CN102000066A

CN102000066A - 水朝阳旋覆花提取物,以其为有效成分的抗肿瘤药物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102000066A
Application number: CN 201010291812
Authority: CN
Inventors: 嵇长久; 董坚; 谭宁华; 洪敏�; 张玉梅; 刘为青; 何敏; 曾广智; 范君婷; 黄火强
Original assignee: FIRST AFFILIATED HOSPITAL OF KUNMING MEDICAL SCHOOL; Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: FIRST AFFILIATED HOSPITAL OF KUNMING MEDICAL SCHOOL; Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2010-09-26
Filing date: 2010-09-26
Publication date: 2011-04-06
Anticipated expiration: 2030-09-26
Also published as: CN102000066B

Abstract

本发明涉及从水朝阳旋覆花的花和叶中提取分离到的具有抗肿瘤活性倍半萜内酯成分水朝阳内酯(Ergolide，Erg.)与锦菊素(Bigelovin，Big.)混晶的提取物，其制备方法，以其为有效成分的抗肿瘤药物和其在抗癌药物中的应用。本发明的提取方法与现有技术相比较，提高了提取效率，简化了重结晶的次数，结晶的量大大提高，另外将Erg.和Big.不进行分离，简化分离的步骤，将活性更好的Big.保留下来，资源充分利用。

Description

水朝阳旋覆花提取物,以其为有效成分的抗肿瘤药物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体地，涉及从水朝阳旋覆花的花和叶中提取分离到的具有抗肿瘤活性倍半萜内酯成分水朝阳内酯(Ergolide，Erg.)与锦菊素(Bigelovin，Big.)混晶的提取物，其制备方法，以其为有效成分的抗肿瘤药物和其在抗癌药物中的应用。

背景技术

水朝阳旋覆花是菊科旋覆花属植物(Inula helianthus-aquatica C.Y.Wuex Ling)，水朝阳旋覆花全株供药用，在云南省等西南地区作为中药旋覆花使用。据中药大辞典记载，其花序或全草味腥、咸，微苦，性凉。具有下气、行水、软坚、清热解表、降气祛痰的功能。用于感冒头痛、发热、鼻炎、眼痛、百日咳、咳嗽、支气管哮喘、呕逆、经如胶漆、胸满肋痛、大腹水肿、心下痞坚、头目眩晕。其根有消肿的功能，用于牙龈炎、口腔溃疡、气管炎。另据抗癌中药大全记载，其水提液或醇提液或提取的旋覆花内酯为抗癌有效成分，有较强的抑制癌细胞作用，其抗癌效价大于常用化疗药5-Fu。云南民间用于治疗食道癌、胃癌、结肠癌、纵膈肿瘤、乳腺癌、牙龈癌和脑部肿瘤等。

水朝阳旋覆花中富含倍半萜内酯类成分，经药理试验证明该倍半萜内酯类成分为其抗癌作用物质基础，其中代表成分为水朝阳内酯(Erg.)与锦菊素(Big.)。现有的发明专利CN1255333“水朝阳内酯的药物用途”和CN1089945“抗癌药物水朝阳内酯”，仅涉及抗癌成分水朝阳内酯(Erg.)及其制备方法和用途。其采用的有效成分仅涉及Erg.，其采用的提取工艺为：水朝阳草置索氏提取器中加2倍重量比的石油醚，80℃水浴回流提取，冷时析出结晶；过滤，用甲醇反复重结晶，即得水朝阳内酯类成分；再经硅胶柱层析(样品∶硅胶＝1∶200)分离，氯仿洗脱，TLC检测合并相同部分，甲醇结晶得Erg.。这种方法不仅适用规模较小，而且采用分离方法制得水朝阳内酯，将其他活性物质完全丢弃，工艺步骤复杂，溶剂浪费大。

现有技术中未见有同时含有Erg.和Big.为有效成分的提取物和抗癌药的报道，也未有同时制备提取含Erg.和Big.两种成分的方法报道。

(水朝阳内酯) (锦菊素)

