CN108514529B - 一种美白化妆品用中药提取物的提取方法及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种美白化妆品用中药提取物提取方法及其用途。本发明首次以中药经典名方四妙勇安汤处方为研究对象，采用丙酮、乙酸乙酯和水的混合液为提取剂从金银花、元参、当归和甘草组成的混合物中提取出高酪氨酸酶抑制率的提取物中药源美白剂，所述中药源美白剂可用于制备美白乳液、美白霜、美白化妆水等形式的化妆品；提供了一种中药源化妆品用美白剂，克服了化学类美白剂具有细胞毒性、对人体具有损伤的缺陷。

Description

一种美白化妆品用中药提取物的提取方法及其用途
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种美白化妆品用中药提取物提取方法及其用途。
背景技术
随着我国经济的快速发展，人们对于“美”的关注愈加增多，化妆品行业在此时机正在蓬勃发展，而“美白”则是化妆品行业永恒的话题。市面上的美白原料、美白产品种类繁多，给予化妆品工程师、厂家和用户极大的选择空间，但同时造成化妆品市场的不规范化并加大了相关部门的监管难度。
络氨酸酶是黑色素代谢中目前唯一已知的、在黑色素生物合成过程中起关键作用的一种酶，它控制黑色素形成过程，其活性程度对色素形成的数量与沉积起主要作用。皮肤美白剂是通过作用于皮肤黑色素的形成、代谢途径的某个阶段，控制黑色素的形成。现时市面上的美白原料主要分为化学、生物和天然植物类。化学类美白剂效果显著，一般以直接破坏黑素细胞为主要作用途径(如氢醌)，但此类美白剂大多具有一定的细胞毒性或对人体具有一定损伤性。生物类美白剂由于来源较安全，效果客观等优点，成为近年研究的主线之一，但由于技术发展的限制，大多生产周期较长，产率低，成本高。而天然植物(中草药)来源天然，对比起化学类美白剂具有明显的安全性，对比起生物类美白剂又更易得、低成本。将临床证明具有安全性的经典名方中草药开发成药妆可以解决化妆品中功能添加剂的安全性问题。
2018年04月13日国家中医药管理局发布了《古代经典名方目录(第一批)》，这些方剂都经过了长期的临床实践所以其安全性得到了验证，并且疗效确切。四妙勇安汤为古代经典名方之一，具有清热解毒，活血止痛之功效，最早出自于《验方新编》(清·鲍相璈)“此症生手、足各指，或生指头，或生指节、指缝。初生或白色痛极，或如粟米起一黄泡。其皮或如煮熟红枣，黑色不退，久则溃烂，节节脱落，延至手足背腐烂黑陷，痛不可忍。宜用顶大甘草，研极细末，用香麻油调敷。再用金银花、元参各三两，当归二两，甘草一两，水煎服。”，处方为金银花、元参各三两，当归二两，甘草一两。
未有任何文献报道可以将四妙勇安汤提取物开发成为具有美白功效化妆品的添加物。
发明内容
本发明的目的是提供一种由中药经典名方开发出的美白化妆品，本发明首次以中药经典名方四妙勇安汤处方为研究对象采用不同提取方法提取出具有美白功效的提取物，并用来制备出美白化妆品，提供了一种中药源化妆品用美白剂，克服了化学类美白剂具有细胞毒性、对人体具有损伤的缺陷。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种中药源美白剂的提取方法，所述中药源美白剂采用溶剂提取法从金银花、元参、当归和甘草组成的混合物中提取所得。
优选的，所述中药源美白剂采用溶剂提取法从金银花、元参、当归和甘草组成的混合物中提取所得其具体提取方法包括如下步骤：
1)将金银花、元参、当归和甘草混合后进行粉碎，然后过400目筛得中药粉待用；
2)将中药粉置于溶剂中，于50-100℃下提取6-12h后过滤得滤液；
3)将滤液在40-60℃下减压浓缩至无馏分液蒸出，然后加入到水中冻干得中药源美白剂。
优选的，所述溶剂为水、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯、正庚烷、甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种，进一步优选为丙酮、乙酸乙酯和水的混合液；本发明以酪氨酸酶的抑制率为指标，对不同溶剂获得的提取物测量酪氨酸酶的抑制率，从而选择最终提取溶剂；
