烷基-3-三苯甲基-甘油和18克(102 mmol)5-己烯基-1-甲磺酸酯溶解在150 ml苯中。加入20克粉末KOH，并将反应混合物搅拌和回流6小时，同时通过共沸蒸馏除去反应中形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约50 ml。将反应混合物冷却至室温，并加入200 ml水。用200 ml二乙醚提取混合物三次，用200 ml水洗涤合并的有机相三次，减压除去溶剂，得到50克(R)-1-十八烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油橙色油。
(S)-1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油的合成： 将145克NaIO4溶解在500 ml水中。向此溶液中加入14克K2CO3和2.4克KMnO4，并将该悬浮液加热至40℃的温度。在1.5小时期间逐滴加入50克(R)-1-十八烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油的500 ml叔丁醇溶液，并将该混合物额外加热4小时。根据需要加入额外量的KMnO4溶液，保持粉红色。将反应混合物冷却至室温，并在此温度下搅拌过夜。以份额方式加入亚硫酸氢钠，直到粉红色以及而后的褐色消失，并且反应混合物变成黄色。在室温下搅拌此溶液30分钟之后，逐滴加入100 ml 10%硫酸，并将该溶液转入分液漏斗中，用200 ml己烷提取三次。用15克Na2S2O5的100 ml水溶液洗涤有机相两次，而后用200 ml水洗涤。通过减压除去大约500 ml溶剂，将有机相浓缩。向残余溶液中加入15 ml水和1.5 ml浓盐酸，并将得到的混合物回流6小时，然后冷却至室温，通过减压除去溶剂再次浓缩。通过加入100 ml水和10 ml 30% NaOH溶液，将残余物的pH值调节至12。过滤沉淀，用10 ml水洗涤四次。用100 ml己烷：乙酸乙酯的1:1(v/v)混合物提取滤液。通过加入8 ml浓盐酸，将水相酸化至pH1，而后用100 ml己烷提取。用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，在5±3℃，用1:9(v/v)丙酮：己烷混合物将粗品重结晶过夜，得到19克纯(S)-1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油类白色固体。
(S)-1- 十八烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 - 甘油的合成： 将17克(S)-1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油溶解在100 ml甲醇中。加入2 ml浓HCl(37%)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。减压除去溶剂，并将100 ml水加入到所得到的残余物中。将混合物用70 ml氯仿提取三次。合并的有机相用70 ml水、70 ml碳酸氢钠的浓缩液洗涤，并再次用70 ml水洗涤。然后用硫酸钠干燥溶液，过滤，减压蒸发，得到14克(S)-1-十八烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油白蜡。
(R)-1- 十八烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将7克(S)-1-十八烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油(通过与苯共沸蒸馏将其干燥)和7 ml三乙胺溶解在60 ml THF中。在30分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的4.3 ml POCl3的40 ml THF溶液中。在冷却下，继续额外搅拌15分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，然后用30分钟的时间逐滴加入3 ml乙醇胺和13 ml三乙胺的60 ml THF溶液。在冰浴中，继续搅拌15分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在72 ml乙酸和30 ml水的混合物中，并加热到70℃的温度，保持1小时。用80 mL氯仿三次提取混合物，并用100 ml水洗涤两次。减压除去溶剂，得到10克(R)-1-十八烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺黄色油。
(R)-1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-216) 的合成： 将3克(R)-1-十八烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在100 ml甲醇：10%氢氧化钠水溶液的8:2(v/v)混合物中，并在室温下搅拌反应混合物5小时。然后通过加入甲酸，将反应混合物的pH值调节至大约4。然后加入100 ml水和100 ml氯仿。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，然后减压除去溶剂。用硅胶(55克)色谱纯化得到的残余物(3克)。使用氯仿和己烷的混合物、而后用氯仿和甲醇的混合物和最终氯仿、甲醇和水的混合物从柱中洗脱出760 mg的(R)-1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇的氘化氯仿(CDCl3)中。在600 MHz测定1H NMR和13C NMR光谱。
结果显示了1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR
Figure 250577DEST_PATH_IMAGE023
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.341 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.113 2 H, br s G
3.858 1 H, m F
3.670 2 H, m, CH2 E
3.614 2 H, m, CH2 E
3.562 2 H, m, CH2 E
3.480 2 H, t, J=5.7 Hz, CH2 E
3.422 2 H, m, CH2 E
2.334 2 H, t, J=7.2 Hz, CH2 D
1.692 2 H, tt, J=7.2 Hz, CH2 C
1.604 2 H, tt, J=6.6 Hz, CH2 C
1.545 2 H, tt, J=6.6 Hz, CH2 C
1.259-1.312 30 H, m, 15 x CH2 B
0.881 3 H, t, J=7.2 Hz, CH3 A
按照1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR
Figure 626195DEST_PATH_IMAGE024
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.281 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
177.251 E
78.072 D
71.962
70.306
70.005
66.007
61.995
40.537 C
34.061 B
32.030
29.815
29.764
29.727
29.645
29.459
29.314
26.178
22.778
21.877
14.140 A
1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C28H58NO8P)的计算质量是567。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)得到的质谱显示了具有m/z=566的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)显示了具有m/z=590的分子离子，相当于阳离子化分子离子[M+Na]+。由此，该质谱与1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-216)的化学结构一致。
(R)-1- 十八烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将6克(R)-1-十八烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在50 ml异丙醇和18 ml二氯甲烷的混合物中，并将该混合物加热到35-40℃范围的温度。逐滴加入7.5克碳酸钾的10 ml水溶液，同时保持温度在35-40℃。然后在40℃的温度下，逐滴加入5 ml硫酸二甲酯的10 ml异丙醇溶液。将反应在40℃保持2小时，而后在室温下保持过夜。加入100 ml水，而后用100 ml二氯甲烷提取混合物三次。用100 ml水洗涤有机相，减压除去溶剂，得到6克(R)-1-十八烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸黄色油。
(R)-1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-215) 的合成： 将6克(R)-1-十八烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸溶解在100 ml的8:2(v/v)甲醇：10%氢氧化钠水溶液的混合物中，并在室温下搅拌反应混合物5小时。然后通过加入甲酸，将反应混合物的pH值调节至大约4。然后加入100 ml水和100 ml氯仿。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，然后减压除去溶剂。用硅胶(112克)色谱纯化得到的残余物(5.3克)。使用氯仿和己烷的混合物、而后用氯仿和甲醇的混合物、最后用氯仿、甲醇和水的混合物洗脱产物。从含有产物的馏份中减压除去溶剂，得到2.8克(R)-1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-215)白蜡。
1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇的氘化氯仿(CDCl3)中。在600 MHz测定1H NMR和13C NMR光谱。
结果显示了1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR:
Figure 46812DEST_PATH_IMAGE025
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.343 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.267 2 H, br , s A
3.775 1 H, m B
3.657 2 H, m, CH2 C
3.623 2 H, m, CH2 C
3.505 － 3.562 4 H, m, CH2 C
3.413 2 H, m, CH2 C
3.227 9 H, s, 3 x CH3 D
2.358 2 H, dt, J1=7.2 Hz, J2=3 Hz E
1.699 2 H, tt CH2 F
1.602 2 H, tt CH2 F
1.542 2 H, tt CH2 F
1.259 － 1.312 30 H, m, 15 x CH2 I
0.881 3 H, t, 1 x CH3, J=7.2 Hz J
按照1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR:
Figure 706332DEST_PATH_IMAGE026
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.285 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.580 E
78.216 D
71.936
70.477
69.961
66.613
65.926
59.155
54.424 C
34.117 B
32.026
29.802
29.767
29.750
29.717
29.625
29.452
29.346
26.164
22.774
22.073
14.133 A
1- 十八烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C31H64NO8P)的计算质量是609。
使用电喷雾离子化质谱(ESI+MS)得到的质谱显示了具有m/z=610的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]-。由此，该质谱与1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-215)的化学结构一致。
体外 IL12/23 p40 生成：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-216对IL12/23 p40的体外生成的影响。
如图16所示，20μg/ml的CI-216可以抑制由骨髓所获得细胞生成IL12/23 p40。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-215和CI-216对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图17所示，用10μg/ml(17μM)的CI-215处理，可以导致磷酸酪氨酸水平提高，而用20μg/ml(34μM)的CI-215处理，导致磷酸酪氨酸水平降低。
类似地，如图18所示，用10μg/ml(15μM)的CI-216处理，可以诱导酪氨酸磷酸化作用，而接触20μg/ml(30μM)的CI-216，导致磷酸酪氨酸水平降低。这些变化与用10μg/ml(17μM)和20μg /ml(34μM)阳性对照CI-201分别引起的效果非常相似。
实施例 6
1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-206) 和 1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-205)
按照下文所描述的方法，合成(R)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(R)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(S)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-胆碱磷酸，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
(R)-1- 十六烷基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 按照实施例1所述，制备(R)-1-十六烷基-3-三苯甲基-甘油，首先制备(S)-1-十六烷基-甘油，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇。
(R)-1- 十六烷基 -2-(4'- 戊烯基 )-3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将7.35克(R)-1-十六烷基-3-三苯甲基-甘油和1.87 ml 5-溴-1-戊烯溶解在150 ml苯中。加入3克粉末KOH，并将反应混合物搅拌和回流10小时，同时共沸蒸馏除去所形成的水。蒸馏苯，直到几乎干燥为止。将反应混合物冷却至室温，加入100 ml二乙醚，用水(3 x 50 ml)洗涤该混合物，并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂。将得到的残余物(7.8克)溶解在20 ml己烷中，并冷却至4℃过夜。过滤除去沉淀的副产物，减压除去溶剂，得到7.75克产物黄色油。
(R)-1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成：将7.75克(R)-1-十六烷基-2-(4'-戊烯基)-3-三苯甲基-甘油溶解在280 ml叔丁醇中。加入3.2克碳酸钾的90 ml水溶液。然后加入50 ml 34克高碘酸钠在250 ml水中的溶液和2 ml 470 mg高锰酸钾在10 ml水中的溶液。搅拌该混合物，并在10分钟期间内加入高碘酸盐溶液的剩余部分。根据需要加入额外量的高锰酸盐溶液，以保持粉红色。将混合物加热至40℃，保持4.5小时，冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。以份额方式加入亚硫酸氢钠，混合物变成褐色，而后固体消失，颜色变成黄色。然后搅拌该混合物30分钟，并逐滴加入25 ml 10%硫酸溶液。用二乙醚(3 x 100 mL)提取该溶液。用50 ml水洗涤合并的有机相，用20 ml亚硫酸氢钠溶液(在20 ml水中用5克亚硫酸氢钠制备)洗涤两次，用50 ml水洗涤两次，然后用硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发，得到11克产物黄色蜡。
(S)-1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 - 甘油的合成： 将11克1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-3-三苯甲基-甘油溶解在100 ml甲酸中，并在室温下搅拌该混合物2小时。然后减压除去甲酸。加入100 ml甲苯：己烷的1:1溶液，并在室温下搅拌该混合物。用100 ml甲醇：10% NaOH水溶液的8:2(v/v)混合物提取该溶液两次。用磷酸二氢钠酸化该碱性溶液，直到pH值在4-5范围内为止。加入100 ml二乙醚和100 ml水，分离各相，用100 ml二乙醚洗涤水相两次。然后用100 ml水和100 ml盐水洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到8克产物。用丙酮：己烷的1:9混合物将产物结晶，得到2.4克(S)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油。
(S)-1- 十六烷基 -2-(3- 甲基羧基 ) 丙基 - 甘油的合成： 将2.4克(S)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油溶解在50 ml甲醇中。加入1 ml浓HCl，并在室温下搅拌混合物6小时，而后在4℃保持过夜。减压除去溶剂，加入50 ml水，用50 ml氯仿提取该混合物三次。用50 ml水、50 ml浓碳酸氢钠洗涤有机相，并再次用50 ml水洗涤。用硫酸钠干燥混合物，过滤，减压除去溶剂，得到2.9克产物，在减压下将其用五氧化二磷干燥。
(R)-1- 十六烷基 -2-(3- 甲基羧基 ) 丙基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成：将2.9克(S)-1-十六烷基-2-(3-甲基羧基)丙基-甘油和3 ml三乙胺溶解在30 ml THF中。在15分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的2 ml POCl3的20 ml THF溶液中。在冷却下，继续额外搅拌10分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。用15分钟时间将1.3 ml乙醇胺和6 ml三乙胺的50 ml THF溶液逐滴加入到冰冷却下的反应混合物中。在0℃，继续搅拌10分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂。将残余物溶解在24 ml乙酸和10 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时。用50 mL氯仿三次提取混合物，并用50 ml水洗涤两次。减压除去溶剂，得到3.8克(R)-1-十六烷基-2-(3-甲基羧基)丙基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺棕色油。
(R)-1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-206) 的合成： 将0.8克(R)-1-十六烷基-2-(3-甲基羧基)丙基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在20 ml 8:2(v/v)甲醇：10%氢氧化钠水溶液中。加入10%氢氧化钠溶液，并在室温下搅拌混合物过夜。通过加入磷酸二氢钠将反应混合物的pH值调节至4-5的范围。加入50 ml水和50 ml氯仿。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到684 mg粗品残余物。用硅胶(30克)色谱纯化该残余物。用氯仿：甲醇：水的混合物(体积比60:35:5)洗脱产物。减压除去溶剂，将残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到314 mg(R)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺白蜡，在减压下将其用五氧化二磷干燥。
1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR光谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-206)的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照CI-206的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 554202DEST_PATH_IMAGE027
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.338 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.137 2H, br, s A
3.828-3.900 1H, m B
3.620-3.726 6H, m J
3.371-3.489 4 H, m, 2 x CH2 C
2.302-2.518 2H, m I
1.838-1895 2 H, m F
1.525-1.574 2H, m E
1.258 26 H, m, 13 x CH2 G
0.881 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz H
按照CI-206的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 479433DEST_PATH_IMAGE028
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.256 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.760 D
77.850-77.951 C
71.938
70.268
69.376
66.045
62.068
40.408 B
35.035
32.017
30.886
29.803
29.698
29.631
29.456
26.150
25.231
22.774
22.149
14.160 A
1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C25H52NO8P)的计算质量是525.6560。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)得到的质谱显示了具有m/z=524的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。由此，该质谱与1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-206)的化学结构一致。
(R)-1- 十六烷基 -2-(3- 甲基羧基 ) 丙基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成： 将2.8克(R)-1-十六烷基-2-(3-甲基羧基)丙基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在50 ml异丙醇和18 ml二氯甲烷的混合物中。逐滴加入3.7克碳酸钾的10 ml水溶液，同时将反应混合物保持在35-40℃的温度范围内。在40℃，在5分钟期间内逐滴加入2.52 ml硫酸二甲酯的10 ml异丙醇溶液。然后在40℃保持反应混合物90分钟，冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。加入水，将混合物用50 ml氯仿提取三次。用50 ml水洗涤有机相，减压除去溶剂，得到3克(R)-1-十六烷基-2-(3-甲基羧基)丙基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸棕色油。
