CN102112142A - 用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法 - Google Patents

用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102112142A
CN102112142A CN2009801308750A CN200980130875A CN102112142A CN 102112142 A CN102112142 A CN 102112142A CN 2009801308750 A CN2009801308750 A CN 2009801308750A CN 200980130875 A CN200980130875 A CN 200980130875A CN 102112142 A CN102112142 A CN 102112142A
Authority
CN
China
Prior art keywords
glycyrrhizin
extract
radix glycyrrhizae
organic solvent
content
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2009801308750A
Other languages
English (en)
Inventor
郑灿圭
孙世一
金弘起
金亨善
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Daewon Pharm Co Ltd
Original Assignee
Daewon Pharm Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Daewon Pharm Co Ltd filed Critical Daewon Pharm Co Ltd
Priority claimed from PCT/KR2009/004331 external-priority patent/WO2010013987A2/en
Publication of CN102112142A publication Critical patent/CN102112142A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

本发明公开了一种提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法，该方法包括：用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂提取甘草得到含甘草苷的产物(步骤1)；以及将水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂加入步骤1中提取得到的含甘草苷的产物中，向溶液中加入酸或碱，水解混合物以制备含甘草素的产物(步骤2)。

Description

用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法
技术领域
本发明涉及提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法。
背景技术
通常，甘草是多年生的植物，属于蔷薇目豆科，它的根是红褐色，生长在深厚土层中，它的角茎(angular stem)垂直地长至约1m～约1.5m。它的叶子是带有点尖(pointed tips)的斜椭圆形。叶子约2cm～约5cm长，约1cm～约3cm宽，没有任何内颚叶(1acinia)。它的花与大豆的花相似，在夏天开靛紫色花，是一种总状花序。
与古老的习语，“东方药房中的甘草”相符地是，这种植物是一种广泛用于东方药学实践中的草药。根据甘草的药理作用，它结合肝脏中的有毒物质并为肝脏解毒，对治疗吸毒成瘾、肝炎、荨麻疹、皮炎、湿疹等是有用的。此外，它不仅具有去咳化痰的功效，还具有抗组胺和抗乙酰胆碱能的功效。它具有缓解由肌肉或组织的突然紧张所致疼痛、减缓体重增加以及白细胞数量的增加的功效，还具有利尿，抗炎的功效等，特别是其中的成分，如甘草苷，甘草素等抑制消化性溃疡的产生。
据《东医宝鉴》，朝鲜王朝(1392～1910)时期由Huh Jun编写的一部悠久的东方医学科学纲要，其中记载“甘草消除了所有的药物毒性，集合了72类不同石药(矿物药)和约1200类不同草药的功效，所以被称为“国老”，意思是国家的长老。该植物通常控制韩烈(冷和热)和四齐(暖热凉热)，使耳朵、眼睛、嘴、鼻、尿液和粪便的生理正常，促进血液在所有血管中的流动，增强肌肉和骨骼，改善全身的营养状况。”
已知，在竹笋或蘑菇所致中毒的民间疗法中，人们将所述植物煎煮成药汤饮用，且已知通过煎煮所述植物并饮用煮沸的植物汤汁，其对烟草中毒、吸毒成瘾和其它成瘾是有效的。因此，甘草已被用来作为对各种中毒的解毒剂，它已被广泛认为是非常重要的草药(galenical)如镇咳药、祛痰药、调味品和缓和剂(palliative)，不仅用于东方药物，而且用于新药和民间医药。
甘草提取物含有高含量的甘草苷、甘草素、芹糖甘草苷、异甘草苷、含有异芹糖甘草苷和苷元的黄酮类化合物，以及主要含有甘草苷和芹糖甘草苷的甲醇流分(Kamei，J等，Eur.J.Pharmacol.，469，pp159-63，2003)。在这些成分中，已知甘草素显示出各种生理活性如抗痴呆、抗菌、抗氧化、抗血管生成、抗皮肤癌、为镉中毒解毒等功效。
