CN104725394A

CN104725394A - 一种光甘草定的制备方法

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Publication number: CN104725394A
Application number: CN201510102210.6A
Authority: CN
Inventors: 李玉山
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-03-02
Filing date: 2015-03-02
Publication date: 2015-06-24

Abstract

一种光甘草定的制备方法，该方法包含以下步骤：1)提取，浓缩；2)萃取分离；3)柱色谱；4)结晶纯化。本发明采用乙醇或乙酸乙酯回流提取，浓缩至比重1.05-1.10；或用碱水提取，酸液沉淀，乙酰化后分离纯化，再柱色谱。有机溶剂提取物浓缩回收溶剂后加水稀释，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取分离，再采用硅藻土、硅胶、DEAE-纤维素、聚酰胺树脂、中性氧化铝柱色谱，以不同极性的洗脱剂洗脱，薄层色谱监测，洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定。

Description

一种光甘草定的制备方法

技术领域

本发明涉及一种光甘草定的制备方法。

背景技术

光甘草定(Glabridin)，CAS No.59870-68-7，代码：182519。分子式：C₂₀H₂₀O₄，分子量：324.3704。低含量为棕色粉末，高含量为白色粉末，光甘草定不溶于水，溶于丁二醇，丙二醇等有机溶剂。英文名称：1，3-Benzenediol，4-[(3R)-3，4-dihydro-8，8-dimethyl-2H，8H-benzo[1，2-b：3，4-b′]dipyran-3-yl]-，中文别名：4-[(3R)-8，8-Dimethyl-3，4-dihydro-2H-pyrano[6，5-f]chromen-3-yl]benzene-1，3-diol1，3-Benzenediol，4-(3，4-dihydro-8，8-dimethyl-2H，8H-benzo[1，2-b：3，4-b′]dipyran-3-yl)-，(R)-；2H，8H-Benzo[1，2-b：3，4-b′]dipyran，1，3-benzenediol deriv。结构式如下：

光甘草定系从Glycyrrhiza glabra L.(syn.Liquiritae officinalis Moench.，Fani.Fabaccae)的根中提取得到的，用作化妆品原料。Glycyrrhiza glabra L.系多年生草本植物，生长于欧洲南部、亚洲、地中海地带，在俄罗斯、西班牙、伊朗和印度地区广泛种植。光甘草定的主要药理作用：①抑制酪氨酸酶，从而抑制黑色素生成，黑色素使皮肤或眼睛由褐色变为黑色，皮肤组织的磷脂膜被紫外线诱导产生的活性氧破坏，活性氧是一种能引起皮肤色素沉着的物质，表现为出现红斑和色素沉着。②抗炎作用，光甘草定减轻由紫外线刺激引起的皮肤炎症。光甘草定抑制环氧化酶的活性，环氧化酶是将花生四烯酸转化为前列腺素的酶，而前列腺素正是致炎因子，光甘草定通过抑制环氧化酶影响花生四烯酸的产生，从而减轻炎症。③抗氧化作用，光甘草定减少传染性皮肤病的皮质激素，能加强类固醇的作用。光甘草定抗自由基氧化作用，能明显抑制自由基的产生，从而防治与自由基氧化有关的如动脉粥样硬化，细胞衰老等。此外，光甘草定尚有一定的降血脂、抑制食欲和降血压的作用。

