CN102178709B - 榛叶提取物的微丸及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及榛叶提取物的微丸及其制备方法。本发明的微丸包含：榛叶提取物30-90重量份、稀释剂10-75重量份、崩解剂0.5-10重量份、和任选的粘合剂。本发明还涉及包含所述微丸的包衣微丸，以及所述微丸的制备方法。本发明微丸可以结合缓释或肠溶微丸技术，制备出缓控释或肠溶微丸制剂。本发明的微丸制剂所选用主药与辅料的种类、配比剂量合理，具有良好的产率，并且具有稳定安全、溶出率高、生物利用度高、副作用小、和/或给药方便等优点。

Description

榛叶提取物的微丸及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种榛叶提取物的微丸及其制备方法，特别涉及可用于抗衰老抗氧化的榛叶提取物制成的微丸及其制备方法。

背景技术

抗氧化物质(抗氧化剂)是指能够清除氧自由基，抑制或消除以及减缓氧化反应的一类物质。抗氧化剂的开发与研究一直以来受到人们的广泛关注，特别是当科学家们发现生物体的疾病与衰老是生物体内自由基作用的结果后，抗氧化剂的研究更有了广阔的发展空间。抗氧化剂可以来源于生物体，包括动物、植物、微生物等，通常称其为天然抗氧化剂或生物氧化剂；有些抗氧化剂也可以通过化学合成的方法得到，将其称为化学合成抗氧化剂。天然抗氧化剂已从单纯作为油脂和含脂食品的抗氧化剂，发展到作为生物体内氧自由基的清除剂，起到保护生物体细胞组织，保护心脑血管循环系统、抗癌及延缓衰老等生理作用。某些植物对疾病有预防和治疗作用，大部分归因于其中含有能够清除过量自由基的抗氧化活性的成分，如黄酮类、苯酚类、皂苷类、鞣质类、生物碱类等。从植物中提取抗氧化活性成分对于开发更多更好的天然抗氧化剂，从而逐渐取代存在潜在致癌性的化学合成抗氧化剂，具有重大的现实意义。

榛属植物例如平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛，广泛分布于东北、华东、华北、西北及西南地区，其中以东北三省居多。榛属植物富含黄酮、鞣质、多酚等多种具有抗氧化活性的成分，这些成分具有多方面生理活性，可有效的防癌、抗氧化、降血脂，对心血管疾病亦具有预防作用。由于榛属植物抗氧化成分独特的生理作用，它的应用价值很高，但是对榛属植物的抗氧化成分的利用目前仍是非常少。

本领域仍然需要有新颖、有效的天然抗氧化剂，例如具有抗氧化活性的榛属植物的提取物。

微丸是指直径小于2.5mm的球状制剂。微丸服用后可均匀地分布在胃肠道内，使药物在胃肠道表面分布面积增大，从而可提高生物利用度或减少药物局部浓度过高所导致的胃肠道刺激性；在胃肠道的吸收受胃排空的影响较小，吸收均匀，个体间生物利用度差异小；流动性好，便于包装、分剂量。制成缓释、控释或肠溶微丸可控制药物的释放速度、部位和时间以达到不同的治疗目的。

虽然现有技术有报道榛属植物例如榛叶例如榛叶提取物具有相应的生物学活性。然而，对于榛叶提取物，发明人发现，在将其制备成微丸时，在将该微丸进一步包衣的过程中，出现不明原因的微丸破裂而导致包衣微丸的收率较低。因此，寻找一种适合于榛叶提取物微丸的配方对于本领域技术人员而言是极具价值的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于抗氧化的榛叶提取物微丸，以及其制备方法，以克服微丸在包衣过程中出现收率较低的问题。此外，本发明提供的微丸具有稳定性和安全性好、副作用小、溶出率高、生物利用度高、服用剂量小、和/或服用方便的特点。

概括地说，本发明第一方面提供了一种榛叶提取物的微丸，该微丸包含：榛叶提取物30-90重量份、稀释剂10-75重量份、崩解剂0.5-10重量份、和任选的粘合剂。或者，本发明第一方面提供了一种榛叶提取物的微丸，该微丸包含：榛叶提取物30-90重量％、稀释剂10-75重量％、崩解剂0.5-10重量％、和任选的粘合剂，且各组分的重量之和为100重量％。

本发明第二方面提供了一种包衣微丸，其包括本发明第一方面任一项所述的微丸以及涂渍于该微丸表面的衣材。

本发明第三方面提供了制备本发明第一方面任一项所述微丸的方法。

下面对本发明作详细说明。

本发明第一方面提供了一种榛叶提取物的微丸，该微丸包含：榛叶提取物30-90重量份、稀释剂10-75重量份、崩解剂0.5-10重量份、和任选的粘合剂。或者，本发明第一方面提供了一种榛叶提取物的微丸，该微丸包含：榛叶提取物30-90重量％、稀释剂10-75重量％、崩解剂0.5-10重量％、和任选的粘合剂，且各组分的重量之和为100重量％。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述榛叶提取物的特征在于以下(a)至(e)任一项或多项：