发明內容

本发明的目的在于提供含有以水朝阳内酯(Erg.)和锦菊素(Big.)为有效成分的水朝阳旋覆花提取物，含其的抗癌药物，该药物按主要活性成分在原料中含量分布情况，将活性成分通过配方使其比例固定，从而保证了疗效稳定，可控，适用于工业化生产；同时提供本发明水朝阳旋覆花提取物及含其的药物的制备方法，该方法提取效率高，工艺操作简单，保留水朝阳旋覆花的主要抗癌活性成分，适用于工业化生产。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案：

水朝阳旋覆花提取物，由下述方法获得：取干燥水朝阳旋覆花的花和叶进行分别处理，用花和叶药材重量6-10倍体积的石油醚回流提取，减压回收溶剂得石油醚浸膏；将花和叶的石油醚浸膏分别注入50％-80％乙醇，加热回流，稍冷过滤，除去不溶物，回收溶剂得醇水处理浸膏；花和叶的醇水处理浸膏分别用适量无水乙醇加热溶解，冷却后即有大量结晶析出，所得结晶再经无水乙醇重结晶后即得Erg.和Big.两者的混晶，两者含量可达95％以上。花和叶结晶分别经HPLC含量分析后得两者中Erg.和Big.的含量比，再将两者调配成Erg.和Big.的含量比在1∶0.8-1.2范围内，即得所需水朝阳旋覆花提取物，命名为IHA-01。

将花、叶混晶Erg./Big.含量比调配成1∶0.8-1.2的终产物IHA-01是按下述步骤进行：设花结晶中Erg./Big.为1∶a，叶中为1∶b，花结晶量为1，叶结晶量为x，需要调配Erg./Big.的比例为1∶c，其中c取值范围为0.8-1.2，两者调配公式为x＝(1+b)(c-a)/(1+a)(b-c)。

以本发明水朝阳旋覆花提取物为有效成分和药学上可接受的载体制成的抗肿瘤药物。

本发明水朝阳旋覆花提取物的制备方法，取干燥水朝阳旋覆花的花和叶进行分别处理，用花和叶药材重量6-10倍体积的石油醚回流提取，减压回收溶剂得石油醚浸膏；将花和叶的石油醚浸膏分别注入50％-80％乙醇，加热回流，稍冷过滤，除去不溶物，回收溶剂得醇水处理浸膏；花和叶的醇水处理浸膏分别用适量无水乙醇加热溶解，冷却后即有大量结晶析出，所得结晶再经无水乙醇重结晶后即得Erg.&Big.两者的混晶，两者含量可达95％以上。花和叶结晶分别经HPLC含量分析后得两者中Erg.&Big.含量比，设花结晶中Erg./Big.为1∶a，叶中为1∶b，花结晶量为1，叶结晶量为x，需要调配Erg./Big.的比例为1∶c，其中c为0.8-1.2，两者调配公式为x＝(1+b)(c-a)/(1+a)(b-c)，将花、叶混晶两者调配成Erg.和Big.含量比在1∶0.8-1.2范围内，即得所需水朝阳旋覆花提取物，命名为IHA-01。

本发明水朝阳旋覆花提取物在制备治疗癌症的药物中的应用。

本发明的提取方法与现有技术相比较，提高了提取效率，简化了重结晶的次数，结晶的量大大提高，另外不对Erg.和Big.进行分离，简化分离的步骤，将活性更好的Big.保留下来，资源充分利用。通过对不同产地的水朝阳旋覆花的花和叶中Erg.与Big.的HPLC含量分析，确定将Erg.与Big.含量比例调配至1∶0.8-1.2范围内，得到精确控制的水朝阳旋覆花的提取物产品。

