CN101375842A

CN101375842A - 联苯环辛烯类木脂素在制备抗乙肝病毒药物中的用途

Info

Publication number: CN101375842A
Application number: CNA2007100453054A
Authority: CN
Inventors: 陈道峰; 马文辉; 周佩; 黄海
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2007-08-27
Filing date: 2007-08-27
Publication date: 2009-03-04
Anticipated expiration: 2027-08-27
Also published as: CN101375842B

Abstract

本发明属中药制药领域，涉及联苯环辛烯类木脂素在制备抗乙肝病毒药物中的新用途。本发明从五味子属Schisandra植物鹤庆五味子S.wilsoniana中提取联苯环辛烯类木脂素并经实验证实其抗具有HBV病毒活性。所述的联苯环辛烯类木脂素经与阳性对照拉米呋啶药理试验比较，结果证实具有显著的抗HBV作用，且有效浓度低，细胞毒性较小，本发明所述的化合物联苯环辛烯木脂素可作为活性成分制备用于治疗乙型肝炎的药物。

Description

联苯环辛烯类木脂素在制备抗乙肝病毒药物中的用途

技术领域

本发明属中药制药领域，涉及鹤庆五味子中联苯环辛烯类木脂素的新的药用用途。尤其涉及鹤庆五味子中联苯环辛烯类木脂素在制备抗乙肝病毒药物中的新用途。

背景技术

乙肝病毒(HBV)感染是全球性的影响人类健康的主要疾病之一，全世界大约有3亿多人为慢性HBV携带者，我国约占半数。由于HBV感染可以导致慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌，因此已成为影响人类寿命的九大疾病之一。由于慢性HBV感染者较非携带者发生肝癌的相对危险率为217，因此在全世界每年大约有200万人死于乙肝引起的肝硬化和肝癌，而我国又是乙型肝炎的高发区，每年约有25万人死于与乙肝相关的慢性肝病(肝硬化与肝癌)。这给人民健康和国民经济带来巨大损失。因此，寻求高效低毒的抗HBV药物已成为刻不容缓的问题。

尽管药物化学工作者在筛选抗HBV药物的过程中进行了不懈的努力，但到目前为止人们还没有找到特效药来治愈HBV感染。临床上已获得FDA正式批准使用的α-干扰素和核苷类药物拉米呋啶只能在某种程度上获得治疗效果，对大多数病人还达不到治愈的目的，停止治疗后的“反跳”现象是医药工作者最感棘手的问题，所以开发研制高效、低毒、不“反跳”的抗HBV新药向药物化学工作者提出了挑战。在筛选抗HBV新药的过程中，越来越多的药物化学工作者把注意力转向了植物来源丰富，价廉易得，毒副作用小，分子结构复杂多样的天然化合物。

鹤庆五味子Schisandra wilsoniana为我国特有药用植物，属于五味子科(Schisandrance)五味子属(Schisandra)，分布于云南，其果实在民间一直作为五味子(Fructus Schisandra)的代用品，具有收敛固涩，益气养津，补肾宁心的功效，主治久咳虚喘，梦遗滑精、遗尿、尿频、自汗、盗汗、神经衰弱、肝炎等。

发明内容

本发明的目的是提供联苯环辛烯类木脂素的新的药用用途，尤其涉及鹤庆五味子中联苯环辛烯类木脂素在制备抗乙肝病毒药物中的新用途。

本发明应用现代药理筛选方法，对植物药中抑制HBV的活性物质进行研究，从五味子科五味子属(Schisandra)植物鹤庆五味子(S.wilsoniana)中提取联苯环辛烯类木脂素并证实其具有抗HBV病毒活性。

本发明涉及的联苯环辛烯类木脂素包括化合物五味子甲素(1)、戈米辛O(2)、五味子酯丙(2)和鹤庆五味子丁素(4)。

本发明所述的活性联苯环辛烯类化合物具有如下式I的化学结构：

其中各取代基及化合物1-4的情况如表1所示：

表1

注：TBC为船椅式构象，TC为船式构象。

本发明涉及的鹤庆五味子为我国特有药用植物S.wilsoniana的干燥果实，分布于云南。本发明首次从鹤庆五味子植物中分离到联苯环辛烯类木脂素，并经实验证实鹤庆五味子植物中的联苯环辛烯类木脂素具有较好的抗HBV活性。