(a)其中含有总黄酮30～55wt％；

(b)其经FRAP法测定抗氧化活性，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为1～7g/L；

(c)其经β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性，其IC50值为1～6g/L；

(d)其经清除DPPH自由基能力的测定法测定，其IC50值为30～120mg/L；

(e)其中含有总黄酮30～55wt％；经FRAP法测定抗氧化活性，其中的抗氧化剂的浓度为1～7mmoL/L；经β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性，其IC50值为1～6g/L；经清除DPPH自由基能力的测定法测定，其IC50值为30～120mg/L。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述榛叶是选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛的榛属(Corylus)植物榛叶。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述榛叶提取物是由包括以下步骤提取得到的：

1)、提供榛属植物的提取原料(例如榛属植物(例如选自平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛，例如平榛、毛榛、或刺榛)的根、茎、叶、皮和/或榛花，优选榛叶)；

2)、将该提取原料粉碎，用10-95％乙醇，优选10-30％乙醇，更优选20％乙醇作为提取溶液，在50-90℃下回流提取，得提取液；

3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化，先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色，然后用10-95％乙醇，优选30-95％乙醇，优选50-65％乙醇，更优选60％乙醇为洗脱液进行洗脱，并通过FRAP法(铁还原抗氧化能力测试法，亦称为铁离子还原法，Ferric reducing/antioxidant power)检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分，所述大孔吸附树脂选自D101、D140、AB-8、D11、D16、HPD型(例如HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700及其组合)及其组合；

4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂，干燥，即得。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述稀释剂选自微晶纤维素、淀粉、糊精、乳糖及其组合。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述崩解剂选自交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠及其组合。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述稀释剂选自微晶纤维素、淀粉、糊精、乳糖及其组合，并且所述崩解剂选自交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠及其组合。本发明发现，通过上述稀释剂和崩解剂的组合对于克服微丸在包衣过程中收率较低是非常有益的。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述微丸包含：榛叶提取物30-75重量份、稀释剂25-60重量份、崩解剂1-6重量份、和任选的粘合剂。在一个实施方案中，所述微丸包含：榛叶提取物30-75重量％、稀释剂25-60重量％、崩解剂1-6重量％、和任选的粘合剂，且各组分的重量之和为100重量％。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述微丸包含：榛叶提取物35-65重量份、稀释剂30-60重量份、崩解剂1-6重量份、和任选的粘合剂。在一个实施方案中，所述微丸包含：榛叶提取物35-65重量％、稀释剂30-60重量％、崩解剂1-6重量％、和任选的粘合剂，且各组分的重量之和为100重量％。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述微丸包含：榛叶提取物40-60重量份、稀释剂35-60重量份、崩解剂2-4重量份、和任选的粘合剂。在一个实施方案中，所述微丸包含：榛叶提取物40-60重量％、稀释剂35-60重量％、崩解剂2-4重量％、和任选的粘合剂，且各组分的重量之和为100重量％。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述微丸包含：0-10重量份的粘合剂，优选粘合剂为0-5重量份，优选粘合剂为0-2.5重量份，优选粘合剂为0.5-2.5重量份。在一个实施方案中，所述微丸包含：0-10重量％的粘合剂，优选粘合剂为0-5重量％，优选粘合剂为0-2.5重量％，优选粘合剂为0.5-2.5重量％。在一个实施方案中，所述粘合剂选自聚维酮、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、淀粉浆、羟丙甲纤维素、明胶、聚乙二醇、海藻酸钠、水、乙醇及其组合。在一个实施方案中，所述粘合剂选自聚维酮、乙基纤维素、淀粉浆、羟丙甲纤维素、水及其组合。在一个实施方案中，所述粘合剂的用量是根据制软材操作而适量添加的。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述稀释剂是微晶纤维素并且所述崩解剂是交联聚维酮。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述稀释剂是淀粉和乳糖的组合并且所述崩解剂是羧甲基淀粉钠。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述稀释剂是微晶纤维素和糊精的组合并且所述崩解剂是交联羧甲基纤维素钠。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述稀释剂是微晶纤维素和糊精的组合并且所述崩解剂是交联聚维酮。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述稀释剂是淀粉、乳糖和糊精的组合并且所述崩解剂是低取代羟丙基纤维素。

在本发明第一方面所述微丸的一个实施方案中，所述微丸基本上包含实施例1-5所述配方和任选的适量粘合剂。

本发明第二方面提供了一种包衣微丸，其包括本发明第一方面任一项所述的微丸以及涂渍于该微丸表面的衣材。

在本发明第二方面所述包衣微丸的一个实施方案中，其中所述衣材是缓释衣材、控释衣材或肠溶衣材。在一个实施方案中，其中所述衣材是肠溶衣材。本领域技术人员根据已有知识知晓所述缓释衣材、控释衣材或肠溶衣材的组成及其施用于本发明微丸的用量。

在本发明第二方面所述包衣微丸的一个实施方案中，其中所述衣材是缓释衣材、或控释衣材。在一个实施方案中，其中所述缓释衣材或控释衣材包含聚合物材料、致孔剂和抗粘剂。在一个实施方案中，其中所述聚合物材料为乙基纤维素、丙烯酸树脂、醋酸纤维素中的一种或几种。在一个实施方案中，其中所述致孔剂为羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、聚维酮、蔗糖、吐温、司盘、黄原胶中的一种或几种。在一个实施方案中，其中所述抗粘剂为滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶中的一种或几种。