附图说明：

图1为本发明IHA-01混晶(Erg.&Big.)的HPLC图谱；

图2为Erg.与Big.的标准曲线图；

图3为三个产地花和叶HPLC分析图谱，KMF、DLF、LQF分别表示昆明、大理、禄劝产的花；KML、DLL、LQL分别表示昆明、大理、禄劝产的叶。

具体实施方式：

下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

本发明提取水朝阳旋覆花提取物的工艺试验：

本发明工艺所用的原料收集于云南省不同产地，以Erg.与Big.纯品分别制作标准曲线用以提取工艺中样品含量分析，见附图1和2。提取溶剂种类和浓度、提取方法等经过正交试验设计研究而成，保证了水朝阳旋覆花的抗癌活性成分的得率高；醇水处理过程中有效成分的转移率高。

水朝阳旋覆花的花和叶中都含有Erg.与Big.，按提取工艺步骤提取得到的抗癌成分主要为两者的混晶，两者的含量比例因不同产地而有含量差异，花中Erg.含量高于Big.，而叶中则以Big.为主。不同产地的水朝阳旋覆花的花和叶的HPLC含量分析见附图3。

其提取制备工艺的研究步骤和详细数据如下：

1、原料药材：

昆明、大理、禄劝三个产地的水朝阳旋覆花的干燥花和叶。

选用昆明产的水朝阳旋覆花的干燥花和叶分别做正交提取。

2、优化提取工艺的技术条件：

2.1溶剂提取工艺选择试验：

Erg.与Big.属于倍半萜内酯类成分，极性较低，易溶于氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇等溶剂中，而室温下又微溶于石油醚，难溶于水。考虑到这类成分的理化性质，用乙醇提取后浸膏成分复杂，再用石油醚萃取效率不高，造成有效成分分散，或需萃取多次而造成费时费力又费溶剂。本发明通过反复试验，最后选择石油醚作溶媒，热提3-4次即可较完全地提取出Erg.与Big.，而且其它成分较少提出，便于纯化除杂。

2.2醇水处理工艺选择试验：

石油醚提取浸膏虽用无水乙醇或甲醇直接处理即可以析出部分结晶，但因其中含有大量油脂及叶绿素等小极性成分，会影响结晶的效率和得率。根据Erg.与Big.的理化性质，本发明又对其进一步除杂，用含水乙醇对石油醚提取浸膏进行热回流，提取两次可将绝大部分Erg.与Big.提取出来，转移率可达70-95％，而弃去大量低极性杂质成分和叶绿素，处理后的浸膏再用无水乙醇结晶后，得到的粗晶量较多而且重结晶步骤又少。

在重结晶试验中发现Erg.与Big.在热的无水乙醇中的溶解度与室温下乙醇中差别很大，因此用之作重结晶溶剂非常良好。考虑到无水乙醇和95％的乙醇的成本问题，本发明对两者作重结晶溶剂进行了观察比较，发现还是无水乙醇效果较好：重结晶所需乙醇体积较少，结晶的量和晶型都较好。

2.3提取工艺的优化试验：

具体的工艺流程通过下面一系列正交试验得到进一步确认。

为了考察最佳石油醚提取工艺条件，以提取温度70℃、80℃、90℃，溶剂体积6、8、10倍，提取时间1.5、2.0、2.5小时和提取次数2、3、4次，为影响因素，以浸膏得率、浸膏中Erg.&Big.的总百分含量为评价指标，综合比较，进行四因素三水平L₉(3⁴)正交提取试验。由于样品来自三个产地，样品较多，考虑到昆明产地的样品便于采集研究和质量控制，同时预试验中昆明的样品的含量和比例基本处于中间水平，于是本发明对昆明产的花和叶分别进行了正交提取试验。

表1三个产地花和叶一次提取所得浸膏中Erg.与Big.含量分析结果

No.	Con._Big.	Con._Erg.	Big./Erg.	Erg.&Big.％
					KMF	1.80E-01	3.81E-01	0.472	3.51E-01
DLF	4.02E-01	4.47E-01	0.898	5.31E-01
					LQF	5.91E-02	1.90E-01	0.311	1.56E-01
KML	2.86E-01	2.13E-01	1.34	3.12E-01
					DLL	2.54E-01	9.84E-02	2.59	2.20E-01
LQL	2.24E-01	2.31E-01	0.97	2.84E-01