优选的，按照重量比计算，所述金银花：元参：当归：甘草＝5-6:4-5:2-3:4-3，进一步优选为6:4:3:4；四妙勇安汤中“金银花、元参各三两，当归二两，甘草一两”按照重量配比计算为3:3:2:1，本发明在四妙勇安汤的处方配比基础上，以酪氨酸酶的抑制率为指标，采用丙酮、乙酸乙酯和水的混合液作为提取剂对提出的提取物测量酪氨酸酶的抑制率，从而调整物料配比；
本发明研究了中药源美白剂的稳定性，发现在室温下放置5天后其酪氨酸酶的抑制率大大下降，抑制率仅为最初抑制率的60％以下；为了解决本发明提取的中药源美白剂放置过程中酪氨酸酶的抑制率降低的问题，本发明分别采用弱酸、弱碱和氨基酸作为中药源美白剂的稳定剂，研究人员惊奇的发现，将氨基酸或其衍生物与中药源美白剂经混合、水溶后冻干可以有效解决中药源美白剂放置过程中酪氨酸酶的抑制率降低的问题。
优选的，所述氨基酸或其衍生物为β-丙氨酸、丙氨酸谷氨酸盐、乙酰精氨酸、乙酰半胱氨酸、乙酰谷氨酸、乙酰组氨酸、乙酰羟脯氨酸，进一步优选为乙酰精氨酸或乙酰羟脯氨酸；
优选的，所述氨基酸或其衍生物用量为中药源美白剂重量的0.2％-2.0％，进一步优选为0.5％-1.2％；本领域技术人员可以以酪氨酸酶的抑制率随时间的稳定性为参考指标来调节氨基酸的用量；
本发明制备的氨基酸或其衍生物与中药源美白剂经混合、水溶后冻干所得混合物可以作为化妆品美白添加剂用于制备美白乳液、美白霜、美白化妆水等形式的化妆品。
本发明首次以中药经典名方四妙勇安汤处方为研究对象，提取出酪氨酸酶的抑制率优异的提取物，具有如下有益效果：
1)本发明利用中药理论，将金银花、元参、当归、甘草四种原料作为整体提取对象，提取物对酪氨酸酶的抑制率显著优于单一原料提取物的抑制率，四味药之间存在较强的交互作用，提高了提取物对酪氨酸酶的抑制率；
2)本发明采用氨基酸或其衍生物作为中药源美白剂的稳定剂，可大大提高产品的稳定性，能够使本发明提取的中药源美白剂满足化妆品对美白添加剂稳定性的要求；
3)本发明提取的中药源美白剂与氨基酸或其衍生物复合成的化妆品美白添加剂可用于制备美白乳液、美白霜、美白化妆水等形式的化妆品。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。
酪氨酸酶的抑制率测试(生化酶学法)：
按表1中各反应组，精密移取反应液于同一5mL连盖塑料离心管(EP管)中，混合均匀，水浴恒温(37℃)反应10min，迅速加入1mL多巴溶液，混合均匀，再进行水浴恒温(37℃)反应4min，迅速移入比色皿，于第5min时采取紫外分光光度计在475nm处测定吸光度(PBS磷酸盐溶液作空白对照)，得到AC1、Ac2、AT1、AT2。平行实验3次。按公式(1)计算：
抑制率(％)＝[1-(AT1-AT2/(AC1-Ac2)]×100％ 公式(1)
表1抑酶反应液的组成
反应组 磷酸盐溶液/ml 供试药液/ml 络氨酸酶溶液/ml
A<sub>C1</sub> 1.5 0 0.5
Ac<sub>2</sub> 2 0 0
A<sub>T1</sub> 1 0.5 0.5
A<sub>T2</sub> 1.5 0.5 0
PBS溶液(磷酸盐溶液)的配制：将磷酸氢二钠和磷酸二氢钠分别配成0.2mol·L-1的溶液，以51:49的体积比例混合均匀，用pH计测定并调整pH至6.8左右备用，随用随配。
酪氨酸酶溶液的制备：精确称取酪氨酸酶，用pH＝6.8的磷酸盐溶液配成约200U·mg-1的酶液，-20℃冷冻保存，用前4℃解冻。
多巴溶液的制备：精确称取L-多巴胺，先用少量0.1mol·L-1盐酸溶液完全溶解，再加PBS溶液配制成1.5mg·mL-1的多巴溶液，4℃避光冷藏保存。
抑制酪氨酸酶实验供试药液的处理：用pH＝6.8的磷酸盐溶液将提取物稀释至浓度为100mg·mL-1的供试药液。