范丽，段文娟，王晓等在《超高压同时提取光果甘草中甘草酸和光甘草定的研究》(食品科技，2013，3(12)：214-218)中报道了超高压提取效果明显优于超声提取，同时，超高压提取时间只需1min，是超声提取的1/30、热回流提取的1/120，缩短了提取时间，提高了工作效率，是一种快速、简单、常温的提取方法。陈军明，王平，王雪峰等《甘草渣中光甘草定提取工艺的研究》(新疆中医药，2014，32(4)：63-66)中报道了Celite、Hz806、D101、XAD-1等多种树脂对光甘草定的吸附性能和原液浓度、流速、洗脱剂的浓度对树脂吸附性能的影响。结果表明，Celite树脂对光甘草定吸附量高，易于洗脱，分离效果好，回收率较一般方法高，纯度在50％以上。木合布力·阿布力孜，热娜·卡斯木，马淑燕等在《甘草中光甘草定的提取和抗氧化活性研究》(天然产物研究与开发，2007，19：675-677)中报道了从光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.)丙酮提取物中分离得到黄酮类单体成分-光甘草定(Glabridin)，并对其抗氧化生物活性进行观察研究。以肝脏微粒体中的细胞色素P450/NADPH氧化系统作为体外抗氧化实验模型，微粒体中自由基诱发程度由探针DCFH-DA的氧化产物DCF的浓度进行检测，以银杏叶提取物EGB761用作阳性对照物。光甘草定以0.10、0.25和0.5mg/mL浓度，分别抑制自由基浓度67％、73％和83％。在较低浓度时，其抗氧化活性强度与EGB761类似。光甘草定在细胞色素P450/NADPH氧化系统中具有强抗自由基氧化作用。范玉涵，王银军，张爱军等在《光甘草定提取工艺的优化及分离》(宁夏医科大学学报，2014，36(1)：111-114)中报道了采用单因素试验与正交试验优选光甘草定提取的最佳工艺条件，以硅胶柱为分离柱，氯仿及甲醇不同比例为洗脱液，分离纯化光甘草定。结果通过单因素实验，筛选出无水乙醇做提取溶剂，回流提取为提取方法，正交试验确定最佳提取工艺条件为，以料液比为1∶10的比例回流提取2次，每次2h，所得提取物采用硅胶柱层析分离得到纯度为80％的光甘草定成分。马淑燕，木合布力·阿布力孜，巴哈尔古丽·卡哈尔等在《光果甘草异黄酮类成分光甘草定的制备工艺》(新疆医科大学报，2007，30(7)：692-694)中报道了提取和分离新疆光果甘草(Gly cyrrhiza glabra L)的异黄酮类活性成分光甘草定(Glabridin，GB)的工艺，采用丙酮粗提光果甘草提取物，氧化铝和硅胶柱层析法分离不同极性的组分，制备型薄层层析法和重结晶法进行纯化，核磁共振、质谱、红外和紫外光谱法进行结构鉴定。郭瑞丽，李雪琴，张晓鹏在《光果甘草中光甘草定的微波辅助提取研究》中报道了研究新疆光果甘草根中光甘草定(Glabridin，GB)的检测条件和提取工艺，采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对光甘草定和光果甘草根提取物进行分析测定，考察提取溶剂、提取方法对光甘草定得率的影响，微波提取法适用于光甘草定的提取，在提取溶剂为70％乙醇水溶液，料液比为1∶15(g/ml)，温度为65℃，单次提取40min的条件下，光甘草定得率为0.256％。李雪琴，郭瑞丽在《疏水性离子液体萃取光甘草定》(化学研究与应用，2013，25(2)：169-173)中报道了选择了疏水性的离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C4mim])PF₆])和亲水性的离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐([C4mim][BF₄])作萃取剂，对光甘草定提取液进行了萃取，并对离子液体的再生进行了研究。结果表明，亲水性的离子液体和光甘草定提取液无法分层，而疏水性的离子液体分层清晰，并得疏水性离子液体[C₄mim][PF₆]萃取光甘草定最佳萃取工艺条件为：相体积比为1∶2.5(V/V)，pH7，萃取温度45℃，萃取时间30min，此时光甘草定的萃取率达85.49％。离子液体再生选用2mol·L^-1氢氧化钠和无水乙醇混合液做反萃剂，可得光甘草定的回收率大于90％，离子液体循环使用5次，萃取率未见明显下降。李玉会，徐德平，张连富在《同时提取光果甘草中光甘草定和甘草酸的工艺研究》(天然产物研究与开发，2011，23：547-550)中报道了光果甘草中光甘草定、甘草酸两种重要活性成分的同时提取工艺。通过单因素试验确定了影响提取的主要因素及适宜水平范围，通过正交试验确定了其最佳提取条件，用含0.6％氨水的60％乙醇溶液作为提取剂，料液比为1∶20(w∶v)，在75℃条件下提取2h。最佳提取条件下光甘草定的得率为0.238％±0.002％，甘草酸的得率为5.08％±0.03％。徐岩，张清溪，袁其朋等在，《响应面法优化超声提取光果甘草中光甘草定的工艺研究》(食品科技，2009，34(12)：235-239)中报道了不同有机溶剂对光果甘草中光甘草定的提取效果，确定了最佳提取溶剂。在单因素实验的基础上，选择超声提取液料比、提收时间和超声功率3因素为自变量，光甘草定提取率为响应值，采用3因素3水平的响应面实验方法，对光果甘草中光甘草定的超声波提取工艺条件进行了优化。结果表明，最佳工艺条件为：以乙酸乙酯为溶剂超声提取，液料比23∶1(mL/g)、提取2次、提取温度44℃、提取时间30min、超声功率500W，该条件提取光甘草定的提取率为0.269％。樊金玲，张琳，朱文学等在《响应面法优化提取光甘草定工艺的研究》(中国食品学报，2012，12(4)：72.75)中报道了光果甘草中光甘草定的提取工艺，在单因素实验的基础上，以100％工业甲醇为提取溶剂，选定料液比、提取时间和提取温度3个因素的3个水平进行中心组合实验，建立光甘草定得率和纯度的二次回归方程，其决定系数分别为98.08％和91.21％。通过响应面及岭嵴分析得到优化的提取工艺条件是：料液比1∶38.5g/mL、提取时间64min、提取温度50.4℃，光甘草定得率预测值为0.52％，验证值为0.51％。赛力曼·哈得尔，李宏智，木合布力·阿布力孜等在《新疆甘草黄酮类成分光甘草定的制备工艺改进》(亚太传统医药，2008，4(9)：27-28)中报道了利用简便方法提取和分离新疆光果甘草异黄酮类成分光甘草定的工艺。分别利用二氯甲烷、甲醇和乙醇等3种溶剂提取法，对光果甘草中光甘草定的提取率进行考察，再利用硅胶柱层析和制备薄层层析法对光甘草定进行分离纯化，利用3种不同提取方法获得的光果甘草总黄酮粗提物中，光甘草定的含量分别达2.9％、2.6％和2.3％。