本发明所述的的化合物通过下述方法制备：

取上述鹤庆五味子果实8kg，95％乙醇冷浸，提取物浓缩后用乙醚萃取，共得400克，取200克干法上样进行硅胶柱层析，以石油醚-丙酮梯度洗脱。油醚-丙酮(30:1)的流份中，得到粗晶，在油醚-丙酮(30:1)溶剂中重结晶后得五味子甲素(1)；油醚-丙酮(20:1)的流份经MCI柱(甲醇-水(4:1))除去色素，用石油醚-丙酮(20:1)反复硅胶柱层析，然后运用制备TLC方法(石油醚-乙酸乙酯(10:1))进行纯化，得戈米辛O(2)；油醚-丙酮(4:1)的流份经MCI柱(甲醇-水(4:1))除去色素，再经C18反相柱(甲醇:水(7:3))洗脱，最后经制备TLC方法(石油醚：乙酸乙酯(3:1))进行纯化，得五味子酯丙(3)；油醚-丙酮(3:1)的流份经MCI柱除去色素，再经C18反相柱(甲醇:水(6:4))洗脱，最后通过制备TLC方法(石油醚:乙酸乙酯(2:1))进行纯化，得鹤庆五味子丁素(4)，鹤庆五味子丁素为新化合物。

其中，五味子甲素deoxyschisandrin(1)，C₂₄H₃₂O₆(416)，白色方晶(石油醚/丙酮)，熔点121-122℃；

(c0.10，MeOH)；UV(MeOH)λ_maxnm(log ε)：220(4.85)，248(4.23)，280(3.52)；IR(KBr)ν_max(cm^-1)：1590，1489，1428，1328；¹¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ ppm：6.54(1H，s，H-4)，2.60(2H，m，H-6)，1.81(1H，m，H-7)，1.91(1H，m，H-8)，2.22(2H，m，H-9)，6.53(1H，s，H-11)，0.73(3H，d，J＝7.2Hz，CH₃(17))，1.00(3H，d，J＝7.2Hz，CH₃(18))，OCH₃(3.59，3.59，3.93，3.94，3.95，3.96，各3H，s)；EI-MS m/z：416([M]⁺，100)，235(4)，181(3)。

其中，戈米辛O(gomisin O)(2)，C₂₃H₂₈O₇(416)，白色粉末；

(c 0.05，MeOH)；UV(MeOH)λ_maxnm(log ε)：214(4.74)，282(sh，3.62)；IR(KBr)ν_max(cm^-1)：3500，1615，1595；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ ppm：6.42(1H，s，H-4)，6.56(1H，s，H-11)，4.34(1H，d，J＝8.2Hz，H-6)，1.75(2H，m，H-7/8)，2.17(2H，m，H-9)，0.90(6H，d，J＝7.0Hz，CH₃(17，18))，5.96(2H，s，OCH₂O)，OCH₃(3.52，3.90，3.90，3.91，各3H，s)；EI-MS m/z：416([M]⁺，100)，398(15)，360(54)。

其中，五味子酯丙(schisantherin C)(3)，C₂₈H₃₄O₉(514)，白色粉末，

(c 0.20，MeOH)；UV(MeOH)λ_max(log ε)nm：220(4.66)，260(sh，3.97)，295(sh，3.34)；IR(KBr)ν_max(cm^-1)：3524，1710，1692，1648，1622，1598；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ ppm：6.76(1H，s，H-4)，5.67(1H，s，H-6)，1.95(1H，m，H-8)，2.23(2H，m，H-9)，6.50(1H，s，H-11)，1.13(3H，d，J＝7.4Hz，CH₃(17))，1.29(3H，s，CH₃(18))，6.00(1H，m，H-3′)，1.66(3H，d，J＝7.1Hz，CH₃(4′))，1.56(3H，s，CH₃(5′))，5.85，5.92(各1H，d，J＝1.2Hz，OCH₂O)，OCH₃(3.54，3.68，3.85，3.88，各3H，s)；EI-MS m/z：514([M]⁺，46)，414(72)，371(20)，343(100)，83(77)，55(89)。

其中，鹤庆五味子丁素(schisanwilsonin D)(4)，C₂₈H₃₆O₉(516)，白色粉末，

{[α]}_{D}^{25} = - 53.5

(c 0.02，MeOH)；UV(MeOH)λ_maxnm(log ε)：214(4.87)，290(sh，3.23)；CD(c＝0.02，MeOH)：Δε₂₀₄＝+34.5，Δε₂₃₃＝-28.7，Δε₂₄₈＝-11.9，Δε₂₅₂＝-12.2；IR(KBr)ν_max(cm^-1)：3440，2937，2849，1709，1595，1457，1404，1330，1260，1124，1090，735；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ ppm：6.71(1H，s，H-4)，5.76(1H，s，H-6)，2.07(1H，m，H-8)，2.26(2H，m，H-9)，6.68(1H，s，H-11)，5.71(1H，brs，OH-12)，3.57(3H，s，OCH₃-1)，3.88(3H，s，OCH₃-2)，3.92(3H，s，OCH₃-3)，3.86(3H，s，OCH₃-13)，3.31(3H，s，OCH₃-14)，1.14(3H，d，J＝1.14Hz，CH₃(17))，1.07(3H，d，J＝1.14Hz，CH₃(18))，5.97(1H，m H-3′)，1.61(3H，d，J＝7.0Hz，CH₃(4′))，1.52(3H，s，CH₃(5′))；HR-ESI-MS：539.2262([M+Na]⁺，C₂₈H₃₆O₉Na⁺；calc.539.2257)。