(R)-1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-205) 的合成： 将3克(R)-1-十六烷基-2-(3-甲基羧基)丙基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸溶解在50 ml甲醇：10%氢氧化钠水溶液的8:2(v/v)混合物中，并在室温下搅拌混合物过夜。通过加入磷酸二氢钠将反应的pH值调节至4-5的范围。加入50 ml水和50 ml氯仿，并将得到的溶液转入分液漏斗中。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到2.3克粗品残余物。用硅胶(110克)色谱纯化该残余物。用氯仿：甲醇：水(体积比60:35:5)洗脱产物。减压除去溶剂之后，将残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到677mg(R)-1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-205)白蜡，在减压下将其用五氧化二磷干燥。
1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR光谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 641424DEST_PATH_IMAGE029
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.338 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.272 2H, br, s A
3.940-3.995 1H, m B
3.583 － 3.728 6H, m J
3.377-3.482 4 H, m, 2 x CH2 C
3.241 9H, s, 3 x CH3 D
2.304-2.510 2H, m I
1.801-1904 2 H, m F
1.517-1.560 2H, m E
1.256 26 H, m, 13 x CH2 G
0.880 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz H
按照1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 968500DEST_PATH_IMAGE030
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.231 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.790 D
78.082-78.186 C
71.888
70.389
69.298
66.494
65.922
59.115-59.178
54.327 B
31.992
31.280
29.772
29.732
29.673
29.598
29.431
26.115
25.462
22.753
14.148 A
1- 十六烷基 -2-(3- 羧基 ) 丙基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C28H58NO8P)的计算质量是567.7358。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)进行的质谱显示了具有m/z=566的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。由此，该质谱与1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-205和CI-206对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图19所示，用20μg/ml CI-206处理可以导致磷酸酪氨酸水平降低。
类似地，如图20所示，用20μg/ml的CI-205处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，与用20μg/ml阳性对照CI-201处理一样。
CI-205 和 CI-206 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-205和CI-206的毒性。
如图21A和21B所示，在50μg/ml的剂量下或更高的剂量下检测到CI-206的显著毒性，CI-206的LD50位于50和100μg/ml之间。
如图22A和22B所示，在两个实验中，在100μg/ml的剂量下检测到CI-205的显著毒性，只在一个实验中，在20-50μg/ml的剂量下检测到其显著的毒性，CI-205的 LD50位于50和100μg /ml之间。
实施例 7
1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-207) 和 1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺
按照下文所描述的方法，合成(R)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸和(R)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸和(S)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
(S)-1- 辛基 - 甘油的合成： 将21 ml(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、29克粉末氢氧化钾和32 ml 1-溴辛烷在150 ml苯中搅拌并回流6小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约100ml。然后将反应混合物冷却至室温，并加入200 ml水。然后用150 ml二乙醚提取反应混合物三次，用100 ml水洗涤合并的有机相，然后减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在100 ml 90:10:5(v/v)甲醇：水：浓盐酸的混合物中，并将得到的溶液回流2小时，而后冷却至室温，加入100 ml水。用100 ml氯仿提取产物三次，连续地用150 ml水、150 ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用100 ml水洗涤。用无水Na2SO4干燥溶剂，过滤，减压除去，得到34克(S)-1-辛基-甘油。
(R)-1- 辛基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将34克(S)-1-辛基-甘油和61克三苯基氯甲烷加入到500 ml干燥THF和130 ml干燥乙腈的混合物中。加入46 ml干燥三乙胺，并将反应混合物回流17小时。然后将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(1千克)上。将混合物转入分液漏斗中，并用200 ml二乙醚提取三次。连续地用150 ml水、100 ml稀(1.5%)H2SO4(两次)、200 ml水、200 ml浓碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用200 ml水洗涤。然后用无水Na2SO4干燥溶液，减压除去溶剂。将得到的残余物(80克棕色油)溶解在500 ml热己烷中，并在4℃的温度下保持过夜。过滤沉淀，并从滤液中减压除去溶剂。将得到的残余物用硅胶色谱纯化。将得到的纯(R)-1-辛基-3-三苯甲基-甘油用含有10%己烷的氯仿、含有5%己烷的氯仿、而后用含有乙酸乙酯(5%和10%)的氯仿的混合物洗脱。产率是73%。
(R)-1- 辛基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 三苯甲基甘油的合成： 将18.7克(R)-1-辛基-3-三苯甲基-甘油、5.5克6-溴-1-己烯和22克粉末氢氧化钾在100 ml苯中搅拌并回流9小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约30ml。将该反应混合物冷却至室温，加入100 ml水。将得到的混合物转入分液漏斗中，并用二乙醚提取。用200 ml水洗涤合并的有机相两次，减压除去溶剂，得到20.2克(R)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基甘油。
(S)-1- 辛基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油的合成： 将20.2克(R)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基甘油溶解在100 ml甲醇中，加入10 ml浓盐酸(32%)，并将得到的反应混合物回流4小时。将反应混合物冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。加入100ml水，并用100 ml二乙醚提取该溶液两次。用100 ml水、100 ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机相，并再次用100 ml水洗涤。减压除去溶剂。将得到的残余物(20.1克)溶解在250 ml己烷中，并将得到的溶液在4℃的温度下保存96小时，导致大部分三苯基甲醇沉淀。过滤并从滤液中除去溶剂后，用硅胶(91.4克)色谱纯化剩余产物(12克)。用氯仿、而后用含有5%丙酮的氯仿洗脱纯(S)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油(5.7克)。产率是52%。
(R)-1- 辛基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将4.9克(S)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油(将其在干燥器中用P2O5干燥)和2.65 ml三乙胺溶解在40 ml THF中。在30分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的1.4 ml POCl3的20 ml THF溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌30分钟，并在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，然后用15分钟的时间逐滴加入1.1 ml乙醇胺和2.8 ml三乙胺的30 ml THF溶液，同时搅拌。在冰浴中，继续搅拌35分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，用15 ml THF洗涤固体两次，并从滤液中减压除去溶剂。将得到的残余物(5.6克)溶解在36 ml乙酸和15 ml水的混合物中，并加热到70℃的温度，保持1小时。冷却至室温后，将该溶液转入分液漏斗中，用氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取两次，用稀碳酸氢钠溶液洗涤，然后减压除去溶剂，得到4.6克粗品(R)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。用硅胶(59克)色谱纯化该粗品。用氯仿、而后用氯仿和10%-40%甲醇的混合物洗脱出2.6克纯产物。产率是75.9%。
(R)-1- 辛基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将2.1克(R)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在100 ml乙醇(含有6克碳酸钾)溶液中。加入8 ml硫酸二甲酯，并将反应混合物加热至40℃的温度，保持6小时。将反应混合物冷却至室温，并加入100 ml水。然后用100 ml氯仿提取该混合物两次。从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂。用硅胶(59克)色谱纯化该粗品。用氯仿、而后用氯仿与20%-60%甲醇的混合物洗脱出2.0克纯(R)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。产率是86.4%。
(R)-1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-207) 的合成： 将172 mg碳酸氢钠的17 ml水溶液加入到700 mg(R)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸的28 ml水溶液中。然后加入3.0克高碘酸钠的28 ml水溶液。将40 mg高锰酸钾的12 ml水溶液放在滴液漏斗中，并根据保持反应混合物的粉红色的需要，逐滴加入到反应混合物中。在反应期间，加入大约一半的高锰酸盐溶液。在室温下搅拌3小时之后，加入6克磷酸二氢钠，并将反应混合物用50 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取三次。用无水Na2SO4干燥合并的有机相，减压除去溶剂，得到360mg粗品。用硅胶(12.23克)色谱纯化该粗品。用氯仿、而后用氯仿与10%-60%甲醇洗脱出119mg纯(R)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
使用按照上文所描述方法制备的(S)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油，另一个合成方法进行如下：
(S)-1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将77克NaIO4溶解在300 ml水中。向此溶液中加入9克NaHCO3和1.26克KMnO4，并将该悬浮液加热至40℃。在1小时期间内，将21克(S)-1-辛基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油的300 ml叔丁醇溶液逐滴加入到反应混合物中，并将该混合物额外加热3小时。根据保持粉红色的需要加入额外量的KMnO4溶液。将反应混合物冷却至室温，并通过硅藻土过滤，用叔丁醇洗涤硅藻土。逐滴加入100 ml 10%硫酸溶液，并将该溶液转入分液漏斗中，用200 ml己烷提取三次。用20克Na2S2O5的100ml水溶液洗涤有机相，而后用200 ml水洗涤。通过减压除去溶剂而将有机相浓缩，直到体积减少到大约150 ml为止。将15 ml水和2 ml浓HCl加入到剩余溶液中，并将得到的混合物回流6小时，然后冷却至室温，通过减压除去溶剂而再次浓缩。通过加入100 ml水和10 ml 30% NaOH溶液，将残余物的pH值调节至12。过滤沉淀，用20 ml水洗涤四次。用100 ml己烷：乙酸乙酯的1:1(v/v)混合物提取滤液。通过加入10 ml浓HCl将水相酸化至pH1，并用100 ml己烷提取三次。用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到7.4克粗品黄色油。用硅胶(100克)色谱纯化该粗品。用氯仿、而后用氯仿与5%-50%乙酸乙酯洗脱出4.8克纯(S)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油。产率是39.7%。
(S)-1- 辛基 -2-(4- 二苯甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将1.14克(S)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油溶解在20 ml二氯甲烷中。加入748 mg二苯基重氮甲烷(如J. Organic Chem.(1959)24：560-561所述制备)，并在室温下将暗红色反应混合物搅拌大约3小时，直到溶液变成无色为止。减压除去溶剂。用硅胶(43克)色谱纯化残余物(1.9克)。用氯仿、而后用氯仿与5%-20%乙酸乙酯洗脱出1.08克纯(S)-1-辛基-2-(4-二苯甲基羧基)丁基-sn-甘油。产率是61.4%。
(R)-1- 辛基 -2-(4- 二苯甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将1克(S)-1-辛基-2-(4-二苯甲基羧基)丁基-sn-甘油(通过与苯共沸蒸馏进行干燥)和0.885 ml三乙胺溶解在30 ml THF中。在15分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的0.235 ml POCl3的20 ml THF溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌15分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，然后用15分钟的时间逐滴加入0.154 ml乙醇胺和0.885 ml三乙胺的50 ml THF溶液，同时搅拌。在冰浴中，继续搅拌15分钟，而后在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤，并减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在24 ml乙酸和10 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时。用80 mL氯仿提取混合物三次，并用50 ml水洗涤两次。减压除去溶剂，产生1.12克(R)-1-辛基-2-(4-二苯甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺黄色油。
(R)-1- 辛基 -2-(4- 二苯甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成： 将1.12克(R)-1-辛基-2-(4-二苯甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在65 ml甲醇和18 ml二氯甲烷的混合物中，并将该混合物加热至35-40℃范围内的温度。逐滴加入1.3克碳酸钾的10 ml水溶液，同时将反应混合物保持在35-40℃的温度范围内。然后在40℃，逐滴加入7.2 ml硫酸二甲酯的10 ml甲醇溶液。将反应混合物在40℃的温度下保持2小时，而后在室温下过夜。加入50 ml水，然后用50 ml氯仿提取该混合物三次。用50 ml水洗涤有机相，减压除去溶剂，得到1克(R)-1-辛基-2-(4-二苯甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸黄色油。
(R)-1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-207) 的合成：将气态HCl鼓入冰冷却下的1克(R)-1-辛基-2-(4-二苯甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸的40 ml氯仿溶液中90分钟。将得到的溶液在冰浴中额外搅拌2小时。然后通过加入磷酸二氢钠，将反应混合物的pH值调节至大约6。加入50 ml水，并用60 ml氯仿提取该混合物三次。用60 ml水洗涤合并的有机相，减压除去溶剂，得到0.370克(R)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。产率是50.2%。
(R)-1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成：将气态HCl鼓入冰冷却下的5克(R)-1-辛基-2-(4-二苯甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(按照上文所述制备)的40 ml氯仿溶液中90分钟。加入HCl完毕后，在冰冷却浴中额外搅拌反应混合物2小时。通过加入磷酸氢二钠水溶液，将反应混合物的pH值调节至6。用氯仿(3 x 50 ml)提取混合物，用水(100 ml)洗涤合并的有机相。减压除去溶剂，得到3.5克棕色油。用硅胶(68.5克)色谱纯化该油。用氯仿、而后用氯仿：甲醇的8:2(v/v)混合物、而后用氯仿：甲醇：水的700:26:45(v/v)混合物洗脱产物。从含有所需要的产物的馏份中减压除去溶剂之后，将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到150mg(R)-1-辛基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸胆黄色蜡。
1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-207) 的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在300 MHz测定光谱。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR
Figure 941267DEST_PATH_IMAGE031
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.33 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.268 2 H, br s H
3.942 － 3.969 1H, m G
3.394 － 3.673 10 H, m, 5 x CH2 F
3.234 9 H, s, 3 x CH3 E
2.307 2 H, t, J=7.2 Hz D
1.518 － 1.652 6 H, m, 3 x CH2 C
1.270 10 H, m, 5 x CH2 B
0.879 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz A
13C NMR
按照1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 353793DEST_PATH_IMAGE032
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=76.99 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
177.530 E
77.895 D
71.646
69.964
69.762
65.207
65.642
59.013
54.080 C
34.629 B
31.664
29.404
29.273
29.179
29.101
25.856
22.482
22.009
13.890 A
1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C21H44NO8P)的计算质量是469。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)进行的质谱显示了具有m/z=468的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。由此，该质谱与1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在600 MHz测定光谱。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR
Figure 116213DEST_PATH_IMAGE033
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.361 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.136 2 H, br s H
3.883 － 3.901 1H, m G
3.420-－ 3.766 10 H, m, 5 x CH2 F
2.344 2 H, t, J=7.2 Hz E
1.673-1.719 2H, m, CH2 D
1.588-1.632 2H, m, CH2 C
1.527 － 1.561 2H, m, CH2 C
1.272-1.290 10 H, m, 5 x CH2 B
0.882 3 H, t, 1 x CH3, J=6.9 Hz A
13C NMR
按照1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=79.344 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
178.820 E
77.895 D
79.996
73.980
72.367
72.066
68.205
64.103
