CN112094306A - 一种含甘草苷的提取物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含甘草苷的提取物的制备方法,通过将提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，且控制乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为85‑95：4‑10:1‑5，进而分两次在不同的条件下综合提取含甘草苷的提取物，使得含甘草苷的提取物中的甘草苷的含量率在35.82%以上；同时，还通过设定第一次超声波处理过程采用梯度加热方式，进一步，提高了提取物中甘草苷的含量；进而，还公开了一种通过上述制备方法获得的含甘草苷的提取物。

Description

一种含甘草苷的提取物及其制备方法
技术领域
本发明涉及中药提取分离技术领域，具体涉及一种从甘草中提取含甘草苷的提取物的制备方法以及通过该方法提取的含甘草苷的提取物。
背景技术
甘草苷（Liquiritin，系统命名为：4’,7-二羟基双氢黄酮-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷）是甘草中最主要的黄酮类物质，属于二氢黄酮类，具有很强的药理活性。甘草苷具有抗氧化、抗心律失常、抗溃疡、抗病毒、神经保护、心肌细胞膜保护等作用。甘草苷虽然具有多种药理活性，但要将其开发成新药还需要解决很多问题，其中一个主要问题就是提取工艺。针对提取工艺，现有技术中使用的类型是各种各样，如中国专利文献CN101073595A公开了一种甘草总黄酮和总皂苷提取物及其制备方法，其包括以下步骤：提取、过滤、浓缩和干燥步骤，其中，提取步骤详细如下：所用溶剂可以是水、或者任意一种醇类、酮类及酯类溶剂，或者按照一定比例组成的混合溶剂，或者有这些溶剂与酸碱盐配成的酸性或碱性溶剂，方法是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微博提取、高压提取等。在现有的操作中，为了操作上的方便一般选择超声提取法,当然，随着我国对环保要求越来越严格，在上述方法中不在加入酸、碱或者盐进行提取，如中国专利文献CN109549966A公开了一种光果甘草提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）将新鲜光果甘草用胶体磨进行粉碎，得到均浆粉碎物；（2）将提取溶剂加入到步骤（1）中得到的均浆粉碎物中进行超声提取，得到超声提取液；然后，将超声提取液进行分离、浓缩，得到光果甘草提取物；其中，提取溶剂为丁二醇或丁二醇水溶液。在上述文献中，可以看出，公开了以丁二醇为超声提取溶剂的提取方法，当然除了丁二醇外，现有技术中，经常使用的提取溶剂为甲醇或者乙醇，申请人发现，经过现有文献中的提取方法提取的含有甘草苷的提取物中的甘草苷的含量较低，难以实现甘草药物的利用率，所以如何提高含甘草苷的提取物中的甘草苷的含量具有重大价值和意义。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种含甘草苷的提取物的制备方法，其包括以下步骤：
（1）将甘草按照质量体积比为1Kg:5-15L的比例加入提取溶剂和水混合得到混合液；所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为85-95：4-10:1-5；
（2）将上述混合液在60-70℃下进行超声波处理，获得处理液Ⅰ；其中，超声波条件如下：功率为400-800W，频率为20-30KHz，时间为60-120min；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却，再次加入提取溶剂混合均匀，获得处理液Ⅱ；
（4）将上述处理液Ⅱ进行过滤和超滤得到滤过液；
（5）将上述滤过液进行浓缩和冷冻干燥得到含甘草苷的提取物。
进一步，步骤（1）中，所述提取溶剂和水的体积比为2:3-3:2。
进一步，步骤（3）中加入提取溶剂的体积是步骤（2）中处理液Ⅰ体积的0.8-1.2倍；所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为85-95：4-10:1-5。
进一步，步骤（3）中冷却后的温度为16-26℃。
进一步，步骤（3）中混合均匀的方式采用搅拌处理，其中，时间为60-120min。
进一步，步骤（4）中，过滤采用微孔滤膜过滤，所述微孔滤膜的孔径为0.22-0.8μm；超滤采用可耐受有机溶剂的超滤膜超滤，所述超滤膜的截留分子量指标可为2000-5000Da。
进一步，步骤（5）中，浓缩采用旋转蒸发浓缩，其温度设定为45-55℃，该过程浓缩至原来体积的3-6%；冷冻干燥的条件如下：在-50--30℃、真空条件下持续冻干8-12h。
优选地，步骤（2）中，超声波处理过程采用梯度分布加热，首先加热至60-65℃至少30min，随后加热至65-70℃至少10min。
进一步，所述梯度分布加热首先加热至60-65℃保持30-50min，随后加热至65-70℃保持10-90min。
本发明还公开了一种含甘草苷的提取物，其由上述制备方法制备而成。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
（1）本发明的含甘草苷的提取物的制备方法,通过将提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，且控制乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为85-95：4-10:1-5，进而分两次在不同的条件下综合提取含甘草苷的提取物，使含甘草苷的提取物中甘草苷的含量在35.82%以上；其中，第一条件为在甘草中加入相应比例的提取溶剂和水的混合物，接着在相应温度和相应超声条件下，尤其是400-800W的超声功率，在该超声功率下，可以避免温度的瞬时提高以及高功率会破坏甘草苷的结构，且低于400w功率提取效果差，同时，在该条件下，控制超声提取的温度在60-70度，在该温度下，不破坏甘草苷结构，且提取率高；经过上述第一条件处理后，再次加入提取溶剂，且将该次加入的提取溶剂为处理液Ⅰ的0.8倍-1.2倍，该条件可以补充第一条件下提取溶剂在超声下的损耗，同时，再次加入提取溶剂在保证提取溶剂足量的同时，可以使甘草苷的提取物尤其是甘草苷尽可能提取在提取溶剂中，达到最好的提取效果，通过设置上述倍数，可以实现降低提取率和避免提取溶剂的大量使用。
