CN102178707A - 具有抗氧化活性的榛属植物提取物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有抗氧化活性的榛属植物提取物及其制备方法。本发明具有抗氧化活性的榛属植物提取物,其中含有总黄酮30~55wt%。本发明还提供了制备具有抗氧化活性的榛属植物提取物的方法,其基本上包括醇水溶液提取以及用大孔树脂进行纯化的步骤。本发明方法提取得到的提取物具有非常高的抗氧化剂含量和非常高的抗氧化活性。

Description

具有抗氧化活性的榛属植物提取物及其制备方法
技术领域
本发明属植物活性成分提取的技术领域,具体涉及具有抗氧化活性的榛属植物提取物以及它们的制备方法。
背景技术
抗氧化物质(抗氧化剂)是指能够清除氧自由基,抑制或消除以及减缓氧化反应的一类物质。抗氧化剂的开发与研究一直以来受到人们的广泛关注,特别是当科学家们发现生物体的疾病与衰老是生物体内自由基作用的结果后,抗氧化剂的研究更有了广阔的发展空间。抗氧化剂可以来源于生物体,包括动物、植物、微生物等,通常称其为天然抗氧化剂或生物氧化剂;有些抗氧化剂也可以通过化学合成的方法得到,将其称为化学合成抗氧化剂。天然抗氧化剂已从单纯作为油脂和含脂食品的抗氧化剂,发展到作为生物体内氧自由基的清除剂,起到保护生物体细胞组织,保护心脑血管循环系统、抗癌及延缓衰老等生理作用。某些植物对疾病有预防和治疗作用,大部分归因于其中含有能够清除过量自由基的抗氧化活性的成分,如黄酮类、苯酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类等。从植物中提取抗氧化活性成分对于开发更多更好的天然抗氧化剂,从而逐渐取代存在潜在致癌性的化学合成抗氧化剂,具有重大的现实意义。
榛属植物例如平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛,广泛分布于东北、华东、华北、西北及西南地区,其中以东北三省居多。榛属植物富含黄酮、鞣质、多酚等多种具有抗氧化活性的成分,这些成分具有多方面生理活性,可有效的防癌、抗氧化、降血脂,对心血管疾病亦具有预防作用。由于榛属植物抗氧化成分独特的生理作用,它的应用价值很高,但是对榛属植物的抗氧化成分的利用目前仍是非常少。
本领域仍然需要有新颖、有效的天然抗氧化剂,例如具有抗氧化活性的榛属植物的提取物。
发明内容
本发明的目的是提供一种新颖、有效的天然抗氧化剂,期望该天然抗氧化剂可从具有充裕资源的植物材料提取得到。本发明人令人惊奇地发现,从榛属植物通过本发明特别的方法提取得到的提取物,具有非常高的抗氧化剂含量和非常高的抗氧化活性。本发明基于上述发现而得以完成。
为此,本发明第一方面提供了一种具有抗氧化活性的榛属植物提取物,其中含有总黄酮30~55wt%。
根据本发明第一方面的提取物,经FRAP法测定抗氧化活性,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为1~7mg/mL。
根据本发明第一方面的提取物,经β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性,其IC50值为1~6mg/mL。
根据本发明第一方面的提取物,经清除DPPH自由基能力的测定法测定,其IC50值为30~120μg/mL。
根据本发明第一方面的提取物,其中含有总黄酮30~35wt%;经FRAP法测定抗氧化活性,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为1~7mg/mL;经β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性,其IC50值为1~6mg/mL;经清除DPPH自由基能力的测定法测定,其IC50值为30~120μg/mL。
根据本发明第一方面的提取物,其中所述榛属(Corylus)植物选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛。在一个实施方案中,所述榛属植物选自平榛、毛榛。
根据本发明第一方面的提取物,其是由榛属植物的根、茎、叶、皮和/或榛花提取获得的。在一个实施方案中,所述提取物是由榛属植物的叶提取得到的。
根据本发明第一方面的提取物,其是由包括以下步骤提取得到的:
1)、提供榛属植物的提取原料(例如榛属植物(例如选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛,例如平榛、毛榛、或刺榛)的根、茎、叶、皮和/或榛花,优选榛叶);
2)、将该提取原料粉碎,用10-95%乙醇,优选10-30%乙醇,更优选20%乙醇作为提取溶液,在50-90℃下回流提取,得提取液;
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用10-95%乙醇,优选30-95%乙醇,优选50-65%乙醇,更优选60%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法(铁还原抗氧化能力测试法,亦称为铁离子还原法,Ferric reducing/antioxidant power)检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂选自D101、D140、AB-8、D11、D16、HPD型(例如HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700及其组合)及其组合;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
本发明第二方面提供了制备具有抗氧化活性的榛属植物提取物(例如本发明第一方面所述提取物)的方法,其基本上包括以下步骤:
