CN102293827B - 一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药材樟树根以及含有樟树根、或樟树根提取物、或樟树根有效部位的药物制剂的质量检测方法，该方法中含有如下检测方法中的一种或几种：a.樟树苷A的薄层鉴别；b.二氢槲皮素的液相鉴别；c.特征图谱；d.二氢槲皮素的含量测定。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域，特别涉及一种樟树根及含有樟树根的制剂的质量检测方法。
背景技术
樟树根药材标准收载于1996年版《江西省中药材标准》，具有祛风湿、利关节行气活血的功效，用于风湿痹痛、四肢关节酸痛、心腹胀痛、跌打损伤、脚气、疥廯。目前国内已上市的中成药肠炎宁片、肠炎宁糖浆、肠炎宁口服液、肠炎宁胶囊、肠炎宁咀嚼片等都含有樟树根，但是由于对樟树根中的成分研究很不充分，导致以上药物的药品标准中没有建立樟树根药材的检测方法或者只有简单的鉴别，缺乏对樟树根药材中有效成分或特征成分的检测方法，不能对药材和制剂的质量进行有效控制。
发明人首次在樟树根药材中分离得到了樟树苷A、樟树苷A苷元和二氢槲皮素，其中樟树苷A和樟树苷A苷元为新化合物，并对不同产地的樟树根药材和含樟树根药材的中成药进行了分析，建立了樟树苷A和二氢槲皮素的鉴别方法、以樟树苷A、樟树苷A苷元和二氢槲皮素为参照物的特征图谱及二氢槲皮素的含量测定方法。由于樟树苷A和樟树苷A苷元为樟树根药材的特有成分，二氢槲皮素是一种二氢黄酮醇类化合物，属于维生素PP族，是一种应用广泛的生物活性剂，与其他的黄酮类化合物一样，在人体中具有多种生物活性，包括抗氧化、清除自由基、抗病毒、抗发炎、血管舒张和抗菌等作用，且在樟树根药材中含量相对较高，因此上述质量控制方法能有效控制药材及制剂的质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种樟树根及含有樟树根的制剂的质量检测方法，本发明质量检测方法能对药材和制剂的质量进行有效控制。
本发明提供的质量检测方法含有如下检测方法中的一种或几种：（1）樟树苷A的薄层鉴别；（2）二氢槲皮素的液相鉴别；（3）特征图谱；（4）二氢槲皮素的含量测定，其中：
（1）樟树苷A的薄层鉴别方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和樟树苷A对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，在105℃烘5分钟，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。其中，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水的体积比优选15:40:22:10；
（2）二氢槲皮素的液相鉴别方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI D高效液相法测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸水溶液为流动相；检测波长为285~290nm；优选：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为15:85的乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相；检测波长为288nm；
（3）特征图谱测定方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI D高效液相法测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸水溶液为流动相，采用梯度洗脱；柱温为20~40℃；检测波长为280~290nm；优选：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱：0min→40min→60min→80min，A与B的体积比为10:90→35:65→50:50→50:50；柱温为30℃；检测波长为285nm；
（4）二氢槲皮素的含量测定方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI D高效液相法测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸水溶液为流动相；检测波长为285~290nm；优选：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为15:85的乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相；检测波长为288nm。
本发明中樟树根为樟科植物樟Cinnamomum camphora （L.） Presl的干燥根或茎枝。
本发明中含有樟树根的制剂可以是樟树根单味药材提取物或樟树根有效部位的制剂，也可以是含有樟树根、或樟树根提取物、或樟树根有效部位的复方制剂，例如肠炎宁糖浆、肠炎宁片、肠炎宁咀嚼片、肠炎宁胶囊、肠炎宁颗粒、肠炎宁口服液和肠炎宁丸等。
本发明创新之处在于：前期通过对樟树根成分研究，从中首次分离得到了两个新化合物樟树苷A和樟树苷A苷元及活性成分二氢槲皮素；本发明在此基础上，建立了专属性强的药材及制剂的定性、定量检测方法，能够更好的控制药材及制剂的质量，确保临床疗效的稳定。
附图说明