42.529 C
35.874 B
33.953
32.948
31.699
31.557
31.471
31.383
31.327
28.162
27.320
24.785
23.819
23.691
16.123 A
1- 辛基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C18H38NO8P)的计算质量是427。
使用电喷雾离子化质谱(ESI-MS)进行的质谱显示了具有m/z=426的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。使用正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=428的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，和具有m/z=450的离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+。由此，该MS谱与1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的化学结构一致。
实施例 8
1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-208)
按照下文所描述的方法，由(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油合成(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。使用相同的方法，由(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油合成(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸。
(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油和(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油的合成描述在实施例1中。
(R)-1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-208) 的合成： 用25分钟的时间，将8.60克(19.97 mmol)(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油(如实施例1所述制备)和2.63克(26 mmol)三乙胺的500 ml THF溶液逐滴加入到冰冷却下的3.90克(26 mmol)POCl3的100 ml THF溶液中。在冰浴中，继续额外搅拌10分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。在强烈搅拌下，将1.6 ml乙醇胺和6.4 ml三乙胺的500 ml THF溶液逐滴加入到冰冷却下的反应混合物中。在冰浴中，继续额外搅拌10分钟，而后继续在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，并减压除去溶剂。将残余物溶解在24 ml乙酸和100 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时。将反应混合物冷却至室温，并用250 ml二氯甲烷提取两次。然后减压除去溶剂。将残余物溶解在500 ml异丙醇和180 ml二氯甲烷的混合物中。加入50克碳酸钾的100 ml水溶液，以便得到高于11的pH值。将溶液在35-40℃的温度范围内保持，以便在此期间用45分钟时间逐滴加入11.15克甲苯磺酸甲酯的100ml异丙醇溶液。额外90分钟之后，用盐酸酸化混合物。加入100 ml水和550 ml二氯甲烷，分离各相。用100 ml水洗涤有机相，减压除去溶剂。将粗品用硅胶柱色谱纯化。用氯仿、而后用氯仿、甲醇和水的混合物洗脱出11.0克(18.46 mmol)(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸。产率是92.45%。
1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-208) 的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在300 MHz测定光谱。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.27 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.303 2 H, br s I
3.821 － 3.840 1H, m H
3.648 3H, s, 1 x CH3 G
3.383 － 3.606 10 H, m, 5 x CH2 F
3.340 9 H, s, 3 x CH3 E
2.334 2 H, t, J=7.5 Hz D
1.530 － 1.657 6 H, m, 3 x CH2 C
1.253 26 H, m, 13 x CH2 B
0.879 3 H, t, 1 x CH3, J=6.3 Hz A
13C NMR
按照1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 777505DEST_PATH_IMAGE036
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.03 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
174.23 F
77.97 E
71.74
70.65
69.84
66.16
65.40
59.44
54.35 D
51.51 C
33.66 B
31.93
29.74
29.62
29.47
29.38
26.14
22.70
21.68
14.13 A
1- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-208) 的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C30H62NO8P)的计算质量是595.79。
使用快速原子轰击(FAB+)进行的质谱显示了具有m/z=596.324的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+。该MS谱与1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-208对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图23所示，用20μg/ml的CI-208处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，其比用20μg/ml的CI-201对照物处理所引起的降低更强。
CI-208 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-208的毒性。
如图24A和24B所示，在50μg/ml的剂量下或更高的剂量下检测到CI-208的毒性，在20μg/ml的剂量下，只在两个实验的一个实验中检测到毒性。CI-208的LD50看来似乎位于50和100μg/ml之间。
实施例 9
1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-213) 和 1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-214)
按照下文所描述的方法，合成(R)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸和(R)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，使用(R)-(+)-3-苄氧基-丙二醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸和(S)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸，但用(S)-(-)-3-苄氧基-丙二醇作为起始原料。
1- 三苯甲基 -3- 苄基 -sn- 甘油的合成： 将5克(27.44 mmol)(R)-(+)-3-苄氧基-丙二醇和10克(35.87 mmol)三苯基氯甲烷加入到100 ml干燥THF和25 ml干燥乙腈中。加入8 ml干燥三乙胺，并将反应混合物回流17小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(100克)上，转入分液漏斗中，并用100 ml二乙醚提取三次。连续地用100 ml水、100 ml稀(1.5%)硫酸(两次)、100 ml水、100 ml浓碳酸氢钠溶液洗涤，并再次用100 ml水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，减压除去溶剂，得到11克1-三苯甲基-3-苄基-sn-甘油黄色油。产率是94%。
1- 三苯甲基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 苄基 -sn- 甘油的合成： 将11克1-三苯甲基-3-苄基-sn-甘油和5.7克5-己烯基-1-甲烷磺酸酯溶解在110 ml苯中。加入6克粉末KOH，并将反应混合物搅拌和回流12小时，同时通过共沸蒸馏除去反应中形成的水。将反应混合物冷却至室温，用100 ml水洗涤三次。用无水Na2SO4干燥有机相，减压除去溶剂。将残余物溶解在150 ml热己烷中，冷却，并在4℃保持过夜，在此期间，出现副产物的沉淀。过滤，从滤液中减压除去溶剂，得到13克1-三苯甲基-2-(5'-己烯基)-3-苄基-sn-甘油棕色油。
2-(5'- 己烯基 )-3- 苄基 -sn- 甘油的合成：将13克1-三苯甲基-2-(5'-己烯基)-3-苄基-sn-甘油溶解在100 ml甲醇中。加入4 ml浓盐酸(37%)，并将该溶液回流4小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(100克)上，转入分液漏斗中，并用100 ml二乙醚提取三次。用100 ml水、100 ml饱和碳酸氢钠溶液连续地洗涤有机相，并再次用100 ml水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，减压除去溶剂，得到14.5克粗品。用硅胶(150克)柱色谱纯化该粗品。用二氯甲烷、而后用二氯甲烷和乙酸乙酯的混合物洗脱出3.17克2-(5'-己烯基)-3-苄基-sn-甘油。产率是46.8%。
1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 苄基 -sn- 甘油的合成： 将3克2-(5'-己烯基)-3-苄基-sn-甘油溶解在100 ml苯中。加入3克KOH，并通过共沸蒸馏将反应混合物干燥2小时。在3小时期间内，向该混合物中逐滴加入5.35克叔丁基-16-溴十六烷酸酯的100 ml苯溶液。加入完毕后，将反应混合物额外回流12小时。将溶剂的体积逐渐地减少到大约20 ml。将反应混合物冷却至室温，加入100 ml水和100 ml叔丁醇。通过加入浓HCl，将反应混合物的pH值调节至大约1。将混合物在室温下搅拌2小时，用100 ml二乙醚提取三次。用100 ml水分次洗涤合并的有机相，直到pH值是中性为止。用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到6克棕色油。将该油溶解在100 ml己烷：乙酸乙酯的1:1(v/v)混合物中。用100 ml甲醇：10% NaOH水溶液的8:2(v/v)混合物提取该溶液两次。通过加入NaH2PO4，将该碱性溶液酸化至pH4-5。加入100 ml二乙醚和100 ml水，然后分离各相。用100 ml二乙醚提取水相两次，并与有机相合并。用100 ml水和100 ml盐水洗涤有机相。用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到5.3克1-(15'-羧基)十五烷基-2-(5'-己烯基)-3-苄基-sn-甘油黄色油。产率是90%。
1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -3- 苄基 -sn- 甘油的合成： 将5.3克1-(15'-羧基)十五烷基-2-(5'-己烯基)-3-苄基-sn-甘油溶解在130 ml叔丁醇中，并加入1.2克碳酸氢钠的40 ml水溶液。然后加入54 mg KMnO4的1 ml水溶液。将20克NaIO4溶解在115 ml水中，然后在10分钟期间内将此溶液加入到反应混合物中。根据保持反应的粉红色的需要，加入额外数量的216 mg KMnO4的4 ml水溶液。在室温下继续搅拌6小时，而后将反应混合物在4℃保持过夜。加入亚硫酸氢钠，直到反应混合物的颜色变成浅黄色为止。搅拌混合物30分钟，逐滴加入25 ml 10%硫酸溶液，并用100 ml二乙醚提取该混合物三次。连续地用100 ml水、100 ml含有25克亚硫酸氢钠（在100 ml水中）的溶液(两次)和100 ml水(两次)洗涤合并的有机相。用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到5.3克粗品1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-3-苄基-sn-甘油黄色蜡。
(S)-1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成：将5.0克1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-3-苄基-sn-甘油溶解在50 ml甲醇中，并加入10 ml的85%甲酸。加入5克钯黑，并在氮气氛围中将反应混合物加热到60℃，保持24小时。将反应混合物冷却至室温，并通过硅藻土过滤。用甲醇、而后用水洗涤硅藻土。将洗涤液与滤液合并，并从滤液中减压除去溶剂。将残余物（5克）溶解在10 ml 10%氢氧化钠水溶液和40 ml甲醇的混合物中，并在室温下将得到的混合物搅拌2小时。用50 ml己烷：甲苯的1:1(v/v)混合物洗涤反应混合物。通过加入磷酸二氢钠，将反应混合物的pH值调节至5，然后用50 ml氯仿提取混合物三次。用50 ml盐水洗涤有机相，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂。用9:1(v/v)己烷：丙酮混合物将粗品(4克)重结晶，得到3克(S)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油无色固体。产率是72%。
(S)-1-(15'- 甲基羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成：将3克(S)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油溶解在50 ml甲醇中。加入1 ml浓盐酸(37%)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。将反应混合物减压浓缩至大约10 ml，加入50 ml水，然后用50 ml氯仿提取混合物三次。连续地用50 ml水、50 ml浓碳酸氢钠溶液和50 ml水洗涤合并的有机相。用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到3克(S)-1-(15'-甲基羧基)十五烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油黄色油。
(R)-1-(15'- 甲基羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将2.8克(S)-1-(15'-甲基羧基)十五烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油和2.5 ml干燥三乙胺溶解在30 ml THF中。在20分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的POCl3(1.65 ml)的20 ml THF溶液中，同时搅拌。在冰浴中，继续额外搅拌10分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。用60分钟时间将1.1 ml乙醇胺和6 ml三乙胺的50 ml THF溶液逐滴加入到冰冷却下的反应混合物中，同时搅拌。在冰浴中，继续额外搅拌10分钟，而后继续在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在24 ml乙酸和100 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时。将反应混合物冷却至室温，用50 ml氯仿提取三次，用50 ml水洗涤有机相两次。减压除去溶剂，得到4克粗品(R)-1-(15'-甲基羧基)十五烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺棕色油。
(R)-1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-214) 的合成：将1.5克(R)-1-(15'-甲基羧基)十五烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在50 ml甲醇：10%氢氧化钠水溶液的8:2(v/v)混合物中，并将得到的混合物在室温下搅拌5小时。通过加入磷酸二氢钠和甲酸，将反应的pH值调节至4。加入100 ml水和100 ml氯仿。提取之后，分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到500 mg粗品(R)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-磷酸乙醇胺。用硅胶(15克)色谱纯化粗品。用100 ml氯仿、而后用100 ml氯仿：甲醇混合物(9:1和8:2体积比)、而后用200 ml氯仿：甲醇：水混合物(70:26:4和60:35:5体积比)进行洗脱。从含有所需要的产物的馏份中减压除去溶剂，将残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到88 mg纯(R)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-214)黄色蜡。
1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在300 MHz测定光谱。
结果显示了1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
1H NMR
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.44 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.37 2 H, br , s F
3.93 － 3.98 1 H, m E
3.42 － 3.85 10 H, m, 5 x CH2 D
2.27 － 2.36 4 H, m, 2 x CH2 C
1.54-1.70 8 H, m, 4 x CH2 B
1.27 22 H, m, 11 x CH2 A
13C NMR
按照1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 379704DEST_PATH_IMAGE038
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.614 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
177.250 C
177.125 C
78.174 B
72.097
70.388
70.199
65.850
61.841
40.788 A
34.424
34.228
29.851
29.698
29.527
29.392
26.289
25.198
21.945
1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C26H52NO10P)的计算质量是569.6655。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=568的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。
另外，通过正离子电喷雾离子化质谱(ES+-MS)观察到具有m/z=570的分子阳离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+。
由此，该MS谱与1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的化学结构一致。
(R)-1-(15'- 甲基羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成： 将1.2克(R)-1-(15'-甲基羧基)十五烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在60 ml甲醇和20 ml二氯甲烷的混合物中。加入2克碳酸钾的10 ml水溶液，将该溶液加热，并保持在35-40℃的温度范围内。逐滴加入1.25 ml硫酸二甲酯的10ml甲醇溶液。加入完毕后，将反应混合物在40℃额外搅拌90分钟，然后冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。加入100 ml水，并用100 ml氯仿提取三次。用100 ml水洗涤合并的有机相，减压除去溶剂，得到900 mg(R)-1-(15'-甲基羧基)十五烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸棕色油。
(R)-1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-213) 的合成：将1.88克(R)-1-(15'-甲基羧基)十五烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸溶解在50 ml甲醇：10%氢氧化钠水溶液的8:2(v/v)混合物中，并将得到的混合物在室温下搅拌5小时。通过加入磷酸二氢钠和甲酸，将反应的pH值调节至4。加入100 ml水和100 ml氯仿。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到860 mg粗品(R)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-胆碱磷酸。用硅胶(20克)色谱纯化粗品。用100 ml氯仿、而后用100 ml氯仿：甲醇混合物(9:1和8:2体积比)、而后用200 ml氯仿：甲醇：水混合物(70:26:4和60:35:5体积比)进行洗脱。从含有所需要的产物的馏份中减压除去溶剂，将残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到105 mg纯(R)-1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-213)黄色蜡。
1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇的氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定光谱。
结果显示了1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
1H NMR
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.38 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.27 2 H, br , s G
3.94-4.00 1 H, m F
3.36 － 3.89 10 H, m, 5 x CH2 E
3.23 9 H, s, 3 x CH3 D
2.26 － 2.37 4 H, m, 2 x CH2 C
1.52-1.72 8 H, m, 4 x CH2 B
1.26 22 H, m, 11 x CH2 A
13C NMR
按照1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 330660DEST_PATH_IMAGE040
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.35 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.90 C
176.72 C
78.21 B
71.92
70.37
70.01
66.58
65.87