（2）本发明的含甘草苷的提取物的制备方法,在研究过程中，发明人发现，虽然经过一定温度下超声波处理甘草混合液可以有效的获取含有甘草苷的提取物，但是，使用超声波过程中温度的升温过程会发生局部温度瞬时升高的现象，该瞬时升高的温度会破坏甘草苷的结构和活性，同时，发明人发现，可以通过分段加热的处理方式，即先限定在60-65度处理一段时间，再升温至65-70度处理一段时间，可以提高含有甘草苷的提取物中甘草苷的含量，这可能是因为，采取阶段升温的方式可以更好控制温度范围，有效避免超声波处理过程中的局部瞬时高温现象的出现，减少甘草苷的破坏，从而提高了提取物中甘草苷的含量。
（3）本发明的含甘草苷的提取物，其中甘草苷的含量高于现有的含甘草苷的提取物中甘草苷的含量。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的内容进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。居于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在以下实施例和对比例中，使用的原料甘草经过粉碎处理，并过筛，过筛目数为60-100目，具体选择80目。关于使用的溶剂乙醇、异丙醇和丙酮为市售分析纯，其中乙醇为无水乙醇。
实施例1
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为90：7：3；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ体积相同的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为38.29±2.47%。
实施例2
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入2L去离子水，充分搅拌均匀，再加入3L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为85：10：5；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在60℃，调节超声波发射器的功率为800W，设定超声波发射频率为20KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理60 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却16℃，再次加入上述处理液Ⅰ1.2倍体积的提取溶剂，持续搅拌处理120 min，保持温度为16℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.22μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为5000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为45℃，浓缩为原来体积的6%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-50℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-50℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干8小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为38.07±1.28%。
实施例3
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入9L蒸馏水，充分搅拌均匀，再加入6L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为95：4：1；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在70℃，调节超声波发射器的功率为400W，设定超声波发射频率为30KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理120 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却26℃，再次加入上述处理液Ⅰ0.8倍体积的提取溶剂，持续搅拌处理60 min，保持温度为26℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.80μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为2000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为55℃，浓缩为原来体积的3%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-30℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-30℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干8小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为37.33±0.86%。
实施例4
该实施例是在实施例1的基础上变化，其区别在于：步骤（2）中，采用梯度分布加热方式，具体为将步骤（1）中混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在60-65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理30 min，随后升温至65-70℃继续超声波处理30min，获得处理液Ⅰ。
最后，经HPLC检测，含甘草苷的提取物中甘草苷的含量为41.24±0.73%。
实施例5