附图1 樟树苷A的结构式。
附图2 樟树苷A苷元的结构式。
附图3 樟树根药材的特征图谱（峰1：樟树根苷A 峰2：樟树根苷A苷元 峰S：二氢槲皮素）。
具体实施方式
下述实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1：樟树根药材特征图谱测定
照高效液相法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为285nm。理论板数按二氢槲皮素计不低于3000；
| 时间（分钟） | 流动相A （%） | 流动相B（%） |
| 0～40 | 10～35 | 90～65 |
| 40～60 | 35～50 | 65～50 |
| 60～80 | 50 | 50 |
参照物溶液的制备 取樟树苷A对照品、樟树苷A苷元对照品、二氢槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含樟树苷A 20μg、樟树根苷A苷元20μg、二氢槲皮素30μg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；
结果 供试品特征图谱中有6个特征峰，其中3个峰分别与相应的参照物峰保留时间相同，以二氢槲皮素参照物峰相应的峰为S峰，各特征峰的相对保留时间在规定值的±5%之内。
实验例1 樟树根药材特征图谱测定研究
1．仪器设备、样品、试剂试药及对照品
仪器设备：Waters系列高效液相色谱仪，包括：Waters 600 controller，PDA2996型二极管阵列检测器，Waters 717 plus 自动进样器，Empower化学工作站。SHIMADZULC-2010AHT高效液相色谱仪，紫外可变波长检测器，Lc-solution色谱工作站。Sartorius BP211D电子天平；
色谱柱：Diamonsil C18(250×4.6mm，5μm)、waters Symmetry C18(250×4.6mm，5μm)和Agilent ZORBAX SB-C18Diamonsil C18(250×4.6mm，5μm) ；
相似度计算软件：《中药色谱指纹相似度评价系统2004年A版》（国家药典委员会发行）；
试剂：乙腈为色谱纯、水为超纯水，其它试剂均为分析纯；
样品：樟树苷A、樟树苷A苷元、二氢槲皮素对照品均为本实验室自制.
2．色谱条件的确定
2.1检测波长的选择
取按实施例1中供试品溶液制备方法制备的供试品溶液，注入液相色谱仪，以A：乙腈-B：0.1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，对供试品色谱400～200nm进行光谱扫描，经对各个波长的供试品色谱图进行比较，以285nm为检测波长，基线较平稳，各峰的响应值较大，较能反应样品中各个组分的信息.
2.2流动相的选择
流动相①A：乙腈-B：0.1%磷酸溶液为流动相，按表1进行梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：285nm；进样量：10μl；
表1 梯度洗脱表
| 时间（分钟） | 流动相A （%） | 流动相B（%） |
| 0～20 | 10 | 90 |
| 20～40 | 10→20 | 90→80 |
| 40～45 | 20→70 | 80→30 |
| 45～65 | 70 | 30 |
流动相②A：乙腈-B：0.1%磷酸溶液为流动相，按表2进行梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：285nm；进样量：10μl；
表2 梯度洗脱表
| 时间（分钟） | 流动相A （%） | 流动相B（%） |
| 0～40 | 5～30 | 95～70 |
| 40～45 | 30～70 | 70～30 |
| 45～65 | 70 | 30 |
流动相③A：乙腈-B：0.1%磷酸溶液为流动相，按表3进行梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：285nm；进样量：10μl；
表3 梯度洗脱表
| 时间（分钟） | 流动相A （%） | 流动相B（%） |
| 0～40 | 10～35 | 90～65 |
| 40～60 | 35～50 | 65～50 |
| 60～80 | 50 | 50 |
比较上述3个流动相的分离效果，流动相③分离效果最好，故选择流动相③为樟树根特征图谱流动相.
3．耐用性考察
取同一供试品溶液，比较不同柱温和不同品牌的色谱柱的耐用性.
3.1色谱柱柱温的比较
本次研究考察了柱温在25℃、30℃、35℃时樟树根HPLC色谱图的分离情况，通过不同温度所得色谱图，结果显示柱温在25-35℃间，分离效果无显著性差别.
3.2不同品牌的色谱柱
按实施例1所述色谱流动相，取樟树根供试品溶液，采用岛津Lc-2010系列高效色谱仪，分别使用 Diamonsil C18、waters Symmetry C18和Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱进行分析，记录色谱图。通过比较三个不同品牌的色谱柱所得色谱图，结果显示使用Diamonsil C18、waters Symmetry C18和Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱分离效果无显著性差别，本课题组选用了Agilent ZORBAX SB-C18柱进行了樟树根特征图谱研究.