59.14
54.34 A
34.31
34.07
29.66
29.56
29.52
29.36
29.24
26.12
25.06
21.98
1-(15'- 羧基 ) 十五烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C29H58NO10P)的计算质量是611.7453。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=610的分子离子，相当于离子[M-H]-。
另外，正离子电喷雾离子化质谱(ES+-MI)显示了具有m/z=612的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，伴有具有m/z=634的分子阳离子，相当于阳离子化离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
CI-213 和 CI-214 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-213和CI-214的毒性。
如图25A和25B所示，在测试剂量范围内(即，至多150μg/ml，245.2μM)，CI-213没有清楚地显示出显著毒性。在100μg/ml(163.5μM)的剂量下，只在一个实验中检测到细胞数目统计上显著的降低。
类似地，如图26A和26B所示，在测试剂量范围内(即，至多150μg/ml，263.3μM)，CI-214没有清楚地显示出显著毒性。在100μg/ml(175.5μM)的剂量下，只在一个实验中检测到细胞数目统计上显著的降低。
这些结果表明，CI-213和CI-214两者的LD50高于150μg/ml。。
实施例 10
1- 十六烷基 -2-(2- 羧基 ) 乙基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-217)
按照下文所描述方法，合成(R)-1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
(S)-1- 十六烷基 -sn- 甘油的合成： 将40克(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、80克粉末氢氧化钾和100克十六烷基溴在350 ml苯中搅拌并回流7小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约50 ml。将反应混合物冷却至室温，加入300 ml冰冷却的水，用150 ml二氯甲烷提取混合物4次。用水洗涤合并的有机相，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在500 ml甲醇：水：浓盐酸的90:10:5(v/v)混合物中，并将得到的溶液回流2小时。冷却至室温后，加入200 ml水。用200 ml氯仿提取产物三次，连续地用200 ml水、200 ml饱和碳酸钠水溶液洗涤，并再次用200 ml水洗涤。减压除去溶剂，在4℃用450 ml石油醚将产物结晶，得到69.93克纯(S)-1-十六烷基-sn-甘油。产率是73%。
1- 十六烷基 -3- 三苯甲基 - 甘油的合成： 将18.47克(S)-1-十六烷基-sn-甘油和19克三苯基氯甲烷溶解在250 ml干燥THF和58 ml干燥乙腈的混合物中。加入17 ml三乙胺，并将反应混合物回流17小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(20克)和三乙胺(5 ml)上，转入分液漏斗中，并用二乙醚提取。连续地用200 ml水、200 ml稀(1.5%)硫酸(两次)、200 ml水、200 ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用200 ml水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，减压除去溶剂，得到41.79克粗品残余物。将该残余物溶解在300 ml乙酸乙酯中，并冷却（在-20℃）过夜。在-10℃将混合物离心(每分钟转数3,500转)，然后倾倒掉母液。将得到的固体熔融，并溶解在己烷中，并冷冻(5±3℃)过夜。过滤沉淀，得到18.97克纯(R)-1-十六烷基-3-三苯甲基-sn-甘油类白色固体。
3- 己烯基 -1- 甲磺酸酯的合成： 在冰浴中，将20 ml顺式-3-已烯-1-醇和40 ml干燥三乙胺的混合物在100 ml干燥二氯甲烷中冷却。用75分钟的时间逐滴加入20 ml甲磺酰氯的50 ml二氯甲烷溶液，然后在4℃保持该混合物2小时。加入冰(50克)，在室温下搅拌该混合物30分钟，而后用100 ml氯仿提取两次。用50 ml水、50 ml 10%硫酸水溶液、50 ml水、50 ml 10%碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，而后用50 ml水洗涤两次。用无水Na2SO4干燥溶剂，并减压除去。用硅胶(85.37克)色谱纯化得到的残余物(34.90克)。用氯仿和己烷的1:1(v/v)混合物洗脱，得到18.83克3-己烯基-1-甲磺酸酯。
(S)-1- 十六烷基 -2-(3'- 己烯基 )- 甘油的合成： 将10.60克(R)-1-十六烷基-3-三苯甲基-sn-甘油溶解在50 ml苯和50 ml石油醚的混合物中。加入16.65克粉末KOH，并在氮气氛围中将反应混合物加热至回流。用10小时的时间将10 ml 3-己烯基-1-甲磺酸酯的50 ml苯和200 ml石油醚溶液逐滴加入到该回流反应混合物中，同时共沸蒸馏除去在反应中形成的水。加入完毕后，继续搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并加入200 ml水。用200 ml二乙醚提取混合物三次，用200 ml水洗涤合并的有机相三次，减压除去溶剂，得到11.88克粗品(R)-1-十六烷基-2-(3-己烯基)-3-三苯甲基-sn-甘油。将1-十六烷基-2-(3-己烯基)-3-三苯甲基-甘油溶解在100 ml甲醇中，加入4 ml浓HCl，并将得到的溶液回流4小时。加入100ml水，并用100 ml二乙醚提取该混合物四次。用100 ml水洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在己烷中，并在4℃保存过夜。过滤沉淀，减压除去溶剂，得到10.08克粗品。用硅胶(95.91克)色谱纯化该产物。用己烷和氯仿的1:1(v/v)混合物、而后用氯仿、而后用氯仿与2%丙酮洗脱出3.71克的产物(S)-1-十六烷基-2-(3'-己烯基)-sn-甘油。
(R)-1- 十六烷基 -2-(3'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将2.08克(S)-1-十六烷基-2-(3'-己烯基)-sn-甘油(在干燥器中用P2O5干燥)和1.2 ml三乙胺溶解在60 ml THF中。在55分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的0.84 ml POCl3和0.7 ml三乙胺的40 ml THF溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌10分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，然后用25分钟的时间逐滴加入0.55 ml乙醇胺和2.0 ml三乙胺的15 ml THF溶液。在冰浴中，继续搅拌30分钟，而后在室温下搅拌过夜。额外加入0.18 ml乙醇胺，并在室温下搅拌反应混合物2小时。过滤反应混合物，从滤液中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在48 ml乙酸和20 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时，冷却至室温。用100 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取溶液三次，用稀碳酸氢钠溶液和100 ml水洗涤，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到2.57克(R)-1-十六烷基-2-(3'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
(R)-1- 十六烷基 -2-(3'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将6.8克碳酸钾加入到2.54克(R)-1-十六烷基-2-(3'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺的100 ml甲醇和100 ml二氯甲烷溶液中。然后逐滴加入3 ml硫酸二甲酯，并在室温下搅拌反应混合物7小时。加入额外1 ml的硫酸二甲酯，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将26.4克磷酸二氢钠加入到反应混合物中，然后加入100 ml水，然后用100 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取该混合物三次。用100 ml水洗涤合并的有机相，减压除去溶剂，得到3.44克粗品(R)-1-十六烷基-2-(3'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
(R)-1- 十六烷基 -2-(2- 羧基 ) 乙基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-217) 的合成： 将3.4克(R)-1-十六烷基-2-(3'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸的200 ml水溶液加热至35℃，并加入4.33克碳酸氢钠。然后将13.5克高碘酸钠的90 ml水溶液放入滴液漏斗中，并逐滴加入。将180 mg高锰酸钾的10 ml水溶液放在第二个滴液漏斗中，根据保持反应混合物的粉红色的需要来逐滴加入。总共加入大约4 ml高锰酸盐溶液。在35-40℃，将反应混合物搅拌5小时，而后在室温下搅拌过夜。通过加入磷酸二氢钠，而后加入磷酸(80%)，将反应的pH值调节至大约3。用100 ml氯仿提取反应混合物三次，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，并用50 ml亚硫酸氢钠溶液洗涤两次、而后用50 ml水洗涤。用无水Na2SO4干燥有机溶液，减压除去溶剂，得到2.78克粗品。用硅胶(30.89克)色谱纯化粗品。用己烷与20%-50%氯仿的混合物、而后用氯仿、而后用氯仿与10%-80%甲醇的混合物洗脱出1.98克纯(R)-1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
1- 十六烷基 -2-(2- 羧基 ) 乙基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇的氘化氯仿(CDCl3)中。在600 MHz测定光谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
1H NMR
Figure 137946DEST_PATH_IMAGE041
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.27 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.052 2 H, br , s H
3.72 1 H, m G
3.66 2 H, m, CH2 F
3.469 2 H, m, CH2 F
3.400 2 H, m, CH2 F
3.299 2 H, m, CH2 F
3.227 2 H, m, CH2 F
3.012 9 H, s, 3 x CH3 E
2.351 2 H, m, CH2 D
1.347 2 H, m, CH2 C
1.059 26 H, m, 13 x CH2 B
0.675 3 H, t, J=7.2 Hz, CH3 A
13C NMR
按照1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 294121DEST_PATH_IMAGE042
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.817 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
173.126 E
78.990 D
72.220 C
70.695 C
66.932 C
66.584 C
66.271 C
59.509 C
54.487 B
35.945
35.651
32.291
30.040
29.880
29.707
26.432
23.013
14.211 A
1- 十六烷基 -2-(2- 羧基 ) 乙基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸(C27H56NO8P)的计算质量是554。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=553的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。
另外，通过正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=555的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，伴有具有m/z=577的分子离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-217对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图17所示，用20μg/ml(36μM)的CI-217处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，而用10μg/ml(18μM)的CI-217处理，具有很小的影响。这些结果与用20μg/ml(34μM)和10μg/ml( 17μM)阳性对照CI-201分别处理的效果非常相似。
实施例 11
1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-219) 和 1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-220)
按照下文所描述方法，合成(R)-1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸和(R1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸和(S)-1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
(S)-1- 二十烷基 -sn- 甘油的合成： 将8.6 ml(76.08 mmol)(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、15克粉末氢氧化钾和27.5克(76.08 mmol)1-溴二十烷在150 ml苯中搅拌并回流6小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约70 ml。然后将反应混合物冷却至室温，并加入150 ml水。然后用150 ml二乙醚提取反应混合物三次，用100 ml水洗涤合并的有机相，然后减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在105 ml甲醇：水：浓盐酸的90:10:5(v/v)混合物中，并将得到的溶液回流，直到溶液清澈为止。然后将溶液冷却至室温，并加入100 ml水。用150 ml氯仿提取产物，连续地用150 ml水、150 ml饱和碳酸钠水溶液洗涤，并再次用150 ml水洗涤。然后减压除去溶剂，用200 ml己烷将产物结晶，得到21.0克纯1-二十烷基-sn-甘油，在减压下将其在干燥器中用氧化磷干燥。产率是81.5%。
(R)-1- 二十烷基 -3- 三苯甲基 -sn- 甘油的合成： 将20克1-二十烷基-sn-甘油和18克三苯基氯甲烷加入到400 ml干燥四氢呋喃(THF)和100 ml干燥乙腈的混合物中。加入15 ml干燥三乙胺，并将反应混合物回流17小时。然后将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(500克)上，转入分液漏斗中，并用200 ml二乙醚提取三次。连续地用150 ml水、150 ml稀(1.5%)H2SO4(两次)、150 ml水、150 ml浓碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用150 ml水洗涤。然后用无水硫酸钠干燥溶液，减压除去溶剂。将得到的残余物(棕色油)溶解在300 ml乙酸乙酯中，并冷却（-20℃）过夜。在-10℃将混合物离心(每分钟转数3,500转)，然后倾倒掉母液。将得到的固体溶解在己烷中，并冷冻(5±3℃)过夜。过滤沉淀，得到26.0克纯(R)-1-二十烷基-3-三苯甲基-sn-甘油类白色固体。产率是79%。
(R)-1- 二十烷基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 三苯甲基 -sn- 甘油的合成： 将26克(R)-1-二十烷基-3-三苯甲基-sn-甘油和10克5-己烯基-1-甲烷磺酸酯溶解在150 ml苯中。加入12克粉末KOH，并将反应混合物搅拌和回流6小时，同时通过共沸蒸馏除去反应中形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约75 ml。将反应混合物冷却至室温，并加入200 ml水。用150 ml二乙醚提取混合物三次，用150 ml水洗涤合并的有机相三次，并减压除去溶剂。用硅胶柱(200克)纯化得到的残余物(28克棕色油)。用氯仿洗脱出28克产物浅黄色油。产率是87.5%。
(S)-1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将70克NaIO4溶解在250 ml水中。向此溶液中加入6克NaHCO3和1.2克KMnO4，并将该悬浮液加热至40℃。在90分钟期间逐滴加入25克(R)-1-二十烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-sn-甘油的250 ml叔丁醇溶液，并额外加热该混合物6小时。根据保持粉红色的需要加入额外量的KMnO4溶液。将反应混合物冷却至室温，并通过硅藻土过滤，然后用50 ml叔丁醇洗涤硅藻土。逐滴加入100 ml 10%硫酸溶液，并将该溶液转入分液漏斗中，用200 ml己烷提取三次。用20克Na2S2O5的100ml水溶液洗涤有机相，而后用100 ml水洗涤。通过减压除去大约400 ml溶剂，将有机相浓缩。向剩余溶液中加入15 ml水和2 ml浓HCl，并将得到的混合物回流6小时。然后将该混合物冷却至室温，并通过减压除去溶剂而再次浓缩。通过加入100 ml水和10 ml 30% NaOH溶液，将残余物的pH值调节至12。过滤沉淀，用20 ml水洗涤四次。用100 ml己烷：乙酸乙酯的1:1(v/v)混合物提取滤液。通过加入10 ml浓HCl将水相酸化至pH1，然后用100 ml己烷提取三次。用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，而后在5±3℃用1:9(v/v)丙酮：己烷混合物将粗品过夜重结晶，得到9.0克纯(S)-1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油。产率是53.1%。
(S)-1- 二十烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将8.9克1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油溶解在50 ml甲醇中。加入1 ml浓HCl(32%)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。减压除去溶剂，并将50 ml水加入到所得到的残余物中。将混合物用50 ml氯仿提取三次。用50 ml水、50 ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤合并的有机相，并再次用50 ml水洗涤。然后用硫酸钠干燥溶液，过滤，减压蒸发，得到8.9克(S)-1-二十烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油白蜡。
(R)-1- 二十烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将8.9克1-二十烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油(通过与苯共沸蒸馏进行干燥)和8 ml三乙胺溶解在70 ml THF中。在30分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的5.36 ml POCl3的40 ml THF溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌30分钟，并在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，然后用30分钟的时间逐滴加入3.5 ml乙醇胺和16 ml三乙胺的50 ml THF溶液，同时搅拌。在冰浴中，继续搅拌30分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂。将得到的残余物(14克黄色油)溶解在乙酸(72 ml)和水(30 ml)的混合物中，加热到70℃，保持1小时。用150 mL氯仿将所得到的混合物提取三次，并用150 ml水洗涤两次。减压除去溶剂，得到13克(R)-1-二十烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺黄色油。
(R)-1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (CI-220) 的合成： 将4克(R)-1-二十烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在100 ml甲醇：10%氢氧化钠水溶液的8:2(v/v)混合物中，并在室温下搅拌反应混合物过夜。然后通过加入甲酸，将反应混合物的pH值调节至大约4。然后加入150 ml水和150 ml氯仿。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，然后减压除去溶剂。用硅胶(70克)色谱纯化得到的残余物。使用氯仿和己烷的混合物、而后用氯仿和甲醇的混合物和最终用氯仿、甲醇和水的混合物从柱中洗脱出835 mg的(R)-1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-220)。产率是21%。
1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在600 MHz测定光谱。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 91175DEST_PATH_IMAGE043
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.357 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.107 2 H, br , s H
3.858 － 3.876 1 H, m G
3.398 － 3.745 10 H, m, 5 x CH2 F
2.346 2 H, t, J=7.2 Hz E
1.666 － 1.737 2 H, m D
1.599 － 1.631 2 H, m C
1.535 － 1.569 2 H, m C
1.260 34 H, m, 17 x CH2 B
0.882 3 H, t, 1 x CH3, J=6.9 Hz A
按照1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 637694DEST_PATH_IMAGE044
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.318 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
177.352 E
78.023 － 78.075 D
71.977
70.293
70.019
65.968
61.913
40.525 C
34.108 B
32.045
29.825
29.778
29.730
29.659
29.476
29.320
26.186