1)、提供榛属植物的提取原料(例如榛属植物(例如选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛,例如平榛、毛榛、或刺榛)的根、茎、叶、皮和/或榛花,优选榛叶);
2)、将该提取原料粉碎,用10-95%乙醇,优选10-30%乙醇,更优选20%乙醇作为提取溶液,在50-90℃下回流提取,得提取液;
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用10-95%乙醇,优选30-95%乙醇,优选50-65%乙醇,更优选60%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂选自D101、D140、AB-8、D11、D16、HPD型(例如HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700及其组合)及其组合;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
根据本发明第二方面所述的方法,其中所述的大孔吸附树脂选自HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700及其组合。
本发明第三方面提供了一种组合物,其中包含本发明第一方面所述的提取物,以及任选的生理学可接受的载体。本发明的组合物可用作抗氧化剂用于生物体例如人,以产生抗氧化作用。所述载体是本领域技术人员公知的,例如填充剂如蔗糖等。
本发明的任一方面的任一实施方案,可以与其它实施方案进行组合,只要它们不会出现矛盾。此外,在本发明任一方面的任一实施方案中,任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征,只要它们不会出现矛盾。
本发明所引述的所有文献,它们的全部内容通过引用并入本文,并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时,以本发明的表述为准。此外,本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义,即便如此,本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释,提及的术语和短语如有与公知含义不一致的,以本发明所表述的含义为准。
在本发明中,本发明提取物(例如榛提取物,例如榛叶提取物)亦可称为榛属植物抗氧化剂或榛属植物提取物等。
在本发明中,术语“榛提取物”包括但不限于平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛,以及它们之间的杂交品种榛。
本发明的目的之一是提供一种榛属植物抗氧化剂的提取工艺,本发明的目的可以通过如下措施来实现:
在一个实施方案中,本发明提供了一种从榛属植物提取抗氧化剂的工艺方法,其包括以下步骤和工艺条件:
1)、提供榛属植物提取原料,该榛属植物可以是平榛、毛榛,该原料可以是榛属植物的根、茎、叶、皮和榛花,优选是叶;
2)、将榛属植物提取原料粉碎成20目至80目,用10-95%的乙醇溶液作为提取溶液,在50-90℃下回流提取,过滤得提取液。所述的回流提取的料液比为1∶1-1∶10,优选2∶10,提取次数为2-5次,每次提取1-4小时。优选的提取溶液为10-30%的乙醇溶液,最优选的提取溶液为20%的乙醇溶液;
3)、将所得含有抗氧化剂的提取液通过大孔吸附树脂纯化,所述的大孔吸附树脂为D101、D140、AB-8、D11、D16、HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700类型的一种或它们任意比例的组合并且不限于这些类型;所述提取液通过大孔吸附树脂的流速为0.1-5.0BV/h;
4)、先用水洗脱大孔吸附树脂至流出的液体无色,再用10-95%的乙醇作为洗脱溶液洗脱至无抗氧化剂流出(用FRAP法检测)并收集洗脱流分;水洗脱及洗脱溶液洗脱的流速为0.1-5.0BV/h。优选的洗脱溶液为30-95%的乙醇溶液,优选50-65%乙醇,最优选的洗脱溶液为60%的乙醇溶液;
5)、蒸发回收洗脱流分中的溶剂,干燥,得榛属植物抗氧化剂产品。
在本发明中,BV是指树脂床体积。
本发明人发现,通过本发明的方法从榛属植物中提取得到的提取物,具有非常高的抗氧化剂含量和非常高的抗氧化活性。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述,然而,本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解,在不背离本发明的精神和范围的前提下,可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的,但是本发明仍然在此作尽可能详细的描述。
A、检测方法:
(1)榛属植物抗氧化剂抗氧化活性评价:抗氧化活性的FRAP法测定
采用铁离子还原法(Ferric reducing/antioxidant power,FRAP)。取适量作为明提取物作为抗氧化剂或化学合成抗氧化剂BHT溶于10%无水乙醇溶液,定容至10mL作为样液,加入1.8mL TPTZ工作液(由0.3mol/L醋酸盐缓冲液25mL、10mmol/L TPTZ溶液2.5mL、20mmol/L FeCl3溶液2.5mL组成),混匀后37℃反应10min,593nm测定吸光度。吸取不同浓度0.1mmol/L,0.2mmol/L,0.4mmol/L,0.6mmol/L,0.8mmol/L,1.0mmol/L的FeSO4标准液10mL,替代上述样液,操作方法同上,绘制标准曲线。样品的抗氧化活性(FRAP值)以达到同样吸光度值所需的FeSO4毫摩尔数表示。根据标准曲线计算样品的FRAP值,当FRAP值为0.5时,本发明实施例1的提取物的榛抗氧化剂浓度为2.25mg/mL,而BHT浓度为9.2mg/mL,说明本发明提取物的抗氧化活性优于BHT。