4.樟树根对照特征图谱的建立
4.1参照物溶液的制备
取樟树苷A对照品、樟树苷A苷元对照品、二氢槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含樟树苷A苷元20μg、樟树苷A苷元20μg、二氢槲皮素30μg的混合溶液，即得；
吸取参照物溶液10μl，注入液相色谱仪，记录谱图.
4.2 2倍运行时间色谱图
取樟树根供试品溶液，按实施例1所述色谱条件，经140分钟色谱图观察，70分钟以后不再出色谱峰，表明该色谱条件在70分钟以内，可完成各成分的分离，结束仪器分析.
4.3空白溶剂试验
取甲醇溶液，采用实施例1色谱条件，进样10μl，记录谱图。结果显示空白液在色谱图中未出现与供试品溶液相应的色谱峰.
4.4 10批樟树根供试品HPLC图谱测定
取10批樟树根按实施例1所述方法制成供试品溶液，采用正文HPLC色谱条件进行测定，记录色谱图.
4.5数据处理原则与参数设定
通过上述测定所得色谱图，分别在Lc-solution色谱工作站设定积分参数，斜率灵敏度为200，峰宽为5，最小峰面积为1.0×105，最小峰高为0进行积分进行积分。逐个以txt数据文件的形式导出,按《中药色谱特征图谱相似度评价系统A版》对数据的要求修改数据格式.
4.6数据导入
将导出的上述10批樟树根供试品色谱图，分别导入《中药色谱特征图谱相似度评价系统A版》.
4.7樟树根对照谱图的生成与导出
将导入的10批樟树根供试品色谱图，对其中6个主要色谱峰进行色谱峰匹配，采用自动匹配生成对照特征图谱，并导出对照特征图谱的电子文件樟树根对照特征图谱文件.scp.
5.樟树根特征图谱方法学考察
通过上述色谱条件获得的樟树根的特征图谱包含6个主要色谱峰，选择抚州抚州样品1樟树根，以这6个主要峰为考察对象，对樟树根特征图谱进行方法学考察.
5.1精密度考察
取同一供试品溶液，连续进样5次，测定，考察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，精密度考察结果表明：各色谱峰相对保留时间和峰面积的RSD均小于2.0%，表明仪器精密度较好.
5.2稳定性考察
取樟树根按实施例1所述方法制成供试品溶液，在0、2、4、8、12、24小时进样，测定，考察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，稳定性考察结果表明：各色谱峰相对保留时间和峰面积的RSD均小于2.0%，表明样品在24小时内稳定.
5.3重复性考察
取本品6份，照实施例1供试品溶液的制备项下方法制备供试品溶液，进样，测定，考察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，重复性考察结果表明：各色谱峰相对保留时间和峰面积的RSD均小于2.0%，表明本测定方法重复性较好.
5.4樟树根HPLC特征图谱色谱峰指认
取樟树根按实施例1所述方法制备成供试品溶液。取樟树苷A、樟树苷A苷元、二氢槲皮素对照品对照品适量，分别加甲醇制成各自对照品溶液。 按实施例1所述色谱条件，分别吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录谱图。以保留时间先后顺序，对供试品溶液中3个主要色谱峰进行了指认，供试品溶液色谱中与对照品保留时间一致的色谱峰的化学成分依次为樟树根苷A、樟树根苷A苷元、二氢槲皮素对照品.
6. 10批樟树根特征图谱相似度测定
取10批樟树根，按实施例1所述条件进行测定，将上述10批樟树根供试品数据文件及樟树根对照特征图谱分别导入《中药色谱特征图谱相似度评价系统2004年 A版》，进行多点校正，并计算相似度，考察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果见表4.
表4 10批樟树根相似度计算结果
| 序号 | 批号 | 相似度计算结果 |
| S 1 | 鹰潭样品1 | 0.999 |
| S 2 | 抚州样品1 | 0.999 |
| S 3 | 抚州样品2 | 1 |
| S 4 | 抚州样品3 | 0.999 |
| S 5 | 抚州样品4 | 0.999 |
| S 6 | 赣州样品 | 0.982 |
| S 7 | 戈阳样品 | 0.962 |
| S 8 | 贵溪样品 | 0.891 |
| S 9 | 景德镇样品 | 0.926 |
| S 10 | 浙江样品 | 0.939 |
10批樟树根供试品色谱图经计算机相似度计算软件（国家药典委员会2004年 A版）与樟树根对照特征图谱进行比较，相似度结果均大于0.89，从目前的数据说明樟树根批与批之间有较好的均一性。综合以上数据，结合生产的可操作性，暂定相似度不低于0.85.