本发明采用乙醇或乙酸乙酯回流提取，浓缩至比重1.05-1.10；或用碱水提取，酸液沉淀，乙酰化后分离纯化，再柱色谱。有机溶剂提取物浓缩回收溶剂后加水稀释，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取分离，再采用硅藻土、硅胶、DEAE纤维素、聚酰胺树脂、中性氧化铝柱色谱，以不同极性的洗脱剂洗脱，薄层色谱监测，洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定。

发明内容

为克服背景技术中的不足，本发明旨在提供一种光甘草定的制备方法。

本发明的技术解决方案是：

一种光甘草定的制备方法，包括如下步骤：

(1)提取，浓缩：乙醇或乙酸乙酯回流提取，浓缩至比重1.05-1.10；或用碱水提取，酸液沉淀。

(2)萃取分离：用石油醚、氯仿、乙酸乙酯分别萃取3-5次；依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3-5次，分别将这些萃取液和水萃取液减压浓缩至稠膏。

(3)柱色谱：分别用硅藻土、硅胶、DEAE-纤维素、聚酰胺树脂、中性氧化铝柱色谱。

(4)结晶纯化：洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定。

具体实施方式

方式一：光果甘草50kg粉碎，分别用95％乙醇500、400、300kg回流提取2.0、1.5、1.0h，第三次提取液下批料套用，将前两次提取液合并浓缩，浓缩至比重1.05-1.10，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯分别萃取3-5次，氯仿萃取液浓缩后硅藻土1000g拌样，干燥后用索氏提取器提取，依次用石油醚→乙酸乙酯→丙酮→乙醇提取，回收溶剂后取乙酸乙酯部分200g用硅胶柱色谱，先用石油醚洗脱，再用石油醚-甲醇(100∶5-100∶20，V∶V)梯度洗脱，分为6部分(Fr₁：14.5g；Fr₂：25.8g；Fr₃：4.7g；Fr₄：3.6g；Fr₅：26.5g Fr₆：8.3g)，Fr₅部分采用硅胶柱色谱进行分离，以氯仿-甲醇(100∶3-100∶10，V∶V)梯度洗脱，氯仿-甲醇(100∶3-100∶6，V∶V)洗脱部分用制备硅胶薄层分离，以石油醚-乙酸乙酯(100∶15，V∶V)进行分离，制得化合物1(10mg)，氯仿-甲醇(100∶7-100∶10，V∶V)洗脱部分经硅胶减压柱分离，以石油醚-丙酮(100∶8)洗脱，中洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定，含量98.6％.