在本发明第二方面所述包衣微丸的一个实施方案中，其中所述衣材是肠溶衣材。在一个实施方案中，其中所述肠溶衣材包含聚合物材料。在一个实施方案中，其中所述聚合物材料为甲基丙烯酸共聚物、丙烯酸树脂、羟丙基纤维素酞酸酯、醋酸纤维素酞酸酯、聚乙烯醇酞酸酯中的一种或几种。

本发明第三方面提供了制备本发明第一方面任一项所述微丸的方法，其包括以下步骤：

(1)取榛叶提取物，加入所述稀释剂和崩解剂，混匀，粉碎；

(2)加入由水和/或乙醇配制的粘合剂，或直接加入一定量的水、乙醇或两者不同比例的溶液作为润湿剂，对物料制软材；

(3)采用挤压-滚圆成丸法或离心-流化造丸法制备微丸，干燥。

在本发明第三方面的方法中，所述榛叶提取物、稀释剂、崩解剂、粘合剂等如本发明第一方面所述。

本发明第一方面所述微丸的各个实施方案可以与一个或多个其它实施方案进行任意组合，只要这种组合不会出现矛盾。当然在相互之间组合时，必要的话可对相应特征作适当修饰。对于本发明的其它方面的各个实施方案亦可以类似地进行任意组合。

下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

本发明的目的之一是提供一种榛属植物抗氧化剂的提取工艺，本发明的目的可以通过如下措施来实现：

在一个实施方案中，本发明提供了一种从榛属植物提取抗氧化剂的工艺方法，其包括以下步骤和工艺条件：

1)、提供榛属植物提取原料，该榛属(Corylus)植物可以是平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛以及它们之间的杂交品种榛，该原料可以是榛属植物的根、茎、叶、皮和榛花，优选是叶；

2)、将榛属植物提取原料粉碎成20目至80目，用10-95％的乙醇溶液作为提取溶液，在50-90℃下回流提取，过滤得提取液。所述的回流提取的料液比为1∶1-1∶10，优选2∶10，提取次数为2-5次，每次提取1-4小时。优选的提取溶液为10-30％的乙醇溶液，最优选的提取溶液为20％的乙醇溶液；

3)、将所得含有抗氧化剂的提取液通过大孔吸附树脂纯化，所述的大孔吸附树脂为D101、D140、AB-8、D11、D16、HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700类型的一种或它们任意比例的组合并且不限于这些类型；所述提取液通过大孔吸附树脂的流速为0.1-5.0BV/h；

4)、先用水洗脱大孔吸附树脂至流出的液体无色，再用10-95％的乙醇作为洗脱溶液洗脱至无抗氧化剂流出(用FRAP法检测)并收集洗脱流分；水洗脱及洗脱溶液洗脱的流速为0.1-5.0BV/h。优选的洗脱溶液为30-95％的乙醇溶液，优选50-65％乙醇，最优选的洗脱溶液为60％的乙醇溶液；

5)、蒸发回收洗脱流分中的溶剂，干燥，得榛属植物抗氧化剂产品。

在本发明中，BV是指树脂床体积。

本发明人发现，通过本发明的方法从榛属植物中提取得到的提取物，具有非常高的抗氧化剂含量和非常高的抗氧化活性。

在本发明中，提及“重量份”时，其既可以指重量的份数，亦可以指重量百分数，优选是指重量的份数。如果该“重量份”是指重量百分数的含义，则该微丸中全部组分的总和为100％。另外，对于给定配方比，各成分以重量的份数表示时，各组分的总量可以是100重量份，亦可以不是100重量份。例如本文提及“微丸包含：榛叶提取物30-75重量份、稀释剂25-60重量份、崩解剂1-6重量份”时，该微丸可以包括各组分的比例为榛叶提取物30克、稀释剂60克、崩解剂1克；或者该微丸可以包括各组分的比例为榛叶提取物75克、稀释剂60克、崩解剂6克；或者该微丸可以包括各组分的比例为榛叶提取物约45克、稀释剂约55克、崩解剂约5克，各组分共计100克，且不含粘合剂(以水为润湿剂)。

在本发明中，术语“重量％”时，是指以重量计的百分数。

在本发明中，本发明提取物(例如榛提取物，例如榛叶提取物)亦可称为榛属植物抗氧化剂或榛属植物提取物等。

在本发明中，术语“榛提取物”包括但不限于平榛、毛榛、刺榛、川榛、华榛、绒苞榛、滇榛、维西榛、藏刺榛、短柄川榛和欧洲榛，以及它们之间的杂交品种榛。

在一个实施方案中，本发明的榛叶提取物微丸由榛叶提取物30％-90％和辅料10％-70％所组成，其中辅料为稀释剂、崩解剂、粘合剂，其中稀释剂10％-60％、崩解剂0.5％-10％、粘合剂0-10％。

在一个实施方案中，本发明的榛叶提取物可以是质量可控的浸膏、喷雾干燥的粉末中的一种或两种混合物。

在一个实施方案中，本发明的榛叶提取物微丸所述的稀释剂为用微晶纤维素、淀粉、糊精、乳糖中的一种或几种；崩解剂为交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠中的一种或几种。粘合剂为聚维酮、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、淀粉浆、羟丙甲纤维素、明胶、聚乙二醇和海藻酸钠中的一种或几种。