有关甘草素的传统工艺，韩国专利No.5353872公开了一种治疗和预防由重金属成瘾所致疾病的含甘草素的组合物，以及韩国专利No.697056公开了一种治疗和预防肝癌的含有甘草素作为活性成分的组合物。
具有这些不同生理活性的甘草素一般通过传统方法用水或低级醇提取。然而，由于甘草提取物中的甘草素含量低，已进行了许多研究以提高甘草提取物中的甘草素含量。
例如，韩国专利No.592482公开了一种提高甘草提取物中的甘草素含量的方法，包括：
将甘草分割成小段，将小段用水在100℃下回流提取，过滤提取物，然后冷冻干燥滤出物；用具有糖水解活性的细菌或细菌的酶液处理上述步骤得到的冷冻干燥的物质，然后在约20℃～约50℃下静置约10分钟～约36小时；向上述步骤培养得到的培养物中加入2倍～10倍量的乙醇，将其分为乙醇可溶部分和乙醇不溶部分，然后减压浓缩乙醇可溶部分，获得提取物；将上述步骤得到的提取物分散于蒸馏水中进行三相萃取分配，然后浓缩可溶流分；以及在二氯甲烷和甲醇的混合溶剂中对上述步骤中的第七流分进行重结晶，获得纯的甘草素。
然而，该方法的问题在于由于使用了细菌或细菌的酶液，使各步骤复杂，成本增加。
韩国专利No.37789公开了一种提高甘草或甘草提取物中的活性成分-甘草素含量的方法，包括：
将甘草苷溶解于DMSO中；向溶液中加入1M HCl；水浴加热所述混合物，进行甘草苷的酸水解；加入等量的1M HCl以中和酸性部分；以及用含有氯仿和丙酮的溶剂组合进行硅胶层析以纯化杂质如酸水解过程中产生的糖和盐。
然而，由于该方法中高熔点的DMSO难以去除，需要做许多诸如检查残留溶剂的工作，当使用HCl进行酸水解时，问题产生了，由于缓慢的水解反应，耗时的酸水解是不可避免的，而产生的甘草素纯度并不好。
因此，本发明人研究了一种简单高效的提高甘草提取物中甘草素含量的方法，应理解为在约80℃～约100℃下，当向提取物中加入强酸或强碱时，生成之后易于分离的含有甘草素的产物沉淀，所述提取物是通过将甘草加入水、有机溶剂或有机溶剂的混合溶剂中并使用超声波提取得到的，通过简单的方法使甘草提取物中的甘草素提取含量增加，并最终形成本发明。
发明内容
技术问题
本发明的一个目的是提供一种提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法。
技术方案
为了实现本发明的目的，本发明提供一种提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法，该方法包括：
用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂提取甘草得到含甘草苷的产物(步骤1)；以及将水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂加入步骤1中提取的含甘草苷的产物中，向溶液中加入酸或碱，水解该混合物以制备含甘草素的产物(步骤2)。
有益效果
由于本发明方法无需使用高价的溶剂，省略了柱层析过程以简化步骤，比采用传统方法获得了含更高含量(约8～23％)甘草素的提取物，该方法在甘草素提取过程中是有用的。
最佳实施方式
参考附图并通过以下优选实施方式的详细描述，本发明的特征和优点将被更清楚地理解。首先指出地是，本文使用的术语或词语应被视为与本发明的精神相应的含义或概念，依据的原则是发明人可适当定义这些术语的概念以最好的描述他自己的发明。此外，应理解地是，与本发明有关的已知的功能和结构的详细描述将被省略掉，以免不必要地掩盖了本发明的重点。
本发明提供一种提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法，该方法包括：
用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂提取甘草以得到含甘草苷的产物(步骤1)；以及将水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂加入步骤1中提取的含甘草苷的产物中，向溶液中加入酸或碱，水解该混合物以制备含甘草素的产物(步骤2)。
以下将详细描述本发明。
首先，在步骤1中，用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂提取甘草以得到含甘草苷的产物。
由于甘草中甘草素的含量近乎为0％，可以首先从甘草中提取甘草苷，然后水解得到甘草素。
在该步骤中，甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、甘草林恩(Glycyrrhiza glabra Linne.)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、甘草林恩(Glycyrrhiza glabra Linne.)、胀果甘草蝙蝠(Glycyrrhiza inflataBat.)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)和甘草林恩(Glycyrrhizaglabra Linne.)等，可作为甘草使用。
可优选水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂作为该步骤提取过程中的溶剂，所述有机溶剂可优选包括低级醇，如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇等，丙酮、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、二甲醚、乙醚以及二甲基甲酰胺、苯、甲苯和二甲苯等。
