CN102114008B - 一种丹皮酚的包合物及其制备方法与质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药牡丹皮的主要成分丹皮酚的包合物及其制备方法及质量检测方法。丹皮酚包合物的其制备方法为：取β-环糊精，加入水中搅匀，加热；取丹皮酚加入到乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨，出料，常温放置，抽滤，干燥，即得丹皮酚包合物。

Description

一种丹皮酚的包合物及其制备方法与质量检测方法

技术领域：

本发明涉及一种中药有效成分的包合物及其制备方法与质量检测方法，具体涉及中药牡丹皮的主要成分丹皮酚的包合物及其制备方法及质量检测方法。

技术背景：

丹皮酚是中药牡丹皮的主要有效成分，具有广泛的药理作用，由于丹皮酚具有较强的挥发性，遇光、热、湿不稳定，故采用β-环糊精(cyclodextrin，β-CD)对丹皮酚进行包合，以降低其挥发性，增加其稳定性，并使丹皮酚晶体固体粉末化，便于制成多种剂型，提高疗效。

《海峡药学》2005年第5期中记载了张建军，涂瑶生的论文《正交设计研究丹皮酚包合工艺》，此文研究用β-环糊精包合丹皮酚的工艺，最终确定以丹皮酚与β-CD的投料比为1∶10，包合温度为50℃，搅拌时间为1h为最佳工艺，其包合物收得率为74.99±1.86。《河南大学学报》2007年第3期记载了韩紫岩、王荔、张庆雷的论文《中药制剂中丹皮酚包合工艺的研究》，根据正交实验结果，确定丹皮酚β-CD包合物采用超声法制备，最佳工艺为：称取丹皮酚1份，用10份乙醇溶解，缓慢滴入由8倍量β-环糊精制成的饱和水溶液中，于60℃下超声30min，冷藏24h，滤渣低温干燥，即得。该工艺的包合收得率为最高不超过90％。

现有的丹皮酚β-环糊精包合技术为加热搅拌法、超声法等，不利于大型工业化生产，而且收得率均不高，并且需要花费的时间较长。本发明提供了一种新的技术方案，采用胶体磨法制备丹皮酚β-CD包合物，该方法简便，不仅有利于大型工业化生产，而且包合收得率高达90％以上。

发明内容：

本发明的目的是提供一种丹皮酚的包合物；

本发明的另一目的是提供该丹皮酚包合物的制备方法；

本发明的目的还在于提供一种对丹皮酚包合物进行质量检测的方法；

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种丹皮酚的包合物，其制备方法为：取β-环糊精，加入水中搅匀，加热；取丹皮酚加入到乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨，出料，常温放置，抽滤，干燥，即得丹皮酚包合物。上述制备方法的优选为：取丹皮酚5～15倍量的β-环糊精，加入1～4倍量水中搅匀，加热至50～70℃；取丹皮酚加入到3～7倍量85～95％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨10～30min，出料，常温放置12～24小时，抽滤，40～60℃干燥，即得丹皮酚包合物。

上述制备方法更为优选的技术方案为：取丹皮酚10倍量的β-环糊精，加入2.7倍量纯化水中搅匀，加热至60℃；取丹皮酚加入到5倍量95％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨20min，出料，常温放置24小时，抽滤，50℃干燥，即得丹皮酚包合物。

对本发明丹皮酚包合物，可以采用气相色谱法进行含量测定，测定方法为：

(1)色谱条件：气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱；进样口温度：220～240℃；检测器温度：230～250℃；分流比：20～30∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃线性上升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：0.5～1.5ml/min；进样：1～10μl；

(2)对照品溶液制备：精密称取丹皮酚，置量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

(3)内标溶液制备：精密吸取正十五烷，置量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

(4)标准曲线制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置量瓶中，并分别加入内标溶液，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线；

(5)含量测定：精密称取待测的丹皮酚包合物，置量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定，计算，即得。

上述含量测定方法的优选技术方案为：

(1)色谱条件：气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱；进样口温度：230℃；检测器温度：240℃；分流比：25∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃线性上升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：1.0ml/min；进样：2μl；理论板数按丹皮酚峰计算，不低于600；

(2)对照品溶液制备：精密称取丹皮酚10mg，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

(3)内标溶液制备：精密吸取正十五烷100mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

(4)标准曲线制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置10ml量瓶中，并分别加入内标溶液1ml，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线；

(5)含量测定：精密称取待测的丹皮酚包合物约10mg，置100ml量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定，即得。