该实施例是在实施例2的基础上变化，其区别在于：步骤（2）中，采用梯度分布加热方式，具体为将步骤（1）中混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在60-65℃，调节超声波发射器的功率为800W，设定超声波发射频率为20KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理40 min，随后升温至65-70℃继续超声波处理60min，获得处理液Ⅰ。
最后，经HPLC检测，含甘草苷的提取物中甘草苷的含量为41.31±0.65%。
实施例6
该实施例是在实施例3的基础上变化，其区别在于：步骤（2）中，采用梯度分布加热方式，具体为将步骤（1）中混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在60-65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为30KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理50 min，随后升温至65-70℃继续超声波处理70min，获得处理液Ⅰ。
最后，经HPLC检测，含甘草苷的提取物中甘草苷的含量为40.76±0.68%。
实施例7
该实施例是在实施例1的基础上变化，其区别在于：步骤（2）中，采用梯度分布加热方式，具体为将步骤（1）中混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在60-65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理50 min，随后升温至65-70℃继续超声波处理10min，获得处理液Ⅰ。
最后，经HPLC检测，含甘草苷的提取物中甘草苷的含量为42.09±0.82% 。
对比例1
在10Kg甘草中加入200Kg70%丁二醇溶液（w/w）,用超声提取器在60℃，超声频率20KHz条件下提取60分钟，提取一次，降温至室温，然后将获得的超声提取液通过4000转/分钟三足式离心除去药渣，离心液用800nm陶瓷膜分离取过膜清液，在用截留分子量为5000Da超滤膜浓缩至相对密度1.12（25℃），即得到甘草提取液；将上述甘草苷提取液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为26.24±1.53%。
对比例2
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入10L乙醇充分搅拌均匀制成混合液；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理180 min，后降温至室温，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（4）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为31.52±1.15 %。
对比例3
该对比例是在对比例2的基础上变化，其区别在于将乙醇换为异丙醇，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为27.27±0.89%。
对比例4
该对比例是在对比例2的基础上变化，其区别在于将乙醇换为丙酮，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为26.88±1.35%。
对比例5
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为1：1：1；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ体积相同的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为32.66±0.75%。
对比例6
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为1：1：1；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ体积相同的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为15.53±0.47%。
对比例7
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为90：7：3；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为1000W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ体积相同的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为32.39±1.18%。
对比例8
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为90：7：3；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为200W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ体积相同的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为25.53±0.91%。
对比例9
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为90：7：3；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，得处理液Ⅱ；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为31.29±0.89%。
对比例10
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为90：7：3；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在65℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ0.5倍体积的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为33.56±0.77%。
对比例11