7. 10批樟树茎特征图谱相似度测定
取10批樟树茎，按实施例1所述条件进行测定，将上述10批樟树茎供试品数据文件及樟树茎对照特征图谱分别导入《中药色谱特征图谱相似度评价系统2004年 A版》，进行多点校正，并计算相似度，考察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果见表5.
表5 10批樟树茎相似度计算结果
| 序号 | 批号 | 相似度计算结果 |
| S 1 | 鹰潭 | 0.985 |
| S 2 | 福建 | 0.947 |
| S 3 | 抚州1 | 0.909 |
| S 4 | 抚州2 | 0.992 |
| S 5 | 抚州3 | 0.992 |
| S 6 | 抚州4 | 0.992 |
| S 7 | 戈阳 | 0.969 |
| S 8 | 贵溪1 | 0.847 |
| S 9 | 贵溪2 | 0.913 |
| S 10 | 浙江 | 0.958 |
10批樟树茎供试品色谱图经计算机相似度计算软件（国家药典委员会2004年 A版）与樟树根对照特征图谱进行比较，相似度结果均大于0.84，从目前的数据说明樟树茎批与批之间有较好的均一性。综合以上数据，结合生产的可操作性，暂定相似度不低于0.80.
8. 樟树根与樟树茎图谱相似度测定
将上述10批樟树根樟与树茎供试品数据文件分别导入《中药色谱特征图谱相似度评价系统2004年 A版》，进行多点校正，并计算相似度，结果见表6.
表6 10批樟树茎相似度计算结果
| 序号 | 批号 | 相似度计算结果 |
| S 1 | 鹰潭茎 | 0.984 |
| S 2 | 福建茎 | 0.924 |
| S 3 | 抚州茎1 | 0.906 |
| S 4 | 抚州茎2 | 0.999 |
| S 5 | 抚州茎3 | 0.999 |
| S 6 | 抚州茎4 | 0.999 |
| S 7 | 戈阳茎 | 0.95 |
| S 8 | 贵溪茎1 | 0.849 |
| S 9 | 贵溪茎2 | 0.91 |
| S 10 | 浙江茎 | 0.936 |
| S 11 | 鹰潭样品根1 | 0.999 |
| S 12 | 抚州样品根1 | 0.999 |
| S 13 | 抚州样品根2 | 0.998 |
| S 14 | 抚州样品根3 | 0.999 |
| S 15 | 抚州样品根4 | 0.999 |
| S 16 | 赣州样品根 | 0.854 |
| S 17 | 戈阳样品根 | 0.971 |
| S18 | 贵溪样品根 | 0.882 |
| S 19 | 景德镇样品根 | 0.917 |
| S 20 | 浙江样品根 | 0.914 |
10批樟树根供试品色谱图与10批樟树茎供试品色谱图经计算机相似度计算软件（国家药典委员会2004年 A版）与他们对照特征图谱进行比较，相似度结果均大于0.84，从目前的数据说明樟树根与樟树茎主要成分有较好的均一性。
实施例2 樟树根药材中二氢槲皮素的含量测定
照高效液相法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（15:85）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按二氢槲皮素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取二氢槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取樟树根药材粉末（过四号筛）约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
结果 本品按干燥品计算，含二氢槲皮素为0.023%。
实验例2 樟树根药材中二氢槲皮素的含量测定研究
1. 仪器、药品与试剂
高效液相色谱仪: 岛津Lc-2010HT高效液相色谱仪。KQ5200B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司生产；
二氢槲皮素对照品自制，纯度大于98%；
乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯；
2.色谱条件
Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），柱温：30℃。流动相：乙腈-0.1%磷酸（15:85），检测波长：288nm，流速：1.0ml/min。理论板数按二氢槲皮素峰计算应不得低于1500；
3. 对照品溶液的制备 精密称取二氢槲皮素对照品10.23mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，取上述母液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液；
4.供试品溶液的制备 取樟树根药材粉末（过四号筛）约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
5. 系统适应性试验
取二氢槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，以甲醇为空白，在400～210nm波长范围内进行光谱扫描，结果在287.6nm波长处有最大吸收，故确定检测波长为288nm。按2项下色谱条件测定，比较二氢槲皮素对照品溶液、供试品溶液的色谱图，结果二氢槲皮素色谱峰无拖尾，分离度良好；
6. 线性关系考察
精密称取二氢槲皮素对照品10.23mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，取上述母液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液，按2项下色谱条件，分别注入高效液相色谱仪1μl，3μl，5μl，10μl，20μl，测定峰面积。以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归分析，结果见表7.