方式二：干燥光果甘草依次用正己烷、乙酸乙酯回流提取，分别得正己烷、乙酸乙酯提取物，取乙酸乙酯提取物50g，经硅胶H干柱色谱，正己烷、氯仿、丙酮依次洗脱。氯仿洗脱液浓缩得到黄色粉末15g，继用硅胶H制备薄层色谱，氯仿-乙酸乙酯-甲醇(10∶1∶6，V∶V)展开，刮取色带，用乙醇反复重结晶得晶体1、2、3。丙酮洗脱液浓缩得到黄色粉末25g，取丙酮提取物用氯仿溶解，过滤，氯仿液运用硅胶减压柱色谱，先以氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(100∶5-100∶10，V∶V)梯度洗脱，TLC检测，收集目标成分，洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定。含量99.2％。

方式三：将光果甘草破碎，以5％氢氧化钠水溶液浸取，过滤，滤液酸化至pH2-3，得褐色沉淀物，将沉淀物磨成粉末，用乙醚提取2次，合并二次提取液，水浴中回收乙醚，残留物用乙酸乙酯提取，浓缩提取液，蒸去溶剂，得深褐色膏状物，加入少许吡啶，震荡混匀，加少量乙酸酐水浴回流10min，放入20倍冰水中，放置过夜，有褐色沉淀，沉淀用盐酸和冷水洗涤、以5％氢氧化钠于室温水解，以薄层色谱监测，待脱乙酰化反应完全后，过滤，酸化至pH2-3，洗涤，干燥，得白色沉淀，溶于少量氯仿，过滤，DEAE纤维素处理，装柱，平衡，洗脱液先用乙酸乙酯-乙醇-水(100∶8∶5，V∶V)，再用乙酸乙酯-乙醇-丙酮-水(100∶8∶2∶5，V∶V)，上样量为柱床体积的150(W/V)，连接层析检测仪进行梯度洗脱，收集目标成分洗脱液，中洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定。

方式四：光果甘草50kg粉碎，分别用95％乙醇500、400、300kg回流提取2.0、1.5、1.0h，第三次提取液下批料套用，将前两次提取液合并浓缩，浓缩至1.05-1.10，加10倍量蒸馏水稀释，装入分液漏斗中，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3-5次，分别将这些萃取液和水萃取液减压浓缩至稠膏，取氯仿提取物20g，用少量氯仿溶解，与100g中性氧化铝混匀，室温下挥发除尽溶剂，加于中性氧化铝柱上，先用石油醚洗脱，再用石油醚-氯仿(1∶1，V∶V)洗脱，氯仿洗脱，氯仿-甲醇(100∶5-100∶10，V∶V)梯度洗脱，得到35个流分，第1流分为石油醚洗脱物，第2流分为石油醚-氯仿(1∶1，V∶V)洗脱物，第3-8流分为氯仿洗脱物，第9-15流分为氯仿-甲醇(100∶5，V∶V)洗脱物，第16-21流分为氯仿-甲醇(100∶7，V∶V)洗脱物，第21-31流分为氯仿-甲醇(100∶9，V∶V)洗脱物，第32-35流分为氯仿-甲醇(100∶10，V∶V)洗脱物，根据薄板色谱结果，将它们合并成4个流分，将流分1-8、流分9-18、流分19-28、流分29-35分合并，将流分19-28部分干法装柱，上湿样，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(100∶9，V∶V)洗脱，经薄层色谱结果，合并同类项，中洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定，含量99.6％。

方式五：光果甘草50kg粉碎，分别用95％乙醇500、400、300kg回流提取2.0、1.5、1.0h，第三次提取液下批料套用，将前两次提取液合并浓缩，浓缩至比重1.05-1.10，加10倍量蒸馏水稀释，装入分液漏斗中，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯等体积萃取3-5次，弃去石油醚层，氯仿在减压旋转蒸发仪内浓缩成浸膏，加入燕馏水，60℃水浴加热2h，静置到室温，过滤，弃去滤液，重复3次，挥干溶剂后得到浓缩物与硅藻土拌样挥干，装入玻璃管柱中，先用石油醚洗脱，去除其中的叶绿素和极性较小的成分，洗脱结束后倒出硅藻土挥干溶剂，重新装入玻璃管柱，用石油醚-乙醇(100∶8，V∶V)洗脱，用1％三氯化铝乙醇溶液与黄酮类化合物在滤纸上显色后，用在紫外灯下观察有无黄绿色荧光，提取至流洗液无黄酮反应时结束，洗脱液浓缩后挥干溶剂，用少量95％的乙醇溶解后上聚酰胺树脂柱，依次用水和20-80％的乙醇洗脱，薄层色谱监测，收集目标成分洗脱液，中洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定。