根据本发明方法，可优选加入甘草重量2倍～10倍量的溶剂用于提取，更优选4倍～8倍的量，但不限于此。
根据本发明方法，提取温度可优选为约30℃～约100℃，更优选为约80℃～约100℃，但不限于此。
根据本发明方法，提取时间可优选为约1小时～约10小时，更优选为约4小时～约8小时，但不限于此。
根据本发明方法，提取方法可包括但不限于加热及搅拌提取，回流提取、超声提取和浸渍。
根据本发明方法，提取的次数可优选为但不限于一次～五次。
根据所述方法，可提取含甘草苷的甘草提取物，将得到的提取物进行过滤并在减压下浓缩以得到含甘草苷的产物。
接下来，在步骤2中，将水、有机溶剂，或有机溶剂的混合溶剂引入到步骤1中得到的含甘草苷的产物中，向产物中加入酸或碱，水解产物中含有的甘草苷制备含甘草素的产物。
然后使用的有机溶剂可优选包括低级醇如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇等，丙酮、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、二甲醚、乙醚以及二甲基甲酰胺、苯、甲苯和二甲苯等。在有机溶剂中，甲醇或乙醇的浓度可为70％～100％。
所述酸可优选为强酸，例如盐酸、硫酸、硝酸或它们的任意混合溶剂。优选使用硫酸。更优选使用约1M～约5M的硫酸。作为碱，优选使用氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或它们的任意混合物，优选使用氢氧化钙。更优选使用约1M～约5M的氢氧化钙。
根据本发明方法，反应温度优选为约50℃～约100℃，更优选为约80℃～约100℃。
由于甘草素在水中不溶，在水解后，可将反应混合物降至室温以得到沉淀，甘草素含量达到约5％～约15％。随后，将沉淀溶于有机溶剂中，用水洗几次，然后浓缩有机层并在减压下干燥将甘草素含量提高至约8％～约23％。然后使用的有机溶剂可包括低级醇如正丁醇、叔丁醇等，乙酸乙酯、二甲醚、乙醚以及二甲基甲酰胺、苯、甲苯和二甲苯等。
当干燥有机溶剂时，优选减压下干燥，而不是热风干燥，减压干燥所述沉淀的有机溶剂之后，可将沉淀再次溶于乙醇中并在减压下再次干燥沉淀以更大程度地减少残留溶剂的量。
由于本发明方法无需使用高价的溶剂，省略了柱层析过程以简化步骤，比采用传统方法获得了含更高含量(约8～23％)甘草素的提取物，该方法在甘草素提取过程中是有用的。
实施方式
以下给出优选实施例以更好地理解本发明。然而，以下实施例仅用于理解本发明，本发明并不限于以下实施例。
<实施例1>甘草素1的制备
(1)含甘草苷的甘草提取物的制备
从东方药商那里购买到甘草并精确区分后，将其分割成小段(甘草段)使用。甘草中含有的甘草苷的含量不到1％。向约100g的甘草段中加入800ml约80％～约90％的甲醇，并在约85℃下加热搅拌约8小时。随后，冷却并过滤，然后在减压下浓缩，得到含约25.8g甘草苷的提取物。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ7.61(1H，d，8.6Hz)7.08(2H，d，8.4Hz)6.81(2H，d，8.4Hz)6.49(1H，dd，8.6Hz)，6.37(1H，d，2.4Hz)，5.41(1H，dd，13.2，3.1)5.37(2H，dd，13.0，2.9Hz)，3.49(3H，t，2.4Hz)，3.05(1H，dd，17.0，13.0)，2.68(1H，dd，17.0，2.9)。
在得到的甘草提取物中，按照以下方法测定甘草苷的含量。具体地，精确称量约0.5g提取物，用约50ml约80％的甲醇进行超声提取，然后过滤以制备试验溶液。另外，精确称量约10mg甘草苷标准品以制备50ml标准溶液，然后各取20μl的试验溶液和标准溶液用于检测，使用液相色谱按照以下条件测定甘草苷的含量，考虑到稀释因素。
*检测器：紫外分光光度计(测量波长：约254nm)
*柱：十八烷基硅胶，约5μm，约4.6mm×约15cm
*流动相：约1％乙酸混合溶液：ACN＝9∶1
*流速：约1ml/min
根据该方法的测定显示：从甘草提取物中获得的甘草苷含量约为2.3％。
(2)甘草素的制备
将约100g(1)中得到的提取物分散于约500ml水中，向其中加入3M硫酸250ml，在约90℃～约100℃下加热搅拌约2小时。随后，将混合物冷却至室温，过滤生成的沉淀并干燥产生约34g的深褐色物质(甘草素含量：约8.5％)。
随后，将约30g的所述物质溶于约300ml乙酸乙酯中，用约300ml水洗两次，浓缩并减压干燥除去溶剂，得到约22g深褐色晶体(甘草素含量：约11％)。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ7.73(1H，d，8.6Hz，H-5)7.33(2H，d，8.4Hz)6.81(2H，d，8.4Hz)6.49(1H，dd，8.6Hz)，6.35(1H，d，2.4Hz)，5.37(2H，dd，13.0，2.9Hz)，3.05(1H，dd，17.0，13.0)，2.68(1H，dd，17.0，2.9)。
然后，按照以下方法测定甘草素的含量。具体地，精确称量约0.1g产物，用约50ml约80％的甲醇进行超声提取，然后过滤以制备试验溶液。另外，精确称量约10mg甘草苷标准品以制备50ml标准溶液，然后各取20μl的试验溶液和标准溶液用于检测，使用液相色谱按照以下条件测定甘草素的含量，考虑到稀释因素。
*检测器：紫外分光光度计(测量波长：约254nm)
*柱：十八烷基硅胶，约5μm，约4.6mm×约15cm
*流动相：约0.01M磷酸：ACN＝67∶33
*流速：约1ml/min
<实施例2>甘草素2的制备