(2)榛属植物抗氧化剂抗氧化活性评价:β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性
将0.2mgβ-胡萝卜素溶于0.2mL氯仿中,加入20mg亚油酸及200mg吐温-40。混合均匀后于40℃水浴中除去氯仿,加入50mL蒸馏水(经鼓氧气2~3min),剧烈振荡,即配成反应介质溶液,同时设置空白,除不加β-胡萝卜素氯仿溶液外,其他步骤同前。于具塞试管中逐一加入4.0mL反应介质溶液,将本发明榛属植物提取物抗氧化剂或化学合成抗氧化剂BHT溶于无水乙醇,配制成系列浓度溶液作为样液,分别加入0.2mL样液,同时设置空白调零管、对照管和样品管,其中空白调零管中不含β-胡萝卜素与试样,对照管不含试样,以0.2mL无水乙醇代替试样溶液。上述溶液混匀后,置于50℃水浴中恒温,在470nm波长下测定t=0时的吸光度,之后每间隔15min测定吸光度,直至对照管中β-胡萝卜素颜色消失(约120min)。
抗氧化活性的计算公式:
Figure BSA00000470613300051
(A0
Figure BSA00000470613300052
分别表示t=0时样品和对照的吸光度;At
Figure BSA00000470613300053
分别表示t=120min时样品和对照的吸光度)
β-胡萝卜素-亚油酸法测定榛属植物抗氧化剂,表现出优良的抗氧化活性。其中本发明实施例1提取物的IC50值(抗氧化活性为50%时所对应的抗氧化剂溶液浓度)为1.15mg/mL,而BHT的IC50值为1.42mg/mL,说明本发明榛提取物抗氧化剂优于BHT的抗氧化活性。
(3)榛属植物抗氧化剂抗氧化活性评价:清除DPPH自由基能力的测定法
用无水乙醇配置6.5×10-5mol/L DPPH溶液,另将本发明榛属植物抗氧化剂或化学合成抗氧化剂BHT溶于无水乙醇,配制成系列浓度溶液作为样液。精确吸取2.5mL DPPH溶液和0.5mL样液摇匀,室温避光放置反应10min后倒入光径1cm比色皿,517nm下测定吸光值。重复测定3次,结果取平均值。然后按下式计算DPPH自由基清除率,抗氧化剂清除自由基能力采用清除DPPH的IC50值表示,即DPPH自由基清除率为50%时所对应的抗氧化剂溶液浓度。
清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%
A0为2.5mL DPPH溶液+0.5mL无水乙醇
Ai为2.5mL DPPH溶液+0.5mL样液
Aj为2.5mL无水乙醇+0.5mL样液
经计算,本发明实施例1的提取物,其IC50值(50%DPPH自由基清除率所需样品的浓度)为39.28μg/mL,而BHT的IC50值为103.34μg/mL,说明本发明榛提取物抗氧化剂优于BHT的抗氧化活性。
(4)黄酮类物质颜色鉴定反应
取0.5g榛属植物抗氧化剂用5mL甲醇溶解作为待测夜,进行鉴定反应。盐酸-镁粉反应,在试管中加入2ml待测样品,加入少许镁粉,震荡后,滴加浓盐酸数滴,充分振摇,反应完全后,观察颜色变化,可见溶液显棕红色;AlCl3显色反应,取200μL点样在薄层板上,相应位置喷上AlCl3溶液,出现黄色斑点,紫外下呈亮黄绿色荧光斑点;与氨水的反应,量取10μL待测夜滴于滤纸上,后置于氨水瓶口熏2-3min,立即置于紫外灯下观察,可见亮黄绿色荧光斑点。通过颜色鉴定反应可知,榛属植物抗氧化剂含有黄酮类物质。
(5)提取物中总黄酮含量的测定
取0.0058g芦丁对照品,用甲醇溶解,定容至100mL,作为对照品储备液。分别准确移取用对照品储备液等倍稀释的不同浓度芦丁对照品溶液,置于25mL的比色管中,并分别准确加2.5mL 5%的AlCl3无水乙醇溶液于上述溶液中,用甲醇定容,摇匀,静置20min后,以试剂空白作参比于420nm处测定吸光度。以芦丁对照品溶液梯度变化的浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制芦丁对照品标准曲线。
取本发明制备的提取物,参考以上芦丁对照品的配液方法配制成相应浓度的溶液,以试剂空白作参比在420nm处测定吸光度,依据芦丁对照品标准曲线计算出提取物中总黄酮的百分含量(wt%)。
B、制备本发明提取物的实施例
实施例1
制备本发明提取物的步骤如下:
1)、取40g平榛叶粉,20目;
2)、将该提取原料粉碎,用10%乙醇作为提取溶液,在90℃下回流提取,得提取液(在本提取步骤中,回流提取的料液比为1∶5,提取3次,每次提取2小时);
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用60%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂为HPD-100;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
经计算和测定:收率3.85%;总黄酮含量51.4wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为2.21mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为1.15g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为39.3μg/mL。
实施例2
制备本发明提取物的步骤如下:
1)、取40g毛榛叶粉,80目;
2)、将该提取原料粉碎,用30%乙醇作为提取溶液,在50℃下回流提取,得提取液(在本提取步骤中,回流提取的料液比为1∶2,提取2次,每次提取3小时);
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用65%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂为HPD-700;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