在一个实施方案中，本发明微丸可以按照上述技术方案，以现有技术微丸制剂的制备方法进行制备，也可按照下述方法进行制备：

(1)取榛叶提取物，加入辅料稀释剂和崩解剂，混匀，粉碎；

(2)加入含有粘合剂的水、无水乙醇或两者不同比例的溶液作为粘合剂；或直接加入一定量的水、无水乙醇或两者不同比例的溶液作为润湿剂；

(3)采用挤压-滚圆成丸法或离心-流化造丸法制备微丸。

本发明的榛叶提取物微丸可以制备成缓释、控释或肠溶微丸制剂。制备成榛叶提取物缓释、控释微丸，其中聚合物材料为乙基纤维素、丙烯酸树脂、醋酸纤维素中的一种或几种；致孔剂为羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、聚维酮、蔗糖、吐温、司盘、黄原胶中的一种或几种；抗粘剂为滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶中的一种或几种。制备成榛叶提取物肠溶微丸，其中的肠溶衣的聚合物材料为甲基丙烯酸共聚物、丙烯酸树脂、羟丙基纤维素酞酸酯、醋酸纤维素酞酸酯、聚乙烯醇酞酸酯中的一种或几种。制备成缓释、控释或肠溶微丸，其制备方法包括锅滚动包衣法、流化床包衣法、压制包衣法、热熔包衣法。

本发明发现，本发明的微丸具有令人意料不到的高成品率。根据本发明，所获得的微丸具有如下特点：(1)微丸体积小，均匀地分布在胃肠道内，使药物在胃肠道表面分布面积增大，受胃排空的影响较小，吸收均匀，可提高生物利用度和减少胃肠道刺激性；(2)提高药物的稳定性，使物质免受外界环境的影响；(3)屏蔽气味、延长挥发性物质的储存时间；(4)流动性好、不易破碎，制成胶囊时易填充；(5)便于吞咽困难的幼儿及老年患者服用；(6)制成缓释、控释或肠溶微丸，有效控制释药的速度、部位和时间，延长有效的血药浓度、减少用药次数和总剂量；(7)制备方法是在常规微丸制备方法的基础上对制备过程中的各种提取时间、干燥温度、辅料种类和加入量经过多次试验研究进行优化，具有配比合理、工艺简单，易于控制，产品质量稳定的特点。

具体实施方式

下面通过具体的实施例/实验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例和实验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

A、检测方法：

(1)榛属植物抗氧化剂抗氧化活性评价：抗氧化活性的FRAP法测定

采用铁离子还原法(Ferric reducing/antioxidant power，FRAP)。取适量作为明提取物作为抗氧化剂或化学合成抗氧化剂BHT溶于10％无水乙醇溶液，定容至10mL作为样液，加入1.8mL TPTZ工作液(由0.3mol/L醋酸盐缓冲液25mL、10mmol/L TPTZ溶液2.5mL、20mmol/L FeCl₃溶液2.5mL组成)，混匀后37℃反应10min，593nm测定吸光度。吸取不同浓度0.1mmol/L，0.2mmol/L，0.4mmol/L，0.6mmol/L，0.8mmol/L，1.0mmol/L的FeSO4标准液10mL，替代上述样液，操作方法同上，绘制标准曲线。样品的抗氧化活性(FRAP值)以达到同样吸光度值所需的FeSO4毫摩尔数表示。根据标准曲线计算样品的FRAP值，当FRAP值为0.5时，本发明实施例1的提取物的榛抗氧化剂浓度为2.25mg/mL，而BHT浓度为9.2mg/mL，说明本发明提取物的抗氧化活性优于BHT。

(2)榛属植物抗氧化剂抗氧化活性评价：β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性

将0.2mgβ-胡萝卜素溶于0.2mL氯仿中，加入20mg亚油酸及200mg吐温-40。混合均匀后于40℃水浴中除去氯仿，加入50mL蒸馏水(经鼓氧气2～3min)，剧烈振荡，即配成反应介质溶液，同时设置空白，除不加β-胡萝卜素氯仿溶液外，其他步骤同前。于具塞试管中逐一加入4.0mL反应介质溶液，将本发明榛属植物提取物抗氧化剂或化学合成抗氧化剂BHT溶于无水乙醇，配制成系列浓度溶液作为样液，分别加入0.2mL样液，同时设置空白调零管、对照管和样品管，其中空白调零管中不含β-胡萝卜素与试样，对照管不含试样，以0.2mL无水乙醇代替试样溶液。上述溶液混匀后，置于50℃水浴中恒温，在470nm波长下测定t＝0时的吸光度，之后每间隔15min测定吸光度，直至对照管中β-胡萝卜素颜色消失(约120min)。

抗氧化活性的计算公式：

(A₀、分别表示t＝0时样品和对照的吸光度；A_t、

分别表示t＝120min时样品和对照的吸光度)