Con._Big.和Con._Erg.分别表示两者的浓度，单位为mg/ml。

本发明较好的提取分离条件是：用药材重量6-10倍体积的石油醚，于70-90℃条件下回流提取。较好的条件为用药材重量8-10倍体积的石油醚，于80-90℃条件下回流提取3-4次。

2.4醇水处理工艺的优化试验：

为了进一步富集Erg.&Big.，使其在浸膏中的百分含量提高，以利于结晶效果，考虑到含水乙醇在热提下能将石油醚提取浸膏中Erg.&Big.较好地富集出来，除去大量杂质成分(经过预试发现)，本发明将花和叶石油醚提取正交试验所得浸膏分别合并、混匀后，各取9份等重的浸膏样品，以酒精浓度50％、60％、70％，酒精体积10、15、20倍，和水浴时间1.0、1.5、2.0h进行三因素三水平醇水处理L₉(3³)正交提取试验，摸索最佳醇水处理工艺。水浴温度80℃，加热5分钟后计时，提取两次，稍冷至60℃趁热过滤上清液，合并，蒸干称重。残渣用无水乙醇溶解过滤蒸干得残留物。醇水处理后所得浸膏及对应残留物(Rinsing)与处理之前的对照品(Control)一起进行HPLC定量分析，以醇水处理后Erg.&Big.转移百分量(Trans％)和醇水处理后所得浸膏中Erg.&Big.的百分含量为评价指标，两者的权重系数分别为0.7和0.3。

本发明较好的醇水处理工艺条件是：以乙醇浓度为60-70％，体积为15-20倍，80℃回流1.5-2小时。

2.5TLC条件试验：

硅胶G板；展开剂：石油醚-丙酮(2∶1)；显色剂：间二硝基苯-氢氧化钾溶液、5％硫酸/乙醇溶液。

混晶按TLC条件展开，用间二硝基苯-氢氧化钾显色剂显色，出现一红一紫两斑点，Rf值分别为0.45和0.4左右，红点在上为Erg.，紫点为Big.。若用硫酸显色剂，长时间加热显色，显示出两个黄色斑点。

2.6色谱分析条件：

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18，Stable Bond Analytical 4.6*150mm，5μm；流动相：甲醇-水50％；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：30℃；进样量：5μl；分析时间15-20分钟。Erg.和Big.的保留时间分别为8.2’和5.4’。

3、本发明水朝阳旋覆花提取物的制备方法：取干燥水朝阳旋覆花的花和叶进行分别处理，用花和叶药材重量6-10倍体积的石油醚回流提取，减压回收溶剂得石油醚浸膏；将花和叶的石油醚浸膏分别注入50％-80％乙醇，加热回流，稍冷过滤，除去不溶物，回收溶剂得醇水处理浸膏；花和叶的醇水处理浸膏分别用适量无水乙醇加热溶解，冷却后即有大量结晶析出，所得结晶再经无水乙醇重结晶后即得Erg.与Big.两者的混晶，两者含量可达95％以上。花和叶结晶分别经HPLC含量分析后得两者中Erg.与Big.含量比，设花结晶中Erg./Big.为1∶a，叶中为1∶b，花结晶量为1，叶结晶量为x，需要调配Erg./Big.的比例为1∶c，其中c取值范围为0.8-1.2，两者调配公式为x＝(1+b)(c-a)/(1+a)(b-c)，将花、叶混晶两者调配成Erg.和Big.含量比在1∶0.8-1.2范围内，即得所需终产物水朝阳旋覆花提取物，命名为IHA-01。

由上述制备方法制得的水朝阳旋覆花提取物IHA-01经药效学研究证明，体外试验对人源肺癌、胃癌、肠癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、鼻咽癌、胆管癌及非人源肿瘤等细胞株均有不同程度的杀伤作用和生长抑制作用。对人胚肺二倍体正常细胞无抑制现象，说明其对增殖异常细胞有特异杀伤作用，可能为细胞周期依赖药物。