经计算和测定:收率2.65%;总黄酮含量35.3wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为4.32mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为3.31g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为32.4μg/mL。
实施例3
制备本发明提取物的步骤如下:
1)、取40g平榛叶粉,40目;
2)、将该提取原料粉碎,用20%乙醇作为提取溶液,在70℃下回流提取,得提取液(在本提取步骤中,回流提取的料液比为1∶10,提取2次,每次提取1小时);
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用50%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂为HPD-400;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
经计算和测定:收率6.72%;总黄酮含量33.7wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为6.87mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为5.63g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为117.6μg/mL。
实施例4
制备本发明提取物的步骤如下:
1)、取40g刺榛叶粉,60目;
2)、将该提取原料粉碎,用20%乙醇作为提取溶液,在60℃下回流提取,得提取液(在本提取步骤中,回流提取的料液比为1∶8,提取5次,每次提取4小时);
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用55%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂为HPD-600;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
经计算和测定:收率4.62%;总黄酮含量43.2wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为3.42mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为2.74g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为84.2μg/mL。
实施例5
制备本发明提取物的步骤如下:
1)、取40g毛榛叶粉,60目;
2)、将该提取原料粉碎,用25%乙醇作为提取溶液,在75℃下回流提取,得提取液(在本提取步骤中,回流提取的料液比为1∶5,提取3次,每次提取3小时);
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用60%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂为HPD-600;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
经计算和测定:收率5.16%;总黄酮含量46.7wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为1.13mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为3.66g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为61.6μg/mL。
C、参考本发明方法制备提取物的制备例
制备例1
参考实施例1的方法制备榛叶提取物,不同之处是步骤2)中所用乙醇为60%,步骤3)中所用乙醇为40%,步骤3)中所用大孔树脂为D101型。
经计算和测定:收率4.14%;总黄酮含量26.4wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为11.3mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为8.74g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为69.8μg/mL。
制备例2
参考实施例2的方法制备榛叶提取物,不同之处是步骤2)中所用乙醇为90%提取温度为室温,步骤3)中所用乙醇为75%,步骤3)中所用大孔树脂为D11型。
经计算和测定:收率3.16%;总黄酮含量19.7wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为14.2mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为9.16g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为87.2μg/mL。
制备例3
参考实施例3的方法制备榛叶提取物,不同之处是步骤2)中所用乙醇为60%,步骤3)中所用乙醇为30%,步骤3)中所用大孔树脂为D140型。
经计算和测定:收率6.13%;总黄酮含量14.7wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为10.1mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为8.54g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为164.3μg/mL。