发明人对本发明的提供的技术方案进行了实验研究，用来证明本发明的技术效果，下述实验用于进一步说明本发明的技术效果，但不限制本发明。

1.材料

1.1仪器：

气相色谱仪，来源：美国安捷轮GC 6890型气相色谱仪；

CT-C-I型热风循环蒸汽烘箱，来源：南京鑫长江制药设备有限公司；

JM型立式胶体磨，来源：奥尔特机械有限公司。

1.2试药：

牡丹皮，购自江苏省连云港市药材公司，符合中国药典标准，经鉴定为毛莨科牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮；

丹皮酚对照品，来源：中国药品生物制品检定所；

正十五烷，来源：中国药品生物制品检定所；

β-CD，来源：广东省郁南县环状糊精有限公司，纯度＞98％；

乙腈，为色谱纯；

其他试剂均为分析纯；

水为双蒸水。

2.方法与结果

2.1丹皮酚提取：

将适量牡丹皮药材饮片置入装有挥发油提取器的烧瓶中，直通蒸汽提取，提取时间2h，收集芳香水，室温静置，待丹皮酚晶体析出，过滤，晾干，备用。

2.2丹皮酚包合物制备工艺选择与制备方法确定：

2.2.1丹皮酚分散溶媒的选择

(1)实验方案：取丹皮酚10倍量的β-环糊精，加入纯化水中，加热搅匀；取丹皮酚加入到分散溶媒中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨，出料，常温放置24小时，抽滤，干燥，即得丹皮酚包合物。

在其他包合条件一定的情况下，选择水、85％乙醇、90％乙醇、95％乙醇、乙酸乙酯五种不同的溶媒分散丹皮酚，进行实验研究，以丹皮酚的包合率为评判指标。

(2)实验结果：实验结果见表1，选用不同的分散溶媒，所得到的包合率不同，其中选择95％乙醇作为分散溶媒时，包合效果最好，85％乙醇、90％乙醇液可以达到比较好的包合效果。

表1丹皮酚分散溶媒的选择实验结果

2.2.2丹皮酚与β-CD比例的选择实验

(1)实验方案：取丹皮酚，以95％乙醇溶解，备用；取β-环糊精加入纯化水中搅匀，加热至60℃；再将丹皮酚乙醇溶液加入其中，经胶体磨研磨20min，出料，常温放置24小时，抽滤，干燥，即得丹皮酚包合物。

在其他包合条件一定的情况下，丹皮酚与β-CD比例选择1∶5、1∶10、1∶15三种不同的比例，进行实验研究，以丹皮酚的包合率为评判指标。

(2)实验结果：实验结果见表2，选用不同的比例，所得到的包合率不同，三种不同的比例包合效果均较好，其中当丹皮酚与β-CD比例选择1∶10时，包合效果最佳。

表2丹皮酚与β-CD比例的选择实验结果

2.2.3包合温度的选择实验

(1)实验方案：取丹皮酚，以95％乙醇溶解，备用；取β-环糊精加入纯化水中搅匀，加热至50℃、60℃、70℃三个不同的温度条件；再将丹皮酚乙醇溶液加入其中，经胶体磨研磨20min，出料，常温放置24小时，抽滤，干燥，即得丹皮酚包合物。

在其他包合条件一定的情况下，包合的温度选择50℃、60℃、70℃三种不同的温度条件，进行实验研究，以丹皮酚的包合率为评判指标。

(2)实验结果：

实验结果见表3，选用不同的温度，所得到的包合率不同，其中当选择60℃时，包合效果最佳。

表3包合温度的选择实验结果

2.2.4包合时间的选择实验

(1)实验方案：取丹皮酚，以95％乙醇溶解，备用；取β-环糊精加入纯化水中搅匀，加热至60℃；再将丹皮酚乙醇溶液加入其中，经胶体磨分别研磨10min、20min、30min三种不同的包合时间，出料，常温放置24小时，抽滤，干燥，即得丹皮酚包合物。

在其他包合条件一定的情况下，包合的时间选择10min、20min、30min三种不同的条件，进行实验研究，以丹皮酚的包合率为评判指标。

(2)实验结果：实验结果见表4，选用不同的包合时间，所得到的包合率不同，其中当选择20min时，包合效果最佳。

表4包合时间的选择实验结果

2.2.5包合物干燥温度的选择实验

(1)实验方案：取丹皮酚，以95％乙醇溶解，备用；取β-环糊精加入纯化水中搅匀，加热至60℃；再将丹皮酚乙醇溶液加入其中，经胶体磨分别研磨20min，出料，常温放置24小时，抽滤，分别在40℃、50℃、60℃三种温度下干燥，即得丹皮酚包合物。