22.794
21.884
14.154 A
1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C30H62NO8P)的计算质量是595.42。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=594的分子离子，相当于去质子化的离子[M-H]-。
使用正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=596的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，伴有具有m/z=618的分子离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的化学结构一致。
(R)-1- 二十烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将9克(R)-1-二十烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在40 ml异丙醇和18 ml二氯甲烷的混合物中，并将该混合物加热至35-40℃。逐滴加入10.3克碳酸钾的20 ml水溶液，同时保持反应混合物在35-40℃。然后在40℃，逐滴加入7.2 ml硫酸二甲酯的10 ml异丙醇(10ml)溶液。在40℃保持反应混合物2小时，而后在室温下过夜。加入150 ml水，并用150 ml氯仿提取该混合物三次。用150 ml水洗涤有机相，减压除去溶剂，得到8克(R)-1-二十烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸蜡。
(R)-1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (CI-219) 的合成： 将8克(R)-1-二十烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸溶解在100 ml甲醇：10%氢氧化钠水溶液的8:2(v/v)混合物中，并在室温下搅拌反应混合物5小时。然后通过加入磷酸二氢钠、而后加入甲酸，将反应混合物的pH值调节至大约。然后加入100 ml水和150 ml氯仿。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，然后减压除去溶剂。用硅胶(150克)色谱纯化得到的残余物(7.5克)。使用氯仿、而后用氯仿和甲醇的混合物、最后用氯仿、甲醇和水的混合物洗脱产物。从含有产物的馏份中减压除去溶剂，得到4克(R)-1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸白色固体。产率是51.1%。
1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在600 MHz测定光谱。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 811187DEST_PATH_IMAGE045
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.246 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.264 2 H, br , s I
3.834 － 3.872 1 H, m H
3.404 － 3.679 10 H, m, 5 x CH2 G
3.224 9 H, s, 3 x CH3 F
2.188 2 H, dt, J1=2.4 Hz, J2=7.2 Hz E
1.503 － 1.561 2 H, m D
1.431 － 1.465 2 H, m C
1.359 － 1.394 2 H, m C
1.095 － 1.136 34 H, m, 17 x CH2 B
0.716 3 H, t, 1 x CH3, J=7.2 Hz A
按照1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 946502DEST_PATH_IMAGE046
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.386 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.589 E
78.209 － 78.263 D
71.974
70.467
70.034
66.615
65.856 － 65.892
59.151 － 59.183
54.382 C
34.053 B
32.062
29.835
29.787
29.736
29.662
29.490
29.387
26.190
22.810
22.023
14.156 A
1- 二十烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-二十烷-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C33H68NO8P)的计算质量是637.47。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=637的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。
另外，使用正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=638的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，伴有具有m/z=660的分子离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定CI-219和CI-220对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图28所示，用20μg/ml的CI- 219处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，而用10μg/ml的CI- 219处理，具有很小的影响(如果有的话)。20μg/ml CI-219的影响与20μg/ml CI-201的影响相似。
类似地，如图29所示，用20μg/ml的CI- 220处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，而用10μg/ml的CI- 220处理，具有很小的影响(如果有的话)。20μg/ml CI-220的影响与20μg/ml CI-201的影响相似。
实施例 12
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸酯 (CI-201-PA)
按照下文所描述方法，由(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油合成(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸酯。使用相同的方法，由(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油合成(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯。
(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油和(R)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油的合成描述在实施例1中。
(R)-1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸酯的合成： 用20分钟的时间，将按照实施例1所描述方法制备的(S)-1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油(1.44克)和三乙胺(1.5 ml)（在THF(15 ml)中）溶液逐滴加入到冰冷却下的POCl3(1 ml)的THF(15 ml)溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌30分钟，并在室温下额外搅拌1小时。减压蒸发溶剂。将得到的残余物溶解在冰冷却下的饱和碳酸氢钠溶液(100 ml)中，并在冰浴中搅拌反应混合物45分钟。通过加入HCl(32%)，将溶液的pH值调节至4-5的范围。用氯仿(3 x 50 ml)提取混合物，用水(50 ml)洗涤有机相，减压除去溶剂。将混合物溶解在氯仿中，并用硅胶(30克)纯化。使用氯仿、而后用氯仿与10%-50%甲醇的混合物洗脱出470 mg纯1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯。
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸酯 (CI-201-PA) 的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。然后在300 MHz测定1H NMR和13C NMR谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 914458DEST_PATH_IMAGE047
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.29 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
3.900 2 H, m
3.658 － 3.680 3 H, m, CH2 and CH
3.413 4 H, m, 2 x CH2
2.336 2 H, m D
1.539-1.609 6 H, m, 3 x CH2 C
1.255 26 H, m, 13 x CH2 B
0.880 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz A
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 10590DEST_PATH_IMAGE048
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.113 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
178.54 D
78.057 B
71.791 C
70.624 C
69.837 C
65.271 C
33.931
33.766
31.970
30.952
29.775
29.649
29.413
29.048
26.156
22.729
21.571
14.138 A
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸酯的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯(C24H49O8P)的计算质量是496.3165。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=495的分子离子，相当于去质子化的离子[M-H]-。由此，该MS谱与1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯(CI-201-PA)的化学结构一致。
CI-201-PA 的毒性：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，评价CI-201-PA的毒性。
如图30 A和30B所示，在20μg/ml或更高的剂量下检测了CI-201-PA的毒性，LD50大约为50μg/ml。在10μg/ml的浓度下，只在两个实验的一个实验中观察到毒性。
实施例 13
1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (1-S-CI-201) 和 1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (1-S-CI-202)
按照下文所描述的方法，合成1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸和1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，使用(R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇对甲苯磺酸酯作为起始原料。使用相同的方法，合成3-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-1-胆碱磷酸和3-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油-1-磷酸乙醇胺，使用(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇对甲苯磺酸酯作为起始原料。
1-S- 十六烷基 -sn- 甘油的合成： 将48 ml的1-十六烷硫醇在150 ml苯中搅拌并回流，同时通过共沸蒸馏除去水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约125 ml。加入58 ml乙醇钠的乙醇溶液，并在氮气氛围中将该混合物搅拌30分钟。加入30克(R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇对甲苯磺酸酯的100 ml干燥苯溶液，并将混合物回流3小时。将反应混合物冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物倾倒在冰上，用150 ml二乙醚提取三次。用150 ml水洗涤有机相两次，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在100 ml 9:1:0.5(v/v)甲醇：水：浓HCl的混合物中，并将得到的溶液回流2小时，而后冷却至室温。将反应混合物倾倒在冰上，用200 ml氯仿提取三次，然后用200 ml水、200 ml饱和碳酸钠溶液洗涤，并再次用200 ml水洗涤。减压除去溶剂，得到70克橙色固体。用400 ml己烷将残余物重结晶两次，得到30克1-S-十六烷基-sn-甘油(30 g)白色固体。
1-S- 十六烷基 -3- 三苯甲基 -sn- 甘油的合成： 将28克1-S-十六烷基-甘油和31克氯三苯甲烷放入到370 ml干燥THF和100 ml干燥乙腈的混合物中。加入25 ml干燥三乙胺，并将反应混合物回流17小时。然后将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(1千克)上，转入分液漏斗中，并用200 ml二乙醚提取三次。用200 ml水、200 ml稀硫酸(1.5%)(两次)、200 ml水、200 ml浓碳酸氢钠溶液和200 ml水洗涤。然后用无水硫酸钠干燥溶液，减压除去溶剂，得到60克棕色油。将该油溶解在150 ml乙酸乙酯中，并将得到的溶液在-20℃保持过夜。然后将混合物离心(在-10℃)，并倾倒掉母液。在4℃，用己烷将获得的固体重结晶。过滤后，得到36克1-S-十六烷基-3-三苯甲基-sn-甘油白色固体。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 叔丁基 - 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将10克1-S-十六烷基-3-三苯甲基-sn-甘油溶解在150 ml苯和50 ml石油醚的混合物中，然后加入20.48克粉末KOH。将反应混合物搅拌并回流。用大约10小时的时间，将10 ml戊酸叔丁基酯的200 ml石油醚溶液逐滴加入到该回流溶液中，同时共沸蒸馏除去形成的水。加入完毕后，将反应混合物额外回流1小时，以便减少溶剂的体积。然后将反应混合物冷却至室温，并加入100 ml冰冷却的水和20 ml甲酸的混合物。然后用100 ml氯仿提取反应混合物两次，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到15.65克浅棕色油。将得到的油溶解在160 ml甲基叔丁基醚(MTBE)和20 ml甲醇的混合物中。加入3 ml浓HCl，并将得到的溶液回流4小时，然后冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。用100 ml饱和碳酸钠水溶液洗涤反应混合物，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到14.10克浅棕色油。用硅胶柱(91克)色谱纯化该油。使用己烷、而后己烷和氯仿的混合物、而后氯仿和丙酮从柱中洗脱产物。减压除去溶剂，得到6.84克1-S-十六烷基-2-(4-叔丁基-羧基)丁基-sn-甘油。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将6.84克1-S-十六烷基-2-(4-叔丁基-羧基)丁基-sn-甘油溶解在80 ml乙醇中。加入3.7克KOH的5ml水溶液，并将混合物搅拌和回流6小时。将混合物冷却至室温后，加入16 ml水和100 ml己烷：乙酸乙酯的8:2(v/v)混合物。分离各相，并将50 ml水和5 ml甲酸加入到有机相中。用氯仿提取，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到3.89克1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油浅棕色油。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将3.89克1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油溶解在100 ml甲醇中，并加入1 ml浓盐酸。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用100 ml氯仿提取两次。用50 ml水洗涤有机相两次，用硫酸钠干燥，然后减压除去溶剂，得到3.75克残余物。用硅胶柱(49克)色谱纯化该残余物。使用氯仿、而后氯仿和丙酮的混合物从柱中洗脱产物。减压除去溶剂，得到2.94克纯1-S-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将2.83克1-S-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油和1.7 ml三乙胺溶解在20 ml苯和120 ml THF的混合物中。在60分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的1.14 ml POCl3和0.98 ml三乙胺的20 ml THF溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌10分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。然后用40分钟时间将1.02 ml乙醇胺和2.8 ml三乙胺的50 ml THF溶液逐滴加入到冰冷却下的反应混合物中。在0℃，继续搅拌10分钟，而后在室温下搅拌过夜。然后过滤反应混合物，减压除去溶剂。将残余物(4.23克)溶解在48 ml乙酸和20 ml水的混合物中，并加热到70℃，保持1小时。然后用50 ml的2:1(v/v)的氯仿：甲醇混合物将溶液提取三次，减压除去有机溶剂，得到4.05克粗品1-S-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成： 将0.97克1-S-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在50 ml甲醇中。加入7 ml 10%氢氧化钠溶液，并在室温下将得到的溶液搅拌8小时。加入2 ml甲酸，然后用50 ml氯仿提取该混合物三次。减压除去合并的有机溶剂，得到0.70克蜡样残余物。用硅胶(32克)色谱纯化该残余物。使用氯仿、而后氯仿和甲醇的混合物从柱中洗脱产物。减压除去溶剂，得到0.625克纯1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(1-S-CI-202)。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (1-S-CI-202) 的 NMR 特征：
利用13C NMR谱测定样品。
结果显示了1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(1-S-CI-202)的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(1-S-CI-202)的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 145030DEST_PATH_IMAGE049
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.724 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
179.382 C
78.616 B
69.824
66.630
62.304
53.954
40.447
35.308
33.130
32.680
32.072
29.877
29.514
29.165
22.824
22.277
14.179 A
1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (1-S-CI-201) 的质谱特征：
对1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C26H54NO7PS)的计算质量是555.75。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=554的分子离子，相当于去质子化的离子[M-H]-。
使用正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=556的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，和具有m/z=578的离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(1-S-CI-202)的化学结构一致。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将3.48克1-S-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺溶解在35 ml甲醇和100 ml二氯甲烷的混合物中。加入10克碳酸钾的20 ml水溶液。然后加入3.5 ml的硫酸二甲酯，并将反应在室温下搅拌过夜。通过加入1 ml甲酸，将反应的pH值调节至4。用75 ml 2:1(v/v)氯仿：甲醇混合物提取该混合物三次，而后除去溶剂，得到3.72克粗品1-S-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
(R)-1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成： 将3.72克1-S-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸溶解在100 ml甲醇中。加入10 ml 10%氢氧化钠溶液，并在室温下将得到的溶液搅拌过夜。加入1.2 ml甲酸，用100 ml 2:1(v/v)氯仿：甲醇混合物提取该混合物三次。减压除去合并的有机溶剂，得到2.92克残余物。用硅胶(54克)色谱纯化2.46克该残余物。使用氯仿和己烷的混合物、而后氯仿、而后氯仿和甲醇的混合物从柱中洗脱产物。减压除去溶剂，得到1.21克纯1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(1-S-CI-201)。
1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (1-S-CI-201) 的 NMR 特征：
利用13C NMR谱测定样品。
结果显示了1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(1-S-CI-201)的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(1-S-CI-201)的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 275797DEST_PATH_IMAGE050
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=75.948 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