表7 二氢槲皮素线性关系考察结果
| 二氢槲皮素(μg) | 峰面积 |
| 0.0409 | 132056 |
| 0.1228 | 398616 |
| 0.2046 | 667910 |
| 0.4092 | 1370560 |
| 0.8184 | 2682501 |
结果表明：二氢槲皮素在0.0409～0.8184μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系，回归方程Y=3.2888×106X+6.3182×102相关系数：R2=0.9998（n=5）.
7. 精密度试验
精密量取含二氢槲皮素（40μg /ml）的对照品溶液10μl，按2项下色谱条件，进样测定5次，精密度考察结果表明：各峰面积的RSD均小于2.0%，表明仪器精密度较好.
8．供试品溶液制备的条件考察
8.1提取溶剂的考察
取樟树根药材粉末（过四号筛）4份各约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、50%甲醇、75%甲醇及甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量, 分别用水、50%甲醇、75%甲醇及甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按2项下色谱条件测定，结果见表8.
表8 不同溶剂提取测定结果
| 溶剂 | 水 | 50%甲醇 | 75%甲醇 | 甲醇 |
| 二氢槲皮素含量 (mg/g） | 0.0047 | 0.0479 | 0.1345 | 0.1618 |
结果表明：甲醇提取率较高，故确定甲醇为最佳提取溶剂.
8.2提取体积的考察
取樟树根药材粉末（过四号筛）3份各约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25 ml，50 ml，100ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量, 分别甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，后两份精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按2项下色谱条件测定，结果见表9.
表9 不同提取方法测定结果
| 溶剂体积 | 25 ml | 50ml | 100ml |
| 二氢槲皮素含量 (mg/g） | 0.1596 | 0.1646 | 0.1642 |
结果表明：采用加热回流60分钟，加入甲醇50ml提取已比较完全，与加入甲醇100ml无明显差异，为节省成本，采用50ml的50%甲醇提取.
8.3 提取时间的考察
取樟树根药材粉末（过四号筛）4份各约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇50 ml，称定重量，浸渍30分钟后，分别加热回流提取20分钟，30分钟，60分钟，90分钟，放冷，再称定重量, 分别甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按2项下色谱条件测定，结果见表10.
表10不同提取时间考察结果
| 时间（分钟） | 20 | 30 | 60 | 90 |
| 二氢槲皮素含量（mg/g） | 0.0996 | 0.1325 | 0.1525 | 0.1517 |
结果表明：采用甲醇为提取溶剂，加热回流提取60分钟即可提取完全，故提取时间定为60分钟.
9. 稳定性试验
取供试品溶液，按2项下色谱条件测定二氢槲皮素在1、2、4、8、12、24小时内峰面积，稳定性考察结果表明：各峰面积的RSD均小于2.0%，表明样品在24小时内稳定.
10. 重复性试验
取樟树根药材粉末（过四号筛），一式5份，照4项下方法制备供试品溶液，并按2项下色谱条件测定，结果见表11，二氢槲皮素平均含量为0.15mg/g，RSD=1.9%.
表11 供试品溶液中二氢槲皮素重复性试验结果
| 样品取样量(g） | 峰面积 | 二氢槲皮素含量(mg/g) |
| 2.5021 | 622687 | 0.1525 |
| 2.5084 | 617453 | 0.1508 |
| 2.5095 | 635887 | 0.1552 |
| 2.5087 | 636552 | 0.1555 |
| 2.5004 | 607651 | 0.1489 |
11. 耐用性试验
取樟树根药材粉末（过四号筛），照4项下方法制备供试品溶液，分别用A：Diamonsil C18（250×4.6mm，5μm）、B: Agilent ZORBAX SB-C18（250×4.6mm,5μm）、C: Kromasil 100-5C18（250×4.6mm,5μm）三种品牌的色谱柱按2项下色谱条件对其进行测定，结果无明显差别.
12.范围
在线性范围内，测定取样量在1.3g和5g时候的回收率，考察在高低取样量的准确度.