药物稳定性及质量标准检测：制剂经二年多常温保存，其理化特性、抗癌活性及有效成分含量均稳定。

此外，通过上述方法得到的水朝阳旋覆花提取物IHA-01混晶，经过硅胶柱层析(石油醚∶丙酮＝5∶1)或反相HPLC制备柱层析(甲醇∶水＝1∶1)分离，可制得Erg.及Big.的纯品，单独应用Erg.或Big.的药效学研究证明Big.的活性明显强于Erg.，活性强度在一到十倍左右，应与其在五元环上形成α，β不饱和酮有关。

实施例2：

本发明水朝阳旋覆花提取物IHA-01的制备：

原料：昆明产的水朝阳旋覆花的干燥花和叶。

1、花四因素三水平正交提取试验L₉(3⁴)中的一个例子，取花200g，置于2000ml圆底烧瓶中，加入1600ml石油醚，操作温度为90℃，水浴锅上加热，回流提取四次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏，浸膏得率为5.89％，Erg.&Big.总含量为6.68‰，Erg./Big.的比例为1∶0.5，提取完全率达78.6％。

2、花四因素三水平正交提取试验L₉(3⁴)中的另一个例子，取花200g，置于2000ml圆底烧瓶中，加入1200ml石油醚，操作温度为80℃，水浴锅上加热，回流提取四次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏，浸膏得率为5.46％，Erg.&Big.总含量为6.15‰，Erg./Big.的比例为1∶0.51，提取完全率达72.4％。

3、取花200g，置于3000ml圆底烧瓶中，加入2000ml石油醚，操作温度为70℃，水浴锅上加热，回流提取四次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏，浸膏得率为6.34％，Erg.&Big.总含量为7.32‰，Erg./Big.的比例为1∶0.5，提取完全率达86.2％。

4：叶四因素三水平正交提取试验L₉(3⁴)中的一个例子，取叶200g，置于2000ml圆底烧瓶中，加入1600ml石油醚，操作温度为90℃，水浴锅上加热，回流提取四次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏，浸膏得率为4.47％，Erg.&Big.总含量为11.4‰，Erg./Big.的比例为1∶1.34，提取完全率达98％。

5、叶四因素三水平正交提取试验L₉(3⁴)中的另一个例子，取叶200g，置于3000ml圆底烧瓶中，加入2000ml石油醚，操作温度为80℃，水浴锅上加热，回流提取三次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏，浸膏得率为4.09％，Erg.&Big.总含量为8.30‰，Erg./Big.的比例为1∶1.36，提取完全率达71.6％。

6、取叶200g，置于3000ml圆底烧瓶中，加入2000ml石油醚，操作温度为70℃，水浴锅上加热，回流提取四次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏，浸膏得率为4.41％，Erg.&Big.总含量为8.96‰，Erg./Big.的比例为1∶1.36，提取完全率达77.0％。

7、用上述步骤1、2、3所述正交试验所得到的花石油醚浸膏全部合并，混匀，各取9份各10g石油醚浸膏样品，以乙醇浓度、乙醇体积和水浴回流时间进行三因素三水平醇水处理L₉(3³)正交试验。正交试验中一例，取10g花石油醚浸膏，加入15倍体积70％乙醇，80℃回流，回流1个小时，提取两次，稍冷至60℃，趁热过滤上清液，合并滤液，减压蒸干，得醇水处理浸膏，称重。HPLC分析发现Erg.&Big.转移率为69.1％，含量由10.8％提高到33.9％。

8、取10g花石油醚浸膏，加入20倍体积60％乙醇，80℃回流，回流2个小时，提取两次，稍冷至60℃，趁热过滤上清液，合并滤液，减压蒸干，得醇水处理浸膏，称重。HPLC分析发现Erg.&Big.转移率为78.7％，含量由10.8％提高到35.8％。