采用与实施例1相同的方法得到约23g深褐色物质(甘草素含量：约11.2％)，不同之处在于向甘草中加入约80％的乙醇以制备提取物。
<实施例3>甘草素3的制备
采用与实施例1相同的方法得到约23g深褐色物质(甘草素含量：约11.8％)，不同之处在于向甘草中添加约80％的甲醇得到提取物后，再向提取物中加入约100％的甲醇，得到含甘草苷的提取物(约2.9％)。
<实施例4>甘草素4的制备
采用与实施例1相同的方法产生约25g深褐色物质(甘草素含量：约12.1％)，不同之处在于提取工艺是用约80％的乙醇提取甘草两次。
<对比例1>甘草素1的传统制备方法
向约100g甘草段中加入约800ml约80％～100％的甲醇，室温下静置48小时。随后，过滤该混合物并减压浓缩，得到约18.4g～约21.2g提取物(甘草素含量：约1.3～约1.6)。将得到的提取物溶于200ml DMSO中，向溶液中加入1N HCl 100ml，100℃水浴加热所述混合物6小时。将混合物冷却至室温，向其中加入等量的1N NaOH以中和酸性部分，然后冷冻干燥约48小时，得到约28g提取物(甘草素含量：约0.8％)。
<对比例2>甘草素2的传统制备方法
采用与实施例1相同的方法得到约29g含甘草素的提取物(甘草素含量：约0.7％)，不同之处在于用乙醇替换甲醇作为溶剂。
<实验例1>甘草苷的高效提取实验
(1)依照提取溶剂的甘草苷含量
，为测定根据提取溶剂的不同，甘草提取物中甘草苷的含量，在表1中给出的提取溶剂和提取温度的条件下，加热搅拌约100g的甘草段8小时，用实施例1中测定甘草苷含量的方法测定所述提取物中甘草苷的含量，结果列于表1中。
表1
  提取溶剂 提取温度(℃)   甘草苷含量(％)
  甲醇   85   2.2
  乙醇   85   1.9
  异丙醇   85   1.9
  正丙醇   85   1.9
  正丁醇   85   1.7
  叔丁醇   85   1.6
  二甲基甲酰胺   85   1.8
  丙酮   80   1.7
  乙腈   80   1.7
  乙酸乙酯   80   1.8
  四氢呋喃   80   1.8
  二甲醚   50   1.1
  乙醚   55   1.2
  正己烷   70   0.2
  苯   85   0.7
  甲苯   85   0.8
  二甲苯   85   0.8
  二氯甲烷   40   0.3
  氯仿   40   0.4
如表1所示，确定以甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、叔丁醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、二甲醚、乙醚、二甲基甲酰胺、苯和乙腈作为提取溶剂时，甘草提取物中的甘草苷含量为约1％～约2％，并确定甘草苷提取物在正己烷、苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷和氯仿中提取较差。
(2)根据提取溶剂中甲醇或乙醇的浓度测定的甘草苷含量
依照提取溶剂中甲醇或乙醇的浓度，为确定甘草提取物中甘草苷的含量，通过改变提取溶剂甲醇或乙醇的浓度，在约85℃下加热搅拌约100g甘草约8小时，生成甘草提取物，用实施例1中测定甘草苷含量的方法测定提取物中甘草苷的含量，结果列于表2中。
表2
  提取溶剂   甘草含量(％)
  50％甲醇   1.7
  60％甲醇   1.9
  70％甲醇   2.0
  80％甲醇   2.3
  90％甲醇   2.3
  100％甲醇   2.2
  50％乙醇   1.6
  60％乙醇   1.5
  70％乙醇   2.1
  80％乙醇   2.3
  90％乙醇   2.0
  100％乙醇   1.9
如表2所示，确定当甲醇或乙醇为约80％～约100％时，甘草提取物中甘草苷含量高。
(3)根据提取温度的甘草苷含量
为测定根据提取温度的不同，甘草提取物中甘草苷的含量，进行如下实验。
将约800ml约80％～约100％甲醇或乙醇加入约100g甘草段中，在约85℃下加热搅拌约8小时进行提取。作为对比例，采用相同方法提取24小时。随后得到的提取物中甘草苷含量用实施例1中测定甘草苷含量的方法进行测定，结果列于表3中。
表3
Figure BPA00001309406700111
如表3所示，确定在85℃下提取的甘草苷含量为在室温下提取物的甘草苷含量的约1.5倍。
因此，为了从甘草中高效提取甘草苷，确定用约80％～约100％甲醇或乙醇作为提取溶剂，并优选在80℃或更高温度下进行提取。
(4)依照超声提取的甘草苷含量
为测定依照提取温度和超声提取，甘草提取物中甘草苷的含量，进行如下实验。
将约800ml约80％～约100％甲醇或乙醇加入约100g甘草段中，在约60℃下超声约8小时进行提取。作为对比例，采用相同方法提取8小时。随后得到的提取物中甘草苷含量用实施例1中测定甘草苷含量的方法进行测定，结果列于表4中。
表4
Figure BPA00001309406700112
如表4所示，确定在60℃下提取的甘草苷量为在室温下提取物的甘草苷量的约1.4倍。
因此，为了从甘草中高效提取甘草苷，确定用约80％～约100％甲醇或乙醇作为提取溶剂，并优选在60℃或更高温度下进行提取。
<实验例2>甘草苷水解为甘草素的实验
(1)依照水解温度的甘草素含量
根据本发明，在通过向含甘草苷的甘草提取物中加入酸，将甘草苷水解为甘草素的反应中，依照水解温度，进行如下实验以测定水解后产生的甘草素的含量。