12.1 低浓度取样量的回收率
取樟树根药材（二氢槲皮素含量为0.1526mg/g）粉末6份各约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入含二氢槲皮素（浓度1.802μg/ml）对照品的甲醇溶液50ml，称定重量，浸渍30分钟后，分别加热回流提取60分钟，取出，放冷，再称定重量,分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，分别精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。照2项下色谱条件测定，结果表明:按本方法试验，二氢槲皮素低浓度取样量的回收率为97.30%，RSD为1.4%，本方法测定二氢槲皮素低浓度取样量的回收率试验良好.
12.2 高浓度取样量的回收率
取樟树根药材（二氢槲皮素含量为0.1526mg/g）粉末6份各约2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入含二氢槲皮素（浓度7.924μg/ml）对照品的甲醇溶液50ml，称定重量，浸渍30分钟后，分别加热回流提取60分钟，取出，放冷，再称定重量,分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，分别精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。照2项下色谱条件测定，结果表明:按本方法试验，二氢槲皮素高浓度取样量的回收率为99.69%，RSD为1.6%，本方法测定二氢槲皮素高浓度取样量的回收率试验良好.
13. 回收率试验
取樟树根药材（二氢槲皮素含量为0.1526mg/g）粉末6份各约1.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入含二氢槲皮素（浓度3.602μg/ml）对照品的甲醇溶液50ml，称定重量，浸渍30分钟后，分别加热回流提取60分钟，取出，放冷，再称定重量,分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，分别精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。照2项下色谱条件测定，结果表明：本方法二氢槲皮素回收率为97.46%， RSD为1.3%，回收率试验良好，方法可行.
14. 样品测定
取樟树根药材10批，照4项下方法制备供试品溶液，并按2项下色谱条件测定，测定结果见表12、13.
表12 樟树根中二氢槲皮素含量测定结果
| 批号 | 二氢槲皮素含量（%） | 相对平均偏差（%） |
| 抚州 | 0.083 | 0.2 |
| 浙江 | 0.025 | 0 |
| 贵溪 | 0.048 | 0.1 |
| 福建 | 0.018 | 0.7 |
| 景德镇 | 0.020 | 0.1 |
| 戈阳 | 0.163 | 0.1 |
| 赣州 | 0.010 | 1.8 |
| 鹰潭1 | 0.022 | 1.1 |
| 鹰潭2 | 0.080 | 0.4 |
| 鹰潭3 | 0.018 | 0.3 |
表13 樟树茎中二氢槲皮素含量测定结果
| 批号 | 二氢槲皮素含量（%） | 相对平均偏差（%） |
| 抚州 | 0.025 | 0.9 |
| 浙江 | 0.050 | 0.4 |
| 贵溪 | 0.017 | 1 |
| 福建 | 0.054 | 0.8 |
| 景德镇 | 0.010 | 1.1 |
| 戈阳 | 0.028 | 0.1 |
| 赣州 | 0.012 | 1.3 |
| 鹰潭1 | 0.011 | 0.2 |
| 鹰潭2 | 0.013 | 0.4 |
| 鹰潭3 | 0.014 | 1.7 |
本品按干燥品计算，含二氢槲皮素不得少于0.01%。
实施例3 肠炎宁糖浆
地锦草 660g 黄毛耳草 900g 樟树根 660g
香薷 330g 枫树叶 330g
以上五味，加水煎煮二次，每次2小时，合并滤液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20(80℃)的清膏，加乙醇2倍量，搅拌，静置，滤过，滤液浓缩至适量，趁热加入蔗糖600g使溶解，滤过，滤液加尼泊金乙酯、香料适量，搅匀，加水调整总量至1000ml，即得.
樟树苷A薄层鉴别：
取本品3-6ml，加水稀释至30ml，用水饱和正丁醇振摇提取2-3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次30ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取樟树苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例4 肠炎宁片
地锦草 660g 黄毛耳草 900g 樟树根 660g
香薷 330g 枫树叶 330g
以上五味，取部分地锦草、香薷，分别粉碎成细粉，过80-120目筛，地锦草粉用文火炒至淡棕色至棕褐色，与香薷粉混匀；另取上述二味药物剩余部分和黄毛耳草、樟树根、枫树叶，加水提取2-3次，每次2-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至在80℃时测相对密度1.15-1.30，放冷，与上述药粉混合，干燥，粉碎成细粉，以0.1%樟脑油乙醇溶液润湿制成颗粒，干燥，加入适量辅料，压制成1000片，包衣，即得.