在其他包合条件一定的情况下，包合物的干燥温度选择40℃、50℃、60℃三种不同的条件，进行实验研究，以丹皮酚的包合率为评判指标。

(2)实验结果：实验结果见表5，选用不同的干燥温度，所得到的包合率不同，包合物干燥温度在40℃时，干燥时间为4.8h，虽然包合率较高，但干燥时间较长，不利于大型工业生产的实际；当包合物的干燥温度为60℃时，虽然干燥时间较短，但包合率明显降低；当包合物的干燥温度为50℃时，不仅包合率较好，而且干燥时间也适当，符合大型工业生产的实际。

表5包合温度的选择实验结果

2.2.6丹皮酚包合物的制备方法：根据上述的实验结果，确定丹皮酚包合物的制备方法为：取丹皮酚10倍量的β-环糊精，加入2.7倍量纯化水中搅匀，加热至60℃；取丹皮酚加入到5倍量95％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨20min，出料，常温放置24小时，抽滤，50℃干燥，即得白色疏松状丹皮酚包合物粉末。

根据下式求得包合物收得率为96.5％。

2.3包合物中丹皮酚含量测定：

2.3.1色谱条件：

Agilent 6890气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱(HP-5：30m×0.32mm×0.25μm)；进样口温度：230℃；检测器温度(FID)：240℃；分流比：25∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：1.0ml/min；进样：2μl；理论板数按丹皮酚峰计算，不低于600。

2.3.2丹皮酚晶体中丹皮酚含量测定：

精密称取丹皮酚晶体约10mg，置100ml量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度。摇匀，进样测定。结果丹皮酚平均含量为99.0％，RSD＝1.0％(n＝6)。

2.3.3包合物中丹皮酚的含量测定：

精密称取包合物适量入50ml量瓶中，精密加入25ml无水乙醇，混匀，精密称质量，加热回流1.5h，放冷，称质量，用无水乙醇补足减失质量，摇匀；取9ml续滤液加入10ml量瓶中再加入1ml内标溶液，摇匀，即为供试品溶液，进样测定，计算得包合物中丹皮酚的平均含量为17.6％，RSD＝2.3％(n＝6)。并根据下式求得包合物的包合率为96.12％。

2.3.4丹皮酚包合物含量测定方法研究说明

2.3.4.1仪器与试药：

Agilent GC6890气相色谱仪；FID检测器；丹皮酚包合物(江苏康缘药业股份有限公司)；丹皮酚对照品(中国药品生物制品检定所)；

2.3.4.2色谱条件：

(1)程序升温条件选择：选用通过文献查阅及实际摸索，考察了不同的气相色谱分析条件，柱温是色谱条件的重要参数，它对各组分分离的影响很大，发明人摸索了以下几种程序升温条件：

①150℃，保持9min；

②起始80℃保持3min，再以20℃/分钟升至160℃，保持6分钟；

③80℃保持3min，再以20℃/分钟升至160℃，保持6分钟；再以20℃/分钟升至210℃，保持5分钟；

以上程序②、③均能够使供试品色谱中丹皮酚峰与其它峰达到很好的分离(R_S＞2)，并且阴性样品无干扰，拖尾因子符合要求。考虑省时，节约，所以，选择程序②作为本方法程序升温条件。最后确定进样口温度；230℃，柱温：80℃保持3min，再以20℃/分钟升至160℃，保持6分钟；检测器温度；240℃。

(2)色谱柱的选择：因挥发性成分多为非极性成分，且成分复杂，所以选用非极性固定相的细口径毛细管色谱柱：HP-5(5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱，30m×0.32mm×0.25μm)。经试验研究，该色谱柱对制剂中各成分分离效果好，所以固定选择用该类型色谱柱作为丹皮酚包合物中丹皮酚含量测定专用色谱柱。

2.3.4.3系统适应性研究：

在上述条件下，测定样品中丹皮酚的含量，以丹皮酚峰计算理论塔板数大于3000，分离度大于2，已达到基线分离，拖尾因子在0.95～1.05之间。为确保定量分析的准确，在系统实验中丹皮酚的理论塔板数不得低于4000。

2.3.4.4供试品溶液的制备：

由于样品中，丹皮酚的含量较高，为了减少不必要的操作步骤及减小误差，采用直接溶剂提取进样分析的方法来测定丹皮酚的含量，通过实验表明，在供试品色谱中杂质少，对丹皮酚的测定无干扰。