Claims

1.一种光甘草定的制备方法，以光果甘草为原料，该方法包含以下步骤：

(1)提取，浓缩。

(2)萃取分离。

(3)柱色谱。

(4)结晶纯化。

2.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(1)中光果甘草粉碎，分别用95％乙醇回流提取2.0、1.5、1.0h，第三次提取液下批料套用，将前两次提取液合并浓缩，浓缩至比重1.05-1.10；干燥光果甘草依次用正己烷、乙酸乙酯回流提取，分别得正己烷、乙酸乙酯提取物；光果甘草破碎，以5％氢氧化钠水溶液浸取，过滤，滤液酸化至pH2-3，得褐色沉淀物，将沉淀物磨成粉末。

3.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(2)中依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3-5次，分别将这些萃取液和水萃取液减压浓缩至稠膏。

4.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(3)中氯仿萃取液浓缩后硅藻上拌样，依次用石油醚→乙酸乙酯→丙酮→乙醇提取，回收溶剂后取乙酸乙酯部分用硅胶柱色谱，先用石油醚洗脱，再用石油醚-甲醇(100∶5-100∶20，V∶V)梯度洗脱，再采用硅胶柱色谱进行分离，以氯仿-甲醇(100∶3-100∶10，V∶V)梯度洗脱，氯仿-甲醇(100∶3-100∶6，V∶V)洗脱部分用制备硅胶薄层分离，氯仿-甲醇(100∶7-100∶10，V∶V)洗脱部分经硅胶减压柱分离，以石油醚-丙酮(100∶8)洗脱。

5.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(3)中乙酸乙酯得取物经硅胶H干柱色谱，正己烷、氯仿、丙酮依次洗脱，氯仿洗脱液浓缩用硅胶H制备薄层色谱，氯仿-乙酸乙酯-甲醇(10∶1∶6，V∶V)展开，刮取目标成分色带，用氯仿溶解，过滤，氯仿液用硅胶减压柱色谱，先以氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(100∶5-100∶10，V∶V)梯度洗脱，TLC检测，收集目标成分洗脱液。

6.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(3)中粗品溶于少量氯仿，过滤，DEAE纤维素处理，装柱，平衡，洗脱液先用乙酸乙酯乙醇水(100∶8∶5，V∶V)，再用乙酸乙酯乙醇丙酮-水(100∶8∶2∶5，V∶V)，，连接色谱检测仪进行梯度洗脱，收集目标成分洗脱液。

7.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(3)中氯仿提取物用少量氯仿溶解，与中性氧化铝混匀，室温下挥发除尽溶剂，加于中性氧化铝柱上，先用石油醚洗脱，再用石油醚-氯仿(1∶1，V∶V)洗脱，氯仿洗脱，氯仿甲醇(100∶5100∶10，V∶V)梯度洗脱，根据薄板色谱结果，合并相同流分，将含有目标成分部分干法装柱，上湿样，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(100∶9，V∶V)洗脱，经薄层色谱结果，合并目标成分部分。

8.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(3)中粗品浓缩物与硅藻土拌样挥干，装入色谱柱中，先用石油醚洗脱，洗脱结束后倒出硅藻土挥干溶剂，重新装入色谱柱柱，用石油醚-乙醇(100∶8，V∶V)洗脱，用1％三氯化铝乙醇溶液与黄酮类化合物在滤纸上显色后，用在紫外灯下观察有无黄绿色荧光，提取至流洗液无黄酮反应时结束，洗脱液浓缩后挥干溶剂，用少量95％的乙醇溶解后上聚酰胺树脂柱，依次用水和20-80％的乙醇洗脱，薄层色谱监测，收集目标成分洗脱液。

9.如权利要求1所述的一种光甘草定的制备方法，其特征在于，步骤(4)中洗脱液加入3-5％活性炭回流脱色30min，浓缩结晶，结晶物中加入石油醚、正己烷或乙醚中之一，充分搅匀滴入少量甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷或正丁醇中之一或混合溶剂，直至结晶物上少量色素漂洗干净，得到白色有光泽的光甘草定。