实施例1
按照重量配比将金银花：元参：当归：甘草＝3:3:2:1混合后进行粉碎，然后过400目筛得中药粉待用；
提取溶剂的筛选：
取粉碎后的中药粉10.0g加入到100g溶剂中，在50-60℃下提取10-12h后过滤得滤液；将滤液在40-60℃下减压浓缩至无馏分液蒸出得膏状物，然后加入到20ml水中超声1-2h后置于冻干机中在-5℃预冻6-8h，然后在-30℃下冻干得不同溶剂获得的中药源美白剂，采用生化酶学法测试酪氨酸酶的抑制率，不同溶剂获得的中药源美白剂见表2所示：
表2溶剂种类对提取物中药源美白剂酪氨酸酶的抑制率的影响
溶剂 酪氨酸酶抑制率/％
水 38.2
甲醇 23.1
乙醇 26.4
二氯甲烷 18.9
乙酸乙酯 30.1
正庚烷 20.4
乙醚 20.8
正丁醇 25.4
丙酮 40.2
丙酮/水(重量比为1:1) 60.3
水/乙酸乙酯(重量比为1:1) 56.2
丙酮/水/乙酸乙酯(重量比为1:1:1) 72.4
以上结果表明，上述溶剂获得的提取物对酪氨酸酶均具有较好的抑制作用，尤其是采用丙酮/水/乙酸乙酯混合溶剂时，获得的提取物对酪氨酸酶抑制率高达72.4％。
实施例2
经典名方四妙勇安汤处方为金银花、元参各三两，当归二两，甘草一两，即按照重量比计算，金银花:元参:当归:甘草＝3:3:2:1；但是该处方对酪氨酸酶抑制效果不一定是最优配比，所以本发明对其配比进行了进一步优化，方法如下：
按照不同重量配比将金银花、元参、当归、甘草混合后进行粉碎，然后过400目筛得中药粉待用；取粉碎后的中药粉10.0g加入到100g溶剂(重量比丙酮/水/乙酸乙酯＝1:1:1)中，在50-60℃下提取10-12h后过滤得滤液；将滤液在40-60℃下减压浓缩至无馏分液蒸出得膏状物，然后加入到20ml水中超声1-2h后置于冻干机中在-5℃预冻6-8h，然后在-30℃下冻干得不同物料配比获得的中药源美白剂，采用生化酶学法测试酪氨酸酶的抑制率，不同物料配比获得的中药源美白剂见表3所示：
表3原料配比对提取物中药源美白剂酪氨酸酶的抑制率的影响
Figure BDA0001718587970000061
以上结果表明，上述四种中药金银花、元参、当归和甘草的提取物均对酪氨酸酶具有一定的抑制作用，但是复配以后其对酪氨酸酶的抑制作用大大增强，但从对酪氨酸酶的抑制率来看，四种中药存在严重的交互作用，改变中药原料重量配比类似于改变了中药中的“君臣佐使”，本发明在现有优化的基础上，按照重量配比确定金银花：元参：当归：甘草＝6:4:3:4(序列9)。
实施例3
以表3序列9提取出的中药源美白剂为研究对象，在25-30℃下、相对湿度为80-90％RH的环境下放置，考察其对酪氨酸酶抑制率随时间的变化，结果如表4所示：
表4本发明提取的中药源美白剂的稳定性
放置天数/d 0 1 3 5
酪氨酸酶抑制率/％ 88.4 78.1 62.2 53.4
以上结果表明本发明提取的中药源美白剂虽然具有优异的酪氨酸酶抑制率，但是稳定性差，放置5天后其酪氨酸酶抑制率仅为53.4％，为最初的60.4％，不宜直接作为化妆品美白添加剂使用。
为了克服本发明提取的中药源美白剂稳定性差的问题，本发明向新鲜提取的中药源美白剂中加入弱酸、弱碱，以期能够提高产品的稳定性，方法如下：
向1.0g新鲜提取出的中药源美白剂(表3序列9中提取方法)中加入5mg的弱酸或者弱碱作为添加剂，然后置于5ml纯化水，搅拌均匀后，-5℃冷冻3-4h，最后置于-30℃下冻干得复配后的中药源美白剂，检测复配后的中药源美白剂5天后的酪氨酸酶抑制率，结果如表5所示：
表5复配后的中药源美白剂的酪氨酸酶抑制率
Figure BDA0001718587970000071
Figure BDA0001718587970000081
结果表明，氨基酸衍生物可以作为中药源美白剂的稳定剂使用，尤其是采用乙酰羟脯氨酸或乙酰精氨酸时，其酪氨酸酶抑制率仅由最初的88.4％下降为88.2％和86.6％；当使用乙酰羟脯氨酸作为本发明中药源美白剂的稳定剂时，3个月后其酪氨酸酶抑制率仍保持为86.8％。。