制备例4
参考实施例4的方法制备榛叶提取物,不同之处是步骤3)中所用大孔树脂为D16型。
经计算和测定:收率4.94%;总黄酮含量30.7wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为14.3mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为6.3g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为91.7μg/mL。
制备例5
参考实施例5的方法制备榛叶提取物,不同之处是步骤2)中所用乙醇为75%,步骤3)中所用大孔树脂为AB-8型。
经计算和测定:收率4.96%;总黄酮含量28.6wt%;FRAP法测定,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为12.43mg/mL;β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC50值为5.73g/L;清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC50值为133.4μg/mL。

Claims (10)

1.一种具有抗氧化活性的榛属植物提取物,其中含有总黄酮30~55wt%。
2.根据权利要求1的提取物,经FRAP法测定抗氧化活性,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为1~7mg/mL。
3.根据权利要求1的提取物,经β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性,其IC50值为1~6mg/mL。
4.根据权利要求1的提取物,经清除DPPH自由基能力的测定法测定,其IC50值为30~120μg/mL。
5.根据权利要求1的提取物,其中含有总黄酮30~55wt%;经FRAP法测定抗氧化活性,当FRAP值为0.5时,其中的抗氧化剂的浓度为1~7mg/mL;经β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性,其IC50值为1~6mg/mL;经清除DPPH自由基能力的测定法测定,其IC50值为30~120μg/mL。
6.根据权利要求1的提取物,其中所述榛属(Corylus)植物选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛;和/或所述提取物是由榛属植物的根、茎、叶、皮和/或榛花提取获得的。
7.根据权利要求1至6任一项的提取物,其是由包括以下步骤提取得到的:
1)、提供榛属植物的提取原料(例如榛属植物(例如选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛,例如平榛、毛榛、或刺榛)的根、茎、叶、皮和/或榛花,优选榛叶);
2)、将该提取原料粉碎,用10-95%乙醇,优选10-30%乙醇,更优选20%乙醇作为提取溶液,在50-90℃下回流提取,得提取液;
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用10-95%乙醇,优选30-95%乙醇,优选50-65%乙醇,更优选60%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂选自D101、D140、AB-8、D11、D16、HPD型(例如HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700及其组合)及其组合;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
8.制备具有抗氧化活性的榛属植物提取物的方法,其基本上包括以下步骤:
1)、提供榛属植物的提取原料(例如榛属植物(例如选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛,例如平榛、毛榛、或刺榛)的根、茎、叶、皮和/或榛花,优选榛叶);
2)、将该提取原料粉碎,用10-95%乙醇,优选10-30%乙醇,更优选20%乙醇作为提取溶液,在50-90℃下回流提取,得提取液;
3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化,先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色,然后用10-95%乙醇,优选30-95%乙醇,优选50-65%乙醇,更优选60%乙醇为洗脱液进行洗脱,并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分,所述大孔吸附树脂选自D101、D140、AB-8、D11、D16、HPD型(例如HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700及其组合)及其组合;
4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂,干燥,即得。
9.权利要求8方法,其中所述的大孔吸附树脂选自HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700及其组合。
10.一种组合物,其中包含权利要求1至7任一项的提取物,以及任选的生理学可接受的载体。
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