二氢槲皮素的含量测定：照高效液相法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定.
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（15:85）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按二氢槲皮素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取二氢槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，研细，取1.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
结果 本品每片含樟树根以二氢槲皮素计为8.4mg。
实施例5 肠炎宁丸中二氢槲皮素的液相鉴别
照高效液相法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（15:85）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按二氢槲皮素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取二氢槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，研细，取1.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
结果 供试品色谱中呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。
实施例6 肠炎宁胶囊中二氢槲皮素的含量测定
照高效液相法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（15:85）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按二氢槲皮素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取二氢槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取1.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
结果 本品每粒含樟树根以二氢槲皮素计为9.7mg。
实施例7 肠炎宁咀嚼片中樟树苷A薄层鉴别
取本品10片，研细，取2-3g，加入甲醇50ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使悬浮，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取樟树根苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例8 肠炎宁颗粒中樟树苷A薄层鉴别
取本品，研细，取3-6g，加入甲醇50ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使悬浮，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取樟树根苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例9 肠炎宁口服液中樟树苷A薄层鉴别
取本品3-6ml，加水稀释至30ml，用水饱和正丁醇振摇提取2-3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次30ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取樟树苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例10 樟树根药材
本品为樟科植物樟Cinnamomum camphora （L.） Presl的干燥根或茎枝.
【性状】 本品根呈类圆形，微扭曲，长3.0～20cm，直径0.5～15cm；或为不规则的块片，大小不一。表面红棕色、暗棕色或黄白色，粗糙，有纵沟和皱纹。质硬，断面灰棕色或黄白色，横断面可见年轮，纵断面有纵直走向的条纹。有特异的樟脑香气，味微苦而辛凉.
茎呈长圆柱形，多分枝，长短不一，直径3.0cm以上。表面红棕色或黄棕色，老枝灰褐色，具纵裂沟。质坚硬，不易折断，断面皮部薄，黄白色，木部宽广，淡黄色，中心有髓.
【鉴别】
（1） 本品粉末浅棕色或棕黄色。淀粉粒单粒球形或长圆形，直径3～22μm；复粒由2～5分粒组成。石细胞散在或成群，淡黄棕色，呈类长方形、类方形或多角形，直径49～117μm，壁厚2～13μm，层纹明显，纹孔较稀疏。纤维多见，成束或散离，多碎断，直径10～15μm，壁厚2～6μm，木质化。具缘纹孔导管直径40～110μm，多破碎，有的导管中含黄棕色物质。木薄壁细胞多角形，直径10～20μm，壁略增厚。木射线细胞狭长形，细胞壁连珠状增厚；
（2） 取本品粉末少许，进行微量升华，升华物中滴加新制的1%香草醛硫酸溶液2～3滴，滴液变为棕褐色，滴液边缘渐显玫瑰红色；
（3）取本品粉末2g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使悬浮，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取樟树根苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点.
【检查】
水分 照水分测定法（中国药典2010年版一部附录Ⅸ H第二法）测定，不得过15.0%.
总灰分 不得过5.0%（中国药典2010年版一部附录Ⅸ K）.
酸不溶性灰分 不得过1.0%（中国药典2010年版一部附录Ⅸ K）.
【特征图谱】 照高效液相法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定.
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为285nm。理论板数按二氢槲皮素计不低于3000；
| 时间（分钟） | 流动相A （%） | 流动相B（%） |
| 0～40 | 10～35 | 90～65 |
| 40～60 | 35～50 | 65～50 |
| 60～80 | 50 | 50 |
参照物溶液的制备 取樟树苷A对照品、樟树苷A苷元对照品、二氢槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含樟树苷A 20μg、樟树根苷A苷元20μg、二氢槲皮素30μg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；
供试品特征图谱中应有6个特征峰，其中3个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同，与二氢槲皮素参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内.
【含量测定】照高效液相法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定.
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（15:85）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按二氢槲皮素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备 精密称取二氢槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约2.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得.
挥发油总量 取本品30g，切碎后，精密称定，照挥发油含量测定法甲法（中国药典2010年版一部附录Ⅹ D）测定.
本品按干燥品计算，含挥发油不得少于0.5%（ml/g）。
实施例11 樟树根药材
本品为樟科植物樟Cinnamomum camphora （L.） Presl的干燥根或茎枝。全年采收生长8年及8年以上树龄的根及直径3cm以上的茎枝或砍伐后留下的树根，除去泥沙，锯断劈成长条或块片，阴干.