将约100g<实验例1>中得到的含甘草苷的甘草提取物分散于约500ml水中，向溶液中加入约3M硫酸约250ml进行水解反应。随后，通过改变水解反温度(从约50℃～约100℃)，进行反应约2小时。随后，将反应混合物降至室温以形成沉淀，过滤沉淀并干燥以生成含甘草素的产物。用实施例1中测定甘草素含量的方法测定产物中甘草素的含量，结果列于表5中。
表5
  反应温度(℃)   甘草素含量(％)
  50   2.4
  60   3.7
  70   5.2
  80   7.2
  90   8.5
  100   8.5
如表5所示，测得随着反应温度升高，水解产生的甘草素的量增加，确定当水解反应在约90℃～约100℃下进行时，甘草素含量增加约8.5％。
(2)根据酸种类的甘草素含量
根据本发明，在通过将含甘草苷的甘草提取物加入并分散于水中，然后向溶液中加入酸，将甘草苷水解为甘草素的反应中，依照酸的种类，进行如下实验以测定甘草素的含量。
将约100g<实验例1>中得到的含甘草苷的甘草提取物加入并分散于约500ml水中，向混合物中加入约1M～约5M盐酸、硫酸、硝酸及它们的混合溶液约250ml在约100℃下进行水解反应约2小时。随后，将反应混合物降至室温以形成沉淀，过滤沉淀并干燥以生成含甘草素的产物。用实施例1中测定甘草素含量的方法测定产物中甘草素的含量，结果列于表6中。
表6
  酸   甘草素含量(％)
  1M盐酸   2.2
  3M盐酸   4.3
  5M盐酸   5.1
  1M硫酸   7.3
  3M硫酸   8.5
  5M硫酸   7.9
  1M硝酸   7.2
  3M硝酸   8.1
  5M硝酸   7.2
  3M盐酸+3M硫酸   7.4
  3M盐酸+3M硝酸   7.3
  3M硝酸+3M硫酸   8.1
如表6所示，确定当使用硫酸或硝酸作为酸时，得到含高甘草素含量的提取物，当使用约3M硫酸时，甘草素含量增加约8.5％。
(3)依照碱种类的甘草素含量
根据本发明，在通过将含甘草苷的甘草提取物加入并分散于水中，然后向溶液中加入碱，将甘草苷水解为甘草素的反应中，依照碱的种类，进行如下实验以测定甘草素的含量。
将约100g<实验例1>中得到的含甘草苷的甘草提取物加入并分散于约500ml水中，向混合物中加入约1M～约5M氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙及它们的混合溶液约250ml在约100℃下进行水解反应约2小时。随后，将反应混合物降至室温以形成沉淀，过滤沉淀并干燥以生成含甘草素的产物。用实施例1中测定甘草素含量的方法测定产物中甘草素的含量，结果列于表7中。
表7
  碱   甘草素含量(％)
  1M氢氧化钠   1.5
  3M氢氧化钠   3.2
  5M氢氧化钠   5.7
  1M氢氧化钾   2.1
  3M氢氧化钾   4.3
  5M氢氧化钾   6.2
  1M氢氧化钙   2.2
  3M氢氧化钙   4.4
  5M氢氧化钙   6.5
  3M氢氧化钠+3M氢氧化钾   6.1
  3M氢氧化钠+3M氢氧化钙   6.3
  3M氢氧化钾+3M氢氧化钙   6.4
如表7所示，确定当使用氢氧化钠、氢氧化钾及氢氧化钙作为碱时，可以得到含甘草素的提取物，特别是当使用约5M氢氧化钙时，甘草素含量能增加约6.5％。这被认为是由于甘草素在碱溶液中的溶解度增加，所有提取物均不沉淀，一部分提取物溶于溶液中并流失，导致比表6中的甘草素含量低。
(4)依照溶剂种类的甘草素含量
根据本发明，在通过将含甘草苷的甘草提取物加入并分散于水中，然后向溶液中加入酸，将甘草苷水解为甘草素的反应中，进行如下实验以测定当加入有机溶剂而不是水时，甘草素含量在有机溶剂中的变化。作为对照组，仅使用水而不添加如何有机溶剂。
向约100g<实验例1>中得到的含甘草苷的甘草提取物中加入约500ml有机溶剂、约500ml水和约250ml 3M硫酸，然后在约85℃下加热搅拌约2小时，或仅向约100g含甘草苷的甘草提取物中加入约500ml有机溶剂和硫酸，相当于3M硫酸约250m1，然后在约85℃下加热搅拌约2小时。随后，将反应混合物降至室温以形成沉淀，分离有机层并用水洗两次，浓缩并减压干燥以生成含甘草素的产物。用实施例1中测定甘草素含量的方法测定产物中甘草素的含量，结果列于表8中。
表8
如表8所示，确定当水解过程中加入水和有机溶剂时，甘草素含量比仅使用水时的含量略低，比仅使用有机溶剂时的含量高。
因此，根据本发明方法，将含甘草苷的甘草提取物加入并分散于水中，向溶液中加入酸，然后提高反应温度以增加甘草素含量。
<实验例3>提高甘草素沉淀含量的方法
(1)依照溶剂种类的甘草素含量
根据本发明，向含甘草苷的甘草提取物中加入酸将甘草苷水解为甘草素，然后将得到的沉淀溶于有机溶剂中，用纯水洗，进行如下实验以确定除去了多少杂质，甘草素含量增加了多少。
向约10g<实验例2>中得到的含甘草苷的甘草提取物中加入约100ml有机溶剂，用约100ml水洗两次，蒸馏所述有机溶剂并减压干燥以获得含甘草素的产物。用实施例1中测定甘草素含量的方法测定产物中甘草素的含量，结果列于表9中。
表9
  水解溶剂   甘草素含量(％)   甘草提取物重量(g)
  正丁醇   10.3   8.6
  叔丁醇   10.7   8.1
  乙酸乙酯   11.5   7.5
  二甲醚   8.9   9.3
  乙醚   9.2   9.6
  二甲基甲酰胺   10.4   8.2
  正己烷   不溶
  苯   8.6   9.1
  甲苯   9.0   9.4
  二氯甲烷   8.7   9.8
  氯仿   8.5   9.9