β-胡萝卜素-亚油酸法测定榛属植物抗氧化剂，表现出优良的抗氧化活性。其中本发明实施例1提取物的IC50值(抗氧化活性为50％时所对应的抗氧化剂溶液浓度)为1.15mg/mL，而BHT的IC50值为1.42mg/mL，说明本发明榛提取物抗氧化剂优于BHT的抗氧化活性。

(3)榛属植物抗氧化剂抗氧化活性评价：清除DPPH自由基能力的测定法

用无水乙醇配置6.5×10^-5mol/L DPPH溶液，另将本发明榛属植物抗氧化剂或化学合成抗氧化剂BHT溶于无水乙醇，配制成系列浓度溶液作为样液。精确吸取2.5mL DPPH溶液和0.5mL样液摇匀，室温避光放置反应10min后倒入光径1cm比色皿，517nm下测定吸光值。重复测定3次，结果取平均值。然后按下式计算DPPH自由基清除率，抗氧化剂清除自由基能力采用清除DPPH的IC₅₀值表示，即DPPH自由基清除率为50％时所对应的抗氧化剂溶液浓度。

清除率(％)＝[1-(Ai-Aj)/A₀]×100％

A₀为2.5mLDPPH溶液+0.5mL无水乙醇

Ai为2.5mLDPPH溶液+0.5mL样液

Aj为2.5mL无水乙醇+0.5mL样液

经计算，本发明实施例1的提取物，其IC50值(50％DPPH自由基清除率所需样品的浓度)为39.28μg/mL，而BHT的IC50值为103.34μg/mL，说明本发明榛提取物抗氧化剂优于BHT的抗氧化活性。

(4)黄酮类物质颜色鉴定反应

取0.5g榛属植物抗氧化剂用5mL甲醇溶解作为待测夜，进行鉴定反应。盐酸-镁粉反应，在试管中加入2ml待测样品，加入少许镁粉，震荡后，滴加浓盐酸数滴，充分振摇，反应完全后，观察颜色变化，可见溶液显棕红色；AlCl₃显色反应，取200μL点样在薄层板上，相应位置喷上AlCl₃溶液，出现黄色斑点，紫外下呈亮黄绿色荧光斑点；与氨水的反应，量取10μL待测夜滴于滤纸上，后置于氨水瓶口熏2-3min，立即置于紫外灯下观察，可见亮黄绿色荧光斑点。通过颜色鉴定反应可知，榛属植物抗氧化剂含有黄酮类物质。

(5)提取物中总黄酮含量的测定

取0.0058g芦丁对照品，用甲醇溶解，定容至100mL，作为对照品储备液。分别准确移取用对照品储备液等倍稀释的不同浓度芦丁对照品溶液，置于25mL的比色管中，并分别准确加2.5mL 5％的AlCl3无水乙醇溶液于上述溶液中，用甲醇定容，摇匀，静置20min后，以试剂空白作参比于420nm处测定吸光度。以芦丁对照品溶液梯度变化的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制芦丁对照品标准曲线。

取本发明制备的提取物，参考以上芦丁对照品的配液方法配制成相应浓度的溶液，以试剂空白作参比在420nm处测定吸光度，依据芦丁对照品标准曲线计算出提取物中总黄酮的百分含量(wt％)。

B、制备本发明提取物的实施例

实施例1

制备本发明提取物的步骤如下：

1)、取40g平榛叶粉，20目；

2)、将该提取原料粉碎，用10％乙醇作为提取溶液，在90℃下回流提取，得提取液(在本提取步骤中，回流提取的料液比为1∶5，提取3次，每次提取2小时)；

3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化，先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色，然后用60％乙醇为洗脱液进行洗脱，并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分，所述大孔吸附树脂为HPD-100；

4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂，干燥，即得。

经计算和测定：收率3.85％；总黄酮含量51.4wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为2.21g/L为；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为1.15g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为39.3mg/L。

实施例2

制备本发明提取物的步骤如下：

1)、取40g毛榛叶粉，80目；

2)、将该提取原料粉碎，用30％乙醇作为提取溶液，在50℃下回流提取，得提取液(在本提取步骤中，回流提取的料液比为1∶2，提取2次，每次提取3小时)；

3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化，先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色，然后用65％乙醇为洗脱液进行洗脱，并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分，所述大孔吸附树脂为HPD-700；

4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂，干燥，即得。

经计算和测定：收率2.65％；总黄酮含量35.3wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为4.32g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为3.31g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为32.4mg/L。

实施例3

制备本发明提取物的步骤如下：

1)、取40g平榛叶粉，40目；

2)、将该提取原料粉碎，用20％乙醇作为提取溶液，在70℃下回流提取，得提取液(在本提取步骤中，回流提取的料液比为1∶10，提取2次，每次提取1小时)；

3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化，先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色，然后用50％乙醇为洗脱液进行洗脱，并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分，所述大孔吸附树脂为HPD-400；

4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂，干燥，即得。

经计算和测定：收率6.72％；总黄酮含量33.7wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为6.87g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为5.63g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为117.6mg/L。

实施例4

制备本发明提取物的步骤如下：

1)、取40g刺榛叶粉，60目；

2)、将该提取原料粉碎，用20％乙醇作为提取溶液，在60℃下回流提取，得提取液(在本提取步骤中，回流提取的料液比为1∶8，提取5次，每次提取4小时)；

3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化，先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色，然后用55％乙醇为洗脱液进行洗脱，并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分，所述大孔吸附树脂为HPD-600；