实施例4
按照重量配比金银花：元参：当归：甘草＝6:4:3:4混合后进行粉碎，然后过400目筛得中药粉待用；取粉碎后的中药粉10.0g加入到100g溶剂(重量比丙酮/水/乙酸乙酯＝1:1:1)中，在50-60℃下提取10-12h后过滤得滤液；将滤液在40-60℃下减压浓缩至无馏分液蒸出得膏状物，然后加入到20ml水中超声1-2h后置于冻干机中在-5℃预冻6-8h得中药源美白剂，然后向中药源美白剂中加入其重量的0.8％wt的乙酰羟脯氨酸混合均匀，加水溶解后-5℃冷冻3-4h，最后置于-30℃下冻干得乙酰羟脯氨酸复配后的中药源美白剂。
一、以乙酰羟脯氨酸复配后的中药源美白剂作为化妆品美白添加剂用来制备美白霜，物料配比按照重量百分比计算如表6所示：
表6美白霜的配方
Figure BDA0001718587970000082
Figure BDA0001718587970000091
按照表中物料配比分别称量好A相和B相；
将A相加热至60℃，保温待用；将B相加热溶解，升温至60-70℃，然后对B相在6000-8000rpm的转速下均质3-5min，调节转速至1000-2000rpm将A相滴加到B相中，滴加结束后在4000-5000rpm的转速下均质20-30min后降温至室温得美白霜，外观为乳白色乳液，无刺激性，pH＝6.32，
对制备的美白霜进行如下理化检测：
(1)离心检测
将美白霜置于离心管中，以5000r/min的转速离心30min，再以12000r/min的转速离心10min，未出现分层、浮油等现象。
(2)循环温度考察
将美白霜在-20℃与45℃环境下循环存放3次，每次24h，每次改变温度环境都先将美白霜放至常温，未出现分层、浮油等现象。
本发明制备的美白霜理化性质稳定，符合化妆品要求。
二、以乙酰羟脯氨酸复配后的中药源美白剂作为化妆品美白添加剂用来制备美白乳液，物料配比按照重量百分比计算如表7所示：
表7美白乳液配方
物料名称 重量百分比wt％
硬脂酸 2.5
十六烷醇 0.8
蜂蜡 1.8
三乙氧基辛基硅烷 0.2
甘油 3.0
亚油酸 0.2
4-甲氧基水杨酸 0.6
抗坏血酸二棕榈酸酯 0.1
对羟基苯甲酸乙酯 0.2
麝香玫瑰(ROSAMOSCHATA)籽油 0.1
纯化水 余量
按照表7中配方称取各物料，混合均匀后升温至50-60℃，5000-6000rpm的转速下高速均质20-30min后，自然降温至室温，然后升温至40-50℃于3000-4000rpm的转速下均质10-20min后自然降温至室温得美白乳液。
对本发明制备的美白乳液按照美白霜的检测方法进行理化性质检测，离心检测和循环温度考察过程中均未出现分层、浮油等现象。
尽管已经详细描述了本发明的实施方式，但是应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明的实施方式做出各种改变、替换和变更。

Claims (1)

1.一种中药源美白剂的提取方法，其特征在于：所述中药源美白剂采用溶剂提取法从金银花、元参、当归和甘草组成的混合物中提取所得；
具体提取方法包括以下步骤：
1）将金银花、元参、当归和甘草混合后进行粉碎，然后过400目筛得中药粉待用；
2）将中药粉置于溶剂中，于50-100℃下提取6-12h后过滤得滤液；
3）将滤液在40-60℃下减压浓缩至无馏分液蒸出，然后加入到水中冻干得中药源美白剂；
所述溶剂为丙酮、乙酸乙酯和水的混合液，重量比为1:1:1；
按照重量比计算，所述金银花：元参：当归：甘草= 6:4:3:4；
所述提取方法提取出的中药源美白剂采用如下方法稳定，将氨基酸或其衍生物与中药源美白剂经混合、水溶后冻干；
所述氨基酸或其衍生物为乙酰精氨酸或乙酰羟脯氨酸；
所述氨基酸或其衍生物用量为中药源美白剂重量的0.2%-2.0%。
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