如表9所示，测得以丁醇、乙酸乙酯和二甲基甲酰胺作为极性溶剂，甘草素含量提高约10％，而在非极性溶剂中不易溶或甘草素含量的增加微乎其微。确定在提取物溶于有机溶剂及水洗过程中，除去了杂质而非甘草素。
(2)依照甘草中甘草苷含量的甘草素含量
为测定依照甘草中甘草苷量的甘草素含量，用与<实施例4>相同的方法，对具有不同甘草苷含量的各甘草进行实验，生成含甘草素的产物，用实施例1中测定甘草素含量的方法测定产物中甘草素的含量，结果列于表10中。
表10
  甘草苷含量(％)   甘草素含量(％)   甘草提取物重量(g)
  0.52   5.7   6.1
  0.78   8.4   6.2
  0.98   11.5   6.3
  1.35   14.2   6.3
  1.81   18.3   6.8
  2.54   23.1   7.1
如表10所示，测得随着甘草中甘草苷含量增加，甘草素含量以及甘草或甘草提取物的产量增加。为提高产量，优选使用具有高甘草苷含量的甘草进行提取。
<实验例4>干燥含甘草素的甘草提取物的方法
根据本发明，将<实施例1>中含甘草素的提取物溶于乙酸乙酯中，并在干燥乙酸乙酯的过程中采用如下方法，然后测定残留溶剂的量，在所述溶剂中溶有含甘草素的甘草提取物。结果列于表11中。
1)用热风干燥的方法在约40℃下干燥提取物约48小时。
2)用热风干燥的方法在约50℃下干燥提取物约48小时。提取物彼此相互粘连，易于形成高粘物质。
3)用减压干燥的方法在约50℃下干燥提取物约24小时。
4)用减压干燥的方法在约60℃下干燥提取物约24小时。
5)用减压干燥的方法在约70℃下干燥提取物约24小时。
6)用减压干燥的方法在约50℃或更高温度下干燥提取物约5小时，然后将约30g的干燥物溶于约300ml乙醇中，用减压干燥的方法在约50℃下干燥约24小时。
7)用减压干燥的方法在约50℃或更高温度下干燥提取物约5小时，然后将约30g的干燥物溶于约300ml乙醇中，用减压干燥的方法在约60℃下干燥约24小时。
8)用减压干燥的方法在约50℃或更高温度下干燥提取物约5小时，然后将约30g的干燥物溶于约300ml乙醇中，用减压干燥的方法在约70℃下干燥约24小时。
表11
Figure BPA00001309406700181
如表11所示，在减少残留溶剂方面，优选将<实施例1>中含甘草素的沉淀溶于乙酸乙酯中，用减压干燥而不是热风干燥干燥所述乙酸乙酯。确定随着减压干燥过程中温度的升高，残留溶剂的量降低。
此外，确定当减压干燥时，例如，将沉淀物溶于乙酸乙酯中，然后减压干燥，然后将得到的沉淀溶于乙醇，然后减压干燥，残留溶剂的量显著降低。
因此，将含甘草素的沉淀溶于有机溶剂中，可采用减压干燥的方法进行干燥，然后将得到的沉淀再次溶于乙醇中，再次采用相同的减压干燥的方法进行干燥。
工业实用性
由于本发明无需使用高价的溶剂，省略了柱层析过程以简化步骤，比采用传统方法获得了含更高含量(约8～23％)甘草素的提取物，该方法在甘草素提取过程中是有用的。
虽然为了详细阐述的目的，本发明公开了优选的实施方式，然而本领域技术人员应了解，在不偏离本发明所附权利要求所述的范围和精神基础上，可进行各种修改、增加和替换。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法，该方法包括：
用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂提取甘草以得到含甘草苷的产物(步骤1)；以及
将水加入步骤1中提取的含甘草苷的产物中，并将该产物分散于水中(步骤2)；以及
向步骤2制得的分散液中加入酸或碱，水解该分散液中的甘草苷制备得到含甘草素的沉淀(步骤3)。
2.如权利要求1所述的方法，其中步骤1中所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、二甲醚、乙醚以及二甲基甲酰胺、苯、甲苯和二甲苯。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述甲醇或乙醇的浓度为70％～100％。
4.如权利要求1所述的方法，其中步骤1中所述的提取在30℃～100℃下进行。
5.如权利要求1所述的方法，其中步骤1中所述的提取方法为加热及搅拌提取，回流提取或超声提取。
6.如权利要求1所述的方法，其中步骤3中所述的酸为硫酸、盐酸、硝酸或它们的混合溶液，步骤3中所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或它们的任意混合物。
7.如权利要求1所述的方法，其中步骤3中所述的酸为1M～5M的硫酸，步骤3中所述的碱为1M～5M的氢氧化钙。
8.如权利要求1所述的方法，其中步骤3中所述的水解反应在50℃～100℃下进行。
9.如权利要求1所述的方法，进一步包括：
将步骤3中得到的含甘草素的沉淀溶于有机溶剂中，水洗溶液几次，浓缩并减压干燥有机层以提高甘草素含量。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述有机溶剂选自正丁醇、叔丁醇、乙酸乙酯、二甲醚、乙醚以及二甲基甲酰胺、苯、甲苯和二甲苯。
11.如权利要求9所述的方法，其中所述干燥为减压干燥。
12.如权利要9所述的方法，进一步包括：
将步骤3中得到的含甘草素的沉淀溶于有机溶剂中，水洗溶液几次，浓缩并减压干燥有机层，然后将含甘草素的产物溶于乙醇中并减压干燥溶液以减少残留的溶剂的量。

Claims (12)

1.一种提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法，该方法包括：