表2是化合物1-4的碳谱(¹³C-NMR)数据(δin ppm)。

表2

in CDCl₃，100MHz；

本发明所述的联苯环辛烯类木脂素经药理试验，结果证明具有显著的抗HBV作用，且有效浓度低，细胞毒性较小的特点(表3)。所测木脂素对HBsAg和HBeAg均显示有抑制作用，且对HBsAg的作用高于HBeAg。其中五味子酯丙、戈米辛O在50μg/mL时对HBsAg的抑制率高于阳性对照拉米呋啶(200μg/mL时抑制率为28.6％)，其中五味子酯丙抑制作用较明显，在50μg/mL时抑制率为59.0％。五味子甲素在200μg/mL时对HBsAg的抑制率为50.3％，明显高于阳性对照拉米呋啶(200μg/mL时抑制率为34.8％)。五味子酯丙和戈米辛O在50μg/mL对HBeAg的抑制率分别为34.7％和32.6％，和拉米呋啶相当。鹤庆五味子丁素在浓度为50μg/mL时对HBeAg抑制率为28.8％，和拉米呋啶相当，对HBeAg也表现出一定的抑制作用。

本发明所述的联苯环辛烯类木脂素可作为活性成分制备用于治疗乙型肝炎的药物。

附图说明：

图1是鹤庆五味子中联苯环辛烯类木脂素成分提取分离工艺流程图，注：A：PE-Acetone B：PE-EtOAc C：MeOH-H₂O。

具体实施方式

实施例1 制备鹤庆五味子联苯环辛烯类木脂素

取我国云南药用鹤庆五味子植物(S.wilsoniana)的干燥果实8kg，95％乙醇浸泡，提取物浓缩后用乙醚萃取，共得400克(提取率5％)，取200克干法上样进行硅胶柱层析，以石油醚-丙酮梯度洗脱，以石油醚-丙酮梯度洗脱。油醚-丙酮(30:1)的流份中，得到粗晶，在油醚-丙酮(30:1)溶剂中重结晶后得五味子甲素(1)；油醚-丙酮(20:1)的流份经MCI柱(甲醇-水(4:1))除去色素，用石油醚-丙酮(20:1-15:1)反复硅胶柱层析，然后运用制备TLC方法(石油醚-乙酸乙酯(10:1))进行纯化，得戈米辛O(2)；油醚-丙酮(4:1)的流份经MCI柱(甲醇-水(4:1))除去色素，再经C18反相柱(甲醇:水(7:3))洗脱，最后经制备TLC方法(石油醚:乙酸乙酯(3:1))进行纯化，得五味子酯丙(3)；石油醚-丙酮(3:1)的流份经MCI柱除去色素，再经C18反相柱(甲醇:水(6:4))洗脱，最后通过制备TLC方法(石油醚:乙酸乙酯(2:1))进行纯化，得鹤庆五味子丁素(4)。

实施例2 体外抗HBV实验

应用Hep G2的2.2.15细胞株(教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室，上海)，以每孔10×10⁵个细胞接种于24孔板，培养基为DMEM，生长液含10％胎牛血清，380μg/ml G418，0.03％谷胺酰胺，青霉素、链霉素各100μg/ml，在5％CO₂孵箱中37℃培养，48小时后，换成二甲基亚砜助溶的含药物的培养液，每种药物设3～5个浓度，每个浓度设4个平行孔，继续培养9天(每3天换液一次)，收集上清液用ELISA检测HBsAg及HBeAg含量。同样条件下以不含药物的培养液上清液作为对照组。同时用上述细胞株，用MTT法测定药物的细胞毒性。阳性对照为拉米呋啶(3TC)。结果证实本发明化合物具有显著的抗HBV作用，且有效浓度低，细胞毒性较小。

表3是联苯环辛烯类木脂素对HepG22.2.15细胞的毒性情况及对HBsAg和HBeAg的抑制效果。

表3

-：“未见明显毒性”系指用MTT法检测细胞存活率≥75％；+：“显示毒性”指细胞存活率<75％；/：没有进行抑制率测试。

Claims

1、联苯环辛烯类木脂素在制备抗乙肝病毒药物中的用途，所述的联苯环辛烯木脂素具有式I的化学结构：

其中各取代基及化合物如下表，

其中：TBC为船椅式构象，TC为船式构象。

2、按权利要求1所述的用途，其中所述的联苯环辛烯类木脂素是鹤庆五味子S.wilsoniana中联苯环辛烯类木脂素。

3、按权利要求1所述的用途，其中所述的联苯环辛烯类木脂素是化合物五味子甲素。

4、按权利要求1所述的用途，其中所述的联苯环辛烯类木脂素是化合物戈米辛O。

5、按权利要求1所述的用途，其中所述的联苯环辛烯类木脂素是化合物五味子酯丙。

6、按权利要求1所述的用途，其中所述的联苯环辛烯类木脂素是化合物鹤庆五味子丁素。