【性状】本品根呈类圆形，微扭曲，长3.0～20cm，直径0.5～15cm；或为不规则的块片，大小不一。表面红棕色、暗棕色或黄白色，粗糙，有纵沟和皱纹。质硬，断面灰棕色或黄白色，横断面可见年轮，纵断面有纵直走向的条纹。有特异的樟脑香气，味微苦而辛凉.
茎呈长圆柱形，多分枝，长短不一，直径3.0cm以上。表面红棕色或黄棕色，老枝灰褐色，具纵裂沟。质坚硬，不易折断，断面皮部薄，黄白色，木部宽广，淡黄色，中心有髓.
【鉴别】
（1） 本品粉末浅棕色或棕黄色。淀粉粒单粒球形或长圆形，直径3～22μm；复粒由2～5分粒组成。石细胞散在或成群，淡黄棕色，呈类长方形、类方形或多角形，直径49～117μm，壁厚2～13μm，层纹明显，纹孔较稀疏。纤维多见，成束或散离，多碎断，直径10～15μm，壁厚2～6μm，木质化。具缘纹孔导管直径40～110μm，多破碎，有的导管中含黄棕色物质。木薄壁细胞多角形，直径10～20μm，壁略增厚。木射线细胞狭长形，细胞壁连珠状增厚.
（2） 取本品粉末少许，进行微量升华，升华物中滴加新制的1%香草醛硫酸溶液2～3滴，滴液变为棕褐色，滴液边缘渐显玫瑰红色.
（3）照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部 附录VI D）测定.
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸（15:85）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按花旗松素峰计算应不低于1500;
对照品溶液的制备 称取花旗松素对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得;
供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约2.5g，称定,置具塞锥形瓶中，加入甲醇50ml，称定重量，浸渍30分钟后，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液25ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。供试品色谱中应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰.
【检查】
水分 照水分测定法（中国药典2010年版一部附录Ⅸ H第二法）测定，不得过15.0%.
总灰分 不得过5.0%（中国药典2010年版一部附录Ⅸ K）.
酸不溶性灰分 不得过1.0%（中国药典2010年版一部附录Ⅸ K）.
【含量测定】 取本品100g，精密称定，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录ⅩD甲法）测定.
本品按干燥品计算，含挥发油不得少于0.5%（ml/g）。
Claims (7)
1.一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法，其特征在于该方法中含有如下检测方法中的一种或几种：（1）樟树苷A的薄层鉴别；（2）二氢槲皮素的液相鉴别；（3）特征图谱；（4）二氢槲皮素的含量测定，其中：
（1）樟树苷A的薄层鉴别方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和樟树苷A对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:40:22:10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，在105℃烘5分钟，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（2）二氢槲皮素的液相鉴别方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI D高效液相法测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为15:85的乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相；检测波长为285~290nm；
（3）特征图谱测定方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI D高效液相法测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱：0min→40min→60min→80min，A与B的体积比为10:90→35:65→50:50→50:50；柱温为20~40℃；检测波长为280~290nm；
（4）二氢槲皮素的含量测定方法如下：
照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI D高效液相法测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为15:85的乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相；检测波长为285~290nm。
2.如权利要求1所述的一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法，其特征在于所述（2）二氢槲皮素的液相鉴别方法中的检测波长为288nm。
3.如权利要求1所述的一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法，其特征在于所述（3）特征图谱测定方法中的检测波长为285nm。
4.如权利要求1所述的一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法，其特征在于所述（4）二氢槲皮素的含量测定方法中的检测波长为288nm。
5.如权利要求1-4任一所述的一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法，其特征在于所述的樟树根为樟科植物樟Cinnamomum camphora （L.） Presl的干燥根或茎枝。
6.如权利要求1-4任一所述的一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法，其特征在于含有樟树根的制剂可以是樟树根单味药材提取物或樟树根有效部位的制剂，也可以是含有樟树根、或樟树根提取物、或樟树根有效部位的复方制剂。
7.如权利要求1-4任一所述的一种樟树根及含有樟树根的制剂的检测方法，其特征在于含有樟树根的制剂是肠炎宁糖浆、肠炎宁片、肠炎宁咀嚼片、肠炎宁胶囊、肠炎宁颗粒、肠炎宁口服液和肠炎宁丸中的任意一种。
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