用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂提取甘草以得到含甘草苷的产物(步骤1)；以及
将水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合溶剂加入步骤1中提取的含甘草苷的产物中，向溶液中加入酸或碱并水解该混合物以制备得到含甘草素的产物(步骤2)。
2.如权利要求1所述的方法，其中步骤1和步骤2中所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、二甲醚、乙醚以及二甲基甲酰胺、苯、甲苯和二甲苯。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述甲醇或乙醇的浓度为70％～100％。
4.如权利要求1所述的方法，其中步骤1中所述的提取在30℃～100℃下进行。
5.如权利要求1所述的方法，其中步骤1中所述的提取方法为加热及搅拌提取，回流提取或超声提取。
6.如权利要求1所述的方法，其中步骤2中所述的酸为硫酸、盐酸、硝酸或它们的混合溶液，步骤2中所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或它们的任意混合物。
7.如权利要求1所述的方法，其中步骤2中所述的酸为1M～5M的硫酸，步骤2中所述的碱为1M～5M的氢氧化钙。
8.如权利要求1所述的方法，其中步骤2中所述的水解反应在50℃～100℃下进行。
9.如权利要求1所述的方法，进一步包括：
将步骤2中得到的含甘草素的产物溶于有机溶剂中，水洗溶液几次，浓缩并减压干燥有机层以提高甘草素含量。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述有机溶剂选自正丁醇、叔丁醇、乙酸乙酯、二甲醚、乙醚以及二甲基甲酰胺、苯、甲苯和二甲苯。
11.如权利要求9所述的方法，其中所述干燥为减压干燥。
12.如权利要9所述的方法，进一步包括：
将步骤2中得到的含甘草素的产物溶于有机溶剂中，水洗溶液几次，浓缩并减压干燥有机层，然后将含甘草素的产物溶于乙醇中并减压干燥溶液以减少残留的溶剂的量。
CN2009801308750A 2008-08-01 2009-08-03 用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法 Pending CN102112142A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2008-0075520 2008-08-01
KR20080075520 2008-08-01
KR1020090064903A KR101158535B1 (ko) 2008-08-01 2009-07-16 감초 또는 감초 추출물에서의 개선된 리퀴리티게닌의 추출 방법
KR10-2009-0064903 2009-07-16
PCT/KR2009/004331 WO2010013987A2 (en) 2008-08-01 2009-08-03 Extraction method for increasing liquiritigenin content in glycyrrhizae radix et rhizoma or glycyrrhizae radix extract

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102112142A true CN102112142A (zh) 2011-06-29

Family

ID=42087994

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2009801308750A Pending CN102112142A (zh) 2008-08-01 2009-08-03 用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR101158535B1 (zh)
CN (1) CN102112142A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102391232A (zh) * 2011-09-26 2012-03-28 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 从甘草中提取甘草素的方法
CN108514529A (zh) * 2018-07-04 2018-09-11 张言聚 一种美白化妆品用中药提取物的提取方法及其用途
CN109223765A (zh) * 2018-08-06 2019-01-18 北京中医药大学 甘草苷在制备或筛选热敏通道trpv1相关药物中的用途
CN111202764A (zh) * 2020-01-10 2020-05-29 成都农业科技职业学院 一种提高甘草素含量的工艺
CN112094306A (zh) * 2020-11-18 2020-12-18 大湾汉唯(广州)医药科技集团有限公司 一种含甘草苷的提取物及其制备方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102210501B1 (ko) * 2019-06-19 2021-02-01 영남대학교 산학협력단 근육질환 예방 또는 치료용 조성물