对提取溶剂进行了系统的考察：

(甲醇、乙醇、乙酸乙酯)50ml，称定重量，加热使之充分溶解，放冷，称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，滤过，分别精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，精密加入正十五烷内标液1ml，加无无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密吸取2ul，注入气相色谱仪，测定，即得。结果见表6。

表6溶剂考察结果

以上结果表明，用乙醇作为溶剂提取较为适宜。

2.3.4.5线性关系考察：

精密称取丹皮酚10mg，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

精密吸取正十五烷100mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置10ml量瓶中，并分别加入内标溶液1ml，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线。

结果：丹皮酚浓度在2.0～50.0μg/ml范围内线性关系良好，其回归方程为Y＝5.493X+4.614×10^-3，r＝0.9999。

2.3.4.6精密度试验

精密吸取对照品溶液2μl，重复进样6次，测得矫正因子，计算RSD＝0.50％。结果见表7：

表7精密度试验结果

2.3.4.7重复性试验

取本品内容物，按含量测定中所述丹皮酚的供试品溶液制备方法制备，平行试验6份，测定，结果丹皮酚平均含量为9.57％，RSD＝1.04％。结果见表8：

表8重复性试验结果

2.3.4.8稳定性试验

取本品内容物，按含量测定所述的丹皮酚的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液2μl，分别于第0、2、4、8、12、24小时各进样一次，共进样6次，测得矫正因子，计算RSD＝0.56％。结果表明丹皮酚包合物供试品溶液在24小时内基本稳定。结果见表9：

表9稳定性试验结果

2.4包合物稳定性考察：

由于本实验采用的丹皮酚晶体为新制备的，其丹皮酚含量达99％，远高于文献报道的80％，故以丹皮酚含量作为包合率及稳定性研究的考察指标。

2.4.1抗光解性实验：

分别称取丹皮酚β-CD包合物和按制备投料比混匀所得的丹皮酚与β-CD混合物(以下简称混合物)各若干份，照射12d(强度3500cd)，于0，2，4，8，12d时取样，测定含量。实验结果见表10，表明包合物抗光解性优于混合物。

表10丹皮酚β-CD包合物和混合物抗光解性实验结果

2.4.2热稳定性实验：

分别称取包合物和混合物各若干份，分别于40℃、60℃、80℃恒温于干燥箱内放置12d，于第0，2，4，8，12d时取样，测定含量。结果见表12，表明包合物的热稳定性明显优于混合物。

表12丹皮酚β-CD包合物和混合物的热稳定性实验结果

2.4.3湿稳定性实验：

分别称取包合物和混合物适量，于相对湿度分别为75％和90％的条件下，室温放置12d，第0，2，4，8，12d时取样，测定含量，结果见表13，表明在高湿条件下，包合物较混合物稳定。

表13丹皮酚β-CD包合物和混合物的湿稳定性实验结果

本发明的有益效果：

1.有关丹皮酚的包合方法多为实验室条件如热溶法、加热搅拌法、超声法等，这些方法不利于产业化生产。本发明的技术方案采用胶体磨法制备丹皮酚β-CD包合物，以丹皮酚含量为指标计算的包合率达90％以上，高于现有文献报道值，而且该方法简便，利于产业化生产。

2.有关丹皮酚的含量测定方法文献报道的有导数光谱法、薄层色谱法和高效液相色谱法等，本实验采用气相色谱法，该方法简便灵敏、准确可行。

3.包合物经X射线衍射法、红外光谱法及差热分析法鉴定，丹皮酚与β-CD已形成一种新的物相，包合物确已形成。稳定性实验表明，包合物的抗光解性、热稳定性和湿稳定性明显高于混合物。可见采用本发明的制备方法，将丹皮酚被β-CD包合后，包合物对光、热和湿的稳定性显著提高。

说明书附图：

无。

具体实施方式：

实施例1：

1.丹皮酚包合物的制备：

取丹皮酚6倍量的β-环糊精，加入2倍量水中搅匀，加热至55℃；取丹皮酚加入到4倍量85％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨15min，出料，常温放置14小时，抽滤，40℃干燥，即得丹皮酚包合物。

2.丹皮酚包合物的检测

(1)色谱条件：气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱；进样口温度：230℃；检测器温度(FID)：240℃；分流比：25∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：1.0ml/min；进样：2μl；理论板数按丹皮酚峰计算，不低于600；