175.904 D
76.958 C
68.150
64.677-64.749
57.613-57.676
52.612 B
52.185
33.133
31.379
31.076
30.314
28.096
27.745
27.345
21.069
20.499
12.427 A
1-S- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (1-S-CI-201) 的质谱特征：
对1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C29H60NO7PS)的计算质量是597。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)进行的质谱显示了具有m/z=596的分子离子，相当于去质子化的离子[M-H]-。
使用正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=598的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，和具有m/z=620的离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(1-S-CI-201)的化学结构一致。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文所描述的内容，测定1-S-CI-201和1-S-CI-202对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图31所示，用20μg/ml(34μM)的 1-S-CI-201处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，与20μg/ml(34μM)阳性对照CI-201一样。然而，用10μg/ml(17μM)的 1-S-CI-201处理，具有很小的影响(如果有的话)，而10μg/ml(34μM)CI-201导致磷酸酪氨酸水平提高。
如图32所示，用20μg/ml(36μM)的 1-S-CI-202处理，可以导致磷酸酪氨酸水平降低，而用10μg/ml(18μM)的1-S-CI-202处理，导致磷酸酪氨酸水平提高。这些结果与10μg/ml和20μg /ml的各自的CI-201和 CI-202分别得到的结果非常相似。
实施例 14
1- 十六烷基 -2-(5,6- 二羟基 ) 己基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (di-OH)
按照下文所描述的方法，合成(R)-1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
1- 十六烷基 -sn- 甘油的合成：将19.4克(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、49克粉末KOH和4.8克十六烷基溴在500 ml甲苯(500ml)中搅拌并回流6小时，同时共沸蒸馏除去形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约100 ml，并将反应混合物冷却至室温。将冷却的反应混合物溶解在500 ml二氯甲烷中，用200 ml水洗涤两次，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在500 ml 90:10:5(v/v)的甲醇：水：浓H2SO4的混合物中，并将得到的溶液回流30分钟，而后冷却至室温，用500 ml二氯甲烷提取。用100 ml水洗涤提取物两次，用100 ml 5%碳酸钠水溶液洗涤，并再次用100 ml水洗涤，直到中性为止。减压除去溶剂，在4℃用己烷将粗品重结晶，得到35.3克纯1-十六烷基-sn-甘油。产率是76%。
1- 十六烷基 -3- 三苯甲基 -sn- 甘油的合成：在氮气氛围中，将35.3克1-十六烷基-sn-甘油、37.3克三苯基氯甲烷和22.44克干燥三乙胺在470 ml干燥四氢呋喃和120 ml干燥乙腈的混合物中的溶液回流15小时。冷却至室温后，过滤反应混合物。将滤液倾倒在冰(500克)上，而后用200 ml氯仿提取三次。依次用500 ml水、500 ml 0.15N HCl、500 ml饱和NaHCO3水溶液洗涤有机相，并再次用水洗涤。用Na2SO4干燥提取物，减压除去溶剂。将得到的黄色残余物溶解在500 ml温热己烷中，并将得到的澄清溶液冷冻(5±3℃)过夜。在这段时间，出现沉淀。过滤沉淀后，从滤液中减压除去溶剂，得到58.3克1-十六烷基-3-三苯甲基-sn-甘油。产率是95%。
(S)-1- 十六烷基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油的合成：将36.3克1-十六烷基-3-三苯甲基-sn-甘油和11.5克5-己烯基-甲磺酸酯(由5-己烯-1-醇和甲磺酰氯在干燥吡啶中制备)溶解在500 ml甲苯中。加入20克粉末KOH，并将反应混合物搅拌和回流8小时，同时共沸蒸馏除去所形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约100 ml，并将反应混合物冷却至室温。将冷却的反应混合物溶解在500 ml二氯甲烷中，用200 ml水洗涤两次，减压除去溶剂。将得到的1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基甘油溶解在500 ml甲醇：水：浓(32%)HCl的90:10:5(v/v)混合物中，并将得到的溶液回流3小时。将反应混合物冷却至室温，加入500 ml水，而后用250 ml二氯甲烷提取该混合物三次。用100 ml水洗涤合并的有机相两次，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在250 ml己烷中，并将得到的溶液在-20℃保存48小时，导致大部分三苯基甲醇沉淀。过滤并从滤液中除去溶剂后，用硅胶色谱纯化剩余的产物。用1:1(v/v)氯仿：石油醚洗脱出11.65克纯(S)-1-十六烷基-2-(5’-己烯基)-sn-甘油。产率是45%。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的合成：将11.65克1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油和3.23克三乙胺溶解在650 ml干燥THF中。将此溶液逐滴加入到冰冷却下的5.34克三氯氧磷的130 ml THF溶液中，同时搅拌。以某种速度进行加入，以使反应温度不超过15℃。在冷却下，继续额外搅拌10分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。然后将反应混合物在冰浴中冷却，用30分钟的时间逐滴加入2.10 ml乙醇胺和9.73 ml三乙胺的THF溶液，同时搅拌。在冰浴中，继续搅拌20分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂。将得到的残余物(15.93克)溶解在240 ml乙酸和100 ml水的混合物中。将得到的溶液在70℃加热1小时，冷却至室温，并用250 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取两次。从有机相中减压除去溶剂，得到12.50克(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-3-磷酸乙醇胺溶解在650 ml异丙醇和220 ml二氯甲烷中。加入66.5克K2CO3的130 ml水溶液，并将该反应混合物加热到40℃。以不会使反应温度超过35-40℃的这种速度，逐滴加入13.3 ml硫酸二甲酯的130 ml异丙醇溶液(用45分钟的时间)。加入完毕后，在40℃继续搅拌90分钟。然后将反应混合物冷却至室温，用500 ml的氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取三次，从有机相中减压除去溶剂，得到12.50克(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5,6- 二羟基 - 己基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将8.57克(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸溶解在80 ml甲酸中。加入18.7 ml 30%过氧化氢，并在室温下搅拌反应混合物过夜。加入250 ml水，并将该溶液转入分液漏斗中，用100 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物提取5次。从有机相中减压除去溶剂，并将得到的残余物溶解在150 ml甲醇中。加入55 ml氢氧化钠水溶液(10%)，并在室温下搅拌反应混合物2小时。加入3 ml冷却的浓HCl(32%)在150 ml水中的混合物，并将得到的溶液转入分液漏斗中，用100 ml氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物将产物提取5次。从有机相中减压除去溶剂，并将得到的粗品用硅胶色谱纯化。用氯仿和4%-60%甲醇的混合物洗脱出4.5克纯(R)-1-十六烷基-2-(5,6-二羟基-己基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(di-OH)。产率是50%。
1- 十六烷基 -2-(5,6- 二羟基 - 己基 )- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 352338DEST_PATH_IMAGE051
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.299 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.300 2 H, br , s A
3.930 2 H, m E
3.880 － 3.898 1H, m B
3.653 － 3.784 2 H, m G
3.477 － 3.566 10 H, m, 5 x CH2 C
3.320 9 H, s, 3 x CH3 D
1.506-1.532 6H, m 3 x CH2 F
1.246 28 H, m, 14 x CH2 I
0.872 3 H, t, 1 x CH3, J=6.75 Hz J
按照1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 935766DEST_PATH_IMAGE052
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.700 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
78.691 B
72.734
72.443 D
70.993
70.661
67.645
66.843
66.690
60.067
55.007 A
33.669
33.512
32.612
30.586
30.411
30.258
30.051
26.779
23.373
23.176
14.800 C
1- 十六烷基 -2-(5,6- 二羟基 ) 己基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(C30H64NO8P)的计算质量是597.4370。
使用快速原子轰击(FAB+)得到的质谱显示了具有m/z=598.400的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+。由此，该质谱与1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(di-OH)的化学结构一致。
di-OH 的毒性：
按照上文所描述方法评价di-OH的毒性。
如图33A和33B所示，在20μg/ml或更高剂量下检测到di-OH的毒性，di-OH的LD50在20和50μg/ml之间。
动脉粥样硬化病变试验：
如上文材料和方法部分中所述，在LDL-RD雄性小鼠中，测试di-OH抵御动脉粥样硬化病变的体内效能。以每个小鼠1 mg的剂量给予Di-OH，相当于60 mg/kg的剂量。
如图34所示，与对照物(PBS)相比较，1 mg/小鼠的di-OH可以使动脉粥样硬化病变面积降低25%。
这些结果表明，di-OH可有效抵御动脉粥样硬化。
实施例 15
1-( 顺式 -9- 十六碳烯基 )-2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸
按照下文所描述方法，合成(R)-1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
1-( 顺式 -9- 十六碳烯基 )-sn- 甘油的合成： 将5.32克(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇、12.26克粉末氢氧化钾和10克顺式-9-十六碳烯基-甲磺酸酯在250 ml苯中搅拌并回流10.5小时，同时共沸蒸馏除去所形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约50 ml。将反应混合物冷却至室温，加入50 ml水，并用100 ml二乙醚提取该混合物三次。用100 ml水洗涤合并的有机相，减压除去溶剂。将残余物(12.01克)溶解在200 ml甲醇：水：浓盐酸的90:10:3(v/v)混合物中，并将得到的溶液在室温下搅拌过夜，而后回流1小时。冷却至室温后，加入100 ml水。用75 ml二乙醚提取产物三次，连续地用100 ml水、100 ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并再次用100 ml水洗涤。用Na2SO4干燥之后，减压除去溶剂，得到9.104克粗品1-(顺式-9-十六碳烯基)-sn-甘油。用硅胶(30克)柱色谱纯化该粗品。用氯仿、而后用氯仿和5%甲醇的混合物洗脱出9.07克纯1-(顺式-9-十六碳烯基)-甘油。产率是91.8%。
(S)-1-( 顺式 -9- 十六碳烯基 )-3- 三苯甲基 -sn- 甘油的合成： 将9.07克1-(顺式-9-十六碳烯基)-甘油溶解在干燥THF(160 ml)和干燥乙腈(40 ml)的混合物中。加入10.52克三苯基氯甲烷和10 ml三乙胺，并将反应混合物回流15小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(100克)上，转入分液漏斗中，并用100 ml氯仿提取三次。连续地用100 ml水、100 ml稀(1.0%)硫酸、100 ml水、100 ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，并再次用100 ml水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在热己烷(100 ml)中，并将得到的溶液在4℃冷却36小时。过滤沉淀的副产物，减压除去溶剂，得到14.57克粗品。用硅胶(200克)色谱纯化粗品。用氯仿洗脱出9.81克纯1-(顺式-9-十六碳烯基)-3-三苯甲基-sn-甘油。产率是61.1%。
(S)-1-( 顺式 -9- 十六碳烯基 )-2-(4- 叔丁基 - 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油的合成： 将8.83克1-(顺式-9-十六碳烯基)-3-三苯甲基-sn-甘油溶解在苯(170 ml)和石油醚(100 ml)的混合物中。加入粉末KOH(23.1克)，并将反应混合物加热至温和回流状态。用25小时的时间逐滴加入戊酸叔丁基酯(20 ml)的石油醚(420 ml)溶液，同时共沸蒸馏除去所形成的水。冷却至室温后，通过加入甲酸(10 ml)，将反应混合物的pH值调节至大约6。用二乙醚(3 x 100 ml)提取混合物，用水(100 ml)洗涤有机相。减压除去溶剂，得到17.72克油状产物。将该残余物溶解在甲醇(50 ml)中，加入4 ml浓HCl(32%)，并将反应混合物回流5.5小时。冷却至室温后，加入50 ml水，并用二乙醚(3 x 50 ml)提取该混合物。将合并的有机相用水(50 ml)洗涤，减压除去溶剂，得到14.26克粗品。用硅胶(110克)色谱纯化2.93克纯1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-叔丁基-羧基)丁基-sn-甘油。用氯仿：己烷(1:1体积比)的混合物洗脱产物，而后用氯仿与至多3%乙酸乙酯的混合物洗脱。从含有所需要产物的馏份中减压除去溶剂。产率是39.2%。
(R)-1-( 顺式 -9- 十六碳烯基 )-2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成：将1.59克(S)-1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-叔丁基-羧基)丁基-sn-甘油(通过与苯共沸蒸馏进行干燥)和0.7 ml三乙胺溶解在THF(45 ml)中。在18分钟期间内将该溶液逐滴加入到冰冷却下的POCl3(0.5 ml)和三乙胺(0.05 ml)的THF(20 ml)溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌10分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。将反应混合物在冰浴中冷却，然后用65分钟的时间逐滴加入乙醇胺(0.38 ml)和三乙胺(3.25 ml)的THF(54 ml)溶液，同时搅拌。在冷却期间，继续搅拌10分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，用THF(2 x 10 ml)洗涤，减压除去溶剂。将残余物(2.1克)溶解在乙酸(48 ml)和水(20 ml)的混合物中，加热到70℃，保持1小时。用二乙醚(2x50 ml)提取，用水(2x50 ml)洗涤，减压除去溶剂，得到2.15克粗品浅棕色油。将该油溶解在甲醇(35 ml)和二氯甲烷(100 ml)的混合物中。加入碳酸钾(10克)的水(20 ml)溶液，并在室温下搅拌反应混合物10分钟。加入硫酸二甲酯(2.5 ml)，并在室温下搅拌反应混合物6小时。加入额外1 ml的硫酸二甲酯，并将反应混合物在室温下搅拌48小时。用氯仿(3 x 50 ml)提取混合物，从合并的有机相中减压除去溶剂，得到2.48克蜡样产物。将该残余物溶解在甲醇(100 ml)中，加入氢氧化锂(0.19 g)的水(6 ml)溶液(pH≈11)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。通过加入甲酸将反应混合物的pH值调节至4-5，然后用氯仿(3 x 100 ml)提取该混合物。从合并的有机相中减压除去溶剂。薄层色谱分析显示大约60%转化率。将得到的残余物溶解在乙醇(100 ml)中，加入氢氧化锂(0.2克)的水(5 ml)溶液(pH≈11)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。通过加入甲酸(0.22 ml)将反应混合物的pH值调节至4-5，然后用2:1(v/v)氯仿：甲醇(3 x 100 ml)提取该混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机相，减压除去溶剂，得到2.18克粗品。用氯仿、而后用氯仿与10%-80%甲醇的混合物洗脱出1.14克纯(R)-1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
1-( 顺式 -9- 十六碳烯基 )-2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR谱。
结果显示了1-(顺式-9-十六碳烯基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全地支持1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构。
按照1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.26 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
5.340 2 H 乙烯基, dt, J1=3.9Hz, J2=1.5 Hz K
3.896 2 H, m A
3.690 1H, m B
3.400-3.626 10 H, m, 5 x CH2 C
3.307 9 H, s, 3 x CH3 D
2.335 2 H, t=6.9 Hz E
1.983 － 2.023 4 H, 烯丙基 J
1.6576 － 1.721 2 H, m G
1.526 － 1.622 4 H, m, 2 x CH2 F
1.288 18 H, m, 9 x CH2 H
0.884 3 H, t, 1 x CH3, J=7.2 Hz I
按照1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 357706DEST_PATH_IMAGE054
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.257 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
178.41 D
130.02 E
129.87 E
77.876 B
71.868
70.200
69.940
65.439
65.368
52.725 A
33.896
31.854
29.838
29.799
29.669
29.609
29.568
29.361
29.146
29.049
27.273
26.139
22.724
21.514
14.137 C
1-( 顺式 -9- 十六碳烯基 )-2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸的质谱特征：
对1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(C29H58NO8P)的计算质量是579.3900。
使用快速原子轰击(FAB+)得到的质谱显示了具有m/z=580.3995的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+。由此，该质谱与1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
实施例 16
(S)-1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油
如实施例1所述，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料，合成(S)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油。还如实施例1所述，使用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料，合成(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油。
(S)-1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在600 MHz测定谱。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油的结构所观察到的1H峰的归属如下：
1H NMR
Figure 667464DEST_PATH_IMAGE055
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.26 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
3.721 1 H, m C
3.655 2 H, m H
3.480 － 3.573 4 H, m, 2 x CH2 G
3.431 2 H, m G
2.403 2 H, t, J=7.2 Hz F
1.750 2 H, tt, CH2 E
1.653 2 H, tt, CH2 D
1.555 2 H, tt, CH2 D
1.254 26 H, m, 13 x CH2 B
0.880 3 H, t, 1 x CH3, J=7.2 Hz A
13C NMR
按照1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 675872DEST_PATH_IMAGE056
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.014 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.95 E
78.495 D
71.914
70.921