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为90：7：3；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在75℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ体积相同的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为33.03±1.12 %。
对比例12
（1）将1Kg甘草置于容器中，加入5L去离子水，充分搅拌均匀，再加入5L提取溶剂充分搅拌均匀制成混合液，其中，所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为90：7：3；
（2）将上述混合液倒入超声反应釜内，控制釜内温度在55℃，调节超声波发射器的功率为600W，设定超声波发射频率为25KHz，启动超声波程序，使混合液产生涡流下进行超声波处理90 min，获得处理液Ⅰ；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却20℃，再次加入与上述处理液Ⅰ体积相同的提取溶剂，持续搅拌处理90 min，保持温度为20℃得处理液Ⅱ；其中，所述提取溶剂与步骤（1）中的提取溶剂的成分和比例相同；
（4）将上述处理液Ⅱ，使用循环泵，设定循环泵输料压力为0.5MPa，使液相料液通过0.45μm的微孔滤膜，除去固相杂质，收集微孔过滤后的流出液；使用循环泵，设定循环泵输料压力为1.2MPa，使除去固相杂质后的流出液再次通过截留分子量指标可为3000（Da）道尔顿的可耐受有机溶剂的超滤膜，获得滤过液；
（5）将上述滤过液经旋转蒸发浓缩，旋转蒸发温度设置为50℃，浓缩为原来体积的5%，获得甘草苷浓缩液；将上述甘草苷浓缩液，进行冷冻干燥，除去残留有机溶剂和水份，获得含有甘草苷的提取物；冻干前先对冻干机进行预冷，待冻干机搁板温度降至4℃时，将盛有已经在-40℃预冻过的甘草苷浓缩液的不锈钢浅盘置于搁板上，设置冻干机搁板温度为-40℃，开启真空泵，设置真空度为15Pa，持续冻干10小时，获得含甘草苷的提取物；经HPLC检测，其中甘草苷的含量为33.12±0.84 %。
在上述实施例和对比例中，HPLC检测过程按照 2010 版药典规定的 HPLC 方法测定上述实施例和对比例中甘草苷的含量，以美国Sigma-Aldrich（西格玛奥德里奇）公司的甘草苷（Liquiritin，4’,7-二羟基双氢黄酮-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，产品编号L8045）做标准品，色谱条件如下：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm)；流动相乙腈（B）-0.05％磷酸(A)梯度洗脱；流速 1m L•min-1；检测波长 237nm；柱温 25℃；进样量 20u L。
经过实施例和对比例中甘草苷的含量结果对比，可以发现，本发明的技术方案的制备方法提取的甘草苷的提取物中甘草苷的含量在35.82%-42.91%之间，高于现有技术的15.53%-33.56% 。
需要说明的是，本发明对甘草的品级并无特殊限制，优选乙级及乙级质量以上，上述实施例和对比例中甘草的品级为乙级质量。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种含甘草苷的提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将甘草按照质量体积比为1Kg:5-15L的比例加入提取溶剂和水混合得到混合液；所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为85-95：4-10:1-5；
（2）将上述混合液在60-70℃下进行超声波处理，获得处理液Ⅰ；其中，超声波条件如下：功率为400-800W，频率为20-30KHz，时间为60-120min；
（3）将上述处理液Ⅰ冷却，再次加入提取溶剂混合均匀，获得处理液Ⅱ；
（4）将上述处理液Ⅱ进行过滤和超滤得到滤过液；
（5）将上述滤过液进行浓缩和冷冻干燥得到含甘草苷的提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述提取溶剂和水的体积比为2:3-3:2。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中加入提取溶剂的体积是步骤（2）中处理液Ⅰ体积的0.8-1.2倍；所述提取溶剂为乙醇、异丙醇和丙酮的混合溶液，其中，乙醇、异丙醇和丙酮的体积比为85-95：4-10:1-5。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中冷却后的温度为16-26℃。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中混合均匀的方式采用搅拌处理，其中，时间为60-120min。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，过滤采用微孔滤膜过滤，所述微孔滤膜的孔径为0.22-0.8μm；超滤采用可耐受有机溶剂的超滤膜超滤，所述超滤膜的截留分子量指标可为2000-5000Da。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，浓缩采用旋转蒸发浓缩，其温度设定为45-55℃，该过程浓缩至原来体积的3-6%；冷冻干燥的条件如下：在-50--30℃、真空条件下持续冻干8-12h。
8.根据权利要求1-7任一所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，超声波处理过程采用梯度分布加热，首先加热至60-65℃至少30min，随后加热至65-70℃至少10min。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述梯度分布加热首先加热至60-65℃保持30-50min，随后加热至65-70℃保持10-90min。
10.一种含甘草苷的提取物，其特征在于，其由权利要求1-9任一的制备方法制备而成。
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