KR102579928B1 (ko) * 2021-04-09 2023-09-18 주식회사 케이엠에프 리퀴리틴, 리퀴리티게닌 및 아트락틸레놀리드 ⅲ의 함량이 증진된 생약 혼합 추출물의 제조방법

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100535872B1 (ko) 2005-07-28 2005-12-09 재단법인서울대학교산학협력재단 감초 추출물 또는 리퀴리티게닌을 포함하는 중금속중독으로 인한 질환의 치료 및 예방용 조성물
KR100815868B1 (ko) 2006-11-09 2008-03-21 대구한의대학교산학협력단 감초 추출물 또는 이로부터 분리한 리퀴리틴 또는리퀴리티게닌을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료를 위한 조성물

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102391232A (zh) * 2011-09-26 2012-03-28 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 从甘草中提取甘草素的方法
CN102391232B (zh) * 2011-09-26 2015-09-30 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 从甘草中提取甘草素的方法
CN108514529A (zh) * 2018-07-04 2018-09-11 张言聚 一种美白化妆品用中药提取物的提取方法及其用途
CN108514529B (zh) * 2018-07-04 2021-08-13 陈思 一种美白化妆品用中药提取物的提取方法及其用途
CN109223765A (zh) * 2018-08-06 2019-01-18 北京中医药大学 甘草苷在制备或筛选热敏通道trpv1相关药物中的用途
CN109223765B (zh) * 2018-08-06 2020-12-22 北京中医药大学 甘草苷在制备或筛选热敏通道trpv1相关药物中的用途
CN111202764A (zh) * 2020-01-10 2020-05-29 成都农业科技职业学院 一种提高甘草素含量的工艺
CN111202764B (zh) * 2020-01-10 2023-11-28 成都农业科技职业学院 一种提高甘草素含量的工艺
CN112094306A (zh) * 2020-11-18 2020-12-18 大湾汉唯(广州)医药科技集团有限公司 一种含甘草苷的提取物及其制备方法
CN112094306B (zh) * 2020-11-18 2021-03-09 大湾汉唯(广州)医药科技集团有限公司 一种含甘草苷的提取物及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR20100014124A (ko) 2010-02-10
KR101158535B1 (ko) 2012-06-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102112142A (zh) 用于提高甘草或甘草提取物中甘草素含量的提取方法
CN100420665C (zh) 一种丹酚酸a的提取方法
CN102153534B (zh) 具酪氨酸酶抑制活性的化合物及制备方法与用途
CN1813802A (zh) 华蟾素（蟾皮）提取物生产工艺
CN104784254A (zh) 一种生物酶法生产黄芩苷的提取方法
CN104586945B (zh) 啤酒花总黄酮提取物、制备方法及其作为制备预防和治疗肝损伤、癌症药物的应用
CN101278958A (zh) 肺宁滴丸及其制备方法
CN102977164A (zh) 一种刺五加叶中金丝桃苷的酶辅助提取工艺
CN102516213B (zh) 一种倍半萜化合物及其制备方法和应用
CN104523733B (zh) 一种抗衰老作用的药物组合物
CN104491048A (zh) 一种枇杷叶总倍半萜苷提取物及其制备方法与应用
CN104688798B (zh) 一种霞草提取物的制备方法及应用
CN105998041B (zh) 迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖苷在制备预治流感药物中的应用
CN107753531A (zh) 文王一支笔提取物及其在制备抗癌药物中的应用
CN103408528A (zh) 一种色满化合物及其制备方法和应用
CN107501382A (zh) 一种人参皂苷超声提取方法
CN104083505B (zh) 一种酸荔枝乙醇部位活性成分的提取方法
CN102133278A (zh) 白芍提取物98%芍药苷的制备方法
CN104211711B (zh) 一种五味子中分离的化合物及其制备与应用
CN102119953A (zh) 地锦草提取物的应用
CN101375842A (zh) 联苯环辛烯类木脂素在制备抗乙肝病毒药物中的用途
CN114573430B (zh) 一种甘草抗炎物质及其制备方法
CN103006761B (zh) 一种山豆根抗肿瘤有效组分提取物及其制法和用途
CN110256511B (zh) 一类含硫螺环缩酮倍半萜化合物及其应用和另一类含硫螺环缩酮倍半萜化合物的应用
CN105566344A (zh) 一种螺环色原酮及其制备与应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20110629