69.685 C
63.068 B
33.302
31.937
29.708
29.682
29.633
29.609
29.473
29.372
29.242
26.099
22.701
21.609
14.127 A
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油(C24H48O5)的计算质量是416.635。
使用电喷雾离子化质谱(ES+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=417.0的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+。由此，该MS谱与1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油的化学结构一致。
实施例 17
1- 十六烷基 -2-(5',5'- 二甲氧基戊基 )- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (diMeAc) 和 1- 十六烷基 -2-(5',5'- 二乙氧基戊基 )- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (diEtAc)
按照下文所描述方法，由(R)-1-十六烷基-2-(5,6-二羟基己基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸制备(R)-1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸和(R)-1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。使用相同的方法，由(S)-1-十六烷基-2-(5,6-二羟基己基)-甘油基-3-胆碱磷酸制备(S)-1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸和(S)-1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸。
(R)-1-十六烷基-2-(5,6-二羟基己基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸和(S)-1-十六烷基-2-(5,6-二羟基己基)-甘油基-3-胆碱磷酸的合成方法描述在实施例14中。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5'- 氧代 - 戊基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的合成： 将2克高碘酸钠加入到冰冷却下的(R)-1-十六烷基-2-(5',6'-二羟基己基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(2克)的水(200 ml)溶液中，并在冷却下搅拌反应混合物30分钟，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物转入分液漏斗中，用氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物(3x100 ml)提取，从合并的有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用无水Na2SO4干燥，过滤，然后减压除去溶剂。用硅胶(21克)色谱纯化得到的粗品。用氯仿、而后用氯仿与40%-60%甲醇的混合物洗脱出1.2克纯(R)-1-十六烷基-2-(5’-氧代-戊基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。产率是63%。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5',5'- 二乙氧基戊基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (diEtAc) 的合成： 该反应在氮气氛围中进行。将 (R)-1- 十六烷基 -2-(5'- 氧代 - 戊基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (50 mg ， 0.088 mmol) 溶解在乙醇 (10 ml) 中。加入原甲酸三乙基酯(0.053 ml，0.0476克，0.32mmol)和3滴浓硫酸(95-97%)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。借助于二氯甲烷(75 ml)将该反应混合物转移至分液漏斗中。依次用水(75 ml)、2.5%碳酸氢钠水溶液(75 ml)和水(75 ml)洗涤溶液，用无水硫酸钠干燥。过滤并减压除去溶剂，得到50 mg(R)-1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。产率是88.4%。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5',5'- 二甲氧基戊基 )-sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (diMeAc) 的合成： 该反应在氮气氛围中进行。将(R)-1-十六烷基-2-(5'-氧代-戊基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(55 mg，0.097 mmol)溶解在甲醇(10 ml)中。加入原甲酸三甲基酯(0.043 ml，0.0414克，0.39 mmol)和3滴浓硫酸(95-97%)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。加入二氯甲烷(75 mL)，并将反应混合物转入分液漏斗中。依次用水(75 ml)、2.5%碳酸氢钠水溶液(75 ml)和再次用水(75 ml)洗涤溶液。用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到36.8 mg(R)-1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。产率是62%。
1- 十六烷基 -2-(5',5'- 二乙氧基戊基 )- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (DiEtAc) 的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 729278DEST_PATH_IMAGE057
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.270 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.459 1 H, t, J=5.6 Hz J
4.309 2H, br, s A
3.859 2H, t, J=5.4 Hz C
3.808 2H, br, s B
3.430-3.679 11H, m, 5 x CH2+CH E
3.388 9H, s, 3 x CH3 D
1.509-1.587 6H, m F
1.256 28H, 14 x CH2 G
1.195 6H, t, 2 x CH3, J=7.05 Hz I
0.881 3 H, t, 1 x CH3, J=6.6 Hz H
按照1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 569058DEST_PATH_IMAGE058
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.0046 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
102.980 L
78.2741 K
71.7498 J
71.0295 I
70.2381 H
65.5827 G
64.9656 F
61.0510 E
59.1392 D
54.6214 C
33.5956
31.9161
30.0866
29.8112
29.7010
29.3441
26.1672
22.6671
21.3484
15.3929 B
14.0619 A
1- 十六烷基 -2-(5',5'- 二乙氧基戊基 )- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (DiEtAc) 的质谱特征：
对1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(C33H70NO8P)的计算质量是639.88。
使用电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)得到的质谱显示了具有m/z=640的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，伴有具有m/z=662的离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+，和具有m/z=594的离子，相当于去乙氧基化的分子离子[M-OEt]+。由此，该质谱与1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
1- 十六烷基 -2-(5',5'- 二甲氧基戊基 )- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (DiMeAc) 的 NMR 特征：
将样品溶解在氘化氯仿(CDCl3)中。在300 MHz测定1H NMR和13C NMR谱。
结果显示了1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(DiMeAc)的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 735204DEST_PATH_IMAGE059
1H NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.28 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.337 1 H, t, J=5.7 Hz G
3.855 2H, br, s A
3.834 － 3.855 4H, m, 2 x CH2 C
3.703 1H, m B
3.529 － 3.591 4H, m C
3.430-3.464 2H, m, CH2 C
3.388 9H, s, 3 x CH3 D
3.302 6H, s, 2 x CH3 H
1.506-1.605 6H, m E
1.256 28H, 14 x CH2 F
0.880 3H, t, 1 x CH3, J=6.9 Hz A
按照1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR(300 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.000 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
104.50 E
78.133 D
71.686
70.845
70.121
66.330
64.974
59.187
54.411 C
52.721 B
52.692 B
32.324
31.884
29.963
29.756
29.554
29.320
26.112
25.348
22.646
21.165
14.071 A
动脉粥样硬化病变试验：
如上文材料和方法部分中所述，在ApoE KO小鼠中，测试diMeAc抵御动脉粥样硬化病变的体内效能。以每个小鼠1 mg的剂量给予diMeAc，相当于40 mg/kg的剂量。
如图35所示，与对照物(PBS)相比较，1 mg/小鼠的diMeAc可以使动脉粥样硬化病变面积降低23%。
这些结果表明，diMeAc可有效抵御动脉粥样硬化。
diEtAc 的毒性：
按照上文所描述方法评价diEtAc的毒性。
如图36A和36B所示，在20μg/ml或更高剂量下，diEtAc显示出毒性，diEtAc的LD50在20和50μg/ml之间。在10μg/ml的浓度下，只在两个实验的一个实验中观察到毒性。
实施例 18
1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸丝氨酸 (VB-223)
按照下文所描述方法，由(S)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油制备(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸丝氨酸。使用相同的方法，由(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-甘油制备(S)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-甘油基-3-磷酸丝氨酸。
(S)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油和(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-甘油的合成方法描述在实施例14中。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 磷酸酯的合成： 将1.0克(S)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-甘油(通过与苯共沸蒸馏进行干燥)和干燥吡啶(1 ml)溶解在THF(60 ml)中。将该溶液逐滴加入到冰冷却下的POCl3(0.3 ml)的THF(12 ml)溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌3小时。向该冷却的反应混合物中加入碳酸氢钠(2.44克)的水(24 ml)溶液，并在冰浴中额外搅拌该混合物30分钟。通过缓慢地加入10%盐酸，将反应混合物的pH值调节至大约1。用二乙醚(3 x 150ml)提取，用水(2 x 150 ml)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到1.43克(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸酯。
(R)-1- 十六烷基 -2-(5'- 己烯基 )-sn- 甘油基 -3- 磷酸基 -N-Boc-L- 丝氨酸 - 二苯甲基酯的合成： 将1.30克(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸酯和0.95克N-Boc-丝氨酸-二苯甲基酯(将其在干燥器中用P2O5干燥)溶解在吡啶(30 ml)中。加入2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(2.99克)，并在氮气氛围中、在室温下搅拌反应混合物20小时。加入水(50 mL)，并将混合物转入分液漏斗中。用己烷：乙酸乙酯的8:2(v/v)混合物(3 x 50 ml)提取，用无水Na2SO4干燥合并的有机相，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在己烷：乙酸乙酯的8:2(v/v)混合物(50 ml)中，用冷却的稀乙酸(5%)洗涤。然后减压除去溶剂，得到1.33克粗品(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸基-N-Boc-L-丝氨酸-二苯甲基酯。
(R)-1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸基 -N-Boc-L- 丝氨酸 - 二苯甲基酯的合成： 将高碘酸钠(3.0克)、高锰酸钾(0.05克)、碳酸钠(0.15克)和碳酸钾(0.03克)溶解在水(100 ml)中。在室温下，在30分钟期间内，向此溶液中逐滴加入(R)-1-十六烷基-2-(5'-己烯基)-sn-甘油基-3-磷酸基-N-Boc-L-丝氨酸-二苯甲基酯(0.90克)的叔丁醇(100 ml)溶液。加入完毕后，在室温下搅拌反应混合物2小时。加入额外量的高锰酸钾(0.02克)，并搅拌反应混合物90分钟。加入磷酸二氢钠(10克)的水(100 ml)溶液，并用氯仿(3 x 100 ml)提取反应混合物。用盐水(100 ml)洗涤合并的有机相，减压除去溶剂，得到1.02克粗品(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸基-N-Boc-L-丝氨酸-二苯甲基酯。
(R)-1- 十六烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸基 -L- 丝氨酸 (VB-223) 的合成： 将1.02克(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸基-N-Boc-L-丝氨酸-二苯甲基酯溶解在二氯甲烷(100 ml)中。将该溶液在冰浴中冷却，并用HCl气体饱和30分钟。将反应混合物额外搅拌1小时。然后通过加入磷酸二氢钠的水溶液，将反应混合物中和，而后用氯仿：甲醇的2:1(v/v)混合物(3 x 100 ml)提取。用无水Na2SO4干燥有机相，减压除去溶剂。用硅胶(12.60克)色谱纯化得到的粗品(0.72克)。用己烷：氯仿的1:1(v/v)混合物、而后用氯仿、而后用氯仿与10%甲醇的混合物洗脱出0.60克纯(R)-1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸基-L-丝氨酸。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定VB-223对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图37所示，用5、10和20μg/ml(8.3、16.7和33.3μM)VB-223处理，大概还用1μg /ml(1.7μM)VB-223处理，可以诱导酪氨酸磷酸化作用。
实施例 18
1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (VB-221) 和 1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (VB-222)
按照下文所描述方法，合成(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸，使用(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。使用相同的方法，合成(S)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺和(S)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸，但用(S)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇作为起始原料。
甲磺酸 2- 辛基 - 十二烷基酯： 将2-辛基-1-十二烷醇(20 ml，56.14 mmol)和无水三乙胺(16 ml，112.28 mmol)溶解在干燥二氯甲烷(60 ml)中。将该溶液冷却至0℃，并逐滴加入甲磺酰氯(5.2 ml，67.36 mmol)的干燥二氯甲烷(40 ml)溶液。加入完毕后，在10℃搅拌该混合物3小时，而后冷冻(2-8℃)过夜。将反应混合物倾倒在冰(500克)上，升温至室温，并用醚(3 x 150 ml)提取。连续地用水(150 ml)、2% H2SO4(150 ml)、水(150 ml)、饱和碳酸氢钠(150 ml)洗涤有机相，并再次用水(150 ml)洗涤。用无水Na2SO4干燥有机相，减压除去溶剂，得到22.8克甲磺酸2-辛基-十二烷基酯黄色油。
1-(2- 辛基 ) 十二烷基 - 甘油： 将(R)-(-)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-甲醇(8.3 ml，66.59 mmol)、粉末氢氧化钾(12克)和甲磺酸-2-辛基-十二烷基酯(22.77克，60.50 mmol)在苯(250 ml)中搅拌并回流5小时，同时共沸蒸馏除去所形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约150 ml。将反应混合物冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。加入200 ml水，并用二乙醚(3 x 200 ml)提取混合物。将合并的有机相用水(200 ml)洗涤，并减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在105 ml甲醇：水：浓盐酸的90:10:5(v/v)混合物中，并将得到的溶液回流30分钟。冷却至室温后，加入水(100 mL)。用氯仿(3 x 100 ml)提取产物，连续地用水(100 ml)、饱和碳酸钠水溶液(100 ml)洗涤，并再次用水(100 ml)洗涤。减压除去溶剂，并将粗品用硅胶(400克)柱色谱纯化。用氯仿、而后用氯仿和10%-30%乙酸乙酯的混合物洗脱出17克纯1-(2-辛基)十二烷基-甘油无色油。产率是75.5%。
(S)-1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -3- 三苯甲基 - 甘油： 将17克1-(2-辛基)十二烷基-甘油(通过与苯共沸蒸馏进行干燥)溶解在干燥THF(400 ml)和干燥乙腈(160 ml)的混合物中。加入三苯基氯甲烷(15.8克)和干燥三乙胺(14 ml)，并将反应混合物回流17小时。将反应混合物冷却至室温，倾倒在冰(1千克)上，转入分液漏斗中，并用二乙醚(3 x 200 ml)提取。连续地用水(200 ml)、稀(1.5%)硫酸(2 x 100 ml)、水(200 ml)、浓碳酸氢钠水溶液(200 ml)洗涤合并的有机相，并再次用水(200 ml)洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，减压除去溶剂，并将得到的粗品用硅胶(350克)柱色谱纯化。用己烷、而后用己烷和氯仿(50-100%)的混合物洗脱出26克纯(S)-1-(2-辛基)十二烷基-3-三苯甲基-甘油黄色油。产率是92.7%。
1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(5'- 己烯基 )-3- 三苯甲基 - 甘油： 将1-(2-辛基)十二烷基-3-三苯甲基-甘油(26克，42.28 mmol)和5-己烯基-1-甲磺酸酯(9.4克，50.73 mmol)溶解在苯(150 ml)中。加入粉末KOH(17克)，并将反应混合物加热到回流，保持5.5小时，同时共沸蒸馏除去所形成的水。将溶剂的体积逐渐地减少到大约50 ml。将反应混合物冷却至室温后，加入200 ml水，并用二乙醚(3 x 100 ml)提取该混合物。将合并的有机相用盐水(3 x 100 ml)洗涤，减压除去溶剂，得到22.8克粗品。用硅胶(300克)色谱纯化该粗品，得到21克纯1-(2-辛基)十二烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油。用氯仿洗脱出产物黄色油。产率是71.2%。
(S)-1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油： 将高碘酸钠(58克)、高锰酸钾(960 mg)和碳酸钾(7克)悬浮在水(250 ml)中。在2.5小时期间内，逐滴加入1-(2-辛基)十二烷基-2-(5'-己烯基)-3-三苯甲基-甘油(21克)的叔丁醇(250 ml)溶液。然后搅拌反应混合物过夜(根据保持粉红色的需要，加入高锰酸盐溶液)。通过硅藻土垫过滤混合物，进一步用叔丁醇洗涤该垫。逐滴加入10 ml稀硫酸(10%)，然后将得到的溶液用己烷(3 x 200 ml)提取。用亚硫酸氢钠(20克)的水溶液(100 ml)洗涤合并的有机相两次、而后用水(200 ml)洗涤。减压浓缩溶剂至150 ml体积。加入20 ml水和5 ml浓HCl，并将得到的混合物回流6小时。冷却至室温后，减压浓缩溶剂，将得到的残余物用30%氢氧化钠(10 ml)和水(100 ml)的混合物处理，使反应混合物达到pH12。过滤沉淀的三苯基甲醇，并用水(4 x 10 ml)洗涤。用己烷：乙酸乙酯的1:1(v/v)混合物(100 ml)提取滤液。用浓HCl(10 ml)将该碱性溶液酸化至pH1，并用己烷(100 ml)提取。用无水硫酸钠干燥有机溶液，减压除去溶剂，得到8.5克(S)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油黄色油。产率是60%。