4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂，干燥，即得。

经计算和测定：收率4.62％；总黄酮含量43.2wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为3.42g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为2.74g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为84.2mg/L。

实施例5

制备本发明提取物的步骤如下：

1)、取40g毛榛叶粉，60目；

2)、将该提取原料粉碎，用25％乙醇作为提取溶液，在75℃下回流提取，得提取液(在本提取步骤中，回流提取的料液比为1∶5，提取3次，每次提取3小时)；

3)、使步骤2)的提取液通过大孔吸附树脂进行纯化，先用水洗脱大孔树脂至流出的液体为无色，然后用60％乙醇为洗脱液进行洗脱，并通过FRAP法检测并收集由该洗脱液洗脱所得的流分，所述大孔吸附树脂为HPD-600；

4)、蒸发并回收洗脱流分的溶剂，干燥，即得。

经计算和测定：收率5.16％；总黄酮含量46.7wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为1.13g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为3.66g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为61.6mg/L。

C、参考本发明方法制备提取物的制备例

制备例1

参考实施例1的方法制备榛叶提取物，不同之处是步骤2)中所用乙醇为60％，步骤3)中所用乙醇为40％，步骤3)中所用大孔树脂为D101型。

经计算和测定：收率4.14％；总黄酮含量26.4wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为11.3g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为8.74g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为69.8mg/L。

制备例2

参考实施例2的方法制备榛叶提取物，不同之处是步骤2)中所用乙醇为90％提取温度为室温，步骤3)中所用乙醇为75％，步骤3)中所用大孔树脂为D11型。

经计算和测定：收率3.16％；总黄酮含量19.7wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为14.2g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为9.16g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为87.2mg/L。

制备例3

参考实施例3的方法制备榛叶提取物，不同之处是步骤2)中所用乙醇为60％，步骤3)中所用乙醇为30％，步骤3)中所用大孔树脂为D140型。

经计算和测定：收率6.13％；总黄酮含量14.7wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为10.1g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为8.54g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为164.3mg/L。

制备例4

参考实施例4的方法制备榛叶提取物，不同之处是步骤3)中所用大孔树脂为D16型。

经计算和测定：收率4.94％；总黄酮含量30.7wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为14.3g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为6.3g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为91.7mg/L。

制备例5

参考实施例5的方法制备榛叶提取物，不同之处是步骤2)中所用乙醇为75％，步骤3)中所用大孔树脂为AB-8型。

经计算和测定：收率4.96％；总黄酮含量28.6wt％；FRAP法测定，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为12.43g/L；β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性的IC₅₀值为5.73g/L；清除DPPH自由基能力的测定法测定的IC₅₀值为133.4mg/L。

D、制备微丸例部分

在以下微丸例中，如未特别指明，所用榛叶提取物是上文实施例1获得的提取物。

微丸例1、微丸的制备

处方配比：

组分	用量(g)	重量比(％)
			榛叶提取物	200	40
微晶纤维素	277.5	55.5
			交联聚维酮	20	4
微粉硅胶	2.5	0.5
			总重	500

按照下述方法进行制备：

(1)按处方配比取榛叶提取物，加入微晶纤维素、交联聚维酮等辅料，粉碎，混匀；

(2)加入聚维酮水溶液作为粘合剂；

(3)采用挤压-滚圆成丸法制备微丸。混合好的物料在10-40r/min的挤出速度下挤出条状物，控制好粘合剂的加入量以控制好挤出的条状物的长度；移入滚圆设备，先用40-70Hz转速下切断挤出物，再在30-50Hz转速条件下滚圆10-20分钟，制得微丸。移入干燥间进行干燥，干燥条件为30±2℃、干燥时间12小时，干燥后包装。

微丸例2、微丸的制备

处方配比：

组分	用量(g)	重量比(％)
			榛叶提取物(实施例2)	200	40
淀粉	200	40
			乳糖	80	16
羧甲基淀粉钠	20	4
			总重	500

按照下述方法进行制备：

(1)按处方配比取榛叶提取物，加入淀粉、乳糖、羧甲基淀粉钠等辅料，粉碎，混匀；

(2)加入乙基纤维素的乙醇溶液作为粘合剂；

(3)采用挤压-滚圆成丸法制备微丸。混合好的物料在10-40r/min的挤出速度下挤出条状物，控制好粘合剂的加入量以控制好挤出的条状物的长度；移入滚圆设备，先用40-70Hz转速下切断挤出物，再在30-50Hz转速条件下滚圆10-20分钟，制得微丸。移入干燥间进行干燥，干燥条件为30±2℃、干燥时间12小时，干燥后包装。