9、用上述步骤4、5、6所述正交试验所得到的叶石油醚浸膏全部合并，混匀，各取9份各10g叶石油醚浸膏样品，以乙醇浓度、乙醇体积和水浴回流时间进行三因素三水平醇水处理L₉(3³)正交试验。正交试验中一例，取10g叶石油醚浸膏，加入15倍体积70％乙醇，80℃回流，回流1个小时，提取两次，稍冷至60℃，趁热过滤上清液，合并滤液，减压蒸干，得醇水处理浸膏，称重。HPLC分析发现Erg.&Big.转移率为99.2％，含量由19.0％提高到30.6％。

10、取10g叶石油醚浸膏加入20倍体积60％乙醇，80℃回流，回流2个小时，提取两次，稍冷至60℃，趁热过滤上清液，合并滤液，减压蒸干，得醇水处理浸膏，称重。HPLC分析发现Erg.&Big.转移率为86.0％，含量由19.0％提高到32.5％。

11、将上述步骤7、8所得到的花的醇水处理正交试验所得浸膏全部合并，加入5倍体积的无水乙醇，水浴加热至全溶，自然冷却即析出大量结晶，所得结晶再用无水乙醇重结晶一次，即得高纯度的Erg.&Big.混晶。结晶后的母液浓缩后再反复重结晶得较高纯度的混晶，合并混晶即得花部位的结晶，HPLC分析该混晶中Erg.&Big.含量达95％以上，两者含量比为1∶0.54。

12、将上述步骤9、10所得到的叶的醇水处理正交试验所得浸膏全部合并，加入5倍体积的无水乙醇，水浴加热至全溶，自然冷却即析出大量结晶，所得结晶再用无水乙醇重结晶一次，即得高纯度的Erg.&Big.混晶。结晶后的母液浓缩后再反复重结晶得较高纯度的混晶，合并混晶即得叶部位的结晶，HPLC分析该部位混晶中Erg.&Big.含量达95％以上，两者含量比为1∶1.36。

13、设花结晶中Erg./Big.为1∶a，叶中为1∶b，花结晶量为1，叶结晶量为x，需要调配Erg./Big.的比例为1∶c，其中c取值范围为0.8-1.2，两者调配公式为x＝(1+b)(c-a)/(1+a)(b-c)；取上述步骤11、12所得到的花和叶部位的结晶分别1.00g和1.25g混合均匀，研成细粉，即得本发明的Erg./Big.含量比为1∶1的IHA-01提取物。

实施例3：

取花500g，置于10L圆底烧瓶中，加入石油醚5L，操作温度为80℃，水浴锅上加热，回流提取四次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏28.5g，浸膏得率为5.7％，Erg.&Big.总含量为7.76‰，Erg./Big.的比例为1∶0.53。取石油醚浸膏，加入20倍体积的70％乙醇，于80℃水浴锅上加热，回流提取二次，倾出上清液，过滤，减压回收溶剂得醇水处理浸膏8.6g，醇水处理浸膏中加入无水乙醇50ml，加热至全溶，自然冷却，得粗晶，结晶后的母液再浓缩后继续析出晶体，合并两次粗晶，再用无水乙醇重结晶一次，即得高纯度的混晶2.8g，得率为5.6‰，Erg./Big.为1∶0.51。

取叶500g，置于10L圆底烧瓶中，加入石油醚5L，操作温度为80℃，水浴锅上加热，回流提取四次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂得浸膏23.5g，浸膏得率为4.7％，Erg.&Big.总含量为9.85‰，Erg./Big.的比例为1∶1.39。取石油醚浸膏，加入20倍体积的70％乙醇，于80℃水浴锅上加热，回流提取二次，倾出上清液，过滤，减压回收溶剂得醇水处理浸膏15.6g，醇水处理浸膏中加入无水乙醇50ml，加热至全溶，自然冷却，得粗晶，结晶后的母液再浓缩后继续析出晶体，合并两次粗晶，再用无水乙醇重结晶一次，即得高纯度的混晶3.7g，得率为7.4‰，Erg./Big.为1∶1.35。