(S)-1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4'- 羧甲基 ) 丁基 - 甘油： 将(S)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油(8.39克)溶解在甲醇(100 ml)中。加入2 ml浓HCl(32%)，并在室温下搅拌溶液过夜。加入水(100 ml)，并用氯仿(3 x 100 ml)提取混合物。连续地用水(100 ml)、浓碳酸氢钠溶液(100 ml)和水(100 ml)洗涤合并的有机相，而后用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂，得到8.48克(S)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油黄色油。产率是98%。
(R)-1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺： 将(S)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4'-羧甲基)丁基-甘油(8.48克)和三乙胺(7.3 ml)溶解在干燥THF(50 ml)中。在60分钟期间内，将该溶液逐滴加入到冰冷却下的POCl3(4.85 ml)的THF(50 ml)溶液中，同时搅拌。在冷却下，继续额外搅拌15分钟，而后在室温下额外搅拌45分钟。将该反应混合物在冰中冷却，然后用60分钟的时间逐滴加入乙醇胺(3.2 ml)和三乙胺(15 ml)的干燥THF(50 ml)溶液，同时搅拌。在冰中，继续搅拌10分钟，而后在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在乙酸(24 ml)和水(10 ml)的混合物中，加热到70℃，保持1小时。将反应混合物冷却至室温，并用氯仿(3 x 80 ml)提取。将合并的有机相用水(2 x 50 ml)洗涤，并减压除去溶剂。用硅胶(220克)色谱纯化残余物(11克)。用氯仿、而后用氯仿与5%-20%甲醇的混合物、最后用70:26:4的氯仿：甲醇：水的混合物洗脱出4.25克纯(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。产率是40%。
(R)-1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺 (VB-222) ： 将(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(1.2克)溶解在100 ml的甲醇：10%氢氧化钠溶液的8:2(v/v)混合物中。在室温下搅拌反应混合物过夜。通过加入磷酸二氢钠，将反应的pH值调节至5。加入水(100 ml)和氯仿(100 ml)。分离各相，并从有机相中减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，然后减压除去溶剂。用硅胶(23克)色谱纯化粗品(1.2克)。用8:2(v/v)氯仿：甲醇的混合物、而后用氯仿：甲醇：水(体积比70:26:4，而后60:35:5)的混合物洗脱产物。从含有所需要的产物的馏份中减压除去溶剂，将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到500 mg纯(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺蜡。产率是42.65%。
1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在600 MHz测定谱图。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 822426DEST_PATH_IMAGE061
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.313 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.117 2 H, br , s H
3.835 － 3.844 1 H, m G
3.394 － 3.718 10 H, m, 5 x CH2 F
2.329 2 H, m E
1.680 － 1.700 1 H, m D
1.595 － 1.606 2 H, m C
1.533 2 H, m C
1.261-1.300 32 H, m, 16 x CH2 B
0.882 6 H, t, 2 x CH3, J=6.9 Hz A
按照1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的结构所观察到的13C峰的归属如下：
Figure 516712DEST_PATH_IMAGE062
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.189 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
177.505 F
78.1013 － 78.152 E
75.103
71.013
70.085
66.144
61.989
40.344 D
38.229 C
33.945 B
31.999
31.350
31.305
31.227
30.191
29.792
29.743
29.439
29.291
26.883
22.751
21.792
21.661
14.138 A
1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 - 甘油基 -3- 磷酸乙醇胺的质谱特征：
对1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(C30H62NO8P)的计算质量是595.42。
使用电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)进行的质谱显示了具有m/z=596的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，伴有具有m/z=618的分子离子，相当于阳离子化的离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺的化学结构一致。
(R)-1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 甲基羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸：
将(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(2.62克)溶解在异丙醇(18 ml)和二氯甲烷(40 ml)的混合物中。逐滴加入碳酸钾(3克)的水(10 ml)溶液，同时将反应混合物保持在35-40℃的温度下。在40℃，逐滴加入硫酸二甲酯(2.1 ml)的异丙醇(10 ml)溶液。将反应混合物在40℃保持2小时，然后冷却至室温，并在室温下搅拌过夜。加入水(100 ml)，并用氯仿(3 x 100 ml)提取混合物。用水(100 ml)洗涤合并的有机相，减压除去溶剂，得到2.78克(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸白色蜡。
(R)-1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸 (VB-221) ： 将(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(2.78克)溶解在甲醇和10%氢氧化钠水溶液的8:2(v/v)混合物（100 ml）中，并在室温下搅拌反应混合物过夜。通过加入磷酸二氢钠，将反应的pH值调节至5。加入水(100 ml)和氯仿(100 ml)。分离各相，并减压除去溶剂。将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，过滤，然后减压除去溶剂。用硅胶(50克)色谱纯化残余物(2.7克)。用8:2(v/v)氯仿：甲醇洗脱非极性杂质。然后用氯仿：甲醇：水(体积比70:26:4，而后60:35:5)的混合物洗脱产物。减压除去溶剂之后，将得到的残余物溶解在氯仿中，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得到800mg纯(R)-1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸白色蜡。产率是29.4%。
1-(2- 辛基 ) 十二烷基 -2-(4- 羧基 ) 丁基 -sn- 甘油基 -3- 胆碱磷酸的 NMR 特征：
将样品溶解在含有几滴氘化甲醇(CD3OD)的氘化氯仿(CDCl3)中。然后在600 MHz测定谱图。利用1H和13C NMR谱两者测定样品。
结果显示了1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸的结构单元的预期信号，并由此完全支持该结构。
按照1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的1H峰的归属如下：
Figure 168274DEST_PATH_IMAGE063
1H NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=7.352 ppm)
δ[ppm] 说明 归属(参见上式)
4.259 2 H, br , s I
3.983 － 3.983 1 H, m H
3.607 － 3.833 6 H, m, 3 x CH2 G
3.432 － 3.493 2H, m G
3.304 － 3.320 2H, m G
3.281 9 H, s, 3 x CH3 F
2.350 2 H, m E
1.875 1H, m D
1.710 2 H, m C
1.602 2 H, m C
1.262 － 1.313 32 H, m, 16 x CH2 B
0.883 6 H, t, 2 x CH3, J=6.9 Hz A
按照1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸的结构所观察到的13C峰的归属如下：
13C NMR(600 MHz, 参比溶剂(CDCl3)=77.308 ppm)
δ[ppm] 归属(参见上式)
176.700 F
78.289 － 78.344 E
75.122
71.137
70.087
66.662
66.011-66.046
59.052 － 59.086
54.420 D
38.274 C
34.150 B
32.032
31.397
31.356
30.216
29.809
29.766
29.466
29.370
26.930
22.782
22.102
14.142 A
质谱特征：
对1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(C33H68NO8P)的计算质量是637.87。
使用电喷雾离子化质谱(ES-MS)得到的质谱显示了具有m/z=636的分子离子，相当于去质子化的分子离子[M-H]-。
使用正离子电喷雾离子化质谱(ESI+-MS)得到的质谱显示了具有m/z=638的分子离子，相当于质子化的分子离子[M+H]+，伴有具有m/z=660的分子离子，相当于阳离子化的分子离子[M+Na]+。
由此，该MS谱与1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸的化学结构一致。
酪氨酸磷酸化作用：
按照上文材料和方法部分中所描述的内容，测定VB-221和VB-222对在原发性巨噬细胞中的体外酪氨酸磷酸化作用的影响。
如图38所示，用5、10和20μg/ml(8、16和32μM)VB-221处理，可以诱导酪氨酸磷酸化作用。
类似地，如图39所示，用10和20μg/ml(16.8和33.6μM)VB-222处理，可以诱导酪氨酸磷酸化作用。
虽然已经结合具体实施方案描述了本发明，但很明显，许多备选方案、修饰和变体对本领域技术人员是显而易见的。相应地，本文意在包括落在附加权利要求的精神和宽范围内的所有这种备选方案、修饰和变体。
将本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请以其整体结合到本文中作为参考，其程度如同每个单一的出版物、专利或专利申请是具体地和单独地注明以其整体结合到本文中作为参考那样。另外，不应该将本申请中对任何参考文献的引证或确认理解为承认这种参考文献作为本发明现有技术是可获得的。至于部分标题的使用，不应该将其理解为是必然限制性的。

Claims (19)

1.具有下式的化合物：
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1是长度为2-28个碳的烷基链；和
(iii) R2选自(4-甲基羧基)丁基，(3-羧基)丙基，(6-羧基)己基，(2-羧基)乙基，5,6-二羟基己基，5,5-二乙氧基戊基和5,5-二甲氧基戊基；和
(iv) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基(phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
2.具有下式的化合物：
Figure 682385DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1是长度为2-28个碳的烷基链；
(iii) R2是
Figure 599525DEST_PATH_IMAGE002
,
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
,
Figure DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 712155DEST_PATH_IMAGE003
, ,
Figure DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iv) R3选自H，磷酸基(phosphate)，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸和磷酸丝氨酸。
3.具有下式的化合物：
Figure 728750DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1、A2和A3各自独立地选自O和S；
(ii) R1选自十二烷基，十八烷基，辛基，二十烷基，顺式-9-十六碳烯基，(2-辛基)十二烷基和(15-羧基)十五烷基；
(iii) R2选自长度为2-28个碳的烷基链，和
Figure 995783DEST_PATH_IMAGE002
，
条件是，如果R1不是(15-羧基)十五烷基，则R2是所述
Figure 194684DEST_PATH_IMAGE002
，
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 801245DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
Figure 794609DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 548939DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 223634DEST_PATH_IMAGE003
,
Figure 747019DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 176863DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iv) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基(phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
4.具有下式的化合物：
Figure 356172DEST_PATH_IMAGE001
或其可药用盐，其中：
(i) A1是S，A2和A3各自是O；
(ii) R1是长度为2-28个碳的烷基链；
(iii) R2是
Figure 67513DEST_PATH_IMAGE002
,
其中X是C1-25链，Y选自：
Figure 710984DEST_PATH_IMAGE003
，-OH，-H，烷基，烷氧基，卤素，乙酰氧基和芳香官能团；和
Z选自：
,
Figure 712756DEST_PATH_IMAGE008
, ,
Figure 289547DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 998877DEST_PATH_IMAGE007
和-OH，
而R'是C1-4烷基；和
(iii) R3选自H，酰基，烷基，磷酸基(phosphate)，胆碱磷酸，磷酸乙醇胺，磷酸乙醇胺-N-戊二酸，磷酸丝氨酸和磷酸肌醇。
5.选自下列的化合物：
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸酯(CI-201-PA)；
1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺；
1-十六烷基-2-(4-甲基羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-208)；
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-202)；
1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-206)；
1-十六烷基-2-(3-羧基)丙基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-205)；
1-十六烷基-2-(6-羧基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-203)；
1-十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-209)；
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-戊二酸(CI-210)；
1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-213)；
1-(15'-羧基)十五烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-214)；
1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-215)；
1-十八烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-216)；
1-十六烷基-2-(2-羧基)乙基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-217)；
1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(1-S-CI-201)；
1-S-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(1-S-CI-202)；
1-十六烷基-2-(5,6-二羟基)己基-甘油基-3-胆碱磷酸(二-OH)；
1-(顺式-9-十六碳烯基)-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸；
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油；
1-十六烷基-2-(5',5'-二乙氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(diEtAc)；
1-十六烷基-2-(5',5'-二甲氧基戊基)-甘油基-3-胆碱磷酸(diMeAc)；
1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-207)；
1-辛基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺；
1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(CI-219)；
1-二十烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(CI-220)；
1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-胆碱磷酸(VB-221)；
1-(2-辛基)十二烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸乙醇胺(VB-222)；和
1-十六烷基-2-(4-羧基)丁基-甘油基-3-磷酸丝氨酸(VB-223)。
6.权利要求1-5的任一项的化合物，确定其用于治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症的方法。
7.权利要求1-5的任一项的化合物，确定其用于降低细胞因子的水平的方法，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23。
8.权利要求1-5的任一项的化合物，确定其用于治疗疾病或病症的方法，在这种疾病或病症中，降低细胞因子的水平是有利的，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23。
9.一种药物组合物，其包含作为活性组分的权利要求1至5的任一项的化合物和可药用载体。
10.权利要求9的药物组合物，将其包装在包装材料中，并以印刷的形式在所述包装材料中或在所述包装材料上做出标记，用于治疗或预防与内源性的氧化的脂质相关的炎症。
11.权利要求9的药物组合物，将其包装在包装材料中，并以印刷的形式在所述包装材料中或在所述包装材料上做出标记，用于降低细胞因子的水平，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23。
12.权利要求9的药物组合物，将其包装在包装材料中，并以印刷的形式在所述包装材料中或在所述包装材料上做出标记，用于治疗疾病或病症，在这种疾病或病症中，降低细胞因子的水平是有利的，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23。
13.治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症的方法，该方法包括：给予需要其的患者治疗有效量的权利要求1至5的任一项的化合物，由此在所述患者中治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症。
14.降低患者的细胞因子水平的方法，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23，该方法包括：给予该患者有效量的权利要求1至5的任一项的化合物。
15.治疗疾病或病症的方法，在这种疾病或病症中，降低细胞因子的水平是有利的，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23，该方法包括：给予需要其的患者有效量的权利要求1至5的任一项的化合物。
16.权利要求1至5的任一项的化合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗或预防与内源性氧化的脂质相关的炎症。
17.权利要求1至5的任一项的化合物在制备药物中的用途，该药物用于降低患者的细胞因子的水平，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23。
18.权利要求1至5的任一项的化合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗疾病或病症，在这种疾病或病症中，降低细胞因子的水平是有利的，其中细胞因子选自白细胞间介素-12和白细胞间介素-23。
19.权利要求6、9、13和16的任一项的化合物、组合物、方法或用途，其中所述炎症与选自下列的疾病或病症有关：特发性的炎性疾病或病症，慢性炎性疾病或病症，急性炎性疾病或病症，自身免疫性疾病或病症，感染性疾病或病症，炎症性恶性疾病或病症，炎症性移植相关的疾病或病症，炎症性变性疾病或病症，与超敏反应相关的疾病或病症，炎症性的心血管疾病或病症，炎症性的脑血管疾病或病症，周围性血管疾病或病症，炎症性的腺疾病或病症，炎症性的胃肠疾病或病症，炎症性的皮肤疾病或病症，炎症性的肝疾病或病症，炎症性的神经系统疾病或病症，炎症性的肌-骨骼疾病或病症，炎症性的肾疾病或病症，炎症性的生殖疾病或病症，炎症性的系统疾病或病症，炎症性的结缔组织疾病或病症，炎症性的肿瘤，坏疽，炎症性的植入物相关的疾病或病症，炎症性的老化过程，免疫缺乏疾病或病症和炎症性的肺疾病或病症。
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