微丸例3、微丸的制备

处方配比：

组分	用量(g)	重量比(％)
			榛叶提取物	300	60
微晶纤维素	165	33
			糊精	20	4
交联羧甲基纤维素钠	15	3
			总重	500

按照下述方法进行制备：

(1)按处方配比取榛叶提取物，加入微晶纤维素、糊精、交联羧甲基纤维素钠等辅料，粉碎，混匀；

(2)加入羟丙甲纤维素的水溶液作为粘合剂；

(3)采用挤压-滚圆成丸法制备微丸。混合好的物料在10-40r/min的挤出速度下挤出条状物，控制好粘合剂的加入量以控制好挤出的条状物的长度；移入滚圆设备，先用40-70Hz转速下切断挤出物，再在30-50Hz转速条件下滚圆10-20分钟，制得微丸。移入干燥间进行干燥，干燥条件为30±2℃、干燥时间12小时，干燥后包装。

微丸例4、微丸的制备

处方配比：

组分	用量(g)	重量比(％)
			榛叶提取物	250	50
微晶纤维素	150	30
			糊精	80	16
交联聚维酮	20	4
			总重	500

按照下述方法进行制备：

(1)按处方配比取榛叶提取物，加入微晶纤维素、糊精、交联聚维酮等辅料，粉碎，混匀；

(2)加入淀粉浆的水溶液作为粘合剂；

(3)采用离心-流化造丸法制备微丸。

微丸例5、微丸的制备

处方配比：

组分	用量(g)	重量比(％)
			榛叶提取物(实施例3)	200	40
淀粉	150	30
			糊精	70	14
乳糖	70	14
			低取代羟丙基纤维素	10	2
总重	500

按照下述方法进行制备：

(1)按处方配比取榛叶提取物，加入淀粉、糊精、乳糖、低取代羟丙基纤维素等辅料，粉碎，混匀；

(2)加入水作为润湿剂；

(3)采用挤压-滚圆成丸法制备微丸。混合好的物料在10-40r/min的挤出速度下挤出条状物，控制好粘合剂的加入量以控制好挤出的条状物的长度；移入滚圆设备，先用40-70Hz转速下切断挤出物，再在30-50Hz转速条件下滚圆10-20分钟，制得微丸。移入干燥间进行干燥，干燥条件为30±2℃、干燥时间12小时，干燥后包装。

对比例1：除了处方中榛叶提取物重量比为30％、微晶纤维素重量比为65.5％以外，其余均与微丸例1相同，得微丸。

对比例2：除了处方中榛叶提取物重量比为68％、乳糖重量比为8％、淀粉重量比20％以外，其余均与微丸例2相同，得微丸。

对比例3：除了处方中榛叶提取物重量比为69％、微晶纤维素重量比为20％、糊精重量比8％以外，其余均与微丸例3相同，得微丸。

对比例4：除了处方中榛叶提取物重量比为25％、微晶纤维素重量比为45％、糊精重量比26％以外，其余均与微丸例4相同，得微丸。

对比例5：除了处方中榛叶提取物重量比为83％、淀粉重量比为5％、糊精重量比5％、乳糖重量比5％以外，其余均与微丸例5相同，得微丸。

对比例6：除了处方中微晶纤维素换为糖粉以外，其余均与微丸例1相同，得微丸。

对比例7：除了处方中乳糖换为糖粉、淀粉换为碳酸钙、羧甲基淀粉换为改良淀粉以外，其余均与微丸例2相同，得微丸。

对比例8：除了处方中交联羧甲基纤维素钠换为改良淀粉以外，其余均与微丸例3相同，得微丸。

对比例9：除了处方中榛叶提取物重量比为25％、微晶纤维素换为糖粉且重量比为45％、糊精重量比26％、交联聚维酮换为甲基纤维素和乙基纤维素等量混合物以外，其余均与微丸例4相同，得微丸。

筛分；

对以上的微丸例1-5和对比例1-9制备的微丸进行筛分，选取直径0.8-2.5mm的小丸，进行下面的微丸例6、7。

微丸例6、微丸的包衣

对以上微丸例和对比例制备的榛叶提取物微丸进行包衣，通过使用不同的包衣材料，使微丸成为缓释、控释或肠溶等制剂，控制药物的释放速度、部位和时间以达到不同的治疗目的。

肠溶衣材料配比：

组分	名称	用量(g)	重量比(％)
				聚合物材料	甲基丙烯酸共聚物	200	10
增塑剂	柠檬酸三乙酯	20	1

润滑剂	滑石粉	40	2
				基质	水	1740	87

将滑石粉、柠檬酸三乙酯加入纯水匀浆，将匀浆后混合物加入甲基丙烯酸共聚物水分散体中，加入少量甲基硅油作消泡剂，使用时缓慢搅拌。

工艺条件：气流温度55℃，微丸温度32℃，雾化压力0.25-0.30MPa，喷浆速度150mL/min。

包衣增重的选择：根据中国药典2010版附录XC溶出度测定法第一法，以盐酸溶液(9→1000)900mL为溶出介质I，转速50r/min，1h后取出转篮，再以pH 6.8磷酸缓冲液900mL为溶出介质II，2h后取样20mL，过滤，稀释，测定，计算溶出度选择包衣的增重。