设花结晶中Erg./Big.为1∶a，叶中为1∶b，花结晶量为1，叶结晶量为x，需要调配Erg./Big.的比例为1∶c，其中c取值范围为0.8-1.2，两者调配公式为x＝(1+b)(c-a)/(1+a)(b-c)，按此公式配制；取上述得到的花和叶部位的结晶分别1.00g和2.62g混合均匀，研成细粉，即得本发明的Erg./Big.含量比为1∶1.1的IHA-01提取物。

花和叶结晶后的母液按1∶5硅胶比例用硅胶柱层析石油醚-丙酮(20∶1，10∶1，5∶1，2∶1，0∶1)洗脱，合并10∶1～5∶1流份，无水乙醇重结晶又可得部分Erg.&Big.的混晶。

实施例4：

用实施例2或3的方法制得的IHA-01提取物研成细粉，与适量淀粉混合均匀后，常规制粒，烘干过筛整粒，冲压制成片剂。

实施例5：

用实施例2或3的方法制得的IHA-01提取物研成细粉，加入适量辅料制粒，干燥，机器灌装入胶囊，制得胶囊剂。

实施例6：

用实施例2或3的方法制得的IHA-01提取物研成细粉，加热溶解，混合均匀后，分装成5mg/2ml/支浓度的注射液于药瓶中密封，消毒制成产品。

Claims

1.水朝阳旋覆花提取物，其特征在于该提取物由下述方法获得：取干燥水朝阳旋覆花的花和叶分别按下述步骤进行处理：用药材重量6-10倍体积的石油醚回流提取，减压回收溶剂得石油醚浸膏；将石油醚浸膏注入50％-80％乙醇，加热回流，稍冷过滤，除去不溶物，回收溶剂得醇水处理浸膏；醇水处理浸膏用适量无水乙醇加热溶解，冷却后析出大量结晶；结晶再经无水乙醇重结晶一次即得到水朝阳内酯(Ergolide，Erg.)和锦菊素(Bigelovin，Big.)两者含量达95％以上的混晶，经HPLC含量分析，得出通过上述步骤分别得到的花、叶混晶两者中Erg.和Big.的含量比；再将两者调配成Erg.和Big.含量比在1∶0.8-1.2范围内的终产物水朝阳旋覆花提取物IHA-01。

2.如权利要求1所述的水朝阳旋覆花提取物，其特征在于所述将花、叶混晶Erg.和Big.含量比调配成1∶0.8-1.2范围内的终产物水朝阳旋覆花提取物IHA-01是按下述步骤进行：设花结晶中Erg./Big.为1∶a，叶中为1∶b，花结晶量为1，叶结晶量为x，需要调配Erg./Big.的比例为1∶c，其中c取值范围为0.8-1.2，两者调配公式为x＝(1+b)(c-a)/(1+a)(b-c)。

3.抗肿瘤药物，其特征在于以权利要求1所述的水朝阳旋覆花提取物IHA-01为有效成分，还含有药学上可接受的载体。

4.权利要求1所述的水朝阳旋覆花提取物的制备方法，其特征在于：取干燥水朝阳旋覆花的花和叶分别按下述步骤进行处理：用药材重量6-10倍体积的石油醚回流提取，减压回收溶剂得石油醚浸膏；将石油醚浸膏注入50％-80％乙醇，加热回流，稍冷过滤，除去不溶物，回收溶剂得醇水处理浸膏；醇水处理浸膏用适量无水乙醇加热溶解，冷却后析出大量结晶；结晶再经无水乙醇重结晶一次即得到Erg.和Big.两者含量达95％以上的混晶，经HPLC含量分析，得出通过上述步骤分别得到的花、叶混晶两者中Erg.和Big.的含量比；设花结晶中Erg./Big.为1∶a，叶中为1∶b，花结晶量为1，叶结晶量为x，需要调配Erg./Big.的比例为1∶c，其中c取值范围为0.8-1.2，最后按照调配公式为x＝(1+b)(c-a)/(1+a)(b-c)，将花、叶混晶两者调配成Erg.和Big.含量比在1∶0.8-1.2范围内的终产物水朝阳旋覆花提取物IHA-01。

5.权利要求1所述的水朝阳旋覆花提取物在制备治疗癌症的药物中的应用。