(2)对照品溶液制备：精密称取丹皮酚10mg，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

(3)内标溶液制备：精密吸取正十五烷100mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

(4)标准曲线制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置10ml量瓶中，并分别加入内标溶液1ml，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线；

(5)含量测定：精密称取丹皮酚包合物约10mg，置100ml量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定，即得。

实施例2：

1.丹皮酚包合物的制备：

取丹皮酚10倍量的β-环糊精，加入2.7倍量纯化水中搅匀，加热至60℃；取丹皮酚加入到5倍量95％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨20min，出料，常温放置24小时，抽滤，50℃干燥，即得丹皮酚包合物。丹皮酚包合物的检测

(1)色谱条件：气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱；进样口温度：220℃；检测器温度(FID)：230℃；分流比：20∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：1.0ml/min；进样：5μl；理论板数按丹皮酚峰计算，不低于600；

(2)对照品溶液制备：精密称取丹皮酚10mg，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

(3)内标溶液制备：精密吸取正十五烷100mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

(4)标准曲线制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置10ml量瓶中，并分别加入内标溶液1ml，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线；

(5)含量测定：精密称取丹皮酚包合物约10mg，置100ml量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定，即得。

实施例3：

1.丹皮酚包合物的制备：

取丹皮酚14倍量的β-环糊精，加入4倍量水中搅匀，加热至70℃；取丹皮酚加入到7倍量90％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨30min，出料，常温放置24小时，抽滤，60℃干燥，即得丹皮酚包合物。

2.丹皮酚包合物的检测

(1)色谱条件：气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱；进样口温度：240℃；检测器温度(FID)：250℃；分流比：25∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：1.0ml/min；进样：10μl；理论板数按丹皮酚峰计算，不低于600；

(2)对照品溶液制备：精密称取丹皮酚10mg，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

(3)内标溶液制备：精密吸取正十五烷100mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

(4)标准曲线制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置10ml量瓶中，并分别加入内标溶液1ml，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线；

(5)含量测定：精密称取丹皮酚包合物约10mg，置100ml量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定，即得。

Claims (4)

1.一种丹皮酚包合物的制备方法，其特征在于：取丹皮酚5～15倍量的β-环糊精，加入1～4倍量水中搅匀，加热至50～70℃；取丹皮酚加入到3～7倍量85～95％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨10～30min，出料，常温放置12～24小时，抽滤，40～60℃干燥，即得丹皮酚包合物。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：取丹皮酚10倍量的β-环糊精，加入2.7倍量纯化水中搅匀，加热至60℃；取丹皮酚加入到5倍量95％乙醇中，加热溶解后倒入β-环糊精溶液中，经胶体磨研磨20min，出料，常温放置24小时，抽滤，50℃干燥，即得丹皮酚包合物。

3.一种权利要求1-2所述丹皮酚包合物的含量测定方法，其特征在于可以采用气相色谱法进行含量测定，测定方法为：

(1)色谱条件：气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱；进样口温度：220～240℃；检测器温度：230～250℃；分流比：20～30∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃线性上升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：0.5～1.5ml/min；进样：1～10μl；

(2)对照品溶液制备：精密称取丹皮酚，置量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

(3)内标溶液制备：精密吸取正十五烷，置量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

(4)标准曲线制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置量瓶中，并分别加入内标溶液，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线；

(5)含量测定：精密称取待测的丹皮酚包合物，置量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定，计算，即得。

4.如权利要求3所述的含量测定方法，其特征在于：

(1)色谱条件：气相色谱仪；用5％二苯基-95％二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱；进样口温度：230℃；检测器温度：240℃；分流比：25∶1；程序升温：初始温度80℃，保持2min，以每分钟20℃线性上升至160℃，保持6min，测定；载气：氮气，流速：1.0ml/min；进样：2μl；理论板数按丹皮酚峰计算，不低于600；

(2)对照品溶液制备：精密称取丹皮酚10mg，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液；

(3)内标溶液制备：精密吸取正十五烷100mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标溶液；

(4)标准曲线制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，5.0ml置10ml量瓶中，并分别加入内标溶液1ml，最后加乙醇至刻度，混匀，进样测定，以对照品峰面积和内标峰面积比值为纵坐标，对照品浓度与内标浓度比值为横坐标，绘制标准曲线；

(5)含量测定：精密称取待测的丹皮酚包合物约10mg，置100ml量瓶中，加入适量乙醇，微加热使之充分溶解，再加入乙醇稀释至刻度，摇匀，进样，测定，即得。