实验结果得出榛叶提取物微丸肠溶包衣增重28％-38％时，其溶出度符合要求。

本微丸例中包衣增重控制在35％。

将本微丸例中制备的包衣微丸装入硬胶囊中，每粒胶囊将量350mg。

微丸例7、微丸的包衣

对以上微丸例制备的榛叶提取物微丸进行包衣，通过使用不同的包衣材料，使微丸成为缓释、控释或肠溶等制剂，控制药物的释放速度、部位和时间以达到不同的治疗目的。

肠溶衣材料配比：

组分	用量(g)	重量比(％)
			丙烯酸树脂II	300	25
羟丙基甲基纤维	20	2
			二氧化钛	50	5
玉米朊	75	7.5
			聚乙二醇	40	4
甘油	15	1.5
			水	500	55

工艺条件：喷浆速度：15-60r/min，主机转速：80-150r/min，供粉速度：15-50r/min。

包衣增重的选择：根据中国药典2010版附录XC溶出度测定法第一法，以盐酸溶液(9→1000)900mL为溶出介质I，转速50r/min，1h后取出转篮，再以pH 6.8磷酸缓冲液900mL为溶出介质II，2h后取样20mL，过滤，稀释，测定，计算溶出度选择包衣的增重。

实验结果得出榛叶提取物微丸肠溶包衣增重31％-40％时，其溶出度符合要求。

本微丸例中包衣增重控制在35％。

包衣损失率考察：

在以上微丸例6、7中，将所得微丸进行筛分，去除直径小于0.5mm的小丸(这部分认为是可能在包衣过程中粉微丸破碎而形成的)，剩余部分认为是合格包衣丸。以下式计算包衣损失率(％)：

分别通过微丸例6的方法进行包衣损失率考察，结果见表1。分别通过微丸例7的方法进行包衣损失率考察，结果见表2。从表1和2的结果可见，本发明的微丸具有可以接受的包衣损失率。

表1、通过微丸例6的方法进行包衣损失率考察的结果

素丸样品	包衣损失率(％)	素丸样品	包衣损失率(％)
				微丸例1	15.7	对比例1	28.2
微丸例2	15.2	对比例2	31.8
				微丸例3	18.1	对比例3	25.5
微丸例4	14.5	对比例4	32.9
				微丸例5	16.1	对比例5	29.4
对比例8	24.1	对比例6	26.5
				对比例9	27.4	对比例7	27.9

表2、通过微丸例7的方法进行包衣损失率考察的结果

素丸样品	包衣损失率(％)	素丸样品	包衣损失率(％)
				微丸例1	16.7	对比例1	25.4
微丸例2	18.3	对比例2	28.5
				微丸例3	15.4	对比例3	27.3
微丸例4	17.2	对比例4	29.8
				微丸例5	13.3	对比例5	26.6
对比例8	28.6	对比例6	25.7
				对比例9	24.9	对比例7	28.4

Claims (9)

1.一种用于抗氧化的榛叶提取物的微丸，该微丸组成为：榛叶提取物30-90重量份、稀释剂10-75重量份、崩解剂0.5-10重量份和任选的粘合剂；并且其中所述榛叶提取物的特征在于：

(a)其中含有总黄酮30～55wt％；

(b)其经FRAP法测定抗氧化活性，当FRAP值为0.5时，其中的抗氧化剂的浓度为1～7g/L；

(c)其经β-胡萝卜素-亚油酸法测定抗氧化活性，其IC₅₀值为1～6g/L；和

(d)其经清除DPPH自由基能力的测定法测定，其IC₅₀值为30～120mg/L。

2.权利要求1的微丸，其中所述稀释剂选自微晶纤维素、淀粉、糊精、乳糖及其组合。

3.权利要求1的微丸，其中所述崩解剂选自交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠及其组合。

4.权利要求1的微丸，其中所述稀释剂选自微晶纤维素、淀粉、糊精、乳糖及其组合，并且所述崩解剂选自交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠及其组合。

5.权利要求1的微丸，其中所述微丸的组成为：榛叶提取物30-75重量份、稀释剂25-60重量份、崩解剂1-6重量份和任选的粘合剂。

6.权利要求1的微丸，其中所述微丸的组成为：榛叶提取物35-65重量份、稀释剂30-60重量份、崩解剂1-6重量份和任选的粘合剂。

7.权利要求1的微丸，其特征在于以下(a)至(e)任一项：

(a)所述稀释剂是微晶纤维素并且所述崩解剂是交联聚维酮；

(b)所述稀释剂是淀粉和乳糖的组合并且所述崩解剂是羧甲基淀粉钠；

(c)所述稀释剂是微晶纤维素和糊精的组合并且所述崩解剂是交联羧甲基纤维素钠；

(d)所述稀释剂是微晶纤维素和糊精的组合并且所述崩解剂是交联聚维酮；或

(e)所述稀释剂是淀粉、乳糖和糊精的组合并且所述崩解剂是低取代羟丙基纤维素。

8.一种包衣微丸，其由权利要求1至7任一项所述微丸以及涂渍于该微丸表面的衣材组成。

9.制备权利要求1至7任一项所述微丸的方法，其包括以下步骤：

(1)取榛叶提取物，加入所述稀释剂和崩解剂，混匀，粉碎；

(2)加入由水和/或乙醇配制的粘合剂，或直接加入一定量的水、乙醇或两者不同比例的溶液作为润湿剂，对物料制软材；

(3)采用挤压-滚圆成丸法或离心-流化造丸法制备微丸，干燥。